Vous êtes sur la page 1sur 85

INSTITUTO POLITCNICO

NACIONAL
ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA
Departamento de Formacin Bsica
Disciplinaria
Academia de Bioqumica Mdica I

MANUAL DE LABORATORIO

DE

BIOQUMICA MDICA I

SEMESTRE: AGOSTO-DICIEMBRE

C I U D A D D E M X I C O
J u l i o d e 2 0 1 7
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

NOMBRE DEL ALUMNO(A):

No. BOLETA: SEMESTRE: 2

GRUPO: 2CM EQUIPO:

PROFESORES
LABORATORIO:
LABORATORIO:
LABORATORIO:

Vo. Bo.
No. PRCTICA FECHA
PROFESOR (A)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.

PROFESORES DE LA ACADEMIA

Alfredo Montiel Mrquez

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017

= 3 =
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Argentina Hernndez Ramos


Arturo Daz Martnez
Carlos Castaeda Gonzlez
Cristina Lpez Gloria
Eunice Dalet Farfn Garca
Feliciano Tamay Cach
Francisco Javier Castaeda Ibarra
Jessica Elena Mendieta Wejebe
Jos Guadalupe Trujillo Ferrara
Juan Guillermo Ordorica Vargas
Leticia Araceli Ramrez Durn
Luz Mara Chirino Castillo
Mara De La Luz Velzquez Monroy
Miguel ngel Ordorica Vargas
Mnica Ordorica Morales
Mnica Yosefit Hernndez Hinojosa
Reyna Elizabeth Barbosa Cabrera
Sandra Gissela Mrquez Ramrez

PERSONAL TCNICO DE LABORATORIO

Leticia Villegas Zaragoza

Julio Csar Aguilar Rentera

MISIN

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017

= 4 =
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

La Escuela Superior de Medicina del Instituto Politcnico Nacional es una institucin de educacin mdica,
pblica, laica y gratuita, con un legado histrico identificado con las necesidades de salud de la poblacin
ms desprotegida; cuenta con una planta de destacados profesores, instalaciones fsicas y campos clnicos,
que garantizan una slida formacin mdica. Forma mdicos generales de alta calidad, creativos y eficientes;
con compromiso social, humanitario, de equidad, tico, ecolgico y crtico, tanto en el sector pblico como
en el privado, contribuyendo a mejorar las condiciones de salud y de desarrollo social de la poblacin.
Realiza investigacin cientfica, genera y difunde el conocimiento y fomenta la educacin mdica continua y
el posgrado. Apoya al Sistema Nacional de Salud y participa en el desarrollo cientfico, tecnolgico y social
del pas.

VISIN

La Escuela Superior de Medicina del Instituto Politcnico Nacional, mantendr su carcter de institucin
pblica de educacin mdica con slidas bases en el conocimiento cientfico y tecnolgico, en constante
actualizacin e innovacin, en un marco de calidad, equidad y servicio. Incrementar desarrollo de la
investigacin cientfica, el posgrado y la educacin mdica continua, manteniendo una vinculacin con los
procesos formativos de los profesionales de la salud de alto nivel, para destacar dentro de las Escuelas y
Facultades de Medicina del pas por la formacin de mdicos generales de alta calidad que conforme al
panorama epidemiolgico sean competentes para atender los problemas de salud y la emergencia de nuevas
patologas, bsicamente en el primer nivel de atencin, contribuyendo as a mejorar la salud y el desarrollo
social de la poblacin en constante interaccin con todos los sectores de la sociedad. Continuar participando
en la rectora de la educacin mdica en el pas, en el desarrollo cientfico y reafirmando su compromiso con
la poblacin ms desprotegida, guiada siempre por un desarrollo basado en la calidad humana, la tica y la
excelencia acadmica.

CALENDARIO DE ACTIVIDADES

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017

= 5 =
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

CURSO DE BIOQUMICA MDICA I


PRIMER SEMESTRE 2017-2018 (18-1)
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
FECHA DE INICIO: Lunes, 7 de agosto de 2017
FECHA DE TERMINACIN: Martes, 19 de diciembre de 2017

DAS DE SUSPENSIN: Mircoles, 1 de noviembre de 2017


Jueves, 2 de noviembre de 2017
Lunes, 20 de noviembre de 2017
VACACIONES Del jueves 21 de diciembre de 2017 al viernes 5 de enero de 2018

EXMENES
Primer Examen Parcial: Lunes, 11 de septiembre de 2017
Temas de teora: 1. Composicin Qumica del Organismo Humano
2. Agua, Soluciones, cidos, Bases, pH y Soluciones Reguladoras
3. Estructura y Funcin de Protenas
Prcticas de Laboratorio: 1. Introduccin 14 al 18 de agosto de 2017
2. Soluciones 21 al 25 de agosto de 2017
3. Electrolitos y pH 28 de agosto al 1 de sept de 2017
4. Soluciones reguladoras 4 al 8 de septiembre de 2017
Segundo Examen Parcial: Lunes, 23 de octubre de 2017
Temas de teora: 4. Termodinmica, Catlisis y Enzimas
5. Estructura, Funcin y Metabolismo de Glcidos
Prcticas de Laboratorio: 5. Protenas 25 al 29 de septiembre de 2017
6. Cintica Qumica 2 al 6 de octubre de 2017
7. Cintica Enzimtica 9 al 13 de octubre de 2017
8. Glcidos 16 al 20 de octubre de 2017
Tercer Examen Parcial: Lunes, 11 de diciembre de 2017
Temas de teora: 6. Bioenergtica y Ciclo del cido Ctrico
7. Estructura Funcin y Metabolismo de Lpidos.
8. Estructura y Funcin de cidos Nucleicos y Gentica Molecular.
Prcticas de Laboratorio: 9. Oxidaciones Biolgicas 6 al 10 de noviembre de 2017
10. Lpidos 13 al 17 de noviembre de 2017
11. cidos Nucleicos 27 de nov al 1 de dic de 2017

Examen Extraordinario: Lunes, 18 de diciembre de 2017


Temas: Todo el curso
Examen a Ttulo de Suficiencia: Lunes, 15 de enero de 2018
Temas: Todo el curso

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017

= 6 =
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Reglamento Interno de la Materia regularidad a las clases de teora y prcticas de laboratorio


en los horarios que les sern notificados al inicio del
curso.
CAPITULO I. DE LA INSCRIPCIN Y ORGANIZACIN
DE LOS ALUMNOS Artculo 10. Los profesores controlarn la asistencia a
clases de teora y laboratorio, llamando lista de presentes al
Artculo 1. La Unidad de Aprendizaje de Bioqumica inicio de las sesiones, con un periodo de tolerancia de 15
Mdica I es impartida por los profesores de la Academia minutos. No hay retardos. En las sesiones de laboratorio,
de Bioqumica Mdica I del Departamento de Formacin los alumnos que lleguen despus del periodo de tolerancia
Bsica Disciplinaria. no podrn permanecer en la sesin.
Artculo 2. Para quedar inscritos y tener derecho a asistir Artculo 11. Los alumnos (damas y caballeros) asistirn de
al curso, los alumnos debern: manera obligatoria a las clases de teora, prcticas de
a) Aparecer en las listas oficiales del Sistema de laboratorio y exmenes con uniforme blanco que incluye
Administracin Escolar del IPN. bata, pantaln, zapato cerrado (no tenis) y sin ningn tipo
de accesorio o prenda, as como portando en la solapa
b) Llenar y entregar una forma de registro y control
izquierda del uniforme su credencial de alumno vigente,
interno que les proporcionarn los profesores de
como lo marca el inciso VII del artculo 107 del
grupo el primer da de clases.
Reglamento Interno del I.P.N. Quien no cumpla con este
c) Entregar una fotografa reciente, de tamao infantil. requisito no podr permanecer en la sesin, y se har
Artculo 3. Los incisos b y c mencionados en el artculo acreedor a la falta correspondiente.
anterior, deben cumplirse a ms tardar una semana Artculo 12. Durante las sesiones tanto de Teora como
despus de iniciado el curso. Laboratorio, los alumnos debern activar el modo
Artculo 4. Cada grupo deber elegir en la primera silencioso de sus telfonos celulares, para no interrumpir
semana de clases un representante, que ser su vocero el trabajo.
oficial, quien tratar los asuntos acadmicos relacionados Artculo 13. Las inasistencias a teora y laboratorio se
con el curso ante sus profesores o la Academia. podrn justificar dentro de los tres das hbiles siguientes,
CAPTULO II. DE LA ORGANIZACIN DEL CURSO con la documentacin oficial pertinente (es de particular
Artculo 5. El curso de Bioqumica Mdica I es Terico- inters la participacin a Congresos). Debido a la falta de
Prctico y se desarrolla mediante tres tipos de actividades: recursos, en caso de no asistir al laboratorio, el alumno
podr justificar la falta pero no reponer la prctica.
a) Clases de Teora. Se imparten en las aulas de la Escuela
Superior de Medicina, asignadas a cada grupo al inicio del Artculo 14. Las actividades de otras materias, realizadas
curso. en el horario correspondiente a Bioqumica Mdica I, no
se consideran justificantes de falta.
b) Prcticas de Laboratorio. Que se realizan en los
Laboratorios de enseanza de la Academia de CAPTULO IV. DEL TRABAJO EN EL
Bioqumica Mdica I. LABORATORIO
c) Actividades complementarias. Las que sean asignadas por Artculo 15. Por razones de disciplina y seguridad, ninguna
los profesores, y que complementen las actividades persona podr trabajar en el laboratorio sin bata larga de
acadmicas. laboratorio blanca, goggles y guantes de cirujano. El alumno
que no cumpla este requisito deber abandonar el recinto y se
Artculo 6. En las clases de Teora se desarrollan los
har acreedor a la falta respectiva.
temas del programa con la participacin activa de los
alumnos. Artculo 16. Queda estrictamente prohibido fumar e ingerir
alimentos o bebidas en el laboratorio. En la misma forma, los
Artculo 7. En las prcticas de Laboratorio los alumnos
alumnos debern abstenerse de recibir visitas, as como sentarse
realizan experimentos sobre temas que complementan la
en las mesas de trabajo, o realizar cualquier tipo de acciones
teora, y resuelven problemas aplicativos.
indisciplinadas.
Artculo 8. Las actividades complementarias, versarn
Artculo 17. Para trabajar en el laboratorio los alumnos
sobre tpicos de inters para la formacin de los alumnos.
formarn equipos, con base en las instrucciones que
CAPITULO III. DE LA ASISTENCIA reciban del profesor al inicio del curso.
Artculo 9. Como se indica en los incisos IV y VI del Artculo 18. Cada equipo de trabajo ser responsable del
artculo 107 del Reglamento Interno del I.P.N., es material de vidrio, utensilios, reactivos, aparatos, etc. que
obligacin de los alumnos asistir con puntualidad y utilice durante el desarrollo de la prctica. Antes de iniciar la

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017

= 7 =
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

prctica debern revisar cuidadosamente dicho material y Artculo 27. Durante los exmenes, los alumnos no
anotar en el vale cualquier anomala que observe, ya que de no podrn llevar consigo telfonos celulares.
hacerlo se harn responsables de los daos que presente el Artculo 28. Para tener derecho a presentar cada uno de
material y debern reponerlo en un plazo mximo de quince los exmenes departamentales ordinarios, los alumnos
das, con nota de compra. debern tener un mnimo del 80% de asistencia global (en
Artculo 19. Al terminar la prctica, el equipo deber teora y laboratorio) en el periodo examinado, siempre y
dejar la mesa de trabajo limpia y en orden, como la cuando no hayan acumulado ms del 20% de faltas en el
recibi. laboratorio (del total de prcticas del curso).
Artculo 20. Los alumnos no podrn abandonar el Artculo 29. Cuando por causa justificada (ver artculo 13
laboratorio hasta que la prctica termine, o cuando sean del presente Reglamento) un alumno no pueda asistir a
autorizados por el maestro. S un alumno abandona el presentar un examen ordinario, deber proceder segn el
laboratorio sin autorizacin, se har acreedor a la falta de artculo 46 del Reglamento General de Estudios.
ese da. Artculo 30. Cada evaluacin departamental ordinaria se
Artculo 21. El alumno deber entregar un reporte escrito integrar por el 50% de la calificacin del examen de
de la prctica, que formar parte de su evaluacin de teora, ms 30% de la calificacin de laboratorio, ms
laboratorio. 20% de la calificacin de actividades complementarias del
CAPITULO V. DE LA EVALUACIN periodo correspondiente.
Artculo 22. La evaluacin final de la Unidad de Artculo 31. La acreditacin de la Unidad de Aprendizaje
Aprendizaje, se har con base en tres Evaluaciones de Bioqumica Medica I se obtendr promediando las tres
Parciales Ordinarias, y en su caso los Exmenes evaluaciones parciales ordinarias. La calificacin mnima
Extraordinario y a Ttulo de Suficiencia. aprobatoria es de 6 (seis) referirse al Artculo 42 y 43 del
Reglamento General de Estudios.
Artculo 23. Las calificaciones quedarn registradas en el
acta de evaluacin correspondiente con un nmero entero Artculo 32. Cuando un alumno no apruebe o intente
de cero a diez. En calificaciones superiores a 6 con mejorar su calificacin ordinaria, deber presentar el
fracciones de cinco dcimas o ms, la calificacin se Examen Extraordinario, que incluye el total de los
aumentar al entero inmediato superior. En calificaciones contenidos de la Unidad de Aprendizaje. Referirse al
inferiores a 6, las fracciones decimales sern consideradas Artculo 45 del Reglamento General de Estudios.
nulas. Artculo 33. Para tener derecho a presentar el Examen
Artculo 24. La evaluacin parcial ordinaria de la Unidad Extraordinario de la Unidad de Aprendizaje, los alumnos
de Aprendizaje se har tomando en cuenta los resultados debern contar con un mnimo de 80% de asistencia a las
obtenidos en: clases de teora y tambin 80% de asistencia a las
prcticas de laboratorio, del total de clases del curso.
a) El examen parcial departamental de los temas
revisados en el aula. Artculo 34. La calificacin mnima aprobatoria del
Examen Extraordinario ser de 6 (seis). Cuando un
b) La calidad de su trabajo en el laboratorio y de sus
alumno presente este examen para mejorar la calificacin
informes de las prcticas.
ordinaria obtenida, su calificacin final ser la ms alta.
c) Las actividades acadmicas complementarias.
Artculo 35. Los alumnos que al trmino del curso
Artculo 25. Los exmenes departamentales ordinarios, tengan calificacin reprobatoria y como mnimo 50% de
extraordinario y a ttulo de suficiencia, se realizarn en el asistencia a las sesiones de teora y prcticas de
lugar, fecha y hora que se dar a conocer al inicio del laboratorio, tendrn derecho a presentar el Examen a
curso. Ttulo de Suficiencia.
Artculo 26. Todos los grupos debern iniciar los
exmenes departamentales a la hora programada. Los
CAPITULO VI. OTROS
sinodales de examen controlarn la asistencia, llamando
lista de presentes al inicio del examen, con un periodo de Artculo 36. Cualquier caso no contemplado en este
tolerancia de 15 minutos, los alumnos que lleguen Reglamento deber someterse por escrito, a la Academia
despus del periodo de tolerancia no podrn presentar de Bioqumica Mdica I, para su discusin y resolucin
examen, ni permanecer en el saln. inapelable.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017

= 8 =
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Normas de Seguridad en el Laboratorio


El manejo inapropiado de sustancias, materiales y equipo que se 3. Material de vidrio.
encuentran en el laboratorio, representa peligro tanto a la salud de o Debe examinar todo el material de vidrio antes de utilizarlo,
las personas, como a la integridad de las instalaciones y equipo de para detectar la existencia de grietas o roturas. En el caso de
trabajo. Es por ello que se deben obedecer las Reglas de que encuentre material defectuoso, reprtelo de inmediato al
seguridad que se enlistan a continuacin, clasificadas en los encargado del laboratorio para que se lo cambie.
siguientes grupos:
o No use el material de vidrio con orillas cortantes, con
1. Sustancias qumicas cuarteadoras, o en general en mal estado.
2. Material biolgico y animales de laboratorio o Debe transportar, mover o manipular slo la cantidad de
3. Material de vidrio material de vidrio que pueda manejar con seguridad.
4. Equipo elctrico e instalaciones de gas
o Use pinzas, franela o guantes de asbesto para transportar o
5. Orden y limpieza
mover recipientes de vidrio calientes.
1. Sustancias qumicas.
o Nunca deje material roto para ser lavado, reprtelo y trelo a la basura.
o Cada sustancia debe tener etiqueta de identificacin, si no es
o No deje vidrios rotos sobre la mesa o en cualquier otro lugar
as, no los utilice.
en donde pueda causar accidentes.
o Antes de utilizar una sustancia, verifique que se trata del
o Al calentar recipientes de vidrio, use llama suave al principio
reactivo correcto y que tiene la concentracin requerida. del calentamiento.
o Identifique la naturaleza de la sustancia y el tipo de peligro o Limpie inmediatamente los materiales que goteen o se
que implica su manejo; es veneno?, qu tan txico es?, es derramen, mediante uso de la franela u otros materiales para
inflamable?, es corrosivo? embeber el lquido y evitar que se disperse.
o Evite el contacto o exposicin innecesaria con sustancias o En caso de lquidos txicos derramados, protjase
qumicas, utilice el equipo de proteccin adecuado y adecuadamente y ventile el rea.
disponible: bata larga, lentes, guantes, campana extractora, etc. 4. Equipo elctrico e instalaciones de gas.
o No pipetee sustancias qumicas directamente, utilice la prepipeta. o No use equipo elctrico defectuoso.
o Evite inhalar productos qumicos y sus vapores. o Verifique que los enchufes y conexiones estn en buenas
o Trabaje y mantenga bajo la campana los reactivos corrosivos condiciones; en caso de que existan cables desnudos o en mal
o voltiles. estado, reprtelos inmediatamente.
o Los hidrocarburos ligeros y solventes deben manejarse lejos del o Maneje el equipo elctrico y sus conexiones con las manos
fuego u otras fuentes de calor. Emple bao mara para calentarlos. secas y cercirese que el piso se encuentra seco. Mantenga
o Para diluir los cidos, estos deben verterse lentamente en el seco el espacio alrededor del equipo elctrico.
agua, agitando cuidadosamente. o Antes de encender el mechero, revise que tanto ste como la
o No vierta agua directamente sobre el cido porque provocar manguera se encuentren en buen estado, verifique que est
adecuadamente conectado a la tubera de gas (tubos de color
salpicaduras.
amarillo) y retire todo material inflamable cercano.
o No deje sobre la mesa tapones de frascos de cidos u otras
o En caso de accidente, retrese inmediatamente y cierre la llave
sustancias corrosivas, porque se pueden contaminar o dejar
de paso que se encuentra bajo la tarja de cada mesa.
residuos corrosivos que podran causar quemaduras.
5. Orden y limpieza.
2. Material biolgico y animales de laboratorio.
o Una vez verificado el buen estado del material de vidrio,
o Para el manejo de estos materiales protjase adecuadamente
lvelo para asegurar su limpieza.
segn sea el caso. Usando guantes, cubre boca, etc.
o Mantenga siempre limpia y en orden su rea de trabajo.
o Para la manipulacin y el sacrificio de los animales de
o No intercambie el contenido de los frascos de reactivo. Use
experimentacin siga las indicaciones del Profesor.
slo los tapones de los recipientes correspondientes.
o Maneje cuidadosamente las muestras biolgicas (sangre, orina,
o Cuando requiera volver a llenar sus frascos reactivos, transfiera
saliva, etc.) para evitar contaminaciones de personas y materiales.
del frasco de almacenamiento, la cantidad necesaria a travs de
un vaso de precipitados, no devuelva el sobrante al envase

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017

= 9 =
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

o Todo el material biolgico, equipos y de desecho (cadveres, original, busque otro frasco reactivo y vierta el sobrante. Nunca
muestras biolgicas, algodn, gasas, guantes, jeringas, etc.) emplee pipetas para efectuar este procedimiento.
debern ser incinerados adecuadamente, para lo cual, deber
ACADEMIA DE BIOQUMICA MDICA I
usted seguir las instrucciones del Profesor para dejarlos
ENERO DE 2017
convenientemente preparados.

SIMBOLOS DE SEGURIDAD

FLAMABLE VENENO

EXPLOSIVO RADIOACTIVO

CORROSIVO GAS COMPRIMIDO

OXIDANTE
INFLAMABLE

NIVEL DE RIESGO BAJO


EXPLOSIVO

CORROSIVO IRRITANTE

DAO AMBIENTAL
VENENO

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017

= 10 =
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

NDICE

No. Pginas
1. INTRODUCCIN... 1
2. SOLUCIONES. 8
3. ELECTRLITOS y pH...... 13
4. SOLUCIONES REGULADORAS......... 16
5. PROTENAS 20
6. CINTICA QUMICA Y CATLISIS. 29
7. CINTICA ENZIMTICA 38
8. GLCIDOS.. 46
9. OXIDACIONES BIOLGICAS 54
10. LPIDOS... 61
11. CIDOS NUCLEICOS... 66

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017

= 11 =
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

PRCTICA No. 1
INTRODUCCIN AL LABORATORIO
Se revisarn conceptos y procedimientos de importancia para el trabajo en el laboratorio. El alumno deber
previamente haber ledo y sujetarse al Reglamento de la Academia de Bioqumica I.

Las actividades de laboratorio constituyen una parte importante del aprendizaje de la materia de
Bioqumica Mdica I, complementando las actividades de la materia impartidas en el aula.

Es obligacin del alumno la asistencia puntual, as como participar de forma activa, obtener resultados de
los experimentos y entregar el reporte del mismo.

Es obligacin del alumno registrar los resultados de cada experimento que obtiene durante el desarrollo
de cada prctica y de la seccin de Evidencias de aprendizaje, siendo este ltimo apoyo
complementario de los resultados.

Ser de suma importancia cumplir de forma obligatoria con las medidas de seguridad, comportamiento,
uniforme y accesorios como: guantes, anteojos de proteccin o caretas transparentes, cubre bocas y bata larga.

EJERCICIO 1. DISTRIBUCIN DE LOS ALUMNOS.

a. Antes de entrar al laboratorio, todos los alumnos debern portar, debidamente abotonada la bata de
laboratorio y tener listo su material de trabajo.

b. Cuando el profesor lo indique, los alumnos colocarn su mochila en el lugar que les sea asignado.

c. Siguiendo las instrucciones de su profesor, localizar la mesa de trabajo de su equipo, dirigirse a ella e
inmediatamente antes de realizar cualquier actividad, debern colocarse los gogles y guantes de forma
obligatoria. No podrn permanecer durante la sesin del laboratorio si no cumplen con este requisito.

d. En la mesa de trabajo, localizar la toma de corriente, desages, tuberas y sitios donde puede trabajar.

e. Observar y ubicar la mesa de trabajo con respecto a la campana de extraccin, regadera, extintores, zonas
de seguridad y rutas de evacuacin.

f. Identificar el uso de cada una de las tuberas que encuentre en la mesa de trabajo y marcarlas con masking
tape. Esperar a que su profesor confirme que el etiquetado es correcto.

g. Localizar la posicin de las vlvulas de apertura de cada tubera.


MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
1
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Evidencias de aprendizaje

1. Ilustrar la mesa de trabajo sealando la posicin de las tomas de corriente, desages y vlvulas de flujo.

2. Ilustrar la distribucin del laboratorio e indique las zonas de seguridad, posicin del equipo de seguridad y
la ruta de evacuacin desde la mesa.

3. En el esquema anterior, marcar la posicin de las vlvulas de apertura.

EJERCICIO 2. VALE DE RESGUARDO DEL MATERIAL DE LABORATORIO.

a) Localizar en la charola el vale de resguardo del material de laboratorio (documento que enlista el
material para realizar cada prctica) seguidamente revisar cuidadosamente cada una de las piezas,
indicando en el vale cualquier defecto en el material. Bajo ninguna circunstancia se deber desplazar la
charola de la mesa de trabajo a ningn otro sitio.

b) Etiquetar con masking tape cada pieza que lo identifique. Reunir en la charola el material que desconozca y
preguntar a su Profesor. Para esta Prctica y las posteriores, favor avisar al Profesor o Profesores para que
le revisen el ejercicio o experimento, en caso de no avisar y desechar el ejercicio o experimento, no se
podr incluir en el Reporte de Laboratorio.

c) Al terminar de revisar todo el material, completar los datos solicitados en el vale, (fecha, grupo, equipo,
responsable, etc.) y entregarlo al personal tcnico de laboratorio. En las siguientes prcticas, el vale se
entregar al inicio de cada sesin con tolerancia de 10 minutos.

d) Al terminar cada prctica el equipo tiene la obligacin de ordenar el material limpio dentro de la charola,
limpiar la mesa y solicitar al personal tcnico que tendr que revisar y levantar el material de su mesa de
trabajo, quienes les tendrn que devolver el vale que se entreg al inicio de la prctica.

Evidencias de aprendizaje

1. Cul es el uso de cada una de las siguientes piezas de material de laboratorio?


Pipeta Mortero
Bureta Tubo de ensayo
Probeta Vlvula de Bunsen
Matraz Erlenmeyer Matraz aforado
Pinza para tubo de ensayo Vaso de precipitados
Reforos Cristalizador
Tubos para centrfuga clnica Tubos Falcn
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
2
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

EJERCICIO 3. MANEJO DEL MECHERO.

a) No encender el mechero hasta que su profesor se lo indique.

b) Conectar el tubo de ltex del mechero a la llave de gas, la que debe estar completamente cerrada, con la manija
en posicin transversal respecto de la salida del gas. No olvidar que la tubera de gas es de color amarillo.

c) Verificar que el tornillo de control de flujo de gas est abierto ms o menos a la mitad de su capacidad
total. El flujo de gas se puede disminuir girando el tornillo en el sentido de las manecillas del reloj y
aumentar en sentido contrario.

d) Encender el mechero aproximando la flama de un cerillo o encendedor al borde de la parte superior del
mechero e inmediatamente abrir la llave de gas, lo cual debe hacerse lentamente, avanzndola hasta que
est aproximadamente a 45 grados con el tubo del gas. Tener cuidado de no acercar su rostro, pelo u
objetos inflamables al mechero al momento de encender, ni cuando est encendido. Al usar el mechero no
deber portar guantes clnicos hechos de ltex o polietileno, tener cuidado, ya que son inflamables.

e) Ajustar la cantidad de aire que entra, usando el arillo de control de flujo de aire, hasta que la flama tenga
una zona central de color azul claro rodeada de otra de color azul oscuro o violeta. La parte ms caliente
se encuentra en la punta de la zona interna. Cuando la combustin es incompleta, por falta de oxgeno, la
flama presenta color amarillo.

Evidencias de aprendizaje

1) En el esquema siguiente, indicar el tipo de mechero, as como las partes que se indican.

1
a

c 3
b

2) Ilustrar la forma correcta de encender el mechero.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
3
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

EJERCICIO 4. COMO CALENTAR UN LQUIDO EN UN TUBO DE ENSAYO.

a) Agregar a un tubo de ensayo agua de la llave hasta un 20% de su capacidad y sujetarlo con pinzas para
tubo de ensayo.

b) No olvidar quitarse los guantes de ltex cuando se emplee el mechero.

c) Colocar el tubo sobre la flama del mechero, inclinar aproximadamente a 70 oC. Nunca calentar un tubo de
ensayo en el fondo o en posicin vertical debido a que se puede proyectar su contenido.

d) Mover el tubo cuidadosamente casi sobre la flama de arriba hacia abajo, para que el lquido se caliente de
manera homognea.

e) Durante el calentamiento dirigir la boca del tubo hacia un lugar donde no se encuentre ninguna persona o
material que se pueda daar.

f) No observar de ninguna manera directamente la boca de un tubo de ensayo que se est calentando, aunque
est fuera de la flama del mechero.

g) Continuar calentando hasta lograr que el agua hierva, sin proyectarse.

h) PROHIBIDO calentar tubos de ensayo con solventes orgnicos directamente a la flama del mechero.
Hacerlo siempre en bao Mara.

i) Al terminar cualquier experimento apagar el mechero para evitar accidentes.

Evidencias de aprendizaje

1. Describir e ilustrar la forma correcta de manejar la pinza para tubo ensayo

2. Ilustrar la forma correcta de calentar un lquido en un tubo de ensayo.

EJERCICIO 5. INSTALACION DE UN BAO MARA.

a) Identificar y reunir el siguiente material: soporte universal, anillo de hierro, rejilla de asbesto, mechero de
Fischer o Bunsen y un vaso de precipitados de 600 mL.

b) Ensamblar el anillo en el soporte a la altura adecuada para que la parte ms caliente de la flama del
mechero quede a nivel del anillo. Colocar la rejilla de asbesto sobre el anillo.

c) Agregar agua de la llave al vaso de precipitado nicamente al 50% de su capacidad y colocarlo sobre la
rejilla. Agregar pequeos trozos de papel en el vaso con agua a modo de cuerpos de ebullicin.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
4
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

d) Encender el mechero y calentar a la temperatura que le indique su profesor.

Evidencias de aprendizaje

1) Ilustrar el montaje del aparato.

2) Por qu no se debe llenar el vaso completamente?

3) Por qu se emplean los cuerpos de ebullicin?

EJERCICIO 6a. MANEJO DE REACTIVOS LQUIDOS: SEGURIDAD.

a) Usar siempre la pre-pipeta, nunca pipetear con la boca para manejar con seguridad los reactivos lquidos.

b) Al abrir un frasco de reactivo, colocar el tapn sobre la mesa en posicin invertida, para evitar
contaminacin. Vaciar la cantidad necesaria en un vaso de precipitados y de ah usar el reactivo.

c) Para extraer el lquido utilizar una pipeta o un gotero limpio. Nunca vaciar reactivos directamente del
frasco para evitar escurrimiento.

d) Usar una pipeta de 10 mL, para transferir 5 mL de agua de un vaso de precipitados a un tubo de ensayo en
su mesa y en la campana de extraccin. Repetir hasta que pueda realizarlo con seguridad.

Evidencias de aprendizaje

1) Describir la forma de uso de la pre-pipeta.

2) Utilizar las tcnicas que se aprendi para medir los volmenes de los utensilios que le solicite su profesor.

EJERCICIO 6b. MANEJO DE REACTIVOS LQUIDOS: PREPARACION DE SERIES.

a) Preparar una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 4.

b) Agregar en el tubo 1 la cantidad de 2.5 mL de agua. En el tubo 2 la cantidad de 1.25 mL de agua. En tanto
que en el tubo tres deposite 8 mL de agua y en el tubo 4, deposite 0.6 mL de agua.

c) Utilizar para cada tubo de ensayo una pipeta de capacidad adecuada. Repetir este ejercicio hasta que pueda
realizarlo con seguridad y precisin.

Evidencias de aprendizaje

1. Elaborar un esquema que describa este experimento.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
5
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

2. Describir que pipetas utiliz para cada uno de los volmenes indicados.

3. Cuntos tipos de pipetas existen?

EJERCICIO 6c. MANEJO DE REACTIVOS LQUIDOS: TITULACIN.

a) Reunir el material siguiente: Soporte universal, pinza para bureta (Lincoln), bureta, matraz Erlenmeyer.

b) Instalar la pinza para bureta sobre el soporte a una altura conveniente para colocar adecuadamente la bureta.

c) Armar la bureta colocando la llave del lado derecho de la escala, la cual debe quedar correctamente
orientada (escala de 0 arriba y escala de 25 abajo).

d) Colocar la bureta con las pinzas teniendo cuidado que este bien sujeta, con la escala hacia el observador y
a la altura adecuada por arriba del matraz Erlenmeyer.

e) Emplear siempre un vaso de precipitados de 100 mL para llenar la bureta, teniendo cuidado que la llave se
encuentre cerrada. Con la finalidad de evitar escurimientos, colocar un vaso de precipitados debajo de la
bureta.

f) Para purgar la bureta abrir completamente la llave para que el lquido salga rpidamente y pueda
arrastrar las burbujas de aire. Posteriormente, aforar al volumen total y colocar el matraz Erlenmeyer.

g) Abrir la llave lentamente y dejar salir el lquido (agua) de la bureta en cantidades fijas de: 1 mL, 5 mL,
6 mL, 10 mL hasta 25 mL, agitando constantemente el matraz Erlenmeyer. Aprender a leer con precisin
la escala de la bureta. Manejar con soltura y seguridad la llave de la bureta y el matraz.

Evidencias de aprendizaje

1) Ilustrar el dispositivo de titulacin.

2) Identificar el tipo de aforo de la bureta utilizada.

3) Describir la forma correcta de leer el volumen en la bureta.

EJERCICIO 7. MANEJO DE REACTIVOS SLIDOS.

a) Preparar un sobre de papel encerado, el cual ser proporcionado por su Profesor de Laboratorio. Escribir
en el sobre el nombre y cantidad de reactivo que se le asign, nmero de equipo y grupo.

b) Encender la balanza y esperar a que se estabilice la lectura. Colocar una charola de papel encerado en el
plato de la balanza. Cuando se estabilice, presione el botn de tarar, para llevarlo a cero.

c) Abrir el recipiente del reactivo y colocar la tapa sobre la mesa, boca arriba, para evitar la contaminacin.
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
6
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

d) Con una esptula retirar el reactivo del recipiente y pesar la cantidad de NaCl (cloruro de sodio)
depositndolo sobre la charola. Si se rebasa la cantidad deseada, regresar el exceso de reactivo al
respectivo recipiente usando la esptula. Nunca regresar al recipiente original un reactivo que caiga fuera
del sobre o por encima de la mesa.

e) Al terminar de pesar la cantidad deseada, verter el reactivo pesado al sobre y cerrarlo con cinta masking
tape y conservar para utilizar en la siguiente prctica.

f) Cerrar inmediatamente el frasco de reactivo para evitar que se hidrate o contamine. Asegurarse que la
mesa y la balanza queden limpias.

Evidencias de aprendizaje

1) Ilustrar la balanza, sealando la posicin del botn de encendido-apagado y del botn de tara.

2) Pesar las muestras que le solicit su profesor.

EJERCICIO 8. TARAR TUBOS PARA CENTRIFUGAR.

a) Localizar la balanza de dos platillos y la centrfuga refrigerada.

b) Aadir a dos tubos Falcon de capacidad de 15 mL la cantidad de 5 mL de agua de la llave como marca la
escala del propio tubo.

c) Colocar en dos frascos gerber cada tubo y mantenerlos a la mano cuando se requiera en la balanza.

d) Ajustar las pesas de medicin en la posicin de cero en una balanza de dos platillos. Asegurarse de que la
aguja o fiel de la balanza est en posicin cero. Si no lo est, girar cuidadosamente las pesas de ajuste en
el sentido que sea necesario hasta lograr el equilibrio.

e) Retirar los tubos de los frascos gerber, colocar cada frasco en cada platillo, cuidando que el ms pesado
quede del lado izquierdo.

f) Deslizar las pesas de medicin de la balanza hasta lograr que el fiel vuelva a la posicin de equilibrio,
posteriormente colocar los tubos nuevamente en cada frasco y observar que se encuentren balanceados.

g) De no estar en equilibrio, use una pipeta y aadir agua de la llave al tubo ms ligero hasta lograr que el
fiel de la balanza regrese al equilibrio. Al equilibrar los tubos ya puede centrifugar.

Evidencias de aprendizaje

1) Ilustrar la balanza de platillos sealando la posicin de las pesas de ajuste y las de medicin.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
7
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

2) Explicar por escrito el resultado de la centrifugacin.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
8
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

PRCTICA No. 2
SOLUCIONES
Una solucin es un sistema homogneo, formado por dos o ms sustancias qumicas. Est formada
por un solvente en el cual se dispersa uno ms solutos. Cuando ambos son lquidos miscibles, se
acostumbra nombrar solvente al que se encuentra en mayor cantidad. En las soluciones acuosas siempre se
considera el agua como solvente.
La relacin que existe entre las cantidades de soluto y solvente en una solucin se llama
concentracin.
Existen varias formas de expresar la concentracin de una solucin. Las de uso ms frecuente son:
MOLARIDAD (M). Nmero de moles de soluto en un litro de solucin. Un mol se define como el
peso molecular en gramos de una sustancia, o sea la masa de una sustancia que contiene el mismo
nmero de tomos o molculas que hay en 12 g de 12C. (6.022 x 1023 o Nmero de Avogadro).
MOLALIDAD (m). Nmero de moles de soluto en 1000 g de solvente.
NORMALIDAD (N). Nmero de equivalentes qumicos de soluto en un litro de solucin. Si
dividimos los gramos de un mol entre la valencia del compuesto se obtiene el peso equivalente
qumico.
OSMOLARIDAD (OsM): Nmero de osmoles en un litro de solucin. Un osmol es la cantidad de
soluto en gramos que proporciona el nmero de Avogadro de partculas en solucin.
PORCENTUAL (%). Expresa el porcentaje de soluto en una solucin. Existen diferentes tipos:
Porciento en peso (% p/p). Nmero de gramos de soluto en 100 g de solucin. Esta es la forma
como se expresa la pureza de los reactivos qumicos.
Porciento en volumen (% v/v). Nmero de mililitros de soluto en 100 mL de solucin.
Porciento en peso-volumen (% p/v). Nmero de gramos de soluto en 100 mL de solucin. Si no se
indica expresamente la relacin de porcentaje, esta es la concentracin porcentual que se debe
usar.
FRACCIN MOLAR (xi). Nmero de moles de una sustancia en una solucin entre la suma de
los moles de todos los componentes de la misma.

DILISIS
Ejemplos de membranas dialticas son el celofn y el colodin. La base del tratamiento de pacientes
renales descompensados es la dilisis, la cual es til tambin para eliminar sustancias nitrogenadas,
medicamentos en exceso o exceso de acidez en sangre. Mdicamente se refieren diversos tipos de dilisis
tales como: hemodilisis y la dilisis peritoneal.

SMOSIS Y PRESIN OSMTICA


Si dos soluciones de diferente concentracin estn separadas por una membrana semipermeable, el
solvente de la solucin menos concentrada difunde a la de mayor concentracin. Esto se explica
termodinmicamente porque la solucin diluida tiene una tendencia de escape o presin de vapor muy
grande. Esta tendencia de escape o presin de vapor es muy baja cuando la solucin est concentrada. Este
fenmeno es conocido como smosis y ejerce una presin osmtica, propiedad coligativa de gran
importancia fisiolgica ya que interviene en la regulacin del volumen de sangre circulante, as como en la
formacin o eliminacin de edemas tisulares, y es la razn por la cual el paciente diabtico elimina
frecuentemente grandes cantidades de orina (poliuria). Esta ltima est ocasionada por la alta concentracin
de glucosa en sangre y forma parte de la triada sintomtica clsica del diabtico: polifagia, polidipsia y
poliuria.
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
9
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

La medicin de la presin osmtica se lleva a cabo mediante el dispositivo llamado OSMMETRO.


Este requiere de una membrana semipermeable y aunque las que ms se acercan a la perfeccin son las de
ferrocianuro de cobre y las de pergamino, por ser ms fcil de conseguir, se utilizar una membrana dialtica
de colodin (celulosa) que proporciona una medida aproximada de la presin osmtica.
La columna de sacarosa ejercer finalmente una presin que se opone al paso del agua (Presin
Hidrosttica). Calculando sta, se puede conocer la presin osmtica ya que ambas son iguales.
Esto se hace mediante la frmula: = hg donde,
= presin osmtica
h = altura a la que asciende la solucin de sacarosa (en metros)
= densidad de la solucin de sacarosa (1.088 g/mL), (convertirla a kg/m3)
g = aceleracin debida a la gravedad (9.81 m/s2)
Efectuando esta operacin encontramos la presin osmtica en Pascales. Para obtener atmsferas
usamos la siguiente equivalencia: una atmosfera igual a 1.013 x 105 Pascales

EXPERIMENTO 1. PREPARACIN DE SOLUCIONES PORCENTUALES.


Utilizando la cantidad de NaCl (Cloruro de Sodio) que pes en la prctica anterior prepar una
solucin de NaCl al 5% considerando que la pureza del reactivo es de 100%. Conserve esta solucin ya que
se utiliza en el experimento de dilisis.

Evidencia de aprendizaje:
1) Describa detalladamente los clculos que hizo para conocer la cantidad de agua destilada que es
necesario aadir al NaCl del sobre para que la solucin sea al 5%.
2) Al considerar que la solucin de NaCl es al 5%, calcule las concentraciones siguientes y detalle los
clculos correspondientes. Molaridad, Normalidad, mEq/mL, mg/mL, moles%, Osmolaridad.

EXPERIMENTO 2. DILISIS
a) Humedecer por inmersin en agua destilada durante 10 minutos el tubo de colodin o celofn de
aproximadamente 6 cm de largo por 2.5 cm de dimetro.
b) Preparar dos tubos de ensayo limpios y etiquetarlos. Aadir el tubo uno 2 mL de NaCl al 5% y 5 gotas
de AgNO3 (Nitrato de Plata). Al tubo nmero dos agregar 2 mL de solucin de almidn al 1% y 2
gotas de solucin de lugol. Agitar y observar la reaccin que ocurre en cada tubo. Etiquetar como
testigo de cloruros y testigo de almidn respectivamente.
c) Pasado los 10 minutos de inmersin del colodin, cerrar un extremo de dicho tubo con un hilo de
algodn para obtener un saco. Desechar el agua destilada utilizada, enjuagar el vaso y llenar con agua
destilada nuevamente hasta un tercio de su volumen.
d) Llenar el saco con una mezcla de 1 mL de solucin de NaCl al 5% y 10 mL de solucin de almidn al
1%.
e) Cerrar cuidadosamente el otro extremo del saco, enjuagar con agua destilada y sumergir en el vaso de
precipitados con agua destilada, cuidando de no tocar las paredes.
f) Determinar la presencia de almidn y de cloruros en el lquido que rodea al saco del vaso de
precipitados, a tiempo 0 (inmediatamente despus de sumergir el saco), 15, 30, 45 y 60 minutos.

Evidencias de aprendizaje:
1) Describir detalladamente los clculos que hizo para conocer la cantidad de agua destilada que es necesario
aadir al NaCl del sobre para que la solucin sea al 5%.
2) Calcular las concentraciones siguientes y detalle los clculos correspondientes del NaCl al 5%: Molaridad,
Normalidad, mEq/mL, mg/mL, moles%, Osmolaridad.
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
10
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

3) Ilustrar el montaje del experimento.


4) Explicar los resultados de la dilisis.

EXPERIMENTO 3. MEDIDA DE LA PRESIN OSMTICA POR EL MTODO DIRECTO.

El osmmetro consiste en un recipiente que contiene una solucin de sacarosa 1 M teida con rojo
neutro conectado a un capilar de polietileno por el cual asciende el nivel del lquido (ver esquema de la
tabla). El recipiente es el cuerpo de una jeringa hipodrmica de 5 mL que presenta dos bandas de hule; la del
extremo inferior permite la fijacin de una membrana de celofn humedecido previamente durante 5 minutos
en agua destilada. La banda superior sirve para sellar el orificio de llenado de la cmara. Por la parte
correspondiente al pivote, se le agrega el trocar metlico de un catter el cual se introduce en el extremo de
un capilar de polietileno. El extremo inferior de la jeringa se sumerge en un vaso de precipitados con agua
destilada. El dispositivo lo instala el personal tcnico del laboratorio. Nota: cualquier error en el montaje del
osmmetro se manifestar por salida de solucin coloreada del dispositivo.
a) Cuando el Profesor le indique, en el osmmetro marcar el nivel de la solucin de sacarosa contenido en el
tubo capilar, el cual ser el tiempo cero.
b) Medir cada 15 minutos el nivel ascendido hasta los 90 minutos.
c) Registrar sus resultados en la tabla siguiente:

Tiempo Altura
min. mm Atm

15

30

45

60

75

90

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
11
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Evidencias de aprendizaje:
1. Graficar el tiempo en el eje de las abscisas (eje x) y la altura en milmetros en el eje de las ordenadas (eje
y).
2. Calcular la presin osmtica en atmosferas y complete la tabla.
3. Cundo deber detenerse el proceso osmtico?
4. Depende slo de la altura la presin osmtica? Explique.
5. Influye el radio del capilar en la presin osmtica? Explique.
6. La sacarosa y el colorante dializan? Explique.
7. Identificar en el esquema de la tabla de resultados todas las partes del osmmetro.

EXPERIMENTO 4. PREPARACION DE SOLUCIONES.

Prepare 50 mL de solucin 0.5 M de CH 3COOH (cido Actico) tomando como base los siguientes
datos: El CH3COOH tiene un peso molecular de 60 g/mol, la pureza del reactivo es de 99.7% y la densidad a
20C es de 1.06 g/mL. Una vez preparada consrvela para utilizarla en el experimento siguiente.

Evidencia de aprendizaje:
1) Describa detalladamente los clculos que hizo para conocer el volumen de CH3COOH
concentrado que utiliz para preparar los 50 mL de dicha solucin. R = _________ mL.
2) Considerando que la solucin es 0.5M calcule las concentraciones siguientes detallando los
clculos:

% (p/v) =
Normalidad =
mmoles/L =
gramos/L =
mEq % =
Osmolaridad =

EXPERIMENTO 5. DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN POR TITULACIN.

En este experimento se utilizar la solucin de CH 3COOH (solucin problema) que se prepar en el


experimento 4.
En un matraz Erlenmeyer de 250 mL coloque 10 mL de la solucin de CH 3COOH problema,
midindolos con la mayor exactitud posible.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
12
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Aada 2 gotas de fenolftalena y titule utilizando solucin de NaOH (Hidrxido de Sodio) 0.2N.
Recuerde que el punto de titulacin se observar cuando persista por ms de un minuto un ligero
color rosa.

Evidencia de aprendizaje:
1) Calcule el gasto terico de NaOH 0.2N
2) Cuntos mL de NaOH 0.2N gast para neutralizar los 10 mL de la solucin de cido actico?
R = _________ mL
3) De acuerdo con los resultados que obtuvo y considerando que la solucin de NaOH es
exactamente 0.2N. Cul es la verdadera normalidad del cido actico problema?
4) Escriba el concepto de titulacin cido-base.

EXPERIMENTO 6. DIFUSIN SIMPLE EN LQUIDOS.

Llene casi completamente una probeta de 100 mL con agua de la llave y luego espolvoree, con un
aplicador de madera, unos granitos de azul de metileno sobre la superficie del agua y observe que ocurre.
Anote sus observaciones.
A continuacin caliente con sus manos la probeta en la parte media y nuevamente observe que ocurre
al agregar calor. Anote sus observaciones. Una vez homogeneizado el colorante, la difusin se ha
efectuado.

Evidencia de aprendizaje:
1) Ilustre el experimento.
2) Es uniforme el descenso del colorante por la columna de agua?
3) Qu sucede al calentar la parte media de la probeta?
4) Qu es disolucin, conveccin y difusin?

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
13
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

PRCTICA No. 3
ELECTRLITOS y pH
Las sustancias que permiten el paso de la corriente se conocen como electrlitos y a los que no
manifiestan esta propiedad como no electrlitos. A esta capacidad de dar paso a la electricidad se le conoce
como conductancia, propiedad que se debe a la movilidad de los iones.
Los electrlitos de clasifican en fuertes y dbiles de acuerdo al grado de disociacin y facilidad con
que conducen la corriente elctrica.
Los electrlitos fuertes se disocian completamente como las sales minerales, los hidrxidos de
metales alcalinos, y los cidos fuertes. En los lquidos del organismo encontramos ejemplos de
electrolitos fuertes: NaCl, KCl y CaCl2, entre otros.
Son electrlitos dbiles la mayor parte de los compuestos orgnicos como los cidos lctico, pirvico,
urea y otros compuestos nitrogenados.
Disueltos en el agua corporal hay ejemplos de compuestos no electrlitos como glucosa y glicerol.
CONDUCTIVIDAD

La conductividad de las soluciones electrolticas depende exclusivamente de las molculas disociadas,


y por lo tanto depende del grado de disociacin y de la concentracin de los electrlitos presentes. Entre
mayor sea la concentracin, mayor ser la conductividad, hasta un lmite determinado en el cual se hace
constante y luego disminuye, explicndose esto porque cuando la concentracin de cationes y aniones es
grande, interfieren entre s y en tal caso los cationes tienen una menor libertad para desplazarse debido a la
interaccin con los aniones cercanos en la solucin y viceversa.
Esta explicacin se puede aprovechar para describir la fuerza inica de una solucin, ya que al no
desplazarse libremente las molculas en la solucin, la concentracin activa o actividad de las soluciones
es menor que la concentracin real, por lo tanto:
I = () Cz2
La fuerza inica (I) es la semisuma de los productos de la concentracin (C) de los iones presentes
por sus respectivas valencias (z) al cuadrado.
Se sabe que las fuerzas de atraccin entre iones de carga con signos contrarios disminuyen
rpidamente al crecer las distancias. En las soluciones concentradas, en las que los iones se encuentran ms
cercanos, se hacen mayores y por lo tanto la actividad se hace menor, en las soluciones muy diluidas la
actividad y la concentracin efectiva son equivalentes entre s.

EXPERIMENTO 1. ELECTRLISIS DEL AGUA.

Coloque un cristalizador sobre un fondo blanco y agregue 50 mL de solucin de NaCl (Cloruro de


Sodio) al 10%.
Introduzca en la solucin electrodos de carbn conectados a una fuente de energa como el puente de
Wheatstone o una pila de 6 9 V.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
14
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Observe la formacin de gas en los electrodos, agregue entre ambos 5 gotas de azul de bromofenol
como indicador.
Observe los cambios de coloracin en la solucin cercana a los electrodos.

Evidencias de aprendizaje:
a) Anote las reacciones que se llevan a cabo en cada uno de los electrodos, incluida la del indicador.
b) Ilustre el proceso de la electrlisis del agua.

EXPERIMENTO 2. CONDUCCIN DE CORRIENTE EN ELECTRLITOS FUERTES Y


DBILES.

Coloque la solucin de HCl (cido Clorhdrico) 0.5M en un vaso de precipitados de 100 mL en


cantidad suficiente para que tenga contacto con los electrodos en una tercera parte de su longitud.
Coloque en uno de los extremo de cada electrodo un reforo a una fuente de energa y observe el paso
de la corriente elctrica manifestado por la intensidad de la luz emitida por el foco, como se indique
en el siguiente esquema:

Lmpara
Fuente

Observe tambin la intensidad luminosa con relacin a la distancia entre los electrodos, sin ponerlos
en contacto.
Repita el experimento usando CH3COOH (cido Actico) 0.5M.

Evidencias de aprendizaje:
1) Anote sus resultados valorando por medio de cruces la intensidad luminosa y la variacin
observada.

Solucin Intensidad luminosa Variacin con la distancia


HCl 0.5M
CH3COOH 0.5M

2) Ilustre y explique sus resultados.

EXPERIMENTO 3. PREPARACIN DE SOLUCIONES DE pH CONOCIDO.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
15
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Con base en los clculos previamente hechos prepare 100 mL del par de soluciones que le indique su
profesor, consrvelas para el siguiente experimento.
De HCl al 37% de pureza y densidad de 1.18 g/mL. De pH = 1.4, 1.7 y 2.0
De CH3COOH al 99.7% de pureza, densidad de 1.06 g/mL y pKa = 4.74. De pH = 3.07, 3.22 y 3.37
Prepare 50 mL de una dilucin 1:10 de cada una de las soluciones asignadas.
Evidencia de aprendizaje:
1) Detalle los clculos de todas las soluciones indicadas en el experimento.
2) Calcule la concentracin y el pH de las diluciones preparadas.
3) Explique porqu se le asignaron ese par de soluciones para preparar.

EXPERIMENTO 4. ACIDEZ VERDADERA Y ACIDEZ DE TITULACIN.

Determine con papel indicador el pH de cada una de las soluciones que prepar en el experimento
anterior.
A continuacin determine el pH potenciomtrico de cada una de ellas.
En un matraz Erlenmeyer tome una alcuota de10 mL de cada una de las soluciones preparadas y
titule con NaOH 0.1N y aada 2 gotas de fenolftalena como indicador.

Evidencia de aprendizaje:
1) Con los datos obtenidos llene la tabla
TITULACIN
N terica pH Gasto de NaOH
Solucin Concentracin
0.1N mL
Terico Colorimtrico Potenciomtrico Terico Experimental N real

HCl

HCl 1:10

CH3COOH

CH3COOH 1:10

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
16
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

PRCTICA No. 4
SOLUCIONES REGULADORAS
A las soluciones reguladoras se les pueden aadir cantidades relativamente grandes de cidos o lcalis
sin alterar de manera significativa su pH. Esta accin amortiguadora se debe a la presencia en la solucin de
un sistema formado por un cido o una base dbil y su sal correspondiente.
Si se toma como ejemplo una solucin que contenga un cido dbil, al que representaremos por HA y
su sal, representada por BA los hidrogeniones existentes en ella procedern nicamente de las molculas
cidas, que se disocian como sigue:

El equilibrio de la reaccin est dado por la siguiente ecuacin:

Donde Ka es la constante de disociacin del cido. De esta ecuacin se deduce que la concentracin
de hidrogeniones es:

La relacin entre estas dos constantes es, sin embargo, tan sensiblemente constante en condiciones
ordinarias que podemos afirmar que la concentracin de A- es igual a la concentracin de la SAL.
Sustituyendo una expresin por otra en la ecuacin anterior tenemos:

Si se toman logaritmos negativos en ambos trminos de la ecuacin, (manipulacin matemtica para


manejar nmeros muy pequeos o muy grandes), queda as:

Ahora bien, si -log [H+] es igual a pH, por analoga podemos decir que log de K a es igual a pKa por
lo que:

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
17
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Por otra parte por las leyes de los logaritmos, las expresiones log de ([cido]/[Sal]) y + log de ([Sal]/
[cido]) son iguales y la segunda puede reemplazar a la primera, de tal modo que hechas todas las
modificaciones la ecuacin queda finalmente como sigue:

Esta ecuacin se conoce con el nombre de Ecuacin de HendersonHasselbalch y nos indica que el
pH de una solucin que contenga un cido dbil y su sal est determinado por el valor de pK a (constante para
cada cido) y por el logaritmo del cociente que resulta de dividir la concentracin de la sal entre la
concentracin del cido.
Por ejemplo, el valor de la constante de disociacin K a del cido actico es de 1.8 x10-5. El valor de
su pKa es por lo tanto igual a 4.74. Si tenemos una solucin reguladora que posea iguales cantidades de
CH3COOH y CH3COONa en concentracin 0.1N, el pH de esa solucin sera de:

Adems de servir para la preparacin de soluciones de pH conocido, las soluciones reguladoras tienen
dentro del organismo un papel de importancia capital que es el de evitar que aumente o disminuya de manera
importante la concentracin de iones hidrgeno, ya que la vida humana es posible en lmites muy estrechos
de pH, es decir, para la sangre arterial un pH de 7.40 y para sangre venosa y lquidos intersticiales 7.35.
Este ltimo es menor por tener ms CO2 y por lo tanto ms H2CO3 producido metablicamente. Se
sabe que los lmites mximos de pH en los que por algunos minutos puede permanecer el organismo sin
sufrir muchas alteraciones son de 7.0 a 7.8. En los lquidos donde existen y actan al mismo tiempo varios
sistemas amortiguadores, como sucede en la sangre, el cido o la base que entra es amortiguado por todos los
sistemas presentes de manera proporcional a la eficacia de cada uno de ellos.
La regulacin fisicoqumica tiene lugar en todos los medios que contienen reguladores, constituidos
principalmente por cidos o bases dbiles y sus sales. Por ejemplo el de fosfatos H 2PO4-/HPO4= con un pKa2
de 7.2 (o de 6.8 a la temperatura corporal), es el principal amortiguador intracelular.
El principal amortiguador extracelular en la sangre y lquidos intersticiales es el sistema bicarbonato
H2CO3/HCO3- con un pKa de 6.1.
En el interior del eritrocito, adems del bicarbonato, el amortiguador de mayor importancia es el de
hemoglobina reducida / oxihemoglobinato (HHb/HbO2). Otros sistemas son los de protenas y aminocidos.
Todos estos sistemas funcionan de manera inmediata cuando existen excesos de lcali cido ya que
un cambio del pH afecta la estructura y la actividad de las protenas, la distribucin de otros iones entre las
clulas y el lquido extracelular, la actividad de hormonas y frmacos, etc.
Comportamiento cido-base de la glicina. Existen sustancias de mucha importancia en bioqumica
como son los aminocidos y las protenas los cuales tienen grupos cidos y bsicos, por lo que actan como
anfolitos. En sta prctica se determinarn las curvas de titulacin de la glicina con HCl y con NaOH.
La glicina es un aminocido que tiene un carboxilo cuyo pka se denomina pka1 y un grupo amino cuyo
pka se denomina pka2. Una propiedad conocida de los aminocidos es el punto isoelctrico (pI) que es el pH
en que el aminocido tiene carga neta 0 en solucin, y en ste caso se calcula con la siguiente frmula:
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
18
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

EXPERIMENTO 1. APRECIACIN DEL PODER REGULADOR Y EFECTO DE LA


CONCENTRACIN

Preparar 50 mL de las soluciones amortiguadoras con los valores de pH que le indicar su profesor (7.0,
7.2, 7.4 y 8.0), emplear KH2PO4 (fosfato dicido de potasio) 0.01 M y Na2HPO4 (fosfato monocido
disdico) 0.01 M (pKa2 = 7.2).
Preparar 50 mL de las soluciones amortiguadoras con los valores de pH que le indicar su profesor (7.2, 7.4
y 8.0), emplear KH2PO4 0.1 M y Na2HPO4 0.1 M (pKa2 = 7.2).
Medir el pH potenciomtrico y colorimtrico de las soluciones anteriores y anotar los resultados en la tabla.
Armar dos dispositivos de titulacin (llenar, purgar y aforar), uno ser para titular con HCl (cido clorhdrico)
las soluciones amortiguadoras preparadas previamente y el otro dispositivo ser para titular con NaOH
(hidrxido de sodio).
Aadir una alcuota de 10 mL de la solucin amortiguadora que prepar en un matraz Erlenmeyer de
250 mL, medir con una pipeta volumtrica de 10 mL. Aadir 5 gotas de azul de timol y titular con HCl
0.1 N hasta observar el cambio de color a rojo. Repetir la titulacin para cada solucin amortiguadora
preparada por duplicado.
Agregar una alcuota de 10 mL de la solucin amortiguadora que prepar en otro matraz Erlenmeyer de
250 mL, medir con una pipeta volumtrica de 10 mL. Aadir 5 gotas de azul de timol y titular con NaOH
0.1 N hasta observar el cambio de color a azul. Repetir la titulacin para cada solucin amortiguadora
preparada por duplicado.
Evidencias de aprendizaje.
1) Describir detalladamente los clculos que realiz para cada uno de los pH solicitados.
2) Con los datos obtenidos y las de todo el grupo llenar la tabla siguiente:
pH pH Gasto de Gasto de
Concentracin
terico Colorimtrico Potenciomtrico HCl 0.1 N NaOH 0.1 N
7.2 0.01
7.2 0.1
7.4 0.01
7.4 0.1
8.0 0.01
8.0 0.1
3) Explicar la coincidencia o no, entre sus resultados y el clculo terico.
4) Explicar los resultados con base en la teora.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
19
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

EXPERIMENTO 2. CURVAS DE TITULACIN DE LA GLICINA.


Aadir 30 mL de solucin de glicina 0.1 N en un vaso de precipitados de 150 mL, con la ayuda de su
Profesor agregar una barra magntica y colocar sobre una placa de agitacin, medir el pH y sin retirar el
electrodo titular con NaOH 0.1 N como se encuentra indicado en la tabla y registrar sus resultados.
Aadir 30 mL de solucin de glicina 0.1 N en otro vaso de precipitados de 150 mL, con la ayuda de su
Profesor agregar una barra magntica y colocar sobre el agitador, medir el pH y sin retirar el electrodo
titular con HCl 0.1 N, como se encuentra indicado en la tabla y registrar sus resultados.

Titulacin con Titulacin con


Glicina 0.1 N Glicina 0.1 N
HCl 0.1N NaOH 0.1 N
mL Acumulativo pH mL Acumulativo pH
0 0 0 0
2 2 2 2
3 5 3 5
4 9 4 9
5 14 5 14
5 19 5 19
5 24 5 24
1 25 1 25
1 26 1 26
1 27 1 27
1 28 1 28
0.5 28.5 0.5 28.5
0.5 29 0.5 29

Evidencias de aprendizaje:
1) Graficar los valores acumulativos de HCl signo negativo y a los de NaOH signo positivo, en el eje de las
abscisas (X) y el pH en el eje de las ordenadas (Y).
2) Identificar en la grfica los valores de pK1 y pK2.
3) Calcular el punto isoelctrico (pI).

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
20
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

PRCTICA No. 5
PROTENAS
Su nombre deriva del griego proteios que significa primordial o fundamental; contienen en su molcula C,
H, O, N y en ocasiones P y S. El nitrgeno constituye en promedio el 16%. Por hidrlisis dan aminocidos,
los cuales varan en nmero, cantidad y posicin en cada protena. La actividad de una protena depende de
su conformacin espacial, por lo que agentes fsicos y qumicos que alteran los diferentes enlaces son
capaces de anularla. Algunos de los agentes desnaturalizantes ms comunes son cidos o bases, detergentes,
metales pesados, solventes orgnicos, alcaloides, calor, radiaciones ultravioleta, rayos x, ondas ultrasnicas,
sales inorgnicas, sustancias orgnicas como urea, guanidina, agentes reductores, agentes oxidantes, etc. Las
protenas desnaturalizadas pierden su actividad, modifican su solubilidad y precipitan. Tal como existen en la
naturaleza se denominan protenas nativas. Las propiedades fisicoqumicas y biolgicas caractersticas de las
protenas se deben a los aminocidos que las constituyen y las reacciones coloridas que se utilizan para su
anlisis en realidad detectan la presencia de un aminocido especfico. Muchas de las propiedades qumicas
de las protenas son comunes a varias especies por que contienen el mismo tipo de aminocidos, por lo que
para caracterizar una protena es necesario estudiar sus propiedades fisicoqumicas las cuales dependen del
peso molecular, de su carga elctrica neta y de la conformacin que adopte la molcula.
REACCIONES QUMICAS.
REACCIN DE MILLN: Es especfica para el grupo fenlico y por lo tanto, la dan positiva todas las
sustancias que poseen este grupo funcional, como el fenol, cido saliclico, timol, tirosina y todas aquellas
protenas que contengan tirosina.
REACCIN DE BIURET: Todas las molculas que contengan dos o ms uniones peptdicas, por lo tanto
todas las protenas y pptidos no menores de 3 unidades, dan positiva a esta reaccin. El nombre se debe
al compuesto biurea (NH2-CO-NH-CO-NH2) el cual da positiva la prueba. Cuando una protena o un
polipptido se hacen reaccionar con sulfato CuSO 4 en solucin alcalina se produce un color caracterstico
prpura o violeta. El color se debe a un complejo que resulta al unirse el cobre con los tomos de
nitrgeno de los enlaces peptdicos. Esta reaccin nos sirve para diferenciar las protenas y pptidos de los
aminocidos y su utilidad principal es la de seguir el proceso de hidrlisis, la reaccin ser negativa
cuando la hidrlisis sea completa.
REACCIN DE AMINOCIDOS AZUFRADOS: Las protenas que contengan los aminocidos cistena
y cistina cuando se tratan con lcalis concentrados, desprenden H2S, el cual se puede reconocer por su olor

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
21
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

desagradable y caracterstico, o bien, por la formacin de un precipitado negro de PbS al reaccionar con
(CH3COO)2Pb.
REACCIN XANTOPROTICA: Esta reaccin se debe a la formacin de nitroderivados aromticos por
reaccin del cido ntrico sobre grupos aromticos que poseen algunos aminocidos como la fenilalanina,
la tirosina y el triptfano. Por lo tanto, la dan positiva todas aquellas protenas que tengan aminocidos
aromticos en su molcula.
REACCIN DE LA NINHIDRINA: Es una de las reacciones ms sensibles para identificar aminocidos
en general, ya que detecta una parte de aminocido en 1 500 000 partes de agua. Aminocidos y muchas
aminas primarias dan un color violeta caracterstico. La prolina da coloracin amarilla. Por su sensibilidad
esta reaccin se emplea para valoracin cuantitativa de aminocidos por colorimetra.

PROPIEDADES FISICOQUMICAS.
DESNATURALIZACIN DE PROTENAS: Cuando la estructura altamente ordenada de una protena se
somete a la accin de agentes fisicoqumicos desnaturalizantes, queda reducida al llamado polmero
estadstico o cadena de aminocidos y adems pierde toda actividad biolgica. Algunos de los agentes
desnaturalizantes ms importantes son los metales pesados, los cidos fuertes y el alcohol.
PRECIPITACIN DE PROTENAS POR METALES PESADOS: Las protenas cuando se encuentran en
solucin a pH superiores a su punto isoelctrico son capaces de reaccionar con diferentes metales pesados
formando los correspondientes proteinatos insolubles. Tomaremos como ejemplo dos protenas, la peptona
y la gelatina y observaremos su reaccin, en forma simultnea frente a los metales pesados: Fe, Ag, Hg, y
Pb.
PRECIPITACIN DE PROTENAS POR EFECTO DE CIDOS FUERTES: Los cidos fuertes son
capaces de desnaturalizar a las protenas formando productos de desnaturalizacin insolubles conocidos
como metaprotenas.
PUNTO ISOELCTRICO: Las protenas al igual que los aminocidos son molculas anfteras. Es decir,
pueden reaccionar con cidos o con lcalis. En medio cido las protenas se combinan con los iones hidrgeno
y quedan con carga positiva. En medio alcalino liberan protones y quedan con carga negativa. El pH en el cual
una protena no posee carga elctrica neta se denomina punto isoelctrico, a este pH la protena presenta su
mnima solubilidad y generalmente precipita, teniendo adems una viscosidad mxima.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
22
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

EXPERIMENTO 1. REACCIN DE MILLN.


Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y enumerar del 1 al 5, colocar en cada tubo 2 mL de
las soluciones siguientes:
Tubo Soluciones
1 Agua destilada
2 Peptona al 2%
3 Casena al 2%
4 Gelatina al 2%
5 Albmina al 2%

Aadir 5 gotas del reactivo de Milln.


Incubar en bao Mara a ebullicin durante 5 minutos. PRECAUCIN!
La presencia de tirosina se pone de manifiesto por la aparicin de un precipitado blanco el cual por
accin del calor se vuelve rojo. La presencia de sales y soluciones muy alcalinas, pueden interferir en esta
reaccin.
Registrar sus resultados en la tabla que se encuentra al final de esta prctica.

Evidencias de aprendizaje
1) Escribir la composicin del reactivo de Milln y explicar cul es el mecanismo propuesto para esta
reaccin.
2) Ilustrar sus resultados.

EXPERIMENTO 2. REACCIN DE BIURET.


Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5, aadir 1 mL de las siguientes
soluciones:
Tubo Soluciones
1 Agua destilada
2 Peptona al 2%
3 Casena al 2%
4 Gelatina al 2%
5 Albmina al 2%

Aadir 2 mL de solucin de NaOH (Hidrxido de Sodio) al 10% en cada tubo PRECAUCIN!


Agregar de 5 gotas de solucin de CuSO4 (Sulfato de Cobre II) al 1% en cada tubo.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
23
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Agitar los tubos y observar la reaccin que se produce en cada caso. La aparicin de una coloracin
violeta o rosa en no ms de 20 minutos debe considerarse como prueba positiva.
Registrar sus resultados en la tabla que se encuentra al final de esta prctica.

Evidencias de aprendizaje
1) Se puede considerar la reaccin de Biuret como caracterstica para todas las protenas? Por qu?
2) Escribir la reaccin.
3) Ilustrar sus resultados.

EXPERIMENTO 3. REACCIN XANTOPROTICA.


Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5, aadir a cada uno 2 mL de las
soluciones siguientes:
Tubo Soluciones
1 Agua destilada
2 Peptona al 2%
3 Casena al 2%
4 Gelatina al 2%
5 Albmina al 2%

Aadir 1 mL de HNO3 (cido Ntrico) concentrado CON CUIDADO!


Incubar en bao Mara a ebullicin durante 2 minutos. Observar una coloracin amarilla
caracterstica.
Enfriar y aadir 1 ml de NH4OH (Hidrxido de Amonio) concentrado, resbalar cuidadosamente por las
paredes del tubo, para estratificar, cuidando de no agitar el tubo.
Observar un anillo naranja en la interfase.
Registrar sus resultados en la tabla que se encuentra al final de esta prctica.
Evidencias de aprendizaje
1) Escribir la reaccin.
2) Se puede considerar esta reaccin general para todas las protenas?
3) Explicar por qu se tie de amarillo la piel al contacto con el HNO3.
4) Ilustrar sus resultados

EXPERIMENTO 4. REACCIN DE AMINOCIDOS AZUFRADOS.


MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
24
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5, aadir a cada uno 2 mL de las
soluciones siguientes:

Tubo Soluciones
1 Agua destilada
2 Peptona al 2%
3 Casena al 2%
4 Gelatina al 2%
5 Albmina al 2%

Agregar 2 mL de NaOH al 10% a cada tubo. PRECAUCIN!


Incubar en bao Mara a ebullicin durante 2 minutos.
Aadir a todos los tubos 0.5 mL de solucin de Pb(CH3COO)2. (Acetato de Plomo II)
Colocar los tubos en bao Mara a ebullicin por 10 min. El oscurecimiento de la solucin o la
formacin de un precipitado negro indica la presencia de aminocidos azufrados.
Registrar sus resultados en la tabla que se encuentra al final de esta prctica.

Evidencias de aprendizaje
1) Escribir la reaccin qumica que se ha efectuado.
2) Qu sustancias pueden interferir en esta reaccin?
3) Ilustrar sus resultados.

EXPERIMENTO 5. REACCIN DE NINHIDRINA.


PRECAUCIN! Para la realizacin del siguiente experimento usar guantes o pinzas para manipular
el papel filtro.
Colocar 6 cuadros de papel filtro Whatman No. 1 de medidas 2 x 2 cm sobre una hoja blanca y
numerar del 1 al 6 (procurando rotular el papel con lpiz, no tinta).
Agregar 1 gota sobre cada cuadro de papel filtro de las soluciones siguientes:
Papel Soluciones
1 Agua destilada
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
25
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

2 Prolina al 2%
3 Peptona al 2%
4 Casena al 2%
5 Gelatina al 2%
6 Albmina al 2%

Aadir una gota de solucin de Ninhidrina en butanol al 0.1%.


Colocar el papel en el horno a 110 C durante 10 minutos. PRECAUCIN! Avisar a su Profesor.
Registrar sus resultados en la tabla que se encuentra al final de esta prctica.

Evidencias de aprendizaje
1) Describir el aspecto de la reaccin.
2) Escribir la reaccin qumica que se ha efectuado.
3) Qu sustancias dan positiva la reaccin de la Ninhidrina, adems de las protenas, pptidos y
aminocidos?
4) Ilustrar sus resultados.

EXPERIMENTO 6. PRECIPITACIN DE PROTENAS POR METALES PESADOS.


(PROPIEDADES FSICOQUMICAS DE LAS PROTENAS)
Preparar una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 4, agregar 1 mL de peptona al
2% a cada tubo. Rotlelos como P1P4 (P=peptona).
Preparar una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 4, agregar 1 mL de gelatina al
2% a cada tubo. Rotlelos como G1G4 (G=gelatina).
A los tubos de la serie 1 agregar 2 gotas de solucin de FeCl3 (Cloruro Frrico) al 2%
A los tubos de la serie 2 agregar 2 gotas de solucin de AgNO3 (Nitrato de Plata) al 2%
A los tubos de la serie 3 agregar 2 gotas de solucin de HgCl2 (Cloruro Mercrico) al 2%
A los tubos de la serie 4 agregar 2 gotas de solucin de Pb(CH3COO) 2 (Acetato de Plomo) al 2%
Observar y registrar los cambios; posteriormente agregar un exceso de 5 gotas a cada tubo y repita la
observacin.
Registrar sus resultados en la tabla, evaluando por medio de cruces (de x a xxx segn la turbiedad del
precipitado).
2 gotas 5 gotas
Solucin
Serie P Serie G Serie P Serie G
FeCl3
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
26
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

AgNO3
HgCl2
Pb(CH3COO) 2

Evidencias de aprendizaje
1) Tiene alguna influencia el pH en el efecto de los metales pesados sobre las protenas?
2) Tienen todos los metales pesados el mismo efecto precipitante sobre las protenas?
3) Ilustrar sus resultados.

EXPERIMENTO 7a. PRECIPITACIN DE PROTENAS POR EFECTO DE CIDOS FUERTES.


Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5, aadir a cada uno 2 mL de las
soluciones siguientes:
Tubo Soluciones
1 Agua destilada
2 Peptona al 2%
3 Casena al 2%
4 Gelatina al 2%
5 Albmina al 2%

Aadir a cada tubo 2 mL de CCl3COOH (cido Triclorocetico) al 5%, estratificando por las paredes
del tubo.
Observar y registrar sus resultados valorando el grado de turbidez de cero a tres cruces en la siguiente
tabla:
Sustancia CCl3COOH
Agua destilada
Peptona al 2%
Casena al 2%
Gelatina al 2%
Albmina al 2%
Evidencias de aprendizaje
1) Cmo puede explicar el efecto desnaturalizante del CCl3COOH y en general de cualquier cido?
2) Ilustrar sus resultados.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
27
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

EXPERIMENTO 7b. PRECIPITACIN DE PROTENAS EN ORINA


Preparar 2 tubos de ensayo, etiquetar y marcar un tubo como orina normal y el otro como orina de
paciente nefrtico, agregar 3 mL de la orina correspondiente a cada tubo.
Aadir 2 mL de la mezcla HNO3-CH3OH (cido Ntrico-Metanol) resbalando lentamente por la pared a
cada tubo, para estratificar.
Observar y registrar sus resultados.
Evidencias de aprendizaje
1) Explicar el fenmeno observado.
2) Ilustrar y describir lo que sucede en la interfase.

EXPERIMENTO 8. PRECIPITACIN DE PROTENAS POR EFECTO DEL ALCOHOL.


Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5, aadir a cada uno 2 mL de las
soluciones siguientes:
Tubo Soluciones
1 Agua destilada
2 Peptona al 2%
3 Casena al 2%
4 Gelatina al 2%
5 Albmina al 2%
Agregar cuidadosamente 3 mL de CH3CH2OH (Etanol) al 96 a cada tubo.
Observar y registrar los resultados valorando la turbidez de cero a tres cruces en la siguiente tabla:

Sustancia CH3CH2OH
Agua
Peptona al 2%
Casena al 2%
Gelatina al 2%
Albmina al 2%
Evidencias de aprendizaje
1) Observa turbidez en todos los tubos?
2) Ilustrar y describir lo que sucede en cada tubo.

EXPERIMENTO 9. DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELCTRICO DE LA CASENA.


MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
28
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Preparar una serie de 9 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 9.


Agregar los reactivos, segn se indica en la tabla siguiente:

Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Agua destilada mL 8.4 7.8 8.8 8.5 8.0 7.0 5.0 1.0 7.4
cido actico 1N mL - - - - - - - - 1.6
cido actico 0.1N mL - - 0.2 0.5 1.0 2.0 4.0 8.0 -
cido actico 0.01N mL 0.6 1.2 - - - - - - -
Casena al 5% en acetato de sodio 0.1N mL 1 1 1 1 1 1 1 1 1
Agitar los tubos y observe el grado de turbidez o la precipitacin que se produce en el tiempo cero (en
el momento) y despus de 15 y 30.
Registrar sus observaciones en la tabla valorando con cruces.

Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Observacin al tiempo cero
Observacin a los 15
Observacin a los 30
pH terico

Evidencias de aprendizaje
1) Calcule el pH terico de cada tubo, aplicando la ecuacin de Henderson-Hasselbalch y regstrelo en
la tabla.

2) Cul es el punto isoelctrico de la casena? Calcule y discuta sus resultados comparando con el terico.
3) Ilustrar los resultados.

TABLA DE RESULTADOS DE ALGUNAS PROPIEDADES QUMICAS DE LAS PROTENAS


REACCIN
SUSTANCIA
Millon Biuret Xantoprotica a.a. azufrados Ninhidrina
Agua
Glicina
Prolina
Peptona
Gelatina
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
29
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Casena
Albmina

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
30
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

PRCTICA No. 6
CINTICA QUMICA Y CATLISIS
De acuerdo con la Ley de Accin de Masas, la velocidad de una reaccin qumica depende de la
concentracin de las sustancias que intervienen en la reaccin. Esta Ley establece que: La magnitud de
una reaccin es proporcional a la masa activa de las sustancias reaccionantes presentes en ese
momento. El trmino masa activa significa la concentracin molecular o sea, la cantidad presente por
unidad de volumen. Si reaccionan:

La velocidad V1 con que reaccionan A y B para producir C y D depende de la concentracin de cada reactivo
y de la afinidad que tengan para reaccionar entre s, pero como esto se puede considerar constante, podemos
decir que: V1 = k1[A][B].

La velocidad V2 con que reaccionan C y D para producir A y B depende a su vez, de la concentracin de C y


D y de la afinidad. Por lo tanto podemos decir tambin que: V2 = k2[C][D]. Cuando se alcanza el equilibrio
qumico, las dos velocidades son iguales. Es decir: V1 = V2

Sustituyendo estos valores por sus equivalentes, tenemos:

Como el cociente de dos constantes es siempre igual a una constante podemos decir que:

Que es la expresin matemtica de la Ley de Accin de Masas y keq se conoce como Constante de Equilibrio.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
31
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

VELOCIDAD DE UNA REACCIN QUMICA


Las reacciones qumicas de acuerdo al nmero de molculas que toman parte de ellas se clasifican en:
Monomoleculares: Cuando participa una sola molcula. Ejemplo: A B
Bimoleculares: Cuando participan dos molculas. Ejemplo: A + B AB
Trimoleculares: Cuando participan tres molculas simultneamente. Ejemplo: A + B + C ABC
Las reacciones trimoleculares son muy raras y reacciones de ms de tres reaccionantes no se conocen.
Cuando se estudia la cintica de una reaccin, tiene ms importancia conocer el orden de la reaccin que el
tipo. El orden de una reaccin nos indica la relacin entre la velocidad y la concentracin de los reactivos,
por lo que se clasifican en:
Reacciones de orden cero. Su velocidad no es afectada por la concentracin. Est determinada por
algn otro factor limitante como absorcin de luz, velocidad de difusin, etc.
Reacciones de primer orden. Su velocidad de reaccin es directamente proporcional a la concentracin
de una de las sustancias reaccionantes.
Reacciones de segundo orden. Su velocidad de reaccin es proporcional a la concentracin de dos
sustancias reaccionantes.
Reacciones de tercer orden. Su velocidad de reaccin es proporcional a la concentracin de tres
sustancias reaccionantes.
La mayor parte de las reacciones enzimticas se caracterizan por seguir el modelo correspondiente a las
reacciones de primer orden. Matemticamente la reaccin puede representarse as:

dt = tiempo, dc = concentracin del material, Ke = constante especfica de velocidad de reaccin

Si representamos por a la concentracin inicial de material y por x la cantidad que ha reaccionado en el


tiempo t, la expresin a-x significa concentracin del material en el tiempo t. La ecuacin anterior puede
expresarse en funcin de a, x y t y al integrarla nos queda:

Cuando se ha completado la descomposicin de la mitad del material, la ecuacin se simplifica y queda:

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
32
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Donde t1/2 es el perodo de vida media, es decir, el tiempo necesario para que se descomponga la mitad de una
cantidad dada de material reaccionante.

Desde hace muchos aos se saba en forma emprica que la velocidad de muchas reacciones aumenta al
aumentar la temperatura. Arrhenius encontr una relacin que expresa matemticamente la forma como la
temperatura afecta la velocidad de una reaccin, la cual est dada por la siguiente ecuacin:

La cual indica que el cambio en el logaritmo natural de la constante de velocidad de una reaccin es inversamente
proporcional al cuadrado de la temperatura absoluta multiplicada por la constante de los gases. E es la energa de
activacin. Actualmente se considera que para que las molculas puedan reaccionar deben ser primero activadas,
es decir, requieren una cantidad de energa E. Integrando entre lmites la ecuacin de Arrhenius:

Si consideramos que E = 1200 caloras al aumentar la temperatura de 22C a 32C, tendramos:

Esto quiere decir que por cada 10C de aumento la velocidad de la reaccin se duplica. En la mayor parte de
las reacciones se observa este aumento bajo ciertas temperaturas lmites.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
33
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Se sabe que muchas reacciones qumicas son afectadas por el pH del medio o el aumento de [H+], sobre todo
aquellas en las que participan cidos. Actualmente se acepta que las molculas deben ser activadas antes de
que puedan reaccionar. Aparentemente el pH cido favorece la ionizacin y el estado inico se puede
considerar como un estado activado.

La velocidad de una reaccin qumica frecuentemente es afectada por la presencia de sustancias extraas
que permanecen inalteradas al terminar la reaccin. Cualquier sustancia que sea capaz de acelerar una
reaccin qumica y que no sea consumida por ellas, se denomina catalizador y el proceso se conoce con el
nombre de catlisis. La funcin de un catalizador es disminuir la energa de activacin, por lo que las
molculas son activadas con menor cantidad de energa producindose reacciones ms rpidas. En un
principio se supuso que los catalizadores actuaban por presencia. Es decir, que no intervenan en los
procesos que catalizaban. Sin embargo, actualmente se acepta que el catalizador se combina con el sustrato
formando un complejo intermediario inestable y altamente reactivo. Supongamos la reaccin: A + B AB.
Esta reaccin en condiciones normales se efecta muy lentamente pero si se aade un catalizador C
apropiado, tenemos: A + B + C (AC) + B AB + C. Estas reacciones son rpidas y el catalizador
puede ser usado una y otra vez. Estas sustancias pueden ser de naturaleza inorgnica o bien sustancias
orgnicas complejas producidas por las clulas y son denominadas enzimas. La sacarosa es un disacrido no
reductor, pero al hidrolizarse, cada molcula libera una molcula de glucosa y una de fructosa, ambas
reductoras. Basndose en esto es posible visualizar y cuantificar la hidrlisis de la sacarosa midiendo la
concentracin de azcares reductores con algn reactivo apropiado. Una caracterstica importante entre los
catalizadores inorgnicos y las enzimas es que ambos solo son capaces de acelerar un proceso que ya est en
marcha. Para esta prctica emplearemos como enzima la sacarasa, tambin conocida como invertasa o
fructofuranosidasa; la cual, es una de las enzimas mejor conocidas y estudiadas. Acta hidrolizando los
azcares que contienen fructosa. As hidroliza la estaquiosa (tetrasacrido), la rafinosa (trisacrido), y alcanza
su mxima velocidad con la sacarosa (disacrido). Se puede medir la hidrlisis observando el cambio en la
rotacin ptica o valorando el poder reductor de los productos obtenidos.

EXPERIMENTO 1. COMPROBACIN DE LA LEY DE ACCIN DE MASAS.


Agregar en un vaso de precipitado de 250 mL de capacidad:
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
34
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

100 mL de agua destilada, 1 mL de solucin de NH4SCN (Sulfocianuro de Amonio) 0.2 M y 1 mL


de solucin de FeCl3 (Cloruro Frrico) 0.2M en HCl (cido Clorhdrico) 0.1N mezclando hasta
lograr la completa homogeneidad. Observar la aparicin de una coloracin roja, debido a la
formacin de (Fe(SCN)3) (Sulfocianuro Frrico)
Aadir en cuatro frascos de gerber 25 mL en cada uno la mezcla reaccionante.
Agregar a cada vaso los reactivos descritos en la tabla siguiente:
Frasco Reactivo
FeCl3 0.2M en HCl 0.1N NH4SCN 0.2M NH4Cl
1 0.5 mL 0.5 mL --
2 1.0 mL 1.0 mL --
3 -- -- 5.0 mL
4 Testigo --
Observar y registrar sus resultados, en la siguiente tabla:
Desplazamiento de la Reaccin
Frasco
(segn la intensidad del color)
1
2
3
4
Evidencias de aprendizaje
1) Escribir la reaccin qumica que se ha efectuado.
2) Describir que observ de acuerdo a la intensidad de la coloracin en cada frasco y segn a la Ley
de Accin de Masas y al principio de Le Chatelier, explique el fenmeno.

EXPERIMENTO 2. VELOCIDAD DE DESCOMPOSICIN DEL PERXIDO DE HIDRGENO (H2O2).


Colocar un dispositivo de titulacin. Llenar la bureta de 25 mL con una solucin de KMnO4 0.01M.
(Permanganato de Potasio)
Depositar en un matraz Erlenmeyer de 250 mL un volumen de 5 mL de una solucin problema de
H2O2 (pregunte a su profesor) y 2 mL de H2SO4 (1:6) (cido Sulfrico) PRECAUCIN!
Calentar la mezcla en un soporte universal con tela de asbesto hasta casi ebullicin y en caliente
titule. El punto final de la titulacin lo observar cuando persista un ligero color rosa, por exceso de la
solucin de permanganato. El H2SO4 y el calentamiento tienen por objeto impedir la formacin de MnO2
(xido de Manganeso). Haga esta determinacin por duplicado y calcule el promedio de las dos
determinaciones (esta ser su concentracin del problema al tiempo cero).
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
35
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Preparar una mezcla de 50 mL de sangre desfibrinada al 0.06% y 50 mL de una solucin problema


de perxido de hidrgeno, al momento de realizar la mezcla se inicia el registro del tiempo.
Depositar alcuotas de 10 ml de la mezcla de reaccin en un matraz Erlenmeyer a los 5, 10, 20, 30 y
40 minutos para titular en cada caso, recordando agregar 2 mL de solucin de H2SO4 (1:6), calentar hasta
ebullicin y titular en la forma ya explicada.
Registrar sus resultados en la siguiente tabla:
Tiempo/seg KMnO4 0.01M/mL (a x) moles/litro log a/(a-x) Ke
300 (5)
600 (10)
1200 (20)
1800 (30)
2400 (40)

Evidencias de aprendizaje
1) Determinar el orden de reaccin grficamente. Para calcular la Ke a cada tiempo se debe utilizar la
ecuacin:

2) Escribir las reacciones qumicas que se han efectuado.

EXPERIMENTO 3. INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DE UNA


REACCIN QUMICA.
Disponer de baos Mara a diferentes temperaturas (una por equipo) pregunte al Profesor.
Aadir 0.25 g de KI (Yoduro de Potasio) y agregar 25 mL (medir con PROBETA) de solucin de
H2SO4 1:6 (cido Sulfrico) en un vaso de precipitado de 100 mL.
Agitar hasta disolucin completa y agregar agua destilada completando a 50 mL (medir con
PROBETA). Esta solucin se denominar Solucin de cido yodhdrico (HI, rotlelo con este nombre).
Nota: Considere que se utilizar en este experimento (25 mL) y en el siguiente (25 mL).
Preparar una serie de 5 tubos de ensaye, etiquetar y numerar del 1 al 5, agregar los reactivos que se
muestra en la tabla siguiente y preincube cada tubo segn corresponda.
Tub
o 1 2 3 4 5
Solucin
HI mL 5 5 5 5 5
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
36
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Na2S2O3 0.02N (tiosulfito de sodio) mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5


Almidn No. de gotas 5 5 5 5 5
Preincubar 5 minutos a: 5 C 25 C 40 C 60 C 90 C
Agregar a cada tubo H2O2 al 0.2% como se indica en la tabla. Nota: Considere realizar cada tubo por
separado con el objetivo de medir con mayor precisin el tiempo en que aparece sbitamente el color azul
intenso.
Tub
o 1 2 3 4 5
Solucin
H2O2 al 0.2% mL 2 2 2 2 2
Registrar sus resultados en la tabla siguiente:
Temperatura Tiempo de reaccin
(C) (aparicin del color azul en segundos)
5
25
40
60
90
Evidencias de aprendizaje
1. Escribir las reacciones qumicas que se han efectuado.
2. Trazar la grfica de 1/tiempo de reaccin en las ordenadas contra la temperatura en las abscisas.

EXPERIMENTO 4. EFECTO DE LA [H+] SOBRE LA VELOCIDAD DE UNA REACCIN QUMICA.


Preparar una serie de 5 tubos de ensaye, etiquetar y numerar del 1 al 5.
Agregar los reactivos segn se indica en la tabla siguiente:

Tubo 1 2 3 4 5
Solucin
HI mL 5 5 5 5 5
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
37
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Na2S2O3 (Tiosulfato de Sodio) mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5


0.02N
Almidn No. de gotas 5 5 5 5 5
H2O destilada mL 5
HCl 0.01N mL 5
HCl 0.1N mL 5
HCl 1N mL 5
HCl 2N mL 5
Agregar a cada tubo H2O2 al 0.2% como se indica en la tabla. Nota: Considere realizar cada frasco por
separado con el objetivo de medir con mayor precisin el tiempo en que aparece sbitamente el color azul
intenso.
Frasco
1 2 3 4 5
Solucin
H2O2 al 0.2% mL 2 2 2 2 2
Registrar sus resultados en la siguiente tabla:
Tiempo de reaccin
[H+]
(aparicin del color azul en segundos)
-7
1 x 10
1 x 10-2
1 x 10-1
1
2
Evidencias de aprendizaje

1) Trazar una grfica con el 1/tiempo en segundos en las ordenadas y la concentracin de H+ en las abscisas.

EXPERIMENTO 5. EFECTO DE UN CATALIZADOR INORGNICO SOBRE LA VELOCIDAD


DE HIDRLISIS DE LA SACAROSA
Preparar dos tubos de ensayo y aadir en cada uno 2 mL de solucin de sacarosa 0.05 M.
Un tubo quedar como testigo (etiquetar con la inicial T) y al otro agregar 3 gotas de cido sulfrico
1:6 (etiquetar como H2SO4).
Incubar en bao Mara a ebullicin durante 15 minutos.
El tubo que contiene H2SO4 neutralizar con 1 mL de NaOH (hidrxido de sodio) al 10%.
Aadir al tubo testigo el reactivo de Fehling, agregando 2 mL de la solucin A ms 2 mL de la
solucin B. Repetir este mismo paso para el tubo que contiene cido sulfrico 1:6.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
38
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Incubar ambos tubos en bao Mara a ebullicin por 10 minutos al cabo de los cuales se retiran del
bao, dejndose enfriar.
Observar si existe un precipitado rojo de Cu2O (xido Cuproso) en ambos tubos.
Registrar sus resultados.

Evidencias de aprendizaje
1) Se puede considerar al H2SO4 como un catalizador? Por qu?

EXPERIMENTO 6. EFECTO DE UN CATALIZADOR BIOLOGICO (ENZIMA) SOBRE LA


VELOCIDAD DE HIDRLISIS DE LA SACAROSA
Preparar dos tubos de ensayo, aadir a un tubo 2 mL de solucin de Sacarosa 0.05 M y 1 mL de
solucin reguladora o buffer de NaCH3COO- (Acetato de Sodio) 0.05 M a pH de 4.7. Repetir este mismo paso
para el otro tubo.
Un tubo quedar como testigo (etiquetar con la inicial T) y al otro aadir 0.2 mL de solucin de invertasa
(etiquetar como invertasa), mezclando bien el contenido del tubo.
Incubar en bao Mara a 40C durante 15 minutos.
Aadir al tubo testigo el reactivo de Fehling, agregando 2 mL de la solucin A ms 2 mL de la
solucin B y agitar hasta que se mezcle bien. Repetir este mismo paso para el tubo que contiene la
invertasa.
Incubar ambos tubos en bao Mara a ebullicin por 10 minutos al cabo de los cuales se retiran del
bao, dejndose enfriar.
Observar si existe un precipitado rojo de Cu2O (xido Cuproso) en ambos tubos.
Registrar sus resultados.

Evidencias de aprendizaje
1) Comparar este experimento con el anterior y explique qu sucede.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
39
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

PRCTICA No. 7
CINTICA ENZIMTICA
FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
La vida depende de una serie de reacciones qumicas cuyo curso y velocidad estn determinados por la
presencia de diversos catalizadores orgnicos denominados enzimas: (del griego en = en, zymo = fermento).
La mayor parte de las reacciones biolgicas seran cinticamente insignificantes si no fuera por las enzimas.
Las enzimas desde el punto de vista qumico son compuestos que pertenecen al grupo de las protenas
(aunque algunas solo funcionan asociadas a un grupo no proteico, grupo prosttico o coenzima). Debido a su
carcter protenico, las enzimas son muy sensibles a cualquier cambio fsico, qumico, o fisicoqumico. As,
cualquier cambio en la temperatura, en el pH, en la fuerza inica, la adicin de sales, la presencia de agentes
oxidantes o reductores, la presencia de metales pesados, etc., producen modificaciones profundas en su
actividad. En general, cualquier factor que sea capaz de desnaturalizar a las protenas ser capaz de alterar su
actividad.
NATURALEZA QUMICA DE LAS ENZIMAS
Estructuralmente todas las enzimas son protenas simples o complejas. La parte protenica de las enzimas se
denomina apoenzima, la parte no protenica puede ser coenzima, si se separa fcilmente de la protena. Las
coenzimas pueden ser comunes a varias enzimas y no actan como catalizadores ya que se transforman en la
reaccin que catalizan y requieren de otra enzima para regenerar su actividad. La mayor parte de las
coenzimas estn relacionadas con las vitaminas. Si la parte no protenica se encuentra firmemente unida a la
protena por enlace covalente y no es posible separarla por dilisis, se denomina grupo prosttico. Hay
varios factores que afectan la velocidad de una reaccin catalizada por enzimas. Algunos de ellos son:
temperatura, pH, concentracin de sustrato, concentracin de enzima e inhibidores.
Temperatura. La velocidad de las reacciones qumicas aumenta al incrementar la temperatura, originando
aumento en la energa cintica y en las velocidades medias de las molculas con el resultado de una mayor
probabilidad de colisiones efectivas. Sin embargo, las enzimas se inactivan y desnaturalizan a temperaturas
elevadas. La mayor parte de las enzimas tienen una temperatura ptima, en la cual catalizan con una
velocidad mxima.
pH. La actividad de la mayora de las enzimas depende del pH debido a la participacin de iones [H +] o iones
[OH-] en las reacciones, adems que se afecta la de los grupos funcionales. La mayora de las enzimas tienen
un pH ptimo en el cual su actividad es mxima.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
40
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Concentracin de la enzima. La velocidad de una reaccin aumenta en proporcin directa a la concentracin


de la enzima que la cataliza. La interaccin enzima substrato cumple la Ley de Accin de Masas. Se emplea
con frecuencia la velocidad de una reaccin como medida de concentracin de la enzima manteniendo fija la
concentracin de substrato.
Concentracin de sustrato. Si se trabaja con una concentracin fija de enzima la velocidad inicial de
reaccin aumenta incrementando la concentracin del sustrato. Con el tiempo se alcanza un mximo y la
adicin de ms sustrato ya no influye sobre la velocidad, ya que la enzima se satur.
La velocidad de cualquier reaccin cambia al modificarse la temperatura (T), debido a los cambios de
energa cintica. Generalmente por cada 10 grados centgrados de aumento en la T se duplica la velocidad,
esto se conoce como la relacin de Vant Hoff o coeficiente de temperatura QT10. Sin embargo, debido a la
constitucin protenica de las enzimas, las temperaturas altas pueden producir desnaturalizacin y una
disminucin marcada en la actividad cataltica. Para la gran mayora de enzimas de animales homeotermos,
la T ptima est alrededor de 37C; cerca de los 60C la mayor parte de las enzimas se inactivan, hecho que
se aprovecha en la tcnica de pasteurizacin.
El pH es uno de los factores que ms afecta la actividad de las enzimas, ya que puede afectar la estabilidad
de la molcula por desnaturalizacin o bien afectar su carga elctrica. Muchos de los grupos ionizables
presentes en la molcula de la enzima pueden ser necesarios para la catlisis y los cambios de pH afectan el
grado de ionizacin. Para que se realice la unin en el complejo enzimasustrato (ES) es necesaria una
adecuada distribucin de cargas en ambas molculas. El pH ptimo es aquel en el cual ciertos grupos
funcionales poseen la carga apropiada para asegurar la formacin del complejo ES en las mejores
condiciones. Adems, como ya se mencion, los pH extremos provocan desnaturalizacin de la molcula
enzimtica y por tanto inactivacin de la misma. Cada enzima posee un pH ptimo en el cual su actividad es
mxima, para la mayora de las enzimas la actividad ptima se encuentra entre los valores de pH= 6 a 8. Sin
embargo existen excepciones, por ejemplo, para la pepsina del jugo gstrico es mxima a un pH=1.5 que es
muy cido, o para la fosfatasa alcalina que se encuentra en huesos y otros rganos cuyo pH=9.5.
Actualmente se acepta que la reaccin enzimtica se efecta a travs de la formacin de un complejo enzima-
sustrato, lo cual puede representarse en forma muy simplificada as:

S + E [ES] P + E

Si [E] es la concentracin total de enzima y [ES] es la enzima combinada, entonces [E ES] es la


concentracin de enzima libre. Recordando la Ley de Accin de Masas, tenemos:

V1 = K1 [E ES] [ES]; V2 = K2 [ES]; V3 = K3 [ES]


MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
41
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

La velocidad de formacin (Vf) del complejo [ES] depende de V1 mientras que la velocidad de degradacin
(Vd) depende de V2 + V3. Por lo tanto en el equilibrio tenemos:

Vf = Vd es decir: V1 = V2 + V3

Sustituyendo sus valores nos queda: K1[E ES] [S] = K2[ES] + K3[ES]. Dividiendo ambos miembros entre
K1 y [ES] nos queda:

Simplificando:

Constante de Michaelis-Menten

La constante de Michaelis-Menten se utiliza como una medida de la afinidad entre la enzima y el sustrato,
aunque no es propiamente la constante de afinidad. La constante de Michaelis-Menten (Km) se define como la
concentracin de sustrato cuando la reaccin adquiere la mitad de su velocidad mxima. Cuando esto sucede:
[E ES] = [ES]. Y por lo tanto, sustituyendo: Km = [S]. Si en una reaccin enzimtica se mantiene constante
la concentracin de la enzima y todos los dems factores que pueden modificar la actividad, se observa
experimentalmente que al aumentar la concentracin del sustrato, aumenta progresivamente la velocidad de
la reaccin hasta llegar a un mximo (velocidad mxima) despus del cual ya no se afecta la velocidad
aunque se trabaje a concentraciones ms altas de sustrato. En algunas enzimas se observa incluso una
disminucin en la actividad si se aumenta demasiado la concentracin de sustrato.
Durante mucho tiempo se pens que los catalizadores eran sustancias que actuaban por presencia debido a las
concentraciones tan pequeas y a que podan recuperarse inalterados al final de la reaccin. Sin embargo, se
sabe que la velocidad de reaccin de acuerdo a la Ley de Accin de Masas depende de su concentracin de
tal manera que la velocidad es directamente proporcional a la concentracin de enzima, lo que se expresa
como: V = K[E]. As que la grfica que se obtiene al expresar la velocidad de reaccin en funcin de la
concentracin de enzima es una recta con pendiente positiva.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
42
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

EXPERIMENTO 1. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA


Preparar una serie de 7 tubos de ensaye, etiquetar y numerar del 1 al 7.
Agregar los reactivos y preincubar, segn se indica en la tabla siguiente:

Tubo
s 1 2 3 4 5 6 7
Reactivos
Sustrato almidn 8 mg/mL en Buffer
mL --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
de fosfatos 0.02M, pH=7
Buffer de fosfatos 0.02M, pH = 7 mL --- 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
Agua destilada mL 5.5 3 3 3 3 3 3
Preincubar 5 minutos a 25C 5C 25C 40C 50C 60C 90C

Posterior a este tiempo, agregar la enzima conservada en hielo, como se indica en la tabla siguiente:
Tubo
s 1 2 3 4 5 6 7
Reactivos
Enzima (solucin de amilasa) mL --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

Agitar todos los tubos y colocar nuevamente cada tubo en su respectivo bao como se indic en la
primera tabla, incubar durante 15 minutos.
Agregar a todos los tubos, 1 mL del reactivo de cido 3,5 dinitrosaliclico (este reactivo desarrolla un
color rojo caoba en presencia de azcares reductores).
Agitar bien y colocar en bao Mara a ebullicin durante 10 minutos.
Retirar y enfrar en bao de hielo.
Leer en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 540 nm, empleando el tubo 1 como blanco.
Registrar sus resultados en la tabla siguiente.

EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA


Tubo Temperatura Absorbancia
1 25 C Blanco
2 5 C
3 25 C
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
43
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

4 40 C
5 50 C
6 60 C
7 90 C

Evidencias de aprendizaje
1) Trazar una grfica con los datos obtenidos, donde la absorbancia sern las ordenadas y la T las abscisas.

EXPERIMENTO 2. EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA


Preparar una serie de 6 tubos de ensaye, etiquetar y numerar del 1 al 6.
Agregar los reactivos y preincubar, segn se indica en la tabla siguiente:

Tubos
Reactivos
1 2 3 4 5 6
Sustrato (sol. de almidn 8 mg/mL) --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
mL
Buffer de fosfatos al pH indicado 7 5 6 7 8 9
m 5 4 4 4 4 4
L
Preincubar a 40C por 5 minutos

Agregar la enzima conservada en hielo, como se indica en la tabla siguiente:

Tubos
Reactivos
1 2 3 4 5 6
Enzima (sol. de amilasa) --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
mL

Agitar los tubos e incubar nuevamente en el bao Mara a 40oC, durante 15 minutos.
Agregar a todos los tubos, 1 mL del reactivo de cido 3,5 dinitrosaliclico.
Agitar bien y colocar en bao Mara a ebullicin durante 10 minutos.
Retirar y enfrar en un bao de hielo.
Leer en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 540 nm, empleando el tubo 1 como blanco
Registrar sus resultados en la tabla siguiente.

EFECTO DEL pH EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA


TUBO pH Absorbancia

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
44
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

1 7 Blanco
2 5
3 6
4 7
5 8
6 9

Evidencias de aprendizaje
1) Trazar la grfica correspondiente donde las absorbancias sern las ordenadas y el pH las abscisas.
2) Basndose en sus resultados diga Cul es el pH ptimo de la amilasa?
3) Cul es el azcar que se libera en la hidrlisis de este polisacrido?

EXPERIMENTO 3. EFECTO DE LA CONCENTRACIN DEL SUSTRATO SOBRE LA


VELOCIDAD DE REACCIN
Preparar una serie de 8 tubos de ensaye, etiquetar y numerar del 1 al 8.
Agregar los reactivos y preincubar, segn se indica en la tabla siguiente:
Tub
o 1 2 3 4 5 6 7 8
Reactivos
Sustrato almidn 8 mg/mL en Buffer de
mL 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 7.5 ---
fosfatos 0.02M, pH=7
Buffer de fosfatos 0.02M, pH=7 mL 7.0 6.5 5.5 4.5 3.5 2.5 0.0 8.0
Preincubar a 40C por 5 minutos
Agregar la enzima conservada en hielo, como se indica en la tabla siguiente:
Tub
o 1 2 3 4 5 6 7 8
Reactivos
Sol. de enzima (amilasa) mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 ---

Agitar todos los tubos e incubar nuevamente en el bao Mara a 40oC, durante 15 minutos.
Agregar a todos los tubos, 1 mL del reactivo de cido 3,5 dinitrosaliclico.
Agitar bien y colocar en bao Mara a ebullicin durante 10 minutos.
Retirar y enfriar en un bao de hielo.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
45
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Leer en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 540 nm, empleando el tubo 8 como blanco
Registrar sus resultados en la tabla siguiente.

EFECTO DE LA CONCENTRACIN DEL SUSTRATO EN LA ACTIVIDAD


ENZIMATICA
Tubo Concentracin de sustrato
Absorbancia
mg/mL
1 0.5
2 1
3 2
4 3
5 4
6 5
7 7.5
8 ------ Blanco
Evidencias de aprendizaje
1) Trazar una grfica con los resultados obtenidos donde las absorbancia sern las ordenadas y las
concentraciones del sustrato las abscisas.
2) Determinar el valor de KM para el sistema almidn/amilasa en estas condiciones. KM=____ mg de
almidn/mL.

EXPERIMENTO 4. EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE LA ENZIMA


Preparar una serie de 6 tubos de ensaye, etiquetar y numerar del 1 al 6.
Agregar los reactivos y preincubar, segn se indica en la tabla siguiente:

Reactivos Tubos 1 2 3 4 5 6

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
46
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Sustrato almidn 8 mg/mL en Buffer de fosfatos 0.02M, pH=7 mL --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Buffer de fosfatos 0.02M, pH=7 mL 1 1 1 1 1 1
Agua destilada mL 5.5 4.9 4.8 4.6 4.2 3.4
Preincubar a 40C durante 5 minutos
Agregar la enzima conservada en hielo, como se indica en la tabla siguiente:
Tubos 1 2 3 4 5 6
Reactivos
Solucin de enzima (amilasa) mL --- 0.1 0.2 0.4 0.8 1.6

Agitar todos los tubos e incubar nuevamente en bao Mara a 40oC, durante 15 minutos.
Agregar a todos los tubos, 1 mL del reactivo de cido 3,5 dinitrosaliclico.
Agitar bien y colocar en bao Mara a ebullicin durante 10 minutos.
Retirar y enfrar en un bao de hielo.
Leer en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 540 nm, empleando el tubo 1 como blanco.
Registrar sus resultados en la tabla siguiente.

EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE LA ENZIMA EN LA ACTIVIDAD


ENZIMTICA
Tubo Concentracin de enzima
Absorbancia
mg/mL
1 ------- Blanco
2 0.1
3 0.2
4 0.4
5 0.8
6 1.6

Evidencias de aprendizaje
1) Trazar una grfica con base en sus resultados con los valores de absorbancia en las ordenadas y la
concentracin de enzima expresada en mg/mL en las abscisas e interpretar la grfica obtenida.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
47
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

PRCTICA No. 8
GLCIDOS
Los glcidos o carbohidratos se definen como derivados aldehdicos o cetnicos reales o en potencia de
alcoholes polivalentes que poseen en su molcula uno o ms carbonos asimtricos. Estos compuestos se
encuentran presentes en todos los seres vivos, en cantidades variables, desempeando importantes funciones
estructurales y energticas. Debe recordarse que todas las propiedades qumicas de los glcidos dependen
de sus grupos funcionales, o sea, grupos alcohol y grupo carbonilo (aldehdico o cetnico). Los glcidos se
clasifican, segn el nmero de compuestos hidrocarbonados simples que los constituyen, en 3 grupos;
monosacridos, oligosacridos y polisacridos. Los monosacridos no se pueden desdoblar por hidrlisis en
compuestos ms sencillos. A su vez se subdividen, segn el nmero de carbonos que contengan, en: triosas,
tetrosas, pentosas, hexosas, etc. Los oligosacridos, por hidrlisis, dan pocas molculas de monosacridos.
En la naturaleza existen varios disacridos (sacarosa, lactosa, maltosa etc.) y unos cuantos trisacridos,
tetrasacridos y pentasacridos libres. Se pueden obtener por sntesis qumica en el laboratorio o por
degradacin hidroltica de polisacridos. Los oligosacridos poseen propiedades fsicas similares a las de los
monosacridos. Los polisacridos, por hidrlisis dan muchas molculas de monosacridos. Desde el punto
de vista fisiolgico se dividen en dos grupos; polisacridos estructurales y polisacridos de reserva. Entre
los primeros tenemos en vegetales: la celulosa, los cidos pecticos y las hemi celulosas. En animales los ms
importantes son los llamados mucopolisacridos, tales como el cido hialurnico y el condroitin sulfato,
abundantes en varios tejidos y lquidos como el cuerpo vtreo del ojo, el cordn umbilical, el lquido sinovial,
tendones, cartlagos, etc. Entre los polisacridos nutrientes o de reserva los ms importantes son, en
vegetales, los almidones e inulina y en animales, el glucgeno.
Los glcidos reciben este nombre debido a que la mayor parte de ellos se caracterizan por tener sabor dulce.
Sin embargo, esta propiedad la presentan solamente los mono y oligosacridos, ya que los polisacridos son
generalmente inspidos. Otras propiedades que nos permiten diferenciar glcidos de bajo peso molecular
(monosacridos y oligosacridos) de los de elevado peso molecular (polisacridos), son su solubilidad en
agua y su capacidad para cristalizar.
Las propiedades qumicas de los glcidos dependen de sus grupos funcionales. Todos los glcidos poseen en
su molcula grupos alcohol y grupos carbonilo, ya sean aldehdicos o cetnicos. Sin embargo, en algunos
glcidos estos grupos pueden estar bloqueados y por lo tanto, su reactividad qumica estar ausente. Una
caracterstica qumica de los aldehdos y cetonas es su carcter reductor, todos los monosacridos u
oligosacridos que tengan libre el grupo aldehdico o cetnico sern reductores, mientras que los
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
48
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

polisacridos y oligosacridos que tengan bloqueados estos grupos sern no reductores. Todos los glcidos
formados por varios azcares (oligo o polisacridos) se pueden hidrolizar por accin enzimtica o de cidos
dando como producto final los monosacridos y liberando los grupos reductores bloqueados. Existen varias
reacciones qumicas que se utilizan para la identificacin de los glcidos, algunas son generales y otras son
especficas para determinar tipo o incluso especficas para cada azcar. Entre las ms utilizadas tenemos: la
formacin de osazonas, esta reaccin es una de las de mayor utilidad para la identificacin de azcares por
ser especfica para cada azcar. La dan positiva tanto los monosacridos como los disacridos reductores
sirviendo para identificarlos el tiempo que tardan en formar la osazona correspondiente, la forma cristalina de
ellas, la solubilidad en caliente o en fro y los puntos de fusin.
Existen mtodos para la determinacin de las propiedades de los glcidos. Molish-Udranski es una reaccin
general para todos los glcidos, debido a que el cido sulfrico concentrado que contiene el reactivo hidroliza y
deshidrata a los azcares obtenindose furfural o hidroximetil furfural como producto final y estas sustancias
son capaces de reaccionar con el alfa naftol formando un compuesto colorido (violeta): Esta prueba es una de
las ms sensibles, la dan positiva soluciones de glucosa al 0.001%. Sin embargo, la reaccin no es especfica,
ya que la dan positiva los aldehdos, las cetonas, y algunos cidos orgnicos tales como el frmico, oxlico,
ctrico, etc. La reaccin de Fehling, se emplea para el anlisis cualitativo y cuantitativo de azcares se basan
en su propiedad reductora, aunque esta propiedad no sea especfica de ellos. Se sabe que los azcares
reductores son capaces de reducir diversos iones metlicos como el cobre, bismuto, mercurio, plata, etc.,
cuando se encuentran estos en solucin alcalina. Este tipo de reacciones son muy empleadas porque los
reactivos son estables, existe poca interferencia con otras sustancias, las reacciones son sensibles y puede usarse
la misma reaccin para un anlisis cualitativo o cuantitativo. El mecanismo de reaccin se lleva a cabo debido
a que algunos compuestos orgnicos que contienen uno o ms grupos alcohlicos en su molcula, en este
caso el tartrato de sodio, reaccionan en solucin alcalina con los hidrxidos metlicos, formando un complejo
soluble, el cual se disocia muy poco, pero los iones que deja en libertad son suficientes para que produzcan
las reacciones de coloracin. La formacin de este complejo es esencial para que se produzca un precipitado
con la mayor parte de los metales pesados. El reactivo de Barfoed es una solucin de acetato cprico en cido
actico y una vez ms, se determina la capacidad de los azcares para reducir el in cprico a cuproso (Cu2O).
Esta reaccin sirve para diferenciar un monosacrido de un disacrido, ya que los primeros a los tres minutos
reducen el reactivo y los disacridos necesitan ms tiempo para que se lleve a cabo la reaccin de reduccin,
ms o menos unos 15 minutos. La reaccin de Bial, sirve para diferenciar pentosas de hexosas, el reactivo
consiste en una solucin de orcinol en cido clorhdrico (HCl) concentrado con una pequesima cantidad de
cloruro frrico (FeCl3). El fundamento de esta reaccin, igual que la reaccin de Molisch, Seliwanoff y otras, se
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
49
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

basa en la produccin de furfural o hidroximetil furfural cuando se calienta con cidos concentrados y la
reaccin de estos con otras sustancias dando productos coloridos, en este caso las pentosas dan color azul y
las hexosas dan color amarillo o caf. La reaccin de Seliwanoff sirve para diferenciar aldosas de cetosas.
Las cetosas reaccionan rpidamente mientras que las aldosas lo hacen lentamente. El reactivo es una
solucin de resorcinol 0.05% en HCl 1:3 recin preparado. Este compuesto es el que se condensa con el
furfural o sus derivados dando productos coloridos. El reactivo de lugol es una solucin de yodo en yoduro
de potasio. Este reactivo reacciona con algunos polisacridos como los almidones, glucgeno y ciertas
dextrinas formando un complejo de inclusin termolbil que se caracteriza por ser colorido, dando un color
diferente segn las ramificaciones que presenta la molcula.

EXPERIMENTO 1. ESTRUCTURA CRISTALINA


Examinar al microscopio los siguientes glcidos: glucosa, sacarosa, almidn y celulosa.
Registrar los resultados, realizando los dibujos o esquemas respectivos.

Evidencias de aprendizaje
1) Cules de estos glcidos tienen estructura cristalina? Por qu?

EXPERIMENTO 2. FORMACIN DE OSAZONAS DE ARABINOSA, GLUCOSA, FRUCTOSA,


GALACTOSA, MALTOSA Y LACTOSA (PROPIEDADES DE LOS GLCIDOS).
Agregar en un tubo de ensayo 0.1 g de alguno de los siguientes carbohidratos (arabinosa, glucosa,
fructosa, galactosa, maltosa o lactosa), 0.2 g de clorhidrato de fenilhidrazina (manejar con guantes
debido a que es neurotxica y cancergena), 0.3 g de NaCH3COO- (Acetato Sdico) y 4 mL de agua
destilada.
Agitar y cubrir el tubo con un tapn de papel procurando que no quede totalmente cerrado.
Colocar en bao Mara a ebullicin, agitando ocasionalmente.
Determinar el tiempo en que tardan en aparecer los precipitados y si lo hacen en fro o en caliente. La
arabinosa, glucosa, fructosa y galactosa precipitan en caliente, pero la maltosa y la lactosa en fro por lo
que despus de 20 minutos de calentamiento se deben retirar del fuego e inmediatamente enfriar en el hielo.
Observar al microscopio los cristales de la osazona que se le asign y la de los otros equipos.
Registrar sus resultados a travs de dibujos o esquemas de cada uno de los cristales.

Evidencias de aprendizaje
1) Por qu la glucosa, la manosa y la fructosa dan la misma osazona?

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
50
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

2) Escribir la reaccin que se efecta.

EXPERIMENTO 3. REACCIN DE MOLISCH-UDRANSKY.


Colocar en una gradilla 6 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 6.
Aadir a cada tubo 3 mL de las soluciones siguientes:

Tubo Solucin
1 Formaldehdo
2 Glucosa
3 Fructosa
4 Arabinosa
5 Sacarosa
6 Almidn
Agregar a todos los tubos 2 gotas del reactivo de Molisch-Udransky (solucin de alfa-naftol al 5% en
alcohol) y agitar para mezclar.
Aadir a todos los tubos en la CAMPANA DE EXTRACCIN 1 mL de H 2SO4 (cido Sulfrico)
PRECAUCIN!, estratificando (inclinando el tubo y dejando resbalar el cido LENTAMENTE por las
paredes). La reaccin es positiva si aparece en la interfase un anillo de color violeta.
Registrar sus resultados en la tabla siguiente.

Tubo Solucin Resultado


(positivo o negativo)
1 Formaldehdo
2 Glucosa
3 Fructosa
4 Arabinosa
5 Sacarosa
6 Almidn

Evidencias de aprendizaje
1) Diga por qu la solucin de formaldehdo da positiva la reaccin.
2) Se puede considerar como una reaccin til para diferenciar un glcido de otro? Por qu?
3) Qu utilidad puede tener la reaccin de Molisch-Udransky?
4) Escribir la reaccin que se efecta.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
51
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

EXPERIMENTO 4. REACCIN DE FEHLING.


Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5.
Aadir a cada tubo el reactivo de Fehling, agregando 2 mL de la solucin A ms 2 mL de la
solucin B y agitar hasta que se mezcle bien.
Posteriormente aadir a cada tubo 3 gotas de las soluciones como se muestra en la siguiente tabla:

Tubo Solucin
1 Glucosa
2 Fructosa
3 Arabinosa
4 Sacarosa
5 Almidn
Colocar los tubos en bao Mara a ebullicin durante 5 minutos.
Dejar enfriar a temperatura ambiente.
Observar y registrar sus resultados en la tabla siguiente.

Resultado Clasificacin:
Propiedad de monosacrido, disacrido o
Tubo Solucin (precipitado rojo o color
reductor o no reductor polisacrido
azul)
1 Glucosa
2 Fructosa
3 Arabinosa
4 Sacarosa
5 Almidn

Evidencias de aprendizaje
1) Qu azcares dan positiva la reaccin de Fehling?
2) Explicar por qu algunos azcares dan negativa la reaccin.
3) Mencionar 3 sustancias que usted considere puedan dar positiva la reaccin de Fehling y no sean azcares.
4) Escribir la reaccin que se efecta.

EXPERIMENTO 5. REACCIN DE BARFOED.


Preparar una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 4.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
52
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Aadir a cada tubo un volumen de 3 mL del reactivo de Barfoed.


Aadir a cada tubo 1 mL de las soluciones siguientes:

Tubo Solucin
1 Glucosa
2 Arabinosa
3 Lactosa
4 Maltosa
Colocar los tubos en bao Mara a ebullicin.
Observar y registrar el tiempo que tarda en aparecer el precipitado rojo de xido cuproso durante la
incubacin.
Registrar los resultados en la tabla siguiente.

Resultado Propiedad de Clasificacin:


Tubo Solucin monosacrido o disacrido
(precipitado rojo en minutos) reductor o no reductor
1 Glucosa
2 Arabinosa
3 Lactosa
4 Maltosa
Evidencias de aprendizaje
1) Escribir la reaccin que se efecta.

EXPERIMENTO 6. REACCIN DE BIAL.


Preparar una serie de 3 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 3.
Agregar a cada tubo 3 mL del reactivo de Bial PRECAUCIN!
Aadir a cada tubo 0.5 mL de las soluciones siguientes:
Tubo Solucin
1 Glucosa
2 Arabinosa
3 Agua
Colocar los tubos en bao Mara a ebullicin durante 5 minutos.
Retirar, diluir cada tubo con 5 mL de agua destilada y agregar 2 mL de CH3(CH2)3OH (n-Butanol).
Agitar los tubos, dejar reposar durante 5 minutos.
Observar y registrar sus resultados en la tabla siguiente.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
53
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Tubo Solucin Clasificacin Resultado


(pentosa o hexosa) (azul o amarillo)
1 Glucosa
2 Arabinosa
3 Agua

Evidencias de aprendizaje
1) Explicar las diferencias observadas.

EXPERIMENTO 7. REACCIN DE SELIWANOFF.


Preparar una serie de 3 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 3.
Aadir a cada tubo 1 mL de las soluciones siguientes:
Tubo Solucin
1 Glucosa
2 Fructosa
3 Agua
Aadir a cada tubo de ensayo 0.5 mL del reactivo de Seliwanoff. PRECAUCIN!
Colocar los tubos en bao Mara a ebullicin, y mantener exactamente por 60 segundos.
Sin retirar los tubos del bao Mra observar los cambios y registrar sus resultados.
Continuar calentando, observar el cambio de color a intervalos de 1 a 5 minutos y registrar sus
resultados. Las cetosas dan una coloracin rojo fuego y las aldosas la dan muy dbil y muy lentamente.
Registrar sus resultados en la tabla siguiente.

Resultados Clasificacin
Tubo Solucin
color minutos (aldosa o cetosa)
1 Glucosa
2 Fructosa
3 Agua
Evidencias de aprendizaje
1) Observar alguna diferencia en las soluciones?
2) Escribir la reaccin que se efecta.

EXPERIMENTO 8. REACCIN DEL LUGOL


Preparar 2 tubos de ensayo y etiquetar.
En el tubo 1 aadir 2 mL de solucin de almidn,
En el tubo 2 aadir 2 mL de glucgeno.
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
54
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

En ambos tubos agregar una gota de lugol y registrar el color producido en cada uno de ellos.
Colocar el tubo que contiene el almidn en bao Mara a ebullicin durante 5 a 10 minutos.
Dejar enfriar a temperatura ambiente.
Observar lo que sucede con la coloracin.
Registrar sus resultados.
Evidencias de aprendizaje
1) Por qu el complejo almidn-yodo es termolbil?
2) Se puede considerar la reaccin del lugol caracterstica para cualquier polisacrido?

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
55
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

PRCTICA No. 9
OXIDACIONES BIOLGICAS
La Bioenergtica es la manera en que el ser vivo, utiliza y transforma la energa del medio ambiente. A estos
procesos qumicos y fsicos se les denominaba respiracin. Sin embargo para evitar ambigedades con el proceso de
la entrada y salida de aire de un compartimiento a otro, se aplica el concepto bioqumico de bioenergtica,
incluyendo este trmino los procesos fotosintticos. Todos los procesos qumicos que constituyen la respiracin
conducen a la oxidacin de sustancias denominadas metabolitos, hasta CO2 y H2O. Por regla general todas las
reacciones de oxidacin son exergnicas, es decir, liberan energa cuando se efectan; en ocasiones toda la energa
se libera en forma de calor, como cuando se quema u oxida un pedazo de madera. Sin embargo un organismo
viviente no es una mquina trmica y, por tanto, debe poseer un mecanismo enzimtico que le permita capturar y
almacenar la energa liberada en los procesos de oxidacin. La utilizacin o captura de la energa involucra la
participacin de enzimas especficas capaces de catalizar la conversin del ADP en ATP (reaccin endergnica).

REACCIONES DE OXIDO REDUCCIN


Un compuesto qumico puede oxidarse de diferentes maneras. La oxidacin tpica es aquella en la cual el
oxgeno se une a un compuesto (oxigenacin), por prdida de hidrgeno (deshidrogenacin) y cuando se
oxida un compuesto perdiendo electrones o cuando gana valencias positivas.
Ejemplos de oxidaciones
Oxigenacin 2Cu + O2 2CuO
Deshidrogenacin H2S S0 + H2
-1e
Prdida de electrones o ganancia de valencia positiva
Fe Fe+++
++

Siempre que se efecta una oxidacin, simultneamente se efecta una reduccin. Es decir, cuando un compuesto
se oxida, otro forzosamente debe reducirse. Como son fenmenos que ocurren simultneamente se denominan
fenmenos de xido reduccin o reacciones REDOX.
La accin de una sustancia reductora como el hidrosulfito de sodio (NaHSO3), forma leucobases (incoloras)
cuando acta sobre colorantes oxidados como el azul de metileno (indicador de xido-reduccin). El proceso

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
56
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

inverso (oxidacin por prdida de hidrgeno) se puede realizar en diferentes condiciones y determinar el tiempo de
reaccin.
La mayor parte de la energa que utilizan los seres vivos deriva de los procesos de oxidacin, y en cada
oxidacin se desprende una determinada cantidad de energa que el organismo aprovecha para realizar las
funciones vitales y para efectuar fenmenos sintticos endergnicos. Todas las oxidaciones biolgicas se
caracterizan por su rapidez y por la suavidad con que se realizan, todas se llevan a cabo en medio acuoso, a pH
generalmente neutro y a bajas temperaturas. Esto hace pensar que todos estos procesos estn catalizados por
enzimas. Warburg fue uno de los primeros investigadores que trat de explicar las oxidaciones biolgicas
suponiendo una activacin del oxgeno. Actualmente se sabe que en los tejidos existe un sistema de enzimas
que contienen hierro, mediante el cual el oxgeno molecular se activa y acta como un agente oxidante. Wieland
Consideraba que el proceso bsico en la oxidacin de los metabolitos es la activacin del hidrgeno por la
accin de enzimas denominadas deshidrogenasas, las cuales transportan el hidrgeno a diferentes aceptores
que pueden ser el oxgeno u otros agentes oxidantes. Szent Gyrgyi concili las dos teoras al suponer que es
necesaria la activacin del hidrgeno y tambin la del oxgeno. Keilin supuso que interviene como eslabn
intermediario el citocromo. Sin embargo, las oxidaciones biolgicas no son tan sencillas, pues se ha
comprobado que en la oxidacin de cada metabolito interviene una gran cantidad de aceptores de hidrgeno. La
glucosa es el ms comn de los metabolitos debido a que es una molcula altamente reducida. Cuando se oxida
y pierde sus hidrgenos, la liberacin de energa de oxidacin no se realiza en forma brusca, sino que intervienen
varios transportadores de hidrgeno y se inicia por la accin de una deshidrogenasa especfica que no reacciona
directamente con el oxgeno sino que requiere de intermediarios como el NAD+, flavoprotenas y
citocromos. La DESHIDROGENASA SUCCNICA (DHS) cataliza la siguiente reaccin:

Por otro lado para la obtencin de la fraccin mitocondrial del hgado de ratn, se tiene que conocer que
el tejido heptico se dispersa en soluciones isotnicas, el ncleo y las mitocondrias permanecen relativamente
inalterados y pueden separarse con facilidad por centrifugacin diferencial.
La citocromo-oxidasa es la ltima enzima de la cadena respiratoria y es la responsable de la activacin del
oxgeno para oxidar a los citocromos. Tanto los citocromos como la citocromo-oxidasa son metaloprotenas
(porfirinas). La citocromo-oxidasa se caracteriza por su elevada sensibilidad al cianuro (CN) y al monxido de
carbono (CO). En el ao de 1885 Ehrlich report la reaccin del indofenol. Observ que inyectando alfa naftol y
dimetil-para-fenilendiamina en animales se formaba en los tejidos una sustancia azul llamada azul de indofenol. La
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
57
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

enzima se denomin indofenol-oxidasa, pero posteriormente se ha podido comprobar que esta enzima slo oxida al
citocromo c, el cual a su vez oxida al indofenol; por lo cual ahora se le conoce como citocromo-oxidasa.

EXPERIMENTO 1. OXIDACIN POR PRDIDA DE ELECTRONES


En un matraz provisto de tapn con vlvula de BUNSEN, agregar 0.5g de fibra de hierro (Fe) y 5
mL de H2SO4 (cido Sulfrico) al 10%.
Calentar a ebullicin y observar la disolucin parcial del Fe (Fierro elemental), formando con el
H2SO4 al 10% el producto FeSO4 (Sulfato Ferroso), mediante la siguiente reaccin:
Fe + H2SO4 FeSO4 + H2 .
Dejar enfriar a temperatura ambiente sin retirar la vlvula ya que esta deja escapar el hidrgeno, pero
impide la entrada de aire evitando as la oxidacin de la sal ferrosa a sal frrica.
Una vez enfriada la solucin diluir el FeSO4 obtenido, con 50 mL de agua destilada.
Seguidamente, con un plumn divida un mosaico blanco (proporcionado en su charola de material de
laboratorio) en cuadrantes, como se indica en la figura.

Cuadrante Cuadrante superior


superior derecho
izquierdo

Cuadrante inferior Cuadrante inferior


izquierdo derecho

En el cuadrante superior izquierdo agregar 1 gota de solucin de FeSO4 y 1 gota de (K3[Fe(CN)6])


(Ferricianuro de Potasio). La aparicin de un color o precipitado azul indicar la presencia de sales
ferrosas.
En el cuadrante superior derecho agregar 1 gota de la solucin de FeSO4 y 1 gota de KSCN
(Sulfocianuro de Potasio) al 0.5%. La aparicin de un color rojo intenso indicar la presencia de sales
frricas.
A continuacin se oxidar la sal ferrosa a sal frrica, aadir en un matraz Erlenmeyer 10 mL de la
solucin de FeSO4 y 3 mL de H2SO4 al 10%, calentar a ebullicin agregando gota a gota una solucin de
KMnO4 (Permanganato de Potasio) 0.1 M hasta que persista un color rosa plido.
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
58
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Para comprobar el paso de sal ferrosa a sal frrica, repetir las reacciones con K3[Fe(CN)6] al 0.5% y
KSCN al 0.5% en los cuadrantes inferiores del mosaico.
Registrar los resultados (positivo, si observa presencia de sales ferrosas o frricas o negativo si no
observa nada) en la tabla siguiente.
Solucin K3[Fe(CN)6] KSCN
Sulfato ferroso
Sulfato frrico
Evidencias de aprendizaje
1) Escribir las reacciones de identificacin que se han efectuado en cada caso.
2) Si el KMnO4 es capaz de oxidar al sulfato ferroso, Qu compuesto se reduce?
3) Escribir la reaccin de xido-reduccin que se ha efectuado.

EXPERIMENTO 2. OXIDACIN POR DESHIDROGENACIN


Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5.
Aadir a cada tubo 5 mL de una solucin diluida de azul de metileno.
Aadir al tubo 1 gota a gota una solucin recin preparada de Na2S2O4 (Hidrosulfito de Sodio) y contar el
nmero de gotas necesarias para decolorar completamente la solucin de azul de metileno. Repetir este paso para
los tubos 2 al 5.
Someter los tubos a los tratamientos fsicos siguientes:
Tubo Tratamientos
1 Testigo Dejar en reposo y registrar el tiempo hasta la reoxidacin del azul de metileno.
2 Calor Colocar en bao Mara a ebullicin y registrar el tiempo para recuperar su color azul.
Agitar enrgicamente a temperatura ambiente y registrar el tiempo hasta recuperar
3 Temp. Amb.
su color azul.
Agregar una gota de H2O2 (Perxido de Hidrgeno) al 0.4% y mezclar. Continuar
4 H2O2 agregando el nmero de gotas necesarias para reoxidar al azul de metileno (Contar y
registrar)
Agregar una gota de FeCl3 (Cloruro Frrico) al 1 y mezclar. Continuar agregando el
5 FeCl3
nmero de gotas necesarias para reoxidar al azul de metileno (Contar y registrar)
Registrar sus resultados en la tabla siguiente.
Tubo 1 2 3 4 5
Testigo Calor Temp. Amb. H2O2 FeCl3
Tiempo o nmero de gotas para la
reoxidacin del azul de metileno.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
59
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Evidencias de aprendizaje
1) Escribir la reaccin qumica que se ha efectuado en cada caso.
REACCIONES BIOLGICAS DE OXIDO-REDUCCIN
EXPERIMENTO 3. OBTENCIN DE LA FRACCIN MITOCONDRIAL DEL TEJIDO
HEPTICO
Sacrificar un ratn, extraer el hgado y depositar en un mortero fro.
Macerar hasta obtener una masa homognea.
Aadir gradualmente 7 volmenes de KCl (Cloruro de Potasio) 0.15 M fro.
Vaciar el contenido del mortero en un tubo Falcon de 15 mL.
Centrifugar a 500 rpm durante 15 minutos a 4oC.
Separar el sobrenadante a otro tubo Falcon limpio, aforar a 7 mL con KCl 0.15M y nuevamente centrifugar
a 3000 rpm durante 15 minutos a 4oC.
Durante este tiempo de centrifugacin, preparar un tubo de ensaye con la etiqueta de SOBRENADANTE
DE HGADO y otro tubo de ensaye con la etiqueta de SUSPENSIN DE HGADO y mantenerlos en
fro. Estos sern utilizados ms adelante.
Terminado el centrifugado, separar el sobrenadante en el tubo de ensaye con la etiqueta de
SOBRENADANTE DE HGADO y conservar en fro.
Posteriormente, el residuo o pellet que quede en el Tubo Falcon aadir 7 mL de KCl 0.15M para resuspender
y vaciar en el tubo de ensaye con la etiqueta de SUSPENSIN DE HGADO. Conservar en fro.
EXPERIMENTO 4. DEMOSTRACIN DE LA ACTIVIDAD DE LA SUCCINATO
DESHIDROGENASA.
Preparar una serie de 6 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 6.
Agregar los reactivos segn se indica en la tabla siguiente:

Reactivo 1 2 3 4 5 6
Tubo
Azul de metileno 0.002M mL 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3
Succinato de sodio 0.1M mL --- 0.5 0.5 --- 0.5 0.5
Malonato de sodio 0.1M mL --- --- 0.5 --- --- 0.5
Agua destilada mL 1.5 1.0 0.5 1.5 1.0 0.5
Suspensin de hgado mL 0.5 0.5 0.5 --- --- ---
Sobrenadante de hgado mL --- --- --- 0.5 0.5 0.5
Mezclar bien el contenido de cada tubo y aadir
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
60
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Vaselina mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5


Una vez agregada la vaselina no agitar el contenido de los tubos e incubar en bao Mara de 37-40C.
Registrar sus resultados, realizando lecturas en los tiempos 0, 5, 10 y 15 minutos, considerando el grado
de decoloracin con cruces (de una a tres) en la tabla siguiente:
Tubo
1 2 3 4 5 6
Tiempo
0 min.
5 min.
10 min.
15 min.
Evidencias de aprendizaje
1) En cul de las fracciones de hgado deben encontrarse las mitocondrias y por qu?
2) Describir cmo acta el malonato de sodio en esta reaccin.
3) Explicar sus resultados sobre la base del anlisis del contenido de cada tubo.

EXPERIMENTO 5. LOCALIZACIN Y DEMOSTRACIN DE LA ACTIVIDAD DE LA


CITOCROMO-OXIDASA
Preparar una serie de 10 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 10.
Agregar los reactivos segn se indica en la tabla siguiente:
Reactivo Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Alfa naftol al 0.15% en etanol al 10% mL 0.5 --- 0.5 0.5 0.5 0.5 --- 0.5 0.5 0.5
Dimetil-para-fenilendiamina al 0.15% mL 0.5 0.5 --- 0.5 0.5 0.5 0.5 --- 0.5 0.5
Agua destilada mL 1.0 1.5 1.5 2.0 0.5 1.0 1.5 1.5 2.0 0.5
KCN al 0.01% NO PIPETEAR mL
--- --- --- --- 0.5 --- --- --- --- 0.5
0.5 mL = 10 gotas
Sobrenadante de hgado mL 1.0 1.0 1.0 --- 1.0 --- --- --- --- ---
Suspensin de hgado mL --- --- --- --- --- 1.0 1.0 1.0 --- 1.0
Agitar los tubos y dejar incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos.
Observar la aparicin del azul de indofenol y registrar los resultados en la tabla siguiente.
Tubo
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo
0 min.
5 min.
10 min.
15 min.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
61
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Evidencias de aprendizaje
1) Escribir la reaccin de formacin del azul de indofenol.
2) Explicar por qu no se us vaselina en este experimento.
3) Explicar sus resultados sobre la base del anlisis del contenido de cada tubo.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
62
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

PRCTICA No. 10
LPIDOS
Este es un conjunto heterogneo de molculas orgnicas cuyas propiedades comunes son su insolubilidad en
agua y solubilidad en solventes no polares como el benceno, cloroformo, ter, etc. Por lo que este grupo
incluye sustancias de muy diversa estructura. Suelen ser molculas de nmero relativamente alto de tomos
de carbono e hidrgeno y bajo en tomos de oxgeno; ciertos lpidos tambin poseen tomos de fsforo,
nitrgeno y azufre en su molcula. Cualquier clasificacin presenta sus limitaciones y la nomenclatura puede
producir falsas interpretaciones ya que idntica terminologa ha sido empleada por diferentes autores para
denominar a distintos grupos de lpidos. Los lpidos son los compuestos ms recientemente estudiados por
ejemplo: prostaglandinas, tromboxanos, leucotrienos, etc., ya que este tipo de sustancias hace poco se
consideraban complejas y de poco inters. Las funciones de los lpidos son muy variadas y las ms aceptadas
actualmente son las siguientes:
a) Funcin estructural, principalmente en las membranas celulares,
b) Actan como material energtico y de reserva,
c) Intervienen en el transporte de compuestos energticamente activos,
d) Componentes protectores de la pared celular de ciertas bacterias, plantas, insectos y vertebrados,
e) Sustancias de gran actividad biolgica como vitaminas y hormonas; las cuales se consideran como
verdaderos reguladores metablicos,
f) Actan como aislante trmico y proteccin alrededor de determinados rganos
Una de las formas de identificacin en la prctica es la reaccin de Hanus a travs del grado de insaturacin
de los cidos grasos que forman parte de un lpido es uno de los factores determinantes de sus propiedades
fsicas, qumicas y fisiolgicas. Se ha observado que aparecen ms dobles enlaces en los triacilgliceroles de
almacenamiento y en los lpidos estructurales cuando la temperatura ambiente disminuye. Los dobles
enlaces disminuyen el punto de fusin por lo que se cree que sea un mecanismo del organismo para impedir
la cristalizacin de los lpidos en los tejidos. El reactivo de Hanus es una solucin de yodo y bromo que
nos permite determinar el grado de insaturacin de un lpido midiendo la capacidad que tiene para fijar
halgenos en su molcula. Una de las reacciones ms usadas para la identificacin de acilglicridos es la
formacin de acrolena o aldehdo acrlico, el cual se puede obtener por deshidratacin del glicerol o de
cualquier glicrido y se reconoce fcilmente por su fuerte olor acre caracterstico.
En esta prctica de lpidos no podemos dejar de mencionar a las membranas ya que hacen posible la
existencia de organismos complejos porque separan las clulas en el interior de los tejidos y los organelos
celulares, formando compartimientos con propiedades fisicoqumicas diferentes, lo que permite una diferente

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
63
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

organizacin; y cada compartimiento se vuelve una parte individual de un conjunto ms complejo. Se ha


comprobado que las membranas son complejos lipoproticos que contienen de 60% a 75% de protena y
de 25% a 40% de lpidos. En este experimento se usarn monocapas lipdicas como modelos de membrana.
Al estratificar butanol sobre agua y agregar un lpido, ste se situar en la interfase, orientandose la parte
polar lipdica a la fase acuosa, y la parte hidrofbica a la fase orgnica. Si ahora se coloca un colorante
se puede observar la difusin pasiva a travs de la membrana.
La reacin de LIEBERMANN-BURCHARDS, es a travs de que el anhdrido actico se puede condensar
con los grupos OH en posicin 3 de los esteroles como en el colesterol y dar los correspondientes steres. Si
el esterol tiene un doble enlace en posicin 5, se produce adems una epimerizacin y una deshidratacin
en presencia de cido sulfrico (H2SO4) concentrado, dando como resultado una serie de compuestos de
estructura desconocida que se caracterizan por tener colores que van del rojo al azul y del azul al verde.
Esta reaccin es por lo tanto especfica para todos los esteroles que contengan un OH en posicin 3 y un
doble enlace en posicin 5.

EXPERIMENTO 1. REACCIN DE HANUS.


Preparar una serie de 4 tubos de ensayo etiquetar y numerar del 1 al 4.
Aadir a cada tubo 6 mL de las soluciones siguientes:
Tubo Solucin
1 Solucin clorofrmica al 10% de aceite de algodn
2 Solucin clorofrmica al 10% de aceite de crtamo
3 Solucin clorofrmica al 10% de monoestearilglicerol
4 Solucin clorofrmica al 10% de aceite de ricino
Aadir a cada tubo 10 gotas del reactivo de Hanus y agitar vigorosamente.
Proteger de la luz con una bolsa negra y colocar debajo de la mesa.
Registrar lecturas a tiempos de 20, 40, 60 y 80 minutos, observando el grado de decoloracin de cada tubo
en la tabla siguiente:

Lpido Lecturas 20 min. 40 min. 60 min. 80 min.


Aceite de algodn
Aceite de Crtamo
Monoestearilglicerol
Aceite de ricino
Nota: Puede interpretar la decoloracin de la siguiente forma: +++++= Rosa intenso, +++=Rosa plido += decolorado

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
64
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

EXPERIMENTO 2. EXTRACCIN DE LPIDOS DE CEREBRO.


Macerar completamente la muestra de cerebro en un mortero, hasta obtener una consistencia homognea.
En este paso NO AGREGAR NINGN TIPO DE SOLUCIN, hasta obtener la consistencia deseada.
Agregar gradualmente 20 mL de una mezcla 200:100:1 de cloroformo-metanol-cido clorhdrico y con
el pistilo del mortero mezclar perfectamente bien.
Agregar 2 mL de HCl 1N (NO OLVIDAR), mezclar y vaciar el contenido en tubo Falcon para
posteriormente centrifugar a 2000 rpm durante 10 minutos.
Despus de centrifugado el tubo, separar la fase metanlica, el paquete celular y la clorofrmica.
Desechar el paquete celular. La fase Clorofrmica se usar para la identificacin del colesterol,
(separacin cromatogrfica de fosfolpidos y la formacin de membranas) y la Metanlica servir para la
identificacin de cerebrsidos.
Registrar sus resultados.

EXPERIMENTO 3. IDENTIFICACIN DE FOSFOLPIDOS DE CEREBRO POR CROMATOGRAFA


EN CAPA FINA.
De la fase clorofrmica obtenida en el experimento anterior y con la ayuda del Profesor aplicar una gota
con una pipeta Pasteur en una cromatoplaca, aproximadamente a 2 cm de altura de la base. Repetir el
mismo procedimiento en otra cromatoplaca.
Permitir que el cloroformo se evapore e introducir en una cmara de vidrio que contenga como solvente
de elucin, una mezcla de cloroformometanolcido acticoagua (65:25:8:4).
Dejar desarrollar las cromatoplacas hasta el frente del solvente ya marcado; retirar las cromatoplacas y
dejarlas secar.
Una cromatoplaca se revelar con ninhidrina que pondr de manifiesto la presencia de los
fosfoaminolpidos, la reacccion se lleva a cabo al calentarse a 100C por 10 minutos.
La otra cromatoplaca ser revelada en cmara de Iodo sublimado.
Registrar sus resultados.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
65
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

EXPERIMENTO 4. REACCIONES DE IDENTIFICACIN DE LPIDOS Y DE CEREBRSIDOS


Utilizar 1 mL de la fase metanlica obtenido en la extraccin de lpidos de cerebro y compruebe la
presencia de cerebrsidos utilizando la reaccin de MolischUdransky cuya tcnica y fundamento ya han
sido descritos anteriormente (Prctica No. 8 Glcidos)
Registrar sus resultados.

EXPERIMENTO 5. REACCIN DE LA ACROLENA


Preparar 2 tubos de ensayo y etiquetarlos.
Agregar a los dos tubos de ensayo una pequea cantidad de bisulfato de potasio (KHSO4).
A un tubo de ensayo aadir 5 gotas de glicerina.
A otro tubo de ensayo agregar 5 gotas de cualquiera de estas soluciones: aceite de algodn, crtamo o
girasol.
Colocar en Bao Mara a ebullicin hasta observar el desprendimiento de los vapores.
Retirar los tubos y percibir los vapores de forma indirecta y tratar de identificarlos. PRECAUCIN!
Registrar los resultados.

Evidencias de aprendizaje
1) Se puede considerar esta reaccin general para cualquier lpido? Por qu?
2) Escribir la reaccin que se ha efectuado.

EXPERIMENTO 6. REACCIN DE LIEBERMANN-BURCHARDS


NOTA: La siguiente reaccin debe realizarse exclusivamente bajo la supervisin del profesor
Preparar 2 tubos de ensayo y etiquetarlos.
En el tubo 1 agregar 3 mL de solucin clorofrmica de colesterol puro.
En el tubo 2, agregar 3 mL de la fase clorofrmica obtenido de la extraccin de lpidos de cerebro en el
experimento 2.
Aadir a ambos tubos, 1 mL de (CH3CO)2O (Anhdrido Actico) y mezclar.
Finalmente aadir 1 mL de H2SO4 concentrado de forma lenta, resbalndolo por las paredes del tubo.
Registrar los resultados.

Evidencias de aprendizaje
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
66
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

1) Describir los cambios de coloracin que se llevaron a cabo.

EXPERIMENTO 7. PERMEABILIDAD DE LA BICAPA LIPDICA


Preparar una serie de 4 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 4.
Agregar los reactivos segn se indica en la siguiente tabla. Al aadir las soluciones, realizar con mucho
cuidado resbalando por las paredes del tubo para estratificar.

Reactivo Tubo 1 2 3 4
Agua destilada mL 5 5 5 5
Azul de metileno ms monoestearato de glicerilo en butanol mL 2 --- --- ---
Azul de metileno ms fosfolpidos en butanol* (VER NOTA) mL --- 2 --- ---

NOTA: A 2 mL de la fase clorofrmica (Obtenida del exp. 2)


evaporar hasta sequedad en Bao Mara a ebullicin (cuidando
que no se queme), el residuo disolver con 2 mL de azul de
metileno en butanol y agregar este contenido al tubo 2 de la serie.
Azul de metileno ms colesterol en butanol mL --- --- 2 ---
Azul de metileno en butanol mL --- --- --- 2
Dejar los tubos en reposo procurando moverlos lo menos posible y haga observaciones a las 2, 4, y 24 horas.
Registrar los resultados.

Evidencias de aprendizaje
1) Observ el paso del colorante en todos los tubos? Explique a qu se debe esa diferencia.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
67
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

PRCTICA No. 11
CIDOS NUCLEICOS
El control de todos los procesos vitales en la forma tan ordenada que realiza una clula, como son la
transformacin de energa en sus diferentes formas, la sntesis de molculas propias, la degradacin de los
metabolitos, el transporte de diferentes materiales a travs de sus membranas, la formacin de nuevas clulas, la
diferenciacin celular, la creacin de nuevos seres, etc.; se puede explicar debido a la existencia de protenas
especficas, fundamentalmente enzimas. Sin embargo, para la biosntesis de protenas las molculas que
poseen la informacin necesaria son el cido desoxirribonuclico (DNA) y el cido ribonuclico (RNA). Estas
molculas son los llamados cidos nuclicos. Rompiendo la mxima bioqumica de que todas las enzimas son
protenas, se descubri que algunos RNA pueden funcionar como catalizadores. Los cidos nuclicos reciben
este nombre debido a que en el ao de 1871 el qumico suizo Friedrich Miescher logr aislar del ncleo
celular una sustancia que llam nuclena, la cual debido a su carcter cido se denomin posteriormente cido
nucleico.
Sin embargo, existen otros tipos de cidos nuclicos. El cido desoxirribonuclico se encuentra
fundamentalmente en el ncleo y es el que posee la informacin gentica y la transmite al citoplasma y por ser
capaz de replicarse puede transmitir la informacin de padres a hijos. En la clula, fuera del ncleo,
normalmente existen tres tipos de cidos ribonuclicos que son: el cido ribonuclico ribosomal (RNAr), el
cido ribonuclico mensajero (RNAm), y el cido ribonuclico soluble o de transferencia (RNAt). El RNAr se
encuentra en los ribosomas y su peso molecular es de 2 000 000. El RNAm tiene un peso molecular de 300 000,
se forma en el ncleo y lleva la informacin al citoplasma. El RNAt tiene un peso molecular de 25 000 a 30
000 y se encuentra disuelto en el citoplasma. El DNA es una de las biomolculas ms grandes que se conocen
hasta ahora y su peso molecular es mayor a un billn.
Tanto el DNA como el RNA se encuentran asociados con protenas fuertemente bsicas (histonas o
protaminas) formando las llamadas nucleoprotenas. La estructura qumica es similar en todos los cidos
nuclicos, todos estn constituidos por bases pricas, bases pirimdicas, pentosa y cido fosfrico. El DNA
tiene como bases pricas adenina y guanina, como bases pirimdicas, citosina y timina, como pentosa la 2-
desoxiribosa y cido fosfrico H3PO4. Los cidos ribonuclicos tienen como bases pricas la adenina y
guanina y como bases pirimdicas uracilo y citosina, como pentosa la Dribosa y H3PO4.
Los cidos nuclicos son macromolculas formadas por la unin de varios nucletidos. Un nucletido se puede
considerar como un ster fosfrico de un nuclesido, que es la unin de una base prica o pirimdica con

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
68
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

una pentosa. Los mononucletidos se unen entre s por medio de un enlace fosfodiester 3- 5, formando los
polinucletidos.
Por otro lado cuando se desea purificar una sustancia se deben seleccionar las clulas o tejidos que se van a
utilizar como materia prima. En el caso del DNA esta seleccin es en especial importante porque el contenido
de DNA es pequeo en la mayor parte de las clulas. La clula ideal ser aquella que tenga una relacin
ncleo/citoplasma alta, como en los linfocitos y clulas del tumor asctico de Ehrlich. Sin embargo, no es
fcil obtener este tipo de clulas por lo que frecuentemente se usan rganos tpicamente linfoides como el timo
y el bazo. El primer paso en la extraccin del DNA es la homogeneizacin del tejido. Este paso puede
degradar en parte la molcula del DNA si no se toman las precauciones necesarias, la solucin reguladora es de
citrato 0.01M y NaCl 0.14M, a pH de 7.2 a 7.4; la fuerza inica de esta solucin hace insoluble a la
desoxirribonucleoprotena. Si se centrifuga este homogeneizado, en el residuo quedarn los restos celulares y
las desoxirribonucleoprotenas insolubles. En el sobrenadante se encuentran compuestos solubles como la
mayor parte de los cidos ribonuclicos.
Al homogeneizar el tejido se liberan las enzimas de los lisosomas, entre ellas la DNAasa, la cual hidroliza el
DNA. Se sabe que el Mg++ es indispensable para la actividad de esta enzima; si en la solucin existe citrato,
ste se une al Mg++ e impide la accin de la DNAasa. Otra forma de evitar la accin hidroltica de la enzima
es trabajar a temperaturas bajas (0C a 2C). El siguiente paso en la purificacin est basado en que las
desoxirribonucleoprotenas y el DNA son solubles en soluciones salinas concentradas, mientras que la
mayor parte de las protenas precipitan en estas condiciones. Si el residuo se suspende en solucin de NaCl
2.6M y se centrifuga, el residuo insoluble estar formado fundamentalmente por protenas, mientras que el
DNA permanecer en solucin. Este DNA se puede precipitar selectivamente por la adicin selectiva de 2
volmenes de alcohol etlico al 95% formndose un precipitado blanco fibroso, el cual se puede recoger por
rotacin de un agitador de vidrio con pequeos salientes.
Existen varios mtodos para identificar y cuantificar a los cidos nuclicos. El mtodo ms utilizado es el
espectrofotomtrico, el cual est basado en que tanto el DNA como el RNA absorben a 260 nm. La absorbancia
es proporcional a la concentracin del cido, por lo tanto, el medir la absorbancia es un mtodo cuantitativo
muy sensible y sencillo, pero no distingue entre DNA y RNA. Es de gran utilidad cuando las muestras estn
puras. Una reaccin muy utilizada para identificar y cuantificar DNA es la llamada reaccin de Dische, la cual
est basada en que el reactivo de difenilamina reacciona especficamente con el DNA dando una coloracin
azul cuya intensidad es proporcional a la concentracin de DNA. En realidad, la especificidad de esta
reaccin no es absoluta, ya que la difenilamina es un reactivo especfico para las 2-desoxipentosas en general,
pero en condiciones normales la cantidad de azcares capaces de interferir es despreciable.
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
69
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

EXPERIMENTO 1. OBTENCIN DEL DNA DE BAZO.

Agregar 300 mL de solucin reguladora de Citrato 0.01M-NaCl 0.14M, pH=7.2 fra, en un vaso de
licuadora previamente enfriado.
Hacer funcionar la licuadora a baja velocidad y aadir los trozos de bazo de todos los equipos, esperar a
que se homogenice completamente el primero antes de aadir el segundo y as sucesivamente.
Terminada la adicin, continuar homogeneizando por 30-60 segundos ms.

Vaciar a tubos Falcon de 50 mL teniendo cuidado de tarar perfectamente los tubos opuestos
PRECAUCIN! (CONSULTE A SU MAESTRO).
Centrifugar a 5000 rpm durante 15 minutos.

Al terminar la centrifugacin, DESECHAR EL SOBRENADANTE, tener cuidado de NO DESECHAR


EL RESIDUO INSOLUBLE O BOTN.
Aadir al botn 15 mL de solucin de Citrato 0.01M-NaCl 0.14M, pH=7.2 fra, homogenizar y
centrifugar a 5,000 rpm durante 5 min para lavar el DNA.
Desechar el sobrenadante cuidando de no perder el botn de precipitado.
Aadir 15 mL de solucin de NaCl 2.6 M fra al residuo insoluble que contiene el DNA y residuos celulares.

Agitar el tubo hasta obtener un completo homogenizado. El DNA es soluble en esta solucin mientras que
la mayor parte de las protenas son insolubles.
Centrifugar a 8000 rpm durante 30 minutos.

Al terminar la centrifugacin, SEPARAR EL SOBRENADANTE que contiene el DNA en solucin en


unvaso de precipitados de 100 mL y DESECHAR EL RESIDUO INSOLUBLE, que contiene restos
celulares y protenas insolubles.
Al sobrenadante que se encuentra en el vaso de precipitados aadir lentamente 30 mL de alcohol etlico
al 95%, procurando que la fase alcohlica quede en la parte superior.
Observar la formacin de un precipitado blanco, denso, en la interfase.

Registrar los resultados.

Evidencias de aprendizaje
1) Explicar por qu se utiliz bazo como materia prima y no otro rgano cualquiera.
2) Sera conveniente utilizar solucin reguladora de fosfatos para la extraccin del DNA? Por qu?
3) Por qu es conveniente trabajar durante toda la extraccin a baja temperatura?

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
70
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

EXPERIMENTO 2. CARACTERIZACIN Y ANLISIS CUANTITATIVO DEL DNA.


Preparar una serie de 6 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 6.
Aadir a cada tubo las soluciones segn se indica en la tabla siguiente:
Tubo
s 1 2 3 4 5 6
Solucin[DNA] mg/mL
1 mL 2
0.5 mL 2
0.25* mL 2
0.125* mL 2**
Problema mL 2
Agua destilada mL ---- 2 2 2 2 ---
Volumen final mL 2 2 2 2 2 2
Nota: *Estas concentraciones son a partir de la transferencia de 2 mL de la mezcla
anterior del tubo.
**En este tubo del volumen final de 4 mL, pipetear 2 mL y descartarlo.
Aadir a todos los tubos 4 mL de reactivo de Dische y agitar vigorosamente.
Incubar los tubos en bao Mara a ebullicin por 10 minutos.
Enfriar los tubos en bao de hielo-agua para leer en el espectrofotmetro.
Leer en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 600 nm, empleando el tubo 5 como blanco.
Registrar los resultados en la tabla siguiente.

[DNA]
Tubo Absorbancia
mg/mL
1 1
2 0.5
3 0.25
4 0.125
5 -------- Blanco
6 Problema
Evidencias de aprendizajes
1) Construir la curva tipo con los datos de la tabla, donde las absorbancias sern las ordenadas y los mg de
DNA las abscisas.

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
71
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

2) Interpolar la absorbancia del tubo No. 6 para encontrar la concentracin de DNA (mg/mL) y calcular la
cantidad total de DNA en su problema.

EXPERIMENTO 3. CARACTERIZACIN Y ANLISIS CUANTITATIVO DEL RNA


Preparar una serie de 6 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 6.
Aadir a cada tubo las soluciones segn se indica en la tabla siguiente:
Tubo
s 1 2 3 4 5 6
Solucin[RNA] mg/mL
0.1 mL 3
0.05 mL 3
0.025* mL 3
0.0125* mL 3**
Problema mL 3
Agua destilada mL ---- 3 3 3 3 ---
Volumen final mL 3 3 3 3 3 3
Nota: *Estas concentraciones son a partir de la transferencia de 3 mL de la mezcla
anterior del tubo.
**En este tubo del volumen final de 6 mL, pipetear 3 mL y descartarlo.
Aadir a todos los tubos 6 mL del reactivo de orcinol cido y 0.4 mL del reactivo de orcinol-alcohol y
agitar vigorosamente.
Incubar los tubos en bao Mara a ebullicin por 10 minutos.
Enfriar los tubos en bao de hielo-agua para leer en el espectrofotmetro.
Leer en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 660 nm, empleando el tubo 5 como blanco.
Registrar los resultados en la tabla siguiente.

Tubo [RNA] mg/mL Absorbancias


1 0.1
2 0.05
3 0.025
4 0.0125
5 ------- Blanco
6 Problema
Evidencias de aprendizajes

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
72
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

1) Construir la curva tipo con los datos de la tabla, donde las absorbancias sern las ordenadas y los mg de
RNA las abscisas.
2) Interpolar los valores de absorbancia de su problema y determinar la concentracin real en mg/mL.

EXPERIMENTO 4. DETERMINACIN DE FOSFATO TOTAL


Preparar una serie de 6 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 6.
Aadir a cada tubo las soluciones segn se indica en la tabla siguiente:

Tubo
Reactivo 1 2 3 4 5 6
Buffer de acetato 0.1M pH 4.0 mL 7 7 7 7 8 8
Reactivo molibdato al 2.5% mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Solucin de vitamina C al 1% reciente mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Agua destilada mL 2
Solucin tipo 1 M/mL 2
Solucin tipo 2.5 M/mL 2
Solucin tipo 5 M/mL 2
Problema DNA 1
Problema RNA 1

Incubar los tubos a temperatura ambiente por 10 minutos.


Leer en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 660 nm, empleando el tubo 1 como blanco.
Registrar los resultados en la tabla siguiente

Tubo [FOSFATO] Absorbancia


M/mL
1 ------- Blanco
2 1
3 2.5
4 5
5 Problema DNA
6 Problema RNA

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
73
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN

Evidencias de aprendizajes
1) Construir la curva tipo para fosfato con los datos de la tabla, donde las absorbancias sern las ordenadas y
los M/mL de las soluciones tipo las abscisas.
2) Cmo afecta el medio cido al enlace 3-5dister fosfato?
3) Cmo afecta el medio alcalino al enlace 3-5dister fosfato?

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I


AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
74