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20150104
Artigo
Carlos A. G. de Souzaa,*, Snia M. C. Siqueiraa, Antnia F. V. de Amorima, Selene M. de Moraisa, Tamara Gonalvesc,
Rayane N. Gomesa, Arcelina P. Cunhab e Ngila M. P. S. Ricardob
a
Laboratrio de Produtos Naturais, Universidade Estadual do Cear , 60740-000 Fortaleza CE, Brasil
b
Departamento de Qumica Orgnica e Inorgnica, Universidade Federal do Cear, 60021-970 Fortaleza CE, Brasil
c
Departamento de Farmcia, Universidade Federal do Cear, 60430-370 Fortaleza CE, Brasil
CH2OH CH2OH
HO O H HO O H
H H
OH H OH H
H O H O
CH2OH
CH2OH
HO
CH2 H HO CH2
H H O
H O H O O H O
O O O
H H H H
OH HO OH HO OH HO OH HO
H H H H
H H H H H H H H
Figura 2. Estrutura da galactomanana obtida a partir das sementes da D. Regia 16
-D-galactopiranose ligadas do tipo 16. (razo manose / galactose da galactomanana, os endospermas isolados foram submetidos a trs
2:1). A razo manose / galactose semelhante a da goma guar, mas extraes aquosas exaustivas.
diferem em termos de posio da ligao OH na cadeia principal: Em cada extrao fez-se uso de 900 mL de gua destilada para
goma flamboyant tem -D-manose, enquanto a goma guar tem -D- cada 150 g de endosperma a 75 C por um perodo de 4 horas,
manose (Figura 2).16 sob agitao, at a formao de uma soluo viscosa. Aps esse
Este polmero apresenta uma srie de caractersticas atraentes para procedimento, a soluo foi filtrada e armazenada a 4 C e o slido
aplicaes biofarmacuticas, entre as quais a sua alta capacidade de retido, submetido a mais duas extraes at que todo o endosperma
gelificao devem ser destacada.17 A goma da semente de flamboyant fosse completamente desfeito, restando apenas fibras insolveis.
carboximetilada foi usada por Betancur e colaboradores na mircro- Ao final das trs extraes exaustivas, os lquidos armazenados
encapsulao da papana e polissacardeos semelhantes, como goma foram reunidos e submetidos a uma filtrao a vcuo, sendo em
guar (Cyamopsis tetragonalobus), goma alfarroba (Ceratonia siliqua) seguida adicionado etanol na proporo 2:1 (etanol/filtrado) para
e goma guapuruvu (Schizolobium parahybae) foram investigadas com precipitao das galactomananas. Estas foram coletadas e poste-
a mesma finalidade.18-22 riormente liofilizadas num liofilizador da Labconco Freeze Dryer,
A variedade de propriedades fsico-qumicas torna esse polissaca- Modelo 7.750.020.
rdeo um material bastante verstil utilizado pelo homem de inmeras
formas, entre elas, na indstria txtil, farmacutica, alimentcia, Determinao da massa molar por cromatografia de
cosmtica e na biomedicina.13,23 permeao em gel (GPC)
Os objetivos do presente trabalho foram preparar micropartculas
do cido L-ascrbico em galactomanana pela tcnica spray drying, Foi preparada uma soluo de 0,1% da goma em gua e em
caracteriz-las e investig-las quanto sua capacidade antioxidante. As seguida foi filtrada com membrana Milipore de porosidade 0,45 m.
micropartculas foram preparadas como alternativa para um potencial A determinao da massa molar foi determinada por cromato-
aumento da estabilidade do frmaco, com melhor desempenho para grafia de permeao em gel (GPC) em um instrumento Shimadzu
possveis aplicaes na rea de alimentos e de biotecnologia. LC-10AD com detector de ndice de refrao RID-10A a 40 C. A
anlise foi realizada com uma coluna Ultrahydrogel linear 7,8 x
PARTE EXPERIMENTAL 300 mm, fase mvel de NaNO3 0,1 mol L-1, fluxo de 0,5 mL min-1.
O volume injetado da amostra foi de 20 L.
Materiais
Anlise por ressonncia magntica nuclear do prton
O cido ascrbico (C6H8O6; 176,12 g mol-1) foi adquirido na CAQ (RMN1H)
(Casa da Qumica) Brasil; metanol (SYNTH) Brasil; etanol (grau de
pureza 95%, SYNTH) Brasil; DPPH (SIGMA) EUA. A estrutura da galactomanana da D. regia foi determinada usando
a espectroscopia de RMN 1H. A ressonncia do prton foi relacionada
Fonte do polisssacardeo com bases nos dados reportada na literatura para galactomananas.25,26
Foram preparadas solues das amostras da galactomanana (D. regia)
As sementes da espcie D. regia foram coletadas na Universidade em D2O na concentrao de 0,045 mg L-1, sendo as amostras deixa-
Estadual do Cear (UECE), Fortaleza CE, Brasil, em janeiro das em gua deuterada nessa concentrao por 24 horas sob agitao
de 2013. Um total de 300 g de sementes foi coletado. A exsicata constante e a temperatura de 80 C. Os espectros de ressonncia
da espcie encontra-se depositada no Herbrio Prisco Bezerra da magntica nuclear do hidrognio (RMN 1H) foram obtidos por meio
Universidade Federal do Cear sob nmero 53140. do espectrmetro Bruker Spectrometers, modelo Avance DRX-500,
com transformada de Fourier, no Centro Nordestino de Aplicao e
Isolamento da galactomanana Uso da ressonncia magntica nuclear (CENAUREMN), operando
na frequncia do hidrognio a 500,13 MHz e utilizando uma sonda
O isolamento da galactomanana seguiu a metodologia proposta dual de 5 mm. Os espectros foram registrados temperatura de 80C.
por Vieira e colaboradores, com modificaes.24 As sementes foram Foi usado um composto 2,2-dimetil-2 silapentano-5-sulfanato de
inativao enzimtica em gua a 98 C em constante agitao por sdio (DSS) como padro interno (0,00 ppm para 1H) nas amostras
1 hora. Em seguida as sementes foram imersas em gua destilada por dissolvidas em gua deuterada. Para os espectros de RMN 1H so
24 horas e, aps esse perodo de intumescimento, o endosperma foi integrados os sinais dos hidrognios pertencentes aos carbonos ano-
separado manualmente do tegumento e do embrio. Para a obteno mrico da amostra. Por meio das integraes desses de dois sinais,
Vol. 38, No. 7 Encapsulao do cido L-ascrbico no biopolmero natural galactomanana por spray-drying 879
em torno de 5,19 e 5,47 ppm, foi calculada a razo manose:galactose (KBr) em p para obteno das pastilhas. A medio IV foi feita no
(M:G) da galactomanana da D. regia.27 intervalo de nmeros de onda de 500-4000 cm - 1.
Para a preparao das micropartculas, 2,0 g de galactomanana lio- A morfologia das amostras de AA, galactomanana (G) e micro-
filizada foi pesada e dissolvida em gua destilada em agitao constante partculas de galactomanana contendo cido ascrbico (GAA) foi
e aquecimento de 40 C por 24 h. Em seguida foi adicionado 200 mg mostrada nas micrografias produzidas pelo microscpio eletrnico
de cido ascrbico com agitao por 1 hora. Logo aps, a soluo foi de varredura, modelo Zeiss DSM 940A (Oberkochen, Alemanha)
atomizada em aparelho de spray dryer Buchi-290, usando temperatura operando a 15 kV. As amostras foram preparadas em stubs, camada
de entrada de 120 C; temperatura de sada de 90 C; eficincia do metlica de platina (60 nm de espessura) no evaporador EMS.
exaustor de 90% e fluxo de bomba de 30%. As micropartculas foram
coletadas, armazenadas e cobertas com papel alumnio, temperatura Anlises trmicas
ambiente para evitar uma possvel oxidao sob ao da luz.
As propriedades trmicas das amostras foram determinadas
Eficincia de encapsulamento usando Calorimetria Diferencial de Varredura (DSC) e anlise
termogravimtrica (TGA). As curvas de DSC foram realizadas em
Curva padro um equipamento Shimadzu modelo DSC-50, utilizando cadinho de
A soluo estoque do AA foi preparada em soluo de metanol platina e atmosfera de nitrognio, com uma vazo de 50 mL min-1 no
na concentrao de 100 g mL-1. Diferentes alquotas desta soluo intervalo de temperatura de 25-500 C, a uma taxa de aquecimento
foram transferidas para bales volumtricos de 10 mL cobertos com de 10 C min-1. A massa das amostras foi de 5 mg. As curvas ter-
papel alumnio e o volume completado com metanol a fim de obter mogravimtricas das amostras foram obtidas por um equipamento
solues de diferentes concentraes (2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, Shimadzu modelo TGA-50, usando um cadinho de platina, atmosfera
20, 22 g mL-1). A absorbncia das solues foi determinada por de ar sinttico, com 50 mL min-1, entre as bandas de temperatura de
espectrometria na regio UV-Vis em 243 nm, usando o metanol 25 a 800 C, com taxas de aquecimento de 10 C min-1. A massa
como branco. A partir da curva de calibrao foi obtida a equao inicial das amostras analisadas foi de 10 mg.
1 de regresso linear entre o valor da absorbncia e a concentrao
do frmaco em g ml-1. Difrao de raios-X
Y = 0,0427X 0,061, onde R2=0,9991 (1) As amostras foram analisadas em difratmetro Panalytical, Xpert
Pro MPD (Holanda) do departamento de Fsica da Universidade
Quantificao de cido ascrbico nas micropartculas por espec- Federal do Cear, utilizando radiao CoK, uma tenso de 40 kV
trofotometria UV-Vis. e uma corrente de 40 mA. A taxa de varredura empregada foi de 0,5
Foi pesado 2 mg de 10 amostras das micropartculas de galacto- min-1 em regio de 3 a 90 de ngulo de difrao (2). As amostras
manana contendo AA, uma amostra padro protegida do ambiente e as foram trituradas para obteno de um p fino antes da anlise.
outras em diferentes condies ambientais [temperatura 25 C, 60C e
sobre ao da luz ()] por sete dias e dissolvidas em 10mL de metanol Atividade antioxidante frente ao radical DPPH
para obter a soluo de 200 g mL-1 em 10 frascos diferentes, as quais
foram analisadas em espectrmetro na regio UV-Vis a 243 nm (n=3). A avaliao quantitativa da atividade antioxidante foi realizada
A concentrao do frmaco foi determinada usando a curva padro, e a seguindo metodologia usual de Yepez e colaboradores, com algumas
eficincia de encapsulao foi calculada de acordo com a equao 2 : modificaes.28 Foram pesados 15 mg de AA no encapsulados nas
seguintes condies: temperaturas de 25 C e 60 C, protegido da luz
QTD
EE (% ) = 100 (2)
e exposto a luz por 7 dias. Da mesma forma, foram pesados 15mg de
QTA micropartculas de galactomanana contendo cido ascrbico (GAA)
nas mesmas condies ambientais. Em seguida, as amostras foram
EE= Eficincia de Encapsulao; QTD= Quantidade de frmaco diludas em metanol para obteno da concentrao de 10mg mL-1 e
determinado no sistema polimrico; QTA= Quantidade de frmaco submetidas ao banho ultrassnico do Modelo USC 1400 para libera-
teoricamente adicionado no sistema polimrico. o do AA das micropartculas no meio e aumentar a solubilidade das
micropartculas frente ao metanol, das quais foram retiradas alquotas
Para calcular o teor de frmaco encapsulado, foi utilizada a para obter as concentraes finais de 5, 1, 0,5, 0,1, 0,05, 0,01 e 0,005
equao 3: mg mL-1. Foram preparados posteriormente 500 mL da soluo meta-
nlica do radical livre DPPH (0,026mgmL-1). O AA foi utilizado como
TTF . EE
TF (%) = (3) padro, devido a sua comprovada ao antioxidante. Em cada tubo de
100 ensaio foram colocados 3,9 mL de soluo metanlica de DPPH de
colorao prpura e 0,1 mL da soluo metanlica da amostra. O teste
TF (%) = Teor de frmaco encapsulado; TTF (%) = Teor terico de foi realizado em triplicata. Depois de 1 hora mediu-se a absorbncia
frmaco encapsulado; EE (%) = Eficincia de Encapsulao. em espectrofotmetro, no comprimento de onda de 515 nm.
Finalmente, foi calculado o percentual de inibio da amostra
Espectroscopia de absoro na regio do infravermelho (PI%), por meio da equao 4, na qual AbsDPPH a absorbncia
inicial da soluo de DPPH e AbsAMOSTRA a absorbncia final.
Os espectros de infravermelho (IV) foram obtidos utilizando
um espectrofotmetro modelo Shimadzu FT-IR 8300. As amostras AbsDPPH AbsAMOSTRA
PI % = 100 (4)
foram trituradas com brometo de potssio de grau espectroscpico AbsDPPH
880 de Souza et al. Quim. Nova
Com os resultados dos PI% obtidos na leitura da absorbncia Tabela 1. Eficincia de encapsulao das micropartculas contendo cido
das diferentes concentraes de cada uma das amostras foi possvel ascrbico
calcular o ndice capaz de inibir 50% dos radicais livres (CI50) em
Amostra TTAA (%) EE (%) TIAA (%) TIAA (mg)
relao ao teor de frmaco incorporado na matrix polimrica na pro-
poro de 15 mg de cada amostra das micropartculas nas diferentes GAA (T 25 C) 10 95,40 0,38 9,54 0,04 0,1908 0,04
condies ambientais.29 GAA (T 60 C) 10 96,56 0,59 9,66 0,06 0,1932 0,06
GAA () 10 97,92 0,65 9,79 0,06 0,1958 0,06
RESULTADOS E DISCUSSO
GAA (P) 10 96,19 0,32 9,62 0,03 0,1924 0,03
Caracterizao qumica da galactomanana Legenda: GAA - galactomanana + cido ascrbico, T - temperatura, - pre-
sena de luz por 7 dias, P - protegido da luz, TTAA - teor terico de acido
A massa molar da galactomanana obtida das sementes da D.re- ascrbico, EE - eficincia de encapsulao, TIAA - teor incorporado de AA.
gia determinada pelo cromatgrafo de permeao em gel foi de
2,5105g mol-1, um valor prximo ao encontrado na literatura por microencapsulao (94,2%) foi encontrada com a relao 5:1 de po-
Tamaki e colaboradores.30 A proporo de D-manose e D-galactose liacilglicerol mono esterato/AA. Os resultados mostrados na Tabela 1
foi estimada em 4,46 : 1,00 pela medida direta das reas relativas tambm esto prximos aos de Stevanovic e colaboradores, quando
aos sinais de 1H (Man) e 1H (Gal) (Figura 3). Este resultado est de relataram o processo de obteno de nanopartculas de AA com o poli
acordo com trabalhos anteriores para outras galactomananas, incluin- (D,L-lctideo-co-glicoldeo) (DLPLG) em que sua maior eficincia
do a goma da D. regia.30,31 Com base no assinalamento dos sinais (98,2%) de microencapsulao foi na proporo 85/15% de DLPLG/
de hidrognios anomricos atribudos por Kapoor e colaboradores AA.34 Os resultados tambm mostram que as diferentes condies
foram identificados os sinais de H-1 de -D-galactose (5,47 ppm) e ambientais interferiram pouco na eficincia de encapsulao do AA.
de -D-manose (5,19 ppm).32 Para confirmar os resultados obtidos da Tabela 1 foi realizado um
tratamento estatstico por meio do teste Q para o intervalo de 95% de
Eficincia de encapsulao confiana, no qual as mdias da eficincia de encapsulao podem
ser consideradas estatisticamente verdadeiras.
A eficincia de encapsulao das micropartculas GAA que foi
realizada na proporo 10:1 (galactomanana: cido ascrbico), est Espectroscopia de absoro na regio do infravermelho (IV)
descrita na Tabela 1.
Estes resultados esto de acordo com os de Lee e colaboradores A Figura 4 mostra o espectro do IV das amostras de AA, galac-
quando relataram a microencapsulao do AA com o poliacilglicerol tomanana (G) e das micropartculas GAA analisadas. O espectro
mono estearato para evitar a oxidao do leite.33 O poliacilglicerol de IV do AA mostra as bandas principais proporcionadas pelos
mono estearato foi utilizado como um material de revestimento para grupos funcionais da molcula, tais como: estiramentos C=O lactona
microencapsular o AA e complexo de ferro. A maior eficincia de (1760cm-1), C=C (1668 cm-1), OH (3217, 3309, 3404, 3533 cm-1),
com a galactomanana obtida da espcie D. regia estimulam estudos 23. Davison, E.; Aridus 2003, 16, 1.
posteriores com maior intervalo de tempo que possam caracterizar 24. Vieira, I. G. P.; Mendes, F. N. P.; Gallo, M. I.; Brito, E. S.; Food Chem.
com mais eficcia a maior estabilidade das micropartculas, pois 2007, 101, 70.
apresentam potencial para serem utilizadas em diferentes formas de 25. Egorov, A. V.; Mestechkina, N. M.; Shcherbukhin, V. D.; Appl. Biochem.
produtos, ou seja, na forma de comprimidos, gel, sprays, etc., na cos- Microbiol. 2003, 39, 398.
metologia, indstrias de alimentos como agente protetor da oxidao 26. Egorov, A. V., Mestechkina, N. M., Shcherbukhin, V. D.; Appl. Biochem.
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Moreira, A. C. O. M.; Moreira, R. A.; Egito, A. S.; Food Hydrocolloids
O material suplementar refere-se s anlises de TGA que fo- 2014, 35, 512.
ram realizadas a fim de compreender o comportamento trmico da 28. Yepez, B.; Espinosa, M.; Lpez, S.; Bolaos, G.; Fluid Phase Equilib.
galactomanana e como ela pode ser influenciada pela presena do 2002, 194, 879.
AA e est disponvel em http://quimicanova.sbq.org.br, na forma de 29. Lee, S. E.; Hwang, H. J.; Ha, J. S.; Jeong, H. S.; Kim, J. H.; Life Sci.
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