ESTUDIO DE HONGOS AMBIENTALES EN INTERIORES Y EN FOSAS

NASALES DE ESTUDIANTES DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA 2015B

Y SU RELACIN CON ALERGIAS RESPIRATORIAS

RESUMEN

Se realiz la identificacin y caracterizacin de hongos ambientales en diferentes

lugares de la ciudad de Santiago de Cali. Para realizar el muestreo, se destaparon
diferentes medios de cultivo a una hora y altura determinada, este proceso permiti
la cuantificacin de los hongos, obteniendo como resultado que en la zona sur de la
ciudad existe una mayor cantidad de contaminacin con estos hongos, los cuales
prevalecen los hongos cladosporium y el micelio esteril, encontrados en mayor
cantidad en el medio SDA + sal

INTRODUCCIN

La calidad del aire de los ambientes en el que permanecemos la mayor cantidad de

tiempo, ya sea en nuestras casas, como en nuestros lugares de trabajo pueden
estar influenciadas por la presencia de partculas suspendidas en la atmosfera, la
mayora de estas son: granos de polen, polvos, y aquellas que presentan actividad
microbiana como lo son las bacterias, hongos y virus [1]. El presente proyecto se
identificaron los agentes microbianos que estn presentes en nuestro entorno y que
causan con mayor frecuencia alergias y problemas respiratorios. Los agentes
microbianos mencionados anteriormente dependen principalmente de la presencia
de sustancias orgnicas, condiciones climticas como lo es la temperatura, la
humedad relativa, el nmero de personas que permanecen en el lugar, la escasa
ventilacin o el estar expuestos a lugares cercanos donde se produce una
construccin.
Los procesos alrgicos en personal susceptible pueden tener relacin con la
presencia de hongos en el ambiente, ya que dentro de las afecciones producidas
por stos las de mayor frecuencia estn asociadas con problemas respiratorios
como asma, rinitis y sinusitis. Estas afecciones pueden estar influenciadas por
exposicin alta a alrgenos y por estimulacin reducida del sistema inmune durante
los perodos crticos de su desarrollo. La inhalacin es la ruta principal de infeccin;
sin embargo, otros tipos de exposicin como ingestin y contacto con piel son
tambin. Un grupo pequeo de hongos ambientales pueden ser principalmente
patgenos oportunistas y algunos producen micotoxinas, que pueden estar
presentes dentro de esporas, y pueden ser inhalados con ellas. Por otra parte, la
mayora de bacterias no son alergnicas potentes con excepcin de esporas
formadas por actinomicetos. Componentes de pared celular bacteriana, como
endotoxinas (predominante en bacterias Gram negativas) y peptidoglicano
(predominante en bacterias Gram positivas) son agentes cruciales con propiedades
pro inflamativas importantes que pueden inducir sntomas respiratorios [2].
El principal objetivo de este proyecto es cuantificar e identificar los principales
hongos presentes en nuestro entorno, ya sea nuestra residencia o lugar de trabajo,
adems de conocer el nmero y genero de los hongos aislados en las fosas nasales
de los estudiantes de microbiologa del 2015B.

OBJETIVOS GENERAL

Cuantificar e identificar los principales gneros de hongos ambientales en

ambientes interiores y fosas nasales de estudiantes de laboratorio de
microbiologa 2015B y relacionar la presencia de hongo con sntomas de alergia
respiratorias.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Cuantificar e identificar los principales hongos ambientales presentes en

ambientes interiores de las casas o lugares de trabajo de los estudiantes de
laboratorio de Microbiologa.
Establecer si hay asociacin entre los sntomas de alergias y el nmero y gnero
de hongos aislados en ambientes y fosas nasales de los estudiantes que
manifestaron tener o haber tenido sntomas de alergias respiratorias
Conocer el nmero y gnero de hongos aislados en las fosas nasales de los
estudiantes de laboratorio de microbiologa 2015B.

MATERIALES Y METODOS

Equipos de laboratorio

Autoclave
Incubadora
Refrigeradores
Microscopio

Materiales de laboratorio

Cajas de Petri
Asas en punta
Mechero bunsen
Porta y cubre objetos
Marcador sharpie
Cinta de enmascarar
 Erlenmeyer

MEDIOS DE CULTIVO USADOS EN LA PRCTICA

Se emplearon en total 6 medios de cultivo, los cuales sern nombrados a

continuacin:

Medios de cultivo para bacterias

Agar nutritivo
Agar manitol sal
Agar Mcconkey

Medios de cultivo para hongos

Agar saboraud
Agar Avena
Agar Rosa Bengala ms cloranfenicol (DRBC)}

PREPARACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

En un Erlenmeyer se
pes la cantidad de Se adicion agua
Se puso a hervir la
medio de cultivo destilada y se dej en
solucion
necesaria para la reposo por 5min
preparacion

Se coloc el
Cuando el medioestuvo erlenmeyer en el Se dej reposar y
esteril se envaso en autoclave y se luego se tapo con
cajas petri esteriliz a 121 C y 15 algodon
Psi

SIEMBRA
 Se destap una caja
Se dej Se tap las
petri con Agar
Se dirigi al lugar del expuesta al cajas petri
Saboraud, DRBC,
muestreo (Lab. aire durante tapando el
Manitol,Agar
Cosmeticos Capilares) 20 minutos borde con cinta
Nutritivo,Agar Avena,
al medio dia de enmascarar
Agar Mcconkey

Se relizaron
Se guardaron en la Se observ
observaciones Se dej a
nevera despues de diariamente el
macroscopicas y temperatura
observar crecimiento de
microscopicas de ambiente para su
crecimiento bacterias y de
las bacterias y encubacion.
microbiano hongos
hongos

En las observaciones se Para los hongos se

caracterizaron las bacterias caracterizo por la textura,
mirando, tamao forma topografia, consistencia,
borde y elevacion color

CARACTERIZACIN

Se esteriliz el lugar de Se identifico y se se describi las

trabajo con dos organizo el material caracteristicas de las
mecheros distaciados dentro del area de clonias de bacterias y
entre si trabajo hongos

Se marc la caja petri

Por ultimo
con las iniciales de la
procedemos hacer la
cepa a sembrar y
siembra
fecha correspondiente
COLORACIN DE BACTERIAS

Se deposit Con la punta de un Se dejo secar a

una gota de palillo se tom un temperatura
solucion salina poco de la colonia y ambiente y se pas
sobre un porta se esparcio en la gota tres veces por la
objeto de solucion salina llama del mechero

se aplico lugol al
Se aplico frotis y se Se aplic en el porta
alcohol-cetona, espero 1 objetos gotas de cristal
se espero 1 minuto, violeta y se espero 1
minutos y se posteriormente minuto, luego se lavo
lavo con agua se lavo con con agua
agua

Finalmente se Se dejarn Se observaron

aplico safranina secar los las placas con el
durante 3o porta objetos micriscopio
segundos y se a temperatura utilizando aceite
lavo con agua ambiente de inmersion

COLORACIN DE HONGOS

Se tom un
Se peg la cinta al
pedazo de cinta
Se coloc una gota de porta objetos con
transparente y el
azul de lactafenol azul de lactalenol
adhesivo se
sobre el porta objetos y se observ en el
presion contra la
microscopio
colonia del hongo

ANALISIS Y DISCUSION DE RESULTADOS

Para la identificacin y caracterizacin de bacterias y hongos presentes en

diferentes lugares de Cali, se necesit la utilizacin de medios de cultivos selectivos
los cuales pudieran permitir la cuantificacin de las bacterias y hongos.es por eso
que para obtener ptimos resultados es necesario esterilizar cada uno de los
medios, la esterilizacin consiste en la eliminacin o muerte de todos los
microorganismos que contiene un objeto o sustancia, en este caso los medios, y se
deben de acondicionar con el fin de que no se vuelvan a contaminar, existen
diferente tipos de esterilizacin como lo son la esterilizacin por agentes fsicos, y
por agentes qumicos, dentro de los agentes fsicos se encuentran el calor seco,
calor hmedo, las radiaciones ionizantes, ultra violeta entre otros, dentro de los
agentes qumicos se encuentran los desinfectantes y los antispticos 3. Por ltimo,
se realiz la coloracin de Gram, en el caso de las bacterias, para despus ser
identificadas con ayuda del microscopio.

Lo medios de cultivo son soluciones que tienen macro y micro nutrientes, los cuales
permiten el crecimiento y desarrollo de los microrganismos, tienen diferentes
funciones y con base en eso se pueden clasificar en selectivos diferenciales. La
identificacin y la caracterizacin de los microorganismos presentes en los medios
de cultivos se realiza observando las caractersticas macroscpicas de las colonias
presentes en l, de esta forma se visualiza para las bacterias el tamao (grande,
mediana, pequea, puntiforme), la forma, borde y elevacin, superficie (lisa,
rugosa), consistencia (blanda, dura, mucoide), aspecto (brillante u opaco, mate o
traslucida), pigmento (amarillo, rojo, verde); para los hongos se adicionan otros
aspectos tales como la textura (algodonosa, afelpada, granular, polvosa, pastosa,
algodonosa-granular), topografa (lisa, radiada o rugosa, verrucosa), consistencia
(cremosa, mucosa, dura-pastosa) y por ltimo el color. Estos anlisis
complementados para las bacterias con la coloracin de Gram, permiten
caracterizar de una forma ms precisa las colonias de bacterias. Esta tcnica se
basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen que
supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los colorantes tien la pared
de las bacterias de color morado y, trascurridos unos minutos, se realiza un lavado
del colorante, con el fin de observar si el color permanece o no en la pared
bacteriana, si dicho colorante persiste podemos afirmas que son bacterias Gram
positivas, pero si el color cambia de morado a rosado serian Gran negativas4.

Para la identificacin y caracterizacin de las bacterias de emplearon tres medios,

los cuales fueron agar nutritivo, este caracteriza por ser, un medio de cultivo
utilizado para propsitos generales, para el aislamiento y recuento de
microorganismos con escasos requerimientos nutricionales, este es un medio de
cultivo no selectivo, en el cual la pluripeptona y el extracto de carne constituyen la
fuente de carbono, nitrgeno que aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano.
El agregado de cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el agar es el agente
solidificante5. El segundo medio utilizado fue el manitol sal, se trata de un medio
altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. Los estafilococos
coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen
rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos,
presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias
sospechosas, se repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio para
efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa. En el medio de cultivo, el
extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno,
vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de
sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el agente selectivo que inhibe el
desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH. Las
bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el
manitol, producen cidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador
de pH del color rojo al amarillo6. Y el tercer agar usado para la siembra de las
bacterias fue el agar Macconkey, se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram
negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar
bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. En el
medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales
biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de
gran parte de la flora Gram positiva. Se utiliza con frecuencia para el aislamiento de
coliformes7.

Para la descripcin microscpica se realiz la tincin de las muestras esto con el fin
de diferenciar el tipo de bacteria que se tena en el cultivo. Para ello se us en
primera instancia el cristal violeta para teir las clulas de las bacterias, como
segundo paso se emple lugol, con el fin de que se le una el cristal violeta quedando
atrapado en las paredes de peptidoglicano de clulas gram (+), posteriormente se
procede a decolorar con el fin de remover el colorante primario el cual es eliminado
de las paredes delgadas de peptidoglicano de las gram (-), pero no lo elimina de las
gram (+), por ltimo se emplea el colorante de contraste safranina el cual le da color
a las Gram (-) , pero no cambia el color azul de las Gram positivas, haciendo posible
su clasificacin4.

Despus de realizada la tincin de Gram, se procedi a identificar

microscpicamente, sin embargo con esta informacin solo se puede decir si tiene
cierta cantidad de coco como bacilos Gram (+) y Gram (-). Sim embargo esta parte
de la prctica se realiz con el fin de identificar como es la identificacin de las
bacterias y su coloracin ya que el proyecto est enfocado ms en los hongos
ambientales en los interiores y en las fosas nasales.

Posteriormente se realiz la identificacin y caracterizacin de hongos utilizando los

medios de cultivo El dicloran Rosa de Bengala cloranfenicol Agar (DRBC), es un
medio de base selectiva para facilitar un buen crecimiento de levaduras y hongos.
El agente antifngico, dicloran, se aade al medio para reducir el crecimiento de
hongos a difundir rpidamente. El pH del medio es de 5,6 para una mejor inhibicin
de la difusin de hongos. El palo de rosa en el medio inhibe el crecimiento de
bacterias y restringe el tamao de las colonias de hongos con un crecimiento ms
rpido. El cloranfenicol est incluido en el medio para inhibir el crecimiento de
bacterias presentes en el ambiente de las muestras y los alimentos. La inhibicin
del crecimiento bacteriano y la restriccin de la propagacin de hongos con el
crecimiento ayudan a aislar el hongo con un crecimiento lento8.
 Imagen 1. Crecimiento microbiano en el medio DRBC

Con base en la imagen 1 podemos observar que el hongo que se encuentra en

mayor cantidad es el cladosporium, este hongo es clasificado como un alrgeno
potente productor de alergias tipo I (rinitis alrgica, asma, hipersensibilidad),
seguido del micelio esteril, bajo este nombre se comprenden las formaciones
micelianas que no producen conidios o esporas, es decir, que carecen de
fructificacin conocida, reproducindose por simple divisin celular de sus
elementos. La mayor cantidad de estos hongos se obtuvieron en la zona sur, lo que
concuerda con la teora, ya que en esta zona, la cordillera occidental tiene 4000 m
de altitud lo que hace que la regin suroccidental sea ms lluviosa lo cual
proporciona caractersticas idneas que facilitan el crecimiento microbiano, por el
contrario la cordillera occidental est a unos 2000 m de altitud sobre la zona norte,
lo hace de esta zona sea ms seca lo que provoca una disminucin en el
crecimiento microbiano.

El agar sabouraud, es un medio de cultivo selectivo y diferencial para el aislamiento

de hongos y levaduras. Este medio tiene un alto contenido de glucosa, cloranfenicol
y pH acido, favoreciendo el crecimiento de hongos por sobre el de las bacterias,
adems a este medio de cultivo puede agregrsele agentes selectivos para el
crecimiento9.
Para este tipo de medio se obtuvo los siguientes resultados
 Imagen 2. Crecimiento microbiano en el medio SDA

Con base en la imagen 2, se puede observar que igualmente que el medio DRBC
prevalece ms hongo en las zona sur que en las dems zonas, como se explic
anteriormente, el clima, el porcentaje de humedad es ms bajo, lo que proporciona
que estos microorganismo se adapten al ambiente, provocando as un incremento
en la presencia de estos microorganismos en el ambiente.
 Imagen 3. Crecimiento microbiano en el medio avena

Al observa la imagen 3 se puede concluir que este medio no es selectivo a diferencia

de los otros dos utilizados para la identificacin y caracterizacin de hongos
presentes en el medio ambiente, sin embargo a pesar de que no sea selectivo
conserva las mismas caractersticas de los medios anteriores, es decir que se
observa mayor crecimiento de hongos en la zona sur que en la zona norte, por la
mismas condiciones explicadas anteriormente.

Con base en los resultados obtenidos mediante las grficas podemos concluir que
el medio SDA+ sal fue el ms efectivo a la hora de cultivar los diferentes tipos de
hongos, ya que en l se pueden apreciar mayor crecimiento microbiano, por otro
lado se puede observar que hubo una mayor prevalencia de hongos cladosporium
y micelio esteril, con base en estos resultados podemos decir que estos dos tipos
de hongos son los que en mayor cantidad se encuentran en la ciudad de Cali.

CONCLUSIONES

De acuerdo a los resultados obtenidos, se puede apreciar que en las zonas

donde hay una disminucin de humedad y por ende climas un poco ms fros,
son las condiciones adecuadas en las que se adapta el microorganismo.
Con base en los resultados obtenidos podemos concluir que el medios SDA
+ sal es el ms efectivo a la hora de cultivar diferentes tipos de hongos, ya
 que este fue el medio donde se observ ms hongos y de diferentes
especies.
Segn la informacin de las tablas, los hongos cladosporium y el micelio
esteril son los que estn en mayor proporcin, estos se caracterizan por ser
hongos filamentosos los cuales son causantes de infecciones invasoras en
pacientes de inmunodeprimidos.

Anexos

Preguntas de la gua 1

1. Qu mtodos son utilizados en el momento para la esterilizacin de materiales y

medios de cultivo del laboratorio de microbiologa?

La esterilizacin es un proceso a travs del que se puede lograr la destruccin total

de los microorganismos viables presentes en un determinado material. Este
procedimiento es de gran utilidad dentro del campo farmacutico, ya que existen
muchos procesos que requieren la utilizacin de materiales estriles. Entre stos
podemos destacar:

La esterilizacin de equipos quirrgicos y otros materiales de uso mdico con

el propsito de reducir el riesgo de infecciones en pacientes.
El acondicionamiento del material (pipetas, tubos, placas de petri, pinzas,
etc.) que va a ser utilizado en los laboratorios de microbiologa.
La preparacin de medios de cultivo que sern empleados con diferentes
propsitos (cultivo de microorganismos, control de ambiente, equipos o
personal, anlisis microbiolgico de medicamentos, cosmticos, alimentos,
etc.)

Clasificacin de los mtodos de esterilizacin de acuerdo al tipo de agente que

acta.

Agentes fsicos: el calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas:
el calor hmedo el cual destruye a los microorganismos por desnaturalizacin de
las protenas y el calor seco que destruye a los microorganismos por oxidacin de
sus componentes celulares. El calor es considerado como el mtodo de
esterilizacin por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas
temperaturas sin sufrir ningn tipo de dao.

Agentes mecnicos: la filtracin permite la remocin de todos los microorganismos

presentes en un lquido o un gas retenindolos sobre la superficie de un material.

Agentes qumicos: algunas sustancias qumicas pueden ser usadas como agentes
esterilizantes porque tienen la capacidad de promover una o ms reacciones
qumicas capaces de daar los componentes celulares de los microorganismos
(protenas, membranas, etc.)11

2. Para que son utilizados el xido de etileno, las radiaciones ionizantes

provenientes de Cobalto 68 y Cesio 139 y los rayos catdicos provenientes de
generadores y aceleradores de electrones.

El xido de etileno es un lquido muy inflamable que, cuando se mezcla con un gas
inerte produce una esterilizacin eficaz por destruccin de DNA y de la estructura
proteica de los microorganismos.

Las radiaciones ionizantes provenientes de Cobalto 68 y Cesio 139 y los rayos

catdicos provenientes de generadores y aceleradores de electrones son tambin
otra forma efectiva de esterilizacin pero de un costo muy elevado que limita su
aplicacin11.

3. Qu son las membranas millipore. Para qu se utilizan?

Las membranas millipore son filtros que constan de una malla cerrada de fibras de
nitrocelulosa. El mtodo de fabricacin permite el control del tamao mximo de las
partculas que vayan a pasar a travs de la membrana. Estos filtros son lo
suficientemente finos como para que las partculas que no los atraviesen no
penetren en el filtro, sino que queden en la superficie. En consecuencia, las
partculas pueden ser lavadas con facilidad en la superficie. Esta membrana elimina
los contaminantes y microorganismos en aplicaciones de esterilizacin, incluso a
pH alto12.

4. Cul es el fundamento de la tindalizacin o esterilizacin intermitente?

La tindalizacin consiste en calentar los productos de 90 a 100 C durante media a

una hora, en tres das consecutivos. Entre cada etapa de calentamiento se incuba
a 37 C. En las etapas de calentamiento se destruyen los microorganismos, pero
permanecen las esporas, las cuales germinan en las etapas de la incubacin, para
que nuevamente se destruyan los microorganismos germinados en la segunda y
tercera etapa de calentamiento13.

5. Cul es ms eficaz como agente esterilizante, el calor seco o el calor hmedo.

Por qu?

Los materiales hmedos conducen mejor el calor que los secos: el agua tiene mayor
coeficiente de transferencia de calor que el aire. Por eso el vapor de agua es ms
eficaz que el calor seco matando a los microorganismos. As la esterilizacin en
presencia de vapor de agua requiere menos temperatura y tiempo que sin agua 14.
6. A qu temperatura en grados F equivalen 121 grados centgrados

9
F = (121C * 5) + 32

F= 249.8

7. Porqu se utiliza el agar nutritivo

Por las caractersticas de sus componentes es un medio usado para el cultivo de

microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. No contiene
inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y
nitrgeno para el desarrollo bacteriano15.

8. Qu clase de microorganismos crece en agar Sabouraud? Por qu?

El agar Sabouraud es un medio utilizado para el aislamiento, identificacin y

conservacin de hongos patgenos y saprfitos. En el medio de cultivo, la
pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos.
El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH cido, favorecen
el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias. Adems, al medio de cultivo,
pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento16.

9. Que sitios creen ustedes que deben permanecer libres de contaminacin y como
han sido tratados para obtener completa esterilidad?

Los sitios que deben estar libres de contaminacin son todos aquellos donde se
vendan o consuman alimentos, es decir, restaurantes, galeras, supermercados y
nuestra propia cocina. Para lograr eliminar la mayor cantidad de contaminantes, se
debe asegurar la refrigeracin, lavado, coccin, almacenamiento y uso de los
alimentos, para que estos tengan el menor grado de contaminacin y logren ser
100% actos para el consumo humano. Adems de este lugar se debe mantener
estriles los sitios donde se realiza la produccin de medicamentos ya que esta
debe ser un rea libre de contaminacin.

10. Que otras tcnicas se utilizan para el anlisis microbiolgico del aire?

Impactacin: el aire, aspirado por una bomba de vaco que forma parte del
muestreador, pasa a travs de un orificio y es dirigido a la superficie del medio de
cultivo contenido en una placa adecuada. Las partculas con suficiente momento de
inercia abandonan la corriente e impactan sobre la superficie. El orificio de entrada
puede consistir en una rendija o en un cabezal con un elevado nmero de orificios
de igual dimetro y el medio de recogida puede ser agar sobre una placa Petri,
RODAC o un portaobjetos.
Burbujeo o impinger: El aire a muestrear pasa a travs de un volumen conocido
de lquido (suero salino, agua de peptona con agentes humectantes, medios
lquidos...). Las partculas abandonan la corriente de aire por impactacin en el
lquido, quedando retenidas en el mismo. Posteriormente, y en el medio de cultivo
adecuado, se transfiere una alcuota del lquido de captacin, procedindose a su
cultivo, recuento y en su caso a su identificacin (viables o cultivables) (1). A otra
alcuota se adiciona naranja de acridina y se filtra, procedindose al recuento total
(viable y no viable) por microscopa de epifluorescencia directamente sobre el filtro.

Centrifugacin: estos muestreadores de impactacin utilizan la fuerza centrfuga

para ayudar a la separacin de las partculas de la corriente de aire de aspiracin.
Operan creando un remolino en el cual las partculas con suficiente inercia dejan la
corriente de aire para impactar sobre la superficie (medio de cultivo) de recogida 17.

BIBLIOGRAFA

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hongos en bibliotecas de la Universidad de Carabobo-Valencia. Revista Universidad
1999; 3 (1): 5-20.

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central de la universidad pedaggica y tecnolgica de Colombia (tunja-boyac).
Revista unal, 30-38.

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http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Seminarioesterilizacion.htm. Consultado el
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Consultado el 23 de noviembre del 2015

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<http://www.britanialab.com/productos/234_inserto_es.pdf>. Consultado el 23 de
noviembre del 2015

[6]Manitol salado agar, [EN LINEA] disponible en:

<http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/manitolsalagar.htm>
(Consultado el 23 de noviembre de 2015).
[7]Agar Macconkeym, [EN LINEA] disponible en:
<http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/maccon
key.pdf> (Consultada el 24 de noviembre de 2015)

[8] Agar Dicloran Rosa Bengala Cloranfenicol Base (DRBC), [EN LINEA] disponible
en:<http://www.kasvi.com.br/pdf/dda2276ce7534f0e4b1eab5de1221b7e_arquivo.p
df> (Consultada el 24 de noviembre de 2015)

[9]Agar sabouraud, [EN LINEA] disponible en:

<https://marceosan.wordpress.com/2011/05/11/agar-sabouraud/> (Consultada el
24 de noviembre de 2015)

[10] Bigloo. Esterilizacin de material y preparacin de medios de cultivo. [En lnea]

http://biotecnologia9.bligoo.com.co/esterilizacion-de-material-y-preparacion-de-
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[11]Biolene. Esterilizacin por xido de etileno. [En lnea]

http://www.biolene.com/preguntas-frecuentes.php?sec=respuestas/2. Consultado
el 24 de noviembre de 2015.

[12]Celina Horak. Esterilizacin por radiacin. [En lnea]

http://www.bioingenieria.edu.ar/grupos/geic/cieer07/presentaciones/Est-rad-
horak.PDF. Consultado el 24 de noviembre de 2015.

[13] David Freifelder. Tcnicas de bioqumica y biologa molecular. Editorial Reverte.

Pgina 159

[14] Ral Romero Cabello. Microbiologa y parasitologa humana. 3ra edicin.

Editorial Mdica Panamericana. Pgina 36
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[15] Esterilizacin con agentes fsicos. [En lnea] http://www.ugr.es/~pomif/pom-
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[16]Nutritivo Agar. [En lnea]

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/nutritivoagar. htm. Consultado 24
de noviembre de 2015.

[17]Laboratorios Britania S.A. Sabouraud Glucosado Agar. [En lnea]

http://www.britanialab.com/productos/362_hoja_tecnica_es.pdf. Consultado 24 de
noviembre de 2015.

[18] Universidad del Pas Vasco. Identificacin y evaluacin de agentes biolgicos

en los lugares de trabajo. [En lnea]
https://www.ehu.eus/documents/2458096/2577739/apendice_03.pdf Consultado 24
de noviembre de 2015