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Grau"
GUADALUPE-2016
DETERMINACION DE BIOMASA:
RECUENTO MICROSCPICO EN
CMARA DE NEUBAUER.
I. OBJETIVOS
A. Cmara de Neubauer
1000 mm3
10000
=
(0.2)(0.2)(0.1)
= 2.50 + 6 /
=
0.2 0.2 0.13 103
3
Donde:
D= dilucin de la muestra
A. Materiales
Pipetas
Lamina cubre objetos
Tubos de ensayo
Gradilla
Agua
Levadura
B. Equipos
Microscopio
Cmara de Neubauer
C. Metodologa
Concentracin: 0.05g/ml
Tabla 1. Conteo de Clulas en Cmara Neubauer
Conteo de Clulas en 25 celdas, en Cmara Neubauer
Filas n7 n9 n13 n17 n19 Prom. Desvi.
1 9 10 10 14 8
3 3 7 12 10 9
6 8 10 14 10 11
11 8 15 12 4 12
14 12 8 10 6 7
16 10 11 6 9 5
Promedio 8.3 10.2 10.7 8.8 8.7 9 1.021
Desvi. 3.0 2.8 2.7 3.5 2.6
CV 0.36 0.27 0.26 0.39 0.30
7 + 9 + 13 + 1719
=
= 9 ;
Concentracin de 5
clulas 233 2
. = 9 25 =
= 23333
1
110
Coeficiente de 1.021
= = 0.11
Variacin 5
2333 103 3
= ( ) = 5.83 108 /
(0.2 0.2 0.1)3 1
Concentracin: 0.08g/ml
7 + 9 + 13 + 1719
=
= 21 ;
5
Concentracin de
clulas
543
2
. = 2125 =
= 54333
1101
Coeficiente de 3.190
= = 0.15
Variacin 21
4533 103 3
= ( ) = 1.36 109 /
(0.2 0.2 0.1)3 1
Concentracin: 0.15g/ml
7 + 9 + 13 + 1719
=
= 35 ;
5
Concentracin de
clulas
8782
. = 3525 =
= 87753
1
110
Coeficiente de 3.190
= = 0.14
Variacin 35
8775 103 3
= ( ) = 2.19 109 /
(0.2 0.2 0.1)3 1
Concentracin: 0.02g/ml
7 + 9 + 13 + 1719
=
= 7 ;
5
Concentracin de
clulas
163
2
. = 6.525 =
= 16253
1
110
Coeficiente de 1.0435
Variacin = = 0.16
7
1625 103 3
= ( ) = 4.06 108 /
(0.2 0.2 0.1)3 1
Concentracin (g/ml) (cel./ml)
0.15 2.19E+09
0.08 1.36E+09
0.05 5.83E+08
0.02 4.06E+08
2.50E+09
2.00E+09
1.50E+09
1.00E+09
y = 1E+10x + 5E+07
5.00E+08 R = 0.9681
0.00E+00
0.00 0.05 0.10 0.15 0.20
Segn (Unam, 1986), en la tcnica de conteo de clulas hay que tener en cuenta
que en esta tcnica uno de los factores que afecta la observacin de las clulas de
levadura es la correcta dilucin de la muestra empleada, se puede decir que si
durante el conteo se observan aproximadamente 69 clulas la muestra se
encuentra muy concentrada, mientras que si se observan menos de 20 clulas, la
muestra se encuentra muy diluida. Comparando la informacin con los datos
obtenidos en nuestra prctica podemos ver que la mayora de nuestras diluciones
fueron concentradas.
Segn (Valencia, 2001), la desviacin estndar es el promedio con respecto de la
media aritmtica, dice cuanto tienden a alejarse de los valores puntuales del
promedio en una distribucin. El coeficiente de variacin indica un mtodo de
comparacin de datos que tienen medidas de media diferentes o unidades
diferentes.
Segn (Madigan, 1998), mediante el mtodo de conteo directo en cmara de
Neubauer se debe utilizar frmulas que expresen la concentracin de clulas,
mostrando diferencia a la utilizada para el recuento de levaduras en laboratorio.
Esto podemos ver en los datos que hallamos en la tabla 2 donde determinamos la
concentracin de clulas, desviacin estndar y coeficiente de variacin, del
mismo modo en la tabla 3 hallamos lo mismo para celdas al azar, de este modo
pudimos determinar la diferencia de levaduras en el laboratorio.
Segn (Arniz, Isac, & Lebrato, 2000), los mtodos clsicos de determinacin d
biomasa son mtodos directos que se basan en el nmero de clulas o en el peso
celular. Los mtodos de enumeracin celular, son mtodos de observacin,
basados en propiedades fsicas o en la actividad metablica especfica, estos no
requieren de examen visual de los organismos ni su incubacin.
VI. CONCLUSIONES
Arniz, Isac, & Lebrato. (2000). Determinacion de la Biomasa en procesos Biologicos. Sevilla -
Espaa.
Unam. (1986). Biologia Celular. En Unam, Manual de practicas (pgs. 20-28). Mexico.