Nombre: Mayerlin Rojas Perez

Cdigo: 114555
Materia: Nematodos Fitoparasitos
Profesor: Eyder Daniel Gomez Lopez
Extraccin de nematodos
Introduccin
Una vez obtenidas las muestras de suelos o races, el manejo y cuidado entre la recoleccin
y la extraccin de nematodos es de suma importancia para obtener optamos resultados, la
etapa de almacenamiento debe ser en lo posible corta y en caso de no ser posible, se deben
tener en cuenta dos aspectos muy importantes, la temperatura y la humedad.
Para evitar la prdida de humedad, es recomendable guardar las muestras en bolsas selladas
y no exponerlas directamente al solo cerca de fuentes de calor que puedan secar nuestra
muestra, se debe tener en cuenta que un manejo inadecuado en el transporte,
almacenamiento o extraccin puede causar un ndice alto de mortalidad y esto puede datos
errneos al momento de realizar un conteo o solucionar un problema.
Palabras clave: Nematodo, Extraccin, Temperatura, Mortalidad, Conteo, Humedad,
Muestra.

Aspectos generales en la recoleccin de muestras.

Se debe recorrer el campo y trazar un recorrido para la extraccin de muestras, despus
extraer un numero acordado de muestras, si el rea es muy pequea, es recomendable tomar
las muestras en zigzag cada 15 metros muestreando en reas de inters, se debe tener muy
en cuenta que las submuestras se toman en los primeros 0.3m de profundidad del suelo, y
que se debe evitar tomar muestras cerca de plantas muertas.
Cuando se trata de cultivos nuevos, o invernaderos, lo mejor es tomar una cantidad de
submuestras en funcin del rea controlada.
La muestra compuesta es una muestra representativa del suelo de todo el terreno. Tambien
existen muestreos de races, los cuales ayudan a tener informacin de los nematodos
endoparsitos (dentro de la raz) y en las muestras de suelo se pueden obtener larvas o
huevos endo y ectoparsitos.

Muestreo de races y suelos.

Para tomar la muestra se deben seguir los siguientes pasos:
1. Con el croquis de la finca se deben identificar los lotes que tengan plantas con sntomas
de poco desarrollo y amarillamiento. Tambin se deben identificar las plantas con
aparente saneamiento o que visiblemente se noten sanas.
2. Una vez identificados los lotes a muestrear, se deben tomar en cuenta dos tipos de
plantas:
Plantas aparentemente sanas: con buen desarrollo y sin amarillamiento.
Plantas aparentemente enfermas: se deben tomar muestras de plantas con
amarillamiento, decaimiento o poco desarrollo; sin embargo, deben evitarse
muestras de plantas que estn muertas o muy deterioradas, ya que los niveles
poblacionales de estas plantas tienden a ser errneos.
3. Para obtener un resultado confiable en muestreos de raz, es necesario que la muestra
final est compuesta de varias sub-muestras. La cantidad de submuestras depende del
rea. Se recomienda de 50 a 80 submuestras por hectrea. En el caso de plantaciones
establecidas o perennes, se debe tomar la muestra de la zona entre el goteo y la mitad de
la rama a una profundidad de 30 centmetros obviando los primeros 10 cm.

Muestreo para cultivos de ciclos cortos o anuales.

Recorrer toda la parcela en forma de zig-zag y tomar submuestras cada 20 pasos,
para un total de 50 submuestras por hectrea aproximadamente.
Quitar la capa superior del suelo (5 a 10 cm aproximadamente).
Tomar muestras cerca de la poca de cosecha.
Muestrear la zona de las races (a 20 o 30 cm de profundidad dependiendo del
cultivo) para lo cual se usa un barretn o pala. Sacar races con suelo adherido.
Tener una hielera o recipiente que guarde la humedad y no altere la condicin de la
muestra.
La muestra se deposita en una bolsa plstica.
La muestra total debe ser de 1000 g aproximadamente.
Identificar la muestra registrando datos de la zona como: agricultor, cultivo
anterior, fecha y otros datos que se consideren importantes.

Porque se toma la muestra en la zona de goteo?

Metodos de extraccin
Hay varios mtodos de extraccin de nematodos empleados en laboratorios de nematologia,
el usar un mtodo u otro depende de algunos factores de estudio entre los cuales tenemos
equipo disponible, condicin de las muestras y tipo de nematodo a estudiar. Algo a destacar
es que ningn tipo de extraccin conocido hasta la fecha es capaz de extraer el 100% de los
nematodos presentes en una muestra y que el resultado final obtenido depende tambin del
mtodo de extraccin utilizado.
Los nematodos fitoparasitos son removimos principalmente de muestras de material vegetal
y suelos y existen dos procesos bsicos utilizados para su extraccin de los cuales uno
depende de la capacidad mvil de los nematodos, y el otro se ocupa de extraer nematodos
inactivos e inmviles, algunos mtodos para la extraccin de nematodos son los siguientes
embudo de Baerman, tcnica de cribado y centrifugacin en solucin azucarada, mtodo de
cribado y decantacin de Cobb, elutriador de Oostenbrink y aparato de Fenwick para
extraccin de quistes entre otros.
Embudos Baerman: Este mtodo es usado para extraer nematodos mviles, este mtodo
consiste en colocar embudo en un soporte universal, llenarlo con agua potable y
posteriormente cantidades de suelo entre los (50 a 100 cc) de material vegetal o suelo, son
colocadas dentro de una bolsa de tela porosa o papel, la cual se sumerge suavemente en el
agua del embudo. Una de las variantes que se puede implementar consiste en colocar a
pocos milmetros del borde superior del embudo, un cedazo o malla de alambre cuya
funcin es soportar la muestra, la que es vertida sobre tela o papel, cuya consistencia,
textura y porosidad puede variar.
Tcnica de centrifugacin-flotacin: El principio de esta tcnica es recuperar a los
nematodos de una muestra mediante flotacin mediante soluciones de gravedad especifica
superior a los fluidos del nematodo algunas de estas soluciones son soluciones de azcar de
caa, soluciones de sulfato de magnesio y sulfato de zinc, si el suelo es arcilloso se
aconseja usar un poco de detergente que ayude a la dispersin de partculas de arcilla y
favorezca la extraccin de nematodos.
Cuando se utiliza este tcnico se debe considerar el estrs osmtico que generan estas
soluciones a los nematodos por lo que es prioridad lavarlos para ayudar a la recuperacin
de estos de lo contrario pueden distorsionarse o morir, esta es una de las tcnicas ms
utilizadas debido a que sirve para extraer nematodos inactivos, inmviles, huevos y
nematodos muertos.
Para llevar a cabo este mtodo se debe:
Preparar una alcuota de muestra 100 gramos de suelo homogenizado, sin ningn
otro tipo de material en el presente.
Colocar la muestra en una cubeta y lavarla directamente bajo un chorro a presin, la
cantidad de agua agregada no debe superar la mitad de la cubeta.
La suspensin resultante se agita bien y se deja reposar durante 30 segundos.
Despus se procede a dejar la solucin sobre un grupo de tamices sper puesto de
100 y 400 mallas.
Con ayuda de una pizeta los residuos en el tamiz de 400 mallas se transfieren a
tubos de centrifuga.
Se centrifuga de 4 a 5 minutos a 3000rpm, se decanta cuidadosamente el
sobrenadante y se agrega una solucin de azcar (480 gramos de azcar de caa por
litro de agua).
Se resuspende el suelo en los tubos y se procede a agitar a la misma velocidad de
1.5 a 3 minutos.
 El sobre nadante el cual contiene a los nematodos es vertido sobre una criba de 400
mallas y el azcar en los nematodos es removido con agua, por ltimo, se
transfieren los nematodos a un plato para su debido uso.
Nota: por medio de esta tcnica se pueden recuperar casi todos los tipos de
nematodos.

Extraccin de nematodos del material vegetal

Examen directo en estereoscopio a baja magnificacin: este mtodo ocupa una pequea
cantidad del material vegetal, consiste en lavar el suelo de las races teniendo extremo
cuidado, despus las races son transferidas a cajas Petri, suracuzas o vidrio reloj y a los que
anteriormente se les ha agregado una pequea cantidad de agua, con ayudas de aguas de
diseccin se rasga levemente el material vegetal para liberar a los nematodos los cuales al
estar en el agua flotan y pueden ser recolectados por una micro aguja o micro pipeta y al
igual que con el suelo, el material vegetal debe mantenerse a una temperatura y humedad
adecuada.
Mazerado de tejidos vegetal con licuadora: se toman 10 gramos de races y se cortan en
trozos de 2 a 3 cm de longitud, se agrega agua dependiendo de la dureza del material y se
licua a mxima velocidad de 20 a 30 segundos, la solucin resultante se filtra en tamices de
100 y 400 micras respectivamente y el resultante se traslada a un embudo baermann donde
se da la separacin final, una vez extraido el material macerado de la licuadora tambin se
puede emplear el mtodo de centrifigacion-floculacion.

Bibliografa
Coyne, J;Nicol B; Claudius, C. 2009. Nematologa Prctica: Una gua de campo y
laboratorio. Benn. IITA. p.1-2.
Crozzoli R. La Nematologa Agrcola en Venezuela. Ediciones de la Facultad de
Agronoma. Universidad Central de Venezuela. ISBN: 978-980-00-2797-4. 2014. 447pp.
FHIA (Fundacin Hondurea de Investigacin Agrcola, HN). 2014. Cmo tomar muestras
de races y suelo para anlisis de nematodos.
Rizosfera
Es la zona donde ocurre la interaccin bioqumica entre el suelo y las races de las plantas,
es una zona de interaccin nica y dinmica entre las plantas el suelo y los
microorganismos del suelo, esta zona se caracteriza por gran cantidad de biomasa y gran
actividad biolgica en comparacin a otras zonas del edafolgicas.
La rizosfera es una capa muy delgada y su profundidad varia segn el lugar del planeta
donde se encuentre, y en esta se dan a cabo procesos ecolgicos indispensables, entre los
cuales la fijacin del nitrgeno tiene un lugar destacado.
Rizovaina regin de la rizosfera caracterizada