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ISSN: 1025-9929
fondo_ed@ulima.edu.pe
Universidad de Lima
Per
Quino Favero, Javier; Bernal Portilla, Nora; Ycono Llanos, Juan Carlos
Diseo de un proceso experimental para la produccin de papana liofilizada
Ingeniera Industrial, nm. 26, 2008, pp. 201-229
Universidad de Lima
Lima, Per
Javier Quino Favero, Nora Bernal Portilla, Juan Carlos Ycono Llanos
[201]
10-industrial 26-QUINO:REVISTA INGENIERIA 28/01/2011 04:36 Pgina 202
INTRODUCCIN
Grfico 1
Importacin de enzimas en el Per en los aos 2003-2006
3.000.000
Peso neto (kg) FOB US$
2.500.000
2.000.000
1.500.000
1.000.000
500.000
2 Ministerio de Agricultura del Per. Cuadro 59. Precio promedio pagado al productor
(en chacra) por mes segn principales productos agrcolas y pecuarios. [en lnea] Por-
tal Agrario. <http://www.portalagrario.gob.pe/precios/pppagprod_0212.shtml>. (Consul-
ta: 27 de enero del 2008).
rea/Pases de origen
y commodities importados Enero-diciembre Enero-noviembre
Importes de consumo Valores en miles de dlares Comparaciones
Total mundial Otras enzimas 3507907000 261.463 285.292 336.087 367.293 418.400 384.941 412.546 7,17
10-industrial 26-QUINO:REVISTA INGENIERIA
Norteamrica Otras enzimas 3507907000 13.176 13.130 14.334 21.774 28.208 26.072 26.457 1,48
Caribe Otras enzimas 3507907000 0 47 437 51 50 50 50 0,00
Amrica Central Otras enzimas 3507907000 0 0 107 12 0 0 0 -
Amrica del Sur Otras enzimas 3507907000 3.828 3.630 2.471 5.883 5.350 4.978 8.406 68,86
Unin Europea-27 Otras enzimas 3507907000 180.762 187.500 225.125 244.815 277.767 255.148 277.300 8,68
28/01/2011
Europa (otros) Otras enzimas 3507907000 4.155 4.922 2.799 3.843 4.006 3.732 4.133 10,74
Ex Unin Sovitica Otras enzimas 3507907000 465 4.771 6.995 411 2.182 2.176 152 -93,01
Asia este Otras enzimas 3507907000 51.289 62.913 72.747 80.263 89.470 82.578 85.584 3,64
04:36
Medio Oriente Otras enzimas 3507907000 518 739 542 855 641 554 657 18,59
frica subsahariana Otras enzimas 3507907000 1.347 1.214 1.292 1.176 869 846 1.012 19,62
Asia del sur Otras enzimas 3507907000 2.161 2.601 3.357 3.402 3.753 3.406 3.243 -4,79
Asia del sureste Otras enzimas 3507907000 3.105 3.117 5.093 3.396 5.073 4.536 4.322 -4,72
Oceana Otras enzimas 3507907000 637 709 786 1.102 1.032 865 1.229 -42,08
Pgina 205
Fuente: Foreign Agricultural Service, Departamento de Agricultura de Estados Unidos (fecha de consulta: 22 de enero del 2008).
205
10-industrial 26-QUINO:REVISTA INGENIERIA 28/01/2011 04:36 Pgina 206
2. MATERIAL Y MTODOS
Tabla 2
Protocolo para cuantificar la cantidad de protena
Blanco Muestra/estndar
Agua 100 L
Muestra 100 L
Buffer alcalino 2.000 L 2000 L
Incubar por 10 minutos a temperatura ambiente
Reactivo Folin-Ciocalteau 200 L 200 L
Incubar por 30 minutos a temperatura ambiente y leer absorbancias a 600nm
Tabla 3
Protocolo para determinar la actividad enzimtica
Blanco Muestra/estndar
Muestra 100 L
Agua 100 L
Buffer MES 0.01M pH 6.20 1900 L 1900 L
Incubar por 10 minutos a 25C
Bapna 25 mM 100 L 100 L
Leer absorbancia de manera continua a 410 nm y calcular la pendiente en el rango lineal.
Tabla 4
Diseo factorial para evaluar los efectos del buffer y
la concentracin de cistena y 2-mercaptoetanol
1 0.1 0 0
2 0.1 0 50
3 0.1 50 0
4 0.1 50 50
5 0.2 0 0
6 0.2 0 50
7 0.2 50 0
8 0.2 50 50
3. RESULTADOS
Grfico 2
Comparacin de las curvas de calibracin con papana y
albmina de suero bovino (BSA)
0.8
0.7 BSA
Papana
0.6 BSA Regr
600nm
0.5
Absorbancia
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
[Protena] mg/mL
Grfico 3
Recuperacin de unidades de enzima a diferentes pH de extraccin
30 Buffer 0.02M 0h
Buffer 0.1M 0h
25
20
15
10
2 3 4 5 6 7 8
pH del buffer de extraccin
Grfico 4
Efectos del tiempo de extraccin en la recuperacin de enzima
100
Buffer citrato-fosfato 0.02M
Buffer citrato-fosfato 0.1M
80
60
40
20
0
0 24 120
Grfico 5 Grfico 6
Efecto de la concentracin molar Efecto de la concentracin
de buffer en la extraccin de cistena (1=0mM y 2=50mM)
de papana (p=0.004) de cistena en la extraccin
de papana (no significativo)
228 222
219
210
205
Actividad
Actividad
201
192
183 188
174
165 171
0.1 0.2 1 2
Buffer Cisterna
Grfico 7
Efecto de la concentracin de 2-mercaptoetanol
(3=0mM y 4=50mM) en la extraccin de papana (p=0.013)
227
207
Actividad
187
167
3 4
ME
Grfico 8
Efectos combinados de la concentracin
del buffer (0.1 y 0.2M) y cistena (0 y 50 mM)
1 2
232.0 232.0
213.5 213.5
Actividad
Actividad
195.0 195.0
176.5 176.5
158.0 158.0
0.1 0.2 0.1 0.2
Buffer Buffer
Grfico 9
Efectos combinados de la concentracin
de buffer (0.1 y 0.2M) y 2-mercaptoetanol
3 4
240 240
220 220
Actividad
Actividad
200 200
180 180
160 160
0.1 0.2 0.1 0.2
Buffer Buffer
Grfico 10
Efectos combinados de cistena 0 y 50mM (1 y 2) y
2-mercaptoetanol 0 y 50mM (3 y 4)
3 4
232 232
207 207
Actividad
Actividad
182 182
157 157
1 2 1 2
Cistena Cistena
Grfico 11
Efectos combinados de la concentracin de buffer 0.1 y 0.2M, cistena 0 y
50mM (1,2) y 2-mercaptoetanol 0 y 50mM (3,4)
1,3 1,4
244.0 244.0
222.2 222.2
Actividad
Actividad
200.4 200.4
178.6 178.6
156.8 156.8
135.0 135.0
0.1 0.2 0.1 0.2
Buffer Buffer
2,3 2,4
244.0 244.0
222.2 222.2
Actividad
Actividad
200.4 200.4
178.6 178.6
156.8 156.8
135.0 135.0
0.1 0.2 0.1 0.2
Buffer Buffer
Grfico 12
Actividad recuperada frente al tiempo para ltex
de papaya mezclado con buffer bajo agitacin constante a 5 C
Grfico 13
Actividad recuperada durante extraccin a 5 y 25 C
Grfico 14
Concentracin de protena extrada a 5 y 25 C
Grfico 15
Actividad especfica versus tiempo
unidades proteasa/mg de protena
Actividad especfica:
Grfico 16
Balance de masa para el proceso de extraccin y purificacin de papana
80 80
Actividad relativa
60 60
40 40
0 0
Extracto obtenido Diafiltrado Liofilizado
Clculos preliminares
a) Buffer de extraccin pH = 3: por 100 mL
39.8 mL de cido ctrico + 10.2 mL de Na2HPO4.12 H2O
39.8 mL x 19.21 g / 1000 mL + 10.2 mL x 71.7 g / 1000 mL
Grfico 17
Balance de masa en base a los procesos experimentales desarrollados
Papaya
Recoleccin de ltex
Ltex
1,0 kg
P-7
Buffer de extraccin
Mezclado 9,0 kg
Agitacin con enfriamiento
Precipitacin
Dilucin
Agua
4,82 kg Papana diluida
5,35 kg 4,87 L
Agua con sales residuales
Filtracin
Agua
Papana concentrada
Liofilizacin Agua
Estimacin de costos
Determinacin de P.U
Agitador magntico
Agitador magntico x hr 21600 400 0.019
Electricidad (kwh) 0.012 0.3 0.004
Incubadora
Incubadora x hr 36000 3000 0.083
Electricidad kwh 1 0.3 0.300
Centrfuga
Centrfuga (x hr) 36000 1500 0.042
Electricidad (kwh) 0.065 0.3 0.020
Filtracin tangencial
Bomba peristltica
Agitador magntico
Equipo 43200 1500 0.035
Electricidad (kwh) 0.0373 0.3 0.011
Liofilizacin
Congelador 43200 6000 0.139
Electricidad (kwh) 0.7 0.3 0.210
Liofilizador 43200 14693 0.340
Electricidad (kwh) 0.7 0.3 0.210
Mano de obra
Investigador, h 4 77.193 19.298
Auxiliar, h 4 56.140 14.035
Centrifugado
Costo proceso 1 mezclado y agitacin
con enfriamiento ($) 10.00 5.35 53.52
Depreciacin del equipo - centrfuga, h 0.50 0.04 0.02
Electricidad (kwh) - centrfuga, kwh 0.50 0.02 0.01
Investigador, h 0.50 19.30 9.65
Auxiliar, h 0.50 14.04 7.02
Costo proceso 2 centrifugado, US$ 70.22
Slidos residuales, kg 0.91 4.00
Cantidad procesado, kg 9.090
Costo unitario proceso 2 centrifugado, US$ 7.725
Factor de escalamiento 120.69
Costo del proceso, US$ 16.70
Precipitacin
Costo proceso 2 centrifugado, US$ 9.09 7.72 70.22
Sulfato de amonio al 40%, g 2.18 35.69 77.80
Depreciacin del equip - agitador, h 0.17 0.02 0.00
Electricidad (kwh) - agitador, Kwh 0.17 0.00 0.00
Investigador, h 0.2 19.30 3.86
Auxiliar, h 0.2 14.04 2.81
Costo proceso 3 de precipitacin 154.69
Cantidad procesado, kg 11.270
Costo unitario proceso 3 precipitacin 13.726
Factor de escalamiento 120.65
Costo del proceso 84.47
Centrifugado
Costo unitario proceso 3 precipitacin, US$/kg 11.270 13.726 154.69
Depreciacin del equipo (hr) - centrfuga, h 0.083 0.04 0.00
Electricidad centrfuga, Kwh 0.083 0.020 0.00
Investigador, h 0.15 19.30 2.89
Auxiliar, h 0.15 14.04 2.11
(continuacin)
Dilucin
Costo proceso 4 centrifugado, US$ 0.54 295.73 159.69
Agua de dilucin, l 4.82 0.08 0.41
Depreciacin del equipo - agitador, h 0.25 0.019 0.00
Electricidad - agitador, Kwh 0.25 0.004 0.00
Investigador, h 0.3 19.30 5.79
Auxiliar, h 0.3 14.04 4.21
Costo proceso 5 dilucin 170.10
Cantidad procesado, kg 5.36
Costo unitario proceso 5 dilucin 31.74
Factor de escalamiento 120.70 US$/kg
Costo del proceso, US 10.41 1.94
Filtracin tangencial
Costo proceso 5 dilucin 5.360 31.74 170.10
Agua de desalinizacin 5.360 0.85 4.58
Depreciacin del equipo - filtracin tangencial, h 1.000 0.03 0.03
Electricidad - filtracin tangencial 1.000 0.01 0.01
Investigador, h 1.50 19.30 28.95
Auxiliar, h 1.50 14.04 21.05
Costo proceso 6 filtracin tangencial 224.73
Cantidad procesado, kg 5.360
Costo unitario proceso 6 filtracin tangencial 41.93
Factor de escalamiento 120.81 US$
Costo del proceso, US$ 54.62 10.19
Liofilizacin
Costo proceso 6 filtracin tangencial, US$ 5.360 41.93 224.73
Depreciacin del equipo - precongelador, h 1.00 0.139 0.14
Electricidad - precongelado, Kwh 1.00 0.210 0.21
Depreciacin del equipo - liofilizacin, Kwh 10.00 0.340 3.40
Electricidad (kwh) - liofilizacin 10.00 0.210 2.10
Investigador, h 2.00 19.30 38.60
Auxiliar, h 5.00 14.04 70.18
Costo proceso 7 liofilizacin, US$ 339.35
Papana liofilizada, kg 0.08
Costo unitario proceso 7 liofilizacin, US$ 4241.86
4. DISCUSIN
5. CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA