Nutricin y Crecimiento microbiano

1. Requerimientos nutricionales
2. Medios de cultivo
3. Condiciones ambientales
4. Reproduccin y tiempo de generacin
5. Curva de crecimiento
6. Cultivo continuo y discontinuo de
microorganismos
7. Medicin del crecimiento microbiano
8. Cultivos puros
 Qu significa crecimiento microbiano?

de tamao
del nmero de clulas

Los requerimientos para el crecimiento microbiano son:

Requerimientos qumicos (nutricionales)
Requerimientos fsicos
 REQUERIMIENTOS QUMICOS NUTRICIONALES

ELEMENTOS ESENCIALES CHONSP (g/L)

(macroelementos g/L)

C,H,O suelen cubrirse al mismo tiempo

C: necesario para construir molculas orgnicas

Fuentes de carbono

Auttrofos Hetertrofos
Utilizan CO2 como nica o Utiliza molculas orgnicas
principal fuente de carbono preformadas, reducidas, a
partir de otros organismos
 REQUERIMIENTOS QUMICOS NUTRICIONALES

ELEMENTOS ESENCIALES CHONSP (g/L)

N: necesario para sintetizar aminocidos, purinas, pirimidinas, algunos

H de C ,lpidos y otras sustancias
P: est presente en c. nucleicos, fosfolpidos, ATP, varios cofactores,
algunas protenas y otros componentes celulares

S: sntesis de algunos aminocidos (cistena y metionina, algunos H de C,

biotina. La mayora utiliza Sulfato como fuente de azufre

MICROELEMENTOS (mg) Ca, Mg, Fe, K, (mg)

ELEMENTOS TRAZA (g) Mn, Mo, Co, Cu, Zn (g)
 REQUERIMIENTOS QUMICOS NUTRICIONALES
FACTORES DE CRECIMIENTO
Aminocidos

Factor o vitamina Purinas y Pirimidinas

Vitaminas
p-aminobenzoico (PABA)
Acido flico

Biotina
ej: Haemophilus influenzae
Cobalamina (vitamina B12)
Factor V :NAD
Niacina (cido nicotnico)
Factor X: comp. tetrapirrrolicos
Riboflavina proporcionados por hemina y
cido pantotnico
Tiamina (vitamina B1) hematina.
Complejo B6 (piridoxal, piridoxamina) (agar chocolate)
Grupo Vitamina K, quinonas

AGUA
MEDIOS DE CUTIVO
Por su estado fsico:
LQUIDOS: caldos
SLIDOS: agares
SEMISLIDOS

El AGAR: polisacrido derivado de ciertas algas marinas.

Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se
solidifica al enfriarse a 40 grados.

Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento

de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.
MEDIOS DE CUTIVO
Por su composicin:
Medios sintticos o definidos
Medios complejos

MEDIOS SINTTICOS O DEFINIDOS

Se conocen todos sus componentes

 MEDIOS COMPLEJOS
Contienen algunos ingredientes cuya composicin qumica
se desconoce (extractos de tejido animal o vegetal)

Peptonas: hidrolizados de
protenas, obtenidos de la
digestin parcial de carne,
casena, harina de soja,
gelatina y otras fuentes
proteicas

Extracto de carne y de levadura:

son medios lquidos de carne de
vacuno y de levadura de cerveza
respectivamente
MEDIOS DE CUTIVO
Medio SELECTIVO
Inhibicin de un tipo, sin inhibicin de otros
Ej Mac Conkey, manitol, endo, SS, EMB

Medio SELECTIVO DE
ENRIQUECIMIENTO
Estimulan la multiplicacin de un microorganismo
Caldo tetrationato

Medio DIFERENCIAL
crecen varios tipos, pero uno tiene una caracterstica
diferente
Ej: Mc Conkey, agar EMB, agar sangre, etc

Medio REDUCIDO
tiles para el crecimiento de anaerobios
Ej: Tioglicolato
 BACTERIAS

Fermentacin
de lactosa

Lactosa Lactosa
+ -
Escherichia coli Proteus mirabilis
Klebsiella pneumoniae Shigella sonei

mac E. coli Proteus

Agar manitol

Serratia marcescens
Ejemplos de morfologa macroscpica en medio slido. (Prescott y col., 2000).

Medios de cultivo para medir la potencia de los antibiticos.
Medios de transporte: Stuart.
Medios para filtracin a travs de membrana.
Medios especiales para cultivo de hongos y levaduras.
Medios especiales para cultivo de protozoarios.

NOM-065-SSA1-1993
Generalidades de medios de cultivo

La viabilidad de los medios debe probarse con cultivos tipo de microorganismos de

la ATCC (Coleccin Americana de Cultivos Tipo) u otras cepas certificadas.
 NECESIDADES NUTRICIONALES

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS T
CONDICIONES
FISICAS pH
AMBIENTALES O2/CO2

IN VITRO
 FACTORES FSICOS AMBIENTALES

pH

ACIDFILAS: <5.0 (Lactobacillus)

CLASIFICACIN DE NEUTRALFILOS: 6.5 7.5
MICROORGANISMOS ALCALFILAS: >9.0 (Alcaligenes)

El metabolismo bacteriano puede acidificar o alcalinizar el medio de cultivo.

Se aaden amortiguadores o buffers:

Fosfatos, peptonas y/o aminocidos
 TEMPERATURA

rango ptimo
PSICRFILOS: OC 20C ; 15C 20C
CLASIFICACION DE
MICROORGANISMOS MESFILOS: 20C 45C ; 30C 37C *

FACULTATIVO: 25C 55C

TERMFILOS HIPERTERMOFILO: 45C 75C

Thermus aquaticus: aguas termales

Flavobacterias, Polaromonas (antrtida)
Psicotrofos: grupo de microorganismos
responsables del deterioro de alimentos
 Reacciones ptima: reacc. Enzimticas a
enzimticas a velocidades en constante
mxima velocidad aumento

Gelificacin de la
Desnaturalizacin
membrana, transporte tan
proteica. Colapso de
lento que no hay
la membrana y lisis
crecimiento
trmica
 Por qu un elemento como el Cobalto o el hierro se
consideran micronutrientes y un elemento como el
carbono un macronutriente?

Investigar de qu forma puede ser suministrada cada uno de

los macronutrientes en los medios de cultivo.

Cmo se encontrar el pH intracelular en los

acidfilos y en los alcalfilos

A qu temperatura sern ms sensibles en general los

microorganismos a las bajas o a las altas?
 EFECTO DE 02 y CO2

TIPO CONDICIONES DE CRECIMIENTO

AEROBIO CON O2

ANAEROBIO FACULTATIVO CON O SIN O2

ANAEROBIO ESTRICTO U SIN O2

OBLIGADO

ANAEROBIO AEROTOLERANTE SIN O2

Enterococcus faecalis (TOLERA O2)
 BAJA CONCENTRACIN DE O2
MICROAEROFLICO (2% -10%).
CIERTO GRADO DE N2 e H2
Camplylobacter 3% - 10% DE CO2
Helicobacter

CAPNOFLICO EN PRESENCIA DE CO2

Varios gneros (Brucella)

 EFECTO de O2 y CO2

Las diferentes relaciones con el oxgeno se deben a la

inactivacin de protenas y al efecto de los derivados
txicos del oxgeno
 El O2 es un poderoso oxidante y excelente aceptor de
electrones, acepta e- y se reduce fcilmente y da lugar a
productos txicos:
Radical superxido
O2 + e- O2-

Destruyen
Perxido de Hidrgeno constituyentes
O2- + e + 2H+ H2O2 celulares

Radical hidroxilo
H2O2 + e + H+ H2O + OH-

2O2- + 2H+ Superxidodismutasa (SOD) O2 + H2O2

2 H2O2 catalasa 2 H2O + O2

 ENZIMAS que
TIPO CONDICIONES DE neutralizan los efectos
CRECIMIENTO txicos del oxgeno

AEROBIO CON O2 CATALASA Y SOD

Pseudomonas

ANAEROBIO FACULTATIVO CON O SIN O2 CATALASA Y SOD

Bacterias entricas

ANAEROBIO ESTRICTO U SIN O2 SIN ENZIMAS

OBLIGADO
Clostridium

ANAEROBIO AEROTOLERANTE SIN O2 SOD

Enterococucs faecalis (TOLERA O2)

MICROAEROFILICO BAJA TENSION DE O2 ENZIMA LBIL EN

(2% -10%). PRESENCIA DE O2
Campylobacter Cierto grado de N2 e H2

3% - 10% de CO2
Helicobacter
 Ambiente (21% del aire es O2)
ATMSFERA Agitacin
AEROBIA
Burbujeo de aire

Medios de cultivo: tioglicolato o cistena

Jarra para anaerobiosis: GasPak , etc
MTODOS PARA Cmara para anaerobiosis
ATMSFERA
PROPORCIONAR ANAEROBIA Bolsas de plstico (Catalizador + CaCO3)
OxyPlate.(cmara de anaerobiosis
independiente)( se aade a los medios una
enzima oxirrasa )

ATMSFERA Mtodo de la vela

MICROAEROFLICA Sobres hermticos con sustancias
qumicas
 Jarra para anaerobiosis
GasPak, y otras marcas..
Sobre generador de H2 y CO2 :
Contiene:
bicarbonato y borohidruro de sodio, se le
aade agua y entonces libera H2 y CO2
2H2 + O2 2 H 2O
Catalizador de paladio
Indicador de anaerobiosis
Cmaras anaerbicas
 OxyPlates:
cmara de anaerobiosis independiente

Enzima oxirrasa
 Tcnicas especiales de cultivo

Capnfilos: [CO2]
Frasco con vela
Estufas de dixido de carbono

Anaerobiosis
Sobres hermticos con sustancias
qumicas: catalizador y CaCO3

(Usados para microaeroflicas)

 PRESION OSMTICA controlada

Discretos
1-6%
HALFILOS Moderados (6-15%)
NaCl Obligados o
extremos (15-30%)
Presin osmtica Halobacterias
cotrolada (Archae)

osmfilos [azcar]

Sthaplylococcus aureus: medios hasta 7.5% de NaCl

Vibriones no colricos (halfilos): medio TCBS (10 g/L)
 OTRAS CONDICIONES

Presin hidrosttica : barotolerantes

600-1100 atm
Viven a T 2-3C

Fuente de iluminacin : Fototrofos

Condiciones extremfilas: Bacillus infernus: crece a mas de 2.4 km

bajo la superficie terrestre, sin Oxgeno y a T de 60C