UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE

CURSO: ENGENHARIA AMBIENTAL

COMPONENTE: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
DOCENTE: VANESSA BECKER

DISCENTES: Matheus Dantas Godeiro

Nayane Dafyne Vieira Barreto
Vilma Arajo da Costa

RELATRIO DE AULAS PRTICAS

TESTE DE GRAM E IDENTIFICAO DE CIANOBACTRIAS

NATAL
08/2017
 AULA PRTICA 1
COLORAO DE GRAM

1 INTRODUO
A forma das bactrias uma caracterstica gentica e, geralmente, so
monomrficas, isto , mantm uma nica forma. Entretanto, algumas condies
ambientais e de cultivo podem fazer com que os organismos apresentem formas
ou arranjos diferentes. No entanto, apesar de quimicamente distintas do meio
que as rodeiam, as bactrias so quase incolores no apresentando contraste
suficiente com o meio em que se encontram, o que dificulta sua visualizao.
Para facilitar a observao dessas bactrias, uma forma simples atravs da
colorao. Os mtodos de colorao mais empregados em bacteriologia mdica
so os de Gram e de Ziehl-Neelsen.

Para compreender melhor foi realizado o mtodo de colorao Gram. O

termo Gram origina do nome de Christian Gram, pesquisador dinamarqus que,
em 1884, desenvolveu, de maneira emprica, o mtodo de colorao que passou
a ter o seu nome e que permite dividir as bactrias em dois grandes grupos:
Gram-positivos e Gram-negativos. o mtodo de colorao mais empregado em
bacteriologia. Essencialmente, separa as bactrias em dois grandes grupos:
GRAM POSITIVAS (G+/GP) e GRAM NEGATIVAS (G-/GN) e com isso
possibilita o diagnstico prvio, antes mesmo da identificao do microrganismo
causador de infeco, como tambm, evidenciar a contaminao a partir de
diferentes materiais.

2 OBJETIVO
Identificar e/ou confirmar a contaminao por bactrias em esfregao de
material colhido em diversas reas do corpo ou de colnias isoladas em meios
de cultura slidos e/ou lquidos para utilizao da tcnica de colorao de gram.
3 MATERIAIS E MTODOS

O mtodo, ou tcnica de Gram, consiste, essencialmente, no tratamento

sucessivo de um esfregao bacteriano, fixado pelo calor, com os seguintes
reagentes: cristal violeta, lugol, lcool e fucsina, como mostra a Figura 1.
Toda bactria, quer seja Gram-positiva, quer seja Gram negativa, absorve
de maneira idntica o cristal violeta e o lugol, adquirindo a cor roxa devido ao
complexo formado pelas duas substncias na parede, membrana e no
citoplasma da clula. Entretanto, ao serem tratadas pelo lcool, apresentam
comportamentos diferentes: as Gram-negativas tem a porosidade ou
permeabilidade aumentada devido a extrao dos lipdeos, assim o complexo
cristal violeta-iodo (CVI) pode ser retirado e as mesmas so descoradas; a
parede celular das Gram-positivas, devido sua composio diferente, no se
deixa descorar pelo lcool, pois torna-se desidratada, a porosidade diminui, a
permeabilidade reduzida e o complexo CVI no extrado.
Logo, ao receber a fucsina, somente as Gram-positivas se deixam corar,
adquirindo a cor vermelha do corante. Assim, quando se examina ao microscpio
um esfregao bacteriano corado pelo mtodo de Gram, as bactrias Gram
positivas se apresentam de cor roxa e as Gram-negativas, de cor avermelhada.
Figura 1 Determinao na Colorao de Gram

Fonte: Adaptado (Copyright2010. Pearson Education, Inc).

SOLUES EMPREGADAS:
CRISTAL VIOLETA - funo: corante principal (corar igualmente todas as
bactrias);
 Figura 2 Lmina aps a adio de corante cristal violeta.

LUGOL (soluo de iodo-iodeto de potssio) - funo: mordente. O

mordente tem a finalidade de aumentar a afinidade do corante pela clula,
permitindo que ela se core mais intensamente.
Figura 3 Lmina aps a adio do Lugol.
 LCOOL ETLICO - funo: agente descorante e diferenciador. Sua
utilizao permite que algumas clulas se descorem mais facilmente que
outras. Este comportamento distinto de descolorao que diferencia as
bactrias.
FUCSINA DILUDA - funo: corante de contraste, corante secundrio ou
contracorante. o corante que d s clulas descoradas uma cor
diferente daquelas que mantm a cor do corante principal. Os
microrganismos que no se descoram facilmente retm a cor do corante
principal (cristal violeta) enquanto que aqueles que se descoram
facilmente podero ser visualizados, pois corar-se-o com o corante de
contraste (fucsina).

Figura 4 Lmina aps a adio do contracorante fucsina diluda;

4 CONCLUSO
Aps o procedimento descrito, foi adicionado uma gota de leo de imerso
sobre o esfregao e observado ao microscpio (Olympus CX21), utilizando a
objetiva de imerso (100X) para melhor visualizao, obtendo, como resultados
esperados, as bactrias coradas em roxo (cor do cristal violeta) - GRAM
POSITIVAS (Ex. Staphylococcus aures) e as bactrias coradas em vermelho (cor
da fucsina) - GRAM NEGATIVAS (Ex. Escherichia coli).
As imagens visualizadas foram desenhadas (em anexo) conforme
interpretao sugeridas pelas Figuras fornecidas pela tcnica que auxiliou nos
experimentos, a seguir.

5 CONSIDERAES FINAIS

A partir dessa prtica entendemos o processo de classificao das

bactrias em dois grandes grupos, Gram-positivos e Gram-negativos, como j
descritos, considerando a importncia na engenharia ambiental. Dessa forma
poderemos obter um olhar crtico quanto aos estudos de contaminao em solos,
gua, compreendendo algumas formas de como as bactrias podem interferir no
organismo e comprometer, de forma geral, o meio ambiente.

6 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ALBERTS, B. et al. Biologia molecular da clula. 5. ed. Porto Alegre: Artmed, 2010.
1584p.
TORTORA, G.R. Microbiologia. 8 Ed. Porto Alegre: Artmed, 2005.
 AULA PRTICA 2

IDENTIFICAO DE CIANOBACTRIAS

1 INTRODUO

As cianobactrias so micro-organismos aerbicos foto-autotrficos.

Seus processos vitais requerem gua, dixido de carbono, substncias
inorgnicas e luz. A fotossntese seu principal modo de obteno de energia
para o metabolismo. Entretanto, sua organizao celular demonstra que esses
micro-organismos so procariontes e, portanto, muito semelhantes
bioquimicamente e estruturalmente s bactrias. As cianobactrias apresentam
ampla variao de tamanho e forma. Algumas dessas peculiaridades sero
evidenciadas no presente relatrio atravs de desenhos com posterior
identificao de grupo e estruturas funcionais.

2 OBJETIVO

Identificar diferentes grupos de cianobactrias

3 PROCEDIMENTO PRTICO

Nesta atividade foi realizada uma aula didtica onde pode-se observar,
com bastante preciso e atravs de lminas contendo amostras de
cianobactrias, a morfologia dos constituintes do organismo. Com isso, aps a
identificao dos diferentes grupos de cianobactrias foram desenhadas as
estruturas e discutidas suas funes (anexos).

MATERIAL UTILIZADO:
Lminas
Microscpio ptico
Papel A4
Lapiseira
Borracha
4 CONSIDERAES FINAIS

A partir dessa metodologia trabalhada em laboratrio, a assimilao do

conhecimento em questo foi excelente, uma vez que, a riqueza de detalhes
pode ser melhor compreendida atravs dos desenhos realizados (em anexo).

5 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

Med on line.Toxinas de Cianobactrias: Causas e conseqncias para a

Sade Pblica. Disponvel em
<http://letc.biof.ufrj.br/sites/default/files/1998%20Azevedo%20Toxinas.pdf>.
Acesso em 22 de agosto de 2017.