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Guia de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica

Book October 2014

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5 authors, including:

Harold Surez-Baron Gerardo Gallego

University of Antioquia Consultative Group on International Agricultural Research
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Latin America: Multi-Country capacity building for compliance with the Cartagena Protocol ob Biosafety Brazil - Colombia - Peru - Costa Rica View project

Biofortified Crops for Improved Human Nutrition View project

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 Gua de Laboratorio de
Biologa Molecular Bsica

ISBN: 978-958-694-134-1 (formato impreso)

ISBN: 978-958-694-135-8 (formato digital)
CIAT

El Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT) miembro del Consorcio CGIAR desarrolla tecnologas,
mtodos innovadores y nuevos conocimientos que contribuyen a que los agricultores, en especial los de escasos
recursos, logren una agricultura eco-eficiente es decir, competitiva y rentable as como sostenible y resiliente. La
agricultura eco-eficiente reduce el hambre y la pobreza, mejora la nutricin humana y brinda soluciones ante la
degradacin ambiental y el cambio climtico en los trpicos. Con su sede principal cerca de Cali, Colombia, el CIAT
realiza investigacin orientada al desarrollo en las regiones tropicales de Amrica Latina, frica y Asia.
www.ciat.cgiar.org

CGIAR es una alianza mundial de investigacin agrcola para un futuro sin hambre. Su labor cientfica la llevan a cabo
los 15 centros de investigacin que conforman el Consorcio CGIAR, en colaboracin con cientos de organizaciones
socias.
www.cgiar.org

Publicacin CIAT No. 397

rea de Investigacin en Agrobiodiversidad

y
Comunicaciones Corporativas

Edicin de produccin: Victoria Rengifo y Claudia Caldern (CIAT)

Fotografa: Julio C. Martnez y Roosevelt Escobar
Diseo de portada: Julio C. Martnez
Diseo e impresin: Grafitextos
 ISBN: 978-958-694-134-1 (formato impreso)
Notas ISBN: 978-958-694-135-8 (formato digital)

Gua de Laboratorio de
Biologa Molecular Bsica
en la Escuela

Harold Surez, Roosevelt Escobar, Patricia Zapata

Gerardo Gallego y Joe Tohme

Centro Internacional de Agricultura Tropical

Desde 1967 / Ciencia para cultivar el cambio
Centro Internacional de Agricultura Tropical
International Center for Tropical Agriculture Notas
Apartado Areo 6713
Cali, Colombia
Tel.: 57 2 4450000
Fax: 57 2 4450073
Correo electrnico: r.escobar@cgiar.org
Sitio web: www.ciat.cgiar.org

Publicacin CIAT No. 397

ISBN: 978-958-694-134-1 (formato impreso)
ISBN: 978-958-694-135-8 (formato digital)
Noviembre de 2014

Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela / Harold Surez, Roosevelt Escobar,
Patricia Zapata, Gerardo Gallego, Joe Tohme -- Cali, CO: Centro Internacional de Agricultura
Tropical (CIAT), 2014.
25 p. -- (Publicacin CIAT No. 397)

Descriptores AGROVOC:
1. Biotecnologa. 2. Tcnicas de laboratorio. 3. Biologa molecular. 4. Gentica. 5. ADN.
6. Bioseguridad. 7. Materiales de enseanza. 8. Colombia.

Descriptores locales:
1. Tcnicas moleculares.

AGROVOC descriptors:
1. Biotechnology. 2. Laboratory techniques. 3. Molecular biology. 4. Genetics. 5. DNA. 6. Biosafety.
7. Teaching materials. 8. Colombia.

Local descriptors:
1. Molecular techniques.

Categora de materia AGRIS: F30 Gentica vegetal y fitomejoramiento

Clasificacin LC: QH 506.S9393
I. Tit. II. Surez, Harold. III. Escobar, Roosevelt. IV. Zapata, Patricia. V. Gallego, Gerardo. VI. Tohme,
Joe. VII. Centro Internacional de Agricultura Tropical.

Derechos de Autor CIAT 2014. Todos los derechos reservados.

El CIAT propicia la amplia diseminacin de sus publicaciones impresas y electrnicas para que el pblico obtenga de
ellas el mximo beneficio. Por tanto, en la mayora de los casos, los colegas que trabajan en investigacin y desarrollo
no deben sentirse limitados en el uso de los materiales del CIAT para fines no comerciales. Sin embargo, el Centro
prohbe la modificacin de estos materiales y espera recibir los crditos merecidos por ellos. Aunque el CIAT elabora sus
publicaciones con sumo cuidado, no garantiza que sean exactas ni que contengan toda la informacin.
Notas Contenido
Pg.
Introduccin 1
Objetivos 2
cidos nucleicos 3
Normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio 5
Actividades en el laboratorio 6
Reconocimiento de la estructura del ADN 6
Extraccin de ADN de clulas vegetales y animales 11
Extraccin de ADN de clulas vegetales 11
Extraccin de ADN de clulas animales 14
La gentica y la herencia 15
Determinar caracteres monognicos en humanos 15
Glosario 19
Referencias 21
 Referencias
Cooper GM; Hausman RE. 2007. La clula. Tercera edicin. Marbn Libros, S.L., Madrid,
Espaa.

Curtis N. 1985. Diccionario ilustrado de la biologa. Everest, S.A., Bogot, Colombia.

Escobar Prez RH; Escobar F; Gallego GJ; Corts DF; Chvez AL; Bohrquez A; Caicedo AL;
Soto M; Narvez AS; Lozano E; Lugo J; Tohme J. 2004. La biotecnologa en el saln de
clases: Documento de trabajo para docentes de secundaria, versin 1 [CD-ROM]. Centro
Internacional de Agricultura Tropical (CIAT), Cali, Colombia. Disponible tambin en:
http://ciat-library.ciat.cgiar.org/Articulos_ciat/cdbiotecnologia/cover.swf

Tiessen A; Palacios N. 2007. Fundacin Ciencia Activa. ISBN 978-970-95522-0-1.

Lecturas sugeridas para consulta:

 http://bibliotecadigital.ilce.edu.mx/sites/ciencia/menu.htm
 http://recursostic.educacion.es/secundaria/edad/
 http://www.yourgenome.org/
 http://www.genomasur.com/BCH/BCH_libro/index_BH.htm
 http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/
 http://www.funsci.com/fun3_en/dna/dnaen.htm
 http://rodas.us.es/access/home.do

Nota
La mencin de productos comerciales en esta gua no constituye una garanta del producto ni un intento
para promocionarlo por parte del Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT) o de otra de las
agencias colaboradoras.

Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela 21

Genoma: Informacin gentica total que posee un organismo o una especie en particular. El
genoma en eucariotas comprende el ADN contenido en el ncleo, organizado en cromosomas y
el genoma mitocondrial.
Genotipo: Conjunto de informacin gentica que porta un individuo.
Guanina (G): Base nitrogenada que se encuentra en el ARN y en el ADN y forma enlaces triples
con la Citosina.
Nuclesido: Molcula orgnica resultante de la unin entre una base nitrogenada y un azcar
(ribosa o desoxirribosa).
Nucletido: Nuclesido unido con un grupo fosfato.
Origami: Arte japons que consiste en plegar papel y realizar figuras sin realizar ningn corte al
papel ni usar pegamento.
Timina (T): Base nitrogenada que se encuentra solo en el ADN. Forma enlaces dobles con la
Adenina.
Uracilo (U): Base nitrogenada que se encuentra solo en el ARN.
20 Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela
Introduccin
En la biotecnologa se integran diversas disciplinas del conocimiento, como las ciencias bsicas,
biologa celular, bioqumica, biofsica, fisiologa, matemticas, entre otras. En las investigaciones
en biotecnologa, se llevan a cabo diversas tcnicas y prcticas de laboratorio, algunas muy
complejas que requieren de laboratorios y equipos sofisticados y costosos. Por lo anterior,
surgen las siguientes preguntas: Cmo ensear biotecnologa en la escuela, de una manera
experimental que sea complemento de la teora? y Qu estrategias se pueden implementar en
un aula para subsanar la falta de laboratorios?
Este trabajo titulado Gua de laboratorio de biologa molecular bsica en la escuela muestra
cmo se pueden llevar a cabo cinco prcticas experimentales con elementos sencillos de fcil
consecucin. Tambin, brinda al docente una herramienta pedaggica para ensear algunos
aspectos bsicos de la biologa molecular, y al estudiante le permite vivenciar de manera
prctica estos temas y reconocer su importancia a nivel econmico y social.
Adriana Bohrquez
Asociada de Investigacin
Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT)
Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela 1
Objetivos
La Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela se dise con el fin de
apoyar, de manera sencilla, el desarrollo de algunas prcticas de biologa celular, biologa
molecular y gentica en un curso de biologa general. La gua se puede complementar con
la aplicacin interactiva La Biotecnologa en el Saln de Clases (Escobar Prez et al., 2004)
desarrollada por el CIAT, la cual ha sido implementada en escuelas pblicas de Cali (Centro
Auxiliar de Servicios Docentes - CASD), escuelas pblicas rurales (Institucin Educativa Tcnico
Agropecuaria Carlos Arturo Verbel Vergara de Caracol, Toluviejo, departamento de Sucre
y la Institucin Educativa Tcnica Tuna (IETT), departamento del Cauca). Las dos ltimas
instituciones se han beneficiado con proyectos de inversin financiados por la Embajada del
Japn, para la construccin y adecuacin de Centros de formacin en biotecnologa en sus
instalaciones.
Esta gua permite que los estudiantes experimenten y disfruten de la ciencia de una manera
ldica y prctica.
2 Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela
Glosario
cido desoxirribonucleico (ADN): Macromolcula que se encuentra en cada clula
almacenando la informacin gentica de cada individuo. Est compuesto por azcar
desoxirribosa y bases nitrogenadas (Adenina, Guanina, Citosina y Timina), unidas mediante
enlaces fosfodister.
cido ribonucleico (ARN): Macromolcula formada por azcar ribosa, bases nitrogenadas
(Adenina, Guanina, Citosina y Uracilo). Es lineal y de hebra sencilla.
Adenina (A): Base nitrogenada que se encuentra en el ARN y en el ADN. Forma enlaces dobles
con la Timina o el Uracilo.
Alelo dominante: Alelo de un gen que se expresa en presencia del alelo recesivo.
Alelo recesivo: Alelo de un gen que se silencia en presencia del alelo dominante.
Base nitrogenada: Compuesto orgnico cclico que puede llevar en su estructura dos o ms
tomos de nitrgeno.
Bioseguridad: Aplicacin de conocimientos, tcnicas y equipamientos para prevenir la
exposicin de personas, laboratorios, reas hospitalarias y medio ambiente a agentes
potencialmente infecciosos o considerados de riesgo biolgico.
Clula: Unidad bsica y funcional de la vida.
Citosina (C): Base nitrogenada que se encuentra en el ARN y en el ADN. Forma enlaces triples
con la Guanina.
Cromatina: Complejo formado por ADN y protenas histonas que producen enrollamiento.
Cromosoma: Estructuras portadoras de los genes, que consta de molculas largas de ADN y de
protenas asociadas. Representan el mayor grado de condensacin de la cromatina.
Fenotipo: Caractersticas morfolgicas, fisiolgicas y conductuales de un individuo o poblacin.
Gen: Fragmento de ADN que lleva la informacin necesaria para producir una protena o
molcula de ARN.
Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela 19
 cidos nucleicos

Dominante Recesivo
Lbulo de la oreja Los cidos nucleicos ADN (cido desoxirribonucleico) y el ARN (cido ribonucleico) son
las principales molculas de informacin de la clula. El ADN contiene el material gentico de
cada organismo y la informacin que podr ser heredada por generaciones futuras; por esto,
su anlisis y comprensin son de gran importancia para realizar estudios relacionados con la
identidad gentica y el funcionamiento de cada organismo.
Dominante Recesivo
Pulgar extensible

Un aporte importante a la biologa ha sido la descripcin del ADN como la molcula de la

vida. El estudio de sus propiedades fisicoqumicas y biolgicas ha desarrollado, en menos de
50 aos, un enfoque novedoso en relacin al origen, flujo y almacenamiento de la informacin
gentica en los organismos vivos (dogma central de la biologa molecular).
Cuadro 2. Evaluacin de caractersticas morfolgicas en compaeros de clase.

Una molcula de ADN consiste en dos cadenas antiparalelas unidas mediante puentes de
hidrgeno, que conforman una doble hlice. Cada cadena es una secuencia repetitiva de
Dominante Recesivo

unidades similares llamadas nucletidos, conformados por un azcar (desoxiribosa), un grupo

fosfato y una base nitrogenada Adenina (A), Timina (T), Citosina (C) y Guanina (G) (Figura
Lnea frontal
del cabello

1A). El ARN, a diferencia del ADN, es de cadena nica, la Timina (T) es reemplazada por el
Uracilo (U) y el azcar es la D-Ribosa (Figura 1B).

A Adenina (A) B Adenina (A)

OH Base Guanina (G) OH Base Guanina (G)

nitrogenada Citosina (C) nitrogenada Citosina (C)
Hoyuelo en la mejilla

Dominante Recesivo

O= P C5H2 Timina (T) O= P C5H2 Uracilo (U)

O O
OH OH

C4 C1 C4 C1
H H
Grupo Fosfato H H H Grupo Fosfato H H H
C3 C 2 C3 C 2

OH H OH OH
Nombre estudiante

Desoxirribosa D- Ribosa

Nucletido (unidad del ADN) Ribonucletido (unidad del ARN)

Figura 1. (A) Esquema bsico de un nucletido; (B) Esquema bsico de un ribonucletico

18 Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela 3
El orden especfico de las bases nitrogenadas a lo largo de una cadena de ADN se conoce con

Forma dominante
el nombre de secuencia del ADN. En esta secuencia se almacenan las instrucciones genticas
especficas requeridas para generar un ser vivo. De esta manera, la informacin gentica puede

Suelto
Curvo

Corto
definirse como frases escritas usando las bases A, C, T y G como alfabeto.

S
En el ADN, la secuencia de las bases a lo largo de una cadena se complementa exactamente
con la otra cadena (antiparalela) lo cual indica que ambas cadenas contienen la misma
informacin gentica. Las dos cadenas de ADN se unen qumicamente a travs de puentes de
hidrgeno, formando pares de bases: A siempre estar unida a T por dos puentes de hidrgeno,

Forma recesiva
mientras que G estar unida a C por tres puentes de hidrgeno. El tamao del genoma se

Largo
Recto
expresa de acuerdo al nmero total de pares de bases (pb) que lo conforman.

Unido
NO

NO
Conceptos para recordar

Capacidad

la lengua
Caracter

Longitud
meique
 ADN es una macromocude dobe cadena presente e
  cu 

del dedo
Hoyuelo

mentn
enrollar

Lbulo

relativa

ndice
Dedo

oreja
en el

de la
de
y contiene s instrucciones para generar un ser vivo.
 cuatro bases nitrogenadas que componen  ADN se encuentran unidas mediante

Forma dominante

Sentido horario
puentes de hidrgeno. G Cy A T

Pico de viuda

Largo
 es de cadena senc co soo se presenta en e 

NO
S

Adaptado de: http://rodas.us.es/access/home.do

Cuadro 1. Rasgos mendelianos en humanos.

    

Sentido contrario
Sin pico viuda
Forma recesiva

Corto
NO

S
Enrollamiento
del cabello

del 2 dedo
extensible
del cabello
Hoyuelos
Caracter

Longitud

del dedo
respecto
coronilla
mejilla

frontal

Pulgar

pulgar
Lnea
en la

en la
4 Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela 17
Fundamento:
Normas bsicas de bioseguridad en el
Mendel enunci en 1868 las leyes por las cuales se rige la herencia de la informacin gentica.
Gracias a su trabajo, se sabe que los caracteres hereditarios estn determinados por alelos o laboratorio
formas alternativas de un gen. Cuando dos parentales se cruzan, si un hijo (filial) recibe un alelo
dominante de uno de los padres, expresar (fenotipo) el rasgo o caracter dominante. Por el 1. Leer la gua de laboratorio para comprender
contrario, los que reciben el alelo recesivo de ambos padres, expresarn el fenotipo recesivo. los objetivos, los conceptos bsicos y el
procedimiento a seguir durante la actividad.
Procedimiento:
2. Preparar y reservar los materiales, equipos
y reactivos o soluciones necesarias para el
1. En el Cuadro 2, listar los nombres de los estudiantes del curso e identificar los rasgos
desarrollo de la prctica. Leer las Fichas Tcnicas
fenotpicos mendelianos monognicos (dominante o recesivo) de cada individuo, teniendo
y de Seguridad (MSDS, por sus siglas en ingls)
en cuenta el Cuadro 1.
de los reactivos que van a ser usados durante la
2. Los genes estn conformados por dos formas alternativas o alelos. Asignar con una letra
experimentacin.
mayscula al alelo dominante del rasgo y con una letra minscula al alelo recesivo del rasgo;
por ejemplo, para la caracterstica lbulo de la oreja: lbulo pegado, caracter recesivo (a) y 3. Utilizar elementos de proteccin (bata de
lbulo suelto caracter dominante (A). laboratorio, guantes, gafas de seguridad,
3. Marcar con una X el rasgo que se observa en cada estudiante. mscaras para gases y zapatos con suela
4. Resumir en un cuadro a tres columnas e indicar nombre del estudiante, fenotipo y genotipo antideslizante). La bata y los zapatos deben
probable. mantenerse bien cerrados para evitar
5. Determinar frecuencia del caracter en cada caso. accidentes (Figura 2).
4. No consumir alimentos ni bebidas en el
Discutir en grupos de trabajo la experiencia.
laboratorio. Figura 2. Elementos de proteccin para usar en
 ! "#"
$ las prcticas de laboratorio.
5. Trabajar en un rea con buena ventilacin.
 "
 
 "#
%&!! '

 *# 6. No pipetear con la boca.
%&!+'
#"+"
#" 7. En caso de presentarse algn derrame o salpicadura, se debe limpiar inmediatamente,
 "
&
"< "%! 

" '" 
 * ' empleando el equipo de seguridad adecuado. Si hay contacto con la piel o los ojos debe
frecuencia entre los estudiantes que participaron en este estudio. lavar inmediatamente durante al menos 10 minutos con abundante agua. Todo accidente o
incidente debe ser informado al coordinador de la prctica.
8. Lavarse las manos con agua y jabn antes y despus de la prctica.

9. Limpiar y organizar el rea de trabajo al finalizar.

16 Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela 5
Actividades en el laboratorio La gentica y la herencia
Reconocimiento de la estructura del ADN La gentica es la rama de la biologa que estudia la herencia de los caracteres, analiza la manera
como las caractersticas de un individuo (morfolgicas, fisiolgicas o bioqumicas) se transmiten
Objetivo: Reconocer la estructura bsica de la molcula de ADN mediante la construccin de
de una generacin a otra. Esta ciencia naci con los experimentos de Gregorio Mendel.
un modelo tridimensional usando la tcnica de Origami.
En organismos que se reproducen, se heredan dos juegos de cromosomas uno del padre y el
Fundamento: La molcula de ADN posee una conformacin estructural especfica y se organiza
otro de la madre. En cada par de cromosomas homlogos hay parejas de genes (o alelos) en
espacialmente como una doble hlice (forma helicoidal). Dicha conformacin es posible gracias
la misma posicin que no tienen que llevar precisamente la misma informacin (homocigoto
a la unin de bases nitrogenadas mediante puentes de hidrgeno. Para comprender de manera
dominante, heterocigoto, homocigoto recesivo). Algunos de estos genes se comportan de
general el sistema de apareamiento de bases y la estructura helicoidal del ADN, se construir
manera mendeliana y permiten reconocer fsicamente (el fenotipo) si la caracterstica que se
una representacin tridimensional en papel y se discutirn algunas propiedades fsicas de esta
expresa en el individuo es la dominante o la recesiva.
molcula.

Metodologa de aprendizaje por descubrimiento

Para tener en cuenta...
 Cada estudiante debe construir un modelo de la molcula de ADN, usando la plantilla
sugerida (Figura 3). **  &


">+&"
'
 Discutir y retroalimentar la experiencia. * +'
#" *  # &

"K "

- Cmo es la estructura de la molcula de ADN? * +"
#" *  %" &"'

"
- Cmo est constituido el ADN?

Materiales y lista de chequeo: Determinar caracteres monognicos en humanos

Objetivo: Comprender de manera prctica la herencia mendeliana de algunos caracteres
Una hoja de papel tamao carta monognicos en humanos (Cuadro 1).
Regla
Materiales y lista de chequeo:
Lpiz
Colores Lpiz Borrador Papel

Metodologa de aprendizaje por descubrimiento:

Analizar las caractersticas morfolgicas (fenotipo) y traducirlas a un lenguaje gentico.

6 Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela 15
Extraccin de ADN de clulas animales 1 cm 8,7 cm

Materiales y lista de chequeo: 2,5 cm

Solucin de jabn
Agua Etanol al 70% y 95% lquido (25%) Vaso desechable
Cuchara Alambre en forma Sal (NaCl) Hielo
de plstico de anzuelo

Procedimiento:

1. Adicionar en un tubo de ensayo etanol al 95% y poner a enfriar en un recipiente con hielo.

2. Colocar un poco de agua (aproximadamente 20 ml) en un vaso desechable y enjuagar la

boca en forma enrgica, durante al menos medio minuto, para arrastrar la mayor cantidad
posible de clulas de descamacin de la mucosa bucal.

Nota: Antes de hacerlo trague saliva para eliminar la accin de las amilasas, enzimas
contenidas en la saliva.

3. Devolver el agua del enjuague al vaso. Aadir dos pizcas de sal y dos gotas de la solucin de
jabn lquido (25%), agitar suavemente evitando la formacin de espuma.

4. Transferir la mezcla al tubo de ensayo con el etanol fro. Dejar en reposo durante 2 o 3
minutos sin mover el tubo esta mezcla se muestra turbia y es ms densa que el alcohol,
por lo que se deposita en el fondo del tubo. El alcohol forma una capa por encima de la
fase acuosa en la que se encuentra el ADN en disolucin provocando que este se precipite
(Figura 8A).

5. Esperar unos 10 minutos mientras el ADN se precipita en la interfase alcohol-agua,

formando una masa blanquecina (grumo de aspecto algodonoso).
Casilla 1 2 3 4 5 6
6. Recoger el ADN utilizando un alambre en forma de anzuelo (Figura 8B). Resuspender el
ADN en un vial con etanol al 70%.

Discutir en grupos de trabajo la experiencia. Figura 3. Plantilla para la elaboracin del modelo del ADN en Origami.
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14 Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela 7
Procedimiento: A B

1. En una hoja de papel, usando un lpiz y una regla, tomar las medidas indicadas en la
Figura 3 y realizar la plantilla sugerida.
2. Recortar la plantilla dibujada por el borde externo (Figura 4A).
3. Asignar al azar, entre las diagonales de las casillas (2 y 5) una secuencia usando los
siguientes cdigos (Figura 4B):
A Adenina
C Citosina
G Guanina
T Timina
4. Tener en cuenta, por la complementariedad de las bases nitrogenadas, que:
  # %"`>*
* 
 k # %"Y>*
* 
5. La secuencia asignada en la Casilla 2 se debe reflejar en la Casilla 5 (Figura 4B).
6. Identificar segn el par de bases nitrogenadas en las casillas espejo el tipo de enlace y
asignarlo (Figura 4C).
Figura 8. (A) Docentes de la Asociacin de Instituciones Educativas Oficiales de los Montes de Mara (ASOIETOMM)
 
"` llevando a cabo la prctica de extraccin de ADN de plantas. Toluviejo, departamento de Sucre.
 `&
"kY (B) Momento en el que se pesca el ADN con la ayuda de un alambre en forma de anzuelo.

A B C
Discutir en grupos de trabajo la experiencia.

Cul es la funcin de la sal, el jabn y el alcohol en el proceso de extraccin del ADN?

Figura 4. (A) Diagrama de la plantilla para asignar la secuencia al azar entre las diagonales de las casillas (2 y 5).
(B) Complementariedad entre bases nitrogenadas (AT y CG). (C) Enlaces mediante puentes de hidrgeno
entre bases nitrogenadas (doble o triple).

7. Escoger cuatro colores al azar y asignar uno a uno a las bases nitrogenadas.
8. Pintar, en el recuadro de la diagonal donde aparezca la base nitrogenada, con el color
asignado.
9. Tomar la plantilla y doblar por la mitad; remarcar el doblez (Figura 5A).
10. Plegar por el borde de la Casilla 1 y llevar hacia atrs (Figura 5B).
11. Remarcar el doblez (Figura 5C).
12. Plegar por el borde de la Casilla 3 y llevar hacia adelante (Figura 5D). Remarcar el doblez.

8 Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela 13
Procedimiento: A B

1. Preparar una solucin con 10 ml del jabn lquido, 1.5 g de sal y 100 ml de agua. Agitar
suavemente la mezcla hasta que la sal se disuelva completamente.

2. Con la ayuda de guantes y cuchillo pelar y remover las primeras capas y picar la parte
central de la cebolla. Depositar en un vaso plstico.

3. Adicionar suficiente cantidad de solucin con jabn hasta cubrir la cebolla picada. C D
4. Preparar un bao mara (calentar en una estufa agua en una olla pequea a 60 C) y dentro
de esta sumergir durante 10 minutos el vaso plstico con la mezcla con cebolla. Mientras se
calienta, y con la ayuda de una cuchara, macerar la cebolla contra las paredes del recipiente.

5. Enfriar la mezcla en un bao de hielo durante 5 minutos y continuar la maceracin contra

las paredes para romper las clulas y liberar el ADN.
6. En un colador plstico, colocar el filtro para caf y pasar la solucin del macerado a travs
del filtro. En un recipiente de vidrio, guardar el filtrado en la nevera o sobre hielo.
7. Vaciar dos cucharadas del filtrado fro en un tubo de ensayo e inclinar levemente. Qu color
tiene el filtrado? Detalle algn tipo de partculas.
8. Adicionar, con cuidado y lentamente, dos cucharadas de etanol fro por las paredes del tubo.
Observar la formacin de capas, cuntas se forman?.
Figura 5. Pliegues iniciales entre los bordes de la plantillas.
13. Por la diagonal de la primera casilla, plegar entre los bordes de las Casillas 1 y 3 y llevar
hacia atrs (Figura 6A).
14. Por la base de la primera casilla, plegar entre los bordes de las Casillas 1 y 3 y llevar hacia
adelante (Figura 6B).
15. Repetir sucesivamente los pliegues hacia atrs (diagonal) y hacia adelante (base) de cada
casilla hasta llegar al final del papel (Figura 6C y 6D).

9. Esperar 3 minutos y observar detenidamente. El etanol hace que el ADN se separe de la

capa acuosa y empiece a flotar en la capa de alcohol (Figura 8A).

10. Tratar de pescar el ADN haciendo un movimiento envolvente con el alambre en forma de
anzuelo. Sacar el ADN de la solucin y observar detenidamente (Figura 8B). Describa el olor
y propiedades fsicas visibles, elasticidad y viscosidad del ADN extrado.

12 Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela 9
 A B
Extraccin de ADN de clulas vegetales y
animales
Extraccin de ADN de clulas vegetales
Objetivo: Extraer ADN de plantas y determinar algunas de sus caractersticas fsicas.
C D
Fundamento: El ADN se encuentra al interior del ncleo de las clulas, superenrollado y unido
a protenas para formar la cromatina. Para su extraccin, es necesario romper las clulas
(membrana o pared celular), acceder al ncleo y liberar el ADN.

Preguntas para desarrollar en la prctica:

  &! '&"" "$

Figura 6. (A) Pliegues entre las diagonales y (B) entre las bases de las casillas de la plantilla
 En qu componentes o estructuras celulares es posible encontrarlo?
para, en forma secuencial (C-D), ir construyendo un modelo tridimensional del ADN.

Materiales y lista de chequeo:

16. Con las dos manos, tomar los extremos de la figura (Figura 7A) y halar suavemente para dar
forma a la figura tridimensional, en forma helicoidal del ADN (Figura 7B y 7C).
10 ml de jabn lquido (de color claro) Un vaso graduado de plstico
100 ml de agua Un vaso de vidrio
A B C
10 ml de etanol al 95% Una estufa
1.5 g de sal (NaCl) Un termmetro
Una olla pequea Una cuchara metlica
Un colador plstico Un tubo de ensayo
Un cuchillo Guantes de ltex
1 Tallo de cebolla larga* Hielo
Figura 7. Modelo tridimensional, en forma helicoidal del ADN obtenido mediante la tcnica de plegado del Origami.
Alambre doblado en la punta (anzuelo) Papel de filtro para caf

* Como tejido alterno se pueden usar hojas de espinaca o un banano.

10 Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela Gua de Laboratorio de Biologa Molecular Bsica en la Escuela 11
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