Medicin de la actividad enzimtica de la - amilasa

Bioqumica III semestre

Universidad de Cartagena
Facultad de Medicina
Grupo B
Mesa 3
Integrantes Pinzn Pea Katya, Plaza Arrieta Marian Alejandra, Prada Tobar Mara del
Mar, Puello Zabaleta Yoimer Alberto, Quiroz Torres Norma.

1. Qu tipo de reaccin cataliza la alfa-amilasa?

Las alfa-amilasas son enzimas que catalizan la hidrlisis de enlaces glicosdicos -1,4 de
carbohidratos, como el almidn, constituidos por unidades de - D- glucosa, para producir
maltosa, glucosa, oligosacridos de diferentes tamaos y cadenas ms o menos ramificadas
llamadas dextronas.

2. Diga la clave enzimtica e interprtela.

3.
La alfa-amilasa presenta un cdigo EC 3.2.1.1 que se interpreta de la siguiente manera:
EC 3 por pertenecer a la clase enzimtica de las hidrolasas (enzima capaz de catalizar
la hidrlisis de un enlace qumico).
EC 3.2. por hacer parte de la subclase de las glucosidasas.
EC 3.2.1 por ser parte de la subclase de las glucosidasas que hidrolizan compuestos S-
y O- glucosilo
EC 3.2.1.1 por Alpha-amilasa

4. En qu tejidos se localiza la alfa-amilasa y cul es su utilidad clnica?

Las principales fuentes de las alfa-amilasas son las clulas acinares del pncreas y las glndulas
salivales, con concentraciones menores se encuentran en el intestino delgado, el musculo
esqueltico y las trompas de Falopio. Las alfa-amilasas se filtra con facilidad en los glomrulos
renales y tambin aparece en la orina por su pequeo tamao, su bajo peso molecular que es
de 50.000 a 55.000, solo una pequea fraccin se filtra y aparece en la orina, ya que los
tubrculos solo reabsorben en forma parcial. La digestin de almidones comienza en la boca
con la accin hidroltica de las AMS salival, sin embargo, la actividad de la AMS salival es de
corta duracin porque, al deglutir, se inactiva por la acidez del contenido gstrico. La AMS
pancretica lleva acabo entonces una mayor accin digestiva de los almidones una vez que los
polisacridos lleguen al intestino.
 As, la medicin de actividad de las alfa-amilasas en orina es de gran importancia diagnostica
adems de la determinacin en suero, su grado de incremento nos indica el diagnstico
diferencial para la pancreatitis aguda. Otros trastornos que causan una concentracin srica
alta de AMS son las lesiones de las glndulas salivales, como paperas y parotiditis y otras
enfermedades intraabdominales como ulcera heptica perforada, obstruccin intestinal,
colecistitis, ruptura de embarazo ectpico, infarto mesentrico y apendicitis aguda. Adems,
han sido descritas concentraciones altas en insuficiencia renal y cetoacidosis diabtica. Las
concentraciones de AMS srica en condiciones intraabdominales distintas a pancreatitis
agudas, son por lo general menores de 500ui somogyi/dl

5. Fundamento del mtodo empleado, mtodo de referencia.

Los mtodos ms comnmente utilizados para la determinacin de la actividad de las amilasas pueden
ser clasificados en: sacarognicos, cromognicos y amiloclsticos
En Mtodos Cromognicos se usan bien complejos insolubles del sustrato, los cuales liberan
fragmentos coloreados al ser hidrolizados o bien paranitrofenol derivados de los maltosacridos
(maltopentosa, maltohexosa, maltoheptosa) los cuales liberan el paranitrofenol al ser hidrolizados
por una mezcla de la amilasa problema con -glucoamilasa, pudiendo medirse aquel
espectrofotomtricamente
En este laboratorio se utiliz un mtodo cromogenico para medir la actividad enzimtica de la alfa-
amilasa en una muestra de suero sanguneo, plasma con heparina u orina, este se fundamentado
en que La -amilasa hidroliza el 2-cloro-4-nitrofenil--D-maltotrisido (CNPG3) a 2-cloro-4-nitrofenol
(CNP) y maltotriosa (G3) segn la siguiente reaccin:

-Amilasa
CNPG3 ------------ CNP + G3
La velocidad de formacin de 2-cloro-4-nitrofenol, determinado fotomtricamente, es proporcional a
la concentracin cataltica de - amilasa en la muestra ensayada

6. Cul es la muestra de eleccin? E indique los posibles interferentes.

La muestra elegida para la determinacin de la actividad de la alfa-amilasa durante la prctica

de laboratorio es suero sanguneo, plasma con heparina como anticoagulante y orina. Los
posibles interferentes que podran tomar papel en la prctica son la saliva y la piel, pues stos
tambin contienen alfa-amilasa; por esta razn, es de suma importancia evitar el contacto de
ellos con la respectiva muestra a utilizar.

7. Cofactor para sta enzima y a qu grupo pertenecen.

Un cofactor es definido como un componente no enzimtico que promueve el valor cataltico

de una enzima.
La alfa-amilasa pancretica utiliza iones cloro como cofactor.
 La alfa-amilasa salival requiere como cofactor al ion calcio.
Dado que la alfa-amilasa requiere de metales inicos para la funcin cataltica, es evidente que
los componentes inorgnicos conforman una parte substancial de ellos, por lo tanto, estos
cofactores pertenecen al grupo inorgnico.

8. Qu es macroamilasemia?

La macroamilasemia es una anomala bioqumica caracterizada por la presencia de complejos

macromoleculares en la sangre, formados por la unin de una amilasa normal y una molcula,
generalmente una inmunoglobulina. Fue descrita por primera vez en 1964 por Wilding, aunque
el trmino macroamilasemia fue propuesto en 1967 por Berk. Debido al gran tamao del
complejo macromolecular, los riones filtran la macroamilasa a una velocidad lenta. Adems,
estos complejos con globulinas son casi indetectables por el rin. Actualmente, se conoce que
la macroamilasemia es un hallazgo benigno por lo que no requiere tratamiento. Sin embargo,
su inters diagnstico consiste en distinguirla de otras causas de hiperamilasemia, con el fin de
evitar hospitalizaciones innecesarias y tratamientos inapropiados.

9. Cmo se diferencian en el laboratorio las diferentes Isoenzimas de las alfa-amilasa?.

Existen dos isoenzimas de la alfa-amilasa: salival y pancreatica, que son producto heterogeneo de dos
genes prximos al centrmero del cromosoma 1. La diversidad de formas moleculares que se pueden
encontrar para cada isoenzima es el resultado de modificaciones postraduccionales, que incluyen
desamidaciones, glicosilaciones y desglicosilaciones. Ambas isoenzimas son polipeplidos de 510
aminocidos con un 94% de homologa estructural. Difieren en cuanto a masa molar, 55000 g/mol la
isoenzima pancretica, 57000 g/mol la salival no glicosilada y 60000 g/mol la salival glicosilada.
Tambin difieren en cuanto al punto isoelctrico, de 7,1 la pancretica y entre 6,4 y 5,9 la salival.
Mtodos de determinacin de isoenzimas
Se han desarrollado gran nmero de mtodos para separar y medir la concentraci6n de las isoenzimas
de la alfa-amilasa basndose en las diferencias fisicoqumicas y antignicas de ambas isoenzimas.
Consisten fundamentalmente en: separacin electrofortica, isoelectroenfoque, cromatografa en
columna e inhibicin selectiva
Electroforesis: se basa en la separacin en funcin de su carga sobre diferentes soportes:
acetato de celulosa, agarosa o poliacrilamida. Posteriormente, se determina la concentraci6n
cataltica de la a-amilasa por diferentes mtodos y se cualifica el color formado en la reaccin
catalizada mediante espectrometra de absorcin en fase solida
Isoelectroenfoque: Con este mtodo. las distintas formas moleculares de la alfa-amilasa se
separan segn su punto isoelctrico. La identificacin de las bandas correspondientes se realiza
con el mismo procedimiento descrito para las separaciones c1cctroforcticas
Cromatografa: se basa en la diferente carga elctrica neta de ambas isoenzimas. Dado que la
isoenzima salival est cargada ms negativamente que la pancretica, De esta manera se pueden
separar las dos isoenzimas. aunque la resolucion conseguida es pobre.
 Inhibicin selectiva: Consiste en la inhibicin ms o menos selectiva de una de las isoenzimas.
Los principales inhibidores utilizados son el inhibidor de germen de trigo y los anticuerpos
monoclonales (inmunoinhibicion).

10. Cmo se define alfa-amilasa segn CARAWAY?

Anteriormente, la amilasa se determinaba cuantitativamente por el mtodo yodomtrico de
Wohlgemuth. Posteriormente, Somogyi estandariz las cantidades de almidn e iodo, siendo estas
modificaciones las bases de los mtodos amiloclsticos y yodomtricos introducidos despus por
Caraway. Este mtodo yodomtrico es basado en el color azul que desarrolla el complejo yodo-almidn.
El mtodo yodomtrico se fundamenta en el hecho conocido de la formacin de un complejo de
inclusin de I2, I3 e I5 en la estructura helicoidal de la amilosa al aadir sobre una disolucin de almidn,
una disolucin de yodo-yoduro potsico. La capacidad de ligar yodo es de 20-22 mg por 100 mg de
amilosa. Este complejo da una coloracin azul medible espectrofotomtricamente. Conforme se
hidroliza el almidn, por la accin de la amilasa, la intensidad de la coloracin azul disminuye. Este
procedimiento amiloclstico mide la actividad de la amilasa determinando la hidrlisis del almidn la
cual se hace evidente por la disminucin de la formacin del complejo almidn-yodo. La actividad de
la enzima es inversamente proporcional a la cantidad de complejo color azul, el cual absorbe al mximo
a 590 nm.