HERENCIA PATERNAL DEL ADN MITOCONDRIAL

ADN MITOCONDRIAL MAMFEROS

(ADNmt) se piensa que es estrictamente maternalmente mitocondrias inherited. esperma desaparecen en la
embriognesis temprana por la destruccin selectiva, la inactivacin, o la dilucin sencilla por la gran
excedente de mitochondria.3 ovocito Cantidades muy pequeas de ADN mitocondrial heredado del padre han
sido detectadas por la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) en ratones despus de varias generaciones
de interespecfica Estudios backcrosses.4 de tales hbridos y de ratn ovocitos con los espermatozoides
microinyeccin apoyan la hiptesis que las mitocondrias de esperma son objeto de la destruccin por
proteins.5-7 codificada en el ncleo Presentamos el caso de un hombre de 28 aos de edad, con miopata
mitocondrial debido a una delecin ADNmt novela de 2 pb en el ND2 gen (tambin conocido como MTND2),
que codifica una subunidad del complejo enzima I del mitocondrial cadena respiratoria. Se determin que el
ADNmt portadoras de la mutacin fue origen paterno y representaron el 90 por ciento de los msculos del
paciente ADNmt.
REPORTE DE UN CASO
El paciente era un hombre de 28 aos de edad, con el ejercicio intenso, de toda la vida intolerancia. Nunca
haba sido capaz de ejecutar ms de unos pocos pasos.Sus funciones cardacas y pulmonares fueron normales,
y l era lo contrario bien. Ambos padres y una hermana de 23 aos de edad, estaban sanos y tenan tolerancia
normal ejercicio. Los sntomas de miopata se asociaron con la acidosis lctica severa inducida por el esfuerzo
fsico menor. Su nivel de lactato en plasma despus de caminar 100 metros a un ritmo ms lento fue de 6 a 8
mmol por litro (la nivel normal est por debajo de 2,5 mmol por litro). Sus niveles de creatina quinasa fueron
elevados marginalmente en perodos sin esfuerzo fsico. Las biopsias del msculo cudriceps derecho e
izquierdo revel que 15 por ciento de las fibras eran del tipo irregular-rojo, un resultado consistente con la
acumulacin de mitocondrias anormal con respiratoria deteriorada funcin. El anlisis bioqumico ha
demostrado una deficiencia aislado del complejo enzima mitocondrial I de la cadena respiratoria en el
msculo. No haba signos de atrofia muscular o debilidad. Los hallazgos anormales en especmenes de biopsia
de msculo de ambos muslos y el hallazgo de discapacidad grave extraccin de oxgeno cuando los msculos
del antebrazo fueron repetidamente contracted8 sugirieron generalizada afectacin muscular.
MTODOS
Se aisl el ADN de las races de la sangre, msculo, pelo del paciente, y fibroblastos (derivadas de una biopsia
de piel) por mtodos estndar. ADN tambin se aisl de la sangre de los padres del paciente y to paterno, y
de la sangre y el msculo cudriceps de La hermana de la paciente. El ADNmt se amplific en dos productos
con el OLA cebadores (5756-5781) + D1B (282-255) y D1A Se purificaron (336-363) + OLB (5.745 a 5721),
9 y los productos. Hemos secuenciado la mayor parte del ADN mitocondrial, incluyendo todos los ARN de
transferencia (ARNt) genes, cytB, y todos los siete genes que codifican subunidades de enzima Complejo I,
usando un analizador gentico (ABI PRISM 310, Applied Biosystems) y una lista de reaccin terminador de
ciclo de secuenciacin kit (ABI PRISM BigDye, Applied Biosystems). las secuencias de obtenidos se
compararon con la referencia Cambridge revisado sequence10,11 (AC J01415) con el uso del programa
DNASIS (Hitachi Ingeniera de Software Europa). Dos diferentes haplotipos de ADNmt fueron encontrados
en el paciente; presumiblemente, vino uno del padre y otro de la madre.
minisequencing12 en fase slida se realiz para establecer la proporciones de ADNmt haplotipos en la sangre
y el msculo. El objetivo era la posicin del nucletido 3197, que, entre otros, distinguido el haplotipo materna
(3197T) a partir de la paterna (3197C).
Los productos de PCR que abarca la posicin en cuestin se generaron el cebador 5 'biotinilado hacia adelante
(3.014 a 3.034) y la inversa imprimacin (3376-3356). Los productos de PCR se inmovilizaron sobre un
revestido con estreptavidina soporte slido (placa de 96 pocillos) y se desnaturaliz por el sodio hidrxido.
Un cebador de secuenciacin (3220-3198) fue diseado recocer adyacente a (aguas arriba de) el nucletido
3.197.
El nucletido en la posicin 3197 se analiz por el cebador reaccin de extensin, en la que un
desoxinuclesido trifosfato marcado con tritio correspondiente a ya sea el nucletido materna
(desoxiadenosina trifosfato) o el nucletido paternal (desoxiguanosina trifosfato) se aadi a dos reacciones
paralelas. Despus del lavado, los cebadores alargados se eluyeron por hidrxido de sodio, y la cantidad de
monofosfato incorporada [3H] era desoxinuclesido se determin con un contador de centelleo lquido. Las
proporciones de adenina a la guanina incorporado en cada cebador de secuenciacin fueron determinados y
en comparacin con los valores de una curva patrn construida sobre la base de las proporciones conocidas
de segmentos clonados de ADNmt albergar 3197T y 3197C, respectivamente. La relacin de la delecin de 2
pb de tipo salvaje ADNmt en tejidos (El nivel de heteroplasmia) se determin por anlisis de fragmentos de
PCR. El ADN mitocondrial se amplific por la 5'-fluorocromo marcado con hacia adelante cebador (5041-
5060) y el cebador inverso (desde 5.196 hasta 5177).
Los productos de PCR se analizaron en un analizador gentico con una estndar GeneScan (PE Applied
Biosystems) como marcador de tamao. Los Se utilizaron reas del mutante (supresin 2-bp) y de tipo salvaje
picos para calcular el porcentaje de mutante (paternal) ADNmt en el paciente de msculo.
Los genotipos nucleares del paciente, sus padres y su hermana se determinaron los marcadores altamente
polimrficos (microsatlites) D7S2212, D7S817, D19S219, D19S559, y TNFb. PCR productos se analizaron
en un analizador gentico con el software GeneScan (Applied Biosystems) y un estndar de GeneScan como
marcador de tamao.
El paciente y su familia dieron su consentimiento oral para despus de la prueba recibir asesoramiento.
consentimiento por escrito no fue requerido por el junta de revisin institucional porque la investigacin se
consider parte de la atencin clnica.
RESULTADOS
La secuenciacin del genoma mitocondrial de un espcimen de una biopsia del msculo cudriceps revel una
delecin de 2 pb, 5132delAA, en el ND2 gene. La supresin de 2 pb provoca un cambio de marco,
introduciendo un codn de parada aguas abajo de la eliminacin. Adems, una nueva variante, 1303G A,
se detect en el ARN ribosomal 12S gen que codifica (rRNA). El 1303G Una variante no se encontr en
50 normales controla, pero un anlisis mostr que esta conservacin posicin no se conserva a travs de la
evolucin (Tabla 1). El paciente fue aparentemente homoplasmic (slo una tipo de ADNmt estaba presente),
tanto para la supresin de 2 pb y 1303G A. El paciente tambin albergaba variosconocidos polimorfismos
del ADN mitocondrial. Para evaluar la relacin de normal a ADNmt mutante (Heteroplasmia) en otros tejidos,
se analizaron ADNmt de la sangre del paciente, las races del pelo, y cultivos de fibroblastos. Ni el 1303G
Una variante ni el 2-bp delecin estaba presente en el ADNmt de estos tejidos. En De hecho, las secuencias
de ADNmt de sangre y msculo diferan en 18 posiciones, algunas de las cuales permiti la asignacin de las
dos secuencias para separar haplogrupos de ADN mitocondrial Europea, H y U5, respectivamente (Tabla 2 y
Fig. 1).
La confusin de las muestras se descart por los anlisis de repetirse sangre y msculo muestras. El msculo
repetida Las biopsias fueron en el lado derecho e izquierdo vasto externo msculos. Adems, el genotipado
de todas las muestras para cinco marcadores nucleares altamente polimrficos (microsatlites) indicaron que
todas las muestras procedan de la misma persona (Fig. 2).
La secuenciacin de ADNmt sangre del paciente de los padres sanos y de su to paterno demostrado que el
haplotipo de los msculos del paciente ADNmt era idntica a la de su padre y el to de sangre (con la excepcin
de la delecin de 2 pb, que se encontr slo en el paciente). El haplotipo de la la sangre de los pacientes fue
idntica a la de su madre.El anlisis de ADNmt de la sangre y los msculos de La hermana de la paciente se
encuentra slo el ADN mitocondrial materno haplotipo (datos no mostrados). El microsatlite nuclear
genotipos del paciente, sus padres, y su hermana mostr una distribucin de alelos consistentes con sus
relaciones biolgicos (Fig. 2).
De acuerdo con la secuenciacin directa de PCR amplificado ADNmt, el tejido muscular del paciente era
homoplasmic para el haplotipo paterno y para la 2-bp supresin. Sin embargo, minisequencing12 en fase
slida y anlisis de fragmentos mostr aproximadamente 10 por ciento materna (Normal) ADNmt en ambos
especmenes de biopsia de msculo (Figura 1). El ADNmt de la sangre del paciente, el cabello races, y los
cultivos de fibroblastos mostraron slo el materno haplotipo.
TABLA 1. CONSERVACIN DE ANLISIS 1303G
EN 12S ARN ribosomal travs de las especies. * Los nucletidos 1297 a 1308 se muestran, y el nucletido
1303 se muestra en la negrita.
TABLA 2. Las diferencias de secuencia entre los dos El ADN mitocondrial (ADNmt) haplotipos encontrados
EN SANGRE y el msculo del paciente y EN SANGRE de sus padres.
* Esta es la sequence.10,11 referencia Cambridge
El haplotipo del ADNmt de los msculos del paciente y de su padre sangre, tal como se define por los
nucletidos en estos sitios, es diagnstico de ADNmt haplogrupo U5.13,14
El haplotipo del ADNmt de la sangre del paciente y la de su madre, tal como se define por los nucletidos
en estos dos sitios, y la presencia de 4580G en todas las muestras (datos no mostrados) son de diagnstico de
ADNmt haplogrupo H.13-15.
Figura 1. Anlisis de la secuencia parcial de ADN mitocondrial de La sangre del paciente y del msculo y de
la sangre de sus padres. El panel A muestra parte de la diferencia en los haplotipos entre muscular del paciente
(paternal) y su sangre (materna).
Las flechas indican los nucletidos polimrficos 3192 y 3197. El panel B muestra de anlisis de fragmentos
para la eliminacin de 2 pb. Fragmentos de 152 pb (normal) y 150 pb (supresin 2-bp) se muestran en prpura.
El estndar de tamao GeneScan se muestra en naranja. Los muscular es heteroplasmic por la eliminacin,
con el 10 por ciento de tipo salvaje y 90 por ciento de ADN mitocondrial mutante.
Figura 2. pedigr de la familia con los genotipos de cinco microsatlites Los marcadores de ADN nuclear.
Alelo tamaos se dan en pares de bases. Estos resultados confirman que Asunto I-1 es el padre biolgico del
paciente (sujeto II-1). Los alelos encontrados en el ADN nuclear del msculo de Asunto II-1 eran idnticos a
los encontrados en el ADN nuclear de su sangre.
DISCUSIN
Presentamos el caso de un paciente con un ejercicio severo intolerancia causada por una delecin de 2 pb en
el gen de ND2 de ADNmt. Un hallazgo sorprendente fue que la mutacin producido en un fondo paterna
ADNmt. Debido a que el paciente tena una miopata aislado debido a una mutacin que slo se encuentra en
el msculo esqueltico, y porque la familia miembros no se vieron afectados y no portaban la mutacin en
sangre o msculo, llegamos a la conclusin de que el 2-bp eliminacin surgi espontneamente en la
embriognesis temprana o en la lnea germinal paterna. Sin embargo, no podemos descartar la posibilidad de
que el padre albergaba esta mutacin en un nivel bajo en otros tejidos. El origen de la mutacin podra ser
similar a la de espordica, solo, deleciones a gran escala, que hasta ahora se ha pensado a surgir
espontneamente en el ADNmt materna, ya sea enla lnea germinal o en mutaciones tempranas
embryogenesis.16 de ADNmt causan sntomas slo cuando ls altos niveles de ADNmt mutante estn
presentes: por lo general, del 50 al 60 por ciento para individuales, deleciones a gran escala y de 80 a 90 ciento
para el punto mutations.17,18 Para un alto porcentaje de ADNmt mutante de estar presente, una ventaja
replicativa para las mitocondrias mutados probablemente se requiere.
Sin embargo, no slo las supresiones sola, a gran escala, sino tambin mutaciones puntuales ADNmt, pueden
proliferar con tiempo y superan en nmero de tipo salvaje mtDNA.19 Ha sido sugerido que la ventaja
replicativa del gran escala deleciones se debe a una terminacin ms rpida de la replicacin de las molculas
de ADNmt ms pequeo, pero el experimental evidencia de esta hiptesis es controversial.2 El complejo I de
la cadena respiratoria consiste en 41 subunidades, 7 de las cuales son codificadas por el ADNmt. Los codn
de parada introducido por la delecin 2-bp afecta traduccin de la parte C-terminal del producto del gen. Por
lo tanto, inactiva la subunidad ND2 y la la funcin cataltica del complejo I. En apoyo de este concepto, la
actividad del complejo I se vio gravemente afectada en el msculo del paciente que describimos. El paciente
tambin albergaba una nueva variante (1303G A) en el gen 12S rRNA. Esta variante podra influir
tericamente fenotipo del paciente.
Sin embargo, la variante se encuentra en una parte de los 12S gen rRNA que no se conserva en la evolucin.
Ratn y 12S rRNA genes de rata tienen una adenina, y el conejo y los genes de elefantes tienen una timina en
esta posicin (Tabla 1), lo que sugiere que 1303G A es un inofensivo variante. Por otra parte, la aparicin
de homoplasmic 1303G A en el padre y el to sano tambin indica la naturaleza no patgena de esta variante.
Hasta ahora, el ADNmt patgena se ha supuesto para ser heredado de la madre o por haber surgido de forma
espontnea en un fondo mtDNA maternal. Sin embargo, herencia paterna ADNmt puede pasar desapercibida
en casos con deleciones, individuales, espordicas a gran escala, ya haplotipos mitocondriales rara vez se
investigan en los anlisis de diagnstico. Lo mismo puede decirse de la casos raros de mutaciones puntuales
en el ADNmt que espordicos dar lugar a un cuadro clnico similar a la de la presente el paciente. Las
mutaciones en el ADNmt que no se pueden detectado en la madre, se encuentran en el msculo esqueltico
solamente, y no tienen efectos distintos de la intolerancia al ejercicio se ha informado de las subunidades de
la cadena respiratoria ND4,20 citocromo b, 21 de citocromo c oxidasa subunidad I, 22 y citocromo oxidasa
subunidad III.23 c Entre estos, las mutaciones del gen del citocromo b han sido reportados en ms de un
patient.21 Sin embargo,espordicos citocromo b mutaciones tambin pueden afectar tejidos distintos de
muscle.24 En el presente caso podra ser el resultado de la supervivencia de uno o una mitocondria esperma
pocos que probablemente habra sido diluido y nunca han sido reconocidos haba la mutacin patgena no
confiere una ventaja proliferativa selectiva en la mitocondria.
Hay evidencia fuerte de que ahora altamente eficaz Existen procesos para la eliminacin de las mitocondrias
espermatozoides sanos en embryogenesis.5-7 mamferos temprana Cuando un espermatozoide, incluyendo la
pieza intermedia, que es rica en las mitocondrias, se inyecta directamente en un ovocito, como en tcnicas de
reproduccin asistida para tratar la infertilidad humana, paternal ADNmt puede ser detectada en la clula de
cuatro toeight etapa de algunos embryos.25 anormal Sin embargo, paternal ADNmt no se ha detectado en los
lactantes nacido despus de injection.26 intracitoplasmtica de espermatozoides El mecanismo subyacente
responsable de la eliminacin de ADNmt de esperma en los embriones normales es no se entiende bien. Los
autores especulan que el proceso de algunos casos pueden ser defectuosos, permitiendo que las mitocondrias
espermticas para sobrevivir y dando a aquellos con un selectiva ventajosamente la posibilidad de que
prevalece en ciertos tejidos. Los presentes hallazgos sugieren que la investigacin de la herencia paterna
ADNmt puede estar justificada en casos con mutaciones mitocondriales espordicos.
Lucia Martnez Pujadas

TIPOS DE VACUNAS
Vacunas de microorganismos vivos atenuados
Contienen el microorganismo vivo pero en una forma atenuada o debilitada, de manera que no pueda causar
la enfermedad. Es el tipo de vacuna que mejor imita lo que sera la infeccin natural, por lo que el sistema
inmunolgico aprende fcilmente a generar la proteccin frente al microorganismo. Al tratarse de
microorganismos vivos estas vacunas se han de mantener refrigeradas. Su efecto suele durar de por vida
con una o dos dosis. Estas vacunas no se han de administrar a personas con el sistema inmunolgico
debilitado, pues una mala respuesta de ste podra hacer que el microorganismo se mantuviera vivo y
aumentaran as las posibilidades de que causara enfermedad.

Vacunas inactivadas o muertas

En este tipo de vacunas el microorganismo no est debilitado sino muerto, de manera que no puede
reproducirse ni causar la enfermedad. Tampoco es tan vital mantenerlas refrigeradas, lo que las hace ms
seguras y ms estables, siendo su transporte ms fcil. La desventaja es que la respuesta inmunolgica que
desencadenan no es tan intensa como la de las vacunas atenuadas y suelen ser necesarias varias dosis de
recuerdo para poder mantener la inmunidad frente al microorganismo.

Vacunas de subunidades
Estas vacunas estn compuestas slo por las partes del microorganismo que mejor respuesta inmunolgica
producen. Al no contener el microorganismo completo gran parte de sus molculas y antgenos, estas
vacunas resultan ms seguras y producen menos reacciones.

Vacunas de toxoides
Muchos microorganismos producen la enfermedad a travs de una toxina. Para inmunizar frente a estos
agentes infecciosos se utilizan vacunas de toxoides. El toxoide no es otra cosa que la propia toxina sometida
a un tratamiento para quitarle su capacidad de provocar la enfermedad, pero sin que pierda su capacidad
de generar una respuesta protectora por parte del sistema inmunolgico.

Vacunas conjugadas
Estas vacunas han venido a solucionar un serio problema que exista con otros tipos de vacunas: los nios
muy pequeos no respondan frente a ciertas vacunas porque su organismo no reconoca los antgenos
presentes en ellas. La incorporacin a estas vacunas de antgenos de otros microorganismos distintos a
aqullos frente a los que se trata de inmunizar ha conseguido que el organismo de estos nios s genere
una respuesta.

Vacunas combinadas
Son las que contienen dos o ms vacunas y que se administran en el mismo momento y en el mismo punto
anatmico. Como ventajas ofrecen que necesitan menos inyecciones, con lo que facilitan la vacunacin y
suponen un ahorro econmico. Su inconveniente principal es que resulta muy complejo alcanzar los niveles
requeridos de seguridad, eficacia y efectividad.
Ejemplos muy conocidos de vacunas combinadas son la de la difteria, ttanos y tos ferina o la triple vrica
(sarampin, rubola y parotiditis), y las hay combinadas contra distintos tipos de meningococo, de hepatitis
(A y B) y otras.

Vacunas obtenidas mediante tecnologas de vanguardia

El uso de novsimas tecnologas inmunitarias, especialmente de ingeniera gentica, est permitiendo
producir nuevas vacunas muy diferentes de las clsicas, que en algunos casos han supuesto un gran
avance, aunque con un elevado coste econmico.