Parasitologia Guia de Practica 2017-II

R
USMP
FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
DEPARTAMENTO ACADEMICO DE CIENCIAS BASICAS
PARASITOLOGIA
GUIA DE PRACTICA
HELMINTOS
Lombrices Teni a
Esquistosomas
ALUMNO : .
PROFESOR:................................................ GRUPO: ...
LIMA-PERU
2017-II
FMH-USMP-Parasitologia 2017
PROPIEDAD INTELECTUAL: Departamento Acadmico de Ciencias Bsicas-USMP

RESPONSABLE DE LA ASIGNATURA: Dra. Maritza M. Caldern Snchez
GUIA ELABORADA POR: Dr. Juan A. Jimnez Chunga
LIMA - PERU
2017-II
2
CONTENIDO
Paginas
PRACTICA 1
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
I. INTRODUCCION
La bioseguridad es un conjunto de medidas probadamente eficaces para evitar la
adquisicion accidental de infecciones con patogenos contenidos en las muestras, asi
como los riesgos relacionados con la exposicion a agentes quimicos, fisicos y/o
mecanicos a los que esta expuesto el personal en los laboratorios.
Slo si las personas que trabajan en los laboratorios conocen las normas de
bioseguridad y las aplican, pueden determinar su propia seguridad, la de sus compaeros
y de la colectividad. El personal de laboratorio debe cumplir con las normas de
bioseguridad y los directivos de la institucin deben cumplir con brindar las facilidades
para que stas sean aplicadas.
Conocer las principales normas para proteger la salud de las personas que
puedan estar expuestas a riesgos relacionados con la exposicion a agentes biologicos,
quimicos, fisicos, y otros en los laboratorios de ensayos, biomdicos y clinicos.
II. AGENTES DE RIESGO

El personal de laboratorio diariamente realiza muchas actividades que pueden
causar enfermedad o dao en l o en las personas que trabajen en ambientes cercanos,
e incluso en sus familiares y la comunidad. Estas enfermedades pueden ser causadas
por:
- Agentes biolgicos, transmitidos por ingestin, inhalacin, inoculacin y por contacto
directo a travs de piel o mucosas.
- Agentes fisicos y mecanicos, como las temperaturas extremas, radiaciones ionizantes,
contactos elctricos o conexiones defectuosas y vidrios resquebrajados de recipientes
daados o tubos rotos.
- Agentes quimicos que pueden ser corrosivos, txicos, carcinognicos, inflamables,
explosivos.
III. PRINCIPIOS BASICOS DE BIOSEGURIDAD

El trmino contencin se utiliza para describir mtodos seguros para manejar
materiales infecciosos en el ambiente de laboratorio donde son manipulados o
conservados.
El objetivo de la contencin es reducir o eliminar la exposicin de quienes trabajan
en laboratorios u otras personas y del medio ambiente externo a agentes potencialmente
peligrosos.
IV.NIVELES DE CONTENCION
El elemento ms importante de la contencin es el cumplimiento estricto de las

prcticas y tcnicas microbiolgicas estandar de procesamiento de las muestras de
laboratorio. Cuando las prcticas de laboratorios no son suficientes para controlar los
riesgos asociados a un agente o a un procedimiento de laboratorio particular, es
necesario aplicar medidas adicionales.
Estas medidas adicionales corresponden a los equipos de seguridad diseados
para la proteccion del personal y practicas de manejo adecuadas (barrera primaria), un
diseo de la instalacin y caracteristicas de la infraestructura de los locales (barrera
secundaria). Estos niveles estan definidos de la siguiente manera:
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Contencin Primaria:
Constituyen la primera linea de defensa cuando se manipulan materiales
biolgicos, quimicos y/o fisicos.
Las barreras de contencin primaria son:
- Equipos de proteccion personal (EPP).
- Tcnicas de laboratorio estandar y normas de higiene personal.
- Inmunizacion (vacunacin).
- Esterilizacion y desinfeccin de instrumentales y superficies.
Es la proteccin del personal y del medio ambiente inmediato contra la exposicin a
agentes infecciosos y/o productos quimicos de riesgo. Es provista por una buena tcnica
microbiologica y el uso apropiado del equipo de seguridad. El uso de vacunas aumenta el
nivel de proteccin personal.
Contencin secundaria:
Se refiere al diseo y construccin de un laboratorio, l o que en seguridad biolgica
se conoce como contencion o barrera secundaria, contribuye a la proteccin del personal
de laboratorio, personas que se localizan fuera del laboratorio y protege a las personas
de la comunidad frente a posibles escapes accidentales de agentes infecciosos.
Los modos de transmision en el laboratorio pueden ser insidiosos y algunas veces
complicados, debido a que los vehiculos y rutas de transmision difieren de los modos
clasicos. El personal de Laboratorio esta frecuentemente expuesto a niveles muy altos de
los agentes infectantes, por to que los periodos de incubacin pueden ser mas cortos que
los del mismo tipo de infeccin provocada por una exposicin corriente.
TIPOS DE LABORATORIO CON RELACION AL NIVEL DE BIOSEGURIDAD (NBS)

NBS 1:
El personal de laboratorio cuenta con una capacitacin especifica acerca de los
procedimientos realizados en el laboratorio y es supervisado por una persona con
capacitacion general en microbiologia o una ciencia relacionada. Adecuado para agentes
biologicos del grupo 1.
NBS 2:
Se aplican normas similares al NBS 1 y es adecuado para trabajos que involucran
agentes biolgicos de riesgo 2 con potencial moderado para el personal y el medio
ambiente.
NBS 3:
Es aplicable a las instalaciones clinicas, de diagnstico, enseanza, investigacin
o produccion en las que se llevan a cabo trabajos con agentes biolgicos del grupo 3 que
pueden producir una enfermedad grave o potencialmente como resultado de la
exposicin por via de inhalacin.
NBS 4:
Debe aplicarse para trabajar con agentes peligrosos y exticos que poseen u n
riesgo individual alto de producir infecciones de laboratorio transmitidas por aerosoles y
enfermedades mortales. El laboratorio de nivel de bioseguridad 4 tiene caracteristicas
especiales de ingenieria y diseo para evitar la diseminacin de los microorganismos en
el medio ambiente. Este NBS permite manipular agentes biolgicos del grupo 4.
CLASIFICACION DE LOS MICROORGANISMOS POR GRUPO DE RIESGO

Agente biolgico del grupo 1
Es poco probable que cause una enfermedad en el hombre. Es decir, los que no
producen enfermedad en el ser humano y de susceptibilidad conocida y estable a los
antimicrobianos. Ejemplo: E. coli K12, Saccharomyces cerevisiae, microorganismos que
se utilizan en la industria de la alimentacion para la elaboracin de quesos, embutidos,
entre otros.
Puede causar una enfermedad en el hombre y puede suponer un peligro para los
trabajadores, siendo poco probable que se propague a la colectividad y existiendo
generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. Como algunos que, perteneciendo a la
propia flora habitual del hombre, son capaces de originar patologia infecciosa humana de
gravedad moderada o limitada. Ejemplo: Staphylococcus epidermidis, Salmonella sp,
entre otros. Parasitos: los estados infecciosos de los parasitos han causado infeccin por
ingestin, penetracin por la piel o mucosas o inyeccin accidental. Las preparaciones
que se saben libres de los estados infectivos no requieren de este nivel de contencin.
Ejemplo: Trypanosoma cruzi, Cryptosporidium, Necator, Strongyloides, Taenia solium.
Puede causar una enfermedad grave en el hombre y presenta un serio peligro
para los trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y existiendo frente
a l generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. Implican patologia grave, de dificil y
largo tratamiento, que pueden curar con secuelas y ocasionalmente producir la muerte. El
mayor y ms frecuente peligro que entraan stos es la infeccin adquirida a travs de
aerosoles y por fluidos biolgicos. Ejemplo: M . tuberculosis, Brucella sp, Coxiella burneti,
Influenza A N1H1, entre otros.
El laboratorio debe tener caracteristicas de diseo e ingenieria especiales. Sin
embargo, se reconoce que algunas instalaciones existentes pueden no presentar todas
las caracteristicas recomendadas para el nivel de bioseguridad 3 (por ejemplo, zona de
acceso con doble puerta y penetraciones selladas).
En esta circunstancia, se puede lograr un nivel de seguridad aceptable para la
prctica de procedimientos de rutina. La decisin de implementar esta modificacin a las
recomendaciones del nivel de bioseguridad 3 debe solamente tomarla el coordinador o
jefe del laboratorio.
Aquel que causando una enfermedad grave en el hombre supone un serio peligro para
los trabajadores, con muchas probabilidades de que se propague a la colectividad y sin
que exista generalmente frente a l profilaxis o tratamiento eficaz.
Normalmente son microorganismos de dosis infectiva baja y altamente contagioso.
Ejemplo: Arenavirus como el que produce la fiebre de Lassa, Machupo, Ebola, Hantavirus
y el VIH.
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PRECAUCIONES DE TRABAJO
1. Las puertas del laboratorio deberan estar cerradas y el acceso al mismo deben
estar restringido mientras se lleven a cabo trabajos con materiales biolgicos. La
puerta deben portar emblemas que digan: "Prohibido pasar, Peligro biologico".
2. El laboratorio debera ser mantenido limpio, ordenado y libre de materiales
extraos.
3. No se permitira comer, beber, fumar y/o almacenar comidas asi como el uso de
cualquier otro item personal (Ej. cosmticos, cigarrillos) dentro del area de trabajo.
4. Usar bata, chaqueta o uniforme dentro del laboratorio. Esta ropa protectora
debera ser quitada inmediatamente antes de abandonar el area de trabajo.
Antes de iniciar la tarea diaria asegurese que la piel de sus manos no presente
cortes, raspones y otras lastimaduras, en caso que asi sea cubrir la herida de
manera conveniente antes de colocarse los guantes.
6. Usar guantes de latex de buena calidad para todo manejo de material biolgico o
donde exista aunque sea de manera potencial el riesgo de exposicin a sangre o
fluidos corporales. Cambiar los guantes de latex toda vez que hayan sido
contaminados, lavarse las manos y ponerse guantes limpios. Una vez usados los
guantes de latex deberan ser colocados dentro del recipiente con solucion
decontaminante.
7. No tocar los ojos, nariz o piel con las manos enguantadas.
8. No abandonar el laboratorio o caminar fuera del lugar de trabajo con los guantes
puestos.
9. El uso de agujas, jeringas y cualquier otro instrumento similar deben ser
restringido a su uso indispensable. Las agujas y otros elementos punzantes
deberan ser descartados en un recipiente resistente y destinado a tal fin.
10. Todas las muestras deben ser tratadas como altamente infecciosas para evitar
posibles contagios.
11. Los procedimientos deberan ser realizados de manera tal que sea nula la creacin
de aerosoles, gotas, salpicaduras, etc.
12. Bajo ninguna circunstancia se pipeteara sustancia alguna con la boca, para ello se
usaran pipeteadores automaticos.
13. Las superficies del area de trabajo deberan ser decontaminadas cuando se
termine la tarea diaria. Usando para tal efecto una solucin de hipoclorito de sodio
en concentracion adecuada.
14. El recipiente para decontaminar especimenes deben contar con tapa de
seguridad para todo traslado fuera del lugar de trabajo. En ese caso el exterior del
recipiente debera ser mantenido fibre de toda contaminacion con sangre usando
solucin decontaminante.
15. El desecho de los fluidos organicos puede efectuarse por las caerias habituales
una vez que estos hayan sido convenientemente decontaminados.
16. Lavar las manos con jabon (lquido o slido suspendido) y agua inmediatamente
despus que el trabajo haya sido terminado. Si los guantes de latex estan
deteriorados, lavar las manos con agua y jabn despus de quitarlos.
17. Informe inmediatamente a su superior de cualquier accidente ocasionado con
elementos del laboratorio.
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PRACTICA 2
METODOS DE DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO
I. INTRODUCCION
Puesto que el diagnstico de la parasitosis intestinal depende del hallazgo de
huevos o larvas de helmintos y quistes o trofozoitos de protozoos en heces, la coleccin y
el manejo adecuado de las muestras son indispensables para la busqueda e
identificacin de los parasitos en el laboratorio.
Son factores que interfieren en el examen, la ingestin de medicamentos previa a
la coleccin y las muestras viejas o conservadas en forma inadecuada. La cantidad de
heces para un examen rutinario es del tamafio de una nuez o de cinco a seis cucharadas.
Las muestras se depositan en un recipiente de boca ancha, con tapa hermtica y limpia,
no debe contaminarse con agua, orina o cualquier otro material extrao; no debe
obtenerse de la taza del ban, ni del suelo. En lactantes, la muestra se obtiene mediante
la cucharilla recta.
Las muestras deben ser etiquetadas con el nombre del paciente, hora de
coleccin y fecha. Generalmente se recomienda examinar tres muestras en serie y en
dias sucesivos. Las heces blandas, diarreicas y liquidas, deben examinarse dentro de las
primeras horas de haber sido colectadas, si esto no es posible, las heces deben
depositarse en una solucin conservadora. Ej.: Formol 10%, alcohol polivinilico (PVA),
merthiolate yodo (MIF) o fenol-alcohol-formol (PAF). Las heces formadas pueden ser
examinadas durante el mismo dia de su coleccion. Si no es posible pueden ser
refrigeradas durante 24 horas o conservadas (una parte de material fecal por tres de la
solucin conservadora).
DIAGNOSTICO
1. Examen directo
Principalmente se busca en muestras frescas, la presencia de formas evolutivas
de parasitos de tamao microscpico sean estos trofozoitos, quistes de protozoos:
Entamoeba histolytica, Giardia intestinalis, Balantidium coli, etc.; asi como larvas
(Strongyloides stercoralis), o huevos de helmintos: Ascaris lumbricoides, Trichuris
trichiura, Hymenolepis nana, Taenia sp., Fasciola hepatica, etc.).
Elementos normales: En un examen microscpico suelen encontrarse como

elementos normales estructuras reconocibles y otras no, fruto de la ingestin de
alimentos. Las mas frecuentes son: Fibras vegetales, Cristales de oxalato de calcio,
Granos de almidn, esporas de hongos, fosfato amnicomagnesio, granos de polen,
fibras musculares lisas, fibras musculares estriadas, cristales de acidos grasos, grasa
neutra, abundantes bacteria.
II. MATERIALES
Muestras de heces frescas/fijadas en formol 10%
Lamina portaobjeto y laminilla cubreobjeto.
Mondadientes
Guantes y mascarillas
Suero fisiolgico (SF) 0.85%
Lugol
Papel lente
Frasco con desinfectante para descartar material (clorox, fenol)
Microscopio de luz
Procedimiento
1. Recolecte la muestra de heces en un envase limpio y tapela. Asegurese de no mezclar
papel higinico u orina con la muestra.
2. Transporte la muestra hasta el laboratorio a temperatura ambiente.
3. Coloque una gota de salina en una lmina portaobjeto.
4. Aada una cantidad pequea de muestra de heces utilizando un aplicador de madera y
mzclela con la solucin salina. Proceda igual agregando lugol.
5. Situe un cubreobjetos sobre la muestra y examine bajo el microscopio (10X y 40X).
6. Evalu la muestra y determine si hay parasitos presentes. El diagnostico definitivo se
logra demostrando la presencia de parasitos. En algunas ocasiones es necesario hacer
examenes repetidos en dias consecutivos antes de establecer que la muestra esta
negativa.
Esquema:
SF Lugol
Tincion
Movilidod
Vocuolos
(Trofozoitos)
Niicleos
2. Mtodos de concentracin
Este mtodo permite concentrar quistes de protozoarios, larvas y huevos de
helmintos contenidos en las heces, para obtener una mayor cantidad de parasitos
mediante centrifugacin, sedimentacin, o flotacin. Las mas usadas son Sedimentacion
espontanea, Ritchie, Willis, Faust, entre otras.
A. Mtodos de Flotacin
Tcnica de Willis
Este mtodo se basa en la propiedad que tiene algunos quistes de protozoarios y
huevos de helmintos de flotar en la superficie de una solucion saturada de cloruro de
sodio debido a su menor densidad.
Material
Muestra de heces fresca.
Tubo de ensayo y gradillas
Lamina portaobjeto y cubreobjeto.
Solucin saturada de Cloruro de sodio (NaCl)
Frasco con desinfectante para descartar material (clorox, fenol, lugol)
Lugol.
Microscopio de luz.
Procedimiento
Colocar en un tubo de prueba uno o dos gramos de heces. Aadir 4 ml de
solucin saturada de NaCl. Emulsionar con una bagueta y completar con la misma
solucion el tubo hasta que en el borde se forme un menisco, djelo reposar durante 20
minutos.
Se toma la muestra cubriendo el tubo con un cubreobjeto, en el se adhieren los
protozoarios. Hacer una observacion microscopica de la muestra en una lamina con lugol.
B. Mtodo de centrifugacin y flotacin

Tcnica de Faust modificada
Se basa en que los quistes y/o huevos de los parasitos flotan en la superficie por
ser de menor densidad que el sulfato de zinc a 33,3%, cuya densidad es 1180. Es util
para la busqueda de quistes y/o huevos de parasitos y excepcionalmente se observan
larvas. Se recomienda controlar la densidad del sulfato de zinc y usar agua filtrada para el
lavado previo de la muestra.
Materiales
Tubo de ensayo 13 x 100 mm
Gradillas
Sulfato de Zinc USP 33,3 g
Agua destilada tibia 100 ml
Muestra de heces frescas
Lugol
Microscopio de luz
Procedimiento
1. Preparar una suspensin fecal en un tubo de prueba, completar el volumen a 10
ml con agua destilada.
2. Centrifugar a 2500 RPM durante un minuto y decantar el sobrenadante; repetir el
procedimiento anterior tres veces (hasta que el sobrenadante este claro).
3. Agregar la solucion de sulfato de zinc 2 ml, mezclar bien y completar con la misma
solucin.
4. Centrifugar a 2500 RPM.
5. Luego con un asa de platino tomar una o dos asadas del material flotante
(superficie) y colocarlo una lamina portaobjeto.
6. Agregar una gota de lugol y cubrir la preparacin con una laminilla cubreobjeto
7. Observar al microscopio.
Pelicula
superficial
Sulfato de Zinc
Sedimento de
C. Mtodo de concentracin: Ritchie

Se basa en la concentracin de quistes y huevos por sedimentacin mediante la
centrifugacin, con ayuda de formol (fijador) y ter (disuelve las grasas de las heces) para
separar y visualizar los elementos parasitarios.
Procedimiento:
1. Se mezcla 1 g de heces con 8 ml. de solucin salina en un tubo. Homogenizar.
Centrifugar a 2000 RPM (revoluciones por minuto) por 2-3 minutos y decantar
(repetir 2 veces, hasta que el sobrenadante este claro).
2. Decantar el sobrenadante y agregar at sedimento 6 ml. de formol at 10%.
Homogenizar. Reposar 5 minutos.
3. Luego se agrega 3 ml. de ter sulfidrico y se agita con cuidado (usar un
tampn).
4. Centrifugar 3 min. a 3000 RPM.
5. Se rompe la capa de detritus y se decanta.
6. Se toma una gota del sedimento y se prepara el examen directo con lugol.
Eter
Restos Lipidos
disueltos
(detritus)
Formalina
Sedimento
Parasitos
D. Tcnica de Graham
Se usa para la busqueda de huevos de Enterobius vermicularis y consiste en
aplicar el lado adhesivo de un pedazo de cinta sobre el area perianal, despegar el mismo
y volver a pegarlo sobre la lamina portaobjeto.
En el laboratorio, se desprende la cinta engomada del frotis perianal por un
extremo, se agrega solucin de tolueno, hidrxido de sodio 2% en solucin salina,
aplicando 1 2 gotas de la sustancia elegida que clarificara la muestra y que permitira
una mejor observacin de los huevos y/o adultos de E. vermicularis. Es necesario
observar la lmina en su totalidad. Observar al microscopio, huevos de otros helmintos,
principalmente huevos de Taenia sp., Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura entre otros.
3. METODOS DIAGNOSTICOS DE HEMO E HISTOPARASITOS

Despus de las heces, la sangre es la muestra ms estudiada. La presencia de
parasitos puede no ser constante. Los mtodos "estandar" mas empleados son:
Extensin fina y preparacin de gota gruesa. Otras posibilidades: Extension en fresco,
Movilidad (Trypanosomas). Familiarizar al estudiante con las diferentes tcnicas de
deteccion directa para el diagnostico de hemo e histo-parasitos.
METODOS DE EXAMENES PARA INVESTIGACION DE PARASITOS HEMATICOS

Para estos examenes se utiliza sangre extraida del pulpejo del dedo o de la vena
en este caso se debe utilizar con anticoagulante y las preparaciones pueden ser hechas
en extension o frotis en gota gruesa.
Frotis
Se prepara de modo que las clulas sanguineas se dispongan planas sobre la
superficie del vidrio.
Se pretende que las clulas no se amontonen, que su espesor no supere una
clula.
Todos los elementos quedan un poco aplanados (x tamao).
Las proteinas sricas (incluyendo la hemoglobina) deben fijarse previamente
Estas preparaciones son muy u tiles para estudiar detalles de hematies y parasitos
sanguineos.
Principal limitacin: Escasa cantidad de sangre estudiada.
Gota gruesa
Contiene entre 6-20 veces ms cantidad de sangre que la extensin.
Se extiende sobre un area de aproximadamente 15 x 12 mm.
No se fija antes de la tincin.
Se somete a un tratamiento de deshemoglobinizacin.
La rotura de los hematies y la prdida de su hemoglobina permite la observacin
microscopica de otras estructuras, incluyendo parasitos.
Resulta u til para diagnostico rapido de parasitemias leves.
No es muy adecuado para estudios morfologicos f inos.
Importante:
Portaobjetos limpios y bien desengrasados.
Sangre fresca.
Puncion dedo.
Puncion lbulo de la oreja.
Puncion venosa en realizacin inmediata.
Realizacin extensin.
Secado al aire, eventualmente estufa 37 C.
Fijacion (previa a tincin) o no.
Coloracin de frotis con colorante Wright

- Cubra el frotis con el colorante.
- Djelo actuar 1 o 2 minutos (EI alcohol metilico que es el disolvente del colorante actua
como fijador)
- Luego agregue una gota de agua taponada y sin que se derrame mezcle bien soplando
suavemente, deje reposar de 5 a 7 minutos,
- Lavar con chorro dbil de agua corriente y djese secar.
- Observar con objetivo de inmersion y aceite de inmersin.
Coloracin de gota gruesa

- Para colorear con Wright, la preparacin debe ser previamente hemolizada, para l o cual
a la preparacin ya seca, se Ie agrega agua y se deja un tiempo hasta que toda la
hemoglobina de los globulos pase al agua.
- Verter el agua suavemente y dejar secar.
- Colorear en la forma indicada para el frotis.
- Si se usa el colorante Giemsa, se sumerge el portaobjeto en el colorante, sin hemlisis
previa, luego del tiempo necesario (variable segun el colorante) se lava con cuidado y se
deja secar.
ESQUEMAS (PRACTICA 2)
PRACTICA 3
CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE
PROTOZOARIOS Y HELMINTOS
I. INTRODUCCION
Los parasitos intestinales se identifican rutinariamente por sus caracteristicas
morfolgicas en los analisis de laboratorio de la materia fecal, conocidos como
examen coprolgico, mediante observacion microscpica en montajes humedos con
solucion salina o con solucin de lugol como colorante.
Tambin se pueden hacer extendidos para realizar posteriormente coloraciones
permanentes, como la coloracin de hematoxilina frrica o la coloracin tricrmica de
Gomori, los cuales facilitan la identificacin al revelar detalles estructurales no
detectables en los montajes humedos.
En algunos casos se pueden tomar biopsias intestinales para identificar la
patologia producida por el parasito y observarlo en el tejido, en este caso se puede
utilizar la coloracin de hematoxilina-eosina, que aunque no es una coloracion
especifica para parasitos permite detectar algunos detalles del parasito buscado.
Los protozoos intestinales se presentan generalmente bajo tres formas de vida:
1. El trofozoito o forma vegetativa, que generalmente es el que produce la patologia.
2. El quiste o forma de resistencia que desarrolla el parasito para poder sobrevivir en

condiciones adversas.
3. El prequiste que es una forma intermedia.
Todos los protozoos que se transmiten por via oro-fecal presentan formas
quisticas, mientras los que se transmiten por contacto intimo o por vectores,
generalmente no presentan esta forma de resistencia.
En el intestino humano se pueden encontrar protozoos patgenos y protozoos

comensales, la aparicin de estos ultimos puede deberse a varios factores como son
las condiciones de salubridad e higiene y factores inmunolgicos; su aparicin, aunque
no amerita tratamientos para su erradicacion, puede dar una idea de estas condiciones
en los pacientes, por Io tanto en los analisis de laboratorio general mente se informa su
presencia.
MATERIAL
Heces frescas/fijadas en formol 10%

Laminas coloreadas con hematoxilina frrica, tricromica de Gomori de frotis de
heces
Pipetas, baguetas, guantes, mascarilla
Suero fisiologico 0.85% y lugol
Aceite de inmersion, laminas portaobjeto y laminillas cubreobjeto
Microscopio de luz
Papel lente
III. CARACTERISTICAS DE ALGUNOS PARASITOS INTESTINALES
Conocer microscpicamente las caracteristicas morfolgicas de los principales

parasitos del intestino humano en extendidos de materia fecal en montaje hmedo.
1. Quiste de Entamoeba coli

2. Quiste de Endolimax nana
3. Quiste de lodamoeba butschlii
4. Quiste de Chilomastix mesnili
5. Quiste de Giardia intestinalis
6. Quiste de Blastocystis hominis
7. Huevo de Fasciola hepatica
8. Huevo de Taenia sp.
9. Huevo de Hymenolepis nana
10. Huevo de Ascaris lumbricoides
11. Huevo de Trichuris trichiura
12. Huevo de Enterobius vermicularis
13. Huevo de Ancylostoma duodenale y/o Necator americanus (uncinarias)
14. Huevo de Diphyllobothrium sp.
15. Larva de Strongyloides stercoralis
Observacin a 100X y 400X de aumento (Figura 1 y 2).
1. Entamoeba coli. t i e n en los quistes, de mayor tamao de 10 a 35 micras

(um) de diametro con mas de cinco nucleos y presencia, en ocasiones de
barras cromidiales finas como astillas en el citoplasma. En las preparaciones
teidas con lugol se suele apreciar vacuolas yodfilas.
2. Endolimax nana. El quiste oval o redondeado de 8-10 um de tamao,

generalmente, presenta cuatro nucleos. La preparacion teida con lugol permite
observar los nucleos como puntos mas brillantes.
3. lodamoeba butschlii. El trofozoito m ide de 8 a 20 micras y el quiste de 5 a 14 pm.

En las preparaciones teidas con hematoxilina frrica o Gomorri-Trichrome se
observa una vacuola vacia en el citoplasma y el nucleo presenta un cariosoma
grande que emite fibrillas hacia la membrana nuclear. En la preparacin teida
con lugol, la vacuola se aprecia tenida (color marron) debido a su contenido de
glicgeno (vacuola yodofila).
4. Giardia intestinalis. El quiste es ovalado y m ide de 10 a 12 pm en su diametro

mayor, en las preparaciones teidas con lugol, tiene una membrana quistica doble
y se distinguen de dos a cuatro nucleos, el axostilo y en ocasiones los cuerpos
parabasales.
5. Chilomastix mesnili. El quiste tiene forma redondeada con una prominencia que to
asemeja a un limn y mide de 6 a 10 um, presenta doble membrana y en su
interior se observa los elementos descritos en el trofozoito.
6. Blastocystis hominis. Mide alrededor de 8-10 um. Presenta gran vacuola central
que ocupa el 50 a 95% de las clulas y restringe el citoplasma a un espacio
perifrico que contiene los nucleos en nmero de 2 a 5.
7. Ascaris lumbricoides. Huevo: forma ovalada con cubierta mamelonada. Identificar

huevo: Frtil, infrtil, decorticado.
Trichuris trichiura. Huevo: de forma eliptica, de color parduzco cuya dimensin

alcanza de 40 a 50 u m en su diametro mayor. Presentan una envoltura gruesa y
con tapones en ambos polos.
9 Enterobius vermicularis. Huevos: distinga la forma plana-convexa a cada lado y el

tamano que alcanza de 50 a 60 um de largo por 20 a 30 um de ancho; en el
interior reconozca la larva.
10. UNCINARIOSIS: lnfeccin intestinal producida por los nematodos Ancylostoma

duodenale y Necator americanus, conocidos como anquilostomoideos; se
localizan en el intestino delgado del hombre sobre todo en el yeyuno.
a. El trmino uncinaria se refiere a la curvatura del extremo anterior a manera
de gancho, con capsula bucal con dientes (Ancylostoma) o placas
cortantes (Necator).
b. Ancylostoma duodenale y Necator americanus. Huevo: de uncinarias de
forma oval, con cascara delgada y traslucida y con blastmeros; miden de
60 a 70 u m por 30 a 40 u m.
11. Taenia sp. Huevo: de forma esfrica, de 35 a 40 u m de tamao, con una cascara
gruesa y radiada conteniendo un embrion hexacanto u oncsfera en este distinga
los ganchos.
12. Diphyllobotrium sp. Huevo: de forma ovalada y distinga en ellos la cubierta

gruesa y en uno de sus polos el oprculo. Los huevos de D. pacificum miden 50-
60 x 36-40 um, mas pequeas que D. latum (59-75 x 42-45 um).
13. Hymenolepis nana Huevo: de 30 a 40 um de diametro, que se caracteriza por

presentar corteza gruesa, transparente, membranas, provista de dos mamelones
polares de donde nacen tres pares de filamentos, contiene un embrion hexacanto
con ganchos dispuestos en paralelo.
14. Fasciola hepatica. Huevo de 120 a 150 um, de forma ovalada, con cubierta gruesa
y en uno de sus polos el oprculo.
15. Strongyloides stercolaris. Larva rabditoide: OBSERVE en preparados de heces

larvas de 200 um de longitud; en la parte anterior localice capsula bucal corta y un
esofago con un bulbo posterior.
PRACTICA 4
IDENTIFICACION DE AMEBAS INTESTINALES
I. INTRODUCCION
Las amebas son organismos eucariontes unicelulares. Presentan locomocin por
seudpodos. Su ciclo biolgico incluye dos fases: trofozoito (forma mvil y vegetativa) y
quiste (forma inmovil y de resistencia). Su reproduccin es por fusin binaria y multiple. La
forma infectante es el quiste mientras que las formas diagnosticas son tanto quistes como
trofozoitos. La via de infeccin de estas parasitosis es la oral y el mecanismo de
transmision es la ingestion de alimentos contaminados con quistes. Amebas del gnero
Entamoeba son las que pueden parasitar el lumen intestinal del hombre: Entamoeba
histolytica, Entamoeba dispar, Entamoeba polecki, Entamoeba coli y Entamoeba
hartmanni. De estas solo E. histolytica es reconocida como patgena (Figura 3).
AMEBA PATOGENA
Entamoeba histolytica
Caracteristicas morfolgicas
Presenta dos formas evolutivas: Trofozoito: viven en el intestino grueso del ser
humano pudiendo invadir y atravesar la mucosa intestinal. Mide de 15 a 30 um. El
trofozoito ameboideo con membrana citoplasmatica, un citoplasma dividido en una parte
externa hialina y transparente casi sin granulaciones (ectoplasma) y otra interna muy
granulada con organulos celulares (endoplasma). EI ncleo es esfrico y con cromatina
muy pequea en el centro (puntiforme), llamado cariosoma. Ademas presenta cromatina
adherida a la cara interna de la membrana nuclear, distribuida en forma ms o menos
homognea. Quiste: forma de resistencia, se eliminan at exterior con las heces. El quiste
maduro tetranucleado es la forma infectante y mide de 10 a 20 um de diametro. Los
estadios de prequiste con 1-2 ncleos con las caracteristicas nucleares descritas en la
forma vegetativa y cuerpos cromidiales con extremos romos.
Diagnstico parasitolgico
Examen microscopico de muestra de heces, para demostrar la presencia de
trofozoitos o quistes mediante el examen directo de la muestra en solucin salina, lugol o
coloracin (tricrmica de Gomori o hematoxilina frrica) o su demostracin en biopsia de
la mucosa intestinal o hepatica.
AMEBAS NO PATOGENAS
+ Entamoeba coli
Se ubica en el ciego y colon y su incidencia es muy alta. Trofozoito de 15-50 u m.
Rango usual 20-25 um. Coloreado con hematoxilina frrica: citoplasma granular
indiferenciado. Bacterias en las vacuolas alimenticias. Diagnstico: nucleo con
aglomeraciones irregulares de cromatina perifrica, con cariosoma grande y de
posicion excntrica. Quiste: De 10-35 um. Rango usual de 12-15 um.
Redondeados u ovales con doble envoltura. Ocho ncleos como maximo, visibles
facilmente. En los quistes inmaduros se observan los cuerpos cromidiales en
forma de aguja y haces de extremos irregulares. Vacuolas de glicogeno de color
caoba al teirse con lugol.
trofozoitos o quistes mediante el examen directo de la muestra en solucin salina, lugol o
coloracion (tricrmica de Gomori o hematoxilina frrica).
+ lodamoeba butschlii
Ubicada en el intestino grueso del hombre. Quiste: mide de 5-20 pm, presenta una
vacuola de glucgeno, de bordes irregulares. Posee un ncleo nico relegado a
una posicin lateral por la vacuola caracterizada por carecer de cromatina
perifrica con cariosoma grande central de bordes irregulares.
quistes mediante el examen directo de la muestra en solucin salina, lugol o coloracion
(tricrmica de Gomori o hematoxilina frrica).
Endolimax nana
Es la ameba ms pequea del intestino. Quiste: Mide de 5-14 pm. Presenta cuatro
nucleos sin cromatina perifrica y con un gran cariosoma ubicado hacia un lado
del ncleo.
quistes mediante el examen directo de la muestra en solucin salina, lugol o coloracion
(tricrmica de Gomori o hematoxilina frrica).
+ Blastocystis hominis
Es un protozoario que habita el intestino del hombre y de otros animales.
Asociado a sintomatologia gastrointestinal inespecifica. Posee pseudpodos de
locomocin y de alimentacion; se multiplica por fusin binaria, endodiogenia,
esquizogonia. Presenta tres formas morfolgicas diferentes: vacuolar, granular y
ameboide.
Mide alrededor de 8-10 pm. Presenta gran vacuola central que ocupa el 50 a 95%
de las clulas y restringe el citoplasma a un espacio perifrico que contiene los
nucleos en nmero de 2 a 5.
II. MATERIAL
Muestras de heces fijadas en formol 10% con quistes de amebas
Laminas portaobjeto
Laminillas cubreobjeto
Lugol
Laminas coloreadas con hematoxilina frrica o tricrmica: Entamoeba histolytica
(quiste y trofozoito), Entamoeba coli, (quiste y trofozoito), lodamoeba butschlii,
(quiste y trofozoito), Endolimax nana, (quiste y trofozoito), Blastocystis hominis

(quiste).
Aceite de inmersin
Papel lente
Microscopio de luz
AMEBAS DE VIDA LIBRE
I. INTRODUCCION
Las amebas de vida libre (AVL) se encuentran ampliamente distribuidas en la
naturaleza. Se han detectado amebas de vida libre en redes publicas de agua, albercas,
estanques, lagos, rios, aguas termales, lodos, suelos desnudos y encharcados, canales
artificiales, aguas de desecho industrial, redes de agua potable, agua embotellada,
unidades dentales, de dialisis, fisioterapia, y aire acondicionado, asi como en materia
fecal de diversos animales. Algunas especies pueden encontrarse en aguas saladas.
Adicionalmente, Naegleria y Acanthamoeba han sido aisladas en tracto respiratorio de
sujetos con y sin datos de infeccin en vias respiratorias. Las AVL son capaces de
producir enfermedades en el hombre como la meningoencefalitis amebiana aguda o
primaria (Naegleria fowleri) y la meningoencefalitis amebiana cronica o granulomatosa
(Acanthamoeba castellani y Balamuthia mandrilaris) (Figura 4).
Acanthamoeba castellani y Balamuthia mandrilaris
Acanthamoeba castellani se caracteriza por presentar dos formas morfolgicas
diferentes: el trofozoito y el quiste.
Los trofozoitos son pleomrficos, de 15-45 um de diametro. En el citoplasma se
distinguen un nucleo central y abundantes vacuolas. El caracter distintivo de los
trofozoitos es la presencia de seudpodos puntiagudos llamados acantopodios.
Los quistes miden 10-15 um de longitud. Se caracterizan por poseer un solo
nucleo y una pared doble, en donde la capa externa es de forma irregular y la
interna es poligonal. Tambin se observa la presencia de poros llamados ostiolos.
Balamuthia mandrilaris se caracteriza por presentar dos formas morfolgicas
diferentes: el trofozoito y el quiste. Los trofozoitos son pleomrficos, de 12-60 um
de diametro. En el citoplasma se distinguen de 1-2 ncleos cada uno con 2-3
cuerpos nucleares. Los quistes son esfricos y miden 12-30 um de longitud. Se
caracterizan por poseer un solo nucleo y una pared triple.
La demostracin microscpica de los trofozoitos o quistes es la base del
diagnostico. Los examenes histopatologicos de biopsias de cerebro, piel o cornea
son recomendados.
Tambin se recomienda el diagnstico por imagenes (tomografia axial
computarizada, resonancia magntica).
Se puede cultivar las amebas en un medio con baja concentracin de nutrientes
en el cual se ha sembrado previamente bacterias coliformes (Medio xenico).
Los examenes de lquido cefalorraquideo o los extendidos coloreados con la
tincin de Wright o Giemsa no se recomiendan pues son poco sensibles.
+ Naegleria fowleri
Naegleria se caracteriza por presentar tres formas morfolgicas diferentes: el
trofozoito, la forma flagelada y el quiste.
Los trofozoitos son pleomrficos, de 10-25 um de longitud. En el citoplasma se
distinguen un nucleo central y abundantes vacuolas. El caracter distintivo de los
trofozoitos es la presencia de seudpodos redondeados llamados lobopodios.
Bajo ciertas condiciones del medio, principalmente por la concentracin de iones,
los trofozoitos pueden adoptar una forma biflagelada.
Los quistes son esfricos y m iden 7-14 um de diametro. Se caracterizan por

poseer un solo ncleo y una pared delgada sin la presencia de poros.
El mecanismo de transmisin se lleva a cabo en aquellos individuos que toman
baos de aguas contaminadas con estas amebas: lagos, piscinas, embalses,
corrientes termales, manantiales. Estas amebas en algunos casos pueden
penetrar a travs de la lmina cribosa del etmoides, pudiendo alcanzar el cerebro
y las meninges causando graves cuadros de necrosis e inflamacion.
Observaciones experimentales inducen a pensar que la infeccin por Naegleria se
contrae por penetracin de los microorganismos a travs de la nariz o a travs del
neuroepitelio olfatorio
La demostracion microscpica de los trofozoitos es la base del diagnstico. Se
recomienda realizar examenes de liquido cefalorraquideo (LCR) o extendidos
coloreados con la tincin de Wright o Giemsa.
Si la muestra de LCR resulta negativa, se puede recurrir a examenes
histopatolgicos de biopsias cerebrales o diagnostico por imagenes (tomografia
axial computarizada).
Se puede cultivar las amebas en un medio con una baja concentracin de
nutrientes en el cual se ha sembrado previamente bacterias coliformes.
Las tcnicas serologicas tiene poco valor diagnostico pues la respuesta inmune
demora en aparecer. Se ha probado la tcnica de inmunoensayo enzimatico
(ELISA) y la inmunofluorescencia indirecta (IFI).
II. MATERIAL
+ Laminas coloreadas con hematoxilina frrica o tricrmica de Gomori:
Acanthamoeba castellani, Balamuthia mandrilaris, Naegleria fowleri
Aceite de inmersin
Papel lente
Microscopio de luz
ESQUEMAS
PRACTICA 5
IDENTIFICACION DE FLAGELADOS Y CILIADOS
INTESTINALES
I. INTRODUCCION
Parasitos caracterizados por poseer flagelos en su forma de trofozoito, los cuales
les sirven para la locomocin. Desde el punto de vista clinico, podemos dividirlos segn la
localizacin anatmica donde se suelen encontrar en flagelados intestinales, genitales,
hematicos y tisulares. Entre los flagelados intestinales la especie mas importante es
Giardia intestinalis, parasito que se localiza en el duodeno y que se multiplica por division
longitudinal. En los nios provoca cuadros diarreicos, aunque a veces pueden encontrarse
en heces sin estar asociado a patologia alguna. Otras especies de flagelados intestinales
menos frecuentes son: Trichomonas hominis, Chilomastix mesnilii (Figura 5).
Los ciliados son protozoarios que se caracterizan por la forma de cilios para su
locomocion, ademas tienen como caracteres de valor diagnostico dos nucleos, citostoma
y citopigio. La transmision de los ciliados ocurre por ingestion de quistes en alimentos o
agua contaminada con residuos fecales. Cuando se ingieren los quistes, estos pasan al
tracto intestinal inferior, se desenquistan e inician su multiplicacin como trofozoitos que
se alimentan.
La forma infectante es el quiste mientras que las formas diagnsticas son tanto
quistes como trofozoitos. La via de infeccin de estas parasitosis es la oral y el
mecanismo de transmisin es la ingestin de alimentos contaminados con quistes.
A. IDENTIFICACION DE FLAGELADOS INTESTINALES

Giardia intestinalis
Se localiza en el duodeno, tiene un estadio de trofozoito y otro de quiste. El
trofozoito mide 10-20 um. Es periforme de simetria bilateral con dos nucleos ovales y
cuatro pares de flagelos, dos axostilos y dos cuerpos parabasales y un disco suctorio. El
quiste mide 8-19 um (promedio 10-14 um). Son ovoides que contienen 4 ncleos
pequeos, restos de flagelos y cuerpo parabasal, el citoplasma esta claramente separado
de la pared quistica.
Hallazgo de trofozoitos o quistes en las heces. En las lminas coloreadas estudie
las caracteristicas de ambos estadios.
Chilomastix mesnilli
Flagelado intestinal no patgeno. EI trofozoito, piriforme de 6-20 um, tiene un
ncleo, citoplasma grande, forma ancha que se extiende hasta la mitad del cuerpo. El
quiste, mide 6-24 um con apariencia de limn contiene un solo nucleo.
En las muestras de heces formoladas observe quistes. En las lminas coloreadas
estudie las caracteristicas del trofozoito y quiste.
B. IDENTIFICACION DE CILIADOS
Balantidium coli
El nico ciliado que infecta al hombre. Parasita el intestino grueso. El trofozoito es de
forma ovoide y tiene de tamao promedio de 70 x45 um, y puede alcanzar un tamao de
150-200 micras, en su extremo anterior esta el citostoma y en el posterior el citopigio.
Tiene un ncleo grande reniforme que es el macro nucleo, uno mas pequefio y vacuolas
contractiles. Los cilios que son los rganos de locomocin estan implantados en la
membrana celular. El quiste tiene pared quistica gruesa transparente y es casi esfrico
con un diametro promedio de 55 pm (50-70 pm), tiene un macro nucleo reniforme y un
micro nucleo.
La balantidiosis requiere de un diagnstico clinico diferencial con otros agentes
infecciosos que producen colitis o disenteria. Principalmente entamoebosis, disenteria
bacilar y colitis ulcerativa. El diagnstico de laboratorio se realiza por el examen de
heces, al observarse los trofozoitos moviles al examen directo, en heces diarreicas, o los
quistes en heces no diarreicas.
II. MATERIAL
Heces frescas/formol 10%
Laminas coloreadas con hematoxilina frrica o tricrmica de Gomori: Giardia
duodenalis (quiste y trofozoito), Chilomastix mesnilli (quiste y trofozoito),
Balantidium coli (quiste y trofozoito).
Pipetas, baguetas, suero fisiologico y lugol.
Aceite de inmersin, lminas y laminillas.
Microscopio de luz.
Papel lente.
PRACTICA 6
IDENTIFICACION DE ESPOROZOARIOS INTESTINALES Y
TISULARES
I. INTRODUCCION
Son protozoarios del Phylum Apicomplexa pues con microscopia electrnica se
visualiza una estructura denominada complejo apical (conoide, anillo polar, roptrias,
microtubulos). Tienen ciclos complejos (monoxenos, heteroxenos), donde intervienen
diversas etapas evolutivas sexuadas y asexuadas: esporozoitos, merozoitos, gametos
que forman el ooquiste o cigote. En su mayoria son agentes oportunistas porque para
ejercer su accin patogena requieren condiciones favorecedoras en el hospedero.
En los coccidios intestinales (Cryptosporidium, Cyclospora, Cystoisospora) la
forma diagnostica es el ooquiste. En el caso particular de Cryptosporidium el ooquiste
eliminado en las heces ya es directamente infectante. La via de infeccin de estas
parasitosis es la oral y el mecanismo de transmisin es la ingestin de alimentos
contaminados con ooquistes maduro.
Toxoplasma gondii es un esporozoario intestinal del gato, siendo el hospedero definitivo,
mientras que el hombre y otro animales son hospederos intermediarios. El diagnstico en
humanos es basicamente serolgico.
+ Cryptosporidium spp
Coccidio intestinal con ciclo complejo que se completa en un u nico husped

(monoxeno). Distintas especies y distintos genotipos: C. parvum. genotipo en 1 humanos,
genotipo 2 en rumiantes y genotipo 3 en caninos. Otros: C. felis, C. meleagridis, C
hominis.
Se localiza en el epitelio intestinal con localizacin de las etapas reproductivas
dentro de una vacuola parasitfora: intracelular pero extracitoplasmatica. La via de
transmision es por ooquistes de pared delgada (autoinfeccin) y los ooquistes de pared
gruesa (heteroinfeccin). Ooquistes: Pequeos de 4 6 um de diametro, ovoides o
esfricos, altamente refringentes, con cuatro paredes exteriores lisas. Pueden observarse
4 esporozoitos inermes dentro de los ooquistes maduros (no se presenta esporoquistes).
Puede infectar todo el tracto digestivo y tambin otros epitelios. Altera la
arquitectura del epitelio intestinal (vacuola parasitfora). Ocasiona atrofia de las
vellosidades, aumento de las criptas e infiltracion de la lmina propia. Interfiere con la
absorcion de fluidos y nutrientes lo que conduce a provocar diarrea coleriforme que
puede comprometer la vida por desequilibrios hidroelectroliticos. Diarrea aguda
autolimitada en inmunocompetentes. Diarrea cronica severa en inmunodeprimidos
La demostracion microscpica de los ooquistes es la base del diagnstico. Se
recomienda realizar examenes seriados de heces y mtodos de concentracion
(tcnicas de Ritchie y Sheather). Los ooquistes se pueden observar en un
extendido teldo con coloracion acido-resistente (mtodo de Kinyoun o Zielh-
Neelsen modificado) y/o Auramina/rodamina
Si la muestra fecal resulta negativa, se pueden buscar los parasitos por biopsia
intestinal o utilizarse el diagnstico indirecto para detectar coproantigenos con la
ayuda de las tcnicas de inmunoensayo enzimatico (ELISA) o
inmunofluorescencia indirecta con anticuerpos monoclonales (IFI).
+ Cyclospora cayetanensis
Los ooquistes de Cyclospora se caracterizan por presentar una forma esfrica y

miden entre 8-10 um de diametro. Cada ooquiste contiene dos esporoquistes que
desarrollan dos esporozoitos cada uno. Se eliminan en las heces de forma
inmadura
(tcnicas de Ritchie y Sheather).
Los ooquistes se pueden observar en un extendido teido con coloracin acido-
resistente (mtodo de Kinyoun o Zielh-Neelsen modificado). Con luz ultravioleta
presentan autofluorescencia.
inmunofluorescencia indirecta (IFI).
+ Cystoisospora belli
Los ooquistes de Cystoisospora se caracterizan por presentar una forma ovalada
y mide entre 20- 30 u m de largo por 10-20 u m de ancho.
Cada ooquiste contiene dos esporoquistes de membrana doble que desarrollan
cuatro esporozoitos cada uno. Se eliminan en las heces de forma inmadura
(tcnicas de Faust y Sheather). Es caracteristica la presencia de los cristales de
Charcot Leyden, que se generan por la destruccion de los eosinofilos.
Los ooquistes se pueden observar en un extendido teido con coloracin acido-
resistente (mtodo de Kinyoun o Zielh-Neelsen modificado). Con luz ultravioleta
presentan autofluorescencia.
inmunofluorescencia indirecta (IFI).
Toxoplasma gondii
El ooquiste tiene una forma esfrica y mide entre 10-12 um de diametro. Cada
ooquiste contiene dos esporoquistes que desarrollan cuatro esporozoitos cada
uno.
Los taquizoitos tienen aspecto semilunar o en arco y miden entre 4-6 um de
largo por 2-4 u m de ancho.
Los quistes tisulares son redondeados y poseen una membrana propia, miden
entre 20-200 um de diametro.
El criterio clinico es la base del diagnstico. La demostracin microscpica de los
taquizoitos es dificil y slo se da en muestras de LCR y mdula osea. Tambin se
puede intentar su aislamiento mediante inoculacion experimental en ratones o en
cultivos celulares (clulas HeLa)
Se pueden buscar los parasitos por biopsia intestinal o utilizarse el diagnstico
indirecto para detectar anticuerpos con la ayuda de la reaccion de Sabin &
Feldman (RSF) o las tcnicas de inmunoensayo enzimatico (ELISA),
inmunofluorescencia indirecta (IFI) o hemoaglutinacion indirecta (HAI).
Actualmente se recomienda el uso de tcnicas moleculares (como la reaccin en
cadena de la polimerasa PCR) para muestras de sangre, LCR, mdula sea y
biopsias.
+ Sarcocystis sp.
Es un parasito unicelular que se encuentra en los musculos y otros tejidos de los
mamiferos, aves y reptiles. Un sarcoquiste mide en promedio 70 um, pero su tamao
fluctua entre 30 y 130 um. Se Ie ha encontrado en todo el mundo infectando diversas
especies. Es una zoonosis, entre los animales que infecta se pueden incluir ovejas,
caballos, cerdos, perros, gatos, conejos, ratones, pollos, humanos, venados, patos, focas,
entre otros. Existen varias especies, nombradas de acuerdo al hospedero en donde se
encuentran, por ejemplo: S. rileyi (pato), S. cuniculi (conejo), S. tenella (oveja) y S.
miescheriana (cerdo). Produce la enfermedad conocida como sarcocystosis. Las
principales especies que infectan humanos son S. hominis y S. suishominis. Los
humanos pueden infectarse por ingestion de came infectada o bien por ooquistes
excretados en las heces.
Analisis de las heces de animales infectados donde se observan los ooquistes
esporulados. Observacion de los quistes en los hospederos intermediarios por medio de
biopsias de tejido (con gran cantidad de bradizoitos. La sarcocistosis extraintestinal
puede detectarse mediante anticuerpos anti-sarcocystis a travs de las pruebas
serologicas, entre ellas la ELISA, HAI, dot-ELlSA e IFI.
Microsporidios
Caracteristicas morfolgicas: El tamano promedio de sus esporas (forma infectante)
varia entre 1.2 a 2 u m de largo por 0,7-1.5 um de ancho
Enterocytozoon bienusi, es el principal microsporidio patgeno del hombre. Infecta

los enterocitos del intestino delgado, principalmente en pacientes
inmunocomprometidos. Su desarrollo se produce directamente en el citoplasma
de la clula hospedadora sin formar vacuola parasitofora. Su tubulo polar presenta
de 5-7 vueltas.
Encephalitozoon intestinales, infecta los enterocitos del intestino delgado,
principalmente en pacientes inmunocomprometidos. Su desarrollo se produce en
el interior de una vacuola parasitfora. Su tubulo polar presenta de 4-7 vueltas.
Encephalitozoon hellem, produce en vacuolas parasitoforas en el interior de las
clulas de su hospedador y forma esporas redondeadas. Su tubulo polar presenta
de 6-8 vueltas.
Encephalitozoon cuniculi, produce en vacuolas parasitforas en el interior de las
clulas de su hospedador y forma esporas. Su tubulo polar presenta de 4-5
vueltas.
Nosema connori, no produce vacuola parasitfora y forma esporas ovales. Su
tubulo polar presenta de 10-11 vueltas.
Vittaforma corneae, no produce vacuola parasitfora y forma esporas cilindricas
Su tubulo polar presenta de 5-6 vueltas.
Pleistophora sp. Forma vacuolas parasitforas y sus esporas son de aspecto oval,
Su tubulo polar tiene 10-11 vueltas.
Diagnstico
La demostracin microscpica de las esporas es la base del diagnstico. Las

esporas se pueden detectar en material de biopsia o mediante el examen de
heces, esputo, aspirado duodenal, LCR y orina.
Se pueden observar utilizando extendidos teidos con la coloracin de Gram (son
grampositivos), la coloracion acido-resistente (mtodo de Zielh-Neelsen), la de
Giemsa o la de Schiff. La coloracion de Weber basada en cromotropos ha
demostrado ser dtil.
Se puede utilizar pruebas serolgicas como la inmunofluorescencia indirecta (IFI)
o moleculares como la reaccion en cadena de la polimerasa (PCR), pero aun no
han demostrado ser fiables para el diagnostico de rutina. Tambin se han logrado
cultivar en lineas celulares como las de rion de mono (MK) o de pulmn fetal
humano (FLH).
II. MATERIAL
Heces frescas formoladas positivas a coccidios
Laminas coloreadas mtodo Kinyoun modificado: Cryptosporidium spp.,
Cyclospora cayetanensis, Cystoisospora belli.
Lamina coloreada con Giemsa: Toxoplasma gondii
Lamina coloreada con hematoxilina- eosina: Sarcocystis sp.
Lamina coloreada con Gram cromotrope: Microsporidium
Pipetas, baguetas, suero fisiologico y lugol.
Microscopio de luz, papel lente
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33
PRACTICA 7
IDENTIFICACION DE FLAGELADOS HEMATICOS,
TISULARES Y DEL APARATO GENITOURINARIO
I. INTRODUCCION
Los flagelados parasitos sanguineos tienen como hospedador intermediario a un
vector. Se reproducen por fisin binaria longitudinal. Leishmania en su ciclo biolgico
adopta la forma de amastigote (con un flagelo intracelular) y de promastigote (con flagelo
libre pero sin membrana ondulante). Trypanosoma cruzi en su ciclo biologico adopta la
forma de amastigote, epimastigote (con flagelo libre y una corta membrana ondulante) y
tripomastigote (con flagelo libre y membrana ondulante completa - forma infectante). La
forma infectante en el caso de Leishmania es el promastigote metaciclico y en el caso de
Trypanosoma es el tripomastigote metaciclico (deyecciones del vector) La via de
infeccin de estas parasitosis es la cutanea. El mecanismo de transmision es la picadura
del vector (Leishmania). Las formas habituales de transmisin de Trypanosoma cruzi son
aquellas conectadas directamente al vector, a la transfusin de sangre, o la via congnita
y, mas recientemente, las que ocurren via oral, por la ingestion de alimentos
contaminados. Mecanismos menos comunes envuelven accidentes de laboratorio,
manejo de animales infectados, transplante de organos.
Los flagelados urogenitales (Trichomonas) carecen de forma quistica. La via de
infeccin de esta parasitosis es la sexual y el mecanismo de transmision es el contacto
sexual y los fomites.
+ Leishmania spp.
Los amastigotes de Leishmania son formas intracelulares. Se caracterizan por
presentar una forma ovoide y m iden entre 2-5 um de diametro (Figura 6).
Cada amastigote se caracteriza por la presencia de un nucleo posterior (con
cariosoma central) ademas de un cinetoplasto anterior al nucleo y restos de
flagelo.
El cinetoplasto tiene forma de bastoncillo y esta conformado por ADN. Es una
estructura que contiene al cuerpo parabasal y un blefaroplasto puntiforme de
donde se origina el flagelo.
El caracter particular de los amastigotes es la ausencia de membrana ondulante y
la presencia de un flagelo intracelular que no se aprecia en las observaciones
microscpicas.
En el vector, el parasito adopta una forma llamada promastigote, que se
caracteriza por su forma alargada y medir entre 14-20 um de longitud.
Cada promastigote se caracteriza por la presencia de un nucleo central, un
cinetoplasto anterior al nucleo y un flagelo.
La demostracin microscpica de los amastigotes es la base del diagnstico. Se
debe buscar el parasito en muestras de tejidos.
Se recomienda realizar examenes directos de extendidos de las lesiones
mediante raspado con bisturi utilizando coloraciones de Giemsa o Leishman.
Si la muestra resulta negativa, se pueden buscar los parasitos por biopsia de
tejidos o se les puede cultivar en medio de Novy, McNeal y Nicolle (NNN) e
inocularlos en animales de laboratorio.
Las tcnicas serolgicas u tiles para el diagnstico indirecto son la tcnica de

intradermoreaccin (prueba de Montenegro), el inmunoensayo enzimatico (ELISA)
e la inmunofluorescencia indirecta (IFI).
Trypanosoma cruzi
Los tripomastigotes de Trypanosoma se caracterizan por presentar una forma
fusiforme alargada y ser aplanados lateralmente. Miden entre 10-25 um de
longitud (Figura 7).
Cada tripomastigote se caracteriza por la presencia de un nucleo central (con
cariosoma central) ademas de un cinetoplasto subterminal posterior al nucleo y un
flagelo (1/3 de la longitud total del parasito).
El caracter particular de los tripomastigotes es la presencia de una membrana
ondulante bordeada por el flagelo que se inicia en el cinetoplasto y sale por el
extremo anterior. No se reproducen.
Los amastigotes se caracterizan por presentar una forma redondeada y miden
entre 2-4 um de diametro.
Cada amastigote se caracteriza por la presencia de un nucleo central, un
cinetoplasto anterior al nucleo y un flagelo intracitoplasmatico.
En el vector, el parasito adopta una forma llamada epimastigote que se
caracteriza por su forma alargada y por medir entre 18-20 um de longitud.
Cada epimastigote se caracteriza por la presencia de un nucleo central ademas
de una membrana ondulante corta (1/2 de la longitud total del parasito), un
cinetoplasto anterior al nucleo y un flagelo libre.
La demostracion microscpica de los tripomastigotes es la base del diagnstico.
Se debe buscar el parasito en muestras de sangre o tejidos.
Se recomienda realizar examenes directos de extendidos sanguineos y tcnicas
de gota gruesa con coloraciones de Giemsa o Wright.
Tambin se pueden utilizar mtodos de concentracin (tcnica de Strout) y se les
puede cultivar en medio de Novy, McNeal y Nicolle (NNN) e inocularlos en
animales de laboratorio.
Las tcnicas como el xenodiagnstico y el hemocultivo, se utilizan con fines
epidemiologicos.
Las tcnicas serolgicas utiles para el diagnstico indirecto son la tcnica de
fijacion de complemento (prueba de Guerreiro-Machado), el inmunoensayo
enzimatico (ELISA), la hemoaglutinacion indirecta (HAI) y la inmunofluorescencia
indirecta (IFI).
La determinacin de zimodemas (perfiles isoenzimaticos) es util en la identificacin
especifica de los parasitos.
CLASE INSECTA: ORDEN DIPTERA

Identificacin de insectos vectores de leishmaniosis: Lutzomyia sp.
CLASE INSECTA: ORDEN HEMIPTERA.

Identificacin de insectos vectores de tripanosomiasis americana: Triatominos:
Rhodnius robustus, Triatoma infestans, Pastrongylus herreri (Figura 8).
Trichomonas vaginalis
Los trofozoitos se caracterizan por presentar una forma piriforme y miden entre
10-30 um de largo por 5-12 um de ancho.
Cada trofozoito se caracteriza por la presencia de un nucleo (con cariosoma
subcentral y cromatina uniformemente distribuida) ademas de un citostoma (abertura
oral), blefaroplastos, axostilo y cuerpos parabasales.
El caracter particular de los trofozoitos es la presencia de dos pares de flagelos
anteriores libres y un quinto a to largo de la membrana ondulante que ocupa 2/3
anteriores del cuerpo.
No presenta formas quistica.
La demostracion microscpica de los trofozoitos es la base del diagnstico. Se
recomienda realizar examenes directos de muestras frescas de secrecin vaginal,
secrecin uretral u orina.
Son caracteristicos los movimientos de rotacin de los parasitos.
Tambin se pueden observar los trofozoitos en un extendido teido con coloracin
Giemsa o Papanicolau y se pueden cultivar en medio de Diamond (crecen
despus de 5-7 dias).
Si la muestra resulta negativa, se pueden buscar los parasitos en secrecin
prostatica o utilizarse el diagnstico indirecto con la ayuda de las tcnicas de
inmunoensayo enzimatico (ELISA) o inmunofluorescencia indirecta (IFI).
II. MATERIAL
Laminas coloreadas con Giemsa: Leishmania spp. ( amastigotes y promastigotes)
Trypanosoma cruzi (amastigotes, epimastigotes y trypomastigotes metaciclicos)
Lamina coloreada con Giemsa: Trichomonas vaginalis
Corte histolgico (H-E) con nidos de amastigotes de Trypanosoma cruzy
Impronta con amastigotes de Leishmania spp.(Giemsa)
Microscopio de luz
Papel lente
PRACTICA 8
IDENTIFICACION DE ESPOROZOARIOS HEMATICOS
I. INTRODUCCION
Son parasitos sanguineos. Tienen como hospedador definitivo a un vector. Los
parasitos de la malaria son miembros del gnero Plasmodium (phylum Apicomplexa). En
los humanos la malaria es causada por P. falciparum, P. malariae, P. ovale, P. vivax y P.
knowlesi. Su ciclo biolgico incluye estadios asexuales (trofozoitos, esquizontes y merozoitos)
y sexuales (macrogametocitos, microgametocitos, ooquistes y esporozoitos). Plasmodium
vivax es selectivo y solo invade eritrocitos jovenes, observandose agrandados. Plasmodium
falciparum no es selectivo e invade eritrocitos en cualquier fase de desarrollo, pudiendo
multiples esporozoitos infectar un solo eritrocito, no aumentando su tamaf\o. La forma
infectante es el esporozoito y las formas diagnsticas se observan en la sangre perifrica,
las cuales van a depender de la especie de Plasmodium Ejm trofozoitos y gametocitos en el
caso de P. falciparum. La via de infeccin de esta parasitosis es la cutanea y el mecanismo
de transmisin es la picadura del vector (inyecta esporozoitos).
El eritrocito parasitado por P. vivax presenta granulaciones de Schdffner, P.
falciparum presenta granulaciones de Maurer y P. malariae presenta granulaciones de
Ziemann.
Plasmodium spp.
Caracteristicas morfolgicas generales
En el hombre se pueden observar estadios de trofozoito, esquizonte y gametocito,
que tienen valor diagnostico.
El trofozoito es el primer estadio eritrocitario, tiene un aspecto de anillo y mide
entre 20-30 pm de diametro.
El esquizonte tiene un aspecto globular y da origen a los merozoitos. Estos son
esfricos y miden entre 2-4 pm de diametro y dan lugar a nuevos trofozoitos.
Los gametocitos varian en forma y tamao. En Plasmodium vivax y P.malariae son
redondeados y miden 8-10 pm ocupando todo el eritrocito mientras que en
Plasmodium falciparum tiene forma de media luna y miden 12-14 pm.
La demostracin microscpica de los estadios esquizognicos (trofozoitos,
esquizontes y gametocitos) es la base del diagnstico. Se recomienda realizar
extendidos sanguineos y mtodos de concentracion (tcnica de gota gruesa).
Los estadios esquizogonicos se pueden observar en un extendido teido con
coloracion de Giemsa, Wright o Leishman.
Tambin se puede utilizar pruebas serologicas como el inmunoensayo enzimatico
(ELISA), la inmunofluorescencia directa (IFD) o la hemoaglutinacin indirecta (HAI),
aunque no son de gran ayuda en el diagnstico. En la actualidad se usan las
pruebas moleculares como la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), la cual
es de gran ayuda en la deteccion de infecciones mixtas.
CLASE INSECTA: ORDEN DIPTERA

Identificacin de insectos vectores de malaria: Anopheles pseudopunctipenis, A.
albimanus.
II. MATERIAL
Laminas coloreadas con Giemsa para observar los diferentes estadios de:
Plasmodium vivax. Trofozoito joven, Trofozoito mediano y adultos. Esquizonte
joven, Esquizonte maduro, Macrogametocito, Microgametocito. Plasmodium
falciparum. Trofozoito joven, Gametocitos.
Aceite de inmersin
Microscopio de luz
Papel lente
Diferencias morfolgicas de Plasmodium humanos en sangre perifrica (Figura 9)
ESPECIES P. vivax P .falciparum P. malariae

Trofozoito joven Anular ocupa 1/3 Anular ocupa 1/6 del Anular o en banda
del hematie rara hematie a menudo ocupa 1/3 del hematie
vez hay 2 varios en un hematie muy raro mas de una.
Trofozoito Adulto Forma irregular Forma ameboidea Forma en banda se
ameboidea, se ve pequea. No se ve ve en sangre
en sangre en sangre perifrica. perifrica, pigmentos
perifrica, pigmento en granulos grandes
Citoplasma
marron amarillento
compacto, pigmento
Esquizonte joven Grande amenoide Tamao medio, Pequeo cromatina

cromatina cromatina fragmentada,
fragmentada, fragmentada, no se pigmento grueso.
pigmento lino ve en sangre
perifrica
Esquizonte maduro Grande doble hilera Pequeos, s ve en Forma de roceta o
de merozoitos de sangre visceral 18 a margarita con 6 a 12
18 a 24. 32 merozoitos merozoitos.
Microgametocito Grandes, esfricos, Media luna, Similar a P. vivax,
cromatina difusa, cromatina unica taxa, pero mas pequeos.
Abundante Pigmento malarico
pigmento malarico y oscuro.
granulaciones
(amarillo)
Macrogametocito Esfrico, cromatina Media luna, Similar a P. vivax pero
compacta, cromatina compacta, pequeo, pigmento
Abundante Pigmento malarico grueso diseminado.
pigmento malarico y oscuro.
granulaciones
(amarillo)
Presencia de formas Todas las formas Gametocitos y Todas las formas
en sangre circulante dependiendo del Trofozoitos Jvenes como suceden en
momento en que P.vivax.
tome la sangre en
relacin en relacion
con el ciclo febril.
APENDICE
Figura 3. Amebas intestinales

truphozoi!c
1tj
Figura 4. Amebas de vida libre

Figura 5. Flagelados intestinales

Figura 6. Leishmania (amastigote)
Flagelo anterior
Cinetoplasto granda
Membrana ondulante
Cinetoplasto
Membrana Flagelo
ondulante
Trypanosoma cruzi Trypansoma brucei
Figura 7. Trypanosoma
Figura 8. Cabezas de Panstrongylus, Triatoma y Rhodnius

Ie
roph ite
hi
seq estered
Figura 9. Diferencias morfolgicas de Plasmodium en sangre perifrica

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PROFESOR:................................................ GRUPO: ...

PROPIEDAD INTELECTUAL: Departamento Acadmico de Ciencias Bsicas-USMP

II. AGENTES DE RIESGO

III. PRINCIPIOS BASICOS DE BIOSEGURIDAD

El elemento ms importante de la contencin es el cumplimiento estricto de las

TIPOS DE LABORATORIO CON RELACION AL NIVEL DE BIOSEGURIDAD (NBS)

CLASIFICACION DE LOS MICROORGANISMOS POR GRUPO DE RIESGO

Elementos normales: En un examen microscpico suelen encontrarse como

B. Mtodo de centrifugacin y flotacin

C. Mtodo de concentracin: Ritchie

3. METODOS DIAGNOSTICOS DE HEMO E HISTOPARASITOS

METODOS DE EXAMENES PARA INVESTIGACION DE PARASITOS HEMATICOS

Coloracin de frotis con colorante Wright

Coloracin de gota gruesa

Los protozoos intestinales se presentan generalmente bajo tres formas de vida:

1. El trofozoito o forma vegetativa, que generalmente es el que produce la patologia.

2. El quiste o forma de resistencia que desarrolla el parasito para poder sobrevivir en

3. El prequiste que es una forma intermedia.

En el intestino humano se pueden encontrar protozoos patgenos y protozoos

Heces frescas/fijadas en formol 10%

III. CARACTERISTICAS DE ALGUNOS PARASITOS INTESTINALES

Conocer microscpicamente las caracteristicas morfolgicas de los principales

1. Quiste de Entamoeba coli

Observacin a 100X y 400X de aumento (Figura 1 y 2).

1. Entamoeba coli. t i e n en los quistes, de mayor tamao de 10 a 35 micras

2. Endolimax nana. El quiste oval o redondeado de 8-10 um de tamao,

3. lodamoeba butschlii. El trofozoito m ide de 8 a 20 micras y el quiste de 5 a 14 pm.

4. Giardia intestinalis. El quiste es ovalado y m ide de 10 a 12 pm en su diametro

7. Ascaris lumbricoides. Huevo: forma ovalada con cubierta mamelonada. Identificar

Trichuris trichiura. Huevo: de forma eliptica, de color parduzco cuya dimensin

9 Enterobius vermicularis. Huevos: distinga la forma plana-convexa a cada lado y el

10. UNCINARIOSIS: lnfeccin intestinal producida por los nematodos Ancylostoma

12. Diphyllobotrium sp. Huevo: de forma ovalada y distinga en ellos la cubierta

13. Hymenolepis nana Huevo: de 30 a 40 um de diametro, que se caracteriza por

15. Strongyloides stercolaris. Larva rabditoide: OBSERVE en preparados de heces

(quiste y trofozoito), Endolimax nana, (quiste y trofozoito), Blastocystis hominis

AMEBAS DE VIDA LIBRE

Acanthamoeba castellani y Balamuthia mandrilaris

Los quistes son esfricos y m iden 7-14 um de diametro. Se caracterizan por

A. IDENTIFICACION DE FLAGELADOS INTESTINALES

Coccidio intestinal con ciclo complejo que se completa en un u nico husped

Los ooquistes de Cyclospora se caracterizan por presentar una forma esfrica y

Enterocytozoon bienusi, es el principal microsporidio patgeno del hombre. Infecta

La demostracin microscpica de las esporas es la base del diagnstico. Las

Las tcnicas serolgicas u tiles para el diagnstico indirecto son la tcnica de

CLASE INSECTA: ORDEN DIPTERA

CLASE INSECTA: ORDEN HEMIPTERA.

CLASE INSECTA: ORDEN DIPTERA

Diferencias morfolgicas de Plasmodium humanos en sangre perifrica (Figura 9)

ESPECIES P. vivax P .falciparum P. malariae

Esquizonte joven Grande amenoide Tamao medio, Pequeo cromatina

Figura 3. Amebas intestinales

Figura 4. Amebas de vida libre

Figura 5. Flagelados intestinales

Figura 6. Leishmania (amastigote)

Trypanosoma cruzi Trypansoma brucei

Figura 8. Cabezas de Panstrongylus, Triatoma y Rhodnius

Figura 9. Diferencias morfolgicas de Plasmodium en sangre perifrica

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