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Experimento N 1. Determinacin Del Punto Isoelctrico Y Solubilidad De La Casena.

Objetivo

Determinar el punto isoelctrico y solubilidad de la Casena.

Material
Tubos de ensayo
Pipetas
Gradillas
Solucin de casena al 0.5% en acetato de sodio 0.1 N
cido actico 1 N
cido actico 0.1 N
cido actico 0.01 N
NaOH al 10%

Mtodo De Trabajo
Preparar el siguiente sistema de tubos:

Tubo N 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Ac. Actico 0.01 N 0.62 1.25 - - - - - - -
Ac. Actico 0.1 N - - 0.25 0.5 1.0 - - - -
Ac. Actico 1.0 N - - - - - 2.0 4.0 8.0 1.6
Agua destilada 8.38 7.75 8.75 8.5 8.0 7.0 5.0 1.0 7.4
Casena 0.5% 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

Agitar los tubos antes y despus de agregar la casena. Haga el clculo del pH terico para cada
uno de los tubos y si fuera posible determine el pH de cada tubo en un pH metro. Con los resultados
construya una grfica. Adems anote la presencia o falta de turbidez de 0 a ++++, segn
corresponda para cada tubo. Determinar con la mayor precisin el tubo que presenta el mximo
de precipitacin, lo cual se producir en el tubo que tiene un pH prximo al punto isoelctrico y al
de solubilidad mnima de la casena. Observar a los 10 minutos y 30 minutos, anote los cambios.
Seguidamente calentar los tubos en bao mara y apreciar el resultado. Anote sus apreciaciones.
Agregar NaOH al 10% gota a gota y observe. Anote los resultados.
Tubo N 1 2 3 4 5 6 7 8
pH 5.95 5.66 5.35 5.05 4.75 3.44 3.14 2.8

Resultados

En el tubo 4 y 5 hubo mayor turbidez, formando precipitados con grumos de color blanco, en el
tubo N4 el pH obtenido por medio de la Ecuacin de Henderson Hasselbach fue el mayor de
todos indicando en ese momento el pI de la casena.

Discusin

El punto isoelctrico es el pH de una molcula que tiene carga neta cero. A este valor de pH la
solubilidad de la sustancia es casi nula. As, todas las protenas tienen una carga neta
dependiendo del pH del medio en el que se encuentren. (Llerena, 2014) por lo cual la solubilidad
se determin por medio de la turbidez, formando un precipitado en el tubo N4 que indica el pI de
la casena. La casena se asienta, o precipita, en una solucin en su punto isoelctrico porque el
polo positivo de una molcula proteica atrae el polo negativo de otra, provocando que las
molculas se unan. (Aguilar et al., 2014), tericamente las casenas precipitan a pH 4.6, que es su
punto isoelctrico a temperatura ambiente. (Calvo, 2012), prcticamente se precipit a un
promedio de pH 4.4 lo que indica que hubo pocos errores en el experimento. Al agregar NaOH al
tubo que tiene la mitad de carga positiva y la otra negativa, van a predominar las cargas negativas
y como estas predominan provocan repulsin en las molculas disolviendo totalmente el
precipitado con grumo, sacando a la protena de su punto isoelctrico llevndola a un punto ms
alcalino.

Conclusin

Se determin el punto isoelctrico de la casena (pI = 5.05)