TCNICAS DE CONCENTRACIN POR FLOTACIN

1. TCNICA DE WILLIS:

Willis en 1921, describe este mtodo basado en la propiedad que tienen las soluciones de
densidad mayor de hacer flotar objetos menos densos. Este mtodo est recomendado
especficamente para la investigacin de protozoarios y helmintos.

Recomendado especialmente para la investigacin de geohelmintos.

Por su sencillez se puede utilizar en el campo, donde no se cuentan con demasiados materiales
o reactivos para realizar otros mtodos.

a. Usos:

Este mtodo es de alta sensibilidad en el diagnstico de huevos livianos de helmintos y quistes

de protozoarios como:

Entamoeba histolytica
Entamoeba coli
Trichomona tenax
Ancylostoma duodenale
Nector americanus
H. nana.

No se recomienda para la bsqueda de huevos pesados ni de larvas, ni en caso de muestras

diarreicas.

b. Fundamento: Los Huevos de helmintos de peso especfico menor que la solucin saturada de
NaCl tienden a subir y adherirse a una lmina colocada en contacto con la superficie del lquido.

c. Reactivos:

Sol. Saturada de NaCl

Sol. De yodo lugol
d. Procedimiento:

1.- Tomar aproximadamente1gr de heces fecales con un abate lenguas.

2.- Colocar la muestra en un vaso de precipitado y mezclar con 10ml de solucin saturada de
cloruro de sodio.

3.-En un tubo de ensaye filtre la mezclar con una gasa, llenando completamente el tubo.

4.-Coloque un portaobjetos sobre el tubo de manera que el lquido haga contacto con el
portaobjetos.

5.-Esperamos de 5 a 10 minutos.

6.-Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del portaobjetos que est en
contacto con la mezcla.

7.-Colocar una gota de yodo lugol en el porta objetos y colocar el cubreobjetos.

8.-Examinar la muestra al microscopio con el objetivo 40x, buscamos quistes o huevecillos de

parsitos.

9.-Reportar los resultados

2. MTODO DE FAUST O FLOTACIN CON SULFATO DE ZINC:

a. Usos:

Es una tcnica til para recuperar quistes y ooquistes de protozoos y huevos de helmintos, con
excepcin de los operculados y los de alta densidad como A. lumbricoides.

En el caso de los helmintos, la solucin de Zn, cuya densidad especfica es de 1.180 (33%), que
conforma un medio de densidad ms alta que la de los huevos:

Nector 1.055
Tricocfalo 1.150

b. Fundamento:

La concentracin adecuada aconsejada es la que usa como reactivo, una solucin acuosa de
sulfato de Zn al 33% con una densidad al 1.180. El agua utiliza diluye y lava materia fecal. El
filtrado con gasa doblada evita que los detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugacin
enriquece en delgada pelcula la superficie del lquido centrifugado con los huevos livianos de
algunos helmintos.

c. Ventajas y Desventajas:

Esta tcnica es mejor para quistes y protozoos que para huevos y larvas de helmintos. El xito
depende de la exactitud en la densidad del sulfato de Zinc. El contacto prolongado con el sulfato
de zinc, puede deformar los quistes y dificultar su identificacin, por lo tanto estas preparaciones
debe ser examinan lo antes posible. Puede tener un alto costo debido al reactivo de zinc y est
contraindicado para muestras diarreicas.

d. Reactivo de Faust:

Se obtiene de disolver 330g de sulfato de zinc en 1000ml de agua destilada y ajustar a una
densidad de 1.18 a 1.20 (preferir esta ltima en caso de material fijado).

e. Procedimiento:

1. La muestra de deposicin (1/2 cucharada) se disuelve con agua en un tubo de centrfuga y se

centrifuga a 2500 rpm durante 2 3 minutos.
2. Se descarta el sobrenadante y el sedimento se resuspende en la solucin de sulfato de zinc
(se puede filtrar en gasa) para luego centrifugar durante un minuto a 2500 rpm.

3. Sin remover el tubo de la centrifuga o colocndolo cuidadosamente en una gradilla, se recoge

de la capa superficial una o dos gotas en un portaobjetos y se tie con una gota de lugol, luego
se coloca un cubreobjetos y se observa.

3. MTODO DE CONCENTRACIN POR FLOTACIN CON CENTRIFUGACIN EN UNA SOLUCIN

DE AZCAR (TCNICA DE SHEATHER)

a. Usos:

Esta tcnica es apropiada para la observacin y registro de ooquistes de Isospora,

Cryptosporidium, Cyclospora y Sarcocystis.

b. Fundamento:

Se basa en la flotacin de quistes, ooquistes y huevos de parsitos en una solucin de azcar

que posee mayor densidad que ellos. Esta tcnica es til para la concentracin de quistes y
ooquistes de protozoos y huevos de helmintos y se usa como mtodo preferencial en el
diagnstico de los coccidios: Cryptosporidium, Cyclospora, Isospora, etc.
c. Procedimiento:

1. Homogeneizar 1 a 2 g de materia fecal en suero fisiolgico.

2. Colocar un embudo de vidrio con una gasa doblada en la abertura del tubo de ensayo y filtrar
el material homogeneizado.
3. Centrifugar el tubo con el material homogeneizado a 1 500 r.p.m. durante 2 a 5 minutos.
4. Eliminar el sobrenadante, y agregar la solucin de azcar (sacarosa 500 gr, agua destilada
320 ml y fenol 6 gr) hasta 1 cm del borde del tubo, agitar hasta disolver el sedimento,
centrifugar como en el paso anterior, completar con la solucin de azcar hasta el borde y
esperar de 2 a 5 minutos la formacin de un menisco.

Con la ayuda del asa de platino, tomar una muestra de la superficie del menisco y colocarla en
una lmina portaobjeto, agregar lugol, cubrir con una laminilla y observar al microscopio. En el
caso de observar coccidios, de la superficie del preparado, tomar con la asa de platino o con una
pinza curva, una muestra para preparar un frotis para teir por el mtodo de Ziehl-Neelsen
modificado.

4. MTODO DE PARODI ALCARAZ (MTODO DE CONCENTRACIN POR FLOTACIN SIN

CENTRIFUGACIN, EN SOLUCIN SOBRESATURADA DE AZCAR):

a. Usos y beneficios:

El mtodo es til para la deteccin de quistes de protozoarios y huevos de helmintos. Se puede

observar varios tipos de huevos de parsitos especialmente para observacin de coccidias.
Puede ser aplicado en el campo con facilidad y es de bajo costo.

b. Fundamento:

Se basa en la propiedad que tienen los quistes y/o huevos de flotar en la superficie de una
solucin saturada de azcar, debido a su menor densidad.

c. Procedimiento:

1. Colocar 1 a 2 g de heces en el tubo de ensayo.

2. Agregar 3 a 5 ml de la solucin sobresaturada de azcar y homogeneizar con un aplicador.
3. Completar el contenido del tubo con la misma solucin de azcar hasta formar un menisco.
4. Dejar en reposo por 30 minutos.
5. Colocar en contacto con el menisco, una laminilla cubreobjetos que permitir la adherencia
por viscosidad de los quistes y huevos.
6. Colocar en la lmina portaobjeto una gota de solucin de lugol.
7. Retirar la laminilla con sumo cuidado, colocarla sobre la lmina portaobjeto y examinar al
microscopio.

Es conveniente la observacin inmediata a 10X y 40X, pues los quistes y/o huevos suelen
deformarse si la densidad de la solucin es demasiado alta.

Este mtodo est contraindicado en muestras diarreicas.

5. MTODO DE FULLEBORN:

a. Utiliza:

Solucin saturada de NaCl (340 g de NaCl en 1000ml de AD, = 1147-1150), mortero, embudo,
colador de malla gruesa, tubo de Borrell.

b. Procedimiento:

1. Triturar en el mortero 5-10 g de MF con 50 ml de solucin salina (9 g NaCl en 1000 ml de AD).

2. Filtrar con el colador recogiendo el lquido en el tubo de Borrell y dejar reposar 20 min.
3. Tomar una gota de la superficie con un ansa o con una pipeta. Colocar la gota entre porta y
cubreobjetos y observar al microscopio. Para que el estudio sea completo, se puede revisar
el sedimento tomando una muestra del fondo, con pipeta, a las 6 hs.