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Introduccin

TEMA 1

INTRODUCCIN A LA BIOQUMICA

La bioqumica tiene como objetivo ms importante el estudio de la estructura, organizacin

y funciones de la materia viva desde el punto de vista molecular.

Segn los aspectos tratados, esta puede dividirse en 3 bloques:

1.- bioqumica estructural

2.- bioqumica metablica o metabolismo
3.- biologa molecular

La bioqumica estructural estudia la composicin, conformacin, configuracin y estructura

de las molculas de la materia viva, relacionndolas con su funcin bioqumica.

El metabolismo estudia las transformaciones, funciones y reacciones qumicas que sufren o

llevan a cabo las molculas de la materia viva.

La biologa molecular estudia la qumica de los procesos y molculas implicadas en la

transmisin y el almacenamiento de la informacin biolgica.

La bioqumica, fundamentalmente extrae conocimientos de biologa, qumica y gentica, y

usa tcnicas que ha importado de la fsica.

Origen de la bioqumica
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El origen del trmino bioqumica se remonta a los comienzos del siglo XIX, cuando
imperaba una teora conocida como vitalismo que sostena que las sustancias existentes
en la materia viva eran cualitativamente diferentes de la materia no viva, y que no se
comportaban segn las leyes conocidas de la fsica y la qumica.
Esto se derrumb a raz de los trabajos de un bioqumico alemn (Whler en 1828), que
sintetiz en un laboratorio urea a partir de cianato amnico. Hasta entonces se pensaba que
solo se poda sintetizar en los animales, en el rin.
La corriente vitalista an persisti porque se crea que las reacciones de la materia viva solo
podan realizarse en clulas vivas. Segn el vitalismo, las reacciones biolgicas se
producan por una fuerza vital de naturaleza misteriosa pero no por procesos qumicos o
fsicos.
Se encargaron de echar esto abajo los hermanos Buchner en 1897, observando que
extractos de clulas de levaduras rotas y por lo tanto muertas, eran capaces de llevar a cabo
la fermentacin del azcar hasta etanol. Esto abri el camino al estudio de las reacciones y
procesos bioqumicos in vitro. A partir de aqu se avanz ms rpidamente en el
conocimiento de las diferentes rutas metablicas.
A finales del siglo XIX todava persistan cientficos vitalistas sosteniendo que la naturaleza
de la catlisis biolgica (las enzimas) y sus estructuras eran demasiado complejas para
describirlas en trminos qumicos.
Este ltimo postulado se derrumb en 1926, cuando Sumner fue capaz de cristalizar una
protena (ureasa purificada de la juda) demostrando que aunque las protenas tienen unas
estructuras grandes y complejas, es posible sintetizarlas como otro compuesto inorgnico
cualquiera y que sus estructuras pueden determinarse con los mtodos de la fsica y
qumica.
A partir de aqu, la contribucin ms importante consisti en establecer las estructuras
qumicas bsicas de las sustancias biolgicas, identificar las reacciones de cada ruta
metablica y localizar stas en el interior de la clula.
Esto es apoyado por el avance en las tcnicas de la biologa celular.
En la mitad del siglo XX se desarrolla la biologa molecular, aunque la idea de gen ya
haba sido propuesta en el siglo XIX por Mendel.
A mediados del siglo XX todava nadie haba aislado un gen ni se haba determinado su
composicin qumica. La mayora de los cientficos pensaban que los cidos nucleicos
tenan una funcin meramente estructural, y que tan solo las protenas eran lo
suficientemente complejas estructuralmente para ser portadoras de la informacin gentica.
En los aos 40 y 50 se demostr que esto era errneo, y que el ADN era el portador de la
informacin gentica.
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Watson y Crick publicaron la estructura en doble hlice del ADN, as como todos lo
descubrimientos posteriores relacionados con los mecanismos de la transmisin de la
informacin biolgica.
Esto dio lugar a una nueva rama de la biologa, la biologa molecular.
La bioqumica tambin nutre de conocimientos a otras ramas de la biologa como la
biofsica, la nutricin, investigacin mdica o biotecnologa entre otros.

PROPIEDADES, ORIGEN Y EVOLUCIN DE LAS BIOMOLCULAS

Bioelementos o elementos biogenticos:

Casi todos los bioelementos se sitan en la primera mitad del sistema peridico. La
composicin en elementos de casi todos los seres vivos es bsicamente similar, aunque
constan de diferencias como el caso del yodo, que es imprescindible para los vertebrados
pero no para otros animales.
En el hombre se han identificado al menos 30 que son indispensables en proporciones muy
diversas. Segn su abundancia, se clasifican en 3 grandes grupos:
- Bioelementos primarios
- Secundarios
- Oligoelementos

Los bioelementos primarios son H, O, C, N. Son los ms abundantes en todo el

organismo. En el caso del hombre, el 99% del total.

Los bioelementos secundarios son Ca, P, K, S, Na, Cl, Mg, Fe. Son mucho menos
abundantes, pero tambin estn presentes en todos los organismos. En el cuerpo humano
constituyen el 0,7% del total de tomos.
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Los oligoelementos son el grupo ms numeroso: Mn, I, Co, Cu, Zn, F, Mo, Se....
Aparecen tan solo en cantidades trazas, y la diferencia con los anteriores es que algunos no
son esenciales en todos los organismos.
La ausencia de estos bioelementos determina la aparicin de enfermedades.

La razn por la cual los primarios estn en mayor proporcin se debe a que son los
elementos ms pequeos del sistema peridico que pueden formar enlaces covalentes.
En el caso concreto del C, este presenta la caracterstica de que adems de formar enlaces
de este tipo con otros tomos de otros elementos, tambin puede formar enlaces covalentes
consigo mismo, dando lugar a cadenas de tomos de carbono que pueden tener ms de 100
tomos de C y que pueden ser lineales, ramificadas o cclicas.
Los enlaces pueden ser dobles, lo que da lugar a la aparicin de una gran variedad de
grupos funcionales.
Tambin los enlaces pueden ser triples, aunque son muy raros.

El silicio es un tomo que tambin puede formar cadenas consigo mismo, pero estos
enlaces se oxidan y se rompen por lo que en una atmsfera de O2 como la nuestra, stos
son inestables.

Las funciones desempeadas por los bioelementos son muy variadas, y las agruparemos
en 3 tipos fundamentales: plsticas / estructurales, catalticas y osmticas.

Hay elementos que desempean funciones plsticas o estructurales ya que forman parte de
huesos, tejidos fibrosos, tegumentos, etc... Dentro de este grupo estn C, O, H, N, pero
tambin S, P, Ca.

En segundo lugar, muchos desempean funciones catalticas. Un ejemplo es el caso del Fe,
que participa en el transporte de oxgeno y electrones, o el caso del Zn que es cofactor de
muchas encimas, o el I, que forma parte de las hormonas tiroideas o el Co, que forma parte
de la vitamina B12 .

En tercer lugar hay bioelementos con funciones osmticas. Destacan el Na, K, Cl, que en
forma inica intervienen en procesos como la distribucin del agua en compartimentos intra
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y extracelulares en procesos como el mantenimiento de potenciales de membrana, as como

otros relacionados.

Del mismo modo que los bioelementos, definimos las biomolculas o principios
inmediatos como aquellas constituyentes de los seres vivos, que segn su naturaleza las
clasificamos en 2 grupos, inorgnicas y orgnicas.

Dentro de las inorgnicas, tenemos el H 2 O , gases como O2 y CO2 , sales inorgnicas

como aniones (como fosfato, bicarbonato) o como cationes (como el amonio).
Dentro de las molculas orgnicas tenemos adems de glcidos, lpidos, protenas y cidos
nucleicos, otras amplias variedades de biomolculas que se conocen en conjunto como
metabolitos, intermediarios de etapas de rutas metablicas, como el piruvato, cido
ctrico, urea, etc.
Aunque existe una gran variedad segn los distintos tipos de clulas, el principal
componente celular siempre es el H 2 O , que representa el 75% aproximadamente. El 2
componente celular en abundancia son las protenas, con un 15%. El 10% restante se
reparte entre las dems biomolculas. Aproximadamente, un 2% de azcares, 3% de
lpidos, un 2% de ARN, un 0,5% de ADN, un 1,5% de metabolitos intermediarios y un 1 %
de sales. Hay ciertos grupos de clulas que se salen de esta generalidad debido a sus
funciones, como las clulas adiposas, que contienen un % mayor en lpidos, o las clulas
hepticas, con un % mayor en azcares. Estos porcentajes tambin pueden variar segn el
estado fisiolgico de la clula. Por ejemplo, si la clula se encuentra en mitosis, el % ser
mayor en cidos nucleicos, que si estuviese madura.
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composicin bioqumica

agua
80
proteinas
70
60 azcares
50 lpidos
40 ARN
30 ADN
20 metabolitos intermediarios
10 sales
0

Tipos de enlaces entre biomolculas

Intramoleculares: unen los tomos para formar la biomolcula. Pueden ser covalentes o
inicos.
Intermoleculares : las molculas interaccionan formando asociaciones supramoleculares
que pueden llegar a ser bastante complejas. Las fuerzas intermoleculares son ms dbiles
que las covalentes. Entre estas, tenemos las electrostticas, puentes de hidrgeno, fuerzas
de Van der Waals, interacciones hidrofbicas y polares.
Ejemplos tpicos de estas estructuras supramoleculares son los ribosomas, la cromatina, las
membranas...

Modelos moleculares

Son modelos creados que usamos para representar la estructura en 3D de las biomolculas.
Esta la podemos representar por 3 tipos de modelos: espaciales, de esferas y varillas, y
esquelticos.
Los primeros son los ms realistas, ya que en ellos el tamao y configuracin de un tomo
en concreto viene determinado por las propiedades del enlace y por los radios de Van der
Waals.
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Ejemplos de espacial

Los modelos de esferas y varillas son menos realistas ya que los tomos estn representados
por esferas ms pequeas de lo que les correspondera segn los radios de Van der Waals,
pero en ellas se aprecia ms fcilmente la disposicin de los enlaces, representados por las
varillas.

Ejemplos del modelo de representacin con esferas y varillas

Los esquelticos nos proporcionan la imagen ms simple ya que solo muestran la

disposicin molecular. Los tomos no estn indicados explcitamente sino que la
disposicin de estos se deducen en los sitios de unin de los enlaces y sus trminos. Estos
modelos se usan sobre todo para representar grandes molculas que pueden tener varios
miles de tomos.

Los tomos de H solo se suelen representar en el primer tipo de modelos.

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Adems de estos 3 modelos tambin se suelen utilizar representaciones esquemticas de

estructuras extensas como sucede con la clsica representacin del ADN como 2 cintas en

espiral o como sucede tambin en el caso de las protenas en sus modelos de cintas. Las
cintas representaran las regiones de la protena en hlice , las flechas en lmina , y los
cordones como estructuras enrolladas al azar.
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TEMA 2

EL AGUA EN LOS PROCESOS BIOLGICOS

Estudiaremos el H 2 O porque es la molcula ms abundante y porque la inmensa mayora

de las reacciones bioqumicas tienen lugar en un medio acuoso y obedecen a las leyes
fsico-qumicas de las disoluciones acuosas.

- En primer lugar, el H 2 O es lquida en un amplio rango de temperaturas (0-100C).

Esto permite que la vida pueda desarrollarse en condiciones climticas muy
dispares.
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- Presenta una densidad mxima a 4C. En consecuencia, el hielo flota sobre el H 2 O

lquida, actuando como aislante trmico, lo que permite que la gran masa de los
ocanos se mantenga lquida y por tanto, la vida de numerosos seres acuticos.
- Elevada constante dielctrica, que permite la disolucin de la mayora de las sales
minerales, ya que debilita las fuerzas electrostticas entre los iones.
- Es un dipolo, por lo tanto, sus molculas tienden a rodear a los iones aislndolos
unos de otros, facilitando la disolucin de las sales. se dice que estos iones quedan
solbatados. El H 2 O tambin solbata otras molculas polares no inicas como el
etanol.
- Elevado calor especfico, gracias a lo que los animales pueden ganar o perder
bastante calor con escasa modificacin de la temperatura corporal. Esto explica el
papel termorregulador corporal de la sangre.
- Elevado calor de vaporizacin. Esto quiere decir que un animal puede eliminar el
exceso de calor vaporizando cantidades de H 2 O relativamente pequeas a travs de
pulmones y piel, pudiendo mantener as la temperatura corporal por debajo de la
ambiente.
- Elevada tensin superficial. Sus molculas se ordenan de modo que la superficie
libre sea mnima. Las sustancias denominadas tensoactivas, como los detergentes,
son capaces de disminuir la tensin superficial del agua, lo que facilita la mezcla o
inclusin de las grasas en un medio acuoso. As es como actan las sales del
intestino delgado, que facilitan la disolucin de las grasas en este.

- Una disociacin en OH y H crtica para muchos procesos biolgicos. Las

clulas vivas tienen mecanismos bastante eficaces para controlar estas
concentraciones.

Muchas de estas propiedades se deben a que sus molculas se hayan enlazadas por fuerzas
intermoleculares que son especialmente, puentes de H y fuerzas de Van der Waals.

Disoluciones acuosas
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Una disolucin es una mezcla homognea de molculas diferentes (solutos) en un

disolvente. En bioqumica la gran mayora de las disoluciones son acuosas. Al disolverse en
agua, estos solutos modifican las propiedades del disolvente como el color, densidad...
Algunas de estas propiedades no dependen de la naturaleza del soluto, sino solo del nmero
de partculas disueltas y las denominamos propiedades coligativas de las disoluciones, que
son:
- descenso de la P de vapor
- descenso crioscpico, o de la temperatura de congelacin
- incremento de la temperatura de ebullicin
- P osmtica

Desde el punto de vista fisiolgico destaca la presin osmtica, porque las membranas
celulares actan como membranas semipermeables.

Ejemplo: los eritrocitos, que forman parte de la sangre. Si colocamos uno en agua destilada,
este estallar (se lisar) ya que en su interior hay una concentracin de soluto, y el agua
entrar en su interior hasta equilibrar las concentraciones interna y externa. Se calcula que
la presin a soportar por las paredes del eritrocito sera de 7,6 atmsferas.
Cuando forman parte de la sangre no se lisan porque este medio es isotnico respecto del
interior del glbulo rojo.

Para mantener constante la concentracin de solutos en el medio interno del organismo, hay
diversos mecanismos. Destacan la sed y la filtracin renal, reguladas por osmoreceptores
conectados con el sistema nervioso central.

Las disoluciones acuosas las diferenciamos en dos tipos: moleculares e inicas.

En las primeras, las molculas disueltas mantienen su integridad como en el caso de
azcares, protenas... En las inicas, las molculas disueltas se disocian en el disolvente en
dos o ms iones.
Que un disolucin sea una o otra repercute directamente en sus propiedades coligativas, ya
que dependen del nmero de partculas disueltas, y por tanto, como en una disolucin
inica, el nmero de iones es mayor que el de molculas disueltas, el efecto sobre las
propiedades coligativas ser mayor, mientras que en el caso de las disoluciones moleculares
ser mucho menor a causa de que las partculas son tantas como las molculas disueltas.
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Un tercer tipo de disoluciones son las coloidales, que se caracterizan porque las partculas
del soluto superan un determinado tamao, (normalmente un dimetro mayor a 10 o una
masa superior a 10 kilodalton). Las disoluciones coloidales difieren de las disoluciones
verdaderas en algunas propiedades. Por ejemplo, se pueden precipitar por centrifugacin a
alta velocidad. La superficie de contacto de las molculas con el agua o interfase adquiere
una especial relevancia en este caso, y numerosas tcnicas analticas se basan en las
propiedades de estas interfases.
Biomolculas que dan lugar a coloides son los polisacridos, protenas y cidos nucleicos.
Estas macromolculas presentan ,en su interfase con el agua, grupos polares como el OH o
inicos como el carboxilo o el amino, que ordenan a su alrededor una gran cantidad de
molculas de agua. Como estas macromolculas son de gran tamao, incluso las
disoluciones concentradas contienen un nmero pequeo de molculas, por lo tanto las
propiedades coligativas de las disoluciones coloidales son poco observables. Sin embargo,
la P osmtica s es importante, y presenta algunas peculiaridades en los siguientes casos:
- cuando el coloide es inico
- cuando el compartimento que contiene el coloide est limitado por una membrana
semipermeable
- cuando al otro lado de la membrana semipermeable existe un soluto inico difusible

En estos casos el coloide s origina una presin osmtica que se debe, por una parte, a la
presencia de las macromolculas coloidales, pero tambin a la existencia en este
compartimento de un exceso de partculas inicas difusibles que son atradas por el
coloide. A esta presin se le denomina presin coloidosmtica, debida a que el coloide
tiene carga y por lo tanto atrae a iones que son los que crean la P.
Esto sucede en biologa en muchos lugares como entre el plasma y el lquido intersticial,
separados por el endotelio del capilar.

Las molculas que se disocian decimos que son electrolitos y diferenciamos

- los electrolitos fuertes, cuando la disociacin es total,y
- los dbiles, cuando la disociacin es solo parcial

Equilibrios inicos
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El agua es un electrolito dbil que se disocia en muy baja proporcin de la siguiente

manera: H 2 O H OH . Solamente una molcula de cada 553 10 6 est disociada, y
esto presenta un gran inters en biologa.

H OH cte 10
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. En agua pura, H OH 10 7 , es decir, que el agua pura
tiene un PH = 7.
Cualquier sustancia que haga variar una de las concentraciones de los iones har que la
concentracin del otro tipo inico se modifique de modo que el producto siga siendo
constante.

El inters fisiolgico del PH se refleja en varios aspectos. En primer lugar, el

funcionamiento armnico de muchos procesos del organismo requiere la actuacin
concertada de muchas encimas, y la accin cataltica de estas dependen del PH. Adems en
el interior de las clulas se producen gradientes locales de PH que se usan en el
almacenamiento de energa qumica en forma de ATP, como sucede por ejemplo entre la
mitocondria y el citosol.
Por otra parte, proceso como el intercambio de gases en los pulmones est regulado por
cambios muy suaves de PH en el interior del eritrocito.

En resumen, en bioqumica tendremos que tener en cuenta el tipo de disolucin que usemos
y el PH.

La mayora de los cidos y bases que tienen inters fisiolgicos son, al igual que el agua,
electrolitos dbiles y estn solo parcialmente disociados. Por ejemplo, el cido actico se va
a disociar segn esta ecuacin: AcH Ac H . En el equilibrio, la constante de

equilibrio es: K
Ac
. Igualmente sucede con otros cidos y bases dbiles.
AcH

Para los cidos y bases dbiles, K es muy baja y con lo que se trabaja es con el pK (-log K).
En la escala de pK los cidos dbiles tienen valores menores a 7 y las bases mayores a 7.
Cuando el cido se encuentra disociado al 50% la concentracin de la forma no disociada
es igual a la concentracin de la forma disociada y por lo tanto podemos decir que PH=pK
. Tambin podemos definir el pk como el PH al que el 50% del cido est disociado.
El pK de los cidos y bases dbiles se puede determinar mediante las curvas de titulacin.
Lo ms importante de las curvas es que muestran como un cido dbil y su anin pueden
actuar como tampones.
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Un sistema tampn o amortiguador es usado por el organismo para protegerse de

variaciones bruscas de PH.

NOTA: adems de tampones o amortiguadores podemos encontrarnos con el trmino

ingls Buffers.

Estas disoluciones contienen en proporciones anlogas las formas disociada y no disociada

de un cido o base dbil, que conseguimos mezclando en proporciones adecuadas un cido
dbil y base fuerte, o base dbil y cido fuerte, de forma que lo que se origina es una
mezcla de un electrolito y una sal fuerte. Cualquier factor externo que tienda a variar la
concentracin de H desplazar el equilibrio hasta que la nueva concentracin de H sea
similar a la inicial. A efectos cualitativos, los sistemas tampn se rigen por la ecuacin de
Hndersson Hasselbach, que es PH pK log
anin .
cido

Las disoluciones reguladoras cumplen una serie de normas:

El PH de una reguladora no depende de las concentraciones absolutas de cido y base o sal
si no de la proporcin entre las formas disociada y no disociada, con lo que a una
disolucin tampn podemos aadir agua sin modificar su PH. Aunque no vara, lo que
ocurre es que las disoluciones ms concentradas tienen mayor capacidad de
tamponamiento. Adems la amortiguacin es mxima cuando el PH del medio coincide con
el pK del amortiguador. Si la diferencia entre el PH y el pK es mayor a 2 entonces no hay
capacidad amortiguadora.
Una base dbil actuar como tampn al aadir un cido fuerte siempre que al reaccionar
entre s quede algn exceso de base.

En el organismo tenemos una serie de amortiguadores fisiolgicos, de los cuales destacan

los fosfatos. En los tejidos el fosfato se haya combinado con azcares, lpidos o cidos
nucleicos. El cido fosfrico tiene 3 tomos de H disociables. Su disociacin es gradual y
cada uno de ellas posee un pK especfico. Pues bien, solo la disociacin del segundo protn
tiene inters fisiolgico ya que su pK es 6,86 , cercano al PH fisiolgico.
Otro importante es el sistema del bicarbonato, ya que el cido carbnico se haya en
equilibrio con el CO2 y por tanto la concentracin de cido carbnico en sangre se

modifica variando la ventilacin pulmonar. Por ltimo, el amortiguador ms importante

fisiolgicamente son las protenas, que contienen grupos funcionales que son cidos y bases
dbiles con una amplia gama de pKs, de manera que funcionan como buenos
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amortiguadores casi a cualquier PH. Por su abundancia en la sangre y su papel en la

respiracin, la hemoglobina destaca como amortiguador entre las protenas. Su peculiaridad
ms importante en este sentido es que su pK vara segn est o no oxigenada, lo que le
confiere una capacidad amortiguadora adicional.

los aminocidos, constituyentes de protenas poseen un grupo carboxilo y otro amino.

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Metodologa bioqumica

TEMA 3

EL MATERIAL BIOLGICO. HOMOGENADO DE TEJIDOS

Aspectos generales de la metodologa bioqumica

En la investigacin bioqumica con frecuencia se necesita purificar un componente

particular de entre una mezcla compleja. Diferenciamos 2 separaciones, las analticas y las
separativas.
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En las analticas el objetivo es identificar y estimar pequeas cantidades de los compuestos,

y generalmente no es necesario recuperar el compuesto despus del proceso de separacin .
Para determinar la presencia de un compuesto en una mezcla se compara su
comportamiento durante el proceso analtico con el de un compuesto conocido que se
denomina estndar o patrn, y que se somete exactamente al mismo tratamiento.
La determinacin cuantitativa del compuesto puede hacerse sin necesidad de purificacin
previa en algunos casos, en los que dicho componente posee una proporcin nica que lo
caracteriza, como sucede con los ensayos de actividad encimtica en extractos crudos o
clulas enteras.
En cuanto a las separativas, el objeto es distinto. Se trata de aislar y recuperar una gran
cantidad del compuesto en un grado de pureza para poder, con este compuesto aislado,
estudiar sus propiedades qumicas o biolgicas. Las separativas requieren una mayor
cantidad de material de partida que las analtica para garantizar un alto grado de
recuperacin del compuesto. Los mtodos utilizados poseen una resolucin menor que los
mtodos usados en las tcnicas analticas.

Usualmente los procesos de purificacin de una molcula en bioqumica comienzan con

tcnicas preparativas que nos dan una buena cantidad de material ya purificado. A
continuacin se sigue purificando hasta que alcancemos el grado de pureza deseado.
Normalmente a mayor pureza menor recuperacin.

El material biolgico usado en bioqumica

La experimentacin en bioqumica puede llevarse a cabo de dos modos fundamentales, in

vivo e in vitro.
El primer trmino se aplica a organismos multicelulares y utiliza plantas o animales enteros
o tambin parte de los animales en las cuales determinados rganos estn prefundidos con
nutrientes. La perfusin implica el bombeo de una disolucin isotnica cargada con
nutrientes, frmacos u hormonas a travs del rgano. Esta solucin asume el papel de la
circulacin normal, aportando nutrientes y eliminando sustancias de desecho.
Los animales se utilizan en investigacin fundamental as como en mdica, veterinaria y en
pruebas toxicolgicas. Los animales ms empleados son ratones, ratas y cobayas, debido a
su bajo precio y facilidad de manejo, pero tambin otros animales como conejos, muy
empleados para preparar anticuerpos. Tambin son utilizados gatos, perros, monos, cerdos,
etc...
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Estos animales deben mantenerse en pequeos grupos homogneos en lo relativo a edad,

sexo, estado fisiolgico... y controlados desde el punto de vista de nutricin, posibles
enfermedades...
Los resultados extrados con experimentos con animales deben ser sometidos a la
estadstica, realizando experimentos con ms animales.

Las plantas enteras se han necesitado en investigacin bsica para el estudio de procesos
como la fotosntesis, respiracin, asimilacin del nitrgeno... pero tambin para
investigacin aplicada en campos como loa patologa, polucin, tecnologa de los
alimentos...
Las plantas, segn las necesidades del experimento y especie, pueden obtenerse de
plantaciones de exterior o de invernadero. La utilizacin de estos ltimos tiene la ventaja de
que se controlan aspectos como la temperatura, humedad, iluminacin...

Los in vitro implican la incubacin del material biolgico en ambientes fsico qumicos
artificiales. Este trmino se aplica a preparaciones encimticas, rganos prefundidos pero
aislados del animal, microorganismos intactos y a partes escindidas de animales o plantas.
Tambin se usa en la experimentacin in vitro clulas desagregadas de tejidos animales por
tratamiento con encimas como la tripsina o colagenasa, que degradan la matriz
extracelular que mantiene los tejidos y rganos unidos.
En un rgano normalmente coexisten varios tipos de clulas. Para separar estos tipos se
usan dos mtodos fundamentalmente. Por una parte la centrifugacin que separa las clulas
en funcin de su tamao. Ms recientemente se desarrollaron los denominados
clasificadores de clulas activadas por fluorescencia, que consisten en que una suspensin
celular se trata con una anticuerpo marcado con fluorescencia (unido a un componente
fluorescente) que se dirige contra un antgeno de la superficie celular que est presente en
cantidades diferentes en los distintos tipos de clulas. A continuacin las clulas can
pasando en fila de una a una por un rayo lser y se van separando fsicamente de acuerdo
con la cantidad de fluorescencia que presenta cada una. Estos aparatos son capaces de
separar varios miles de clulas por segundo.

Adems, para la experimentacin in vitro tambin se pueden usar las clulas animales o
vegetales en cultivo. La ventaja de la utilizacin de los cultivos es que obtenemos
poblaciones homogneas y adems en condiciones controladas de manera que podemos
inducir o reprimir un determinado encima o ruta metablica.
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En general, podemos decir que los mtodos de esta investigacin han permitido avanzar
ms rpido en los experimentos bioqumicos, aunque recibe una dura crtica ya que no
siempre sucede lo mismo cuando estas clulas estn en el laboratorio en cultivo que cuando
estn en vivo en el rgano.

Tcnicas de homogenado de tejidos y fraccionamiento de orgnulos celulares

El primer paso en cualquier proceso analtico en el cual el contenido celular deba ser
liberado, consiste en la homogeneizacin de tejidos y la rotura de celular. Esto nos
proporciona una mezcla cruda que se puede utilizar como material de partida en procesos
analticos, o para la determinacin de actividades encimticas o estudios metablicos
cuando la incorporacin de un determinado metabolito por el tejido intacto sea difcil.
Tambin podemos usar otros tejidos homogeneizados para la separacin de los
componentes celulares (fraccionamiento celular), en experimentos de compartimentacin
metablica ( determinar en qu parte de la clula se produce un proceso o ruta metablica).

El material biolgico que se va a homogeneizar se debe seleccionar de modo que sea rico
en los orgnulos de inters, y adems muy activo en la va metablica que se va a estudiar.
Por ejemplo, si queremos estudiar la cadena respiratoria, seleccionaremos un tejido rico en
mitocondrias, como el hgado fresco. Si quisisemos aislar ncleos, tomaramos un trozo de
timo. Adems tenemos que tomar la precaucin especial de que la solucin en la que se
lleva a cabo la homogeneizacin debe ser isotnica (generalmente disoluciones de
sacarosa). El fraccionamiento celular se hace mediante centrifugacin diferencial ( a
diferentes velocidades y durante tiempos distintos), as es posible separar ncleos,
cloroplastos, lisosomas, mitocondrias, microsomas. El contenido del citosol permanece en
el sobrenadante de la ltima centrifugacin.
Muchas encimas y protenas son termolbiles (se desnaturalizan por accin de la
temperatura) por lo tanto estos procesos de homogeneizacin deben realizarse en fro
(generalmente a 4 C en cmaras fras).
Los mtodos empleados para la disyuncin de las clulas se basan fundamentalmente en
que en general, las clulas cultivadas son fciles de romper. Esto se consigue por choque
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osmtico, ciclos de congelacin descongelacin, o por digestin con encimas (proteasas y

lipasas).
Otra manera de romper las clulas animales es el caso de disolventes orgnicos como el
tolueno . sin embargo, levaduras y clulas vegetales poseen un pared celular resistente y
dura que requiere que para romperla se combinen mtodos encimticos y mecnicos. Los
mtodos encimticos implican el tratamiento de las clulas vegetales con pectinasas y
celulasas. En el caso de levaduras su pared se rompe con la lisocima (mezcla de encimas).
Entre los mtodos fsicos tenemos:
- molido con mortero ( en presencia de un agente abrasivo como almina)
- agitacin en presencia de pequeas bolas de vidrio (es muy usado en levaduras, pero
en las plantas se pueden daar los orgnulos)
Tambin se utilizan homogeneizadores que son sistemas de extrusin o prensas ( la french
es la ms usada con levaduras).
Otra manera es la ruptura celular por ultrasonidos. Es muy empleada con bacterias y su
pared. Los ultrasonidos son eficaces pero presentan un inconveniente, la muestra se calienta
mucho, con lo que debemos actuar de manera espordica y enfriando la muestra entre
aplicacin y aplicacin.

El material biolgico lo conservamos con la tcnica del fro, que es la ms utilizada,

congelando la muestra en nitrgeno lquido, porque se considera que las reacciones
bioqumicas se detienen a 130 C, y el punto de ebullicin del nitrgeno es de -196 C,
con lo que nos asegura la baja temperatura requerida. Normalmente esta congelacin se
hace en presencia de un componente protector, que suele ser glicerol, que evita la
formacin intracelular de cristales de hielo como consecuencia de la congelacin rpida que
al descongelar provocara la lisis de las membranas celulares.

Precipitacin fraccionada y centrifugacin. Ultracentrifugacin.

La precipitacin fraccionada es una fase preparativa de la purificacin de protenas. Se

realiza con sales, comnmente sulfato amnico.
Se basa en que en soluciones salinas concentradas, unas protenas son ms solubles que
otras, y as podemos separar distintas fracciones proteicas.
 21

El objetivo de la centrifugacin es acelerar la sedimentacin de sustancias qumicas,

clulas, partculas... creando campos gravitatorios artificiales mucho ms intensos que el
terrestre. Estos campos gravitatorios artificiales se consiguen haciendo girar la muestra a
gran velocidad en unos aparatos llamados centrfugas. Las centrfugas de uso habitual
alcanzan entre 3.000 G y 10.000 G , siendo 1G = aceleracin de la gravedad terrestre.
En cuanto a las ultracentrfugas, estas alcanzan 400.000 G debido a su mayor velocidad
de rotacin y a su actuacin en vaco.
En las centrifugaciones los tubos que contienen la muestra se colocan en una pieza que gira
y que se llama rotor.
Para la centrifugacin es esencial que el centro de gravedad del rotor coincida con el eje de
rotacin. Para ello, es imprescindible que los tubos con la muestra se coloquen equilibrados
en el rotor, situndolos simtricamente con pesos iguales.

Rotor de ngulo fijo.

Mediante la centrifugacin las partculas se separan en funcin de una caracterstica que es

el coeficiente de sedimentacin, simbolizado por S y sus unidades son los svedverg,
siendo 1 S = 10 13 segundos. S aumenta con la masa de las partculas pero la relacin no
es lineal. Podemos usar la centrifugacin simplemente para eliminar partculas grandes o
agregados de una solucin de molculas. Para ello es suficiente usar un rotor de ngulo fijo
y a una velocidad baja. Esto se suele hacer por ejemplo para purificar protenas.
La centrifugacin tambin puede utilizarse para separar distintos tipos de partculas o
molculas grandes unas de otras. En este caso la variante de la tcnica que se aplica es la
centrifugacin en gradiente de sacarosa, en la que se coloca la muestra en un tubo con
una disolucin de sacarosa con distintas concentraciones a distintas alturas del tubo,
estando la ms concentrada abajo. El gradiente se consigue con un aparato especial que va
dejando caer en el tubo cantidades de sacarosa a distintas concentraciones.
La muestra la colocamos en la parte superior del gradiente y en principio quedar flotando
por diferencia de densidad. Luego centrifugamos con un rotor oscilante o basculante.
Aqu el tubo cuelga del rotor por una bisagra, y queda en posicin horizontal debido a la
 22

fuerza centrfuga al rotar. Esta fuerza situar en bandas a los distintos componentes de la
muestra segn sus densidades en las distintas concentraciones de sacarosa.
Finalmente separamos estas bandas perforando el fondo del tubo (que suele ser de plstico)
con una jeringuilla y tomamos cada una de las fracciones.
sta es una tcnica preparativa porque recuperamos el componente de la muestra a
purificar. Si lo que queremos separar son ms protenas debemos recurrir a la
ultracentrifugacin.
La tcnica de sacarosa puede usarse tambin en ultracentrifugacin , que puede usarse de
modo analtico. Con las protenas la analtica nos permite averiguar los coeficientes de
sedimentacin de las protenas y as caracterizarlas segn este parmetro.
 23

TEMA 4 y TEMA 5

TCNICAS DE AISAMIENTO, PURIFICACIN Y CARACTERIZACIN DE

BIOMOLCULAS

Metodos o tcnicas de cromatografa:

La cromatografa implica el paso de una solucin a travs de un medio que presenta una
adsorcin relativa para los distintos solutos. Puede desarrollarse en papel, capa fina o
columna. Las dos primeras no son muy utilizadas en la actualidad, por ello veremos las de
columna.
Las columnas suelen ser de vidrio y se rellenan con un material que puede adsorber
molculas de modo selectivo debido a alguna diferencia en su estructura qumica. Este
material se introduce suspendido en una disolucin tampn adecuada. A continuacin, la
muestra la colocamos en la parte superior de la columna, y vamos aadiendo solucin
tampn lentamente, la cual va pasando lentamente a lo largo de la columna, y recogemos
por la parte inferior de la columna fracciones del tampn que salen.
 24

Este proceso es la ELUCIN. Lo que sale de la columna es el eludo, y la disolucin

tampn que va atravesando la columna es el eluyente. Las molculas que no se adsorben
al material con el que rellenamos la columna o que lo hacen dbilmente son las primeras en
salir, y las recogemos en las primeras fracciones. Las molculas que se adsorben ms
fuertemente tardan ms en elur y adems en algunas ocasiones incluso es necesario
cambiar la composicin del tampn de elucin para que estas molculas se suelten y las
podamos recoger en la fraccin.
Tanto el relleno como la disolucin tampn se seleccionan dependiendo de la base que
desee usarse para la separacin.
Segn cual sea el fundamento de la separacin, distinguimos 3 grandes tipos de
cromatografa en columna:
- de intercambio inico
- de afinidad
- de exclusin molecular
tambin estudiaremos : - HPLC
- cromatografa de gases

Las cromatografas de intercambio inico

se usan para separar molculas de acuerdo con sus cargas elctricas. Aqu el material de
relleno de la columna es una resina de intercambio inico. Estas son polianiones o
policationes. Supongamos que separamos 3 clases de molculas de una mezcla: una con
carga negativa, otra con carga positiva dbil y otra con positiva fuerte. La resina que
debemos usar en este caso es una aninica, que lleva grupos cargados negativamente por lo
que las molculas de la mezcla que estn cargadas negativamente pasarn a travs de la
columna sin adsorberse y se recogern en las fracciones iniciales. Las molculas con carga
positiva sern ligadas por la resina y se unirn ms fuertemente con las de mayor carga
positiva. Para separarlas de la columna y recogerlas en el eludo usamos un tampn con un
gradiente de NaCl ya que estas disoluciones salinas rompen las interacciones
electrostticas. Vamos metiendo aumentando gradualmente la concentracin de NaCl en el
tampn de elucin. A una pequea concentracin recogemos en el eludo las partculas de
carga positiva dbil y a mayor concentracin de sal las de cargas positiva fuertes.

Cromatografa de afinidad:
es ms especfica, se basa en que muchas protenas interaccionan fuertemente con otras
molculas como por ejemplo sucede con las encimas y anlogos de sustratos, o como
sucede con los antgenos y anticuerpos. Las molculas adecuadas (anlogo del sustrato o el
 25

anticuerpo) se unen covalentemente al material con el que se rellena la columna y van a

actuar a modo de anzuelos moleculares para pescar a la protena adecuada. El resto de las
molculas que no se unen al anzuelo simplemente pasan a travs de la columna y salen en
las fracciones iniciales.
Para elur las molculas que se han unido al anzuelo lo que se hace es elur con una sal
tampn que mantenga molculas anzuelo libres o bien algn otro reactivo que pueda
romper la unin entre la protena o anlogo del sustrato o anticuerpo.

Cromatografa de exclusin molecular:

se denomina tambin de filtracin en gel, y en este caso las molculas las vamos a separar
en funcin de su tamao y no de sus propiedades qumicas. En este caso la columna se
rellena con esferas de un gel poroso. Es muy empleado el sephadox, un polmero
ramificado de la glucosa. Se dispone de sephadox de distintas porosidades y seleccionamos
aquella segn el tamao de las molculas que queremos purificar de modo que las
molculas ms pequeas de la mezcla pueden penetrar en las esferas mientras que las ms
grandes no pueden hacerlo. La mezcla se aplica en la parte superior de la columna y se va
eluyendo con un disolucin tampn. Las molculas ms grandes se mueven ms rpido ya
que no pueden penetrar en las esferas del gel sino que se cuelan en los intersticios entre
ellas, entonces estas saldrn ms rpidamente en las primeras fracciones mientras que las
molculas pequeas pueden entrar en las esferas y tardan ms en salir, eluyndose
consecuentemente en orden decreciente de pesos moleculares.

La cromatografa en gel tambin sirve para determinar pesos moleculares ya que existe una
relacin lineal entre el logaritmo del peso molecular de las protenas globulares y el
volumen de elucin en un rango de pesos moleculares que depende del tipo de gel usado.
Hacemos pasar una serie de protenas de peso molecular conocido (patrones) y medimos en
qu volumen recogemos estas y representamos en unos ejes coordinados el logaritmo del
peso molecular frente al volumen de elucin (Ve). Observamos una lnea de puntos recta.
As podemos calcular el peso molecular a partir del volumen de elucin con la grfica.
 26

Para construir una recta de calibrado de este tipo necesitamos medir una serie de
parmetros de la columna que son :
Vt o volumen total de la columna. Es el volumen que ocupa el gel ms el volumen
de los intersticios. Se determina haciendo pasar una molcula con bajo peso
molecular como NaCl y midiendo el volumen en que la recogemos.

Vo o volumen de exclusin. Es el volumen de los huecos que hay entre las

partculas de gel. Para calcularlo hacemos pasar a travs de la columna una
molcula de peso molecular alto, generalmente azul de dextramo.

Ve o volumen de elucin, que es el volumen en el cual recogemos cada una de las

fracciones que recuperamos de las protenas.

En lugar del Ve podemos usar el Kav , que es el coeficiente entre la fase lquida y el gel:
V V0
K av e
Vt V0

Cromatografa HPLC
( High Performance Liquid Chromatography o Cromatografa lquida de alta eficacia):
Las cromatografas estudiadas hasta ahora eran lentas, ya que solo se aplicaba una presin
hidrosttica para que los lquidos se colasen por la columna. Por ello, la elucin suele tardar
varias horas. En este tiempo las molculas ms frgiles se pueden deteriorar. Otro problema
con que nos encontramos es que al ser un proceso lento, la muestra tiende a difundir
(esparcirse) a medida que baja a lo largo de la columna. Cuanto ms dure la separacin
peor ser la resolucin.
La HPCL resuelve estos problemas ya que usa unas presiones entre 5.000 y 10.000 psi para
hacer que los lquidos atraviesen ms rpidamente la columna, con lo que las separaciones
que tardaban horas se reducen a minutos y la resolucin es ms alta debido a que no hay
tanta difusin.
Para poder hacer esto fue necesario desarrollar resinas no compresibles con las que rellenar
la columna, y adems el cambio de columnas de vidrio por unas metlicas, ms resistentes
para soportar las presiones.

Este tipo de cromatografa HPLC tambin puede ser usado como cromatografa de
intercambio inico, de afinidad...
 27

Cromatografa de gases:
Hasta ahora el eluyente era un lquido. Aqu es un gas. Esta cromatografa tiene lugar con la
columna rellenada de un slido inerte que est finamente dividido de materiales muy
diversos como tierra diatomeas, cromosol. Este material se empapa de un lquido no voltil
como un aceite de silicona que constituye la fase estacionaria.
El eluyente es un gas inerte como helio, argn o nitrgeno que se hace fluir a velocidad
constante a travs de la columna.
La muestra debe ser voltil ( para las molculas no voltiles como aminocidos, se hacen
reacciones qumicas que las transformen en derivados voltiles) que se introducen en la
columna disueltos con un disolvente orgnico que se evaporan al introducirlos a alta
temperatura por calentamiento.
Los productos voltiles se van separando a lo largo de la columna segn su reparto entre las
dos fases, la estacionaria y la mvil (gas o gas portador). Como la muestra se volatiliza a
alta temperatura, y es a la que se produce la operacin, las columnas estn metidas en un
horno.
Los productos se van cuantificando a la salida de la columna mediante detectores (muy
variados) que estn acoplados a registradores que nos van a dar un registro o
cromatograma en el que cada componente que hemos separado se va a corresponder con un
pico que sale cada cierto tiempo de retencin que nos permite identificar a qu molcula
corresponde cada tipo, siempre por comparacin de patrones conocidos.
El rea de cada pico nos permite cuantificar el compuesto que hay en la muestra. Esta es
una tcnica analtica, cuantificamos y cualificamos. No es una tcnica preparativa porque
recuperamos cantidades mnimas.

Electroforesis:
Son aquellas en las que aplicamos un campo elctrico a una solucin con molculas del
soluto con carga positiva. Estas se desplazan hacia el ctodo y las de carga negativa hacia el
nodo. A este desplazamiento se le denomina electroforesis.
La velocidad de las molculas en la electroforesis depende de 2 factores:
En primer lugar, guiando el movimiento est la fuerza producida por el campo sobre la
partcula que se corresponde por q donde q es la carga de la molcula en Culombios,
y es la carga del campo elctrico en voltios m . Pero resistiendo al movimiento est la
fuerza de friccin que ejerce el entorno sobre la partcula que es F v siendo v la
velocidad de la partcula y F su coeficiente de friccin, que depende del tamao y forma
 28

de las partculas (molculas) de modo que las grandes o asimtricas presentan coeficientes
de friccin mayores que las pequeas.
Cuando se activa el campo elctrico, las molculas se aceleran hasta alcanzar una velocidad
en la que ambas fuerzas se igualan, siendo q F v

A continuacin se mueve constantemente a esa velocidad. Esta igualdad tambin la

podemos expresar as: v q o movilidad electrofortica, y es la velocidad de
F
movimiento por unidad de fuerza de campo. Consecuentemente, la movilidad de una
molcula es la electroforesis, y depende de su carga y dimensiones moleculares.
Aunque la electroforesis se puede llevar a cabo en disolucin, normalmente se usa algn
soporte. Las dos ms corrientes son el papel y el gel.
La de papel se usa para separar molculas cargadas pequeas. Se hace que la tira de papel
de filtro se extienda humedecida en un tampn entre dos cmaras que son las que
contienen los dos electrodos. En el centro del papel se coloca una gota de la muestra a
analizar y se conecta el campo elctrico. Al cabo de una hora, cuando las molculas se han
separado, se seca el papel y se tie con un colorante que nos deja ver las molculas que
estamos separando. Cada molcula la identificamos como una mancha, y se habr
desplazado hacia el nodo o ctodo segn su carga, y una determinada distancia que
depende de su carga y dimensiones.
Al igual que en la cromatografa cada componente lo identificamos comparndolo con
factores conocidos.
Actualmente se usa ms la electroforesis en gel, que se emplea para separar protenas y
cidos nucleicos. Se coloca un gel que contenga la disolucin tampn adecuada entre dos
placas de cristal. Estos geles son lminas finas de tan solo uno milmetros de espesor. Los
geles suelen ser de poliacrilamida o agrarosa. La primera es para separar protenas y cidos
nucleicos de bajo peso molecular. La agarosa para separar cidos nucleicos de mayor
tamao. El gel se coloca entre los compartimentos que tienen los electrodos.
La muestra se aplica en la parte superior del gel, en los pocillos (hendiduras) y se le
aade glicerol y un colorante. El primero es para que la muestra sea densa y se quede en el
pocillo y no difunda por el tampn que hay en receptculo superior. El segundo (colorante)
nos sirve para seguir el proceso de la electroforesis. Cuando el colorante llega abajo,
desconectamos, y aqu se supone que las molculas ya estn separadas. Con esto realizado
retiramos el gel y lo teimos con un colorante que nos permita visualizar las molculas que
estamos separando, que las veremos como bandas estrechas.
Si la electroforesis se realiza en gel, la movilidad es menor de la que presentan las
molculas en disolucin por el efecto de tamizado molecular que ejerce el soporte, que es
ms fuerte cuanto ms concentrado est el gel.
 29

Para molculas cuya carga es proporcional a su longitud, como el DNA, que presenta una
unidad de carga en cada residuo, presentan una movilidad libre casi independiente de su
tamao. Entonces, en la electroforesis en gel la movilidad de estas molculas viene
determinada por el efecto del tamizado molecular del gel.
As, mediante electroforesis en gel podemos separar las molculas casi exclusivamente por
su tamao.
Representamos el logaritmo del peso molecular frente a la distancia recorrida, y obtenemos
unos puntos que se ajustan a una lnea recta.

Tcnicas de Dilisis y Ultracentrifugacin

La dilisis y la ultracentrifugacin sirven para concentrar y purificar biopolmeros. Se

basan en la utilizacin de membranas semipermeables que permiten el paso de molculas
pequeas pero no de protenas o otras macromolculas.
La dilisis se usa normalmente para eliminar molculas pequeas contaminantes o para
cambiar las condiciones de una solucin tampn.
Habitualmente se coloca la muestra (disolucin de una protena, por ejemplo) en una bolsa
cerrada pero con las paredes de membranas semipermeables y se sumerge en un volumen
mayor de una disolucin tampn dentro de un recipiente. El tampn se somete a una
agitacin mediante un agitador magntico situado debajo de la muestra en la bolsa.

Las molculas pequeas contaminadoras saldrn de esta bolsa hacia la disolucin

tampn, y esta tender a reemplazar el lquido disolvente en el que tenemos la muestra. Si
reemplazamos el tampn varias veces, al final tendremos la protena disuelta en la
disolucin tampn exterior y habremos eliminado otras molculas pequeas que al
principio la acompaaban.
 30

La ultracentrifugacin se utiliza para concentrar disoluciones de macromolculas. Tambin

se usan membranas semipermeables, pero se aplica presin para hacer salir el disolvente y
las molculas pequeas. Hay una gran diversidad de mtodos. El ms sencillo consta de un
recipiente con una membrana semipermeable al que se le aplica una presin con N 2 gas
como se indica en el dibujo:

La dilisis purifica, y la ultracentrifugacin concentra. Otra tcnica es la diafiltracin, una

combinacin de las anteriores, donde se concentra y se eliminan contaminantes al mismo
tiempo.
Primero se concentra la muestra por ultracentrifugacin y se le aade la disolucin tampn
(gran volumen) y la volvemos a concentrar hasta que queda un pequeo volumen, y as
sucesivas veces.

Tcnicas de Radiactividad

Los istopos radiactivos se empezaron a utilizar despus de la segunda guerra mundial, y

presentaron un gran avance ya que amplan en varios rdenes de magnitud la sensibilidad
con la que detectamos una especie qumica. Los anlisis tradicionales permiten detectar
molculas en cantidades mnimas de nanomoles ( 10 9 moles), mientras que con estas
tcnicas llegamos a una sensibilidad de fentomoles ( 10 15 moles).
Los compuestos marcados radiactivamente son los trazadores, ya que se pueden seguir
las transformaciones que sufren en presencia de un exceso de material no radiactivo.
En bioqumica se usan dos istopos, los radiactivos y los estables. En el caso del hidrgeno,
tenemos el tritio ( 3 H ), radiactivo, y el deuterio ( 2 H ), estable.
La utilidad de los istopos estables la resumimos en:
 31

- incorporando un istopo estable aumentamos la densidad de un material, lo que

nos proporciona un mtodo fsico para separar los compuestos marcados de los no
marcados.

- Los compuestos marcados con istopos estables, en especial el 13C , se usan mucho
en experimentos de resonancia magntica nuclear para el estudio de la estructura
molecular y de los mecanismos de reaccin.

- Como trazadores, cuando no se dispone de los radiactivos adecuados de ese

elemento, como es el caso del 18O y 15 N , que no poseen radiactivos

De entre los istopos radiactivos, en bioqumica se usan los que emiten radiaciones y ,
pero no con emisiones . - Una es un electrn emitido

- Una es una radiacin electromagntica (fotn con alta

energa)

Las emisiones se usan sobre todo en inmunologa ya que existen istopos del yodo que
son emisores y es fcil unir estos istopos a anticuerpos. Salvo esta excepcin, en
bioqumica, los ms usados son los emisores de radiaciones .

La radiactividad es un proceso cintico de primer orden: el nmero de desintegraciones que

se producen en un determinado intervalo de tiempo depende solamente del nmero de
istopos radiactivos presentes.
Este fenmeno da lugar a la ley de desintegracin radiactiva que tiene esta expresin:

N N 0 e t , donde: - N 0 es el nmero de tomos radiactivos en el t = 0

- N es en n de tomos que quedan en el tiempo t

- es la constante de desintegracin
 32

La constante de desintegracin es caracterstica para cada istopo, y est relacionada con

otro parmetro que se emplea ms, que se llama hemivida o T 1 , que es el tiempo
2

requerido para que se desintegren la mitad de los ncleos de una muestra, y es igual a:
0,5 0,693
ln o La hemivida es caracterstica de cada istopo.

La unidad bsica de desintegracin es el Curio (Ci). 1 Ci es la cantidad de radiactividad

equivalente a la que existe en un gramo de radio, es decir, 2,22 1012 desintegraciones por
minuto. En bioqumica se trabaja con cantidades de microcurios ( Ci ).

Los detectores de radiactividad de que disponemos no presentan una eficacia del 100%, por
lo que la radiactividad se expresa en unas unidades relativas que son las cuentas por minuto
(c.p.m.), el nmero de desintegraciones que detecta el aparato en un minuto (menos que las
reales).
Por ejemplo, un contador de radiactividad con una eficacia del 50% para una muestra de
0,1 Ci nos dara un contage de 1,1 10 5 c.p.m.

Para medir la radiactividad disponemos de contadores GEIGER y de contadores de

centelleo, ms empleados.
Los contadores geiger se basan en el fenmeno de la ionizacin que producen las emisiones
radiactivas sobre un medio gaseoso. Estos se usan principalmente para saber, de modo
relativo, si hay o no radiactividad en una muestra, y para cuantificarla pero de modo no
muy aproximado.

Los contadores de centelmo nos ofrecen una mayor precisin. Se basan en los procesos de
excitacin. Aqu la muestra se disuelve o suspende en un disolvente orgnico que incluye
uno o dos compuestos fluorescentes. Una partcula emitida por la muestra tiene una
elevada probabilidad de contactar con una molcula del disolvente. Al ocurrir esto, la
molcula del disolvente es excitada, haciendo que uno de sus electrones pase a un orbital de
energa superior. Cuando este electrn vuelve a su estado inicial se emite un fotn de luz.
Este fotn es absorbido por una molcula de flor que a su vez se excita.
La fluorescencia implica la absorcin de luz a una determinada energa seguida de la
emisin de luz a una energa inferior o longitud de onda mayor .
Un fotomultiplicador detecta este pequeo destelleo de luz y lo convierte en una seal
elctrica que, que es la que se cuenta.
 33

Los istopos emisores presentan un espectro electromagntico caracterstico cada uno.

Estas diferencias se usan en los contadores de centelleo lquido para cuantificar
simultneamente dos istopos de la misma muestra.

Las aplicaciones de los istopos radiactivos en bioqumica son muy variadas. Se incluyen el
estudio de rutas metablicas con trazadores, estudios de cintica encimtica con sustratos
marcados, y la autoradiografa, que se basa en la capacidad de las emisiones radiactivas
para impresionar placas fotogrficas. Esta tcnica combinada con la electroforesis nos
permite, por ejemplo, secuenciar el DNA o hacer estudios de la expresin de los genes,
entre muchas otras cosas.

Tcnicas espectroscpicas

Tanto protenas, como cidos nucleicos o hidratos de carbono, son molculas complejas
que pueden absorber radiacin en un amplio margen del espectro electromagntico. En la
regin infrarroja del espectro se estudia la conformacin de las molculas proteicas.
La regin visible se usa para la medida de la absorbancia de las soluciones coloreadas, y
esto es conocido como colorimetra.
En la zona visible la mayora de los biopolmeros no absorben luz. Aunque algunas
protenas se ven coloreadas, ello es debido a los grupos prostticos o iones, como el cobre
que forman parte del polipptido. El color rojo de la sangre se debe al grupo hemo de la
hemoglobina.
Para poder medir las protenas o cidos nucleicos por colorimetra, hay que transformarlos
en compuestos coloreados mediante reacciones qumicas especficas.

En la regin ultravioleta absorben luz los cidos nucleicos y las protenas, midindose
respectivamente a 260 y 280 nm. En realidad se mide en las cadenas laterales aromticas de
los aminocidos Phe, Tyr y Trp.

Las medidas se absorbancia de luz ultravioleta y visible se hacen en unos aparatos llamados
espectrofotmetros.
La muestra se coloca en una cubeta sobre la que incide una luz monocromtica (con una
sola longitud de onda) que se consigue con un monocromador. Parte de esta luz incidente
va a ser absorbida por la muestra y otra va a atravesarla.
La que la atraviesa es la luz i, y es detectada y registrada.
 34

La absorbancia a la longitud de onda se define como el logaritmo del cociente entre Io

I
e I: log 0 y se relaciona con la concentracin mediante la ley de LAMBERT BEER
I
que dice que la absorbancia es igual a Epsilon por la concentracin y por el grosor de la
cubeta: A c l

es el coeficiente de extincin, caracterstico para cada sustancia. Sus unidades dependen

de las unidades de la concentracin que se emplean ya que la absorbancia no tiene
unidades.
El grosor de la cubeta suele ser de un centmetro, por lo tanto si la concentracin la
expresamos como molaridad, las unidades de seran M L1 cm 1

Esta ley nos permite calcular concentraciones de una sustancia a partir de su absorbancia.
 35

TEMA 6

HIDRATOS DE CARBONO, GLCIDOS

Concepto, clasificacin e importancia biolgica

Los carbohidratos, puramente, son aldehdos o cetonas con mltiples grupos hidroxilo
(polihidroxialdehdos o polihidroxiacetonas). Constituyen la mayor parte de la materia
orgnica de la tierra por sus variadas funciones, de entre las que destacamos:

- Actan como almacenes de energa, combustibles e intermediarios metablicos

- Forman parte de los cidos nucleicos ADN y ARN (desoxirribosa y ribosa)
- Son elementos estructurales en las paredes celulares de plantas y bacterias, y en el
exoesqueleto de artrpodos
- Desempean funciones importantes unidos a protenas y lpidos como la de
reconocimiento intercelular

La clasificacin ms sencilla depende del nmero de unidades de azcar de que consta. As

vamos a tener - las osas o monosacridos
- oligosacridos ( aprox. Entre 2 y 12 unidades )
- polisacridos ( ms de 13 )
 36

A los oligosacridos y polisacridos se les llama tambin sidos , que pueden ser:
- holsidos (formados solo por monosacridos)
- hetersidos ( tamben por una fraccin no glucdica (glucagona))

Los monosacridos

Muchos de ellos tienen como frmula emprica CH 2 O n , y por ello se les llam hidratos
de carbono. Los clasificaremos segn dos criterios:
- Segn el nmero de tomos de C ( triosas, tetrosas, pentosas, hexosas...)
- Segn su grupo funcional : - Aldehdo aldosas
- Cetona cetosas

Lo habitual es combinar los dos criterios, y as tenemos aldopentosas, cetotetrosas...

Los monosacridos ms sencillos tienen 3 tomos de C (aldotrioas y cetotrioas). En el caso

de las aldotriosas vamos a tener 2, debido a que la aldotriosa el el gliceraldehdo , y ste
posee un C asimtrico (C * ) (el carbono 2). Distinguiremos el D-gliceraldehdo y el L-...
dependiendo de si el OH del C * est a la derecha o izquierda respectivamente.

CHO

H C OH D-gliceraldehdo

CH2OH
Las formas D y L son enantimeros porque son estereoismeros pticos (son imgenes
especulaes uno con respecto al otro) y adems son no superponibles.

Si aadimos un nuevo tomo de C, en lugar de una aldotriosa tenemos una aldotetrosa. A

partir del D-gliceraldehdo tenemos 2 tetrosas, y a partir del L otras 2, ya que este nuevo
 37

carbono aadido es asimtrico y por tanto podr presentarse con dos configuraciones
distintas, una con el OH hacia la derecha y otra hacia la izquierda.
Estas tetrosas formadas son la D-eritrosa y la D-treosa, que pertenecen a la serie D ya que
se forman a partir del D-gliceraldehdo, el cual tiene el OH a la derecha del carbono ms
alejado del grupo funcional (aldehdo).

La D-eritrosa y la D-treosa son entre s diastereoismeros porque no son imgenes

especulares.

Si aadimos un nuevo tomo de C, sta molcula tambin podr presentar las dos
conformaciones al ser aquel asimtrico.
La D-eritrosa nos dar lugar a dos pentosas, al igual que la D-treosa. Son importantes la D-
ribosa y la D-Xilosa.

Si seguimos este proceso de adicin de 1 C, obtendremos de cada aldopentosa 2

aldohexosas. Las ms importantes son la D-glucosa y la D-galactosa, que son epmeros
entre s ya que solo se diferencian en la configuracin de un C * , el C4 , en el que la
glucosa tiene su OH a la derecha.

En general, cuando una molcula no contiene planos de simetra, el nmero de

estereoismeros posibles es 2 n , siendo n el nmero de carbonos asimtricos.

En el caso de 1 hexosa, tenemos 4 C * , y por tanto 2 4 estereoismeros posibles, 8 de la

forma D y otros 8 de la forma L.

En el caso de las cetosas todo esto es diferente, aqu el nmero posible de estereoismeros
es menor ya que la cetosa ms pequea es la dihidroxiacetona, y esta n presenta carbonos
asimtricos y solo puede encontrarse con una nica conformacin, no como en el caso del
gliceraldehdo.

CH 2 OH

C=O Molcula de dihidroxiacetona

 38

CH 2 OH

Aadiendo un C como hicimos anteriormente con la otra serie, obtenemos una cetotetrosa,
que es la eritrulosa.

Las cetosas de 4 C tienen el C 3 asimtrico, por lo que podr existir como 2

estereoismeros, la D-eritrulosa y la L-eritrulosa.
Como es una cetosa, su nombre termina en ulosa. La terminaciones de los aldehdos
esosa (eritrulosa).

Si a la D-eritrulosa le aadimos un tomo de C con su correspondiente OH, obtendremos

dos cetopentosas de la serie D, la D-ribulosa y la D-xilulosa. Sus configuraciones (D o L)
nos viene indicado (como antes) por el C ms alejado del grupo funcional. De todos estos,
es importante la D-fructosa.

Tanto las pentosas como las hexosas se pueden ciclar en anillos. En el caso de una
aldohexosa, como la glucosa, reaccionan el grupo carbonilo ( C1 ) y el grupo OH del C 5 ,

formando un hemiacetal intramolecular. Lo que resulta es un anillo de 6 eslabones,

llamdado piransico.
Una glucosa en esta forma cclica, tambin se llama glucopiranosa, y es la forma que
predomina de esta en disolucin.

Cuando una aldohexosa se cicla, aparece un nuevo C * , ya que el C1 ,aunque en la forma

abierta no es asimtrico, al ciclarse se convierte en uno, y por tanto da lugar a que
aparezcan dos nuevos estereoismeros llamados anmeros.

Al C1 se le denomina anomrico.

Estos dos nuevos anmeros se les llama y , que se van a diferenciar en que en la
proyeccin de Haworth el anmero presenta el OH del C1 hacia abajo, mientras que el
anmero hacia arriba.
 39

Los anillos, realmente forman un plano, y los sustituyentes de los carbonos (en los vrtices
del anillo) se sitan hacia arriba y hacia abajo de este. Por ejemplo, en el caso de la glucosa,
cuando el OH est hacia abajo tenemos la -D-glucopiranosa, y si est hacia arriba,
entonces la -D-glucopiranosa.

En el caso de las cetosas como la D-fructosa, la reaccin se produce entre el grupo ceto del

C2 y el OH del C 5 . El enlace de este caso es un hemicetal intramolecular, y da lugar a un

anillo de 5 elementos, que se denomina furansico. En este caso tambin cuando se cicla
la fructosa ( o cualquier cetosa) aparece un nuevo C * anomrico que en este caso es el
C2 , y que posee sus respectivos enmeros y .

La fructosa tambin puede formar un anillo piransico (de 6 lados), formando un

hemiacetal intramolecular entre los carbonos 2 y 6, teniendo un anillo como el de la
glucosa. De echo, la forma piransica es la que predomina de forma libre, pero cuando est
unida a algn sustituyente predomina la furansica.

En disoluciones acuosas los monosacridos presentan la denominada mutarrotacin, que,

por ejemplo, en el caso de la glucosa se produce la interconversin de la -D-
glucopiranosa y la -D-glucopiranosa a travs de la forma de cadena abierta en disolucin,
con lo que se alcanza un equilibrio en el cual tenemos del anmero y 2 del ,
representando la forma de cadena abierta menos del 1%.

La mutarrotacin se detect midiendo el poder rotatorio de disoluciones acuosas de

monosacridos, en las cuales este cambia con el paso del tiempo.

Aunque las proyecciones de Haworth son en un plano, en realidad estas molculas no son
planas, sino que adoptan dos tipos de conformacin, la de silla y la de bote.
Los sustituyentes de los carbonos van a ser de 2 tipos, axiales y ecuatoriales. Los axiales
son perpendiculares al plano central del anillo, y los ecuatoriales son paralelos a este.

Cuando los sustituyentes axiales son grupos distintos del H, se estorban estricamente , y
por tanto, de estas dos conformaciones, la ms estable es la que tenga ms hidrgenos en
posicin axial.
En el caso de la -D-glucopiranosa, la conformacin ms estable es la de silla, en la que
todos los sustituyentes estn ocupados por H.
 40

Los anillos furansicos tampoco son planos. Aqu la conformacin adoptada se denomina
de sobre ya que tienen forma de sobre con la solapa abierta. 4 tomos del anillo son
coplanares, y el 5 se situa en otro plano, formando la solapa.

Tomando como ejemplo la -D-ribosa, el tomo que se aleja puede ser el C 3 o el C2 ,

llamndose respectivamente C 3 -endo y C2 -endo.

La ribosa que forma parte del RNA se encuentra en la conformacin C 3 -endo, mientras
que la dexosirribosa del DNA en la C2 -endo.

Estos anillos furansicos son ms flexibles que los piransicos, y pueden convertirse uno
en otro con mayor facilidad. Esto les da ms preferencia para formar parte de los cidos
nucleicos, frente a las aldohexosas.

Determinacin del enlace oxdico

Esta consiste en averiguar, en un monosacrido, cuales son los tomos implicados en enlace
oxdico. Para ello se emplean dos mtodos fundamentales.
El primero consiste en el tratamiento del monosacrido con un cido peridico, que rompe
los enlaces C-C de las cadenas de los monosacridos, pero no cuando estos participan en el
puente oxdico.
En los monosacridos hay alcoholes (OH) primarios y secundarios. Por tratamiento con
peridico, a partir de los primarios obtenemos aldehdo frmico, y a partir de los
secundarios cido frmico.
 41

Existe otro mtodo que puede usarse complementariamente, que es la metilacin del
monosacrido. Los OH se pueden metilar por tratamiento de yoduro de metilo en presencia
de plata o con sulfuro de metilo en medio alcalino. As se nos metilan todos los OH excepto
los del puente oxdico.
Si despus de la metilacin realizamos una hidrlisis cida suave con HCl diluido,
eliminamos el grupo metilo del C anomrico pero no los otros. A continuacin
identificamos este compuesto por cromatografa, y en funcin de los carbonos metilados
sabremos donde estaba el puente oxdico.
 42

TEMA 7

PROPIEDADES Y DERIVADOS DE LOS MONOSACRIDOS

Propiedades fsicas y qumicas de los monosacridos

Los monosacridos son - blancos y cristalinos,

- solubles en H 2 O pero no en disolventes orgnicos,

- tienen sabor dulce ,

- presentan poder reductor, debido al grupo carbonilo (en el
caso de las cetosas esto solo se manifiesta en medio
alcalino).
- presentan isomera ptica por sus carbonos asimtricos.

Los monosacridos se pueden identificar porque no absorben la luz ultravioleta, pero en la

infrarroja presentan un espectro caracterstico.
 43

Se pueden identificar en luz visible por colorimetra, pero hay que transformarlos en
compuestos coloreados previamente.
Tambin se pueden identificar por cromatografa.

Reacciones y derivados de los monosacridos

Oxidacin de los monosacridos:

Puede producirse de diversas formas segn cual sea el agente oxidante. Usando, por
ejemplo, la oxidacin suave de una aldosa en presencia del in Cu 2 y en medio alcalino,
obtenemos el cido aldnico. El reactivo de Fehling es el usado para la oxidacin.
Como consecuencia de la oxidacin se forma Cu2O de color rojo que nos permite
identificar si hay o no un monosacrido reductor.

Otro tipo de derivados por oxidacin son los cidos urnicos, que se forman por
oxidacin suave en el grupo alcohol primario ( CH 2 OH ) , que est en el C6 en la glucosa.
Se oxida a un grupo cido, y el cido correspondiente es el glucurnico (en el caso de la
glucosa). Los cidos urnicos no se encuentran en estado libre.

En los cidos aldricos se oxidan los dos tomos de C con alcoholes primarios. Es una
oxidacin enrgica, y afecta al C del grupo carbonilo y al del OH primario.
El de la glucosa se denomina cido glucrico o sacrico.

Conjuntamente con los cidos aldricos y aldnicos aparecen uno compuestos que
qumicamente son lactonas que se forman mediante una reaccin de esterificacin
intermolecular con liberacin de una molcula de agua. Por tanto, reacciona el grupo cido
del C1 con uno de los grupos alcohlicos de la aldosa.

Aparecen la o la gluconolactona, dependiendo de que OH acta, llamndose los

carbonos de despus del C1 , , , y respectivamente.

Los cidos aldnicos estn en equilibrio con las lactonas en disolucin.

Las lactonas son compuestos importantes porque actan como intermediarios del
metabolismo. Adems, destaca una por su importancia biolgica, que es la vitamina C o
 44

cido ascrbico, que se forma a partir de la glucosa, y es una -lactona de configuracin

L y dextrgira.

Formacin de hetersidos mediante enlaces glicosdicos

Los hetersidos se forman por unin de molculas de un monosacrido con otras

molculas. La unin se forma entre el C anomrico de un monosacrido y un heterotomo
de la otra molcula, llamndose a esta unin enlace glicosdico.
Segn cual sea el heterotomo diferenciamos los:
- O-hetersidos, en los que el heterotomo es el oxgeno, y el enlace es O-glicosdico.
- S-hetersidos, azufre S-glicosdico.
- N-hetersidos, nitrgeno N-glicosdico.

Los O-hetersidos (tambin llamados O-glucsidos) se forman por condensacin del

monosacrido con un hidroxilo alcohlico o fenlico que aportan el O. En esta unin
tambin se libera una molcula de H 2 O .

o glucosa o metilglucsido

aunque los glucsidos pueden ser o , no se interconvierten mediante mutarrotacin en

disolucin y por eso se emplean para determinar si los monosacridos son o .

Si este OH aporta otro monosacrido se forma un disacrido unido por un enlace O-

glicosdico.

Los S-hetersidos se forman por combinacin las aldosas con molculas que llevan un
grupo tilo (SH). Se forman mercaptales.
Solo las aldosas dan esta reaccin, no las cetosas, que reaccionan en su estructura lineal.

Los N-hetersidos se forman por condensacin del monosacrido con un grupo aminado.
Por ejemplo, los nuclesidos son N-hetersidos.
 45

Adems, hay dos derivados amino de los azcares que tienen importancia biolgica al
aparecer en muchos polisacridos. Uno de ellos es la glucosamina, en la que se sustituye el
OH del C2 por un grupo amino. En la glucosamina aparece en ocasiones acetilado el grupo
amino (N-acetil-glucosamina). Esto pasa igual con la galactosa.

NOTA: La glucosamina y la galactosamina no son N-hetersidos, ya que no interviene el C

anomrico en su formacin.

Otros derivados de los azcares son los steres fosfato, que se forman por combinacin del
cido ortofosfrico con cualquiera de los grupos OH del monosacrido (anomrico u otro
cualquiera).

Si el carbono que reacciona es el anomrico, hablamos de los cidos osil-fosfricos.

En el caso de la glucosa, el cido D-glucosil-1-fosfrico es la glucosa-1-fosfato.

Existen monosacridos importantes unidos a varios grupos fosfato. Diferenciaremos si

estos fosfatos estn sobre el mismo C o sobre otros. Por ejemplo, la fructosa 1,6 difosfato
( que se recomienda llamar fructosa 1,6 bisfosfato ) posee 2 fosfatos sobre 2 tomos de C
distintos.
Las molculas de cido fosfrico pueden unirse unas con otras, y este conjunto a un C del
monosacrido. En este caso el prefijo sera di,tri... como en el caso del ATP

Otros derivados importantes en biologa son los desoxiazcares, en los que se pierde un
grupo OH . Por ejemplo, en la 2-desoxirribosa tenemos 1 H en lugar de un OH (en la
ribosa). La desoxirribosa forma parte del ADN.

Otros derivados importantes en biologa son los alditoles o azcares-alcoholes, que son
derivados por reduccin del grupo carbonilo (aldehdo o cetona) de los monosacridos.
Los ms importantes de la naturaleza son el D-manitol y el D-sorbitol.
Por ejemplo, de la glucosa obtenemos el sorbitol (o glucitol).
 46

De las cetosas generamos un nuevo C * , y as, por reduccin de la D-fructosa, el OH que

aparece, si est a la derecha, es el D-sorbitol, y si est a la izquierda, el D-manitol. Estos
dos son empmeros.

Reacciones para identificar monosacridos

En medio alcalino, los monosacridos sufren 2 reacciones:

- Interconversin aldosa cetosa (epimerizacin)
- Deshidratacin

La deshidratacin se produce por accin de los cidos y adems en un medio cido fuerte.
A partir de los OH se van liberando H 2 O y se forma un compuesto cclico llamado
furfural. 1 hexosa hidroximetil-furfural

Tanto uno como otro se condensan con fenoles o compuestos nitrogenados cclicos, para
dar lugar a compuestos coloreados.
Por tanto, estas reacciones se usan para la identificacin de los monosacridos.
La reaccin de Molish consiste en la combinacin de -naftol con los monosacridos
dando un compuesto de color violeta indicativo de la presencia de aquellos.

TEMA 8

OLIGOSACRIDOS
 47

Los oligosacridos se forman por la unin de monosacridos mediante enlaces O-

glicosdicos. Por tanto, uno de los C que participan en el enlace debe ser anomrico.

Aunque los oligosacridos contienen entre 2 y 12 monosacridos aproximadamente, los

ms importantes y abundantes son los disacridos (2 monosacridos).

Clasificacin e importancia biolgica. Oligosacridos ms importantes

Los disacridos se nombran y clasifican en funcin de su carcter reductor. Hay disacridos

reductores y no reductores. Esto depende de su grupo carbonilo, que es el que le confiere
dicho poder reductor. Los oligosacridos en los que los dos grupos carbonilo participan en
el enlace no presentan poder reductor, debido a que no queda libre ningn grupo carbonilo
en la molcula. En los disacridos que solo intervenga un grupo carbonilo se dar poder
reductor al quedar uno libre.

Los oligosacridos se nombran en funcin de su carcter reductor, de los monosacridos

que lo formen, y de sus enlaces.

Por ejemplo, la maltosa, deriva de la unin de 2 D-glucosas (Glc). Una Glc reacciona con
su carbono anomrico y la otra reacciona con el OH de su C4 . La maltosa, por todo esto, se
nombrara as: -D-glucopiranosil (14) -D-glucopiranosa (nomenclatura IUPAC)

La terminacin osa nos indica que es reductor.

Hay otra nomenclatura abreviada en la que los monosacridos se designan por 3 letras, y
nuestro ejemplo quedara de la forma: Glc (1 4) Glc (reductor).

Un disacrido no reductor es la sacarosa, formada por la unin de 1 Glc + 1 Fru

(fructosa). En el enlace glicosdico intervienen los dos carbonos anomricos. Exactamente
la unin sera de:
-D-glucosa (con OH hacia abajo) + -D-fructosa

Normalmente la -D-fructosa se dibuja dada la vuelta para facilitar la representacin del

enlace.
 48

Esta molcula se nombrara as : -D-glucopiranosil (12) -D-fructofuransido, y

abreviadamente: Glc (1 2 ) Fru.

Hasta ahora hemos visto enlaces , que forman un vrtice hacia abajo, en el que el O
forma su punta. En los el O hace el vrtice hacia arriba.

Los ms importantes son la celobiosa (de la celulosa) y la lactosa.

La celobiosa es la -D-glucopiranosil (14) -D-glucopiranosa o Glc (1 4) Glc.

La lactosa, presente en la leche, se forma por unin entre una D-galactosa y una D-glucosa,
y se nombra -D-galactopiranosil (14) -D-glucopiranosa o Gal (1 4) Glc.

Para nombrar oligosacridos mayores la regla sera la misma. Normalmente el orden es

empezando de izquierda a derecha desde el extremo no reductor hasta el reductor (con el C
anomrico libre).

Con relacin a los trisacridos, existen pocos importantes en biologa. Destaca la

rafinosa, presente en la remolacha, que resulta de la unin de 1galactosa + 1 sacarosa.

Gal (1 6) Glc (1 2 ) Fru

sacarosa

rafinosa

Dentro de los oligosacridos vamos a ver tambin las oligosacarinas, que actan como
hormonas vegetales.
La primera que se descubri es un heptaglucsido, 7 glucosas unidas mediante 5 uniones
(16) y 2 uniones (13) de la siguiente manera:
 49

las uniones (13) son puntos de ramificacin que son crticos, en el sentido de que si se
modifican (cambiando su posicin en la cadena), se altera su actividad biolgica.

Identificacin y anlisis estructural

Para realizar el anlisis estructural de los oligosacridos se usan reacciones que hemos visto
para los monosacridos.
- En primer lugar se analiza si es reductor o no reductor, usando la raccin de
Fehling.
- En segundo lugar se hidrolizan e identifican lo monosacridos que lo forman por
cromatografa
- Para saber el carcter o del enlace glicosdico se hidroliza con encimas
especficas de estos o bien se observa la mutarrotacin de los productos de
hidrlisis. Si el enlace es el poder rotatorio va disminuyendo con el tiempo.

Para determinar los carbonos que estn en el enlace glicosdico, en primer lugar reducimos
el grupo carbonilo hasta un alcohol con boro-hidruro de sodio, un agente reductor ( NaBH 4
). Al reducirse tambin se rompe el puente oxdico.
A continuacin el derivado reductor se metila a fondo (todos los OH que se puedan metilar)
y a continuacin se hidroliza.
Solo quedan sin metilar los grupos hidroxilo implicados en el enlace glicosdico.
Los derivados metilados se identifican por cromatografa.

Por ltimo, la estructura se confirma por oxidacin con periodato y anlisis de los
fragmentos resultantes.
 50

Por ejemplo: Averigua la estructura de un disacrido que:

- es positivo en la reaccin de Fehling
- por hidrlisis y cromatografa se sabe que est formado solo por Glc
- por metilacin exhaustiva, seguida de hidrlisis en medio cido obtenemos 2,3,4,6-
tetrametil-glucosa y 3,4,6-trimetil-glucosa

Como da positivo en la reaccin de Fehling, posee un carbono anomrico libre y es

reductor

la nica posibilidad de formacin del enlace glicosdico es (12) ya que los dems no
estn en condiciones de formar enlace.

Determinantes antignicos de los grupos sanguneos

Son un grupo de oligosacridos que estn unidos a la superficie de los glbulos blancos
mediante protenas de membrana o a travs de lpidos. Quedan expuestos, y en algunos
casos inducen la formacin de anticuerpos y en otros no.

Las personas podemos producir anticuerpos frente a los oligosacridos de los tipos A y B,
pero no frente a los 0.
La diferencia entre los A y B, y el 0 est solo en una unidad de monosacrido
complementario. El esqueleto bsico es comn.
 51

TEMA 9

POLISACRIDOS

Concepto y clasificacin

Los polisacridos estn formados por la unin de ms de 12 monosacridos por enlaces O-

glicosdicos. Se suelen clasificar como:
- homopolisacridos: formados por el mismo monosacrido
- heteropolisacridos: por varios tipos de monosacridos diferentes

Otra clasificacin es la de polisacridos

- simples : formados por monosacridos simples (Glc,Gal...)
- derivados: por derivados de monosacridos (acetilados, azcares cidos...)

Glucanos ms abundantes

La celulosa es la molcula de origen natural ms abundante que existe en la naturaleza.

Esto se debe a que la celulosa forma parte de las paredes celulares de los vegetales, y estos
forman una gran biomasa. Su funcin es pues, estructural.

Vista al microscopio electrnico, la celulosa est formada por fibras que estn, a su vez,
formadas por un conjunto de cadenas de glucosa no ramificadas y dispuestas en paralelo
unas a otras.
Todas las unidades son -D-Glc unidas por enlaces glicosdicos (14). Es un
homopolisacrido simple. La unidad repetitiva es el disacrido celobiosa.
 52

La celulosa se organiza en cadenas lineales, y estas en fibras, por el establecimiento de

puentes de H.
Dentro de la propia cadena de celulosa se pueden establecer puentes de H que mantienen
esta estructura lineal, pero tambin entre cadenas paralelas de celulosa.
Esta estructura es ideal para su funcin biolgica. Su elevada capacidad de formar puentes
de H le da firmeza y es responsable de la insolubilidad en agua de este polisacrido.

En las paredes celulares de las plantas, estas fibras de celulosa se refuerzan por la presencia
de otras sustancias que actan a modo de cemento, como son la hemicelulosa, pectina,
y lignina.

La hemicelulosa es un polisacrido formado por D-xilosa. La pectina est formada por el

cido D-galacturnico, y la lignina es una sustancia ms compleja (polifenlica).
Todas ellas contribuyen a la rigidez de la pared.

La celulosa no puede ser digerida por los animales superiores excepto en el caso de los
rumiantes. Adems de estos ltimos, tambin pueden aprovecharla diversos
microorganismos, insectos, caracoles... A todos ellos se les denomina celulolticos.

La quitina es otro polisacrido relacionado con la celulosa. Est formada por la unin de
molculas de N-acetil-glucosamina, unidas por enlaces (14).

Al igual que suceda con la celulosa, como los enlaces son (14), para que el enlace
glicosdico se pueda formar, una molcula tiene que estar invertida con respecto a la otra.
La unidad repetida en este caso es el disacrido quitobiosa.

Como en la celulosa, en la quitina se pueden formar puentes de H, y por tanto es un

polisacrido que tambin cumple una funcin estructural. Es el principal componente del
exoesqueleto de artrpodos y tambin de las paredes celulares de microorganismos como
levaduras y hongos.

Polisacridos con funcin de almacenamiento

 53

El almidn es un polisacrido que est presente en los vegetales de modo exclusivo. Est
formado por la unin de molculas de glucosa ( -D-Glc), y nos lo encontramos en forma
de grnulos citoplasmticos o tambin dentro de los plastos de los vegetales.

Los enlaces pueden ser de 2 tipos porque el almidn est formado por 2 componentes, la
amilosa y la amilopectina.
En la amilosa, los enlaces son todos (14), mientras que en la amilopectina, son tambin
(14), pero a intervalos regulares nos encontramos con enlaces (16). Es decir, la
amilosa est formada por cadenas lineales, y la amilopectina por cadenas ramificadas, de
modo que cada enlace (16) representa un punto de ramificacin.

La estructura es estos dos componentes es la siguiente:

La amilosa es helicoidal, debido al establecimiento de puentes de H. En las cadenas de

amilosa tambin se establecen puentes, pero de modo diferente a los de la glucosa.

La estructura secundaria de la amilopectina no se conoce con tanto detalle. Posee forma

arborescente debida a las ramificaciones.

Cada molcula de celulosa presenta un extremo reductor y uno no reductor. Esto mismo
pasa con la amilosa.

En el caso de la amilopectina, una molcula tiene un nico extremo reductor pero muchos
no reductores, debido a sus ramificaciones (tantos como ellas).
 54

Otro polisacrido que tambin est relacionado funcional y estructuralmente con la

amilopectina es el glucgeno, polisacrido de reserva del medio animal. Se encuentra en el
hgado y en el msculo.

Su estructura es similar a la de la amilopectina, pero este est ms ramificado. Los enlaces

son (16), y se sitan cada 8 unidades de glucosa en el glucgeno, y en la amilopectina
cada 25 30. Ambos son digeribles por los animales superiores (con encimas amilasa).

Mucopolisacridos cidos o glicosaminoglicanos

Son importantes en el reino animal, y ms en los vertebrados. La caractersticas generales

de este tipo de polisacridos son que:
estn formados por aminoazcares, normalmente por N-acetil-glucosamina y N-acetil-
calactosamina, y de aqu sus nombres.
Suelen poseer grupos cargados negativamente (carbonato, sulfato).
No suelen existir en estado libre, sino asociados a protenas, formando los proteoglicanos, o
tambin a asociaciones de lpidos y protenas.

Dentro de estos glicosaminoglicanos vamos a estudiar la estructura de tres

fundamentalmente:

El cido hialurnico lo encontramos en el tejido conectivo (en la sustancia basalque

rellena los espacios extracelulares de ste), en el lquido senovial, humor vtreo y cordn
umbilical.

Se trata de un polmero lineal no ramificado. La estructura que se repite es un disacrido

formado por la unin del cido D-glucurnico y de la N-acetil-glucosamina, mediante
enlaces (13). Cada disacrido se une al siguiente por enlaces (14). Estos dos
enlaces se alternan en la cadena.
Presentan una gran viscosidad, debida a la presencia de estos grupos cidos COOH que a
PH fisiolgico presentan carga negativa, estn ionizados( COO ), lo que favorece una
hidratacin excesiva, y la formacin de puentes de H intercatenarios.
 55

Otros dos glicosaminoglicanos tambin asociados con el tejido conectivo son el sulfato de
condroitina o condroitn sulfato y el queratn sulfato. En ambos, el ptatrn de enlaces
glicosdicos es alternante (13), (14) como en el caso del c. hialurnico.

En su composicin intervienen N-acil-azcares y tambin llevan grupos cargados

negativamente, pudiendo aparecer grupos sulfato ahora ( CH 2 OSO3 ). En el caso del
condroitn , el disacrido est formado por el c. D-Glucurnico y por la N-acetil-D-
galactosamina. Aqu la N-acetil-gal est sulfatada en el C6 .

La longitud de la cadena del sulfato de condroitina puede variar entre 15 y 150 unidades de
disacrido, y la extensin de la cadena, as como el grado de sulfatacin dependen de la
edad del tejido y de algunas condiciones patolgicas. En el caso del sulfato de queratn, el
disacrido repetido est formado por la galactosa y la N-acetil-galactosamina, que se unen
por enlaces (14) y (13) el intermediario. La galactosamina tambin est
sulfatadoa en el C6 . Aqu, a diferencia, interviene la galactosa simple, y no tenemos grupos
carboxilato.
Aqu la longitud de cadena oscila entre 10 y 50 unidades de disacrido y es menor que la
del sulfato de condroitina.

En resumen: cido hialurnico grupos carboxilato

Base comn Heparn sulfato grupos carboxilato y sulfato
Queratn sulfato grupos sulfato

Otro tipo de mucopolisacridos cidos forman las paredes de las bacterias, y son un
entramado estructural que rodea completamente a la clula.
Es una estructura continua (como una bolsa), constituda por cadenas de polisacridos lagas
y paralelas que estn unidas entre s transversalmente a ciertos intervalos por cadenas
laterales que son pptidos cortos.
Los polisacridos estn formados por la unin de la N-acetil-D-glucosamina y el cido N-
acetil-murmico mediante enlaces (14). El componente cido es un monosacrido
complejo que lleva un radical en el C 3 , lugar donde va unida la cadena lateral polipeptdica
corta que hace de unin d entre polisacridos.
El pptido suele ser un tetrapptido cuya composicin vara entre las especies bacterianas.
 56

A esta estructura continua que rodea a la clula se le denomina pptidoglucano o

murena. Hay algunos antibiticos como la penicilina, cuya accin consiste en inhibir una
de las mltiples etapas de la sntesis encimtica de los peptidoglucanos.

Enlaces azcares protenas

Los dos ms importantes que suelen aparecer en las protenas son:

- N-acetil glucosamina + cadena proteica: la unin se establece por el grupo amino de
la asparagina y se llama una N-GLICOSILACIN.
- Otro tipo de enlace es un O-glicosdico con la treonina o serina. O-
GLICOSILACIN.

EJERCICIOS:

1.- Una muestra de 75 mg de celulosa se hidroliz en medio cido. En el hidrolizado se

encontraron 75 mg de glucosa. cul es la pureza de la muestra de celulosa?

Como la unin Glc-Glc es un enlace glucosdico, se gana una molcula de H 2 O en cada

hidrlisis de 2 molculas, y su peso hay que descontarlo.

El peso molecular de la glucosa es 180.

El peso de las glucosas unidas por enlace glicosdico es 180 18(peso del H 2 O )
180 18 = 162.
180
Entonces, la relacin de prdida de masa ser de 1,1 , que a su vez es el peso que
162
aumentamos al hidrolizar, ya que al romper los enlaces les aportamos la molcula de agua
que haban perdido al formarse el mismo.
Lo mximo que podramos tener sera 75 + 1,1 , que sera el 100%

75 + 1,1 100%
75 x% x = 90,9%
 57

2.- Por metilacin exhaustiva de 32,4 gr de amilopectina seguida de hidrolizacin cida se

obtienen 10 moles de 2,3,4,6 tetrametil-glucosa.

Cules son los otros productos (derivados metilados) que espera obtener?
Cunto de cada uno?
Qu tanto % de residuos de glucosa estn unidos por enlaces (16)?

Si el peso molecular de la amilopectina es de 12 10 6 , Cuntas ramificaciones posee una

molcula de amilopectina?

Amilopectina = glucosas con enlace (14) + ramificaciones peridicas con es.(16)

Hay cuatro tipos de Glc distintas:
- La del C anomrico libre (una en cada molcula de
amilopectina)
- Las unidas por e(14) (de la cadena principal)
- las que forman los puntos de ramificacin, con
es.(16)

- las de los extremos no reductores (OH del C4 libre).

La 2,3,4,6 tetrametil-glucosa corresponder a la del extremo no reductor, pues est unida

a la cadena por el C1 y tiene libres los C 2,3,4 y 6.

Por cada extremo no reductor tenemos una ramificacin y podemos considerar que hay
igual cantidad de puntos de ramificacin que extremos no reductores. Estos puntos de
ramificacin tienen libres los C 2 y 3, y por tanto obtendremos 2,3 dimetil-glucosa.

Las glucosas de las cadenas tienen libres los C 2,3 y 6 y nos darn 2,3,6 trimetil-glucosa.

Nos queda la glucosa del extremo reductor, que nos dar 2,3,6 trimetil-glucosa, y no del 1,
porque se elimina en la hidrlisis cida.
 58

Para calcular que % de cada uno haremos lo siguiente: como tenemos un total de 32,4gr
de amilopectina,
32,4 gr 1000moles
200moles
162 gr.mol 1mol

como los extremos no reductores hemos visto que nos daran 2,3,4,6 tetrametil-glc y hemos
obtenido 10 moles ,

200 100% x = 5% de extremos no reductores, y

10 x% consecuentemete lo mismo de puntos
de ramificacin.

Partiendo de esto, y sabiendo que el nmero de glucosas que tenemos es

12.000.000
74074 , el 5% de estas es 3700 ramificaciones por molcula de amilopectina.
162

Tambin hay otro 5 % de extremos.

El % de enlaces (14) es el otro 90% .

 59

TEMA 10

LPIDOS : CIDOS GRASOS

Con el trmino lpido nos referimos a una sustancia de origen natural, insoluble en agua,
pero s en solventes orgnicos apolares como cloroformo o ter, que se caracteriza por una
gran diversidad tanto estructural como fucional.
 60

En cuanto a las funciones, destacamos que :

-
- Son componentes de membranas.
- Actan como formas de almacenamiento de C y energa.
- Son precursores de otras sustancias importantes en biologa.
- Actan como aislantes para choques mecnicos, trmicos o elctricos.
- Constituyen recubrimientos protectores que impiden infecciones y prdidas o
entradas excesivas de agua.
- Algunos son hormonas o vitaminas.

Clasificacin

Son un grupo compuesto por una gran cantidad de biomolculas, y hay muchas
clasificaciones. Seguiremos la siguiente:

- simples
lpidos - compuestos
- derivados

los lpidos simples estn formados por steres de cidos grasos y un alcohol nicamente.
Dentro de estos, segn cual sea el alcohol y los cidos grasos, tendremos acilgliceroles o
ceras.

Los lpidos compuestos adems tienen steres formados por otro tipo de compuestos. Los
subdividimos en fosfolpidos (con c. fosfrico), y glucolpidos (cerebrsidos y
ganglisidos) .
Los fosfolpidos se subdividen en fosfoacilgliceroles (su alcohol = glicerol) y en
esfingolpidos.
 61

Adems, hay un tercer grupo, los derivados, que no se pueden incluir en los anteriores. En
la composicin de stos no intervienen cidos grasos, aunque algunos derivan in vivo de
ellos.
- acilgliceroles
- Simples - ceras

- fosfolpidos (fosfoacilgliceroles y esfingolpidos)

- Compuestos
Lpidos - Derivados - glucolpidos (cerebrsidos y ganglisidos

lpidos simples: sus cidos grasos son cidos carboxlicos alifticos de cadena larga
(se llaman cidos grasos por estar en las grasas). Como caractersticas generales de los ms
abundantes en la naturaleza podemos decir que:

- la mayora son cidos monocarboxlicos (1 COOH)

- las cadenas de hidrocarburos suelen ser lineales, no ramificadas y con un nmero
par de tomos de C, que oscila entre 12 y 20

Con frecuencia aparecen dobles enlaces (llamados insaturaciones). La insaturacin es

frecuente a partir de los 16 tomos de C. Los dobles enlaces de los cidos grasos suelen
tener la configuracin CIS, y pueden presentarse varios la misma molcula. Cuando esto
ocurre, los dobles enlaces nunca estn seguidos, sino separados por un solo grupo metileno.

La larga cadena hidrocarbonada es apolar, pero la molcula del cido graso contiene un
grupo polar, el COOH, y por tanto adquiere polaridad en conjunto. De echo, los cidos
grasos son cidos dbiles cuyos valores de pK estn situados en 4,5 por trmino medio.
Esto quiere decir que a pH fisiolgico, se encuentran en forma aninica ( COO ), con lo
que es muy hidrfilo, mientras que las colas hidrocarbonatadas son hidrfobas.

Por tanto, los cidos grasos se comportan como molculas anfipticas tpicas, que, al
intentar disolverlas en agua, tienden a formar monocapas en la interfase aire-agua con los
grupos COO (carboxilato) sumergidos en el agua y las colas no polares fuera de sta.
 62

Si agitsemos esta mezcla, los cidos grasos formran las denominadas micelas, en las
que las cadenas hidrocarbonadas se agrupan hacia el interior y los grupos carboxilato se
dirigen hacia el exterior acuoso.

Si se mezclan con agua y con una sustancia oleosa, las micelas se van a formar sobre las
gotas de aceite, emulsificndolo, y esta es la base del funcionamiento de los jabones, ya que
estos son sales de cidos grasos.

Nomenclatura

Habitualmente es por su nombre comn (cido esterico, palmtico, linoleico...), pero

adems, existe un nombre abreviado que consiste en poner el nmero de tomos de C y a
continuacin, si hay dobles enlaces, indicamos la posicin y nmero de estos. Por ejemplo,

cido palmtico: C16 : 0

cido esterico: C18 : 0

cido oleico: C18 : 1 9 C18 : 19 tiene un doble enlace en el C 9

cido linoleico: C18 : 2 9,12 C18 : 2 9,12

La numeracin de los tomos de C comienza por el grupo funcional, excepto un caso, la

nomenclatura relacionada con el mbito de la nutricin, que lo hace al revs. Se considera
que el grupo metilo terminal tiene la posicin 1 y se designa por la letra omega ( )

Se suelen representar as:

En el laboratorio se separan e identifican por medio de la cromatografa de gas-lquido (lo

ms frecuente). Para poder separarlos, el requisito es que sean voltiles, y hay que
 63

transformarlos, pues, en derivados voltiles, hacindolos reaccionar con metanol para que
se formen los steres metlicos correspondientes que s son voltiles.

Al principio, salen en el cromatograma los cidos grasos (realmente sus steres) ms

pequeos, con menos tomos de C.
En cuanto a los dobles enlaces, salen antes aquellos que posean menor nmero de estos con
igual nmero de carbonos.

Reacciones de los cidos grasos

Una importante es la peroxidacin (formacin de perxidos), que puede ser encimtica o no

enzimtica.

En la no encimtica, los agentes son oxidantes fuertes como el agua oxigenada ( H 2O2 ) o el
radical hidroxilo, que atacan a los dobles enlaces de los cidos grasos, que son muy
susceptibles a estas reacciones. Los compuestos que se forman son los hidroperxidos.

Esta reaccin es daina para el organismo porque afecta a los lpidos de membrana, y es
causante de enranciamiento de alimentos.
Aqu, se puede causar la oxidacin de protenas de membrana con el consiguiente efecto
sobre la estructura o funcionamiento de la membrana.
Las clulas de los organismos vivos poseen mecanismos para protegerse de estas reacciones
de peroxidacin, y entre estos, tenemos la existencia de agentes como la vitamina C o la E
que funcionan como anti-oxidantes, que hacen que ellas mismas sufran la reaccin y as
evitan que la sufran otras biomolculas.

La peroxidacin puede estar tambin catalizada encimticamente. Esto ocurre, por ejemplo,
en la formacin de algunos lpidos derivados de cidos grasos como la prostaglandina, que
en su formacin intervienen peroxidacines catalizadas por enzimas.

El envejecimiento celular est tambin relacionado con la formacin de perxidos de cidos

grasos.

Prostaglandinas
 64

Su nombre procede de prstata, donde fueron aisladas por primera vez, pero se
encuentran ubicadas en diferentes partes del organismo.
Estos lpidos presentan gran iportancia en medicina por sus mltiples efectos fisiolgicos,
entre los que destacan la contraccin del msculo liso y la disminucin de la presin
sangunea, que las ejercen a concentraciones muy bajas.

Se sintetizan in vivo a partir de cidos grasos insaturados, y algunos medicamentos anti-

inflamatorios como la aspirina inhiben su formacin, ya que intervienen en el dolor.
En medicina se emplean en la induccin del parto e inhibicin de secrecin gstrica.

Estructuralmente todas derivan del cido 15-hidroxi - 13- trans prostenoico, un cido
graso de 20 tomos de C que tiene un doble enlace extra que provoca que se forme un
anillo de ciclopentano que se forma entre los C 8 y 12, con un OH en el C15

Todas las prostaglandinas poseen este anillo, y las diferentes familias se diferencian entre s
segn los sustituyentes oxigenados de ese anillo de ciclopentano.
Las familias son la A, B, E y F

La A un oxgeno unido al anillo con doble enlace

La B adems, 1 doble enlace en el anillo
La C la A + 1 OH
La F la A + 2 OH

Dentro de cada familia se diferencian segn el nmero y tipo de dobles enlaces de la cadena
lineal, as como los sustituyentes que haya sobre esta cadena lineal.
 65

TEMAS 11 Y 12

GLICRIDOS Y CERAS. FOSFOGLICRIDOS Y ESFINGOLPIDOS

Tanto los glicridos (o acilgliceroles) como las ceras son , como vimos en la clasificacin
anterior, lpidos simples.

Los glicridos son steres de la glicerina (o glicerol), un tri-hidroxi-alcohol + 1,2 3

cidos grasos. As tenemos los mono, di o triacilgliceroles. Ejemplo:
 66

glicerina monoacilglicerol

Los ms abundantes en la naturaleza son los triglicridos. Segn los cidos grasos que los
formen, diferenciamos los simples de los mixtos (en los di o tri). En los simples, todos los
cidos grasos son iguales, y en los mixtos, distintos.

Todos los acilgliceroles son molculas neutras (sin grupos polares). Adems, segn el
estado fsico a temperatura ambiente, diferenciamos las grasas y aceites (slidos y lquidos
respectivamente).
En general, el punto de fusin es menor cuanto mayor es el contenido en cidos grasos
insaturados.

El tomo de C central en el glicerol es quiral, asimtrico, y por tanto, estos lpidos

presentan isomera ptica. La mayora son ismeros L.

Los acilgliceroles se nombran de 2 maneras, usando el nombre del cido graso + -IL e
indicando la posicin en que est unido el cido graso (Con ms de 1 c. graso igual, y si
son iguales, podemos decir, por ejemplo, di-oleil-glicerol, tri-palmitoil-glicerol).
La otra manera es con el sufijo -INA. Por ejemplo, con un oleico y dos palmticos,
diramos momo-oleil,di-palmitoina.

Caractersticas

- Son insolubles en agua, como todo lpido.

- Constituyen los depsitos de grasa del tejido adiposo (triglicridos), como
almacenes de energa y carbono.
- Se transportan a travs de los vasos sanguneos y linfticos gracias a la formacin
de partculas lipoprotenicas como los quilomitrones.
 67

- Protegen fsica y qumicamente a los rganos del cuerpo.

- Todas las caractersticas generales de los lpidos.
Reacciones

La reaccin ms importante de este grupo es la hidrlisis. La hidrlisis no encimtica en

medio cido, no va a dar lugar al glicerol + cido graso. Si es en medio bsico (presencia de
sosa o potasa) obtenemos el glicerol + sales sdicas o potsicas de los cidos grasos
(jabones). Esta reaccin, por tanto, se denomina de saponificacin.

En las clulas tambin tiene lugar la hidrlisis de los acilgliceroles y est catalizada por
encimas (lipasas) que producen el glicerol y cidos grasos. Estas muestran especificidad de
enlaces (de los 3 enlaces ster que pueden existir en un triglicrido).

Las ceras tambin pertenecen al grupo de los lpidos simples, y son steres de un alcohol y
de un cido graso, pero su caracterstica es que ambos son de cadena larga.

Como con los acilgliceroles y casi todos los lpidos, las ceras tambin son insolubles.

En el caso concreto de las ceras, estas sirven como capas protectoras de piel y plumas en
animales, as como hojas y frutos en plantas. Protegen de infecciones y de prdidas de agua.

Entramos ahora en el tema 12, y con l, en los lpidos compuestos. Como habamos visto,
los compuestos son:
Fosfoacilgliceroles fosfatos
Esfingomielinas
Lpidos compuestos: Cerebrsidos con esfingosina
 68

Ganglisidos

Los fosfoacilgliceroles (o fosfoglicridos)

Son formadores de membrana. El ms sencillo es el cido fosfatdico, un glicerol unido
enlaces ster a 2 cidos grasos y 1 cido fosfrico. Es precursor de todos los dems
fosfoglicridos.

Todos los fosfoacilgliceroles se van a diferenciar en que al cido fosfrico se puede unir
por un enlace ster a otro compuesto que va a distinguir los tipos.

Los cidos grasos no nos permiten diferenciar tipos. Lo que s podemos decir es que, en
general, el cido unido al C1 suele ser saturado, y el del C2 insaturado.

Este radical identificador puede ser la colina, una base nitrogenada con un grupo OH con el
que se une al cido fosfrico. Cuando es as, el fosfoacilglicrido resultante es la
fosfatidilcolina o lecitina.

Si el radical es la etanolamina, el resultante es la fosfatidiletanolamina o cefalina.

Si es el aminocido serina, se forma la fosfatidilserina.

Estos grupos son grupos cargados, y por tanto los fosfoacilgliceroles sern molculas
anfipticas.

El radical R puede ser el glicerol, formndose el fosfoacilglicerol fosfatidilglicerol.

La R puede ser tambin un fosfatidilglicerol, y al unirse a otro cido fosfatdico resulta un
difosfatidilglicerol:
c. fosfatdico + glicerol + c. fosfatdico

tambin puede ser un alcohol cclico, el ms abundante es el inositol. En este caso se

formara el fosfatidilinositol, en el que a su vez el inositol puede llevar unidos tambin
grupos fosfato.
 69

Caractersticas

Estos lpidos se caracterizan porque son molculas anfipticas, ya que las largas cadenas
hidrocarbonadas de los cidos grasos unidas al glicerol forman la parte hidrofbica de la
molcula, mientras que el cido fosfrico y la molcula a la que va unido (cargada)
constituyen la cabeza polar hidroflica de la molcula.

En el laboratorio podemos determinar cual es la estructura de un fosfoacilglicerol. Para ello

usamos unas encimas que se llaman fosfolipasas que existen en las clula y son
responsables del recambio de los fosfoacilgicridos de las mismas y son especficas
tambin para cada enlace. Cada una rompe distintos enlaces ster.
- La fosfolipasa A1 rompe enlaces de cidos saturados
- La fosfolipasa A2 repme los de cidos insaturados
- La D , los de cidos fosfricos con otras molculas

En el laboratorio hidrolizamos con estas encimas, recogemos los resultados y determinamos

la molcula de inicio.

Existen algunas variantes de los fosfoacilgliceroles, de entre los cuales vamos a destacar los
que tengan 1 o las 2 cadenas hidrocarbonadas unidas al glicerol por enlaces ter, no ster.
Pues bien, cuando adems se introducen insaturaciones, lo que obtenemos son los
plasmalgenos, lpidos importantes que forman parte de algunas membranas plasmticas
como las de las clulas del corazn.

Los Esfingolpidos
Se caracterizan porque estn formados por un alcohol que es la esfingosina, un alcohola
aminado ( NH 2 ) de 18 Carbonos.

El esfingolpido ms simple, y precursor de los dems, es la ceramida. 1 ceramida = 1 cido

graso + esfingosina, solo que la unin no es por un enlace ster, sino por un enlace amida,
establecido entre el grupo amino de la esfingosina y el cido carboxlico del cido graso.
 70

Por unin de la fosfocolina (colina + P) lo que obtenemos es otro tipo de lpidos, las
esfingomielinas. Aqu la fosfocolina se va a unir al OH terminal de la esfingosina. Las
esfingomielinas tambin poseen naturaleza anfiptica. Poseen una cabeza polar y cola no
polar.
Estas sustancias las encontramos en las membranas celulares de los nervios y del encfalo.

Por unin de la ceramida a un glcido, entonces tenemos los glucolpidos, que tambin son
anfipticos, y que los encontramos en las membranas celulares del tejido nervioso y
encfalo. Los ms sencillos son los cerebrsidos, ya que en ellos, es un monosacrido el
que se une al OH terminal de la ceramida, que puede ser Glc o Gal. Formndose,
respectivamete, glucocerebrsidos y galactocerebrsidos.

El monosacrido que forma los cerebrsidos puede estar sulfatado ( SO3 ). A este tipo se
les denomina lpidos sulftidos. Esto es ms frecuente con la galactosa.

En el caso de los ganglisidos, los accares unidos son oligosacridos, no monosacridos, y

adems son unos que se caracterizan por llevar al menos un residuo de cido silico.

Adems de dar rigidez a las membranas, los gluucolpidos presentan otras funciones a nivel
de superficie celular, como el servir de marcadores antignicos o marcadores para
identificar el estado de diferenciacin celular. Tambin participan en el control del
crecimiento de la clulas, y se relacionan con la transformacin de clulas normales en
cancerosas,y tambin en la unin de clulas con ciertas toxinas.
 71

TEMA 13

TERPENOS Y ESTEROIDES

En este captulo hablaremos de los lpidos derivados del ISOPRENO. El isopreno es el 2-

metil-butiadieno. ste polimeriza para dar lugar a una gran variedad de molculas como los
terpenos y esteroides, pero tambin otros lpidos isoprenoides. El mayor polmero del
isopreno es el caucho, sacado de determinados rboles.

Los terpenos son hidrocarburos o alcoholes formados por varias unidades de isopreno, con
modificaciones mnimas. El aroma caracterstico de muchos frutos y plantas se debe a estos
compuestos.

Los terpenos ms simples son los monoterpenos, formados por 2 unidades de isopreno.
Los siguientes son los diterpenos, formados por 4 unidades, y entre los que destaca el fitol,
alcohol de la clorofila (con 20 C).
Tenemos tambin triterpenos, con 6 unidades de isopreno y 30 carbonos, de entre los que
destaca el escualeno, precursor del colesterol.

Otra familia de terpenos son los dolicoles, formados por tambin 20 unidades de
isopreno, y que se encuentran en las membranas del R.E. y el Aparato de Golgi. Fosfatados
en un extremo, sirven de transportadores de las protenas durante su glicosilacin. El
dolicolfosfato es el encargado de este transporte.
 72

Los esteroides son el grupo ms grande, y se caracterizan por contener en su estructura un

sistema de anillos que es el ciclopentanoperhidrofenantreno, del cual derivan.
Este sistema de anillos est formado por 17 C cuya numeracin es especfica. Adems lleva
una serie de sustituyentes de entre los que destacan 2 grupos metilo sobre los C 10 y 13, y
numerados como 18 y 19. estos metilos estn presentes en todos los esteroides excepto en
los estrgenos, los cuales solo poseen uno.

Los esteroides llevan tambin una cadena hidrocarbonada sobre el C17 que se numeran sus
carbonos desde el 20 en adelante. La longitud de esta cadena es variable. Puede no existir
como en las hormonas sexuales o tener hasta 9 C. Tambin pueden existir sustituyentes
oxigenados y dobles enlaces en posiciones variables segn el esteroide del que se trate.

En su estructura existen muchos carbonos asimtricos, por tanto el nmero de enantimeros

posibles es muy elevado, aunque en la naturaleza no se encuentran todos ellos. As, en
todos los enantimeros conocidos, los metilos 18 y 19 se sitan hacia arriba del
ciclopentanoperhidrofenantreno. El resto de los sustituyentes si estn en posicin CIS con
los metilos (del mismo lado) se denominan sustituyentes . Si por el contrario estn en
posicin TRANS, son sustituyentes .

Los esteroides se suelen clasificar segn la complejidad de la cadena lateral unida al C 20 .

As diferenciamos 5 grupos principales.

1.- Los esteroles :

Contienen siempre algn grupo alcohol. El ms importante y conocido es el colesterol, que

tiene un OH en posicin 3 . Se caracteriza por un enlace doble entre los carbonos 5 y 6, y
por la cadena lateral sobre el C17 que contiene 8 tomos de C. El colesterol acta como
precursor de otros esteroides y est relacionado con enfermedades como la arteriosclerosis.

2.- Los derivados de la vitamina D :

 73

Se forman por accin de la luz ultravioleta sobre los esteroles. Su caracterstica estructural
principal es la apertura del anillo B con la formacin de un doble enlace entre los C 10 y
19. la cadena lateral conserva la cadena lateral del esterol del que deriva. Pueden existir
derivados hidroxilados de esta estructura en varias posiciones. Estos compuestos regulan el
metabolismo del calcio y el fosfato.

3.- Los cidos biliares:

Se caracterizan por, primeramente, la presencia de varios hidroxilos que tienen

configuracin , y por tanto en trans con los metilos. Estos OH se sitan en las posiciones
3,7 0 12, segn el cido biliar. Por ejemplo, en el cido clico hay OH en las 3 posiciones,
y por ello es el ms soluble. En otros ,como el desoxiclico, no hay el del C7 , o el
litoclico, con solo el del C 3 , siendo el ms insoluble, y es responsable de los clculos
biliares.
Esta abundancia de OHs les confiere caractersticas anfipticas, esenciales para su funcin
de emulsionar las grasas de la dieta, facilitando as la accin de encimas digestivas.

Otra caracterstica de los cidos biliares es su cadena lateral sobre el C17 , que siempre
finaliza con un cido graso y consta de 5 tomos de C.

En el organismo humano existen muy pocos cidos biliares libres, sino que su grupo cido
suele estar unido con el grupo amino de los aminocidos glicina o taurina. Los derivados
son glicoclico,tauriclico...

4.- los corticosteroides:

Se forman en la corteza y regulan gran cantidad de procesos fisiolgicos. Por ejemplo,

el cortisol se caracteriza, como todos, por:
- tener 1 grupo ceto en posicin 3
- 1 doble enlace entre las posiciones 4 y 5.

- La cadena lateral sobre el C17 es corta y suele constar de solo 2 tomos de C y

contiene oxgeno (=O).
- Poseen algn otro grupo hidroxilo que puede estar en posiciones variables, siendo
las ms comunes en los carbonos 11 y 17.
 74

5.- Las hormonas sexuales:

Hay dos grupos, las masculinas o andrgenos y las femeninas o estrgenos. En ambos
casos no existe cadena lateral en el C17 . Adems en el caso de los estrgenos, el anillo A
es aromtico, y no existe el grupo metilo sobre el C10 .

Otra caracterstica es la presencia de funciones oxigenadas en los C 3 y C17 .

A parte de terpenos y esteroides existen otros componentes isoprenoides con inters en

biologa como los carotenos, que son pigmentos de frutas y hortalizas rojas. Son
precursores del retinol o vitamina A.
Tambin son isoprenoides los tocofenoles, entre los que destacamos el -tocofenol o
vitaminia E.
Otros son las plastoquinonas de la cadena transportadora de electrones fotosinttica, as
como la ubiquinona o coenzima Q de la mitocondria.
La vitamina K tambin la ubicamos aqu, y participa en la coagulacin sangunea.

PROBLEMAS:

El nmero yodo de un cierto cido graso insaturado con 2 dobles enlaces es de 180. si el
peso atmico del yodo es 127, cual podra ser el cido traso?

El nmero o ndice de I es:

Gramos de yodo que adicionan 100 gramos de grasa o cido graso. El yodo se adiciona a
los dobles enlaces, de tal manera que a cada mol de dobles enlaces se le adiciona 1 mol de
I2 .
 75

Sabemos que 100 gramos de cido adicionan 180 de I 2 , y como 1 mol adiciona 1 mol de
I 2 ...

Si I = 127 I 2 = 254 100 180

1 mol 254 gr de I 2 x 2 x 254

x = Pm cido graso = 282 cido linoleico

2.- Indicar de entre las siguientes grasas, cual tendr un mayor ndice de saponificacin:
- palmitoesteaooleina
- triestearina
- estearoolioinoleina
- trioleina
- estearodioleina

El ndice de saponificacin es la potasa en miligramos necesaria para saponificar un

gramo de grasa.

Como 1 mol de triglicrido reacciona con 3 moles de KOH, que son x gramos de KOH,
la de menor peso molecular ser la de mayor ndice, pues cuanto ms pequeo sea el Pm,
ms gramos de KOH le tocar por gramo de grasa.

La primera es la ms pequea por su nmero de tomos de C. Como todas las dems

tienen cidos grasos de 18 tomos de C, habra que ordenarlas segn sus insaturaciones.
76
 77

TEMA 14

AMINOCIDOS

Los aminocidos son molculas que contienen al menos 1 grupo amino y 1 grupo cido,
que suele ser un COOH, aunque puede haber excepciones. La taurina tiene un cido
SO3 H .

La primera clasificacin de los aminocidos se basa en la posicin relativa de los grupos

cido y amino.

El carbono al que est unido el cido graso se llama C , y a los dems, , , ...

Cuando el grupo amino est unido al C este aminocido se denomina - aminocido. Si

el amino est unido al C , es un - aminocido...

Esta clasificacin nos permite establecer que en el caso de los aminocidos proteicos, todos
ellos pertenecen a la serie . Los aminocidos proteicos los clasificamos segn su cadena
lateral.

Al tomo de C al que estn unidos el amino y el cido, le quedan otros dos posibles enlaces
que los ocupan 1 tomo de H y una cadena lateral (el tringulo grupo amino-cido-H es
comn para todos los aminocidos proteicos).
 78

La clasificacin ms habitual establece 4 grupos:

- a. Hidrfobos o de cadena apolar
- a. Polares con carga neutra
- a. Aninicos o cidos
- a. Catinicos o bsicos

Los aminocidos hidrfobos se caracterizan por tener cadenas laterales hidrocarbonadas

con algn otro elemento como S o H que mantiene la apolaridad. Aqu incluimos:

- glicina
- alanina
- valina con cadenas laterales alifticas
- leucina
- isoleucina

- fenilalanina
- triptfano con cadenas laterales aromticas

- metionina (con un S en su cadena lateral)

 79

La hidrofobia es mayor cuanto ms voluminosa sea la cadena lateral. En el caso de la

glicina o glicocola, el ms sencillo, aunque se considera dentro de los hidrfobos,
realmente lo es muy poco, ya que predomina el carcter inico de los grupos amino y
carboxilo.

Dentro de los aminocidos de cadena apolar, tambin est la prolina, un aminocido

especial, ya que es cclico, con 3 metilos, pero uno unido al grupo amino, formando un
ciclo. Esta caracterstica interviene en las propiedades de las protenas en las que en su
constitucin interviene la prolina.
La prolina puede llamarse tambin iminocido.

Los aminocidos con carga neutra contienen en sus cadenas laterales, grupos hidrfilos
que aumentan su solubilidad, como por ejemplo los grupos OH de la serina, treonina o
tirosina.

Tambin son aminocidos con carga neutra la cistena, con un grupo tilo (SH), as como
la asparagina y glutamina, amidas correspondientes a los cidos asprtico y glutmico.

Los aminocidos aninicos o cidos tienen en su cadena lateral un grupo cido y son
solamente 2, el cido asprtico y el cido glutmico, diferenciados porque el segundo
tiene 1 metileno ms en su cadena lateral.

Los aminocidos catinicos o bsicos son 3, la histidina, lisina y arginina. Su carcter

bsico se lo deben a grupos nitrogenados de su cadena lateral, que estn cargados
positivamente.

Los aminocidos tienen, adems de su nombre, un cdigo que es sus 3 primeras letras o
una nica letra, cdigos usados para trabajar con secuencias de polipptidos y protenas.
 80

Adems de los 20 aminocidos proteicos existen otros en las protenas que derivan de
estos, ya que se les introducen modificaciones una vez que la protena ya est formada.
Estas modificaciones tienen como objetivo adaptar ms la protena a su funcin y al
medio ambiente en el cual tienen que desempear su funcin. Las modificaciones ms
frecuentes son:
- Metilaciones: se producen sobre el N de las cadenas laterales, sobre todo en el caso
de la histidina y lisina, pudiendo hacerlo en 2 y 1 posiciones respectivamente. Estos
aminocidos metilados son frecuentes en las protenas musculares.
- Acetilacin: tambin se produce en el grupo amino, y es frecuente en el caso de la
lisina. Es importante la acetil-lisina en el caso de las histonas

- Hidroxilacin: esta modificacin es ms frecuente en la prolina, en las posiciones 3

y 4. estas abundan en el colgeno.

- Fosforilacin: Aqu se une un grupo fosfato mediante enlace ster a un grupo OH

de la cadena lateral de aminocidos, por lo tanto los aminocidos que se forman son
los que tienen OH en su cadena lateral como la serina, teronina y tirosina.
Los tres son muy importantes ya que son reversibles, y regulan la actividad de
muchas encimas, as como la transcripcin de genes...

- Ciclacin: la ms comn es la que se produce entre el grupo amino y el COOH de

la cadena lateral del cido glutmico. El resultante es el cido piroglutmico,
presente en el inicio de protenas protectoras

- Hipermodificaciones: destacan las hormonas tiroideas T3 y T4, que son dmeros

iodados de la tirosina. Tambin nos encontramos en la elastina de los tendones
estructuras de cuatro residuos de lisina.

Tambin hay aminocidos no proteicos. Los hay , , ... los ms comunes son:

Dentro de los - aminocidos, tenemos muchos ejemplos ya que son intermediarios de

los procesos de sntesis o degradacin de aminocidos proteicos, y por tanto se van a
diferenciar de los proteicos, por ejemplo porque contienen 1 metileno ms en la cadena
lateral como en la homoserina respecto de la serina o la homocistena respecto de la
 81

cistena, otros que contienen un eslabn menos en la cadena lateral como en el caso de
la ornitina respecto de la lisina.
Las primeras participan en el metabolismo de la cistena y serina, mientras que la
segunda participa en el ciclo de la urea.

Dentro de los - aminocidos el ms comn es la - alanina, que es igual que la

alanina, pero con el grupo amino situado sobre el C . Esta forma parte del cido
pantotnico, una viatamina.

Dentro de los - aminocidos destacamos el - amino butrico, abreviadamente

GABA, que es un neurotransmisor.

Propiedades de los aminocidos

Diferenciaremos: - isomera
- comportamiento anftero
- absorbancia en el ultravioleta
- reacciones coloreadas de identificacin

Con respecto a la isomera, en todos los aminocidos proteicos excepto la glicina, el C

es asimtrico. Esta caracterstica provoca la existencia de al menos dos
estereoismeros para cada aminocido, que van a ser D y L segn tengan la cadena
lateral a la derecha o a la izquierda.
La inmensa mayora de los naturales son L aminocidos. Solamente nos encontramos
trazas de aminocidos D en las paredes celulares de bacterias en regiones muy
determinadas, limitadas y minoritarias de las protenas.
Que un aminocido sea D o L va a condicionar el plegamiento de la protena de la que
forma parte.

Hay dos aminocidos que poseen 2 centros quirales que son la treonina y la isoleucina,
que tienen otro C tambin asimtrico, por tanto aqu, en estos aminocidos va a haber
 82

4 estereoismeros posibles, 2 de la serie D y otros 2 de la serie L. Cuando existen dos

estereoismeros, el L nunca aparece, y se denomina alo-.

La absorbancia en ultravioleta aparece en la fenilalanina, tirosina y triptfano. a 280

nm se usan para determinar protenas. El resto de los aminocidos que no son
aromticos, absorben en el ultravioleta a 214 nm, y ya no son usados para determinar
protenas.

Reacciones coloreadas de identificacin: los aminocidos no son molculas coloreadas,

pero existen reactivos que dan lugar a compuestos coloreados cuando se unen a los
amincidos y que se usan para cuantificar estos mediante colorimetra.
De estos, el ms usado es la nihidrina, que proporciona un color prpura al reaccionar
con todos los aminocidos.
Se suelen separar los aminocidos por otras tcnicas, como por ejemplo cromatografa y
despus se identifican con la nihidrina.

El carcter anftero de los aminocidos es fundamental para entender su

comportamiento en disolucin, as como los sistemas de separacin de estos.
Son electrolitos dbiles. El grupo cido y amino son ionizables. Los valores de pK
oscilan entre 2 y 3 normalmente para el grupo cido y entre 9 y 10 para el amino.

Cuando el pH es menor que el pK, los aminocidos se encuentran totalmente

protonados, y lo contrario sucede a pH inferior.

A un pH prximo a la neutralidad, el grup cido va a estar cargado ( COO ), y el

amino estar tambin cargado ( NH 3 ) debido a sus pKs, y el aminocido presenta
carga neutra por compensacin interna de las cargas positivas y negativas. A esta forma
hbrida se le denomina in hbrido o zwitterion.

Los aminocidos que poseen un grupo ionizable en su cadena lateral, presentan un

tercer pK, el pK R . Aqu tenemos los aminocidos bsicos cistena y tirosina.

El valor del pK R depende del tipo de radical. Cuando es un cido, este pK tambin es
cido (3 4). Cuando es una base, es bsico (10 12).
 83

Casos que nos encontramos segn el pH del medio:

Cuando el pH es muy bajo, inferior al pK1, los aminocidos estn totalmente

protonados ( COOH y NH 3 ).

Aumentando del pH, el aminocido se disocia. El primer grupo que pierde el protn es

el cido, quedando como COO , y la molcula queda neutra ( COO y NH 3 ). Como
el pK1 oscila entre 2 y 3, a pH menor que pK1 el amino cido estar en esta forma.

Aumentando ms el pH se disocia el grupo amino, quedando la molcula con carga

negativa ( COO y NH 2 ). Esto se corresponde con el pK2, comprendido entre 9 y 10.
A pH mayor a este, el aminocido estar con esta forma.

Se define el punto isoelctrico de un aminocido como el pH en el cual la carga es

neutra. Aqu se cumplen 2 condiciones: - la especie neutra es la predominante.
- las 2 formas restantes esn en equilibrio con
la forma neutra.

El punto isoelctrico puede calcularse para el caso de los aminocidos neutros como la
media del pK1 y el pK2.
 84

Aminocidos con un tercer pK:

En los equilibrios cido base de estos, al igual que antes, si partimos de pH < pK1, y
con un aminocido cido, tendremos el aminocido totalmente protonado, a medida que
aumentamos el pH, se produce la disociacin de los grupos en orden creciente de sus
pKs: primero el cido, despus el cido del radical, y por ltimo el amino.

Con los aminocidos bsicos pasa casi lo mismo. Primero se disocia el grupo cido, luego
el amino, y luego el bsico del radiacal, normalmente.

En los aminocidos cidos y bsicos, el punto isoelctrico se corresponde con la media de

los 2 pK`s a ambos lados de la especie con carga neutra (pK1 y pKR en cidos, y pK2 y
pKR en bsicos).

A pH prximo al punto isoelctrico, la concentracin del tercer grupo es muy baja, y no la

tenemos en cuenta. Aqu, al igual que antes, en pH cercano al p.i., la forma neutra
predomina, las de los lados estn en equilibrio, y la otra se desprecia.

Todo esto es importante desde el punto de vista fisiolgico ya que la actividad de muchas
protenas dependen del estado en el que se encuentren sus aminocidos (disociados) as
como las estructuras tridimensionales de las mismas.
85
 86

TEMAS 15 a 21

PPTIDOS Y PROTENAS

El enlace peptdico, que une aminocidos para formar pptidos y protenas, qumicamente
es un enlace de tipo amida, que se forma por condensacin entre el grupo carboxilo y
amino de otro con liberacin de una molcula de H 2 O . Lo que se forma es un dipptido.

Con otro aminocido ms tendramos un tripptido, y as sucesivamente (tetrapptido...).

Los pptidos se nombran empezando por el aminocido con el grupo amino libre y
acabando con el que tiene el grupo carboxilo libre (terminal). A los aminocidos se les
coloca el sufijo IL excepto al ltimo. Si son largos, se escribe la secuencia con las
abreviaturas o bien con nombres propios.

El enlace peptdico tiene unas caractersticas muy importantes porque de ellas dependen las
caractersticas del pptido y las protenas.
 87

- En primer lugar, es un enlace muy resistente a la hidrlisis, con lo que las protenas
son muy estables.
- Tanto el enlace C-O como el C-N tienen carcter parcial de doble enlace. Esto
impide la libre rotacin de la molcula alrededor del enlace peptdico, y como
resultado, los 6 tomos que participan en el enlace son coplanarios, de tal manera
que como las protenas se pliegan para formar la estructura secundaria, lo que gira
son los planos sucesivos de los enlaces peptdicos.

Partiendo de los 20 aminocidos proteicos, el nmero de pptidos posibles es enorme, de

echo, la variedad existente es muy grande.

Dentro de los pptidos de importancia biolgica destacaremos en primer lugar el

glutatin, un tripptido que es el - glutamil cisteinil glicina.

Es muy importante porque acta como protector de las condiciones reductoras en el citosol
celular, ya que la cistena posee un grupo SH y el glutatin puede formar dmeros por
puentes disulfuro, pasando de la forma oxidada a la reducida.
Es uno de los pptidos ms pequeos con inters fisiolgico.

Las encefalinas son ms grandes. Hay la Met-encefalina y Leu-encefalina, llamadas as

porque se diferencian solo en el aminocido carboxilo-terminal.
Son pentapptidos (5) y se encuentran en el cerebro donde intervienen en procesos
relacionados con la percepcin del dolor.

Tambin tenemos hormonas como la vasopresina y oxitocina, nonapptidos (9). La primera

regula la reabsorcin renal de agua y la segunda la secrecin de leche.

De mayor tamao tenemos oligopptidos de hasta 34 aminocidos con funcin hormonal.

Un polmero de aminocidos deja de ser un pptido para pasar a ser considerado

protena segn dos criterios:
- en primer lugar, la longitud (hasta 50 a. Es un pptido) esto es bastante ambiguo,
debido a que por ejemplo, la hormona paratiroidea, con 84 aminocidos suele
considerarse un pptido.
 88

- En segundo lugar, y ms importante, la existencia biolgica.

La cadena de aminocidos que se sintetiza en el laboratorio y cuya existencia no ha
sido demostrada en un organismo no ser protena por muy larga que sea. Si existe
en la naturaleza, ello depender, ahora s, de su longitud. An as, el lmite es
difuso.

Clasificacin de las protenas

Las protenas se pueden clasificar segn varios criterios, y todos son complementarios. Nos
centraremos en 4 criterios:
- Composicin
- Forma
- Solubilidad
- Funcin

- Segn la composicin, estas pueden ser simples o conjugadas. Las simples estn
constituidas solo por aminocidos y las conjugadas contienen algn otro componente de
diferente naturaleza qumica.
- Cuando este componente es un glcido, son glicoprotenas.
- Si es un lpido, lipoprotenas.
- Si es un cido nucleico, nucleoprotenas

otra variedad son los grupos prostticos como el grupo hemo, que da hemoprotenas, o un
metal, que da metaloprotenas...

- Segn su forma, clasificaremos a las protenas en globulares y fibrosas. Las primeras

tienen forma esfrica u ovoide, y suelen ser solubles, mientras que las segundas son
alargadas e insolubles, constituyendo la base de los tejidos estructurales, por lo que tambin
se las denomina escleroprotenas.
Como las globulares son solubles y las fibrosas no, podemos decir que la siguiente
clasificacin est relacionada con esta y puede considerarse como una subdivisin.
 89

- Segn la solubilidad, diferenciamos entre:

- Albminas, que son solubles en agua fra. Estas 2 tienen
- Globlulinas, que son solubles en disoluciones salinas diludas origen animal

- Glutelinas, que son de origen vegetal, insolubles en agua y disoluciones salinas,

pero s en cidos y bases diluidos.

- Prolaminas, son de origen vegetal, y solubles en alcoholes de bajo peso molecular.

- Protaminas, protenas bsicas que se encuentran en los fluidos seminales y son

solubles en agua y NH 3 diludo.

- Histonas, que interaccionan con el DNA en los ncleos y son bsicas, solubles en
agua y cidos diludos.

Dado que este grupo es de protenas solubles, todas ellas sern, pues, globulares.

- Segn su funcin (esta clasificacin es la ms heterognea y la ms informativa), pueden

ser:
- Encimas, que catalizan las reacciones biolgicas

- Transportadoras, como la hemoglobina (de O2 ) o protenas de membrana (de

metabolitos)

- De reserva, como almacn de energa, como la ovoalbmina.

- Contrctiles, como la actina y miosina, que intervienen en la contraccin muscular

- Estructurales, que son las ms abundantes, de entre las que destaca el colgeno.
 90

- De defensa

- Hormonal

- Como factores trficos. Se desempea con el desarrollo de tejidos a nivel

embrionario.

- Receptores, de entre los que destacan los hormonales, protenas de membrana a las
cuales se une una hormona. Esta unin desencadena una accin hormonal.

- Protenas cromosmicas como las histonas

- Toxinas, que abundan en microorganismos, insectos y reptiles

Estructura de las protenas

Las protenas son macromolculas, en general bastante grandes (5000 a. pequea),

con una estructura tridimensional muy compleja cuya determinacin es una tarea difcil.
Existen mtodos como la cristalografa por rayos X, y en la actualidad se conoce menos
del 10% de las estructuras de las protenas aisladas de organismos.

Las posibilidades que tienen los aminocidos de plegarse son grandes, pero cada
protena adopta una estructura espacial nica, que se conoce como estructura nativa, y
que est directamente relacionada con la funcin biolgica de esta, de manera que si se
altera esta estructura nativa, se ve alterada su funcin.

Segn las relaciones entre estructura y funcin, tenemos 3 tipos:

- protenas homlogas
- islogas
 91

- anlogas

Las homlogas, perteneciendo a diferentes especies, presentan similar funcin y similar

estructura.

Las islogas, van a ser originarias de la misma especie, desempean una funcin
similar, pero tienen diferencias estructurales que las hacen ms adecuadas a funciones
especficas de esos organismos.

Las anlogas tambin son originarias de la misma especie, su estructura es similar pero
con diferencias en su funcin. En este caso, se cree que sus genes derivan de un gen
ancestral comn por duplicacin y mutacin.

El estudio estructural se realiza estableciendo 4 niveles que son las estructuras primaria,
secundaria, terciaria y cuaternaria. Seguiremos estos cuatro niveles.

La estructura primaria:

Es la secuencia de aminocidos. Nos indica el orden en el que estn unidos los

aminocidos en la cadena polipeptdica.
En las protenas conjugadas, nos indica tambin los lugares de unin con glcidos o
diferentes grupos prostticos.

En la estructura primaria estn las claves o informacin bsica que determina las
estructuras superiores, pero de momento no podemos predecir la estructura secundaria
de las protenas a partir de la primaria, nada ms que e regiones pequeas de estas
proteanas.

Esquemticamente, la estructura primaria puede definirse como largas cadenas

zigzagueantes de enlaces peptdicos y de carbonos alternantes, estando las cadenas
laterales de los aminocidos a los carbonos y denominndose residuos
aminoacdicos.
 92

Existen varias tcnicas diferentes para determinar la estructura primaria de la protenas,

una clsica, que es el mtodo de secuenciacin de Edman, que consiste en:
- Primero tenemos que disponer de la protena purificada, y si est formada por
diferentes cadenas polipeptdicas enrolladas, separarlas.
- Luego estas las rompemos en pptidos de 20 aminocidos.
- Seguidamente separamos estos pptidos cortos y los hacemos reaccionar con el
fenilisotiocianato, que se une al aminocido con posicin aminoterminal
especficamente, y da lugar a que el enlace que une este aminocido con el
siguiente, sea ms sensible a hidrlisis, con lo que luego se somete a una suave, y
solo se romper este enlace peptdico.
- Obtenemos el derivado del aminocido (a. + FITC) y un pptido con un
aminocido menos, con el que podemos realizar un segundo ciclo de secuenciacin.
Los aminocidos que separamos los podemos determinar con tcnicas como la
cromatografa.

Estructura secundaria:

Nos define las disposiciones regionales y con elementos de simetra que nos podemos
encontrar en determinadas regiones en las cadenas polipeptdicas.
Las posibilidades son enormes, sin embargo existe una restriccin muy importante a
todas estas posibilidades, que consiste en la planaridad del enlace peptdico, de tal
manera que los parmetros que cambian en la cadena son los ngulos de giro entre
planos consecutivos de este pptido. Los valores de estos ngulos nos definen las
estructuras secundarias.

Existen muchas estructuras secundarias, pero entre las ms estables se encuentran la

hlice , la lmina (o hoja plegada), y son las ms estudiadas.

Hlice :
En esta disposicin la cadena polipeptdica se enrolla sobre s misma como la rosca de
un sacacorchos. La rotacin es hacia la derecha, y las cadenas laterales de lo
aminocidos se disponen hacia el exterior por el volumen que ocupan.
Cada aminocido est girado 100 con respecto al anterior, lo que quiere decir que hay
3,6 residuos de aminocido cada vuelta completa.
 93

Cada cuatro aminocidos los enlaces peptdicos se encuentran cercanos, pero en niveles
diferentes de la hlice, por lo tanto se pueden establecer puentes de hidrgeno entre
estos enlaces ya que los grupos C-O y N-H tienen posicin trans.
Estos puentes de hidrgeno son la principal fuerza que estabiliza la estructura en hlice
y son determinantes de lo que se denomina la longitud del paso de rosca, que es de
54 nm en la hlice .

En la hlice los puentes de hidrgeno se establecen entre el grupo C-O del

aminocido que ocupa la posicin n y el grupo cido del aminocido con posicin
n+4.
Existen variantes de esta estructura. Destacaremos 2 comunes estudiadas en las
protenas, la hlice 310 y la hlice .

En la hlice 310 tenemos 3 residuos por vuelta ya que los puentes de hidrgeno se
establecen entre el grupo C-O del aminocido n y el N-H del aminocido n+3.
En la hlice , ms ancha, nos encontramos con 4,4 residuos por vuelta; aqu los
puentes de hidrgeno se establecen entre el grupo C-O del aminocido n y el N-H del
n+5.

Lmina o lmina plegada:

Aqu la cadenas polipeptdicas se disponen manteniendo su estructura en zig-zag

extendidas y en dos posibles disposiciones, la paralela, en la que las diferentes cadenas
tienen el extremo amino y carboxilo del mismo lado, y antiparalela, con el grupo amino
y carboxilo contrapuestos. Esta ltima, la antiparalela es ms frecuente.

La lmina tiene una disposicin ms compacta que la hlice . En la lmina la

estabilidad depende de puentes de hidrgeno. Aqu los puentes se establecen entre el O
de un grupo C-O y el H de un N-H de la cadena paralela prxima, son puentes
intercatenarios, mientras que en la hlice eran intracatenarios.

Los residuos se sitan alternativamente hacia arriba o abajo dependiendo del plano
definido por la lmina .
 94

Los aminocidos con cadenas laterales pequeas son ms compatibles con esta
disposicin, debido a que tienen menos impedimentos estricos.

En el caso de las protenas globulares puede suceder que las dos cadenas que
interaccionan por puentes de hidrgeno pueden ser fragmentos de la misma cadena, por
medio de un giro.

Estructura terciaria:

Define el conjunto de todas las interacciones tales como puentes de hidrgeno, enlaces
disulfuro, enlaces de Van der Waals... que rigen el plegamiento de la cadena completa
en el espacio, y engloba todas las estructuras secundarias que pueden existir en distintas
zonas de la molcula.

Adems, define otras zonas como las de ovillo estadstico, zonas de giro o torsin,
donde las cadenas se pliegan sobre s mismas
Destacaremos los giros , que son bastante bruscos, por el establecimiento de puentes
de hidrgeno entre los grupos C-O del aminocido n y el grupo N-H del aminocido
n+3, empleados para conectar lminas antiparalelas.

Tambin existen estructuras al azar con plegamientos al azar.

En algunos casos la cadena polipeptdica puede tener varias zonas de plegamiento con
elasticidad propia. A estas se les denomina dominios.

En protenas fibrosas las estructuras secundaria y terciaria coinciden, las cadenas

laterales se orientan todas igual. Un ejemplo es la -queratina del pelo, que sirvi para
determinar las dimensiones moleculares de las hlices

Estructura cuaternaria:
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Define las interacciones entre varias cadenas polipeptdicas para formar una protena.
Las protenas que solo son una cadena, son monmeros, si tienen dos cadenas son
dmeros, si tres, trmeros, tetrmeros....

Son homodmeros si las dos subunidades son iguales, y heterodmeros si son distintas.
Las fuerzas que estabilizan la estructura cuaternaria son variadas y son las mismas que
las que estabilizan la estructura terciaria (enlaces disulfuro, puentes de hidrgeno,
interacciones inicas...).

Es frecuente que en las protenas oligomricas puedan existir varias estructuras

cuaternarias, varios estados conformacionales que afecten a la actividad de la protena,
como en las encimas alostricas o la hemoglobina.

EL COLGENO

Es la protena fibrosa ms abundante del cuerpo y posee una estructura secundaria

caracterstica que es la hlice P.

El colgeno es la protena base del tejido conjuntivo y el constituyente orgnico bsico

de los tejidos calcificados.

La estructura primaria es nica, se caracteriza por tener un 30% de glicinas, y alrededor

de un 20% de prolina e hidroxiprolina. Estas dos son caractersticas del colgeno. Solo
la elastina, que es otra protena de tendones y cartlago tambin contiene estos dos
amionocidos en esta proporcin.

La estructura secundaria. La hlice P es ms rgida y extendida que la hlice (con

cada aminocido ascenda 18 nm) y aqu 0,29 nm.
Esto se debe a:
- la presencia de prolina e hidroxiprolina, aminocidos cclicos con un anillo del cual
forma parte el N , que da lugar a que el anillo sea rgido estricamente a la cadena
polipeptdica,
- a que al estar el N formando parte del anillo no puede formar puentes de
hidrgeno por no tener hidrgenos,
 96

- y a que los OHs de la hidroxiprolina establecen estos puentes de hidrgeno que

estabilizan a esta hlice P.

La hlice P es levgira, se enrolla formando una triple hlice dextrgira que forma el
tropocolgeno, que presenta 2 nm de dimetro y 260 nm de longitud.

Uno de cada 3 aminocidos son glicinas.

En el tropocolgeno uno de cada tres aminocidos orienta su radical hacia adentro de la
hlice, y solo la glicina puede hacer esto.

Otra caracterstica del colgeno es que estas cadenas polipeptdicas pueden unirse por
enlaces transversales con otras cadenas que se establecen entre los residuos de la lisina
y el lisinal (derivado de la lisina).

Estos enlaces tambin estn entre diferentes unidades de tropocolgeno que se asocian
para formar las protofibrillas y fibrillas del colgeno. Esta unin tambin se establece
entre enlaces de residuos de lisina y lisinal.

El colgeno es una glucoprotena, y existen diferentes tipos de colgeno que se

diferencian entre s por la composicin de las cadenas polipeptdicas que los forman.
Existen dos tipos de cadena, la 1 y la 2 , que se diferencian en la secuencia de
aminocidos, en las glicosilaciones y en el nmero de OHs de la prolina.
Estas caractersticas de los distintos tipos de colgenos adaptan a los mismos para su
funcin en el cuerpo.

Comportamiento de las protenas en disolucin

La mayor parte de las protenas se encuentran disueltas en los lquidos biolgicos,

donde cumplen su funcin. Estos lquidos son disoluciones salinas acuosas.

Las propiedades derivan de dos caractersticas de las protenas:

- Su naturaleza poliinica
 97

- Su naturaleza macromolecular

Con relacin a su naturaleza poliinica, tanto lo extremos de la cadena polipeptdica

como los residuos de los aminocidos cidos y bsicos contribuyen a que la protena
tenga cargas en su periferia, que se comporte como un poliin. Por este motivo hay
contraiones orgnicos en la disolucin que rodean la protena por atraccin
electrosttica y dejan su carga neutra.

Los aminocidos poseen sus constantes de ionizacin, pero al estar unidos a la protena,
la presencia de otros grupos cercanos hace que se modifique, de manera que el pK de
los residuos vare en 1 unidad.

Las protenas, al igual tambin poseen un punto isoelctrico (p.i.) en el que para ese pH
su carga neta es cero.
- Si pH < p.i. la protena tiene carga positiva
- Si pH > p.i. la protena tiene carga negativa.

El punto isoelctrico depende de la composicin de aminocidos de modo que si el

contenido en aminocidos bsicos y cidos es parecido, el p.i. se encuentra entre 6 y 8, si
predominan los aminocidos cidos el p.i. ser ms bajo, como en el caso de la pepsina,
cuyo p.i. es 1,5. gracias a esto, la pepsina puede resistir y desenvolverse por el cido jugo
gstrico e hidrolizar protenas de tipo neutro

Las histonas son bsicas, y pueden unirse al DNA, cargado negativamente.

El carcter poliinico hace que la solubilidad dependa del pH, contenido salino del medio...

Como norma general, una protena es ms soluble si las interacciones entre molculas
proteicas se reducen al mnimo.

Respecto al PH, la solubilidad es mnima en el p.i. ya que no existe repulsin entre las
molculas y no se solubilizan
 98

Con respecto al contenido salino, el efecto es bifsico, a una cierta concentracin de sales,
estas actan como contraines, mientras que a una concentracin elevada insolubilizan las
protenas ya que los iones se rodean de una esfera de solbatacin con molculas de agua, y
estas no estn libres en la disolucin.

Con respecto a la caracterstica de ser macromolculas, al serlo forman disoluciones

coloidales, fundamentales para membranas semipermeables. No las pueden atravesar por su
tamao. Esto se usa tambin para dilisis.
Hacen tambin de receptores inicos que atraen a pequeos iones.

Desnaturalizacin de protenas

La desnaturalizacin es el proceso por el cual una protena cambia su estructura nativa, lo

que conlleva a la prdida de su actividad biolgica.

Es provocada por el calor, PHs extremos o por agentes que rompen enlaces no covalentes
como los detergentes o la urea.

Las estructuras afectadas son la terciaria y la cuaternaria. La protena se despliega y los

residuos hidrfobos que estn dirigidos hacia el interior de la protena, al desnaturalizarse
afloran al exterior con la consiguiente isolubilizacin de la protena.

Solo en los casos ms extremos se ve afectada la estructura secundaria, pero nunca la

primaria. Para romper los enlaces peptdicos hay que recurrir a tratamientos ms fuertes o
digestin con encimas especficas (proteasas) como la pepsina.

Plegamiento de las protenas ( Cmo adoptan su estructura en 3D)

El mecanismo es muy complejo, en general est dirigido por la tendencia a alcanzar estados
de mnima energa.
Una fuerza muy importante es la hidrofobia de los residuos de los aminocidos, que dirige
el plegamiento, de forma que los residuos polares se colocan hacia la periferia de la
protena en contacto con la solucin acuosa, mientras que los residuos apolares o
hidrfobos tienden a protegerse del agua colocndose en el interior de la protena.
 99

El plegamiento no es espontneo a partir de cualquier conformacin una vez que la protena

est formada, lo que explica que gran parte de las desnaturalizaciones sean irreversibles.
Cuando la protena est siendo sintetizada, existen otras protenas que se llaman
chaperoninas, que colaboran en que se pliegue correctamente la cadena en crecimiento.
Para ello, se unen a la cadena desplegada impidiendo interacciones no deseadas, en un
proceso ligado a la hidrlisis del ATP.

En el plegamiento intervienen otras protenas encimticas como isomerasas de puentes de

sulfuro, etc.
 100

TEMA 20 Y TEMA 21

PROTENAS CONJUGADAS

Estas protenas llevan asociados otros componentes de naturaleza no proteica que se

clasifican segn este componente.

Glucoprotenas:

- Colgeno ( ya estudiado).

- Inmunoglobulinas: Son anticuerpos que reconocen y se unen a los determinantes

antignicos, regiones del anticuerpo que provocan la respuesta inmune.
Dentro de las inmunoglobulinas existen 5 tipos: Ig A, D, E, G, M.
 101

La inmunoglobulina G son las ms abundantes al defenderse de un organismo extrao.

Estn formadas por cuatro cadenas polipeptdicas iguales 2 a 2. son 2 cadenas ligeras y 2
cadenas pesadas. Las uniones entre las distintas cadenas se establecen por puentes
disulfuro, lo que hace que sean bastante resistentes a la disociacin.

Las cadenas ligeras constan de dos dominios, uno variable y otro constante. Las pesadas
constan de cuatro dominios, uno variable y 3 constantes. Estos dominios son zonas
globulares que tambin se estabilizan por puentes disulfuro.

Los dominios situados en el extremo aminoterminal tanto de las cadenas ligeras como de
las pesadas (el primer dominio) constituyen el centro activo de la inmunoglobulina. Son los
encargados de reconocer al antgeno y unirse a l. Esto es posible porque presentan una
gran variabilidad estructural. El resto de la molcula es constante, con escasa variabilidad.

En la regin constante de las cadenas pesadas (el segundo dominio) van oligosacridos
unidos.

Las inmunoglobulinas poseen una estructura caracterstica en Y. A esta regin se la

denomina regin bisagra porque permite que la molcula se abra o cierre, facilitando as
la unin con el antgeno.

Diferentes tipos de inmunoglobulinas:

En lo esencial se repite la estructura mencionada. Una diferencia es la composicin de la
cadena pesada, caracterstica para cada una de ellas, las de la Ig A son , las de las D, ...

Las cadenas ligeras son iguales para las 5 clases de inmunoglobulinas y pueden ser de 2
tipos, o (landa o kapa). Nunca tendremos una y una en la misma cadena pesada o
las dos en las ligeras.
En las inmunoglobulinas A esta estructura bsica se repite entre 1 y 3 veces. En el caso de
otras se repite 5 veces.

Existen tambin diferencias funcionales entre las diferentes Igs durante el proceso inmune.
Lipoprotenas:
 102

Son las responsables del transporte de lpidos por la sangre. Presentan una estructura
esfrica cuya parte interna es de naturaleza oleosa, hidrfoba. Estn formadas por lpidos
apolares como los steres de colesterol o triglicridos.
Estn cubiertas por una monocapa de lpidos anfipticos (fosfolpidos y colesterol libre),
junto con las protenas especficas que tambin son anfipticas y dirigen sus residuos
hidroflicos hacia el exterior de la protena y los hidrofbicos hacia el ncleo hidrfobo de
la protena. A estas protenas se las denomina apoprotenas.

La unin de los lpidos del ncleo a la capa externa de fosfolpidos y protena es una unin
dbil no covalente, mediante puentes de hidrgeno y enlaces de Van der Waals, con lo que
se permiten el intercambio de lpidos y apoprotenas entre las distintas lipoprotenas del
suero y entre estas y los tejidos.

Se han identificado en el plasma sanguneo 5 clases de lipoprotenas que se clasifican segn

su densidad y comportamiento en la electroforesis:
- Quilomicrones: lipoprotenas muy ricas en triglicridos procedentes de la dieta

- Lipoprotenas de muy baja densidad: conocidas tambin como VLDL o

lipoprotenas pre , segn su comportamiento en electroforesis . tambin son ricas
en triglicridos, pero en este caso de sntesis endgena

- Lipoprotenas de densidad intermedia

- Lipoprotenas de baja densidad o LDL: estas transportan fundamentalmente

colesterol. Tambin se denominan lipoprotenas

- Lipoprotenas de alta densidad o o HDL: los lpidos aqu son ms abundantes, son
fosfolpidos y colesterol.

La distinta densidad de las protenas se debe a la distinta proporcin de lpidos y

protenas de que consta. A mayor proporcin de lpidos mayor densidad.
 103

En cuanto a las apoprotenas, estas varan de unas a otras y se denominan como apoA,
apoB, C, segn el orden en que han sido descubiertas.
Que las apoprotenas sean tan distintas influye en el punto isoelctrico de las mismas, y
por tanto en su comportamiento en la electroforesis.

Hemoprotenas

Son aquellas que contienen el grupo hemo . como ejemplo, vamos a estudiar la
mioglobina y la hemoglobina, que son protenas que se unen al oxgeno.

Las hemoglobina transporta oxgeno en el interior de los glbulos rojos de humanos y

otros vertebrados, mientras que la mioglobina lo almacena en los tejidos hasta que es
usado en el metabolismo.

La mioglobina se encuentra en concentraciones relativamente altas en el msculo

esqueltico y cardaco, siendo la principal responsable de su color.
Representa el 8% de las protenas musculares de los animales que se sumergen, que
necesitan almacenar grandes cantidades de oxgeno para usarlo cuando estn
sumergidos.

La mioglobina es una protena monomrica, mientras que la hemoglobina es un

tetrmero.

En la mioglobina, la cadena polipeptdica est formada por 8 hlices en las cuales

estn ms de las partes de los aminocidos. Estas hlices se nombran de la A a la H
comenzando por el extremo aminoterminal, y los segmentos interhlice se nombran
AB,CD,DE...
En cuanto a los residuos, estos se pueden nombrar de 2 modos, desde el grupo
aminoterminal al carboxiloterminal o bien A1, A2, A3... segn la hlice donde se
encuentren.

El oxgeno se une al grupo prosttico de la mioglobina, que es el grupo hemo, una

profirina , la protoporfirina 9. el oxgeno se va a unir a un tomo de hierro que se situa
en el centro del grupo hemo, que es un sistema tetrapirrlico, formado por la unin de
 104

cuatro anillos derivados del tirrol, y que se caracteriza por los sustituyentes sobre este
sistema de anillos, 2 vinilo, 2 propinico (ionizables) y 2 metilo.

El grupo hemo se sita en una cavidad que forma la cadena polipeptdica de la

mioglobina, de forma que los sustituyentes apolares se orientan hacia la regin
hidrfoba (interior de la protena), mientras que los ionizables se dirigen al exterior
acuoso. El hierro est unido en el centro del grupo hemo, por lo que los enlaces de
coordinacin.
4 de ellos se establecen con los cuatro nitrgenos de los anillos pirrlicos. El quinto
enlace de coordinacin lo establece con el N de un residuo de histidina denominado
Histidina Proximal, con posicin F8 o G3 de la cadena.
Un sexto enlace de coordinacin se une al O. En la unin interviene la histidina distal
(ms lejana) A2 o E7.

El grupo hemo est oculto en el interior. Esto es esencial para su funcin, ya que el
Fe 2 es capaz de unirse al O, mientras que si el grupo hemo estuviese en la solucin
acuosa tendra el hierro como Fe 3 , con lo que no podra unirse al O. Esta cavidad
protege al Fe de una rpida oxidacin.

Esta proteccin tambin tiene su importancia para la diferente afinidad que presenta
para unirse con el CO, que compite con el O para unirse al grupo hemo, que cuando est
libre, su afinidad por el CO es de 25.000 ms que por el oxgeno, mientras que unido a
la mioglobina, la afinidad por el CO es de solo 250 veces la del O.

La hemoglobina es un tetrmero formado por 4 subunidades , dos a dos iguales. Cada

subunidad es igual a una mioglobina.
Existen diferentes tipos de hemoglobinas, segn cuales sean los substituyentes que la
formen. Las ms abundante es la A1, formada por 2 cadenas y 2 . El 12% es del
tipo A2, con 2 cadenas y dos cadenas . En el feto la ms abundantes la HF, formada
por 2 y 2 .

Unin del Oxgeno a la hemoglobina:

Cada molcula de hemoglobina puede unirse a 4 molculas de O. Es una protena

alostrica. La unin es cooperativa ya que la unin del O a una subunidad favorece la
 105

unin a la siguiente y as sucesivamente. Esto es debido a que la unin proboca un

cambio conformacional que se transmite a las otras unidades de la protena.
Adems, esta unin es reversible, depende de la concentracin de O que existe en el
entorno de la hemoglobina, temperatura, pH...

La importancia de la estructura 3D en su funcin:

Tomaremos como ejemplo las hemoglobinas anmalas. Estas son anormales, y

provocan patologas. Una muy bien caracterizada es la hemoglobina S o falciforme, y
los individuos que la poseen sufren un tipo de anemia falciforme.
Hay una mutacin en los genes que codifican las cadenas que provoca que el
aminocido 6 de la cadena sea valina en vez de glutmico. A pH fisiolgico el
segundo est cargado negativamente y la valina no. Hay entonces una carga positiva
que induce a que la hemoglobina precipite en el interior de los eritrocitos, y baja la
concentracin de hemoglobina en estado desoxigenado. Los glbulos rojos que padecen
esto tienen forma de hoz, y esto es una hemoglobinopata.
 106

TEMAS 22 a 25

NUCLETIDOS Y CIDOS NUCLEICOS

Los nucletidos son un grupo de macromolculas que participan en los procesos de

transmisin y expresin de la informacin gentica. Existen 2 tipos de cidos nucleicos, el
c. ribonucleico (RNA o ARN) y el c. desoxirribonucleico (DNA o ADN).

El nombre de los cidos nucleicos hace referencia a su caracterstica de cidos, pues tienen
cido fosfrico, y la primera vez que se localizaron, fue en el ncleo de clulas eucariotas,
pero sabemos hoy que tambin pueden existir en las mitocondrias, cloroplastos, y
citoplasma, y tambin en todo procariota y virus.

Desde el punto de vista qumico, los cidos nucleicos son polinucletidos, polmeros de
nucletidos que estn unidos por un enlace caracterstico, el fosfo-di-ester, que es un cido
fosfrico que se une por dos enlaces ster sucesivamente a dos grupos alcoholes.

Los nucletidos estn formados por tres componentes, que son el cido orotfosfrico, una
pentosa y una base nitrogenada.

Pentosas:
En el caso de los nucloetidos de ARN (ribonucletidos), la pentosa es la ribosa (ver temas
de azcares). En el ADN (desoxirribonucletidos), las pentosas son la 2-desoxirribosa.
 107

Ahora hablaremos de carbonos prima (1, 2, 3...) para diferenciarlos de los Cs de las
bases nitogenadas (1, 2, 3...).

Bases nitrogenadas:
Hay dos tipos, las pricas y las pirimidnicas, segn de qu anillo deriven, la purina o la
pirimidina.
Los sustituyentes en el anillo determinan las bases.

- Pricas: adenina y guanina

- Pirimidnicas: timina (en ADN solamente),uracilo (solo en ARN) y citosina (en
ambos).

Adems de estas bases nitrogenadas, que son mayoritarias, existen otras minoritarias que
algunas de ellas forman parte de solo unos tipos determinados de cidos nucleicos, y otras
que son productos intermediarios en el metabolismo de stos.

Existen anlogos sintticos usados en terapia anticancerosa y antivrica.

Las bases nitrogenadas pueden existir en 2 formas que se llaman tautomricas (ceto y enol).
La primera predomina a pH fisiolgico. En las enol, el doble enlace del oxgeno se
transforma en sencillo. Que la base est en una u otra forma influye en su capacidad para
formar puentes de hidrgeno. Esto es de gran relevancia a la hora de estudiar ls estructura y
funcin de los cidos nucleicos, ya que estas bases nitrogenadas se emparejan entre s por
puentes de hidrgeno. En el caso del ARN esta molcula es monocatenaria pero pueden
existir regiones bicatenarias por apareamientos de pares de bases complementarias.

Las bases se unen siempre una prica con una pirimidnica, unin fundamental porque las
primeras son grandes, con dos anillos, y las segundas pequeas, con un anillo, lo que nos
garantiza que el par de bases tiene el tamao constante.

Se unen siempre G + C por 3 puentes de hidrgeno, una unin un poco ms fuerte que la A
+ T (en ADN) o A + U (en ARN), formada por 2 puentes de hidrgeno.
En estos puentes de hidrgeno participan los grupos ceto. Si las bases estn en forma enol,
esto influye, y puede dar lugar a la formacin de puentes de hidrgeno incorrectos.
 108

Unin entre los constituyentes:

La pentosa y la base nitrogenada se unen por un enlace N-glucosdico, que se establece

entre el C 1 de la pentosa (el anomrico), con el N 1 de las pirimidinas, o bien con el N 9 de
las purinas. El compuesto resultante es un nuclesido. Entorno a este enlace hay
posibilidad de giro, y esto hace que en los cidos nucleicos puedan existir diferentes
conformaciones segn la posicines relativas que ocupan la pentosa y la base nitrogenada.
De entre estas conformaciones estn la SIN y la ANTI, que dependen de cmo est
colocada la base nitrogenada con respecto a la pentosa (base hacia fuera de la pentosa o
hacia adentro).

Si a un nuclesido le aadimos un cido fosfrico mediante un enlace ster, tenemos un

nucletido. El c. se une por enlace ster a las posiciones 5 o 3 (a los OHs). Aqu, al
unirse una nica molcula de cido fosfrico, el resultante es un nuclesido monofosfato.

Denominacin: (segn la base y la pentosa)

Si el azcar es la ribosa, y la base nitrogenada la adenina, el nuclesido resultante es la

adenosina. El smbolo es la inicial de la base nitrogenada. Si agregamos un cido fosfrico,
obtenemos un nucletido, cido adenlico, uridlico, guanlico... . Se representan como los
anteriores con la misma inicial y con una p minscula a la izquierda, lo que quiere decir
que el cido fosfrico est unido al C 5 (tambin se pone 5-AMP, y normalmete se suele
decir AMP cuando es el 5). Si el cidos fosfrico se une en la posicin 3, para
diferenciarlo, colocamos la p en el lado derecho (o 3-AMP).

Si la pentosa es una desoxipentosa, se aade desoxi- a la palabra (desoxiadenosina, cido

desoxiadenlico...).

Hemos mencionado los nucletidos monofostato. Existen tambin nucletidos di y

trifosfato, y momofosfato cclicos.
Si al grupo fosfato en posicin 5 le aadimos otro cido fosfrico, tenemos un nucletido
difosfato, que lo indicaremos poniendo en la nomenclatura dos ps minsculas o una D
(ADP). Si aadimos otro cido fosfrico a la molcula obtenemos un nucletido trifosfato,
como el ATP.
 109

Los enlaces entre fosfato y fosfato son anhdridos.

Entre los monofosfato cclicos est el AMP cclico, en el que la molcula de fosfato se une
a los carbonos 5 y 3 por dos enlaces ster.

Los nucletidos mono, di, trifosfato y lo monofosfato cclicos son importantes porque,
adems de formar los cidos nulceicos, intervienen de forma libre en reacciones
metablicas y reacciones de intercambio de energa en la clula.

Los nucletidos se pueden representar as:

Los nucletidos se unen por enlaces fosfodiester para formar los polinucletidos, y se
establecen por un enlace ster en el grupo OH 3 de la ribosa, a al OH 5 de otra pentosa.
En este momento tendramos un dinucletido. Aumentando el nmero de nucletidos
tendramos trinucletidos, tetranucletidos...oligonulcetidos, polinucletidos, cidos
nucleicos.

En los polinucletidos tenemos un esqueleto de uniones azcar-fosfato constante para el

ADN y ARN (fosfato pentosa, fosfato pentosa....) siempre en el mismo sentido (5
3). Lo caracterstico de la secuencia es como van situadas las bases de estos nucletidos
(G, A, T, U, C......) desde el nucletido 5 fosforilado, hasta el 3 libre (con OH). Un
ejemplo sera: P CGUA OH . Si solo pusisemos CGUA sobreentenderamos lo dems.
 110

Por apareamiento con puentes de hidrgeno se unen 2 bases complementarias, formando

cadenas dobles como el DNA. Las cadenas de DNA son un poco ms estables que las de
ARN, sobre todo, respecto a la hidrlisis alcalina. Esto se debe a que en el DNA la pentosa
es la desoxirribosa, y en esta no pueden formarse anillos por no tener OH sino H .

Que el ADN contenga timina en vez de uracilo tambin afecta a la estabilidad de este cido
nucleico, porque pueden producirse desaminaciones. Por ejemplo, la desaminacin de
citosina da uracilo.

Otra diferencia existente entre el ADN y al ARN es que en la composicin de los ARN
existen unas relaciones de bases nitrogenadas que no encontramos en los ADNs. En ADN,
la concentracin de Timina es igual a la de Adenina, y la [G] = [C].
El contenido de G y C vara de una especie a otra pero no en individuos de la misa especie.
En el ARN la composicin es ms variable.

Estructura secundaria (3D) de los polinucletidos

DNA:

La mayor parte de las cadenas de ADN son bicatenarias, con excepcin de algunos virus.
Estas dos cadenas discurren antiparalelas:
 111

Dentro de ellas se encuentran los pares de bases unidos por puentes de hidrgeno de
manera que siempre se juntan una prica con una pirimidnica. El ancho es de 11 .

La forma mayoritaria es la de DNA-B o de wattson y Crick (1953 premio nobel). En

esta, la estructura bicatenaria se enrolla en una doble hlice dextrgira , en la que se puede
observar que cada vuelta de hlice se corresponde a 10 pares de bases. Hay una distancia
de 3,4 entre cada par de bases, con lo que una vuelta de hlice tiene 34 . El ancho de la
doble hlice tiene, tambin constante, 2nm.

Hay dos tipos de surcos, los surco mayor y surco menor. Aqu, los pares de bases estn
en el interior y los fosfatos en el exterior (cargados negativamente).

Estas molculas, en disolucin, presentan estructuras largas, flexibles, de aspecto

filamentoso, que se vuelve ms compacto cuando la molcula reacciona con otros
componentes de la clula, como protenas.

Adems de esta forma de ADN-B existen otras formas isomricas. Las ms estudidadas son
el ADN A y el Z.

Del ADN-A todava no se conoce bien su funcin. Se piensa que el DNA puede pasar de
una forma a otra al interactuar con componentes celulares. Se cree que el DNA adopta la
forma A cuando est formando hbridos. Con menos del 75% de humedad adopta la forma
A.
EL DNA-A presenta 11 nucletidos por vuelta. Es una hlice ms corta y ancha que la del
ADN-B. Aqu los pares de bases no aparecen perpendiculares al eje mayor de la hlice
como apareca en la hlice ADN-B. Los surcos mayor y menor estn menos diferenciados
en tamao. Es tambin dextrgira.

El DNA-Z es levgiro, contiene 12 nucletidos por vuelta. Es una molcula ms delgada y

solo hay un nico y profundo surco. Los grupos fosfato se disponen en zig-zag.

Se ha observado tambin la formacin de triplex, 3 hlices, e icluso cuartetos. Se dan solo

en determinadas secuencias, y posibilitan la formacin de diferentes puentes de hidrgeno.
 112

El tamao de las molculas de ADN es diferente segn el organismo del que proceda. Las
ms pequeas constan de miles de pares de bases, y las grandes, de millones de pares.

Se suele hablar del tamao en kilobases ( 10 3 bases).

Forma

Algunas son lineales, como los cromosomas eucariotas. Otras, con los extremos unidos por
enlaces fosfo-di-ster, forman un anillo, como los cromosomas de bacterias, ADN
mitocondrial, de ciertos virus, y de los plsmidos (ADN en el citoplasma que se replica
autnomamente).

Los ADN circulares se superenrrollan sobre s mismos, y a estos se les denomina ADNs
superenrrollados
Tambin pueden asociarse como vitaminas para enrollarse ms.

La eschierichia coli, pequea, tiene un cromosoma de lngitud 1mm, y est superenrrollado

y asociado a prtotenas y a ciertos componentes de la membrana plasmtica.

El ADN lineal no puede superenrrollarse. En eucariotas se pliega alrededor de protenas y

as es como se empaqueta para formar la cromatina.

La estructura de la cromatina es muy variable, pudiendo encontrarse desde estados poco

compactos (fibras de 10 nm de dimetro) hasta estados muy empaquetados (durante la
metarase). Entre estos grados, existen intermedios.
La cromatina est formada por las protenas histonas, ficas en aminocidos bsicos
(cargadas positivamente) a pH fisiolgico lo que les permite interactuar con los grupos
fosfato (cargados negativamente) del DNA.

En clulas de mamferos existen 5 tipos: H 1 , H 2 A , H 2 B , H 3 y H 4 .

Las cuatro ltimas estn formando un octmero, con dos unidades de cada una. Alrededor
de ste, da dos vueltas la fibra del ADN, formando as los nulceosomas, unidad repetitiva
de la fibra de cromatina.
 113

El ADN que une los nucleosomas es el espaciador, que se une al siguiente espaciador por
una molcula de H 1 .

Esta fibra se pliega para dar lugar a una fibra ms gruesa, de 30 nm, en la que cada 6
nucleosomas dan una vuelta de hlice (se enrollan). As se consigue empaquetar la
cromatina unas 50 veces.

En la metafase el empaquetamiento es de 100 veces ms. Esto se alcanza por interaccin

con otras protenas.

El DNA mitocondrial es mucho ms sencillo y es circular.

Debido a que las uniones del ADN son puentes de hidrgeno, es posible separar las dos
cadenas rompiendo las uniones con un aporte bajo de energa. Esto produce la
desnaturalizacin o fusin del ADN, y puede realizarse por un aumento de pH o de
temperatura.

La temperatura a la que se desnaturaliza el ADN al 50% es la Tm o temperatura de fusin, y

es una funcin directa del contenidos de pares citosina-guanina, pues se enlazan por 3
puentes de hidrgeno. A mayor concentracin de guanina-citosina mayor temperatura.

Este proceso es reversible. Si volvemos a temperatura ambiente, el dplex vuelve a

formarse, denominndose a esto renaturalizacin

La desnaturalizacin da lugar al efecto hipercrmico, que consiste en que cuando se

desnaturaliza, aumenta su absorbancia en el ultravioleta.
Lo que absorbe la UV, en realidad, son las bases nitrogenadas, y cuando se separan las
hebras, estas quedan expuestas, captando as mejor la UV.

Existen mtodos como la absorbancia para determinar cidos nucleicos, o como la

transformacin de estos en compuestos coloreados, que pueden ser determinados por
colormetros. Un coloreador es el orcinol, especfico para ribosa, o la difenilamina, para
la desoxirribosa.
 114

El DNA tambin se puede identificar por fluorescencia con el bromuro de eidio, que se
intercala entre bases y emite una coloracin caracterstica.

Secuencias palindrmicas

Son aquellas secuencias que se pueden leer igual en un sentido u otro. Por ejemplo:
5-AAATTT-3 = 3-TTTAAA-5

Son regiones con un tipo de simetra binaria importantes porque se forman estructuras
secundarias caractersticas en los cidos nucleicos a los cuales se unen protenasque regulan
la expresin gentica, pero porque tambin porque hay encimas de restriccin que rompen
los enlaces fosfo-di-ster, y algunas reconocen estas secuencias y son dianas de algunas
encimas.

ARN

Estructura de los cidos ribonucleicos

Son molculas monocatenarias de tamao mucho ms pequeo. Estas tienen entre 70 y

10.000 nucletidos.
Aunque la molcula es monocatenaria, pueden existir regiones bicatenarias, que se forman
por emparejamiento antiparalelo de bases en la misma cadena, formando lazos,
orquillas...importantes para la funcin de ese ARN.

Las cadenas de ARN pueden unirse con cadenas complementarias de ADN, dando lugar a
la hibridacin.

El RNA es ms abundante que el DNA en la clula, y existen diferentes tipos de ARNs:

 115

- ARNm (o mensajero),
- ARNr (ribosmico),
- ARNt (transferente),
- ARNsn (nuclear pequeo),
- ARN heterogneo nuclear.

El ms abundante es el rRNA, y representa el 80% del total de los RNAs en la clula,

seguido del transferente.

Adems, se han identificado los denominados ribozimas, que son RNAs que presentan
por s mismos funcin cataltica.

El ARNm:

Se caracteriza porque no presenta una configuracin tpica que lo diferencie de los dems,
ya que en una clula puede existir al mismo tiempo miles de molculas de ARNm con una
secuencia o estructura diferente.
El mensajero contiene la informacin que dirige el ensambjaje de los aminocidos para
formar los polipptidos. Esta informacin est contenida en tripletes de bases denominados
codones, especficos para cada aminocido.

Los ARN mensajeros de procariotas y eucariotas son distintos. El de eucariotas es

monogenico, contiene la informacin para un nico polipptido, mientras que en
procariotas, este es polignico, y puede codificar varios polipptidos. Tambin hay
diferencias en el sistema del proceso de maduracin del ARN.

El ARNt:

Los RNA transferentes son los ms pequeos, porque contienen entre 70 y 95 nucletidos.
Existen en las clula vivas muchos diferentes (hasta 60).
 116

La funcin de estos cidos nucleicos es unir a los aminocidos en la biosntesis de

protenas, siguiendo el mensaje que le da el ARNm. Colaboran en el ensamblaje de los
aminocidos correctamente.
Esto lo sigue por el anticodn, un triplete de pares de bases complementaria al codn del
ARNm.

Las molculas del transferente son monocatenarias, pero existen regiones con
apareamientos de bases intracatenarios. Esto se manifiesta porque cuando los transferentes
se desnaturalizan, muestran efecto hipercrmico.

La estructura bidimensional, secundaria, de los transferentes es la estructura en trbol,

que consta de un extremo abierto, tres brazos principales, y un brazo menor. A su vez, este
trbol se pliega sobre s, y a esta estructura se la denomina en L.

une el a. por enlaces covalentes durante

la biosntesis proteica.

El brazo T C est asociado con la

fijacin del aminoacil tRNA (RNA + a.)

El asa 2 es donde est el anticodn, y se

caracteriza por tener en las posiciones
adyacentes nucletidos modificados.

El asa 3 contiene dihidrouracilo.

Interviene tambin en la fijacin al
ribosoma del aminoacil tRNA.

Todos los transferentes tienen en el brazo

abierto los extremos 5 y 3. Todos
acaban con CCA en el 3, que es donde se
Una caracterstica de todos los ARNt es la presencia de nucletidos modificados. Hay una
gran variedad. Los ms comunes son bases metiladas, nucletidos con dihirouracilo, y
tambin la pseudouridina, representada por (fi). Aqu lo que vara frente al
 117

nucletido normal es que la base nitrogenada se une a la ribosa por el C 5 y no con el 1, lo

normal.

ARNr

El ARN ribosomal es el ms abundante. Constituye aproximadamente el 65% de los

ribosomas.
Los ribosomas intactos don diferentes en procariotas y eucariotas.

En procariotas, el tamao es de 70S y est

formado por dos subunidades, una mayor
(de 50S) y una menor (de 30S). La unidad
mayor o pesada contiene 2 tipos de
RNA, de 23S y de 5S. La menor o ligera,
solo posee un tipo de 16S.
En eucariotas el ibosoma es de 80S. La
subunidad mayor, de 60S, contiene tres
RNAs, de 28S, 5S, y 5,8S, mientras que
la pequea, de 40S, solo tiene un tipo, de
18S.

Secuencia y estructura de los ARNr:

Sus secuencias estn muy conservadas. Son muy parecidas en todas las especies en la
escala evolutiva. Tambin presentan estructuras secundarias determinadas por la formacin
de apareamientos de bases nitrogenadas intracatenarias.
Toma formas diversas segn la secuencia. Estas estructuras secundarias influyen en la
asociacin con las protenas.

ARNsn (small nuclear RNA)

Estos, se llaman as por su pequeo tamao (entre 4S y 8S) y porque aparecen en el ncleo.
Estn en eucariotas, procariotas y virus.
 118

Muchos de estos ARN existen en estado libre, y se asocian con protenas para formar
partculas de ribonucleoprotenas.

El ms abundante es el U-snRNA, donde la U proviene de que es rico en uracilo y se ha

encontrado en ncleos de clulas eucariotas. Se han descrito 6 tipos de estos U-snRNA.
Adems de ser ricos en U, tambin se caracterizan porque contienen pseudouridina, bases
metiladas, y porque contiene un elemento estructural en el extremo 5 llamado CAP,
presente tambin en RNA mensajeros de clulas eucariotas. Este casquete 5 consta de un
nucletido de G en el que la guanina est trimetilada, que se une por un enlace trifosfato 5-
5 a 1 2 molculas de azcar que estn metiladas en posicin 2.
La funcin que se ha propuesto para los U-snRNA es en el proceso de maduracin del
RNAm en eucariotas. Estos participan en la escisin (eliminacin) de los intrones, aquellas
regiones que no se traducen) y en el empalme de los exones (aquellas que s se traducen).

A algunos ARN se les ha encontrado funcin cataltica, lo que ha llegado a cuar el trmino
de ribozima, ARN con funcin encimtica.