INTRODUCCIN:

Sabemos que, en el laboratorio de microbiologa, casi siempre usamos el microscopio, debido a que nos
proporciona informacin necesaria para identificar a los diversos microorganismos con los que trabajamos.
Estos microorganismos son transparentes y por esto, necesitamos tcnicas de coloracin que permitirn
observar e identificar las caractersticas morfolgicas de cada uno de estos con mayor claridad y nitidez.
Las coloraciones en microbiologa son las primeras herramientas que se utilizan en el laboratorio para
diagnosticar a los microorganismos, he ah la importancia de estas tcnicas.

OBJETIVOS:
- Conocer las tcnicas de coloracin para reconocer bacterias.
- Utilizar y realizar correctamente cada tcnica de coloracin, en este caso la coloracin simple.
- Reconocer las distintas morfologas de las bacterias.

MARCO TERICO:
COLORACIN: Es el proceso por el cual las molculas de un colorante se adsorben a una superficie. El uso de
colorantes permite cambiar el color de las clulas de los microorganismos y poder realizar la observacin en
microscopio ptico. Dado que las bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el cual
se encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin algn tratamiento previo. Es una de las
tcnicas ms utilizadas en los laboratorios de microbiologa para clasificar microorganismos.
COLORANTE: se define como una sustancia capaz de dar color a clulas, tejidos, fibras, etctera.
La molcula de un colorante tiene normalmente dos componentes importantes: uno que aporta el color,
denominado cromgeno, y otro que posibilita la unin a elementos del tejido denominado auxocromo.
El cromforo es la organizacin molecular dentro del cromgeno responsable de la absorcin de un espectro
determinado de longitudes de onda. El auxocromo que se une al cromgeno puede influir en su coloracin y
muchos colorantes tienen ms de un grupo auxocrmico. El auxocromo puede ser un grupo ionizable, un
grupo que reacciona covalentemente con iones metlicos (mordientes) o puede reaccionar covalentemente
con el sustrato, en este caso el tejido. Los colorantes son normalmente hidrosolubles, aunque hay colorantes
que carecen de grupos ionizables y sirven para teir sustancias grasas, como gotas de lpidos.
CROMFORO: (solvente orgnico que le provee las propiedades de color) es todo grupo aislado, covalente e
insaturado, que tiene una absorcin caracterstica en la regin ultravioleta o visible; dicho de otra forma, es
la capacidad que tiene la molcula para que sus electrones absorban energa o luz visible, se exciten y emitan
diversos colores de acuerdo con la longitud de emitida como resultado del cambio en el nivel energtico. Los
cromforos se pueden presentar en dos formas fundamentales: en sistemas conjugados pi o complejos
metlicos. Los cromforos son principalmente grupos funcionales con dobles y triples enlaces carbono-
carbono, anillos aromticos, grupos carbonilos, imino, diazo, nitro y enlaces entre carbono-y (y es un tomo
con pares libres). Segn la naturaleza qumica del cromforo hay varios tipos de colorantes: nitrosos, ozoicos,
derivados de la antroquinona, derivados de la acridina, derivados de iminas quinnicas, derivados de
diferrilmetano y triferrilmetano, derivados del xanteno y derivados de las talocianinas.
AUXCROMOS: (grupo qumico que se ioniza con el cromgeno y forma sales que se pegan a las fibras y
tejidos) son grupos funcionales o radicales que constituyen una molcula y poseen carga parcial positiva;
tienen la funcin de intensificar la formacin de color mediante la accin de grupos de tomos no saturados;
su funcin es desplazar a los cromforos hacia longitudes de ondas largas para aumentar la intensidad. Los
siguientes grupos funcionales son considerados auxcromos: grupo metilo, halgenos, hidroxi, alcoxi y
amino.
Los colorantes tienen las siguientes funciones:
1. Permiten hacer visibles a los objetos microscpicos y transparentes.
2. Revelan su forma y tamao.
3. Muestran la presencia de estructuras internas y externas.
4. Producen reacciones qumicas especficas.
Clasificacin
Segn la fuente de obtencin, los colorantes se clasifican en naturales y sintticos.
Colorantes naturales. Los colorantes naturales son bsicamente histolgicos, encontrndose entre los
empleados con mayor frecuencia, los siguientes: -ndigo: Se obtiene de diversas especies de plantas del
genero indigfera que contiene indican, el cual se fermenta para producir el colorante. -Carmn: Se produce,
mediante el tratamiento con alumbre y otras sales metlicas a hembras del insecto cochinilla "Coccus castis".
-Orcena y Tornasol: Se obtiene mediante el procesamiento industrial de lquenes de los gneros: Le canora
tinctoria y Rosella tinctoria. -Hematoxilina: Este colorante se extrae con ter de la madera de un rbol oriundo
de Mxico y de algunos pases suramericanos denominados Hematoxilium campechianum.
Colorantes sintticos. Se obtiene de la anilina, o es ms exactamente del alquitrn de hulla siendo todos
derivados del benceno.
Segn la naturaleza qumica del radical auxocromo los colorantes se clasifican en:
Colorantes bsicos: La accin colorante est a cargo del catin, mientras que el anin no tiene esa propiedad.
Son los ms usados en bacteriologa, debido a que las bacterias, ricas en cidos nucleicos, portan cargas
negativas en forma de grupos fosfatos, los que se combinan con los colorantes cargados positivamente. Ej.:
tionina, azul de toluidina, azul de metileno, fucsina, violeta cristal, violeta de genciana, verde metilo,
safranina y verde de malaquita.
Colorante cido: Sucede todo lo contrario, la sustancia colorante est a cargo del anin, mientras que el
catin no tiene propiedad. Los colorantes cidos se utilizan en tcnicas especiales, coloraciones negativas o
en mtodos para estudiar algunas estructuras bacterianas, fundamentalmente citoplasmticas. Ej.: naranja
G, cido pcrico, fucsina cida y eosina.
Colorantes neutros: Estn formados simultneamente por soluciones acuosas de colorantes cido y bsicos,
donde el precipitado resultante, soluble exclusivamente en alcohol, constituye el colorante neutro, que tiene
la propiedad tintorial de sus componentes cidos y bsicos. Entre ellos se encuentra el grupo de los eosinatos:
eosinato de azul de metileno, de azul de toluidina, de violeta de metilo.
Colorantes mordientes: son aquellos que se usan en combinacin con sales metlicas, que actan como
mordiente. Estas sales se pueden emplear junto con el colorante, antes o despus. En algunos casos el
colorante mordiente puede ser tambin aninico o, menos frecuentemente, catinico. Normalmente se
emplean para teir los ncleos. Por ejemplo, la hematoxilina frrica de Heidenhain.
Indiferentes o hidrofbicos: realmente no se unen a elementos de los tejidos por afinidad qumica sino
porque se disuelven en ellos. Por ejemplo, el colorante sudn se disuelve en los lpidos y por tanto teir a
las gotas de lpidos, especialmente en los adipocitos.
TIPOS DE COLORACIONES:
Las tinciones se pueden clasificar como simples cuando toda la muestra se tie del mismo color y se utiliza
un slo colorante (azul de lactofenol o tintachina); tincin diferencial, cuando se visualiza ms de un color
porque se utiliza ms de un colorante (Gram o Ziehl-Neelsen); tincin especfica, cuando se utilizan
anticuerpos marcados con una molcula fluorescente para identificar una estructura celular en particular
(inmunocitoqumico)

COLORACIN SIMPLE:
La tincin simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares. La tincin puede
ser uniforme o presentar algunos grnulos en su interior. Utiliza un solo colorante (violeta de genciana, azul
de metileno, fuscina diluida). La tincin simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que
se vean las formas y las estructuras celulares bsicas. En las tinciones simples, se usa un nico reactivo, que
preferentemente es de tipo bsico y contiene un cromgeno (compuesto que da color al tinte) con carga
positiva, ya que la pared celular de las bacterias posee componentes con carga negativa que atraen y enlazan
el cromgeno. Se utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las clulas absorbern el colorante
y quedarn teidas del mismo color. Por tanto, la tincin simple mejora la observacin de la clula completa.
Se fija el espcimen, se aade el colorante y se deja el tiempo adecuado para que se absorba, se retira el
exceso de colorante y la preparacin ya est lista para ser observada. Si se utiliza un mordiente (sustancia
qumica utilizada para intensificar la coloracin), hay que aadirlo justo antes del colorante.
COLORACIN CON TINTA CHINA:
CUESTIONARIO:
1.-