Manuel de Maintenance Des Appareils de Labo

Manuel dentretien et de
MA I N T ENANCE
des appareils de laboratoire
2 e dition
Dpartement technologies essentielles de la Sant

Diagnostic et technologie de laboratoire
Manuel dentretien et de
M AI NTENA NCE
des appareils de laboratoire
2 e dition
Genve 2008
Dpartement technologies essentielles de la Sant

Diagnostic et technologie de laboratoire
Catalogage la source: Bibliothque de lOMS
Manuel dentretien et de maintenance pour lquipement de laboratoire. 2e d.
1.Laboratoire. 2.Maintenance. 3.Manuel. I.Organisation mondiale de la Sant. II.Organisation Panamericaine de la Sant.

ISBN 978 92 4 259635 9 (Classication NLM: WX 147)
Organisation mondiale de la Sant 2008

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1211 Genve 27 (Suisse) (tlphone : +41 22 791 3264 ; tlcopie : +41 22 791 4857 ; adresse lectronique : bookorders@who.int). Les demandes relatives la permission de reproduire ou de
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Dr G. Vercauteren, Coordinateur, Diagnostic et technologie de laboratoire, Dpartement technologies essentielles de la Sant, Organisation mondiale de la Sant, 20 Avenue Appia, 1211 Genve 27,
Suisse.
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M A I N T E N A N C E M A N U A L F O R L A B O R ATO R Y E Q U I P M E N T
Table des matires
TABLE DES FIGURES viii
REMERCIEMENTS x
INTRODUCTION xi
*/(70;9,LECTEUR DE MICROPLAQUES 1
Photographie dun lecteur de microplaques 1
A quoi sert un lecteur de microplaques 1
Principes de fonctionnement 1
Conditions requises pour linstallation 3
Entretien de routine 3
Guide de dpannage 4
Dfinitions 5
*/(70;9,LAVEUR DE MICROPLAQUES 7
Photographie dun laveur de microplaques 7
A quoi sert un laveur de microplaques 7
Guide de dpannage 11
Dfinitions 12
*/(70;9,pH-MTRE 13
A quoi sert un pH-mtre 13
Photographie et lments dun pH-mtre 13
Elments du pH-mtre 14
Circuit lectrique type 15
Procdure gnrale dtalonnage 16
Entretien gnral du pH-mtre 17
Entretien courant de llectrode 18
Dfinitions 19
Annexe : Thorie du pH 20
iii
TA B L E D E S M AT I R E S
*/(70;9,BALANCES 21
Photographies de balances 21
A quoi sert une balance 22
Dfinitions 29
*/(70;9,BAINS-MARIE 31
Schma dun bain-marie 31
Commandes du bain-marie 32
Fonctionnement du bain-marie 32
Dfinitions 34
*/(70;9,ENCEINTE DE SCURIT BIOLOGIQUE 35

Illustration dune enceinte de scurit biologique 35
A quoi sert une enceinte de scurit biologique 35
Scurit biologique 39
Utilisation de lenceinte de scurit biologique 39
Evaluation fonctionnelle (autre option) 41
Tableau dvaluation fonctionnelle des enceintes de scurit biologique 42
Dfinitions 44
*/(70;9,CENTRIFUGEUSES 45
Photographies de centrifugeuses 45
A quoi sert une centrifugeuse 45
Elments de la centrifugeuse 46
Recommandations pour une utilisation et un stockage appropris 48
Dfinitions 52
*/(70;9,DISTILLATEUR 53
Schma dun distillateur 53
A quoi sert un distillateur 53
Dfinitions 57
*/(70;9, DILUTOR 59
Schma dun diluteur 59
A quoi sert un diluteur 59
iv
M A N U E L D E N T R E T I E N E T D E M A I N T E N A N C E P O U R L Q U I P E M E N T D E L A B O R ATO I R E

Dfinitions 64
*/(70;9,DISTRIBUTEUR 65
Schma et photographie dun distributeur 65
A quoi sert un distributeur 65
Conditions requises pour le fonctionnement de lappareil 67
Dfinitions 68
*/(70;9,SPECTROPHOTOMTRE 69
Photographies de spectrophotomtres 69
A quoi sert un spectrophotomtre 69
Elments du spectrophotomtre 72
Entretien du spectrophotomtre 73
Bonnes pratiques dutilisation du spectrophotomtre 75
Dfinitions 79
*/(70;9,AUTOCLAVE 81
Photographie dun autoclave 81
A quoi sert un autoclave 81
Utilisation de lautoclave 84
Maintenance des lments spcialiss 90
Dfinitions 92
*/(70;9,ETUVE 93
Photographies dtuves 93
A quoi sert une tuve 93
Utilisation de ltuve 94
Commandes de ltuve 95
Contrle de qualit 96
Dfinitions 98
*/(70;9,INCUBATEURS 99
Photographies dincubateurs 99
Commandes de lincubateur 101
Entretien de routine et utilisation de lincubateur 101
Dfinitions 104
v
TA B L E D E S M AT I R E S
*/(70;9,MICROSCOPE 105
Photographies de microscopes 105
A quoi sert un microscope 106
Schma dun microscope 108
Les problmes qui peuvent se poser avec les microscopes 111
Entretien gnral du microscope 113
Dfinitions 116
*/(70;9,PIPETTES 119
Photographies et schma de pipettes 119
A quoi sert une pipette 120
Conditions requises pour lutilisation 120
Utilisation de la pipette 121
Dfinitions 126
*/(70;9,AGITATEUR CHAUFFANT 127

Photographie dun agitateur chauffant 127
Commandes de lagitateur chauffant 127
Utilisation de lagitateur chauffant 128
Dfinitions 129
*/(70;9,RFRIGRATEURS ET CONGLATEURS 131

Rfrigrateurs et conglateurs 131
Photographie dune enceinte rfrigre 131
A quoi sert une enceinte rfrigre 132
Circuit de contrle du rfrigrateur 134
Utilisation du rfrigrateur 134
Entretien de routine des rfrigrateurs 135
Utilisation des conglateurs ultra-basse temprature 138
Entretien de routine des conglateurs ultra-basse temprature 138
Dfinitions 141
*/(70;9, ANALYSEURS DE CHIMIE CLINIQUE 143

Photographies danalyseurs de chimie 143
A quoi servent les analyseurs de chimie 144
Elments des analyseurs 144
vi
Utilisation de lanalyseur en chimie sche 145

Utilisation de lanalyseur en chimie liquide 146
Entretien courant des analyseurs de chimie 146
Interventions hors routine et conduite tenir en cas de panne 147
Dfinitions 148
*/(70;9,COLORIMTRES 149
Photographies de colorimtres 149
A quoi sert un colorimtre 149
Elments du colorimtre 150
Utilisation du colorimtre 150
Utilisation de lhmoglobinomtre 151
Dfinitions 155
BIBLIOGRAPHIE 157
vii
TABLE O F FI GU R E S
;HISLKLZN\YLZ
Figure 1 Matriel utilis pour les tests ELISA 2

Figure 2 Laveur ELISA 8
Figure 3 Profils de puits 8
Figure 4 Schma dun pH-mtre 14
Figure 5 Types dlectrodes 15
Figure 6 Circuit lectrique type pour le pH-mtre 15
Figure 7 Balance ressort 22
Figure 8 Balance curseur 22
Figure 9 Balance danalyse 22
Figure 10 Balance plateau suprieur 23
Figure 11 Balance substitution 23
Figure 12 Elments des balances lectroniques 24
Figure 13 Principe de la force de compensation 24
Figure 14 Classification des balances selon lexactitude 25
Figure 15 Panneau de contrle dune balance danalyse 26
Figure 16 Bain-marie 31
Figure 17 Rsistances immersion et externes 31
Figure 18 Commandes du bain-marie 32
Figure 19 Enceinte de scurit biologique 35
Figure 20 Le concept de force centrifuge 46
Figure 21 Distillateur 53
Figure 22 Schma dun diluteur 59
Figure 23 Commandes du diluteur 60
Figure 24 Seringue et doseur 61
Figure 25 Distributeur 65
Figure 26 Distributeur et accessoires 66
Figure 27 Interaction de la lumire avec la matire 70
Figure 28 Phnomne dabsorbance 71
Figure 29 Elments du spectrophotomtre 72
Figure 30 Rfraction de la lumire 79
Figure 31 Grille de diffraction 80
Figure 32 Circuit de vapeur dun autoclave 83
Figure 33 Espace ncessaire autour de lautoclave 87
Figure 34 Alimentation en air comprim 87
Figure 35 Alimentation en vapeur 88
Figure 36 Gnrateur de vapeur 89
Figure 37 Tableau de commande lectronique de ltuve 95
Figure 38 Circuit lectrique de ltuve 95
Figure 39 Systmes de transfert de la chaleur
utiliss dans les incubateurs 100
viii
M A I N T E N A N C E M A N U A L F O R L A B O R ATO R Y E Q U I P M E N T
Figure 40 Commandes de lincubateur 101

Figure 41 Lentille convexe (convergente) 106
Figure 42 Optique de la lentille convergente 106
Figure 43 Schma dun microscope 107
Figure 44 Coupe transversale dun microscope 108
Figure 45 Tte binoculaire 109
Figure 46 Systme dclairage 109
Figure 47 Platine porte-objet (platine mcanique) 110
Figure 48 Revolver porte-objectifs 110
Figure 49 Corps du microscope 111
Figure 50 Schma dune pipette 119
Figure 51 Types de pipettes 120
Figure 52 Etapes de lutilisation dune pipette 121
Figure 53 Dmontage dune pipette 123
Figure 54 Panneau de contrle dun agitateur chauffant 127
Figure 55 Moteur bagues de dphasage 129
Figure 56 Circuit de rfrigration 132
Figure 57 Circuit de contrle du rfrigrateur 134
Figure 58 Panneau de contrle dun rfrigrateur
pour banque de sang 135
Figure 59 Panneau de contrle dun conglateur
ultra-basse temprature 138
Figure 60 Diagramme simplifi de la photomtrie par
rflectance sur bandelette ractive 144
Figure 61 Photographie dune sphre dUlbricht
et diagramme en coupe transversale 145
Figure 62 Elments de base dun photomtre 145
Figure 63 Commandes dun colorimtre portable 150
ix
PR EFAC E
Remerciements
Le prsent manuel est une traduction franaise de la version rvise du Manual de mantenimiento para equipo de laboratorio
(Organisation panamricaine de la Sant, 2005), traduit de lespagnol en anglais. Lors de la rvision, de nouveaux chapitres portant
sur des appareils couramment utiliss dans certains laboratoires ont t ajouts et des mises jour ont t effectues pour permettre
une utilisation de ce manuel lchelle mondiale.
La traduction franaise a t ralise par Mme Annie Bertouille et rvise par Mme Mercedes Prez Gonzlez, sous la direction du
Dr Gaby Vercauteren, Organisation mondiale de la Sant, Genve, Suisse.
LOMS exprime sa gratitude aux personnes qui ont particip tous les niveaux llaboration du prsent manuel. Elle souhaite en
particulier remercier de leur contribution le Dr Jorge Enrique Villamil, qui a rdig la premire dition du Manuel en 2005 (Manual
de mantenimiento para equipo de laboratorio, ISBN 92 75 32590 1), ainsi que le Dr Jean-Marc Gabastou et M. Antonio Hernndez,
rviseurs au dpartement Mdicaments essentiels, vaccins et technologies sanitaires de lOPS.
LOMS souhaite galement remercier les fabricants qui ont autoris lutilisation de leurs images pour la prsente publication.
NOTE:
Au moment de la publication du prsent manuel, la traduction officielle de la terminologie lie au systme de nomenclature
GMDN (Global Medical Device Nomenclature) ntait pas disponible. Le projet de traduction men par la Commission Europene
est nanmoins en cours.
La terminologie utilise dans ce manuel est base sur une traduction technique et peut donc diffrer de la traduction officielle. Cette
dernire sera disponible sur le site www.who.int/diagnostics_laboratory ds quelle sera acheve.
x
0U[YVK\J[PVU
Le prsent manuel a t labor pour aider le personnel des laboratoires de sant. Il vise faire mieux connatre les exigences
techniques concernant linstallation, lutilisation et lentretien des divers quipements qui jouent un rle majeur dans lexcution
des tests de diagnostic. Il sadresse galement au personnel responsable de la direction technique, de lorganisation de la gestion
de la qualit et de la maintenance technique.
Etant donn la diversit des appareils en ce qui concerne lorigine, la marque et le modle, ce manuel prsente des recommandations
dordre gnral. Les caractristiques spcifiques des divers appareils sont expliques en dtail dans les manuels dentretien et
dinstallation fournis par les fabricants. Ces manuels seront rclams ou commands par les organismes et personnes chargs des
achats de matriel technique suivant les procdures habituelles dacquisition, ou en sadressant directement aux fabricants.
Le prsent manuel a t lorigine labor par lOrganisation Panamricaine de la Sant (OPS) afin dappuyer les programmes
dassurance de la qualit que lOPS soutient dans les laboratoires rgionaux. Les versions anglaise et franaise sont des ditions
rvises qui comprennent 20 groupes dappareils choisis de faon couvrir lventail des matriels les plus couramment utiliss
lchelle mondiale dans les laboratoires de niveau technique simple intermdiaire. Du fait des diffrences de niveau de complexit
technique, de marques et de modles, chaque chapitre a t labor en partant de lquipement de base et en y ajoutant des
lments technologiques nouveaux le cas chant. On trouvera dans chaque chapitre les informations suivantes :
t Catgories dappareils, selon leur dnomination gnrique. Les autres appellations sont galement indiques.
t Photographies ou schmas explicatifs, ou les deux, pour identifier le type dappareil dont il sagit.
t Une brve explication des principales utilisations ou applications de lappareil au laboratoire.
t Une description succincte des principes de fonctionnement de lappareil, avec un dveloppement sur les principes ou les lois
physico-chimiques, que le lecteur intress pourra (et devrait) tudier en dtail.
t Les conditions requises pour linstallation, surtout en ce qui concerne les raccordements lectriques et la ncessit dune
installation et dun fonctionnement sans danger, avec mention des normes lectriques internationales.
t Les procdures dentretien de routine, classes selon leur frquence (entretien quotidien, hebdomadaire, mensuel, trimestriel,
annuel ou occasionnel). Les procdures sont numrotes et prsentes selon leur squence dexcution (on trouvera les
procdures spcifiques pour les divers appareils dans les manuels dutilisation fournis par les fabricants).
t Un guide de dpannage, avec les problmes les plus frquemment rencontrs selon le type dappareil, leur cause probable et
les moyens dy remdier.
t Une liste de dfinitions simples de certains termes spcialiss utiliss dans le texte.
t Pour certains appareils, des dveloppements supplmentaires sur ltalonnage, le contrle de qualit et les diffrents modles
avec leurs fonctions
Toutes ces informations, jointes un usage correct et soigneux, aideront maintenir lquipement de laboratoire dans son tat
optimal.
xi
Chapitre 1
3LJ[L\YKLTPJYVWSHX\LZ
GMDN Code 37036
ECRI Code 16-979
Dnomination Lecteur photomtrique pour
microplaques
Le lecteur de microplaques, aussi appel lecteur PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT

photomtrique pour microplaques ou lecteur Le lecteur de microplaques est un spectrophotomtre spcialis.
ELISA est un spectrophotomtre spcialis dans la lecture Contrairement au spectrophotomtre classique qui permet la
des rsultats des tests ELISA, une technique utilise pour lecture sur un large ventail de longueurs donde, le lecteur de
dtecter la prsence danticorps ou dantignes spcifiques microplaques possde des filtres ou des grilles de diffraction qui
dans des chantillons. La technique repose sur la dtection limitent la gamme de longueurs donde celles utilises dans
dun antigne ou dun anticorps capturs sur une surface les tests ELISA, en gnral entre 400 et 750 nm (nanomtres).
solide au moyen danticorps directs ou secondaires marqus, Certains lecteurs travaillent dans lultraviolet et effectuent
ce qui donne une raction dont le produit peut tre lu avec un des analyses entre 340 et 700 nm. Le systme optique adopt
spectrophotomtre. Le mot ELISA est lacronyme de Enzyme- par de nombreux fabricants utilise des fibres optiques qui
Linked Immunosorbent Assay , et dsigne un test bas sur une conduisent la lumire dans les puits des microplaques contenant
raction immunoenzymatique. Le prsent chapitre porte sur les chantillons. Le faisceau lumineux qui traverse lchantillon
lutilisation des lecteurs de microplaques pour les tests ELISA. a un diamtre de 1 3 mm. Un systme de dtection capte la
Pour des renseignements complmentaires sur les principes de lumire venant de lchantillon, amplifie le signal et dtermine
fonctionnement et dentretien de ces appareils, voir le chapitre labsorbance (ou densit optique) de lchantillon. Un systme de
11 sur le spectrophotomtre. lecture convertit cette valeur en donnes permettant dinterprter
les rsultats du test. Certains lecteurs de microplaques utilisent
PHOTOGRAPHIE DUN LECTEUR DE MICROPLAQUES un systme lumineux double faisceau.
Les chantillons tester sont dposs dans des plaques

spcialement conues qui possdent un certain nombre de
Photo avec l aimable autorisation de BioRad Laboratories
puits o la raction a lieu. Les plaques couramment utilises

ont 8 colonnes et 12 ranges, soit un total de 96 puits. Il existe
aussi des plaques ayant un plus grand nombre de puits. Pour
certaines applications, la tendance consiste actuellement
augmenter le nombre de puits (plaques 384 puits) pour
rduire les quantits de ractifs et dchantillons utilises et
augmenter la cadence de travail. Lemplacement des capteurs
optiques du lecteur varie selon les fabricants : ils peuvent se
trouver au-dessus de la plaque contenant les chantillons ou
directement au-dessous des puits.
A QUOI SERT UN LECTEUR DE MICROPLAQUES Actuellement, les lecteurs de microplaques possdent des
commandes rgules par microprocesseurs, des interfaces de
des tests ELISA. Cette technique a des applications directes connexion avec les systmes dinformation et des programmes
en immunologie et en srologie. Parmi ses autres applications de contrle des processus et de contrle de la qualit qui,
figurent la confirmation de la prsence danticorps ou avec laide dun ordinateur, permettent une automatisation
dantignes spcifiques dun agent infectieux, danticorps complte des tests.
prsents la suite dune vaccination ou dauto-anticorps, par
exemple dans la polyarthrite rhumatode.
1
CHAPITRE 1 LECTEUR DE MICROPLAQUES
Matriel ncessaire pour les tests ELISA Etapes biochimiques de la technique ELISA1
Pour lexcution de la technique ELISA, il faut : Les tapes de la technique ELISA du point de vue biochimique
1. Un lecteur de microplaques. sont les suivantes :
2. Un laveur de microplaques (chapitre 2). 1. Les puits de la microplaque sont recouverts dune couche
3. Un systme de distribution de liquides (on peut utiliser des danticorps ou dantignes.
pipettes multicanaux). 2. Les chantillons, les tmoins (ou contrles) et les talons
4. Un incubateur pour incuber les plaques. sont ajouts dans les puits et incubs des tempratures
allant de la temprature ambiante 37 C pendant une
dure dtermine, selon les caractristiques du test.
La figure 1 montre comment ces lments sont relis entre Pendant lincubation, lantigne prsent dans lchantillon
eux. se lie lanticorps dpos sur la plaque, ou lanticorps
prsent dans lchantillon se lie lantigne dpos sur
Etapes mcaniques de la technique ELISA la plaque, selon ce qui se trouve dans lchantillon et en
Utilisation du matriel quelle quantit.
Lorsquon ralise un test ELISA, on procde en gnral comme 3. Aprs lincubation, les antignes ou les anticorps non lis
suit : sont lavs et limins de la plaque au moyen du laveur de
1. Un premier lavage de la plaque peut tre ralis au moyen microplaques et dun tampon de lavage appropri.
du laveur de microplaques. 4. On ajoute ensuite un anticorps secondaire, appel le
2. A laide dun distributeur ou de pipettes multicanaux, on conjugu. Cet anticorps porte une enzyme qui ragira avec
remplit les puits avec la solution prpare pour le test. un substrat pour donner un changement de coloration lors
3. On dpose la plaque dans lincubateur o, temprature dune tape ultrieure.
contrle, une srie de ractions se produit. 5. Alors commence une deuxime tape dincubation
pendant laquelle le conjugu se lie au complexe antigne-
Les tapes 1, 2 et 3 peuvent tre rptes plusieurs fois selon anticorps dans les puits.
le test, jusqu ce que les ractifs ajouts aient fini dagir. 6. Aprs lincubation, on effectue un nouveau cycle de lavage
pour liminer le conjugu non li.
Enfin, quand toutes les tapes dincubation sont acheves, on 7. On ajoute alors un substrat. Lenzyme ragit avec le substrat
transfre la plaque dans le lecteur de microplaques. La plaque et provoque un changement de coloration de la solution.
est lue et on peut en dduire un diagnostic. Ce changement indiquera quelle quantit de complexe
antigne-anticorps est prsente la fin du test.
8. A la fin de la priode dincubation, on ajoute un ractif pour
stopper la raction enzyme-substrat et le changement de
coloration. Ce ractif est en gnral un acide dilu.
9. Enfin, on lit la plaque laide du lecteur de microplaques.
Les valeurs obtenues sont utilises pour dterminer la
quantit exacte ou la prsence dantignes ou danticorps
dans lchantillon.
Note : Certains des puits sont utiliss pour les

Figure 1. Matriel utilis pour les tests ELISA talons et les tmoins. Les talons permettent
de dfinir les valeurs seuils. Les talons et les
tmoins contiennent des quantits connues et
sont utiliss pour mesurer la bonne excution
du test en valuant les donnes obtenues par
rapport aux concentrations connues prsentes
Laveur de dans chaque tmoin. La procdure dcrite ci-
plaque ELISA
dessus est valable en gnral, mais il existe de
nombreux tests ELISA prsentant des variantes
spcifiques.
Incubateur
Systme
de distribution
Lecteur
ELISA
Ordinateur 1 Pour des explications plus dtailles, se reporter

la littrature spcialise.
2
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION 5. Vrifier que le lecteur est talonn en procdant colonne
Pour que le lecteur de microplaques fonctionne correctement, par colonne. Prendre une plaque propre et vide et faire
il faut respecter les points suivants : une lecture. Sil ny a pas de diffrence entre les lectures
1. Un environnement propre, sans poussire. moyennes de la premire la dernire colonne, on peut
2. Une table de travail stable, lcart des appareils qui considrer lappareil comme talonn.
produisent des vibrations (centrifugeuses, agitateurs). Elle
doit tre de taille suffisante pour quil reste de la place ct
du lecteur de microplaques. Le matriel complmentaire ENTRETIEN DE ROUTINE
ncessaire pour excuter le test comme dcrit ci- Les procdures dentretien dcrites ci-aprs concernent
dessus comprend : laveur de microplaques, incubateur, uniquement le lecteur de microplaques. Lentretien du laveur
distributeur, et ordinateur avec ses priphriques. de microplaques est dcrit au chapitre 2.
3. Une alimentation lectrique rpondant aux normes
nationales. Par exemple, dans les pays dAmrique, le Entretien courant
rseau est en gnral aliment en 110 V/60 Hz alors Frquence : une fois par jour
quailleurs dans le monde il est aliment en 220-240 V/50- 1. Vrifier que les capteurs optiques de tous les canaux sont
60 Hz. propres. Sils sont sales, nettoyer la fentre des metteurs
de lumire et des capteurs avec une petite brosse.
Etalonnage du lecteur de microplaques 2. Sassurer encore une fois que le systme metteur de
Ltalonnage dun lecteur de microplaques est une opration lumire est propre.
spcialise qui doit tre ralise par un technicien ou un 3. Vrifier que ltalonnage du lecteur est correct. Au dbut
ingnieur qualifis en suivant les instructions donnes par le de la journe de travail, laisser le lecteur chauffer pendant
fabricant. Pour procder ltalonnage, il est ncessaire de 30 minutes. Ensuite, faire une lecture blanc puis lire une
disposer dune srie de filtres gris monts sur une plaque de plaque entire de substrat. Les valeurs obtenues doivent
mmes dimensions que les plaques utilises pour les analyses. tre identiques. Si non, faire pivoter la plaque et rpter la
Les fabricants fournissent ces plaques dtalonnage pour toutes lecture pour dterminer si la diffrence vient de la plaque
les longueurs donde utilises par le lecteur. ou du lecteur.
Les plaques dtalonnage sont livres avec au moins trois 4. Examiner le systme de dplacement automatique du tiroir
valeurs prtablies de la densit optique correspondant porte-plaque. Le dplacement doit tre constant et sans
lintervalle de mesure courant : une valeur faible, une valeur -coups.
moyenne et une valeur leve. Pour raliser ltalonnage,
procder comme suit : Entretien prventif
1. Mettre la plaque dtalonnage dans lappareil. Frquence : une fois par trimestre
2. Effectuer une lecture complte avec la plaque dtalonnage. 1. Vrifier la stabilit de la lampe. Utiliser la plaque
Vrifier sil y a des diffrences de lecture dun puits dtalonnage, et faire des lectures avec la mme plaque
lautre. Si cest le cas, faire pivoter la plaque de 180 et intervalles de 30 minutes. Comparer les rsultats. Ils ne
refaire la lecture pour voir si les diffrences sont dues doivent pas prsenter de diffrences.
la plaque elle-mme. En gnral, on admet que lappareil 2. Nettoyer le systme optique du dtecteur et le systme
na pas besoin dun talonnage plus pouss si les rsultats metteur de lumire.
correspondent aux valeurs attendues pour deux longueurs 3. Nettoyer le tiroir porte-plaque.
donde. 4. Vrifier lalignement de chaque puits avec les systmes
3. Vrifier si le lecteur ncessite un talonnage. Si oui, metteurs et dtecteurs de lumire.
leffectuer en suivant la procdure indique par le fabricant,
en vrifiant que la linarit des lectures se maintient aussi
rigoureusement que possible.
4. Si lappareil nest pas livr avec une plaque dtalonnage,
le contrler en dposant une solution colore dans les
puits dune plaque et en effectuant immdiatement une
lecture complte. Puis faire pivoter la plaque de 180 et
refaire la lecture. Si les deux sries de lectures donnent
des rsultats moyens identiques pour chaque range, le
lecteur est talonn.
3
CHAPITRE 1 LECTEUR DE MICROPLAQUES
GUIDE DE DPANNAGE
PROBLME CAUSE PROBABLE SOLUTION
Le lecteur donne une valeur qui na pas de sens. La lampe du systme metteur de lumire est hors service. Remplacer la lampe par une autre ayant les mmes
caractristiques que la lampe dorigine.
Le lecteur donne des valeurs diffrentes dune range Les capteurs optiques sont sales. Nettoyer les capteurs.
lautre.
Les lentilles ou dautres parties du systme metteur de Nettoyer les lentilles du systme metteur de lumire.
lumire sont sales.
Un ou plusieurs canaux ne sont pas talonns. Vrifier ltalonnage de chaque canal.
Le lecteur donne des valeurs de labsorbance trop leves. Ractifs prims et/ou prpars de faon incorrecte. Vrifier si la TMB est incolore et si la prparation est
correcte.
Contamination par dautres chantillons. Rpter le test en vrifiant les tiquettes, le laveur de
plaque et la faon dont la pipette a t utilise.
Filtre de longueur donde inadapt. Vrifier la longueur donde recommande pour le test.
Corriger si elle est incorrecte.
Lavage insuffisant ou inefficace. Vrifier la mthode de lavage. Utiliser un test appropri de
contrle de la qualit.
Incubation trs longue ou temprature trop leve. Vrifier la dure et la temprature dincubation.
Dilution incorrecte de lchantillon. Vrifier la procdure de dilution de lchantillon.
Un ractif a t omis. Vrifier que le test a t ralis suivant la procdure
tablie.
Le lecteur donne des valeurs de labsorbance trop faibles. Incubation trs courte ou temprature trop basse. Vrifier la dure et la temprature dincubation.
Les ractifs ntaient pas temprature ambiante. Laisser la temprature des ractifs squilibrer avec la
temprature ambiante.
Lavage excessif de la plaque. Ajuster la procdure de lavage en se conformant aux
instructions du fabricant.
Filtre de longueur donde inadapt. Vrifier la longueur donde slectionne. Utiliser la
longueur donde recommande pour le test.
Ractifs prims ou prpars de faon incorrecte. Vrifier les ractifs utiliss. Tester les dilutions.
Un ractif a t omis. Vrifier que le test a t ralis suivant la procdure
tablie.
La plaque prsente des rayures au fond des puits. Prparer une nouvelle plaque et refaire le test.
Plaque mal choisie ou sale. Vrifier le type de plaque utilis. Prparer une nouvelle
plaque et refaire le test.
Les puits de la plaque ont sch. Changer la faon de laver la plaque.
La plaque est mal installe dans le lecteur. Vrifier le positionnement de la plaque. Refaire la lecture.
Humidit ou traces de doigts sur le dessous de la plaque. Vrifier que le dessous de la plaque est propre sous les
puits.
Il reste du tampon de lavage dans les puits avant dajouter Vrifier que le tampon de lavage est compltement
le substrat. limin.
Les comprims de substrat ne se dissolvent pas Vrifier que les comprims se dissolvent correctement.
compltement.
Le comprim de substrat a t contamin par de Contrler lintgrit et la manipulation des comprims de
lhumidit, des pinces mtalliques ou nest pas entier. substrat.
La position du puits de mesure blanc a pu changer et Vrifier que la rpartition des puits est correcte.
une quantit incorrecte a alors t soustraite de chaque
lecture.
Le lecteur prsente une variation imprvue des lectures de La lampe du lecteur est instable. Remplacer la lampe par une autre ayant les mmes
densit optique. caractristiques que la lampe dorigine.
Le lecteur donne des valeurs augmentant ou diminuant Etalonnage incorrect du moteur dentranement de la Etalonner lentranement de la plaque de faon qu
progressivement dune colonne lautre. plaque. chaque arrt les puits restent exactement aligns avec le
systme metteur de lumire.
Les lectures de la densit optique sont trs basses par La lecture a t faite une longueur donde diffrente de Vrifier la longueur donde utilise pour effectuer la
rapport aux critres dvaluation optique de loprateur. celle qui est prvue pour le test. lecture. Si cest l le problme, rgler la longueur donde et
refaire la lecture. Vrifier que le filtre de longueur donde
choisi est bien celui qui est recommand.
4
Valeur leve de labsorbance obtenue avec le blanc. Homognit de lchantillon. Mlanger les ractifs avant emploi. Laisser leur
temprature squilibrer avec la temprature ambiante.
Pipetage incorrect. Vrifier que les embouts des pipettes sont changs entre
les chantillons et que tout liquide restant est limin.
Lecteur non talonn. Contrler ltalonnage. Utiliser une srie approprie pour le
contrle de qualit.
Lecture effectue sans attendre un prchauffage suffisant Attendre que le lecteur ait atteint sa temprature de
de lappareil. fonctionnement.
Substrat contamin. Vrifier que la TMB est incolore et que sa prparation est
correcte.
Lavage insuffisant ou inefficace. Bien vider le tampon de lavage. Vrifier que le remplissage
des puits et laspiration sont uniformes pendant le lavage.
Les donnes ne sont pas transmises du lecteur au Le lecteur et le microprocesseur ont des codes diffrents. Vrifier les codes slectionns.
microprocesseur.
Taux de transfert de linformation (en bauds) diffrents. Confirmer les taux de transfert slectionns.
Configuration incorrecte de linterface de communication Vrifier la configuration de linterface. La configuration
(rception/transmission). doit respecter les paramtres dfinis par le fabricant.
Faisceau lumineux mal align. Le lecteur a t dplac sans que les prcautions Appeler le service technique.
ncessaires aient t prises.
La source lumineuse (lampe) a t change et linstallation Vrifier linstallation et lalignement de la lampe.
ou lalignement de la nouvelle lampe nont pas t faits
correctement.
Identification incorrecte de lchantillon. La plaque na pas t charge correctement. Vrifier la procdure didentification des chantillons.
Refaire la lecture en tenant compte des corrections.
Identification incorrecte de lchantillon enregistr dans Vrifier la procdure didentification des chantillons.
le lecteur. Refaire la lecture en tenant compte des corrections.
Lordinateur nindique pas les codes derreur. Le programme qui contrle lactivation des alarmes et Appeler le service technique.
des avertissements a un dfaut ou nest pas valid par le
fabricant.
Le lecteur ne dtecte pas les erreurs. Divers composants du systme ne fonctionnent pas, par Appeler le service technique.
exemple le systme de dtection du niveau de liquide.
DFINITIONS
Chemiluminescence. Emission de lumire ou dune luminescence rsultant directement dune raction chimique temprature ambiante.
ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Technique biochimique principalement utilise en immunologie pour dtecter la prsence dun anticorps ou dun antigne
dans un chantillon.
Enzyme. Protine qui acclre (catalyse) les ractions chimiques.
Fluorophore. Molcule qui absorbe la lumire une longueur donde dtermine et qui la rmet une longueur donde plus leve.
Laveur de microplaques. Appareil utilis pour laver les plaques divers stades des tests ELISA afin dliminer les rsidus de composants non lis aprs une raction. Les
laveurs de microplaques utilisent des tampons de lavage spciaux.
Lecteur de microplaques. Nom donn aux spectrophotomtres capables de lire des microplaques.
Microplaque ELISA. Consommable standardis pour lexcution des tests ELISA. Les plaques comportent en gnral 96 puits classiquement disposs en 8 ranges et
12 colonnes. Il existe aussi des microplaques ELISA 384 puits et jusqu 1536 puits pour les tests spcialiss raliser cadence leve dans les centres ayant une forte
demande
TMB. Ttramthylbenzidine, substrat pour la peroxydase de raifort (enzyme).
5
Chapitre 2
3H]L\YKLTPJYVWSHX\LZ
GMDN Code 17489
ECRI Code 17-489
Dnomination Laveur de microplaques
Le laveur de microplaques, aussi appel laveur de microplaques PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT

ELISA ou laveur ELISA , est conu pour effectuer les oprations Le laveur de microplaques est conu pour effectuer les
de lavage requises par la technique ELISA. Il effectue le lavage des oprations de lavage lors des tests ELISA. Il possde au
puits des microplaques ELISA divers stades du test. minimum les sous-systmes suivants, qui peuvent diffrer
selon les fabricants.
t Sous-systme de contrle. En gnral, le laveur ELISA
PHOTOGRAPHIE DUN LAVEUR DE MICROPLAQUES est contrl par des microprocesseurs qui permettent de
programmer et de contrler les oprations, par exemple
le nombre de cycles de lavage2 (15), les dures prvues,
la pression de distribution et daspiration, le format
des plaques (96384 puits), le rglage de la fonction
daspiration selon le type de puits3 ( fond plat, fond en
Photo avec l aimable autorisation de BioRad Laboratories
V ou fond en U), ou encore des bandelettes, les volumes

distribus et aspirs, les cycles de trempage et dagitation,
etc.
t Sous-systme de distribution. En gnral, il comporte
un rservoir pour la solution de lavage, une ou plusieurs
pompes, habituellement une seringue dplacement
positif et une tte de distribution qui rpartit la solution
de lavage dans les diffrents puits au moyen daiguilles.
La tte de distribution est en gnral livre avec huit
paires daiguilles pour raliser les oprations de lavage
et dextraction dans tous les puits dune mme range
simultanment (les sous-systmes de distribution et
dextraction se rejoignent au niveau de la tte du laveur).
Il existe des modles douze paires daiguilles et dautres
A QUOI SERT UN LAVEUR DE MICROPLAQUES qui effectuent le lavage dans tous les puits simultanment.
Certains laveurs offrent la possibilit de travailler avec
contrle les tampons de lavage ncessaires lexcution des diffrents types de solutions de lavage, en changeant de
tests ELISA. De mme, lappareil enlve dans chaque puits les solution selon le programme enregistr par loprateur.
substances restant en excs aprs la raction. Selon le test ralis,
le laveur peut intervenir de une quatre fois, avec distribution
du tampon de lavage, agitation et aspiration des ractifs non
lis1 aprs la dure programme, jusqu lachvement des
cycles de lavage. Lappareil possde deux rservoirs, lun pour le
tampon de lavage et lautre pour les dchets gnrs pendant
le processus de lavage. 1 Voir une explication succincte de la technique ELISA dans le chapitre 1,
Lecteur de microplaques.
2 Le nombre exact de lavages ncessaires dpend du test utilis. Ce nombre
est spcifi sur le mode demploi fourni par le fabricant du test.
3 Si le puits est fond plat, laiguille daspiration est place trs prs dun
des bords du puits ; sil sagit dun puits fond en U ou en V, laiguille est
centre.
7
C H A P I T R E 2 L AV E U R D E M I C R O P L AQ U E S
t Sous-systme dextraction ou daspiration. Ce sous- Les sous-systmes dcrits ci-dessus sont reprsents sur la
systme ncessite un dispositif pour faire le vide et un figure 2. La figure 3 montre les diffrents types de puits les
systme de stockage des liquides et des dchets extraits plus couramment trouvs sur les microplaques. Chaque type
des puits. Le vide peut tre ralis au moyen de pompes de puits convient pour un type particulier de test.
externes et internes. Lextraction se fait laide dune
srie daiguilles montes sur la tte du laveur. Le nombre Procdure de lavage
daiguilles varie de un trois selon le modle utilis. Le lavage de la microplaque constitue lune des tapes de la
Si le laveur na quune aiguille, le lavage et lextraction technique ELISA. On utilise pour cela des solutions spciales.
sont raliss avec cette mme aiguille. Sil y a deux aiguilles, Parmi les solutions les plus couramment employes figure
lune est utilise pour dlivrer la solution de lavage et la solution tamponne au phosphate ou PBS. Elle est stable
lautre pour lextraire. Les modles trois aiguilles utilisent pendant 2 mois si on la conserve 4 C. On estime quil faut
la premire pour dlivrer la solution de lavage, la deuxime 1 3 litres de solution pour laver une microplaque, raison
pour lextraire et la troisime pour contrler et enlever tout de 300 ll par puits et par cycle de lavage. Le lavage peut tre
excs de liquide restant dans le puits. En gnral, laiguille fait manuellement, mais il est prfrable dutiliser un laveur
dextraction est plus longue que laiguille de distribution, automatis pour obtenir un meilleur rendement et pour rduire
ce qui lui permet davancer verticalement jusqu une au minimum la manipulation de produits potentiellement
distance de 0,3 0,5 mm du fond du puits. contamins.
t Sous-systme de dplacement. Il se compose dun
mcanisme qui dplace horizontalement la tte de Il existe diverses procdures de lavage selon les modles de
distribution et dextraction de faon quelle atteigne laveurs :
tous les puits de la microplaque ELISA. Aprs chaque t Aspiration du haut vers le bas. Lorsque la phase
dplacement horizontal jusqu la range de puits suivante, daspiration commence, les aiguilles se dplacent
la tte effectue un dplacement vertical pour distribuer verticalement et laspiration commence ds quelles entrent
ou extraire la solution de lavage. Il existe des laveurs qui en contact avec le liquide. Laspiration se poursuit jusqu
excutent ces oprations simultanment. ce que les aiguilles atteignent leur position la plus basse,
prs du fond des puits. Elles sont alors stoppes pour viter
daspirer lair qui se dplace le long des parois internes des
puits. Ce type daspiration empche le courant dair de
desscher les protines lies la surface des puits.
Figure 2. Laveur ELISA
Pompe
dextraction
Pompes dplacement positif
Tte de distribution
et dextraction
Rservoir dchets
Dplacement
horizontal et
vertical
Pompes
dalimentation
Solution
de lavage
Puits
Plaque ELISA
Figure 3. Prols de puits
Fond plat Fond en U Fond en V Lavage facile
8
t Distribution et aspiration simultanes. Dans certains =tYPJH[PVUKLSHWYVJtK\YLKLSH]HNL

types de laveurs, les systmes de lavage et daspiration Pour vrifier que la procdure de lavage est excute
fonctionnent simultanment ; il se produit une turbulence conformment aux spcifications des techniques ELISA, les
contrle lintrieur du puits qui limine les substances fabricants de tests ELISA ont labor des contrles effectuer
qui ne se sont pas lies pendant les phases dincubation. rgulirement. Lun de ces contrles1 est bas sur lutilisation
t Aspiration depuis le fond des puits. Dans ce systme, de la peroxydase, ractif distribu laide dune pipette dans
le cycle daspiration du liquide contenu dans les puits, les puits dune microplaque pour lecture 405, 450 et 492
en gnral de dure contrle, commence aprs nm. Les puits sont immdiatement lavs et on ajoute un
positionnement de laiguille prs du fond des puits. Ce substrat incolore (TMB/H2O2 ttramthylbenzidine/peroxyde
systme peut aspirer de lair en cas de diffrence de niveau dhydrogne). Tout conjugu restant hydrolysera lenzyme
de remplissage des rservoirs. et le chromogne virera au bleu. Aprs larrt de la raction
par addition dun acide, la TMB virera nouveau au jaune.
Etalonnage du laveur Lintensit de la coloration rsultante est directement lie
Le laveur de microplaques joue un rle dterminant dans la lefficacit du processus de lavage.
bonne excution des tests ELISA. On trouvera ci-dessous une
description des rglages ncessaires pour un fonctionnement
efficace de lappareil : CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION
t Positionnement des aiguilles (tte de distribution et Pour que le laveur de microplaques fonctionne correctement,
daspiration. Le positionnement horizontal et vertical des il faut respecter les points suivants :
aiguilles par rapport aux puits doit tre vrifi avec soin. Si 1. Un environnement propre, sans poussire.
la plaque a des puits fond plat, il faut vrifier que laiguille 2. Une table de travail stable, lcart des appareils qui
de distribution se place tout prs des bords du puits. Avec produisent des vibrations (centrifugeuses, agitateurs).
des puits fond en U ou en V, laiguille doit tre place Elle doit tre de taille suffisante pour quil reste de la
au centre du puits ; lors du dplacement vertical, il faut place ct du laveur de microplaques pour le matriel
maintenir une distance habituellement comprise entre 0,3 complmentaire : lecteur, incubateur, distributeur, et
et 0,5 mm entre la pointe de laiguille et le fond. Il ne faut ordinateur avec ses priphriques.
jamais laisser les aiguilles toucher le fond des puits, afin 3. Une prise de courant en bon tat avec raccordement la
dviter des interfrences mcaniques avec la pointe de terre, et une alimentation lectrique rpondant aux normes
laiguille pendant laspiration. nationales ou celles du laboratoire. Par exemple, dans les
t Dure de laspiration. Il faut rgler la dure de laspiration pays dAmrique, le rseau est en gnral aliment en 110
de faon ce que le film de solution qui adhre aux parois V/60 Hz alors quailleurs dans le monde il est aliment en
du puits puisse scouler vers le fond. Eviter des temps 220-240 V/50-60 Hz.
dattente trop longs afin que le revtement des puits ne
sche pas. Vrifier que les aiguilles du systme daspiration
sont propres (que rien ne les obstrue). ENTRETIEN DE ROUTINE
t Volume dlivr. Vrifier que le volume dlivr est le Les procdures dentretien dcrites ci-aprs concernent
plus proche possible de la capacit maximale des puits ; uniquement le laveur de microplaques. Lentretien du lecteur
vrifier que tous les puits sont remplis uniformment (au de microplaques est dcrit au chapitre 1.
mme niveau). Vrifier que les aiguilles de distribution sont
propres (que rien ne les obstrue). Entretien courant
t Vide. Le systme daspiration doit tre correctement rgl. Frquence : une fois par jour
Un vide trop pouss peut fausser le test. En effet, les puits 1. Vrifier le volume dlivr.
pourraient scher, ce qui affaiblirait considrablement 2. Tester luniformit du remplissage.
lactivit enzymatique et fausserait compltement le 3. Vrifier lefficacit du sous-systme daspiration.
rsultat du test. La plupart des laveurs fonctionnent 4. Vrifier la propret des aiguilles de distribution et
avec un vide compris entre 60 et 70 % de la pression dextraction.
atmosphrique. Sur certains modles, le vide est produit 5. Nettoyer le laveur leau distille aprs emploi, pour
par une pompe externe livre comme accessoire. Son liminer les restes de sels dans les canaux des sous-
fonctionnement est contrl par le laveur, ce qui fait quelle systmes de distribution et dextraction. Les aiguilles
ne fonctionne que lorsque cest ncessaire. doivent tre entirement immerges dans leau distille.
6. Vrifier que le corps du laveur a t nettoy. Si ncessaire,
nettoyer les parties externes avec un chiffon imbib de
dtergent doux.
1 Procdure labore par PANBIO, ELISA Check Plus, Cat. N E-ECP01T.
9
C H A P I T R E 2 L AV E U R D E M I C R O P L A Q U E S
Entretien prventif
Frquence : une fois par trimestre
1. Dmonter et nettoyer les canaux et les raccords. Vrifier 5. Nettoyer le laveur leau distille aprs emploi pour liminer
quils sont en bon tat. Sils prsentent des fuites ou des les restes de sels dans les canaux des sous-systmes de
traces de corrosion, les rparer ou les remplacer. distribution et dextraction.
2. Vrifier lintgrit des lments mcaniques. Les lubrifier 6. Vrifier que le fusible est en bon tat et que ses contacts
selon les instructions du fabricant. sont propres.
3. Contrler le rglage de chacun des sous-systmes. Les
talonner selon les recommandations du fabricant. Note : Lentretien du systme de contrle doit tre effectu
4. Vrifier lintgrit des cbles et raccords lectriques. par un technicien qualifi. Si ncessaire, appeler le fabricant
ou son reprsentant.
10
GUIDE DE DPANNAGE
A la fin du lavage, il reste de la solution dans les Le systme dextraction est dfectueux. Vrifier si le systme de vide fonctionne la pression
puits. approprie.
Les tuyaux du systme de vide sont dun diamtre Vrifier que le diamtre des canaux correspond aux
diffrent de celui qui est recommand. recommandations du fabricant.
Le tuyau daspiration est obstru. Vrifier que les tuyaux daspiration sont propres.
Le rservoir dchets est plein. Vrifier le niveau de remplissage du rservoir
dchets.
Le filtre du systme daspiration est humide ou Vrifier ltat du filtre du systme daspiration.
bouch.
Les pointes des aiguilles ne sont pas places Examiner le positionnement des pointes daiguilles.
correctement et natteignent pas le fond des puits.
Une microplaque dun type diffrent est utilise pour Vrifier le type de plaque utiliser pour le test.
le test.
Le laveur na pas t suffisamment purg. Vrifier la procdure de purge.
Loprateur na pas suivi correctement les instructions Examiner la procdure recommande par le
du fabricant. fabricant. Faire les ajustements ncessaires.
La plaque mise dans le laveur nest pas correctement Vrifier le positionnement de la plaque dans le
aligne. laveur.
Le cycle de lavage ne seffectue pas correctement. Le rservoir de solution de lavage est vide. Examiner le rservoir de solution de lavage.
Complter le niveau.
Le laveur na pas t suffisamment purg au dbut Le nettoyer correctement pour uniformiser
du cycle de travail. lhumidit dans chaque partie et liminer les bulles
dair.
Le volume de solution de lavage dlivrer a t Vrifier le volume requis pour chaque type de test et
incorrectement programm. chaque plaque.
La plaque a t mise de faon incorrecte dans le Vrifier linstallation correcte de la plaque dans le
laveur. laveur.
Le programme de lavage a t incorrectement Vrifier le programme de lavage recommand pour
slectionn. chaque type de plaque.
Les plaques utilises sont diffrentes de celles qui Vrifier que les plaques utilises sont entirement
sont recommandes par le fabricant. compatibles avec le laveur.
Le niveau de liquide dans les puits est insuffisant.
Le tuyau dalimentation en solution de lavage na pas Vrifier les spcifications du fabricant. Faire les
le diamtre ou lpaisseur spcifis par le fabricant. modifications ncessaires.
La pression est insuffisante pour dlivrer la quantit Vrifier que le systme de distribution et les canaux
correcte de solution de lavage. dalimentation ne sont pas obstrus.
Des moisissures et des bactries se dveloppent dans Le systme nest pas souvent utilis. Vrifier les procdures appliquer pour prvenir le
le rservoir de solution de lavage. dveloppement de moisissures et de bactries.
La procdure adquate (dsinfection) nest pas Vrifier les procdures appliquer pour prvenir le
applique. dveloppement de moisissures et de bactries.
Les tuyaux et raccords ne sont pas changs la Vrifier la frquence de remplacement indique par
frquence requise. le fabricant et/ou le service technique.
La solution de lavage a t contamine. Vrifier les procdures appliques pour prparer et
utiliser la solution de lavage afin de dterminer la
cause de la contamination et de lliminer.
Lentretien na pas t fait selon le plan. Vrifier les dates prvues pour effectuer lentretien.
Informer les responsables.
11
C H A P I T R E 2 L AV E U R D E M I C R O P L A Q U E S
DFINITIONS
PBS. Lune des solutions utilises pour effectuer les oprations de lavage dans les tests ELISA. PBS est labrviation de Phosphate Buffer Solution (solution tamponne au
phosphate). Elle se compose de : NaCl, KCl, NaHPO4.2H2O et KH2SO4. Les fabricants fournissent des fiches techniques qui donnent les proportions et les instructions pour
prparer le PBS. En gnral, on mlange une partie de PBS concentr et 19 parties deau dsionise.
Plate (ELISA). Consommable de dimensions standard, destin contenir les chantillons et les ractifs utiliss dans la technique ELISA. Les plaques ont en gnral 96, 384 ou
1536 puits et sont ralises en matire plastique, comme le polystyrne et le polypropylne. Il existe des plaques spcialement traites pour faciliter lexcution des tests.
Positive displacement pump. Pompe rgule par un piston se dplaant dans un cylindre. Son mcanisme est similaire celui dune seringue. Elle est quipe dune srie
de valves pour contrler le dbit entrant et sortant.
Buffer. Solution contenant soit un acide faible et son sel, soit une base faible et son sel, ce qui la rend rsistante aux variations du pH une temprature donne.
TMB/H2O2. (Ttramthylbenzidine/peroxyde dhydrogne). Ractif utilis pour vrifier la qualit du lavage des puits dans les tests ELISA.
12
Chapitre 3
pH mtre
Code GMDN 15164
Code ECRI 15-164
Dnomination pH mtre
Le pH-mtre est un appareil qui dtermine la concentration PHOTOGRAPHIE ET LMENTS DUN PH-MTRE
dions hydrogne (H+) dans une solution. Sil est soigneusement
utilis et talonn, il permet de mesurer lacidit dune solution
aqueuse. Certains pH-mtres sont aussi appels testeurs 1
2
de pH.
A QUOI SERT UN PH-MTRE

Le pH-mtre sutilise couramment dans tous les domaines de
la science o interviennent des solutions aqueuses. On lutilise
ainsi en agriculture, dans le traitement et la purification des
eaux, dans des processus industriels comme la ptrochimie,
la fabrication du papier, lindustrie alimentaire, lindustrie
pharmaceutique, dans la recherche et le dveloppement,
la mtallurgie, etc. Au laboratoire de sant, on lutilise pour
le contrle des milieux de culture et la mesure de lacidit
ou de lalcalinit des bouillons nutritifs et des tampons.
Photo avec l aimable autorisation de Consort

Dans les laboratoires spcialiss, on utilise des appareils
de diagnostic quips de micro-lectrodes pour mesurer
le pH des constituants liquides du sang. La mesure du pH
3
plasmatique permet dvaluer ltat de sant du patient. Sa
valeur est normalement comprise entre 7,35 et 7,45. Elle reflte
1 Bras porte-lectrode et lectrode
le mtabolisme, qui comporte une multitude de ractions 2. Panneau de contrle avec touches de rglage de la temprature, de
dans lesquelles acides et bases se trouvent normalement slection du mode de fonctionnement (veille/mV/pH) et dtalonnage
lquilibre. Les acides librent en permanence des ions 3. Ecran achage numrique
hydrogne (H+) et lorganisme neutralise ou quilibre cette
acidit en librant des ions bicarbonate (HCO3-). Lquilibre
acido-basique est assur par les reins (organes dans lesquels
toute substance prsente en excs est limine). Le pH PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT
plasmatique est lun des paramtres qui se modifient sous Le pH-mtre mesure la concentration dions hydrogne (H+)
leffet de facteurs tels que lge ou ltat de sant du patient. au moyen dune lectrode sensible aux ions. En thorie, cette
Le tableau 1 prsente les valeurs caractristiques du pH de lectrode devrait rpondre uniquement en prsence dun
certains liquides biologiques. certain type dion. Mais dans la pratique, il existe toujours des
interactions ou des interfrences avec les autres types dions
Valeur du pH de certains liquides biologiques prsents dans la solution. Llectrode de mesure du pH (lectrode
Fluid pH Value
Value pH) est en gnral une lectrode combine, dans laquelle une
lectrode de rfrence et une lectrode interne en verre sont
Bile 7,8 8,6
intgres dans une mme sonde. La partie infrieure de la
Salive 6,4 6,8 sonde se compose dune ampoule de verre mince contenant la
Urine 5,5 7,0 pointe de llectrode interne. Le corps de la sonde contient une
Suc gastrique 1,5 1,8 solution sature de chlorure de potassium (KCl) et une solution
0,1 M dacide chlorhydrique (HCl). Lextrmit correspondant
Sang 7,35 7,45
13
CHAPITRE 3 PH-MTRE
la cathode de llectrode de rfrence se trouve dans le corps LMENTS DU pH-MTRE

de la sonde. Lanode se trouve lextrieur de la partie infrieure Un pH-mtre se compose en gnral des lments suivants.
du tube interne. Llectrode de rfrence est en gnral ralise 1. Llment principal (corps) de lappareil contenant
dans le mme type de matriau que llectrode interne. Les les circuits, les commandes, les raccords, les crans
deux tubes, interne et externe, contiennent une solution de KHMJOHNLL[SLZtJOLSSLZKLSLJ[\YLJHKYHUZParmi
rfrence. Seul le tube externe est en contact avec la solution les lments les plus importants figurent :
dont on mesure le pH par une membrane poreuse agissant a) Interrupteur marche/arrt (ON/OFF). Tous les
comme pont salin. pH-mtres ne sont pas quips dun interrupteur
marche/arrt. Certains ont simplement un cordon
Ce dispositif se comporte comme une cellule galvanise. avec une fiche qui permet de les brancher sur une
Llectrode de rfrence est le tube interne de la sonde du prise de courant approprie.
pH-mtre, qui ne peut pas perdre dions par interaction avec le b) Commande de rglage de la temprature. Cette
milieu environnant. Elle reste donc stable (et invariable) pendant commande permet deffectuer un rglage selon la
la mesure. Le tube externe de la sonde contient le milieu qui peut temprature de la solution dont on mesure le pH.
se mlanger au liquide environnant. Ce tube doit par consquent c) Commandes dtalonnage. Selon le modle, le
tre rempli intervalles rguliers avec une solution de chlorure pH-mtre possde un ou deux boutons ou touches
de potassium (KCl) afin de restaurer la capacit de llectrode qui dtalonnage, normalement identifis par Cal 1 et Cal
sans cela serait inhibe par la perte dions et lvaporation. 2. Si le pH-mtre est talonn avec une seule solution,
on utilise le bouton Cal 1, le bouton Cal 2 tant rgl
Lampoule de verre la partie infrieure de llectrode du sur 100 %. Si lappareil permet un talonnage en
pH-mtre agit comme lment de mesure et est recouverte deux points, on utilise deux solutions de pH connu
dun gel hydrat sur ses deux faces, interne et externe. Des couvrant lintervalle des valeurs mesurer. Dans ce
cations sodium (Na+) sont diffuss dans la couche externe de cas, on utilise les deux boutons (Cal 1 et Cal 2). Dans
gel hydrat et dans la solution, tandis que les ions hydrogne certains cas spciaux, il faut procder un talonnage
(H+) sont diffuss dans le gel. Ce dernier assure la slectivit en trois points (avec trois solutions de pH connu).
ionique de llectrode de mesure : les ions hydrogne (H+) ne d) Slecteur de mode de fonctionnement. Cette
peuvent pas traverser la membrane en verre de llectrode ; les commande donne en gnral accs aux fonctions
ions sodium (Na+) la traversent et provoquent une modification suivantes :
du niveau dnergie (diffrence de potentiel), que mesure le I. Mode veille (Stand-by) (0). Dans cette position,
pH-mtre. On trouvera une explication succincte de la thorie les lectrodes sont protges contre les courants
du fonctionnement des lectrodes dans lappendice situ en lectriques. On utilise cette position lorsque
fin de chapitre. lappareil est rang.
II. Mode pH. Dans cette position, lappareil
peut effectuer des mesures de pH lorsque
les procdures dtalonnage requises ont t
effectues.
Figure 4. Schma dun pH-mtre
Voltmtre
haute impdance
Electrode Ag/AgCl
Rgulateur
de temprature
Ple de llectrode de mesure
Ple de llectrode
de rfrence
KCI KCI
Verre spcial permable aux ions
Pont salin
(membrane poreuse) Solution analyser
14
III. Mode millivolt (mV). Dans cette position, lectrode de rfrence (lectrode au calomel) et dune
lappareil peut afficher les lectures en millivolts. lectrode interne, intgres dans un mme corps (ou
IV. Mode ATC (compensation automatique de sonde). Il en existe divers modles selon le fabricant.
la temprature). Ce mode est utilis lorsquon
mesure le pH de solutions dont la temprature CIRCUIT LECTRIQUE TYPE
varie. Cette fonction ncessite lemploi dune La figure 6 prsente un circuit lectrique type adapt au
sonde spciale. Tous les pH-mtres nen sont pas systme de commande du pH-mtre. Chaque fabricant possde
quips. ses propres circuits et variantes.
2. Une lectrode combine. Ce dispositif doit tre maintenu
dans de leau distille et rester connect lappareil de
mesure. Une lectrode combine se compose dune
Figure 5. Types dlectrodes
Electrode combine Electrode de rfrence (au calomel)
Fil de platine (Pt)
Fil dargent (Ag) Mercure (Hg)
Electrode de rfrence Chlorure mercureux (HgCl ou calomel)
Membrane semi-permable
Chlorure de potassium (KCl)

Solution tampon
Membrane poreuse
Figure 6. Circuit lectrique type pour le pH-mtre
1N 4002
7812
110 VAC 3,300 0.1
fd fd 560K 9,09 K
10K
Transformateur Rsistance
variable
110 V / 12 V DC pH mV 1,00 K
0.1 30K
fd
7
3,300 2
fd 6
12V 3
TL081 1
7912 Lampe 5 Sortie
4
10K
Zro
Entre 10K mV
Rfrence pH
15
CHAPITRE 3 PH-MTRE
Description des lments du circuit lectrique type

Systme Elment Description
Alimentation et redressement Transformateur 110V/12V AC* Dispositif qui transforme le courant 110 V du secteur
en courant alternatif 12 V.
Diode de redressement (1N4002) Diode qui sert obtenir une onde de sens positif.
Condensateurs lectrolytiques 3300 microfarads (fd) (2) Condensateurs qui lissent la tension la sortie des
diodes.
Rgulateurs de tension (7812, 7912) Dispositifs qui rgulent la tension aprs linteraction
entre les diodes et les condensateurs.
Condensateurs lectrolytiques 0,1 microfarad (fd) (2) Dispositifs utiliss pour assurer la stabilit haute
frquence.
Lampe tmoin 12 V DC Lampe indiquant que lappareil est en marche (ON).
Mesure en pH et en mV Amplificateur oprationnel (TL081) Circuits mV
(R1) rsistance 9,09 K (ohm)
(R2) rsistance 1 K (ohm)
(R3) rsistance 560 K (ohm) Circuits pH.
(R4) rsistance variable 10 K (ohm).
(R5) rsistance 30 K (ohm) Rsistance de mise la terre.
Le gain du circuit est rgi par lquation :
Gain = 1+ (R3+PxR4)/R5+ (1P) xR4.
Sortie Voltmtre DC bon march Effectue les lectures en millivolts. La tension lue est
10 fois celle donne par la cellule, ce qui permet une
rsolution de 0,1 millivolt.
La lecture se fait au moyen dlectrodes carbone/
quinhydrone.
* Des spcifications de voltage diffrentes peuvent sappliquer dans certaines parties du monde. AC = courant alternatif ; DC = courant continu.
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION Description de la procdure dtalonnage

Le pH-mtre travaille sous une alimentation lectrique Frquence : une fois par jour
prsentant les caractristiques suivantes. 1. Etalonner le pH-mtre avec une solution de pH connu
(talonnage en un point).
Courant monophas 110 V ou 220-230 V, frquence 50-60 Hz, 1.1 Brancher lappareil sur une prise de courant de
selon la rgion gographique. voltage appropri.
1.2 Rgler le slecteur de temprature sur la temprature
Il existe aussi des pH-mtres portables aliments par piles. ambiante.
1.3 Rgler lchelle de lecture.
1.4 Sortir les lectrodes de leur tui de rangement.
PROCDURE GNRALE DTALONNAGE Les lectrodes doivent toujours tre stockes dans
Les pH-mtres doivent tre talonns avant emploi pour une solution approprie. Certaines peuvent tre
garantir la qualit et la justesse des mesures. La procdure est maintenues dans de leau distille et dautres doivent
la suivante : tre maintenues dans une solution spcifie par le
1. Etalonnage en un point. Ce type dtalonnage est ralis fabricant.1 Si pour une raison quelconque llectrode
pour des conditions de travail normales et un usage normal. a sch, il est ncessaire de limmerger pendant au
Il utilise une solution de rfrence de pH connu. moins 24 heures avant emploi.
2. Etalonnage en deux points. Cet talonnage est ralis 1.5 Rincer llectrode leau distille dans un bcher
avant deffectuer des mesures trs prcises. Il utilise deux vide.
solutions de rfrence de pH connu. Il est galement 1.6 Essuyer lextrieur de llectrode avec un matriau
ralis si linstrument nest utilis que de temps autre et absorbant en faisant attention de ne pas le faire
si son entretien est peu frquent. pntrer dans la sonde. Pour viter une ventuelle
contamination, il faut rincer les lectrodes chaque
fois quon change de solution.
1 Vrifier le type de solution tampon recommand par le fabricant de
llectrode.
16
2. Plonger les lectrodes dans la solution 5. Eteindre le pH-mtre.

dtalonnage. 5.1 Sortir llectrode de la dernire solution analyse.
2.1 Immerger llectrode dans la solution dtalonnage 5.2 Rincer llectrode leau distille et la scher avec un
en veillant ce que son extrmit infrieure ne chiffon ou un papier dessuyage en faisant attention
touche pas le fond du bcher. On limite ainsi le de ne pas le faire pntrer dans la sonde.
risque de casser llectrode. Si le test exige que la 5.3 Placer llectrode dans son rcipient de stockage.
solution soit maintenue en agitation laide dun 5.4 Vrifier que le slecteur de fonctions est en position
agitateur magntique, il faut faire attention que Stand-by.
le barreau de lagitateur ne touche pas llectrode, 5.5 Eteindre le pH-mtre (interrupteur sur OFF) ou
ce qui pourrait la casser. On utilise une solution dbrancher le cble dalimentation si lappareil ne
tampon comme solution dtalonnage car son pH possde pas dinterrupteur marche/arrt.
est connu et restera stable mme en prsence dune 5.6 Nettoyer le plan de travail.
contamination lgre. En gnral, une solution de pH
7 est utilise1.
3. Mettre le slecteur sur la position pH. ENTRETIEN GNRAL DU PH-MTRE
3.1 Lorsquon fait passer le slecteur de la position veille Lentretien des pH-mtres comporte deux procdures, lune
(Stand-by) la position pH, on connecte llectrode pour llment principal et lautre pour la sonde de dtection
lchelle de lecture du pH de lappareil. contenant les lectrodes.
3.2 A laide du bouton Cal 1, rgler lchelle de lecture
de faon lire le pH de la solution dtalonnage. Cela Procdure gnrale dentretien pour llment
permet lappareil de lire exactement le pH de la principal du pH-mtre
solution dtalonnage. Frquence : tous les six mois
Exemple : pour une solution dont le pH 1. Examiner lextrieur de lappareil et valuer son tat gnral.
est gal 7, laiguille peut osciller lgrement par Vrifier la propret des botiers et leur ajustement.
units de 0,1 pH ; en moyenne, la lecture doit tre 2. Contrler le cble dalimentation et ses fiches. Vrifier quils
de 7. La lecture du pH sur lchelle de lecture doit se sont propres et en bon tat.
faire perpendiculairement pour viter ou liminer 3. Examiner les commandes de lappareil. Vrifier quelles sont
les erreurs de parallaxe (erreurs dues lombre de en bon tat et sactionnent sans difficult.
laiguille de lappareil, visible sur le miroir de lchelle 4. Vrifier que le dispositif de lecture de lappareil est en
de lecture). Le pH-mtre est alors talonn, cest-- bon tat. Pour cela, il faut dbrancher lappareil. Rgler
dire prt effectuer des lectures correctes du pH. laiguille de lindicateur sur zro (0) au moyen de la vis de
3.3 Remettre le slecteur de fonctions en position Stand- rglage qui se trouve en gnral sous laxe de laiguille. Si
by. lappareil possde un cran daffichage, vrifier que celui-ci
4. Mesurer le pH dune solution. fonctionne normalement.
4.1 Sortir llectrode de la solution dtalonnage. 5. Vrifier que le tmoin de marche (ON) (ampoule ou diode)
4.2 Rincer llectrode leau distille et la scher. fonctionne normalement.
4.3 Plonger llectrode dans la solution de pH inconnu. 6. Vrifier ltat du bras porte-lectrode. Vrifier la fixation et
4.4 Faire passer le slecteur de fonctions de la position le mcanisme dassemblage de llectrode pour viter que
Stand-by la position pH. celle-ci ne bouge. Vrifier que le dispositif de rglage en
4.5 Lire le pH de la solution sur lchelle de lecture hauteur fonctionne correctement.
(cadran) ou lcran du pH-mtre. Inscrire la valeur 7. Contrler ltat des piles (pour les appareils qui fonctionnent
lue sur la feuille de contrle. sur piles) ; les remplacer si ncessaire.
4.6 Remettre le slecteur de fonctions en position Stand- 8. Tester le fonctionnement de lappareil en mesurant le pH
by. dune solution connue.
Sil est ncessaire de mesurer le pH de plus dune 9. Contrler la connexion la terre et tester le courant de
solution, rpter la procdure en rinant la sonde fuite
leau distille et en la schant avec un papier propre
et non pelucheux entre les lectures. Lorsquon doit
mesurer le pH de nombreuses solutions, le pH-mtre
doit tre frquemment rtalonn en suivant les
tapes dcrites plus haut.
1 Vrifier le type de solution dtalonnage recommand par le fabricant de

llectrode.
17
CHAPITRE 3 PH-MTRE
ENTRETIEN COURANT DE LLECTRODE 2. Elimination des dpts et des bactries. Faire tremper
Frquence : tous les quatre mois llectrode pH dans une solution dilue deau de Javel (par
Llectrode de mesure du pH (lectrode pH) ncessite un exemple 1 %) pendant 10 minutes. Rincer abondamment
remplacement priodique de la solution conductrice afin avec de leau.
dobtenir une lecture prcise. 3. Elimination des traces dhuile et de graisse. Rincer
Les tapes suivantes sont recommandes pour le remplacement llectrode pH avec un dtergent doux ou de lalcool
de la solution dlectrolyte : mthylique. Rincer avec de leau.
1. Sortir llectrode pH de la solution tampon de stockage. 4. Elimination des dpts de protines. Faire tremper
2. Rincer abondamment llectrode leau distille. llectrode pH dans une solution de pepsine 1 % et de
3. Enlever le capuchon de llectrode. HCl 0,1 M pendant 5 minutes. Rincer avec de leau.
4. Remplir le conduit entourant llectrode interne avec une
solution sature de chlorure de potassium (KCl). Utiliser Aprs chaque opration de nettoyage, rincer avec de leau
une seringue ou le compte-gouttes fourni avec la solution dsionise et remplir llectrode de rfrence avant emploi.
de KCl. Vrifier que la pointe de la seringue ne touche pas
lintrieur de llectrode. Autres prcautions
5. Remettre le capuchon de llectrode. Rincer llectrode 1. Ne pas faire subir de chocs llectrode. Comme elle est en
leau distille. gnral ralise en verre et est trs fragile, il est ncessaire
6. Lorsque llectrode nest pas utilise, la conserver dans la de la manipuler avec beaucoup de prcaution, en vitant
solution tampon de stockage. les chocs.
2. Ne pas oublier que llectrode a une dure de vie limite.
Nettoyage de llectrode 3. Lorsquelle nest pas utilise, conserver llectrode dans la
Le type de nettoyage ncessit par llectrode dpend de la solution tampon de stockage.
nature de la contamination laquelle elle est soumise. Les
procdures les plus courantes sont rsumes ci-dessous :
1. Nettoyage gnral. Faire tremper llectrode pH dans
une solution 0,1 M de HCl ou une solution 0,1 M de HNO3
pendant 20 minutes. Rincer avec de leau.
GUIDE DE DPANNAGE
Le pH-mtre donne des valeurs instables. Il y a des bulles dair dans llectrode. Faire tremper llectrode pour liminer les bulles.
Llectrode est sale. Nettoyer llectrode et la rtalonner.
Llectrode nest pas immerge. Vrifier que lchantillon recouvre entirement la
pointe de llectrode.
Llectrode est casse. Remplacer llectrode.
La rponse de llectrode est lente. Llectrode est sale ou grasse. Nettoyer llectrode et la rtalonner.
Lcran affiche un message derreur. Slection incorrecte du mode de fonctionnement. Vrifier le mode de fonctionnement slectionn.
Slectionner une opration valide.
Lcran affiche un message dtalonnage ou derreur. Il y a une erreur dtalonnage. Rtalonner le pH-mtre.
Ltalonnage de la valeur tampon est erron. Vrifier les valeurs tampons utilises.
Llectrode est sale. Nettoyer et talonner llectrode.
Le pH-mtre est allum (sur ON) mais il ny a pas de Les piles sont mal installes. Vrifier la polarit des piles.
signal sur lcran.* Les piles sont uses. Remplacer les piles.
Le tmoin de niveau de charge des piles clignote.* Les piles sont uses. Remplacer les piles.
* Uniquement pour les appareils fonctionnant sur piles.
18
DFINITIONS
Dissociation. Phnomne conduisant la rupture dune molcule. Cette rupture entrane la libration de particules portant une charge lectrique (ions).
Electrode au calomel. Electrode de rfrence utilise avec llectrode de mesure pour dterminer le pH dune solution. Elle comprend une base de mercure (Hg), un
revtement de chlorure mercureux (Hg2Cl2) et une solution 0,1 M de chlorure de potassium (KCl). Elle est reprsente par la formule Cl2(Hg2Cl2, KCl)Hg.
Electrode sensible aux ions. Dispositif qui produit une diffrence de potentiel proportionnelle la concentration de la substance analyser.
Electrolyte. Solut donnant une solution conductrice, par exemple NaCl (chlorure de sodium) et NH4OH.
Gel. Substance semi-solide compose dun collode (solide) dispers dans un milieu liquide.
Ion. Atome qui a gagn ou perdu un lectron. Lorsque latome perd un lectron, il devient un ion charg positivement, appel cation. Si latome gagne ou capture un lectron,
il devient un ion charg ngativement, ou anion.
Molarit. Nombre de moles (M) dune substance dans un litre de solution. (Nombre de moles de solut dans un litre (l) de solution). Un symbole ionique mis entre crochets
signifie quil sagit dune concentration molaire.
Mol. (abbreviation for molecule). A quantity of any substance whose mass expressed in grams is numerically equal to its atomic mass.
Mole (abrviation de molcule). Quantit de toute substance dont la masse exprime en grammes est numriquement gale sa masse atomique.
Mole (unit). Quantit dune substance qui contient autant datomes, de molcules, dions ou dautres entits lmentaires quil y a datomes dans 0,012 kilogramme de
carbone 12. Ce nombre est le nombre dAvogadro, gal 6,0225 1023. Correspond lancienne appellation molcule-gramme. Symbole : mol. La masse en grammes de
cette quantit de substance, numriquement gale la masse molculaire de la substance, est appele masse molaire..
pH. Mesure de la concentration dions hydrogne H+ en moles par litre (M) dans une solution. La notion de pH a t propose par Srensen et Lindstrm-Lang en 1909 pour
faciliter lexpression des trs faibles concentrations ioniques. Le pH est dfini par la formule :
pH = log [H+] or [H+] = 10-pH
Il mesure lacidit dune solution. Exemple : dans leau, la concentration de lion H+ est de 1,0 x 10-7 M, ce qui donne un pH de 7. Cela permet dexprimer la gamme de
concentrations allant de 1 10-14 M par des valeurs du pH allant de zro (0) 14. Il existe divers systmes de mesure de lacidit dune solution. Une substance acide dissoute
dans leau est capable de produire des ions H+. Une substance basique dissoute dans leau est capable de produire des ions hydroxyle OH.
Une substance acide contient une plus grande quantit dions H+ que leau pure ; une substance basique contient une plus grande quantit dions OH que leau pure. Les
concentrations de substances sont exprimes en moles par litre (M).
Dans leau pure, les concentrations ioniques [H+] et [OH] sont gales 1,0 107 M. Leau pure est donc considre comme une substance neutre. En ralit, cest un
lectrolyte faible qui se dissocie selon la formule suivante :
H2O ' [H+][OH]
Dans toute solution aqueuse il existe un quilibre exprim par la relation :

[H+][OH]
=K
H2O
Si la solution est dilue, la concentration de leau non dissocie peut tre considre comme constante :tant:
[H+][OH] = [H2O]K = Ka
La nouvelle constante Ka est appele constante de dissociation ou produit ionique de leau et est gale 1,0 1014 25 C.
[H+][OH] = 1,0 1014
X X = 1,0 1014
X2 = 1,0 1014
X = 1,0 107
Dans leau pure, la concentration de H+ et la concentration de OH sont de 1,0 107 M, ce qui est une concentration trs faible tant donn que la concentration molaire
de leau est de 55,4 mol/litre.
Solution. Mlange liquide homogne (de proprits uniformes) de deux ou plusieurs substances. Ce mlange est caractris par labsence de ractions chimiques entre
ses constituants. Le constituant prsent dans la proportion la plus grande, gnralement ltat liquide, est appel solvant et celui ou ceux qui sont prsents en plus petites
quantits sont appels soluts.
Tampon. Solution contenant soit un acide faible et son sel, soit une base faible et son sel, ce qui la rend rsistante aux variations du pH une temprature donne.
19
CHAPITRE 3 PH-MTRE
Annexe
;OtVYPLK\W/
Les lectrodes pH se conduisent en thorie comme une cellule lectrochimique et ragissent la concentration dions H+. Une force
lectromotrice (FEM) est produite, que lon peut calculer daprs lquation de Nernst :
RT
E Eo
ln a H
nF
sachant que:
pH <ln a H
a tant la concentration ionique effective (activit)
Si n = 1, lquation devient :
R'T
E Eo< pH
F
E est une constante qui dpend de la temprature. Si on remplace E par ET, ltalonnage sera plus sensible. Dans la ralit,
les lectrodes ne se comportent pas toujours selon lquation de Nernst. Si on introduit la notion de sensibilit (s), lquation |
devient :
R'T
E E 'T < s pH
F
Les valeurs de E et de s sobtiennent par la mesure de la FEM dans deux solutions de pH connu ; s est la pente de E en fonction du
pH, et E se trouve lintersection avec laxe des ordonnes (y). Quand E et s sont connus, on peut reprendre lquation et calculer
le pH comme suit :
E 'T < E
pH
R'T
s
T
20
Chapitre 4
Balances
Code GMDN 10263 45513 46548
Code ECRI 10-261 10-263 18-449 18-451
Dnomination Balances Balances Balances Micro-balances
lectroniques lectroniques lectroniques pour
danalyse micro-analyse
La balance est un instrument qui mesure la masse dun corps est gale au produit de la masse par la valeur locale de
ou dune substance en utilisant la force dattraction qui sexerce lacclration de la pesanteur [F = m g]. Il faut insister sur la
sur ce corps ou cette substance. Le terme balance vient des notion de valeur locale car la pesanteur dpend de facteurs tels
mots latins bis, qui signifie deux, et lanx,
x qui signifie plateau. que la latitude et laltitude du lieu o la mesure est effectue
Il existe de trs nombreux types de balances et autant de ainsi que la densit du globe terrestre cet endroit. Cette force
dnominations. Il faut noter que le poids est la force quexerce est mesure en Newtons.
lattraction terrestre sur la masse dun corps ; cette force
PHOTOGRAPHIES DE BALANCES
Balance mcanique Balance lectronique

Photo avec laimable autorisation de Ohaus Corporation
Photo avec l aimable autorisation de Acculab Corporation
21
C H A P I T R E 4 B A L A N C ES
A QUOI SERT UNE BALANCE Figure 7. Balance ressort
dune substance, ou son poids. Au laboratoire, la balance sert

effectuer des peses dans le cadre des activits de contrle
de la qualit (sur des dispositifs tels que des pipettes), dans la
prparation de mlanges en proportions prdfinies et pour
Ressort avec charge
dterminer des densits ou des masses volumiques.
Ressort sans charge
PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT
F=-kx
La conception de linstrument, les principes et les critres X
mtrologiques diffrent selon le type de balance. Actuellement,
Dplacement
les balances se divisent en deux grands groupes : les balances
mcaniques et les balances lectroniques. Echelle de mesure
m
F = F1
Balances mcaniques -kx = mg Masse
Les modles les plus courants sont :
1. Balance ressort. Son fonctionnement repose sur une F=mg
proprit mcanique des ressorts, selon laquelle la force
exerce sur un ressort est proportionnelle la constante
dlasticit du ressort (k) multiplie par son longation (x) [F
= kx]. Plus la masse (m) pose sur le plateau de la balance
est grande, plus le ressort sallonge, puisque llongation Figure 8. Balance curseur
est proportionnelle la masse et la constante du ressort.
Ltalonnage dune balance ressort dpend de la pesanteur
qui sexerce sur lobjet peser. On utilise ce type de balance
lorsquon na pas besoin dune grande prcision.
2. Balance curseur. Ce type de balance (balance de type
pse-bb ou balance de mnage) est quip de deux poids
connus (curseurs) qui peuvent tre dplacs le long de deux
chelles, une macro-chelle et une micro-chelle. Lorsquon
place une substance de masse inconnue sur le plateau, on Plateau
Macro-chelle
dtermine son poids en dplaant les curseurs le long des Curseur de micro-chelle
chelles jusqu ce que lquilibre soit atteint. On obtient alors Curseur de macro-chelle
le poids en additionnant les deux quantits indiques par la
Micro-chelle
position des curseurs.
3. Balance danalyse. Cette balance fonctionne par
comparaison de masses de poids connu avec la masse
dune substance de poids inconnu. Son lment de base
est constitu par un flau bras symtriques reposant sur
une arte centrale appele couteau. Aux extrmits des Figure 9. Balance danalyse
bras du flau se trouvent des triers reposant eux aussi
sur des couteaux, ce qui leur permet dosciller librement,
et auxquels sont suspendus deux plateaux. Des masses Bras ou au
certifies sont dposes sur lun des plateaux et le corps Couteau central
de masse inconnue sur lautre. La balance possde un
Etriers
systme de blocage qui permet dimmobiliser le flau
lorsque la balance nest pas utilise ou lorsquil faut modifier Colonne centrale
les contrepoids. La balance se trouve lintrieur dune Chambre
bote (ou chambre) qui la protge des interfrences
telles que celles provoques par les courants dair.
Les balances danalyse peuvent mesurer des poids dun
dix-millime de gramme (0,0001 g) ou dun cent-millime Plateau
de gramme (0,00001 g). Ce type de balance a en gnral une Echelle de lecture
capacit maximale (ou porte) de 200 grammes.
Levier de blocage
22
Il est ncessaire de disposer dune srie de masses certifies. Figure 10. Balance plateau suprieur
La srie se compose gnralement comme suit :
Masse
G
Type de masse Masse nominale Plateau
Masses unitaires 1, 2, 5, 10, 20, and 50 g
100, 200 and 500 g Raccords
souples
Lamelles 2, 5, 10, 20 and 50 mg
100, 200 and 500 mg F
Colonne
4. Balance plateau suprieur (balance guides

parallles. Ce type de balance possde un plateau de
chargement situ sa partie suprieure, support par une
colonne maintenue en position verticale par deux paires
de guides avec raccords souples. Leffet de la force produite Figure 11. Balance substitution
par la masse se transmet partir dun point de la colonne
verticale la cellule de charge, directement ou au moyen
dun systme mcanique. Avec ce type de conception, Echelle de lecture
Rglage
le paralllisme des guides doit tre maintenu avec une de sensibilit
exactitude de 1 m. Les carts de paralllisme provoquent
une erreur connue sous le nom derreur de charge excentre
(lorsque la masse peser donne une lecture diffrente Masse connue Mcanisme
de rglage du zro
selon quelle est place au centre du plateau ou sur un de
ses bords). Le schma ci-dessous explique ce principe de Couteau
fonctionnement, que certains fabricants ont introduit dans
les balances lectroniques.
5. )HSHUJLnZ\IZ[P[\[PVUIHSHUJLntH\HZ`Tt[YPX\L
ou bras ingaux). Cette balance ne possde quun seul
Masse
plateau. Une masse inconnue est dpose sur le plateau inconnue
de pese. La pese se fait en enlevant des masses connues
du contrepoids laide dun systme mcanique de cames
jusqu ce que lquilibre soit atteint. Le couteau est en
gnral dcentr par rapport au flau et est situ vers
lavant de la balance. Lorsquon dpose une masse sur le
plateau de pese et quon libre le mcanisme de blocage, 3. Vrifier et rgler la sensibilit. Il faut toujours le faire
le mouvement du flau est projet par lintermdiaire chaque fois quun rglage interne est effectu. Appliquer
dun systme optique sur un cran situ lavant de la procdure standard comme suit :
linstrument. a. Bloquer la balance.
b. Placer un poids standard (quivalent ltendue de
=tYPJH[PVUK\MVUJ[PVUULTLU[ lchelle de lecture optique) sur le plateau.
La procdure utilise pour vrifier le fonctionnement dune c. Positionner le rglage micromtrique sur 1 (un).
balance mcanique est dcrite ci-dessous. La procdure dcrite d. Dbloquer la balance.
est celle qui sapplique la balance substitution. e. Rgler sur zro.
1. Vrifier que la balance est de niveau. Lhorizontalit est f. Positionner le rglage micromtrique sur 0 (zro).
ralise au moyen dune vis de calage situe sur le socle La balance doit indiquer 100. Si lchelle indique
de la balance ou au moyen dun niveau bulle et dun plus ou moins que 100, il faut rgler la sensibilit.
bouton de rglage sur une chelle dispose sur le devant Pour cela, il faut bloquer la balance, ouvrir le capot
du socle. suprieur et tourner la vis de rglage de la sensibilit.
2. Tester le mcanisme de zro. Rgler la balance sur zro et la Si lchelle indique plus que 100, tourner la vis dans le
dbloquer. Si la valeur indique ne reste pas sur zro, faire sens des aiguilles dune montre (visser), et si lchelle
le rglage du zro au moyen de la vis situe en position indique moins que 100, tourner la vis dans le sens
horizontale prs du couteau. Pour cela, il faut bloquer contraire des aiguilles dune montre (dvisser).
la balance, tourner un peu la vis de rglage, dbloquer Rpter lopration jusqu ce que la balance soit
la balance, et continuer ainsi jusqu ce que le zro se rgle (zro et sensibilit).
positionne correctement sur lchelle de lecture.
23
4. Vrifier la bute du plateau. Elle est monte sur une tige Lors de toute modification de la charge (poids/masse), le
filete qui vient au contact du plateau afin de lempcher systme mcanique mobile rpond par un dplacement
dosciller lorsque la balance est bloque. En cas de vertical sur une certaine distance. Ce dplacement est dtect
dsquilibre, il faut tourner lgrement cet axe jusqu ce par une cellule photolectrique (e) qui envoie un signal
que la distance entre la bute et le plateau soit gale zro lectrique au servo-amplificateur (f ). Ce signal modifie le flux
lorsque la balance est bloque. de courant lectrique traversant la bobine de llectroaimant
(c) de telle faon que le systme mobile revient sa position
Entretien de la balance mcanique dquilibre sous leffet de lajustement du champ magntique
Lentretien des balances mcaniques se limite aux oprations dans llectroaimant. Par consquent, le poids de la masse
suivantes : (G) peut tre mesur indirectement au dbut du passage du
Frquence
q : une fois par
p jour
j courant lectrique, qui traverse le circuit mesurant la tension
1. Vrifier le niveau. (V) au moyen dune rsistance de prcision (R), soit [V = I R].
2. Vrifier le zro. Actuellement, de nombreux systmes de pese utilisent un
3. Vrifier le rglage de sensibilit. systme lectronique pour effectuer des mesures trs exactes
4. Nettoyer le plateau de pese. de la masse et du poids. Le schma ci-dessous explique le
fonctionnement des balances lectroniques.
Frquence
q : une fois par
p an
1. Etalonner la balance et enregistrer la procdure par crit.
Figure 12. Elments des balances lectroniques
2. Dmonter et nettoyer les composants internes. Suivre la
procdure indique par le fabricant ou sadresser une
entreprise spcialise.
P
Balances lectroniques
Les balances lectroniques possdent trois lments de base :
1. Un plateau de pese. Lobjet peser qui est dpos sur le
plateau exerce une pression rpartie de faon alatoire Mcanisme
sur toute la surface de ce plateau. Par un mcanisme de de transfert
transfert (leviers, supports, guides), la charge se trouve
concentre en une force unique F qui peut tre mesure
[F = P,a]. Lintgrale de la valeur de la pression sur laire
du plateau permet de calculer la force.
2. Un dispositif de mesure appel cellule de charge qui Cellule de charge
produit un signal de sortie correspondant la force de
la charge sous forme de variations de la tension ou de la
frquence.
Ecran et processeur
3. Un circuit lectronique analogique/digital qui donne le
de signal
rsultat final de la pese sous forme numrique.
Les balances de laboratoire fonctionnent sur le principe de la

compensation de la force lectromagntique applicable des
dplacements ou des torsions. La combinaison des lments
mcaniques et des systmes de lecture automatiques fournit Figure 13. Principe de la force de compensation
une mesure du poids avec un degr de justesse qui dpend
du modle.
G
Principe. Les parties mobiles (plateau de pese, colonne (a),
bobine, indicateur de position et charge (G) (lobjet peser))
sont maintenus en quilibre par une force de compensation b
(F) gale au poids de lobjet. La force de compensation est a
produite par le passage dun courant lectrique dans une
bobine situe dans lentrefer dun lectroaimant cylindrique.
La force F se calcule par la formule [F = I L B], dans laquelle
I = intensit lectrique, L = longueur totale du fil de la bobine e R V=I*R
et B = intensit du champ magntique dans lentrefer de
llectroaimant. I
c d
f
24
Systme de traitement du signal Figure 14. Classication des balances selon lexactitude
Le systme de traitement du signal se compose du circuit
qui transforme le signal lectrique mis par le transducteur
en donnes numriques pouvant tre lues sur un cran. Le
traitement du signal comprend les lments suivants :
1. Rglage de la tare. Ce rglage est utilis pour ajuster la
valeur de lecture zro avec toute charge se situant dans
la plage de mesure de la balance. Le rglage se fait au
moyen dun bouton gnralement situ sur la partie avant
de la balance. On utilise couramment cette fonction pour
le tarage du rcipient contenant lobjet peser.
2. Rglage du temps dintgration. Pendant une lecture,
les valeurs sont moyennes sur une priode prdfinie.
Cette fonction est trs utile lorsque les peses doivent tre
effectues dans des conditions instables, par exemple en
prsence de courants dair ou de vibrations. Ce rglage
dfinit le temps quon laisse un rsultat pour quil se situe
entre des valeurs limites fixes lavance et qui permettent
de le considrer comme stable. Cet intervalle de temps
peut tre modifi selon les applications recherches.
3. Arrondissage. En gnral, les balances lectroniques Le nombre de divisions de lchelle se calcule par la formule :
traitent les donnes avec une plus grande rsolution que Max
celle qui est affiche. La valeur affiche sur lcran est la n
valeur interne nette arrondie.
dd
4. Dtecteur de stabilit. Ce tmoin lumineux steint LOIML accepte les valeurs suivantes, par convention, pour les
lorsque le rsultat de la pese sest stabilis et est prt balances de laboratoire :
tre lu. Sur certains modles de balances, le rsultat ne 1. Ultramicroanalyse dd = 0.1 g
saffiche lcran que lorsque la mesure sest stabilise. 2. Microanalyse dd = 1 g
5. 7YVJLZZL\Y KL ZPNUHS tSLJ[YVUPX\L Il permet le 3. Semi-microanalyse dd = 0.01 mg
traitement et laffichage des rsultats de la pese. Il permet 4. Macroanalyse dd = 0.1 mg
aussi dautres fonctions comme la numration dobjets, le 5. Prcision dd 1 mg
calcul du poids en pourcentage, la pese dynamique de
poids instables (par exemple des animaux) et la pese de
mlanges, entre autres. Le microprocesseur effectue les
calculs selon les instructions saisies par loprateur sur le
clavier de la balance.
*SHZZPJH[PVUKLZIHSHUJLZ
LOrganisation internationale de mtrologie lgale (OIML)
classe les balances en quatre groupes :
t Groupe I : exactitude spciale
t Groupe II : haute exactitude
t Groupe III : exactitude moyenne
t Groupe IV : exactitude ordinaire
La figure 14 prsente cette classification sous forme

graphique.
Dans la classification mtrologique des balances lectroniques,

seuls deux paramtres ont une importance :
1. La charge maximale (Max)
2. La valeur de la division numrique (d)1
1 Kupper, W., Balances and Weighing, Mettler Instrument Corp., Princeton-

Hightstown, NJ.
25
Commandes des balances lectroniques Utilisation de la balance lectronique

La figure 15 montre les commandes couramment rencontres Le mode demploi dune balance lectronique moderne est
sur une balance lectronique moderne. Il faut souligner les expliqu en dtail dans le manuel dutilisation fourni par le
points suivants : fabricant. En gnral, il faut respecter la procdure suivante :
1. De nombreuses fonctions sont intgres dans lappareil. 1. Laisser la balance squilibrer avec lenvironnement dans
2. Diverses units de mesure peuvent tre slectionnes. lequel elle est installe.
3. Il est possible de connatre la date et lheure de la 2. Laisser la balance chauffer avant de commencer les peses.
mesure. Normalement, il suffit de la laisser raccorde au systme
4. Les procdures peuvent tre documentes et imprimes. dalimentation lectrique. Certains fabricants conseillent
5. Il est possible de choisir la langue. dattendre au moins 20 minutes aprs le raccordement de
la balance au secteur. Pour les balances danalyse de classe
1, il faut attendre au moins 2 heures avant de commencer
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION les peses.
Vrifier que la balance est talonne. Les balances
les conditions suivantes doivent tre remplies : lectroniques ont en gnral un talonnage dusine stock
1. Un environnement sans courants dair ni changements en mmoire, que lon peut utiliser si on ne dispose pas
brusques de temprature, et sans poussire. de masses dtalonnage. Si un talonnage est ncessaire,
2. Une table ou une paillasse parfaitement horizontale. utiliser des masses dtalonnage selon les instructions du
Une plate-forme possdant une grande inertie et isole fabricant. Les masses dtalonnage doivent au minimum
des structures avoisinantes est idale pour rduire leffet rpondre aux tolrances fixes par l American Society
des vibrations produites par certains appareils tels que for Testing and Materials (ASTM). Pour information, le
centrifugeuses et rfrigrateurs. Lemplacement doit tre tableau ci-dessous indique les tolrances acceptes pour
de taille suffisante pour recevoir la balance et tous les les masses ASTM de classe 11.
accessoires ncessaires pendant les peses. De mme, la
place ncessaire pour les cbles tels que raccords, cbles Poids (grammes) Limite suprieure (g) Limite infrieure (g)
dalimentation lectrique et connexions limprimante 100 100,0003 99,9998
doit tre prvue lavance.
200 200,0005 199,9995
3. Eviter dinstaller des appareils qui produisent des champs
magntiques intenses ou des vibrations comme les 300 300,0008 299,9993
centrifugeuses, moteurs lectriques, compresseurs et 500 500,0013 499,9988
gnrateurs proximit de lemplacement de la balance. 1 000 1000,0025 999,9975
4. Eviter de placer la balance proximit du systme de
2 000 2000,0050 1999,9950
climatisation (courants dair) ou dans un endroit expos
la lumire solaire directe. 3 000 3000,0075 2999,9925
5. Une prise de courant satisfaisant aux normes lectriques 5 000 5000,0125 4999,9875
en vigueur dans le pays ou le laboratoire. Elle doit tre en
bon tat, relie la terre et munie dun interrupteur.
3. Suivre les instructions figurant dans le manuel dutilisation
fourni par le fabricant.
Figure 15. Panneau de contrle dune balance danalyse Etalonnage des balances
Ltalonnage des balances doit tre
ralis par un personnel spcialement
form cette activit. Il faut souligner le
fait que ltalonnage doit tre bas sur
Marche/arrt (ON/OFF) les normes de lOIML ou dun organisme
quivalent, tel que l ASTM, qui ont tabli
Touche Menu Date Heure Slecteurs des mthodologies de classification des
Unit Etalonnage
poids standard. On trouvera ci-aprs la
Touche Impression Menu
classification des poids de rfrence
Touche Slection/ utilise par lOIML.
Mode Tare
Ecran
Niveau
1 Field Services Handbook for High Precision

Scales, IES Corporation, Portland, Oregon, 2004.
26
Tableau de classication des poids de rfrence selon lOIML1

Frquence de
Classe Description Tolrance Incertitude admise rtalonnage
E1 Poids en acier inoxydable sans marques ni cavit de 0,5 ppm sur 1 kg 1/3 de la tolrance 2 ans
rglage.
E2 Poids en acier inoxydable sans marques ni cavit de 1,5 ppm sur 1 kg 1/3 de la tolrance 2 ans
rglage.
F1 Poids en acier inoxydable avec bouton viss pour protger 5 ppm sur 1 kg 1/5 de la tolrance 1 an
la cavit de rglage.
F2 Poids plaqus bronze. 15 ppm sur 1 kg 1/5 de la tolrance 1 an
M1 Poids en bronze (ne rouillent pas, ne se corrodent pas) ou 50 ppm sur 1 kg 1/5 de la tolrance 1 an
poids en fonte avec finition peinture de haute qualit.
M2 Poids en bronze ou en fonte (poids commerciaux). 200 ppm sur 1 kg 1/5 de la tolrance 1 an
Tableau dutilisation des poids standard en fonction de la capacit de la balance

Rsolution
Capacit
100 g 10 g 1g 100 mg 10 mg 1 mg 0,1 mg TN
Jusqu 200 g M1 M1 F2 F1 F2
200 g 1 kg M1 M1 F2 F1/E2 E2 E2
1 30 kg M2 M2 M1 F2 E2 E2 E2
30 100 kg M2 M1 F2 F1 E2
Plus de 100 kg M2 M1/F2 F1 E2
Toute procdure dtalonnage doit tre ralise avec des poids 4. Toujours utiliser un rcipient propre, pralablement
standard. Les rsultats obtenus doivent tre analyss afin de tar, pour la pese (rcipient en verre ou papier pour
dterminer sils se situent dans les tolrances admises. Les pese si possible). Noter que le plastique peut se charger
poids standard doivent tre choisis en fonction de la capacit dlectricit statique et est dconseill pour peser des
de la balance. Le tableau ci-dessus complte le prcdent. Il substances en poudre ou en granuls.
aide dterminer quels sont les poids standard utiliser pour 5. Toute projection doit tre immdiatement nettoye
ltalonnage dune balance en fonction de sa capacit. pour viter une corrosion ou une contamination. Utiliser
de lthanol 70 % pour dsinfecter le plateau de la
balance.
ENTRETIEN DE ROUTINE
La balance est un instrument qui se caractrise par sa haute Trs important : Ne jamais lubrifier une balance sauf indication
prcision. Cest pourquoi loprateur nest charg que de expresse du fabricant. Toute substance interfrant avec
lentretien minimal, qui comprend les activits suivantes : le mcanisme de la balance retarde sa rponse ou fausse
dfinitivement les mesures.
A faire chaque jour
1. Nettoyer le plateau de pese pour enlever la poussire. Le Note : En gnral, le fabricant ou linstallateur effectue
nettoyage se fait avec un chiffon de tissu propre qui peut lentretien rgulier des balances (maintenance) selon des
tre humidifi avec de leau distille. Sil y a des taches, les procdures qui varient selon le type et le modle.
enlever avec un dtergent doux. On peut aussi utiliser un
pinceau poils souples pour enlever les particules ou la
poussire dposes sur le plateau de pese.
2. Nettoyer lintrieur et lextrieur de la chambre de la
balance. Vrifier labsence de poussire sur les vitres.
3. Vrifier que le mcanisme de rglage sur la porte avant de
la chambre de la balance fonctionne correctement.
1 Guidelines for calibration in laboratories, Drinking Water Inspectorate by

LGC (Teddington) Ltd., December 2000. 27
CHAPITRE 4 BALANCES
GUIDE DE DPANNAGE
Balance lectronique
La balance ne sallume pas. Le cble de raccordement est dbranch ou la fiche Vrifier le branchement. Remettre correctement le
est mal connecte la balance. cble de raccordement si ncessaire.
La prise de courant nest pas alimente. Vrifier lalimentation lectrique.
La lecture du poids est incorrecte. La balance na pas t mise zro avant la lecture. Mettre la balance sur zro ; refaire la mesure.
La balance est incorrectement talonne. Etalonner selon la procdure recommande par le
fabricant.
La balance nest pas horizontale. Mettre la balance de niveau.
La balance nindique pas les units de mesures Les units sont incorrectement slectionnes. Vrifier la procdure dfinie par le fabricant pour
souhaites sur lcran. slectionner lunit de mesure souhaite.
Lunit souhaite nest pas disponible ou nest pas Activer lunit de mesure selon la procdure dfinie
active. par le fabricant.
La configuration de la balance ne peut tre modifie Le menu est peut-tre verrouill. Vrifier si la touche de verrouillage du menu est
partir du menu. active. Si oui, la dsactiver.
La balance ne garde pas les slections ni les La touche End na pas t presse pour finaliser le Vrifier que les modifications et les slections sont
modifications effectues. processus. effectues conformment aux instructions du
fabricant. Refaire la slection ou la modification.
Le lecteur de la balance est instable. La surface de la table ou de la paillasse vibre. Eteindre la balance, attendre un moment et rallumer
la balance.
La porte avant de la balance est ouverte. Placer la balance sur une surface stable.
Fermer la porte avant pour effectuer la mesure.
Linterface RS232 ne fonctionne pas. Le cble de raccordement est mal connect. Vrifier que le cble est bien connect.
Lcran donne une lecture incomplte ou est bloqu. Le microprocesseur est bloqu. Eteindre la balance, attendre un moment et la
rallumer. Si le problme persiste, appeler le service
technique.
Lcran affiche un code derreur. Diverses causes. Vrifier les codes derreur dans le manuel
dutilisation de la balance.
ERREUR DE FONCTIONNEMENT CAUSE PROBABLE

Lectures non reproductibles (hystrsis). La cellule de mesure est sale.
Le montage de la cellule de mesure est dfectueux.
Lectures non linaires. Systme lectronique dfectueux.
Systme mcanique en mauvais tat.
Le rsultat affich narrte pas de monter ou de Systme lectronique dfectueux.
descendre.
Changement de temprature dans la pice.
Le rsultat affich narrte pas de monter et La cellule de mesure est sale.
descendre.
Systme lectronique dfectueux.
Problmes lis lenvironnement tels que courants
dair, lectricit statique ou vibrations.
Lcran est vide ou affiche des signes qui ne veulent Systme lectronique dfectueux.
rien dire.
Lcran indique une surcharge ou une valeur ngative La cellule de mesure a t endommage par une
en labsence de charge. surcharge.
La balance ne peut tre talonne. Pile dtalonnage dfectueuse.
Systme lectronique dfectueux.
28
DFINITIONS
ASTM. American Society of Testing and Materials.
Charge excentre. Aptitude de la balance lire rgulirement la valeur des masses, quelle que soit leur place sur le plateau de linstrument..
Ecart de linarit. Diffrence de lecture observe lorsque la balance est charge successivement avec des poids rgulirement croissants jusqu sa capacit maximale
puis, selon le mme processus, avec des poids rgulirement dcroissants. La diffrence entre les lectures obtenues et les valeurs arithmtiques correspondant aux poids
utiliss traduit une non-linarit.
Erreur de charge excentre. Dviation des rsultats lorsque lobjet peser est plac en diffrents endroits du plateau de pese, par exemple au centre du plateau ou sur
un de ses bords.
Erreur de sensibilit. Ecart constant sur toute ltendue de pese ou la capacit dune balance.
Etalonnage. Dtermination de la valeur correcte de la lecture donne par un instrument, par mesure ou comparaison par rapport un talon ou une norme. Les balances
sont talonnes au moyen de poids standard. On dit aussi calibration ou calibrage.
Exactitude. Somme de toutes les erreurs de la balance. Cest ce quon appelle marge derreur totale.
Hystrsis. Diffrence entre les rsultats lorsque la charge de la balance est augmente ou diminue.
Linarit. Dsigne laptitude dune balance effectuer des lectures justes du poids sur toute ltendue de pese. Lexpression graphique du poids par rapport son indication
sur une balance parfaitement linaire donnerait une ligne droite. Pour dterminer lerreur linaire dune balance, il faut utiliser des masses certifies. Cette procdure permet
de calculer les diffrences linaires en faisant une lecture avec les masses certifies avec ou sans charge pralable. La diffrence entre les lectures permet de calculer lcart
de linarit.
Masse. Proprit physique dun corps lie la quantit de matire, exprime en kilogrammes (kg) quil contient. En physique, il existe deux quantits auxquelles le nom de
masse est appliqu : la masse gravitationnelle, qui est une mesure de la faon dont le corps interagit avec le champ de gravitation (si sa masse est faible, le corps subit une
force de gravitation plus faible que si sa masse tait plus grande) et la masse inertielle, qui est une mesure quantitative ou numrique de linertie dun corps, cest--dire
de sa rsistance lacclration. Lunit qui exprime la masse est le kilogramme (kg).
Masses certifies. Masses conformes la tolrance dfinie par les organismes de certification. Les talons correspondant aux classes 1 4 de lASTM sont les plus largement
utiliss et doivent ltre (comme rfrence obligatoire) pour raliser les talonnages de routine.
OIML. Organisation internationale de mtrologie lgale.
Sensibilit. La plus petite masse dtecte par la balance ou la plus petite masse que la balance peut mesurer correctement.
Traabilit. Capacit relier les mesures donnes par un instrument une norme dfinie.
29
Chapitre 5
Bains-marie
Code GMDN 36754 16772
Code ECRI 15-108 16-772
Dnomination Bain-marie Bain-marie agitateur
Le bain-marie est un appareil utilis au laboratoire lors de t A immersion. Aussi appeles thermoplongeurs. Ces
lexcution de tests dagglutination et dinactivation, de tests rsistances sont installes lintrieur dun tube scell et
srologiques, biomdicaux et pharmaceutiques et mme places la partie infrieure de la cuve, en contact direct
pour des procdures dincubation en milieu industriel. Ils avec le milieu chauffer.
utilisent en gnral de leau, mais certains fonctionnent avec t Externes. Ces rsistances sont situes la partie infrieure
de lhuile. La gamme de tempratures de fonctionnement se de lappareil mais lextrieur de la cuve. Elles sont
situe en gnral entre la temprature ambiante et 60 C. On protges par un matriau isolant qui vite la dperdition
peut slectionner une temprature de 100 C en utilisant un de chaleur. Ce type de rsistance transmet la chaleur au
couvercle spcial. La capacit dune cuve de bain-marie va de fond de la cuve par conduction thermique.
2 30 litres.
SCHMA DUN BAIN-MARIE Figure 16. Bain-marie

Le schma ci-dessous montre les lments
constitutifs du bain-marie. On peut voir le
panneau de contrle lectronique, lcran Ecran
daffichage, le couvercle (facultatif ) et la cuve. Couvercle
Dautres lments peuvent tre installs, par Panneau
de contrle
exemple un thermomtre et un agitateur Cuve
permettant dobtenir une temprature uniforme
Touche
(non indiqus sur la figure). de slection Grille diusante
Interrupteur
PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT Robinet de vidange

Les bains-marie sont raliss en acier et
sont en gnral recouverts dune peinture
lectrostatique offrant une bonne adhrence
et une forte rsistance aux conditions
environnementales du laboratoire. Les bains-
marie ont un panneau de contrle extrieur sur
lequel se trouvent les commandes. Ils possdent Figure 17. Rsistances immersion et externes
galement une cuve en matriau inoxydable et
dont le fond est garni de rsistances lectriques.
Ces rsistances servent transmettre la chaleur
au milieu liquide (eau ou huile) jusqu ce quil
ait atteint la temprature slectionne au
moyen dun dispositif de contrle (thermostat
ou dispositif similaire). Les rsistances peuvent
Rsistance
tre de deux types : immersion Rsistance
externe
31
CHAPITRE 5 BAINS-MARIE
Certains types de bain-marie possdent une srie daccessoires FONCTIONNEMENT DU BAIN-MARIE

tels que systmes dagitation ou circulateurs produisant un
mouvement soigneusement contrl au sein du milieu de Installation
chauffage pour maintenir luniformit de la temprature. Le 1. Installer le bain-marie proximit dune prise de courant.
tableau ci-dessous dcrit les principaux types de bain-marie. Celle-ci doit tre relie la terre pour garantir la protection
et la scurit de loprateur et de lappareil. Les bains-marie
fonctionnent en gnral sous 120 V/60 Hz ou 230 V/60
Classe Gamme de temprature Hz. Leur installation et leur utilisation sont facilites par la
prsence dun vier proximit pour les remplir deau et
Basse De la temprature ambiante 60 C
C
temprature les vider.
De la temprature ambiante 100 C
C 2. Vrifier que lemplacement choisi est horizontal et
Haute De la temprature ambiante 275 C. Lorsque des suffisamment solide pour supporter le poids du bain-marie
temprature tempratures suprieures 100 C sont ncessaires, il lorsque celui-ci est rempli de liquide.
faut utiliser un liquide autre que de leau car leau bout
100 C dans les conditions normales. 3. Vrifier que lemplacement choisi laisse assez de place pour
dposer les chantillons et les accessoires ncessaires pour
Ce type de bain-marie utilise en gnral des huiles,
dont le point dbullition est beaucoup plus lev. lutilisation normale du bain-marie.
4. Eviter de placer le bain-marie dans les courants dair, par
Isol De la temprature ambiante 100 C
C avec accessoires
exemple devant un climatiseur ou une fentre, car cela
et/ou agitation (bains-marie eau).
pourrait interfrer avec son fonctionnement normal.
COMMANDES DU BAIN-MARIE Scurit

Les bains-marie ont en gnral des commandes trs 1. Eviter dutiliser le bain-marie dans un environnement o
simples. Certains fabricants utilisent des commandes avec se trouvent des matriaux inflammables et combustibles.
microprocesseurs, variables selon le type dappareil. La figure Lappareil possde des lments (rsistances produisant
ci-dessous montre le panneau de contrle dun bain-marie de hautes tempratures) qui pourraient provoquer un
standard. incendie ou une explosion accidentels.
2. Toujours raccorder lappareil une prise de courant relie
la terre, afin de protger lutilisateur et lappareil contre
Figure 18. Commandes du bain-marie les chocs lectriques. Le raccordement lectrique doit
satisfaire aux normes en vigueur dans le pays et dans le
5. Tmoin 1. Interrupteur laboratoire.
4. Ecran de marche (ON) marche/arrt (ON/OFF) 3. Utiliser exclusivement le bain-marie avec des liquides non
corrosifs et non inflammables.
4. Utiliser un quipement de protection personnelle lors
du travail avec un bain-marie. Lappareil possde des
rsistances qui peuvent provoquer des brlures si on les
touche par inadvertance, mme longtemps aprs que
lappareil a t teint.
5. Lors du travail avec des substances qui dgagent des
vapeurs, placer le bain-marie sous une hotte de chimie ou
dans un endroit bien ar.
2. Touche Menu 6. Ne pas oublier que les liquides mis incuber au bain-
6. Tmoins dchelle 3. Touches de rglage marie peuvent provoquer des brlures en cas de contact
de temprature (C/F) des paramtres accidentel avec les mains.
7. Bien noter que le bain-marie est destin tre utilis avec
du liquide dans la cuve. Si la cuve est vide, sa temprature
Le panneau de contrle comporte les lments suivants : peut devenir trs leve. Utiliser le plateau diffuseur pour
1. Linterrupteur marche/arrt (ON/OFF) dposer les rcipients incuber dans la cuve pleine du
2. Une touche Menu pour slectionner les paramtres bain-marie. Ce plateau est conu de faon uniformiser
de fonctionnement : temprature de fonctionnement, la temprature du liquide.
temprature dalarme, chelle de temprature (C/F) 8. Eviter dutiliser le bain-marie si lune ou lautre de ses
3. Deux touches pour le rglage des paramtres commandes ne fonctionne pas, par exemple les rglages
4. Un cran de temprature de fonctionnement ou de temprature
5. Une lampe tmoin de fonctionnement maximale.
6. Deux lampes tmoins pour identifier lchelle de
temprature (C/F).
32
Utilisation du bain-marie Nettoyage

Avant dutiliser le bain-marie, vrifier quil est propre et que les Frquence
q : une fois par
p mois
accessoires ncessaires sont installs. Le bain-marie sutilise 1. Eteindre et dbrancher lappareil. Attendre quil refroidisse
normalement comme suit : afin dviter le risque de brlures et daccidents.
1. Remplir le bain-marie avec du liquide afin de maintenir 2. Vider le liquide utilis pour le chauffage. Si cest de leau, elle
une temprature constante (eau ou huile). Vrifier quune peut tre vide dans lvier. Si cest de lhuile, la recueillir
fois que les rcipients chauffer sont en place, le niveau dans un rcipient de contenance adapte.
du liquide se situe entre 4 et 5 cm du haut de la cuve. 3. Enlever la grille de diffusion thermique qui se trouve au
2. Installer les instruments de contrle ncessaires, par fond de la cuve.
exemple thermomtre et circulateur. Utiliser les accessoires 4. Dmonter le circulateur et le nettoyer pour liminer les
prvus. Vrifier la position de lampoule du thermomtre dpts calcaires et les algues qui pourraient sy trouver.
ou de la sonde de temprature pour assurer une lecture 5. Nettoyer lintrieur de la cuve avec un dtergent doux.
correcte. Sil y a des traces de corrosion, utiliser des produits de
3. Si on utilise de leau comme liquide chauffant, vrifier nettoyage pour acier inoxydable. Frotter doucement avec
quelle est propre. Certains fabricants recommandent une ponge en matire synthtique ou quivalent. Eviter
dajouter des produits empchant le dveloppement de dutiliser des tampons en laine dacier pour enlever les
moisissures et dalgues. taches de rouille car ils pourraient laisser des particules
4. Placer linterrupteur principal (N 1) sur ON (les numros dacier susceptibles dacclrer la corrosion.
indiqus ici correspondent ceux qui figurent sur le schma 6. Eviter dincliner ou de heurter le capillaire du dispositif de
de la figure 18). Certains fabricants utilisent des commandes contrle de la temprature qui se trouve en gnral au
avec microprocesseurs qui lancent une procdure de fond de la cuve.
vrification automatique ds que linterrupteur est plac 7. Rincer lextrieur et lintrieur du bain-marie leau claire.
en position ON.
5. Slectionner la temprature de fonctionnement au moyen 3\IYPJH[PVU
de la touche Menu (N 2) et des touches de rglage des Frquence
q : une fois par
p jour
j
paramtres. Pour les bains-marie quips dun agitateur ou dun
6. Slectionner la temprature maximale (pour les bains- circulateur :
marie quips de cette option). Il sagit dune scurit
qui coupe lalimentation lectrique si la temprature Lubrifier laxe du moteur lectrique du circulateur. Dposer une
dpasse la limite slectionne. Utiliser la touche Menu et goutte dhuile minrale sur laxe pour maintenir une bonne
les touches de rglage des paramtres. lubrification entre les paliers du moteur et son axe.
7. Eviter dutiliser le bain-marie avec les substances
suivantes : Inspection priodique
a) Eau de Javel. Frquence
q : une fois par
p trimestre
b) Liquides teneur leve en chlore. Contrler le thermomtre ou les dispositifs de contrle de la
c) Solutions salines faibles comme le chlorure de temprature tous les trois mois au moyen dtalons connus. Si
sodium, le chlorure de calcium ou les composs on ne dispose pas dtalons de rfrence, utiliser un mlange
contenant du chrome. glace/eau et/ou de leau bouillante. Noter que le thermomtre
d) Fortes concentrations dacide quel quil soit. ou le dispositif de contrle de la temprature du bain-marie
e) Fortes concentrations de sel quel quil soit. doivent galement tre contrls lors de la premire installation
f ) Faibles concentrations des acides chlorhydrique, de lappareil aprs son achat.
bromhydrique, iodhydrique, sulfurique ou
chromique.
g) Eau dsionise, car elle provoque une corrosion et
une perforation de lacier inoxydable.
Entretien
Les bains-marie sont des appareils dentretien simple.

Les procdures recommandes en routine concernent
essentiellement le nettoyage des parties extrieures. Les
oprations les plus courantes sont :
33
CHAPITRE 5 BAINS-MARIE
GUIDE DE DPANNAGE
Lappareil ne sallume pas. Le bain-marie est dbranch. Brancher le bain-marie.
Linterrupteur est dfectueux Remplacer linterrupteur.
Le fusible est dfectueux. Remplacer le fusible.
Le bain-marie ne chauffe pas. La temprature nest pas slectionne. Slectionner la temprature.
Les rsistances sont dfectueuses. Remplacer la ou les rsistances.
La temprature limite nest pas fixe. Slectionner la temprature limite.
La temprature est plus leve que la valeur Le dispositif de contrle de la temprature est Remplacer le dispositif de contrle de la temprature
slectionne. dfectueux. si ncessaire.
Vrifier la slection des paramtres.
Les chantillons chauffent lentement. La cuve est vide ou contient trs peu de liquide. Remplir la cuve jusquau niveau recommand.
La temprature augmente trs lentement. Les rsistances sont dfectueuses. Remplacer la ou les rsistances.
Le dispositif de contrle de la temprature est Remplacer le dispositif de contrle de la
dfectueux. temprature.
DFINITIONS
Circulateur. Appareil qui agite ou mlange un liquide pour assurer lhomognit de ses proprits (temprature, couleur, densit). Egalement appel agitateur.
Fusible. Dispositif de scurit qui protge les circuits lectriques dune intensit excessive. Les fusibles sont raliss en matriaux dont les proprits et les dimensions sont
adaptes pour quils fonctionnent dans des conditions prdfinies. Si pour une raison quelconque les paramtres prdfinis sont dpasss, le matriau brle ou fond, ce qui
interrompt le passage du courant lectrique.
Peinture lectrostatique. Procd de peinture qui utilise le pouvoir dattraction exerc sur les particules par une charge lectrostatique. Une diffrence de potentiel de
80150 kV est applique sur un grillage mtallique travers lequel on projette la peinture afin den charger chaque particule. Les objets mtalliques peindre sont relis au
ple oppos du circuit haute tension de faon attirer les particules de peinture. Lobjet recouvert de particules de peinture est ensuite plac dans un four lectrique dont
la chaleur fait fondre les particules, qui adhrent alors fortement lobjet.
Plateau diffuseur. Aussi appel grille de diffusion thermique. Dispositif plac au fond du bain-marie comme support des rcipients dposs dans la cuve. Il permet galement
aux courants de convection thermique produits dans le liquide de la cuve de circuler de haut en bas et de bas en haut, ce qui maintient une temprature homogne la valeur
slectionne par loprateur. En gnral, le plateau diffuseur est en acier inoxydable.
Rsistance. Opposition quexerce un matriau ou un circuit lectrique au passage du courant lectrique. Cest la proprit dun circuit qui transforme lnergie lectrique en
chaleur en sopposant au passage du courant. La rsistance (R) dun corps de section uniforme, par exemple un fil mtallique, est directement proportionnelle sa longueur
(l) et inversement proportionnelle sa section (a). La rsistance se calcule au moyen de la formule :
l
R k=
a
dans laquelle :
k = constante qui dpend des units employes

l = longueur du conducteur
a = aire de la section du conducteur
Lohm () est lunit classique de rsistance lectrique ; 1 ohm est gal 1 volt par ampre.
Rsistance immersion. Aussi appele thermoplongeur. Rsistance lectrique (voir dfinition ci-dessus) place lintrieur dun tube scell. On les utilise en gnral
pour chauffer des liquides tels que leau ou lhuile.
34
Chapitre 6
,UJLPU[LKLZtJ\YP[tIPVSVNPX\L
Code GMDN 20652 20653 20654
Code ECRI 15-698 20-652 20-653 20-654
Dnomination Enceintes de scurit Enceintes de scurit Enceintes de scurit Enceintes de scurit
biologique biologique, classe I biologique, classe II biologique, classe III
Ce dispositif est conu pour contrler les arosols et

microparticules associs la manipulation de matriels A QUOI SERT UNE ENCEINTE DE SCURIT
biologiques potentiellement toxiques ou infectieux lors dactivits BIOLOGIQUE
telles quagitation, centrifugation, utilisation de pipettes et Lenceinte de scurit biologique est utilise pour :
ouverture de rcipients sous pression. Les enceintes de scurit 1. Protger loprateur contre les risques associs la
biologique aussi appeles postes de scurit microbiologique ou manipulation de matriels biologiques potentiellement
enceintes flux laminaire sont destines protger lutilisateur, infectieux.
lenvironnement et lchantillon grce des conditions de 2. Protger lchantillon analyser contre la contamination.
ventilation appropries. 3. Protger lenvironnement.
Les enceintes sont utilises pour les travaux de routine en

ILLUSTRATION DUNE ENCEINTE DE SCURIT relation avec des agents pathognes (parasites, bactries,
BIOLOGIQUE virus, champignons), pour les cultures cellulaires et, dans
des conditions trs prcises, pour la manipulation dagents
Figure 19. Enceinte de scurit biologique toxiques.
Lenceinte de scurit biologique est en gnral construite en
acier. Elle est quipe dune vitre frontale de hauteur rglable,
dun systme de ventilation avec moteur lectrique, dun
ventilateur et dune srie de conduites qui, lorsque lenceinte
est en marche, produisent une dpression (pression ngative)
lintrieur. Ce dispositif force lair entrant par louverture frontale
circuler vers lintrieur de lenceinte en formant un rideau
dair qui protge loprateur. A lintrieur de lenceinte, lair est
conduit travers une srie de grilles et de conduites et passe
finalement sur des filtres HEPA.1 Selon le modle denceinte, lair
est recycl lintrieur du laboratoire ou vacu et renouvel
en proportions variables. Le flux dair, qui dans les enceintes
de classe II se dplace du filtre vers la surface de travail, est
laminaire. On trouvera ci-dessous une rcapitulation des types
denceintes existants et de leurs principales caractristiques.
1 HEPA: High Efficiency Particulate Air.
35
C H A P I T R E 6 E N C E I N T E D E S C U R I T B I O LO G I Q U E
Types denceintes de scurit biologique
Type denceinte, avec illustration Caractristiques

CLASSE I TYPE A
1. Protection : de loprateur et de lenvironnement.
2. Vitesse de lair lentre dans lenceinte : 38 cm/s.
3. Convient pour le travail avec des agents correspondant

Vers la conduite dvacuation aux niveaux de scurit biologique1 1, 2 ou 3.
Filtre HEPA 4. Systme de filtration : filtre HEPA situ dans le systme

dvacuation qui peut ou non tre reli lextrieur.
Air contamin 5. Inconvnient : Ne protge pas lchantillon qui y est
Zone de travail manipul.
Air entrant
COUPE LATRALE
CLASSE II TYPE A
1. Protection : de loprateur, du produit et de

lenvironnement.
2. Vitesse de lair lentre dans lenceinte : 38 cm/s.

Air ltr par ltre HEPA Filtre HEPA dvacuation 3. Convient pour le travail avec des agents correspondant
aux niveaux de scurit biologique 1, 2 ou 3.
Vitre frontale Filtre HEPA dvacuation
4. Systme de filtration : deux filtres HEPA, lun situ
sur la surface de travail et lautre sur le systme
Flux laminaire vertical dvacuation, qui peut tre ou non reli lextrieur.
Si le systme dvacuation est reli lextrieur, la
Plnum postrieur connexion se fait par un manchon de raccordement.
Ouverture frontale 5. Recycle environ 70 % du volume dair et en renouvelle

Zone de travail 30 %.
Entre dair Grille arrire
Grille avant Moteur du ventilateur
Air potentiellement Bouche daspiration

contamin du ventilateur
1 Voir la classification des agents en niveaux de scurit biologique dans la section Scurit biologique
36

CLASSE II TYPE B1

lenvironnement.
Conduite dvacuation 2. Vitesse de lair lentre dans lenceinte : 50,8 cm/s.
3. Convient pour le travail avec les agents correspondant

4. Systme de filtration : deux filtres HEPA. Lair

potentiellement contamin est vacu (70 %) et
recycl lintrieur de lenceinte aprs filtration en
Filtres HEPA passant par la grille avant (30 %).
Systme de plnums
Flux laminaire 5. Toutes les conduites biologiquement contamines
sont sous pression ngative.
Surface de travail
6. Permet de travailller sur de petites quantits de
produits chimiques toxiques ou radioactifs.
V=100 PLm
[50.8cm/s]
CLASSE II TYPE B2

lenvironnement.
2. Vitesse de lair lentre dans lenceinte : 50,8 cm/s.

Conduite aux niveaux de scurit biologique 1, 2 ou 3.
dvacuation
Prltre 4. Systme de filtration : deux filtres HEPA. Ce type
Filtre HEPA denceinte est une enceinte vacuation totale. Elle ne
dvacuation possde pas de systme de recyclage.
Filtre HEPA 5. Toutes les conduites biologiquement contamines
dalimentation sont sous pression ngative.
6. Lenceinte possde un systme dvacuation qui

V vert = 55 PLm - (28cm/s) permet de travailler sur de produits chimiques
Conduite postrieure toxiques ou radioactifs.
sous pression ngative
Grille arrire
V = 100 PLm - (50.8cm/s)
Grille avant
Vue latrale
37

CLASSE II TYPE B3 OU A/B3

lenvironnement.
2. Vitesse de lair lentre dans lenceinte : 50,8 cm/s.
Filtre HEPA dvacuation 3. Convient pour le travail avec des agents correspondant
Filtre HEPA 4. Systme de filtration : deux filtres HEPA.
dalimentation
5. Toutes les conduites biologiquement contamines
sont sous pression ngative.
V vert = 55 PLm (28cm/s) Conduite postrieure sous
pression ngative 6. Enceinte combine. Elle peut tre connecte au moyen
dune conduite. Cest une enceinte de type B3. Sil ny
a pas de conduite de raccordement, lenceinte est de
Grille arrire type A. Elle recycle 70 % du volume dair lintrieur
V = 100 PLm - (50.8cm/s) de lenceinte.
Grille avant
VUE LATRALE
CLASSE III

lenvironnement
Conduite dadmission dair 2. Systme de filtration : deux filtres HEPA monts en
Conduite dvacuation srie dans le systme dvacuation ; un filtre HEPA
Double ltre HEPA dans le systme dadmission.
dvacuation
Fentre avant au niveau de scurit biologique 4
Gants 4. Enceinte totalement tanche. Les lments

dadmission et dvacuation de lair sont commands
par un sas double porte. La manipulation se fait
laide de gants fixs de faon tanche sur le devant de
lenceinte.
VUE LATRALE
38
SCURIT BIOLOGIQUE1 4. Le plancher de la pice doit tre plan et horizontal.

Les micro-organismes se rpartissent en quatre groupes 5. Lespace libre autour de lenceinte recommand par le
en fonction de facteurs tels que la pathognicit, la dose fabricant doit tre respect. De mme, la hauteur de la
infectante, le mode de transmission, la gamme dhtes, pice doit tre vrifie (la hauteur sous plafond doit tre
lexistence de mesures prventives et lefficacit du traitement suffisante pour que le fonctionnement de lenceinte ne soit
de la maladie quils provoquent. pas entrav).
1. Le NYV\WLKLYPZX\L se compose dagents biologiques 6. Les enceintes de type B doivent possder une conduite
dont il est trs peu probable quil provoquent une maladie dvacuation quipe de vannes de rgulation qui
chez lhomme ou lanimal en bonne sant. (Risque nul pour permettent disoler et de rguler le flux dair.
les individus ou la communaut). 7. Les raccords pour larrive de gaz doivent tre situs
2. Le NYV\WLKLYPZX\L se compose dagents pathognes proximit immdiate de lenceinte afin de faciliter le
qui provoquent une maladie chez lhomme ou lanimal branchement sur les robinets de service.
mais dont il est peu probable quils prsentent un danger 8. Lenceinte doit faire lobjet dune certification annuelle pour
pour le personnel de laboratoire, la communaut, les vrifier quelle satisfait la norme NSF 49.
animaux domestiques ou lenvironnement dans des
circonstances normales. Les personnes exposes lors
du travail au laboratoire sont rarement atteintes dune UTILISATION DE LENCEINTE DE SCURIT
maladie grave. Il existe des mesures prventives et un BIOLOGIQUE
traitement efficace et le risque de dissmination est limit. Lutilisation correcte de lenceinte de scurit biologique
(Risque modr pour les individus, risque limit pour la implique le respect des instructions suivantes :
communaut). 1. Planifier lavance le travail qui sera effectu dans
3. Le NYV\WLKLYPZX\L se compose dagents pathognes lenceinte de scurit biologique. Dterminer quelles
qui provoquent habituellement une maladie grave procdures et quel matriel seront utiliss. Coordonner
chez lhomme et lanimal et ont un impact conomique lhoraire dutilisation de lenceinte avec les autres membres
important. Cependant, la transmission de linfection par du personnel de laboratoire afin dviter les interruptions
simple contact dun individu lautre nest pas frquente. ou les alles et venues pendant que lenceinte est en
Les maladies que provoquent ces agents peuvent tre service.
traites par des anti-infectieux ou des antiparasitaires. 2. Allumer lenceinte. Si la lampe UV est allume, lteindre.
(Risque lev pour les individus, risque faible pour la Allumer le tube fluorescent et le ventilateur de lenceinte.
communaut). Vrifier que les grilles avant et arrire ne sont pas obstrues.
4. Le NYV\WLKLYPZX\L se compose dagents pathognes Prparer la zone de travail. Laisser lenceinte fonctionner
qui provoquent habituellement une maladie trs grave pendant au moins 15 minutes.
chez lhomme ou lanimal, contre laquelle il nexiste 3. Se laver les mains et les avant-bras avec un savon germicide.
souvent aucun traitement. Ces agents se transmettent Mettre lquipement protecteur : blouse ou combinaison
facilement dun individu lautre, de lanimal lhomme ou manches longues et poignets rglables, lunettes de
inversement, directement ou indirectement, ou par simple protection et masque si le travail effectuer lexige.
contact. (Risque lev pour les individus, risque lev pour Prparer les surfaces internes de lenceinte en appliquant
la communaut). de lthanol 70 % ou un dsinfectant appropri, puis faire
circuler lair.
4. Nintroduire et installer que les lments (matriels
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION biologiques et appareillage) ncessaires pour le test ou
Les conditions suivantes doivent tre remplies pour quune la manipulation. Faire une distinction entre zones propres
enceinte de scurit biologique fonctionne correctement : et zones sales. Disposer les lments de faon que les
1. Une zone de travail protge des courants dair provenant lments propres ne se mlangent pas ou ne se croisent
des fentres ou du systme de climatisation. Lenceinte doit pas avec les lments utiliss ou sales et nentravent pas
galement tre situe lcart des zones de passage pour la circulation de lair entre la grille avant et la grille arrire
viter les courants dair qui pourraient nuire lintgrit de lenceinte. Disposer un sac de scurit pour les dchets
du rideau dair lintrieur du dispositif. Il faut aussi vrifier biologiques, un rcipient contenant du dsinfectant pour
que lenceinte nest pas installe ct dautres types de les pipettes et un conteneur pour les objets piquants ou
dispositifs tels que des hottes de chimie. tranchants. Eviter de placer des objets de grande taille
2. Une alimentation lectrique munie des quipements de ct les uns des autres. Aprs avoir dispos tout le
contrle et de scurit ; la prise de courant doit tre relie ncessaire, il faut laisser le flux dair circuler dans lenceinte
la terre. pendant environ 3 5 minutes pour liminer toutes les
3. Une table solide et de niveau conue pour supporter le particules produites ou libres pendant lintroduction du
poids de lenceinte et permettant loprateur de travailler matriel.
confortablement. Il doit y avoir un espace libre pour les 5. Commencer le travail. Introduire lentement les mains
pieds et la hauteur du plan de travail doit tre suffisante. dans la zone de travail. Effectuer les manipulations en
procdant de faon soigneuse et mthodique (des zones
1 The Laboratory Biosafety Guidelines, 3rd. Edition-Draft, Health Canada, 2001. propres vers les zones potentiellement contamines). Tenir
39
les matriels au moins 10 cm de la grille avant. Essayer ENTRETIEN DE ROUTINE

deffectuer les oprations les plus contaminantes et celles
qui prsentent le plus de risques vers le fond de la zone
de travail. Eviter dutiliser une flamme nue ou un briquet
car cela perturberait la structure laminaire du flux dair et
risquerait de brler le filtre. Eviter de retirer les mains de
la zone de travail avant que toutes les oprations soient
accomplies et que les matriels potentiellement dangereux
soient limins dans le sac pour dchets biologiques ou Lentretien gnral dune enceinte de scurit biologique est
dans les rcipients pour pipettes et pour objets piquants dans lensemble simple raliser. Les procdures de routine et
ou tranchants. leur frquence sont dcrites ci-dessous :
6. Aprs avoir termin toutes les manipulations, nettoyer Frquence
q : une fois par
p semaine
lenceinte en laissant lair circuler librement pendant 3 5 1. Dcontaminer la surface de travail et les surfaces internes
minutes. de lenceinte avec de lthanol 70 %.
7. Dcontaminer toutes les surfaces, appareillage compris, 2. Nettoyer la fentre frontale en verre et la lampe UV laide
ayant t en contact avec le matriel biologiquement dune solution de nettoyage domestique.
contamin. Appliquer de lthanol 70 % ou un 3. Vrifier la prcision de la lecture du manomtre qui indique
dsinfectant appropri et laisser scher. Soulever les objets toute baisse de pression du flux dair traversant le filtre
et dsinfecter dessous. Couvrir les rcipients ouverts avant HEPA. Inscrire la date et le rsultat dans le livre de bord de
de les sortir de la zone de travail. Remettre le matriel et lenceinte.
les appareils leur place (incubateur, autoclave, etc.).
8. Jeter les gants et enlever lquipement protecteur. Frquence
q : une fois par
p mois
Evacuer les vtements et accessoires de protection selon 1. Nettoyer les surfaces extrieures, surtout le devant et
la procdure en vigueur au laboratoire. Se laver les mains le dessus, avec un chiffon humide pour enlever la
leau courante et au savon. poussire.
9. Eteindre le ventilateur, le tube fluorescent, fermer 2. Dsinfecter la surface de la partie basse avec de lthanol
louverture frontale et rallumer la lampe UV. 70 % ou une solution dsinfectante approprie.
3. Vrifier ltat des robinets de service.
Note : En cas de fuite ou de projections lintrieur de lenceinte 4. Effectuer les tches hebdomadaires selon le calendrier.
pendant le travail, il faut laisser celle-ci en marche et procder
une dcontamination de la surface de tout le matriel souill. Frquence
q : une fois par
p an
On vitera ainsi que des contaminants ne soient rejets par 1. Effectuer la procdure de certification conformment aux
lenceinte. indications de la norme NSF 49.
2. Vrifier lintensit de la lampe UV avec un radiomtre. La
Dcontamination de lenceinte remplacer si ncessaire.
La dcontamination de lenceinte de scurit biologique 3. Vrifier ltat du tube fluorescent. Le remplacer si
est une opration qui doit tre effectue avant tout travail ncessaire.
dentretien ou de maintenance ncessitant louverture de 4. Effectuer les tches mensuelles selon le calendrier.
ses surfaces ou composants internes. Chaque fois quune des
procdures indiques ci-dessous doit tre ralise, lenceinte Dmontage du plan de travail
doit tre pralablement dcontamine. Pour le dmontage du plan de travail, procder comme suit :
1. Changement des filtres. 1. Dcontaminer le plan de travail avant de le dmonter.
2. Excution de tests ncessitant un accs aux surfaces 2. Dvisser et enlever les vis de fixation situes sur la partie
internes ou une ouverture de lenceinte. avant.
3. Excution de tests de certification lorsque lenceinte a 3. Dvisser, mais ne pas enlever, les vis de fixation situes sur
t utilise avec des agents biologiques classs dans les la partie arrire.
groupes de risque 2 ou 3. 4. Soulever la partie avant du plan de travail et enlever celui-ci
4. Dplacement de lenceinte. en le tirant vers lavant de lenceinte.
5. Projections de matriel biologique contenant des agents 5. Dcontaminer la partie intrieure du plan de travail.
haut risque. 6. Pour le remettre, suivre dans lordre inverse les tapes 2, 3
et 4.
La procdure de dcontamination la plus approprie doit
tre dfinie par le responsable de la scurit industrielle
et des risques professionnels. Dans lannexe G de la norme
NSF 49 est dcrite la procdure de dcontamination par le
paraformaldhyde dpolymris. Seuls des professionnels
ayant reu la formation approprie doivent raliser de telles
procdures.
1 Les lampes UV ont une capacit de rayonnement denviron 7500 heures.
Certains fabricants conseillent de les remplacer une fois par an.
40
Remplacement de la lampe ultraviolets 3. Test daugmentation de la temprature. Dtermine

Pour remplacer la lampe UV, suivre les instructions du fabricant. laugmentation maximale de temprature dans lenceinte
En gnral, la procdure est la suivante : lorsque le ventilateur et lclairage sont en marche.
1. Allumer lenceinte et la laisser fonctionner pendant 5 4. Test de niveau sonore. Dtermine le niveau sonore de
minutes. lenceinte pendant son fonctionnement.
2. Relever la vitre avant en position maximum. 5. Test dintensit lumineuse. Dtermine lintensit
3. Dcontaminer les surfaces intrieures et la lampe UV. lumineuse au niveau du plan de travail de lenceinte.
4. Dbrancher lalimentation lectrique de lenceinte. 6. Test de vibration. Dtermine le niveau de vibration
5. Dconnecter la lampe UV en la faisant pivoter de 90 lintrieur de lenceinte pendant son fonctionnement.
degrs. Installer une lampe de rechange ayant les mmes 7. Test de protection du personnel, du produit et
caractristiques que la lampe dorigine. Sur certains [LZ[Z IPVSVNPX\LZ KL JVU[HTPUH[PVU JYVPZtL Ce test
modles, les lampes sont installes sur une plaque fixe sur dtermine si des arosols sont prsents dans lenceinte, si
la partie avant de lenceinte, et il faut dvisser et soulever des contaminants extrieurs atteignent le plan de travail
cette plaque pour dgager le support de la lampe. Une fois et si lenceinte rduit le taux darosols.
cela fait, remplacer la lampe comme indiqu ci-dessus. 8. Test de stabilit. Dtermine si la structure de lenceinte
est stable. Analyse la rsistance aux chocs latraux, la
Maintenance spcialise distorsion sous leffet dune force, au gauchissement et
Au bout dun certain temps, lenceinte devra tre soumise une linclinaison du plan de travail sous leffet dune charge.
maintenance spcialise. On trouvera ci-dessous quelques- 9. ;LZ[KL]P[LZZLK\\_]LY[PJHS Dtermine la vitesse de
unes des procdures faire excuter selon le manuel technique lair qui se dplace verticalement vers le plan de travail.
du fabricant par une entreprise spcialise. 10. ;LZ[KL]P[LZZLK\\_LU[YHU[ Dtermine la vitesse
1. Certification annuelle conformment aux dispositions de laquelle lair entre dans lenceinte par louverture frontale
la norme NSF 49. et le volume dvacuation de lenceinte.
2. Remplacement du moteur. En gnral, il comporte des 11. Test avec fumigne. Dtermine si le flux dair le long du
roulements scells sans entretien et fonctionne par primtre de louverture frontale se dirige vers lenceinte,
induction sous contrle de frquence (moteur asynchrone). et si le flux vertical descendant ne montre pas de lacunes
Ce moteur na pas de charbons. (*)1 ou de reflux vers le plan de travail.
3. Remplacement des ventilateurs. (*) 12. Test de drainage. Dfinit la capacit du bac de rtention
4. Remplacement du filtre HEPA (*). La frquence de des claboussures situ sous le plan de travail.
remplacement dpend de lutilisation de lenceinte et du 13. Test de fonctionnement du systme moteur/
systme de contrle de lenvironnement install dans le ventilateur. Dtermine si le systme fournit la pression
laboratoire. Sil y a un bon contrle des poussires, le filtre statique ncessaire.
peut durer de nombreuses annes. 14. ;LZ[ K\ Z`Z[uTL tSLJ[YPX\L Dtermine sil existe un
5. Rparation du systme de contrle lectronique : alarme risque potentiel de dcharge lectrique. Mesure le courant
de contrle du flux dair, position de la vitre frontale, de fuite, la polarit, le fonctionnement du disjoncteur
contrles de la vitesse de lair. courant de dfaut et la rsistance du circuit de mise la
6. Rparation ou nettoyage des vannes de rgulation du flux terre.
dair et des manchons de raccordement.
*LY[PJH[PVUKLSLUJLPU[L EVALUATION FONCTIONNELLE (AUTRE OPTION)

La procdure de certification des enceintes de scurit Sil existe des enceintes de scurit biologique dans le
biologique est rgie par la norme NSF 49, qui sapplique laboratoire mais quaucun service autoris de certification
toutes les enceintes de classe II. Cette norme dfinit les nest disponible, le personnel charg de la maintenance a la
matriaux, les critres de conception, la construction, les possibilit deffectuer les procdures de rvision annuelle
paramtres de fonctionnement et les tests qui permettent de en se basant sur la norme NSF 49. Cette rvision, dment
garantir la scurit et la capacit de lenceinte pour lusage documente, doit attester avec un faible niveau dincertitude
prvu. On trouvera ci-dessous une liste de tests avec mention le bon tat et le fonctionnement normal de lenceinte. 2
des normes requises. Pour tous dtails, il faudra se reporter On trouvera ci-dessous les grandes lignes des contrles
aux normes. La procdure de certification comprend les tests effectuer.
suivants : 1. Evaluation de linstallation. Vrifier que les conditions
1. Test dtanchit lair. Seffectue sur les surfaces dinstallation de lenceinte sont conformes aux
extrieures. Dtermine si tous les raccords, joints et recommandations du fabricant.
soudures sont exempts de fuites.
2. ;LZ[KLM\P[LZKLZS[YLZ/,7( Dtermine lintgrit des
filtres HEPA dentre et dvacuation, leur logement et leur
cadre de montage. 1 (*) Ces oprations ncessitent une dcontamination spcialise pralable.
2 Lvaluation fonctionnelle repose essentiellement sur la prsence (dans
ltablissement ou au niveau local) de techniciens et dingnieurs qualifis
et expriments. Cette rvision, dment documente, doit attester avec
un faible niveau dincertitude le bon tat et le fonctionnement normal de
lenceinte2.
41
C H A P I T R E 6 E N C E I N T E D E S C U R I T B I O LO G I Q U E Missing text page 10 Word file
2. Evaluation oprationnelle. Vrifier si lenceinte fonctionne On trouvera dans le tableau ci-dessous les paramtres prendre
conformment ses caractristiques de conception et de en compte lors de lvaluation fonctionnelle. Ils figurent en
fabrication. gnral dans les formulaires dinspection1 prpars cette
3. Evaluation de performance. Vrifier la capacit de fin.
lenceinte offrir un espace de travail suffisant dans les
conditions de travail normales et critiques.
1 Chaque tablissement a ses propres formulaires pour les registres de
maintenance administratifs et techniques.
Tableau dvaluation fonctionnelle des enceintes de scurit biologique
Paramtres Observation
Identification de lenceinte par ltablissement Marque, modle, type, srie, emplacement, code inventaire, date.
ELECTRIQUES
Voltage Mesure de la tension. Ncessite un voltmtre.
Amprage Mesure de lamprage. Ncessite un voltmtre ou une pince ampremtrique.
Moteur/ventilateur Vrification de la temprature de fonctionnement. Vrifier le niveau sonore et les vibrations.
Eclairage Fluorescent Confirmer que la lampe fonctionne.
Eclairage Ultraviolet Confirmer lhoraire de fonctionnement des lampes et leur intensit lumineuse. Ncessite un radiomtre.
Prise lectrique Vrifier lintgrit, la qualit des contacts et les voltages disponibles.
Interrupteurs Contrler ltat et lintgrit.
Intgrit des cbles et raccords Vrification visuelle.
Alarmes Vrifier ltat et ltalonnage.
PHYSIQUES
Finition interne/externe Vrification visuelle.
Etat des filtres et prfiltres Vrification visuelle. Il ne doit pas y avoir de fuites, ni dans le matriau filtrant ni au niveau des joints.
Joints/raccords Vrification visuelle. Il ne doit pas y avoir de fuites.
Fentre coulissante Vrification visuelle. Doit coulisser librement et conserver la position voulue.
OPRATIONNELS
Vitesse du flux dair Contrle de la vitesse selon la classe et le type denceinte. Ncessite un anmomtre.
Niveau sonore Ncessite un audiomtre.
Diffrentiel de pression dans le filtre HEPA Mesurer la pression dans lenceinte avec un manomtre.
PERFORMANCE
Numration des particules Mthode dfinie dans la norme Federal Standard 209D. Ncessite un gnrateur de tension, un
photomtre et un compteur de particules.
CONDITIONS DANS LE SECTEUR DINSTALLATION

Temprature Ncessite un thermomtre : environ 20-22 C.
Humidit Ncessite un hygromtre : environ 45-55 %.
Propret Doit tre satisfaisante.
Courants dair Il ne doit pas y avoir de courants dair susceptibles de nuire au fonctionnement de lenceinte.
42
GUIDE DE DPANNAGE1
Ni lclairage ni le systme de ventilation de Lenceinte est dbranche. Vrifier que lenceinte est raccorde une prise de
lenceinte ne fonctionnent. courant et que le cble est correctement reli au
botier lectrique de lenceinte.
La prise de courant nest pas alimente. Vrifier que la prise de courant est alimente et
que le coupe-circuit nest pas dsactiv (protection
thermomagntique). Remettre les interrupteurs en
marche.
Le ventilateur fonctionne mais pas La lampe est dfectueuse. Remplacer la lampe. Utiliser une lampe ayant les
lclairage. mmes caractristiques que la lampe dorigine.
La lampe est mal connecte. Vrifier la connexion de la lampe. Remettre la lampe
en position correcte.
La protection thermomagntique du coupe-circuit est active. Reconnecter le coupe-circuit.
Le fil conducteur de la lampe est dconnect. Contrler le fil conducteur de la lampe.
Le ballast de la lampe est dfectueux. Remplacer le ballast.
Le ventilateur ne souffle pas mais la lampe La fentre frontale est ferme. Ouvrir la fentre en position de travail.
fonctionne.
Le moteur du ventilateur est dfectueux. Remplacer le bloc moteur du ventilateur.
Le moteur du ventilateur est dconnect. Contrler les connexions du moteur.
Le manomtre indique une augmentation La rtention de particules dans le filtre HEPA a augment. Processus normal pendant la vie active du filtre.
de la dpression au niveau du filtre.
Il y a un blocage au niveau des grilles ou des fentes de reprise. Vrifier que les grilles ne sont pas obstrues par du
matriel.
La conduite dvacuation est obstrue. Vrifier quil ny a pas de blocage ou dobstruction
dans la conduite dvacuation.
Il y a un blocage ou une obstruction sous le plan de travail. Vrifier que le tuyau situ sous le plan de travail nest
pas obstru.
Il y a une contamination des chantillons Les modes opratoires sont incorrects. Vrifier que lenceinte est utilise conformment au
manipuls dans lenceinte. mode demploi et aux bonnes pratiques.
Obstruction au niveau des fentes de reprise ou blocage de la Tester le systme dvacuation et de reprise pour
conduite dvacuation. vrifier labsence dobstruction.
Des facteurs extrieurs lenceinte affectent la circulation de Vrifier le secteur dinstallation de lenceinte et les
lair lintrieur et provoquent une contamination. procdures qui y sont effectues.
Le filtre HEPA est dfectueux. Remplacer le filtre HEPA est procder la
certification de lenceinte.
1 Purifier Delta Series, Biological Safety Cabinets, Users Manual, Kansas City, Labconco Corporation, Part N 36960-20, Rev. A ECO B296.
43
DFINITIONS
Arosol. Suspension de fines particules solides ou liquides dans lair. Le diamtre moyen des particules se situe entre 104 et 107 cm.
Certification. Procdure tablissant que le fonctionnement de lenceinte de scurit biologique satisfait aux normes et critres minimaux assurant une utilisation sans
danger. La norme NSF 49 sapplique aux enceintes de classe II, types A, B1, B2 et B3.
Dcontamination. Elimination ou destruction des agents infectieux ; limination ou neutralisation des agents toxiques.
Enceinte de scurit biologique. Dispositif assurant des conditions de ventilation qui protgent lutilisateur, lenvironnement et lchantillon contre les arosols et
microparticules associs la manipulation de matriels biologiques potentiellement infectieux dans le laboratoire et librs lors doprations telles quagitation, centrifugation,
utilisation de pipettes et ouverture de rcipients sous pression. Aussi appele poste de scurit microbiologique.
Entre dair. Air qui pntre dans lenceinte par louverture frontale et qui remplace lair vacu..
Filtre HEPA (filtre particules de haute efficacit). Filtre capable dliminer des particules de diamtre moyen 0,3 m avec une efficacit de 99,97 %. Ces filtres sont
raliss en fibres de borosilicate agglomres au moyen dun adhsif rsistant leau. Le matriau filtrant est repli sur lui-mme lintrieur dun cadre afin daugmenter
laire de filtration.
Flux laminaire. Ecoulement non turbulent dun fluide visqueux (par exemple lair) en couches parallles. Le flux laminaire est ralis lorsque le nombre de Reynolds (Re)
est infrieur 3000.
Lumire ultraviolette (UV). Rayonnement lectromagntique dont la longueur donde se situe entre 200 et 390 nm. Elle est utilise dans les enceintes de scurit
biologique pour ses proprits germicides.
NSF. Sigle correspondant National Sanitation Foundation, organisation but non lucratif ddie la recherche, lducation et aux services, qui uvre la rsolution de
problmes concernant ltre humain, la promotion de la sant et lenrichissement de la qualit de vie par la conservation et lamlioration de lenvironnement. Les normes
NSF tablissent les critres de base pour la promotion de la salubrit de lenvironnement et la protection de la sant publique..
Plan de travail. Surface utilise pour excuter des travaux, manipulations ou autres activits lintrieur de lenceinte de scurit biologique.
Toxique. Substance ayant des effets physiologiques indsirables sur les systmes biologiques.
44
Chapitre 7
*LU[YPM\NL\ZLZ
Code GMDN 15115 10778 10778
Code ECRI 15-115 15-117 15-116
Dnomination Centrifugeuses sur pied, basse Centrifugeuse sur Centrifugeuse sur
vitesse, non rfrigres, pour pied, rfrigre pied
banque de sang
Le terme centrifugeuse vient des mots latins centrum qui signifie A QUOI SERT UNE CENTRIFUGEUSE
centre et fugere qui signifie fuir. La centrifugeuse utilise la force La centrifugeuse utilise la force centrifuge (force gnre lors
centrifuge produite par un mouvement rotatif pour sparer de la rotation dun objet autour dun point fixe) pour sparer
les constituants dun mlange. Il existe une vaste gamme des solides en suspension dans un liquide par sdimentation,
de centrifugeuses adaptes aux besoins de lindustrie et de ou pour sparer des liquides de diffrentes densits. Les
la recherche. Le prsent chapitre traite des centrifugeuses mouvements de rotation permettent de gnrer des forces
normalement utilises dans les laboratoires de sant publique beaucoup plus importantes que la pesanteur pendant des
et danalyses mdicales. dures contrles. Au laboratoire, les centrifugeuses sont en
gnral utilises pour des processus tels que la sparation, par
sdimentation, dlments solides prsents dans des liquides
biologiques, et en particulier des lments figurs du sang
(globules rouges, globules blancs et plaquettes entre autres),
PHOTOGRAPHIE DE CENTRIFUGEUSE et pour raliser de nombreux tests et traitements.
Il existe plusieurs sortes de centrifugeuses. Les plus utilises

en sant publique, pour la surveillance et dans les laboratoires
danalyses mdicales sont la centrifugeuse de paillasse,
lultracentrifugeuse, la centrifugeuse hmatocrite et la
centrifugeuse sur pied ( poser sur le sol).
Photo avec l aimable autorisation de Beckman Coulter
Les centrifugeuses reprsentent une application pratique de la
loi de Newton. Lorsquun corps de masse m tourne autour dun
point central O, il est soumis une force centripte N dirige
vers laxe de rotation avec une intensit rpondant la formule
N = m2R, dans laquelle m est la masse du corps, R le rayon et
la vitesse angulaire. Les centrifugeuses possdent un axe de
rotation sur lequel est mont un rotor muni de compartiments
destins recevoir les chantillons. La vitesse tangentielle est
dfinie par la relation : VT=R.
45
CHAPITRE 7 CENTRIFUGEUSES
Lorsque le systme tourne une vitesse de radians par 2. Systme de rfrigration (sur les centrifugeuses
seconde, les chantillons sont soumis la force centrifuge Fp rfrigres).
de mme intensit que N mais de direction oppose. La figure 3. Systme de vide (sur les ultracentrifugeuses, non indiqu
ci-dessous1 prsente sous une forme schmatique cette notion, sur la figure).
ses applications et le rsultat obtenu. La force Fp sexerce sur 4. Base.
les particules prsentes dans la substance centrifuge, et les 5. Couvercle.
spare en fonction de leur diffrence de densit. Les particules 6. Botier.
les plus denses se dposeront au fond du tube dans un temps 7. Moteur lectrique.
assez bref, tandis que les particules plus lgres ncessitent 8. Rotor. Il existe diffrents types de rotors. Les plus courants
un temps plus long et se dposent au-dessus des particules sont les rotors angle fixe, godets oscillants, tubes
denses. La relation entre lacclration de la force centrifuge verticaux et tubes quasi-verticaux, qui seront dcrits ci-
2r pour un rayon donn r et lacclration de la pesanteur g aprs
est connue sous le nom de force centrifuge relative ou FCR2.
Coupe transversale dune centrifugeuse (les numros
rt 2 correspondent aux lments dcrits ci-dessus)
RCF
g
5 1
La force centrifuge relative est loutil qui permet de comparer
des rotors de diffrentes spcifications lorsquon recherche des
effets de centrifugation quivalents.
ELMENTS DE LA CENTRIFUGEUSE 8
3
Les lments les plus importants dune centrifugeuse sont :
Panneau de contrle, qui se compose en gnral des lments 6 2
suivants :
1. Panneau de contrle, qui se compose en gnral des
lments suivants : 7
Interrupteur marche/arrt, rglage du temps de
fonctionnement (minuteur), rglage de la vitesse de
rotation (sur certaines centrifugeuses), rglage de la
temprature (sur les centrifugeuses rfrigres), contrle 4
des vibrations (mcanisme de scurit) et systme de
freinage.
Figure 20. Le concept de force centrifuge
Force Centrifuge
Fp
Rotor
Fp
Vt m Echantillon
m m
Vt
N R Fp Fp
O N N m Densit
Vt m
m
CONCEPT APPLICATION RSULTAT
1 Les lois de Newton ainsi que lexplication du systme de coordonnes

inertielles peuvent tre consultes dans les manuels de physique, chapitres
sur le mouvement circulaire uniforme
2 FCR. Force Centrifuge Relative
3 Les numros identifiant chaque lment correspondent ceux qui figurent
sur la coupe transversale de la centrifugeuse.
46
Types de rotors
Les centrifugeuses utilisent de nombreux types de rotors. Les
plus couramment utiliss sont dcrits ci-dessous.
Type de rotor Caractristiques Coupe transversale

Rotors angle fixe. Aussi appels rotors angulaires. Ce sont les rotors dusage _
courant. Les tubes sont maintenus un angle fixe spcifi,
selon le modle, entre 20 et 45 degrs. On les utilise pour
sdimenter des particules infracellulaires. Langle raccourcit
la trajectoire des particules et le temps de sdimentation par
rapport aux rotors godets oscillants.
Rotors godets oscillants. Aussi appels rotors libres. On les utilise pour effectuer des
tudes isopycniques (sparation par densit) et des tudes Position
de sparation zonale (sparation par taille), lorsquune en rotation
rsolution maximale des zones est requise pour un
chantillon.
Position
au repos
Rotors tubes verticaux. Aussi appels rotors verticaux. Avec ce type de rotors, les r
tubes restent parallles laxe de rotation. Il se forme
donc des bandes parallles laxe des tubes et non sur leur
longueur. On utilise ces rotors pour les tudes isopycniques
et, dans certains cas, pour des sparations zonales, lorsquil
est important davoir un temps de centrifugation court. Ces
rotors utilisent des tubes spcialement conus.
Rotors tubes quasi-verticaux. Ce type de rotor est destin la centrifugation en gradient

de densit lorsque certains lments de lchantillon ne
participent pas au gradient. La faible inclinaison de ces rotors
rduit le temps de centrifugation par rapport aux rotors
angle fixe.
47
Normalement, les fabricants spcifient les rotors utiliser dans 2. Un environnement propre et sans poussire, avec un
les centrifugeuses en publiant des tableaux spcialiss qui plancher ferme et horizontal.
contiennent les informations suivantes : 3. Si la centrifugeuse est rfrigre, il faut laisser un espace
1. Type de rotor. Spcifie le type de rotor pour lequel libre sur le ct du condenseur pour que le transfert de
linformation technique est fournie. chaleur puisse seffectuer correctement.
2. Capacit nominale du rotor. Dfinit la capacit en litres 4. Une armoire de rangement pour les accessoires de la
ou sous-multiples du litre. Par exemple : 6 litres ; 250 ml, centrifugeuse, notamment les diffrents rotors.
etc.
3. Vitesse maximale. Indique la vitesse maximale laquelle
ce rotor doit fonctionner, en tours par minute (RPM). ENTRETIEN DE ROUTINE
4. Force centrifuge relative maximale. (FCR) obtenue par Lentretien de routine dune centrifugeuse dpend de
ce type de rotor. nombreux facteurs comme la technologie intgre, la
5. Facteur k, le coefficient de sdimentation, dfini par la frquence dutilisation, la formation des utilisateurs, la qualit
formule : de lalimentation lectrique et les conditions ambiantes.
Les recommandations gnrales qui suivent concernent
ln rmax rmin 1013 lutilisation correcte et lentretien courant ncessaires pour
k =
t2 3600 garantir un fonctionnement optimal. Les oprations effectuer
en routine et les rparations spcialises dpendront des
dans laquelle: recommandations du fabricant pour chaque marque et
= vitesse angulaire en radians par seconde modle. Il faut toujours dsinfecter la cuve du rotor, la tte de la
rmax = rayon maximal en mm, mesur dans le tube de centrifugeuse, les godets et les joints des tourillons avant toute
centrifugation intervention sur des centrifugeuses utilises pour prparer des
rmin = rayon minimal en mm, mesur dans le tube de chantillons biologiques ou infectieux.
centrifugation
Le temps ncessaire pour la sdimentation peut tre Recommandation prioritaire : Sassurer que seul un personnel
calcul en heures laide de ce facteur. qualifi, dment form et connaissant bien le mode demploi
6. Informations sur la compatibilit du rotor avec dautres et les utilisations des centrifugeuses ainsi que les prcautions
modles de centrifugeuses du mme fabricant. observer et les risques est affect leur emploi. Il incombe
au directeur du laboratoire de superviser les oprations et
Les centrifugeuses de fabrication rcente ont reu des de prendre les prcautions requises pour que le personnel
amliorations au niveau de la scurit et de la dure de vie manipulant les centrifugeuses soit parfaitement au courant de
oprationnelle. Il sagit entre autres de fonctions contrles par tout ce quimplique lutilisation de ces appareils.
des microprocesseurs. Grce des logiciels pilots depuis un
clavier, ces centrifugeuses possdent plusieurs programmes en
mmoire. Selon le type de rotor utilis et la procdure choisie, RECOMMANDATIONS POUR UNE UTILISATION ET
ces programmes contrlent la dure de centrifugation, la UN STOCKAGE APPROPRIS1
temprature requise, la vitesse de rotation, lacclration et la
dclration, et les alarmes destines avertir lutilisateur de Rotors
toute anomalie de fonctionnement. 1. Enregistrer la date dachat de chacun des rotors, avec les
informations sur le modle et le numro de srie.
Les fabricants ont galement intgr des moteurs induction 2. Lire et assimiler le manuel dutilisation du rotor, de
(sans charbons) dans les centrifugeuses. Ceux-ci ont lavantage lappareillage et des tubes avant dutiliser la centrifugeuse.
dassurer un contrle lectronique des courants et champs Se conformer aux indications du fabricant en ce qui
magntiques rgulant la vitesse de rotation, ce qui rduit la concerne lutilisation et lentretien de lappareil.
frquence dentretien. Pour le fonctionnement et lentretien 3. Nutiliser les rotors quavec les centrifugeuses pour
de ces appareils, il est ncessaire de se conformer aux lesquelles ils sont conus. Ne pas changer de rotors sans
recommandations du fabricant. avoir vrifi leur compatibilit avec la centrifugeuse.
4. Enregistrer les paramtres de fonctionnement de chaque
rotor dans un cahier de bord de faon dterminer sa
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION dure de vie restante et pouvoir se procurer un rotor de
Pour un fonctionnement normal des centrifugeuses, les rechange lorsque cela sera ncessaire.
conditions suivantes doivent tre remplies : 5. Suivre les recommandations du fabricant concernant la
1. Une source dalimentation lectrique de capacit adapte vitesse maximale et la densit des chantillons. Chaque
lappareil, en courant monophas ou triphas stable (selon rotor est conu pour supporter un effort maximum, et les
le modle et les spcifications du fabricant). En gnral, les spcifications du fabricant doivent tre rigoureusement
centrifugeuses fonctionnent sous 110 V ou 220 V/60 Hz. respectes.
1 http://www.sunysb.edu/facilities/ehs/lab/cs.shtml
48
6. Suivre les recommandations concernant la rduction de 4. Vrifier si les tubes sont rutilisables ou non. Sils sont
la vitesse de rotation lorsquon travaille avec des solutions usage unique, ne les utiliser quune seule fois.
de densit leve dans des tubes en acier inoxydable ou 5. Pour la strilisation, il est ncessaire de vrifier dans quel
des adaptateurs en plastique. Les fabricants fournissent les matriau sont faits les tubes car tous ne supportent pas
informations ncessaires. la strilisation par la chaleur. Les tubes de verre sont
7. En cas de travail frquent avec des solutions salines, utiliser normalement striliss la vapeur 121 C pendant 30
des rotors en titane. minutes.
8. Protger le revtement du rotor pour viter de dtriorer 6. Stocker les tubes et flacons dans un endroit frais, sec,
la base mtallique. Ne pas utiliser de dtergents alcalins ou labri de la lumire et lcart de toutes vapeurs chimiques
des solutions de nettoyage qui pourraient endommager et sources de rayonnement ultraviolet.
le film protecteur. Les rotors, qui sont gnralement en 7. Vrifier le niveau maximum de remplissage et la fermeture
aluminium, sont recouverts dune couche daluminium des tubes en verre mince pour viter quils ne se brisent
anodis qui protge leur structure mtallique. dans le rotor sous leffet de la force centrifuge. Se conformer
9. Utiliser des brosses en plastique pour nettoyer les rotors. aux recommandations du fabricant.
Les brosses mtalliques rayent le revtement protecteur,
ce qui cre des points de corrosion. Celle-ci est acclre Maintenance prventive
dans les conditions de fonctionnement et abrge la dure
de vie oprationnelle du rotor.
10. En cas de projections de substances corrosives, laver
immdiatement le rotor.
11. Scher le rotor lair aprs lavoir nettoy et rinc leau.
12. Stocker les rotors tubes verticaux et quasi-verticaux tte Les procdures de maintenance de routine les plus importantes
en bas et sans couvercle. effectuer sur une centrifugeuse sont les suivantes :
13. Stocker les rotors dans un lieu sec. Eviter de les laisser dans Frquence
q : une fois par
p mois
la centrifugeuse. 1. Vrifier que les lments externes de la centrifugeuse sont
14. Stocker les rotors godets oscillants sans les couvercles. exempts de poussire et de taches. Eviter dclabousser le
15. Lubrifier les joints hlicodaux et les joints toriques selon rotor. Nettoyer le compartiment du rotor avec un dtergent
les recommandations du fabricant. doux.
16. Respecter les recommandations relatives la priode de 2. Vrifier que les mcanismes de connexion et dajustement
garantie et la dure de vie de chaque type de rotor. du rotor sont en bon tat. Lubrifier les points recommands
17. Eviter dutiliser des rotors dont la dure de vie est par le fabricant.
dpasse. 3. Vrifier le mcanisme de verrouillage et de scurit du
18. Utiliser un cran de protection lors de la manipulation de couvercle de la centrifugeuse. Ce point est fondamental
matriaux radioactifs. pour assurer la scurit de loprateur car ce mcanisme
19. Charger et dcharger les rotors dans une enceinte de maintient le couvercle ferm pendant le fonctionnement
scurit biologique en cas de travail avec des matriels du rotor.
correspondant au groupe de risque 2 ou plus. 4. Vrifier ltat de lubrification des lments tels que les
20. Ne jamais essayer douvrir le couvercle dune centrifugeuse joints toriques selon les recommandations du fabricant
en marche et ne jamais essayer de freiner le rotor la (frquence et type de lubrifiant). Les centrifugeuses de
main. fabrication rcente sont quipes de roulements bille
qui nont pas besoin dtre lubrifis.
Tubes 5. Vrifier ltat des joints dtanchit.
Les prcautions observer lors de la manipulation des
tubes portent sur le remplissage, le choix de la temprature Frquence
q : une fois par
p an
approprie, les limites de vitesse de centrifugation, le lavage 1. Vrifier que les cartes lectroniques sont propres et bien
et la strilisation. Les principales recommandations sont les connectes.
suivantes : 2. Tester les commandes servant slectionner les diffrents
1. Laver les tubes, adaptateurs et autres accessoires la main paramtres de la centrifugeuse : vitesse, dure, temprature,
avec une solution 1:10 de dtergent doux dans leau et les alarmes et les instruments analogiques et numriques.
une brosse douce en plastique (pas de brosse mtallique). 3. Vrifier la conformit aux normes lectriques. Utiliser un
Eviter dutiliser un lave-vaisselle automatique. testeur de scurit lectrique : rsistance de terre, courant de
2. Eviter dutiliser de lalcool et de lactone car ces fuite.
produits altrent la structure des tubes. Le fabricants 4. Si la centrifugeuse est rfrigre, tester la temprature avec
recommandent le solvant utiliser pour chaque type de un thermomtre lectronique. La temprature ne doit pas
tube de centrifugation. varier de plus de 3 C.
3. Eviter de scher les tubes dans une tuve. Toujours les 5. Contrler lexactitude des commandes de temps de
scher dans un courant dair chaud. centrifugation. Utiliser un minuteur. Le temps mesur ne
doit pas varier de plus de 10 % par rapport au temps
programm.
49
6. Vrifier la vitesse relle de rotation par rapport la vitesse Tous les six mois :
slectionne, en utilisant une charge normale. Le test Vrifier ltat des charbons du moteur, si la centrifugeuse est
seffectue laide dun tachymtre ou dun phototachymtre. quipe dun moteur avec charbons. Remplacer les charbons si
Si le hublot nest pas transparent, suivre la procdure indique ncessaire par de nouveaux ayant les mmes caractristiques
par le fabricant. que les charbons dorigine. Rpter ce contrle tous les six
7. Vrifier le fonctionnement du systme de freinage. mois.
8. Vrifier le fonctionnement du systme de rfrigration sur les
centrifugeuses rfrigres. Les contrles les plus importants Outils et instruments ncessaires
sont : Pour procder aux inspections techniques normalement
a) Contrle des tempratures slectionnes. Elles requises pour une centrifugeuse, les outils et instruments
ne doivent pas varier de plus de 3 C par rapport suivants sont ncessaires :
aux tempratures mesures avec un thermomtre 1. Une cl pour serrer et desserrer les boulons du rotor.
lectronique. 2. Un testeur de scurit lectrique ou un appareil de mesure
b) Vrifier ltat du filtre dentre dair. Sil est obstru, le du courant de fuite.
nettoyer ou le remplacer par un filtre quivalent. 3. Un minuteur.
c) Nettoyer soigneusement les ailettes du condenseur 4. Un thermomtre lectronique avec une exactitude de 0,5
pour liminer la poussire et les impurets qui sy C pour les centrifugeuses rfrigres.
sont dposes. Cela permet de maintenir le taux 5. Un tachymtre ou un phototachymtre.
de transfert de la chaleur conformment aux
spcifications de lappareil. Si une anomalie est
dtecte, appeler un technicien spcialis.
Note : Eviter les projections de liquides sur les touches de

commande. Presser les touches avec le bout des doigts. Eviter
de presser les touches avec les ongles, ce qui risquerait de
perforer la membrane de protection.
GUIDE DE DPANNAGE
Rotors1
Fortes vibrations. Le rotor nest pas quilibr. Equilibrer la charge du rotor. Remplir tous les tubes
opposs avec le mme niveau de liquide de mme
densit.
Rpartir symtriquement le poids des tubes opposs.
Charger symtriquement les rotors angulaires ou
verticaux.
La vitesse choisie est proche de la plage de rsonance Choisir une vitesse de rotation en dehors de la plage
du rotor. de rsonance.
Le montage du rotor est incorrect. Vrifier le montage du rotor. Vrifier quil est bien
ajust.
Les supports du rotor ne sont pas correctement Lubrifier laxe de rotation selon les recommandations
lubrifis. du fabricant, par exemple toutes les 250
centrifugations.
Les couvercles du rotor, des cartouches ou de la cuve Il se produit un vide pendant la centrifugation. Ouvrir la prise dair sur le dessus du rotor ou de la
sont difficiles ouvrir aprs centrifugation. cuve pour casser le vide.
Les joints sont encrasss par de la poussire, Effectuer le nettoyage de routine des joints et les
des restes de lubrifiant sch ou des particules lubrifier. Utiliser les produits recommands par le
mtalliques. fabricant.
1 Rotors and Tubes for Beckman Coulter J2, J6 and Avanti J series centrifuges, Users Manual, Palo Alto, California, The Spinco Business Center of Beckman Coulter, 2001.
50
Tubes
Les tubes fuient. Les couvercles sont mal fixs. Ajuster les couvercles.
Les tubes sont trop pleins. Le mnisque doit se situer plus bas pour viter les
fuites.
Le niveau maximal recommand est dpass dans les Vrifier le volume et la vitesse recommands pour la
tubes ouverts. centrifugation.
Un scellement est peut-tre dfectueux dans les tubes Appuyer lgrement aprs scellement chaud
scellement rapide. (seulement si le contenu nest pas affect). Si des
fuites sont visibles, sceller nouveau.
Les tubes sont fissurs ou casss. Les tubes peuvent se casser ou tre fragiliss sils sont Si lchantillon est congel, le rchauffer 2 C avant
utiliss au-dessous des tempratures recommandes. de centrifuger. Tester le comportement des tubes
basse temprature avant de centrifuger.
Les tubes deviennent fragiles avec lge et lutilisation. Jeter les tubes prims et en utiliser de nouveaux.
Systmes divers
Linterrupteur principal est sur ON mais la Lappareil nest pas aliment. Vrifier lalimentation lectrique.
centrifugeuse ne fonctionne pas.
Le couvercle de la centrifugeuse ne souvre pas. La centrifugeuse est sur OFF. Mettre la centrifugeuse sur ON. Appuyer sur la
poigne et ouvrir le couvercle.
Le tmoin de dsquilibre est activ. La charge centrifuger nest pas quilibre. Equilibrer la charge.
La centrifugeuse nest pas de niveau. Mettre la centrifugeuse de niveau.
Il y a des vibrations faible vitesse. Le mcanisme dajustement du rotor a du jeu. Ajuster correctement le systme de fixation du rotor
La charge nest pas quilibre. Vrifier lquilibrage de la charge centrifuger.
La vitesse choisie est proche de la frquence de rsonance Choisir une vitesse plus leve ou utiliser un autre
du rotor. type de rotor.
La vitesse de rotation est variable. Les courroies de transmission sont en mauvais tat (*). Eteindre la centrifugeuse. Vrifier la tension et
ltat des courroies. Les courroies doivent tre bien
tendues.
La vitesse de rotation natteint pas la valeur Les charbons sont dfectueux. Eteindre la centrifugeuse. Vrifier ltat des charbons.
slectionne. Si cest la cause du problme, remplacer les charbons
par de nouveaux ayant les mmes caractristiques
que les charbons dorigine.
Le rglage de la vitesse est mal talonn. Etalonner le rglage de la vitesse.
La cuve est froide mais le rotor est chaud. La temprature nest pas correctement slectionne. Vrifier la slection de la temprature.
Lindicateur dtat des charbons est allum. Les charbons sont en mauvais tat. Eteindre la centrifugeuse. Vrifier ltat des charbons.
Remplacer les charbons par de nouveaux ayant les
mmes caractristiques.
(*) Procdure valable pour les centrifugeuses quipes dun systme de transmission par courroies..
51
DFINITIONS
Charbon. Dispositif qui transmet lnergie lectrique entre lalimentation lectrique externe (cbles ltat statique) et les composants internes (en rotation) dun moteur.
En gnral, les charbons sont raliss en graphite de structure trs souple et, dans les moteurs, doivent tre changs rgulirement (tous les six mois). Aussi appel balai.
Densit. Voir Masse volumique.
Force centrifuge. Force apparente gale et oppose la force centripte, tendant loigner un corps en rotation du centre de rotation et rsultant de linertie du corps. Cest
lune des composantes du vecteur dinertie, qui est gal lensemble des forces agissant sur le corps. Son intensit est toujours gale [m x an] et sa direction est radiale,
du centre vers lextrieur.
Force centrifuge relative (FCR). Relation entre lacclration de la force centrifuge pour une vitesse et un rayon donns (r2) et lacclration normale de la pesanteur
g. Elle se calcule par la formule :
FCR = r2/g
dans laquelle
r = rayon en mm
= vitesse angulaire en radians par seconde = (2 rpm)/60
g = acclration normale de la pesanteur = 9807 mm/s2
Masse volumique. Masse dun corps par unit de volume, gnralement exprime en grammes par cm3. Lorsque la masse volumique dun corps est rapporte celle de
leau, on obtient la densit, exprime en valeur absolue.
m
D
V
Radian. Unit de mesure angulaire gale langle qui sous-tend un arc de cercle de longueur gale au rayon du cercle. Il est exprim par le quotient de la longueur de larc
que sous-tend un angle ayant sa pointe au centre du cercle par le rayon de ce cercle.
Revtement anodis. Couche mince et dure doxyde daluminium, dpose sur la surface du rotor par un procd lectrochimique afin dempcher la corrosion. Le
revtement reoit souvent une finition en diverses couleurs.
Rsonance. Situation dans laquelle un systme mcanique vibre en rponse une force applique la frquence naturelle du systme.
Sdimentation. Phnomne par lequel les particules dune suspension tombent au fond du milieu sous leffet de la pesanteur. Pendant la centrifugation, ce processus est
acclr et les particules se dplacent en sloignant de laxe de rotation.
Sparation isopycnique. Mthode de sparation des particules base sur leur densit de flottation. Il sagit dune sdimentation lquilibre. La vitesse dune particule
due une diffrence de densit est donne par la formule
v

d 2 l p < lc
= g

18 +

dans laquelle:
v = vitesse de sdimentation (dr/dt)
d = diamtre de la particule
p = masse volumique de la particule
c = masse volumique de la solution
= viscosit du milieu liquide
g = acclration de la pesanteur
Vitesse angulaire. Vitesse de rotation dun corps mesure en radians par seconde. Elle se calcule par la formule :
= (2 rpm)/60
rpm = tours par minute

= constante valant 3,1416
52
Chapitre 8
+PZ[PSSH[L\Y
Code GMDN 40478
Code ECRI 15-136
Dnomination Units de distillation
Le mot distillateurr vient du latin distillare, qui signifie vaporiser A QUOI SERT UN DISTILLATEUR
des liquides sous leffet de la chaleur. Le distillateur utilis au Le distillateur facilite lobtention deau trs pure partir de leau
laboratoire, aussi appel appareil de production deau distille, potable normalement fournie par les services de distribution
purifie leau courante par un processus de vaporisation et de deau des centres urbains. Leau distille se caractrise par
refroidissement contrls. Il transforme leau liquide en vapeur labsence de solides en suspension. Elle a de nombreuses
en lui appliquant de lnergie thermique par chauffage. Lors applications dans les centres de sant, en particulier dans les
de la vaporisation, les molcules deau se sparent des autres laboratoires, les units de lavage et de strilisation, et dans
molcules dilues ou mlanges dans la phase liquide. La les services de dittique. Plus les techniques de laboratoire
vapeur deau est recueillie et passe dans un condenseur, o utilises sont spcialises, plus le degr de puret exig est
elle est refroidie et retourne ltat liquide. Leau condense grand. Par exemple, la prparation de ractifs ou de produits
est ensuite recueillie et stocke dans un rservoir spar. Leau biologiques exige une eau de la plus haute qualit. La
distille prsente des caractristiques de puret suprieures distillation est lun des procds de base pour y parvenir (bien
celles de leau courante ; elle est pratiquement exempte de que dautres procds puissent tre galement exigs). Leau
substances contaminantes. utilise dans les laboratoires doit tre exempte de pyrognes,
avoir une teneur en solides totaux ne dpassant pas 1 ppm, un
pH compris entre 5,4 et 7,2 et une rsistivit au moins gale
3 105 ohm/cm 25 C 1.
SCHMA DUN DISTILLATEUR 1 Warming cabinets, sterilizers, and associated equipment,

t Division 11
Equipment, USACE/NAVFAC/ AFCESA, UFGS-11710, July 2003.
Figure 21. Distillateur
1. Gnrateur de vapeur 7. Sortie de leau de refroidissement
2. Jauge de niveau deau 8. Condenseur/colonne de distillation
3. Vanne de rgulation 9. Filtre au charbon actif
4. Raccordement au rseau de distribution 10. Eau distille
5. Eau en phase liquide
6. Rsistance immersion 11. Arrive deau froide
53
C H A P I T R E 8 D I S T I L L AT E U R
PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT 8. Condenseur. Dispositif dans lequel la vapeur perd de

Le fonctionnement du distillateur est bas sur un phnomne lnergie thermique, se refroidit et retourne ltat liquide.
observ dans la nature et qui est le cycle de leau. Lnergie Pour acclrer ce processus, on produit une convection
provenant du soleil chauffe leau des mers et ocans et force par une circulation de fluide basse temprature
en transforme une partie en vapeur deau. Cette vapeur (air ou eau) autour de la tubulure (serpentin) o passe la
se rassemble sous forme de nuages. Dans des conditions vapeur deau.
atmosphriques appropries, les nuages se refroidissent, et 9. Filtre. Les distillateurs possdent des filtres au charbon
leau se condense et retourne la surface de la Terre sous actif situs la sortie du condenseur ou du collecteur. Ces
forme de pluie. filtres liminent les odeurs ou les particules qui pourraient
se trouver dans le condensat.
Fonctionnement du distillateur 10. Rcipient eau distille. Dispositif dans lequel le liquide
Le distillateur reproduit le phnomne naturel dcrit ci-dessus. ayant achev le processus de distillation (distillat) est recueilli.
La configuration et le modle de lappareil varient selon le Leau distille doit tre stocke dans des rcipients spciaux
volume deau distille que lon dsire obtenir. On trouvera en matire plastique pour viter une contamination par des
ci-dessous une prsentation gnrale des lments dun ions. On utilise gnralement des rcipients en polythylne,
distillateur et une explication de leur fonctionnement. polypropylne ou polyttrafluorthylne.
1. Gnrateur de vapeur. Aussi appel bouilleur, cet lment
est le rcipient qui contient leau distiller. En gnral, il
est branch sur une arrive deau qui permet de remplacer CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION
leau vapore et distille. Il est en gnral en verre dans les Selon le modle, la capacit et le type de distillateur, les
petits distillateurs, et en acier inoxydable avec revtement conditions dinstallation peuvent varier. Le plus souvent, il
de cuivre, dtain ou de titane pour les units de grande faut :
capacit. Il peut tre quip de tmoins de niveau, de 1. Un environnement bien ventil dans lequel lappareil
dbit et de qualit de leau dalimentation, qui protgent puisse tre install. En effet, le distillateur transfre de
le distillateur en cas dirrgularits de lapprovisionnement. la chaleur dans tout fluide et lve la temprature de
Comme source dnergie, il utilise la vapeur deau provenant la zone o il est install. Il est ncessaire de laisser un
dune chaudire ou dun gnrateur de vapeur, ou lnergie espace libre autour de lappareil pour permettre lair
thermique de rsistances immersion qui se transmet de circuler. Certains distillateurs sont monts dans un
leau par conduction directe. Ces processus font monter la chssis mtallique et doivent tre installs sur un support
temprature de leau jusqu ce que, dans les conditions permettant lair de circuler dessous.
normales (pression atmosphrique gale une atmosphre 2. Un raccordement au rseau deau potable. En gnral, le
et acclration de la pesanteur gale 9,80665 m/s2), elle tuyau de raccordement a un diamtre denviron 1,25 cm.
se transforme en vapeur 100 C. Pour assurer un bon fonctionnement, il faut vrifier la
2. Jauge de niveau deau. Dispositif qui permet de rguler qualit de leau alimentant le distillateur afin de dterminer
la quantit deau dans le gnrateur de vapeur. Il est sil est ncessaire dinstaller un systme de traitement1 pour
directement reli larrive deau qui alimente le distillateur. viter les dpts et le tartre dans le rservoir du gnrateur
Lorsque la quantit deau en phase liquide contenue dans de vapeur et sur les rsistances immersion. On utilise leau
le bouilleur baisse, le dispositif permet de remplacer la potable pour alimenter le gnrateur de vapeur et pour
quantit de liquide vapore. rfrigrer le condenseur2.
3. Vanne de rgulation. Dispositif mcanique ou 3. Un systme de distribution de leau distille. Leau distille
lectromcanique qui permet de rguler le dbit de leau produite est dabord recueillie dans un rcipient de
entrant dans le gnrateur de vapeur. stockage. Dans les appareils de grande capacit, elle est
4. Raccordement au rseau de distribution. Apporte leau distribue partir de ce rservoir vers les postes dutilisation
en phase liquide au rservoir du gnrateur de vapeur. au moyen dun rseau. Dans les appareils de taille rduite
5. ,H\ LU WOHZL SPX\PKL Eau qui se trouve lintrieur du ou moyenne, elle est transvase dans dautres rcipients
rservoir du gnrateur de vapeur. Elle reoit lnergie partir desquels elle est prleve par les utilisateurs.
thermique des rsistances immersion et se transforme en 4. Un tuyau de vidange. On lutilise pour vider dans un vier
vapeur lorsque les conditions de temprature et de pression situ proximit de lappareil les impurets qui peuvent
requises sont remplies. saccumuler dans le rservoir du gnrateur de vapeur.
6. R s i s t a n c e s i m m e r s i o n . Aussi appeles
thermoplongeurs. Dispositifs produisant de la chaleur
lorsquils sont parcourus par un courant lectrique. Les
rsistances sont isoles par une gaine en cramique
et protges de lenvironnement externe par un cran 1 Le traitement de leau vise liminer les substances normalement prsentes
mtallique. dans leau du fait de son pouvoir de dissolution lev. En gnral, il sagit
dions inorganiques (anions et cations) tels que bicarbonates, sulfites,
7. Arrive deau froide. Tuyau damene de leau utilise chlorures, calcium, magnsium, sodium, potassium, fer, nitrates et de
traces de nombreux autres ions.
pour condenser la vapeur deau en lui retirant de lnergie 2 Un raccordement au rseau deau potable. En gnral, le tuyau de
thermique (refroidissement). raccordement a un diamtre denviron 1,25 cm. Pour assurer un bon
fonctionnement, il faut vrifier la qualit de leau alimentant le distillateur
afin de dterminer sil est ncessaire dinstaller un systme de traitement1
54
5. Un raccordement lectrique quip des dispositifs de 10. Ajouter de leau propre, laver et vidanger jusqu ce que le
contrle et de scurit requis, rpondant aux normes produit chimique et les rsidus de tartre soient entirement
lectriques nationales et internationales en vigueur dans limins.
le laboratoire, et adapt la capacit des lments rsistifs 11. Remettre le couvercle en place.
du distillateur. En gnral, le circuit est aliment en 220-240 12. Remettre le panneau avant ou refermer la porte de
V, 50/60 Hz. lappareil.
13. Faire fonctionner lappareil normalement
Note : Toujours vrifier les recommandations du fabricant
concernant linstallation du distillateur afin dassurer que celui-
ci fonctionne conformment aux spcifications.
ENTRETIEN DE ROUTINE 9LTWSHJLTLU[K\S[YLH\JOHYIVUHJ[PM

Lentretien de lappareil dpend du modle et de sa capacit. Frquence
q : tous les trois mois
Les procdures dentretien et de maintenance dcrites ci- Normalement, le filtre au charbon actif est immerg au-dessous
dessous sappliquent un distillateur quip dun gnrateur du systme de distribution qui se trouve en aval du rcipient
de vapeur en acier inoxydable avec rsistances immersion et de stockage de leau distille. Il est mont sur un logement
dun condenseur rfrigr par un ventilateur soufflant de lair install dans la conduite de distribution deau distille. En
sur les ailettes ou dans lespace entre les ailettes. gnral, il sagit dun dispositif facile remplacer. La procdure
est habituellement la suivante :
1. Dvisser le dessus du filtre.
2. Enlever llment filtrant usag.
3. Monter un nouvel lment filtrant ayant les mmes
caractristiques que llment dorigine.
4. Remettre en place le dessus du filtre.
Inspection et nettoyage du rservoir du gnrateur de
vapeur
Frquence
q : une fois par
p mois
1. Enlever le panneau de protection ou ouvrir la porte
permettant laccs au bouilleur (gnrateur de vapeur).
2. Enlever le couvercle du bouilleur.
3. Vrifier par examen visuel si les parois internes du rservoir
ou les rsistances sont entartres ou sil y a des dpts Nettoyage du condenseur
de matires solides. La quantit de tartre dpend de Frquence
q : une fois par
p an
la qualit de leau dalimentation du distillateur. Sil y a 1. Pour nettoyer le condenseur, il est ncessaire denlever les
une accumulation de tartre, il faut lenlever pour viter panneaux de protection ou douvrir la porte de lappareil
dendommager les rsistances1. pour avoir accs au condenseur.
4. Enlever les dpts de tartre. En gnral, il faut pour cela 2. Vrifier que le distillateur est dbranch.
utiliser un produit chimique spcialement conu pour le 3. Enlever le condenseur. Dconnecter le systme de
dtartrage. Ce produit doit tre slectionn en fonction des raccordement lentre de vapeur et le raccord entre le
caractristiques de leau utilise, qui seront dtermines condenseur et le rcipient de stockage de leau distille.
par une analyse chimique. 4. Dfaire les vis de fixation du ventilateur au condenseur.
5. Vidanger leau du rservoir du gnrateur jusqu ce que Dconnecter le ventilateur.
son niveau se trouve environ 10 cm au-dessus de la 5. Retirer le ventilateur et enlever la poussire accumule sur
hauteur de la jauge de niveau deau ou des rsistances les pales. Lubrifier laxe de rotation avec de lhuile minrale
(vrifier que le niveau deau se situe au-dessus de la base (deux gouttes).
du rservoir pour assurer que tous les lments restent 6. Retirer le condenseur. Aspirer la poussire et les impurets
immergs). accumules sur les ailettes. On peut aussi utiliser de
6. Ajouter le produit chimique recommand pour la qualit lair comprim ou une brosse trempe dans de leau
deau utilise. savonneuse.
7. Bien mlanger. 7. Rincer les diffrentes parties.
8. Laisser le produit chimique agir jusquau lendemain ou 8. Scher.
selon les instructions du fabricant. 9. Rassembler en suivant lordre inverse des oprations.
9. Le lendemain matin, vidanger le contenu du rservoir.
1 Les sels minraux dposs sur la gaine des rsistances sont

particulirement mauvais conducteurs de la chaleur et empchent le
transfert efficace de la chaleur entre la rsistance et leau lors du processus
de distillation. Cela provoque une augmentation de la temprature de la
rsistance au-dessus de sa temprature normale de fonctionnement, ce qui
risque de lendommager.
55
C H A P I T R E 8 D I S T I L L AT E U R
Strilisation du rcipient de stockage de leau distille
Frquence : de temps autre

Avant dutiliser un nouveau distillateur deau, il est recommand 5. Laisser la solution agir pendant au moins trois heures.
de sassurer que le rcipient de stockage de leau distille est 6. Vider le rcipient de stockage par le tuyau de vidange.
strile et propre. Pour effectuer la strilisation, utiliser une 7. Allumer le distillateur et le faire fonctionner jusqu ce que
mthode chimique, par exemple avec de leau de Javel ou autre le rcipient de stockage deau distille soit plein.
solution chlore. Procder comme suit : 8. Vider de nouveau le rcipient de stockage.
1. Vrifier que linterrupteur principal est sur OFF. 9. Remettre le filtre au charbon actif sa place.
2. Ouvrir le panneau avant pour accder au rcipient de 10. Faire fonctionner le distillateur pour remplir le rcipient
stockage de leau distille. deau distille. Le filtre au charbon actif liminera tous
3. Retirer le filtre au charbon actif de son logement. les rsidus de chlore qui pourraient se trouver dans leau
4. Prparer une solution deau de Javel la concentration de distille.
200 ppm et lajouter dans le rcipient de stockage.
GUIDE DE DPANNAGE
Le distillateur ne produit pas deau distille. Il ny a pas dalimentation lectrique. Vrifier que le cble dalimentation lectrique est
correctement branch.
Vrifier quil y a du courant dans le circuit lectrique
qui alimente le distillateur.
Vrifier que linterrupteur principal est sur ON.
Contrler quil y a de leau dans le gnrateur de
vapeur ou le bouilleur.
La rsistance immersion est hors service. Vrifier lintgrit de la rsistance immersion.
Mesurer le passage du courant lectrique ou la
rsistance en ohms. Remplacer la rsistance par une
autre ayant les mmes caractristiques.
Il y a de leau autour du distillateur. Le montage du distillateur ou de certains de ses Contrler le filtre pour vrifier quil est bien install
lments est dfectueux. et que leau passe au travers.
Vrifier que le rcipient de stockage du distillat est
bien positionn.
Vrifier que le dispositif de vidange ne fuit pas.
Il y a de la vapeur autour du distillateur. La ventilation du distillateur est insuffisante. Vrifier quil y a un espace libre autour du distillateur
et derrire.
Vrifier quaucun objet ne gne la circulation de lair
autour du distillateur.
Enlever tout objet gnant la circulation de lair.
La ventilation du systme de rfrigration ne Vrifier ltat du ventilateur. Sil est sur ON et ne
fonctionne pas. fonctionne pas, le remplacer par un autre ayant les
mmes caractristiques.
Leau distille a une odeur. Le filtre charbon est us. Remplacer le filtre charbon actif.
56
DFINITIONS
Distillation. Processus au cours duquel un fluide en phase liquide est chauff jusqu ce quil soit transform en vapeur puis refroidi et condens pour retourner ltat liquide.
La distillation sutilise pour sparer des substances en mlange en exploitant leur diffrence de volatilit. Pour obtenir des substances trs pures, des cycles conscutifs de
distillation sont effectus afin dliminer progressivement les autres substances prsentes dans le mlange.
Duret de leau.Caractristique chimique de leau dtermine par sa teneur en carbonate, bicarbonate, chlore, sulfate et parfois nitrate de calcium et magnsium. Une eau
dure ne convient pas pour certains processus. Il existe deux types de duret de leau.
tDuret temporaire. Elle est dtermine par la teneur en carbonate et en bicarbonate de calcium et de magnsium. On peut lliminer en faisant bouillir leau et en
filtrant le prcipit. On lappelle aussi duret carbonate.
tDuret permanente. Elle est dtermine par lensemble des sels de calcium et de magnsium lexception des carbonates et bicarbonates. On ne peut pas lliminer
en faisant bouillir leau. On lappelle aussi duret non carbonate.
Interprtation de la duret :
Teneur en CaCO3 en mg/l
0-75 eau douce
75-150 eau mi-dure
150-300 eau dure
>300 eau trs dure
Dans leau potable, la limite maximale autorise est de 300 mg/l.
Dans leau destine aux appareils de chauffage, la limite est de 0 mg/l.
t%VSFUjDBMDJVNx Quantit de calcium prsente dans leau.
t%VSFUjNBHOTJVNx Quantit de magnsium prsente dans leau.
tDuret totale ou titre hydrotimtrique (TH). Quantit de cations calcium (Ca) et magnsium (Mg) en solution, quelle que soit la nature des anions prsents dans
leau. Elle est exprime en ppm (parties par million) de carbonate de calcium (CaCO3).
Solution. Mlange liquide homogne de deux ou plusieurs substances, caractris par labsence de ractions chimiques entre ses constituants. On appelle solvant le
constituant prsent dans la proportion la plus grande et solut celui qui est prsent en plus petite quantit.
Tartre. Nom donn aux solides en suspension qui se dposent en couches la surface des rcipients de stockage de leau. Aussi appel dpt de calcaire
57
Chapitre 9
+PS\[L\Y
Code GMDN 15133
Code ECRI 15-133
Dnomination Diluteurs
Le diluteur est utilis pour diluer des substances. Le mot A QUOI SERT UN DILUTEUR
diluteurr vient du latin diluere qui signifie ajouter du liquide Un diluteur sert prparer des mlanges de substances de
une solution. Les solutions sont dfinies comme des mlanges faon atteindre des concentrations dtermines, de la mme
homognes de deux ou plusieurs constituants qui peuvent faon quavec une pipette, mais avec lavantage de bnficier
tre gazeux, liquides ou solides. Diluer correspond rduire la dun processus automatis ou programm. Il existe des
concentration dun liquide dans un solvant, en gnral dans diluteurs de capacit et de complexit variable. Leur capacit
leau. Le diluteur facilite la prparation des mlanges liquides, dpend du modle et du fabricant. Ils peuvent contrler des
jusqu ce quils atteignent une proportion (concentration) volumes connus compris entre 25 l (microlitres) et 25 ml
adapte lutilisation dans diffrentes techniques de diagnostic. (millilitres).
Ce type dappareil est dsign sous le nom de diluteur, un
anglicisme pour dilueur dont lusage sest gnralis au
laboratoire.
SCHMA DUN DILUTEUR
Figure 22. Schma dun diluteur
Panneau de contrle
Propulseur
Distributeur
59
C H A P I T R E 9 D I LU T E U R
Le diluteur se compose de divers lments qui interagissent de Le contrle du dplacement des pistons facilite le contrle des
manire coordonne pour manipuler des liquides et mlanger volumes manipuls. Le systme de dplacement est activ
des volumes avec une grande prcision, ce qui permet de par un moteur lectrique qui met en mouvement un systme
prparer des solutions connues en quantits allant de 1 l mcanique trs prcis pour modifier la position du piston.
25 ml. Le diluteur se compose en gnral des lments Une srie de valves contrlant le processus daspiration et
suivants : de distribution complte les seringues et leur systme de
1. Un systme de propulsion dplacement. La configuration du diluteur dpend du modle
2. Un systme de contrle et du fabricant.
3. Un systme de distribution
Systme de contrle
Systme de propulsion Les diluteurs modernes ont un systme de contrle automatique
Il est gnralement constitu dun systme dplacement ou command par microprocesseur. Le microprocesseur permet
positif comme on en trouve dans les seringues. Le diluteur de slectionner et de contrler les paramtres suivants :
utilise une ou plusieurs seringues interchangeables (de 1. Processus de mlange et/ou de dissolution de substances
capacit variable) pour contrler le volume mlanger ou (programmable)
diluer. Le piston des seringues est dplac par un mcanisme 2. Distribution de volumes prdfinis
qui contrle sa position. Les volumes aspirs ou dlivrs se 3. Vitesse de distribution ou daspiration
calculent par la formule : 4. Nombre de cycles requis
5. Calibre ou capacit (volume) des seringues
V = AI 6. Temps
7. Cycles damorage et de nettoyage
dans laquelle: 8. Procdures de contrle de la qualit
V = fraction du volume dlivr par la seringue lorsque le
dplacement du piston est gal I Pour donner une ide plus claire de la complexit technique de
ce dispositif, la figure ci-dessous montre un schma du systme
A = aire du piston. de contrle command par microprocesseur avec laffichage
de certaines des fonctions du diluteur. Les commandes de ce
Le volume total aspir ou dlivr est donn par lintgrale type de dispositif sont en gnral symtriques sil y a deux
correspondante : systmes dinjection.
l1
V A 0 ,l
lo
dans laquelle lo et l1 correspondent aux positions qui dfinissent
le dplacement du piston.
Figure 23. Commandes du diluteur
Ecran de linjecteur gauche Ecran de linjecteur droit
Calibre de la seringue droite
Rglage du calibre de la seringue droite
Rglage du volume
Rglage de la vitesse de linjecteur droit
Touches de rglage des paramtres

Interrupteur principal
(augmenter, diminuer)
Slecteur de mode de fonctionnement
60
Systme de distribution Figure 24. Seringue et doseur

Le systme de distribution se compose dune srie de seringues
de haute prcision et de dispositifs appels doseurs au moyen
desquels les liquides sont dlivrs selon le volume et la vitesse Seringue
choisis. Les seringues sont choisies et montes sur le diluteur en
fonction de la densit, de la viscosit et du volume des liquides
manipuler. Les liquides circulent dans des tuyaux flexibles
dont le diamtre, la longueur et la compatibilit chimique sont
Doseur
dfinis au cours du processus de fabrication pour tre adapts
lactivit prvue. Ces tuyaux sont connects au moyen de
raccords ajustables manuellement. Normalement, les seringues
sont classes en fonction de leur utilisation (par exemple,
seringues pour ractifs, pour diluants, pour chantillons) et
des volumes manipuler. Le tableau ci-dessous montre un
exemple de la faon dont elles sont classes en fonction de
leur calibre et des volumes manipuls.
ENTRETIEN DE ROUTINE
Le schma montre les lments du systme de distribution Lentretien de routine consiste essentiellement liminer les
(seringue et doseur). contaminants qui pourraient saccumuler dans le mcanisme
et/ou les tuyaux en contact avec les liquides manipuls. Les
tches les plus courantes sont :
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION
Nettoyage des surfaces extrieures
travail propre, sec et parfaitement horizontal, loin de toute Frquence
q : une fois par
p jour
j
source de vapeurs pouvant nuire son fonctionnement.
Il faut prvoir un espace libre autour de lappareil pour faciliter

la ventilation et le passage des cbles, raccords et tuyaux reliant
le diluteur aux rservoirs de solvants, aux ordinateurs et aux 1. Nettoyer les surfaces extrieures avec un chiffon propre
systmes de distribution. Lespace libre autour du diluteur doit imbib dun dtergent doux mlang de leau.
tre denviron 10 cm. 2. Frotter doucement les surfaces du diluteur et de ses
accessoires.
Il doit y avoir une prise de courant 220-240 V/50-60 Hz en bon 3. Scher les surfaces traites.
tat et relie la terre, ou 115 V/60 Hz, selon les spcifications
du fabricant et/ou les normes lectriques en vigueur dans le
pays.
Tableau des calibres et volumes des seringues
N darticle Modle Intervalle Calibre1

Volume de la
(selon le (selon le utile (volume
seringue Solution aqueuse Liquides visqueux
fabricant) fabricant) manipul)
selon fabr. selon fabr. 25 l 2,525 l 18 18
selon fabr. selon fabr. 50 l 550 l 18 18
selon fabr. selon fabr. 1 l 1001 000 l 18 18
selon fabr. selon fabr. 2,5 ml 2502 500 l 18 12
selon fabr. selon fabr. 5 ml 5005 000 l 12 12
selon fabr. selon fabr. 10 ml 1 00010 000 l 12 12
selon fabr. selon fabr. 25 ml 2 50025 000 l 12 12
1 Table 2.4, Microlab 501A, 503A, 504A, Users Manual,l Hamilton Company.
61
Nettoyage des seringues et tuyaux 3. Effectuer un cycle de remplissage ou damorage jusqu

ce que les tuyaux soient propres.
4. Retirer le tuyau de remplissage de la solution de nettoyage
et le plonger dans un rcipient contenant de leau
dsionise. Refaire un cycle de remplissage ou damorage
jusqu ce que le trajet du liquide ne contienne plus de
Frquence
q : une fois par
p jour
j solution de nettoyage. Jeter le liquide et rincer le rservoir
1. Alimenter le systme avec une solution de nettoyage. de vidange.
Sadresser au fabricant pour savoir quelle solution utiliser. 5. Arrter le cycle de remplissage.
Vrifier que tous les lments du systme sont en contact 6. Mettre le systme de propulsion en position de repos.
avec la solution et que les bulles dair ont t limines. Ce 7. Utiliser le systme maintenant propre et prt lemploi.
processus est appel amorage. Pour alimenter le systme,
on relie le diluteur un rcipient contenant la solution de Procdure pour le stockage du diluteur
nettoyage. Une fois lamorage termin, on vide la solution Frquence
q : chaque
q fois que
q le diluteur doit tre stock
dans un autre rcipient en attendant de lliminer. pendant une dure prolonge
p p g
2. Nettoyer le systme. Pour effectuer le nettoyage, on fait 1. Purger et amorcer le systme avec du mthanol (facilite le
circuler un liquide qui complte la solution de nettoyage schage).
(suivre les recommandations du fabricant). On utilise 2. Enlever les tuyaux et les seringues.
couramment de leau dsionise comme liquide de 3. Stocker les seringues dans leur tui de protection
nettoyage. Selon les substances traites dans le diluteur, dorigine.
dautres agents de nettoyage peuvent tre utiliss, par 4. Couvrir le corps du diluteur pour le protger de la
exemple lthanol, lure ou une solution deau de Javel poussire.
10 % dans leau dsionise. 5. Ranger lappareil.
Nettoyage du systme hydraulique Contrle de qualit

Frquence
q : avant la premire
p mise en service Le contrle de qualit applicable aux diluteurs est le mme que
1. Prparer un rcipient de solution de nettoyage et y plonger pour les pipettes. En cas de doute, se reporter aux explications
le tuyau de remplissage (les fabricants recommandent concernant ltalonnage dans le chapitre 16 sur les pipettes
dutiliser des agents de nettoyage compatibles avec le
diluteur).
2. Plonger le tuyau de vidange dans le rservoir de
vidange.
62
GUIDE DE DPANNAGE
Le diluteur ne sallume pas. Il y a un dfaut dans lalimentation lectrique. Vrifier le raccordement lectrique.
Lalimentation est dconnecte. Brancher le cble dalimentation lectrique.
Le fusible a saut. Vrifier le fusible. Sil a saut, le remplacer par un
fusible quivalent.
Le diluteur fonctionne bien, mais aucun message ni Lcran LCD est peut-tre endommag, ou les diodes Vrifier que le panneau de contrle est bien connect
indication ne saffiche sur lcran. de lclairage DEL sont dfectueuses. au systme de propulsion.
Appeler le service technique du fabricant.
Les touches de commande ne fonctionnent pas. Le diluteur est en mode Pause. Appuyer sur la touche dmarrage/fin (START/END)
pour achever le dplacement du piston.
Le diluteur est obstru. Il y a une erreur interne. Appuyer sur la touche dmarrage/fin (START/
END) pour achever le dplacement du piston et
redmarrer le cycle.
Appeler le service technique du fabricant si le dfaut
persiste.
Le diluteur naspire pas et ne dlivre pas de liquide. Les tuyaux du systme hydraulique sont dfectueux Vrifier que les tuyaux, seringues et raccords ne sont
ou bouchs. pas bouchs. Les nettoyer ou les remplacer.
Le raccordement des tuyaux et des seringues est Vrifier que les tuyaux, joints, raccords et seringues
incorrect. sont bien ajusts.
Le systme de propulsion est dfectueux. Appeler le service technique du fabricant.
Les valves sont dfectueuses. Enlever les valves. Vrifier que leurs joints sont
propres et les remettre en place. Si ncessaire,
remplacer par une valve quivalente.
Le diluteur ne donne pas de rsultats prcis. Il y a de lair dans le circuit de liquide. Vrifier que les tuyaux dalimentation sont
compltement immergs dans les rcipients qui
contiennent les ractifs.
Vrifier que les diffrents raccords sont bien ajusts.
Vrifier que les seringues sont correctement
installes et quil ny a pas de fuites.
Tester le circuit pour vrifier quil ny a pas de fuites
au niveau des tuyaux et des valves.
Rduire la vitesse de fonctionnement de la seringue
pour liminer les problmes de cavitation.
Le tuyau de distribution nest pas correctement choisi Vrifier le calibre recommand pour le tuyau et ses
par rapport au volume de la seringue. raccords. Pour les petits volumes, se conformer aux
dimensions recommandes par le fabricant.
Une bulle dair apparat sur la pointe de la sonde Le tuyau daspiration est sale. Remplacer ou nettoyer le tuyau daspiration.
aprs la dernire aspiration.
Le mode daspiration est incorrect. Rduire la vitesse daspiration.
Il y a de lair en permanence ou des fuites en Il y a des cavitations dans le systme. La vitesse Rduire la vitesse du systme de propulsion. Se
permanence sur le circuit de liquide. daspiration est trs leve. souvenir que plus les liquides sont visqueux, plus la
vitesse de propulsion doit tre faible.
Les raccords sont mal ajusts, uss ou dfectueux. Ajuster les raccords la main. Remplacer les
tuyaux par de nouveaux ayant des dimensions
correspondant aux liquides manipuls.
Le piston est dfectueux ou la seringue est Remplacer le piston ou la seringue.
endommage.
Une des valves est dfectueuse. Remplacer la valve.
Le diluteur chauffe. La ventilation est insuffisante. Contrler la ventilation.
La temprature de la pice est trop leve. Vrifier la climatisation de la pice.
Le cycle de travail est trs intense. Utiliser le diluteur de faon moins intensive.
63
DFINITIONS
Cavitations. Phnomne qui se produit dans un liquide lorsquil se forme un vide pendant lvacuation dun rcipient. La pression diminue jusqu atteindre la tension de
vapeur du liquide. Cela entrane divers phnomnes comme la vaporisation de gaz dissous dans le liquide ou, dans le cas de leau, la formation de bulles de vapeur qui clatent
en un temps infinitsimal, causant des perforations dans leur voisinage immdiat la surface des tuyaux. Ce phnomne se produit dans les diluteurs lorsquon utilise des
seringues de grand volume avec une vitesse de propulsion leve.
Concentration. Mesure de la quantit dune substance chimique prsente dans une solution. Cette notion est exprime par la quantit dune substance dissoute dans un
solvant. La concentration sexprime de diverses faons, les plus courantes tant la molarit (M), la molalit (m), la normalit (N), et le taux de solut en pourcentage.
Dilution. Rduction de la concentration dune solution par laddition dautres liquides. Le liquide ajout est appel le diluant. Addition de molcules dune substance liquide
aux molcules dune autre substance liquide. Pour dterminer le volume V1 de liquide ncessaire pour obtenir le volume V2 la concentration C2 partir dune solution de
concentration C1, on applique la formule :
V 2C 2
V1
C1
Dissolution. Processus par lequel un produit chimique sous forme solide est dissous dans un solvant (par exemple de leau ou un autre liquide). Le produit chimique mis
en solution est appel le solut.
Distributeur. Dispositif utilis pour distribuer des liquides.
Dosage. Distribution dun liquide en volume constant ou sous forme dune progression.
Equivalent en poids (EP) (dune substance). Rsultat de la division du poids molculaire (PM) par la valence.
EP=PM(g)/valence
Equivalent-gramme (Eq). Masse en grammes du solut divise par son quivalent en poids (EP) :
Eq= masse(g)/EP(g)
Molalit (m). Nombre de moles dune substance donne pour 1000 g de solvant. Une solution de molalit m sobtient en ajoutant m moles de la substance 1000 g
deau.
Molarit (M) (dun composant dune solution). Nombre de moles de solut par litre de solution finie. Une solution de molarit n dun sel sobtient en ajoutant n moles de
ce sel de leau jusqu obtenir un (1) litre de solution. Normalement, la formule employe est la suivante :
moles
M
Vol(L )
Mole. Poids molculaire (PM) du solut exprim en grammes.
Moles=masse(g)/EP
Normalit (N) (dun solut). Nombre de moles de solut par litre de solution finie.
Eq
N
Vol(L )
Poids/volume. Relation utilise en chimie clinique, exprimant la masse de la solution en grammes ou ses sous-multiples par unit de volume en litres ou ses sous-multiples.
Par exemple : g/l, mg/ml.
Solution. Mlange liquide homogne de deux ou plusieurs substances. Le ou les produits chimiques appels soluts dterminent en gnral le nom de la solution. La
substance dans laquelle le solut est dissous est appele le solvant. Il y a en gnral une plus grande quantit de solvant que de solut(s) dans une solution.
Note : Un autre type de notation, en parties par unit est utilis pour la mesure des concentrations extrmement faibles. Par exemple : une partie par million (ppm)
signifie quil y a une particule dune substance donne pour 999 999 particules dautres substances.
64
Chapitre 10
Distributeur
Code GMDN 41663, 35734
Code ECRI 16-274
Dnomination Distributeur de liquides pour
laboratoire
Le distributeur est un dispositif de la famille des pipettes et A QUOI SERT UN DISTRIBUTEUR

diluteurs. Son nom anglais dispenserr vient du prfixe dis qui Le distributeur est un appareil multi-usages qui peut tre utilis
dnote une privation et du mot latin pensum qui signifie au laboratoire pour les activits suivantes :
tche. Il existe diffrents types de distributeurs, par exemple 1. Aspirer et distribuer des volumes de liquides ou de solutions
des modles rpondant aux normes applicables aux travaux lorsquune grande exactitude nest pas indispensable.
de chimie et dautres utiliss en microbiologie, bactriologie, 2. Distribuer un volume dun liquide ou dune solution stocke
immunologie et pharmacologie. Des distributeurs automatiques dans un rcipient en fractions prdfinies (distribution
contrls par un programme informatique sont utiliss dans rptitive avec un volume final constant).
les tablissements o il existe une forte demande de tests et 3. Mlanger une solution par aspirations et distributions
qui ont besoin de processus automatiss. Ce chapitre prsente successives, au moyen dun dispositif daspiration et de
les distributeurs manuels, aussi appels distributeurs rptitifs, distribution.
car ce sont les plus couramment employs. 4. Titrer une solution ou une suspension stock de virus en
distribuant le matriel titrer par dilution en srie dans
un diluant donn jusqu atteindre le point final.
SCHMA ET PHOTOGRAPHIE DUN DISTRIBUTEUR
Distributeur Figure 25. Distributeur
1. Slecteur de volume
2. Ecran digital
3. Levier de dosage
4. Levier de remplissage
Tte de
distribution
5. Bouton djection
6. Raccord du distributeur
7. Echelle de dosage
Photo avec l aimable autorisation de Gilson S.A.S.
8. Rservoir
9. Embout de distribution Adaptateur avec

piston intgr
65
C H A P I T R E 10 D I S T R I B U T E U R
5. Diluer une solution en mlangeant des volumes dfinis de 4. Levier de remplissage. Levier mcanique actionn la main
cette solution avec un diluant. pour aspirer le liquide dans le rservoir de ladaptateur.
6. Utiliser de la mme faon quune pipette (aspiration dun 5. Bouton djection. Mcanisme qui libre llment doseur
volume puis distribution de ce mme volume). (adaptateur) de la tte du distributeur.
7. Distribuer des milieux de culture dans des botes de Ptri. 6. Raccord du distributeur. Dispositif permettant de raccorder
On utilise souvent des distributeurs automatiques quips llment doseur la tte du distributeur. Il se compose
daccessoires pour dplacer les botes de Ptri et les stocker dun systme de joints et de coulisses pour assurer un
une fois que le milieu de culture y a t introduit. Pour des ajustement parfait.
applications ponctuelles ( petite chelle), la distribution 7. Echelle de dosage. Elle indique le volume maximal qui peut
des milieux de culture se fait au moyen de seringues en tre dlivr avec ladaptateur slectionn. Dans certains
plastique usage unique avec aiguilles N 161. cas, elle indique galement le volume restant.
8. Adaptateur du distributeur (rservoir). Rcipient qui
Le distributeur peut normalement tre programm pour toutes reoit la solution aspire ou dlivre lors des cycles de
ces activits selon les instructions fournies par le fabricant. distribution. Il en existe de nombreuses variantes, selon le
modle de distributeur. Ladaptateur peut tre unique ou
PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT combin, avec des embouts appropris.
En gnral, les distributeurs modernes sont contrls par des 9. Embout de distribution. Facilite la distribution ou
microprocesseurs et se composent des lments suivants (la laspiration de solutions. Lembout est situ lextrmit de
numrotation ci-dessous correspond celle de la figure 25). ladaptateur du distributeur. Sans embout, il est impossible
1. Slecteur de volume. Ce bouton molet est utilis pour dutiliser le distributeur.
rgler le volume dlivrer : le volume slectionn saffiche 10. Interrupteur marche/arrt (ON/OFF). (Non reprsent sur
sur lcran du distributeur. la figure).
2. Ecran digital. Il affiche les donnes correspondant la 11. Un compartiment pour piles. (Non reprsent sur la
fonction slectionne, comme le volume dlivrer, le type figure).
dembout fix sur la tte de distribution et des informations
comme les alarmes et les messages derreur qui peuvent Accessoires
tre dclenchs pendant le fonctionnement de lappareil, Pour effectuer certaines tches avec le distributeur, des
par exemple une alarme de batterie faible ou de slection accessoires appropris sont ncessaires. La figure ci-dessous
incorrecte de lembout pour le volume choisi. montre des exemples dadaptateurs.
3. Levier de dosage. Ce levier actionne le piston mont sur un
adaptateur dplacement positif de type seringue, dans
lequel il se dplace le long dun cylindre pour dlivrer le
volume de liquide slectionn.
1 Product Information Sheet. 3cc Syringes. For dispensing and plating

Methocult. http://www.stemcell.com/technical/28230_28240-PIS.pdf
Figure 26. Distributeur et accessoires
Tte Adaptateurs et embouts
Distributeur multi-tape
Rservoir auxiliaire
Distributeur simple
Adaptateur multicanaux avec
embouts de dosage
66
Volume distribu ENTRETIEN DE ROUTINE

Les distributeurs sont conus pour travailler sur des intervalles Lentretien du distributeur est simple. Les activits de routine
de volumes prdfinis. Avant lemploi, il faudra examiner le les plus importantes sont dcrites ci-dessous.
type de solution qui sera utilis et les volumes distribuer. Les Frquence : une fois par jour
fabricants proposent divers modles dadaptateurs. Le tableau 1. Nettoyer le distributeur avec un chiffon humide et un
ci-dessous montre les intervalles de travail les plus courants. dtergent doux.
2. Dsinfecter le distributeur avec de lisopropanol
60 %.
Capacit de ladaptateur Volumes distribus 3. Eviter que lhumidit ne pntre lintrieur des
0,1 ml 120 l commandes lectroniques et/ou mcaniques
0,2 ml 240 l
Remplacement de la pile (si ncessaire)
1 ml 10100 l
1. Ouvrir le compartiment des piles. En gnral, il suffit
5 ml 50500 l pour cela de faire glisser le couvercle de la position
10 ml 100 l to 2 ml Ferm la position Ouvert .
25 ml 250 l to 5 ml 2. Enlever la pile use. Lliminer conformment aux
recommandations.
3. Installer une pile ayant les mmes caractristiques que
la pile dorigine. Vrifier la polarit lectrique pour que la
CONDITIONS REQUIS POUR LE FONCTIONNEMENT pile soit correctement installe. Avant de mettre la pile en
DE LAPPAREIL place, nettoyer les contacts avec un chiffon propre.
Selon le type de distributeur, des conditions minimales sont 4. Fermer et ajuster le couvercle.
requises pour le fonctionnement, entre autres :
1. Vrifier que le distributeur est conu pour les solutions qui
seront utilises. Vrifier la compatibilit des matriaux dans
le manuel dutilisation fourni par le fabricant.
2. Un environnement propre, quip de postes de travail de
taille suffisante, bien ventil et clair.
3. Vrifier que la temprature de la pice est stable, avec un
intervalle de variation de 0,5 C entre 0 et 40 C et une
temprature optimale de 20 C.
4. Utiliser un quipement de protection individuelle appropri
lors du travail avec des substances toxiques ou comportant
un risque microbiologique.
5. Utiliser les embouts spcialement conus par le fabricant
pour chaque application particulire.
67
C H A P I T R E 10 D I S T R I B U T E U R
GUIDE DE DPANNAGE
Il nest pas possible de monter ladaptateur sur la Llment est dfectueux. Appeler le service technique.
tte du distributeur.
Llment doseur est sale. Examiner llment pour rechercher une obstruction.
Le nettoyer si ncessaire. Appeler le service
technique.
Ladaptateur ne peut tre retir de la tte du Il y a un dfaut dans le systme lectronique. Rinitialiser lappareil. (Eteindre et rallumer
distributeur. linterrupteur). Slectionner loption dextraction
manuelle.
Il y a un dfaut dans le mcanisme dajustement. Vrifier si le piston se dplace davant en arrire et
inversement. Retirer le cylindre au-dessus dun bac
dchets.
Lembout du systme de dosage (adaptateur) goutte. Lembout est dfectueux. Remplacer le dispositif de dosage.
Le systme de dosage de type pipette goutte. Lembout doseur nest pas bien ajust. Enlever lembout doseur du raccord conique. Le
remettre en place correctement.
Lembout doseur a t incorrectement slectionn. Vrifier le type dembout recommand par le
fabricant.
Le piston ou le joint du piston sont endommags. Remplacer le piston et les joints. Utiliser les pices de
rechange fournies par le fabricant.
Lcran affiche une alarme de batterie faible. La pile est use. Remplacer la pile.
Lcran naffiche aucun signal. La pile est use. Remplacer la pile.
Le systme lectronique est dfectueux. Appeler le service technique.
Lcran affiche des messages derreur. Diverses causes. Appeler le service technique.
Lcran indique une erreur de remplissage. La quantit de liquide est insuffisante pour le Vrifier que le volume disponible pour la distribution
distributeur. est suffisant. Si non, charger ou aspirer un volume
suffisant pour la quantit distribuer.
Lcran affiche une erreur de volume total. Lappareil a aspir plus de liquide que ladaptateur ou Ejecter tout le liquide. Vrifier le fonctionnement lors
lembout doseur ne peut recevoir. dun nouvel essai.
Lcran affiche une erreur de slection de lembout. Lembout install ne convient pas pour lopration Vrifier quel type dembout convient pour lopration
prvue. prvue. Remplacer lembout.
Lembout est dfectueux. Mettre un nouvel embout ayant les mmes
spcifications que lembout dorigine.
DFINITIONS
Bote de Ptri. Bote peu profonde en verre ou en matire plastique utilise pour les cultures de micro-organismes au laboratoire.
Elment doseur (adaptateur). Dispositif aussi appel Combitip, reli la tte de distribution pour distribuer une solution. Il existe diffrentes tailles et formes dadaptateurs
en fonction des volumes distribuer et des caractristiques de la solution utilise.
Mlange. Addition de substances qui ne produisent pas de raction chimique. Dans un mlange homogne, la composition et laspect doivent tre uniformes.
Milieu de culture. Solide ou liquide dvelopp des fins mdicales pour cultiver et identifier des micro-organismes capables de provoquer des maladies (agents pathognes)
et pour diverses autres applications.
68
Chapitre 11
Spectrophotomtre
Code GMDN 36411 36411 36411
Code ECRI 15-082 15-083 15-084
Dnomination Spectrophotomtre, Spectrophotomtre, Spectrophotomtre,
ultraviolet ultraviolet, visible visible
Le mot spectrophotomtre est driv du latin spectrum, qui lchantillon. A partir du rapport entre ces deux intensits, on
signifie image, et du grec phos ou photos, qui signifie lumire. calcule la transmittance, dont la valeur dpend de facteurs tels
Le spectrophotomtre est lun des principaux appareils conus que la concentration de la substance.
des fins de diagnostic et de recherche. Il utilise les proprits
de la lumire et son interaction avec les substances. En
gnral, la lumire mise par une lampe prsentant certaines A QUOI SERT UN SPECTROPHOTOMTRE
caractristiques est guide au travers dun dispositif qui Le spectrophotomtre est utilis au laboratoire pour dterminer
slectionne et spare une longueur donde dtermine, et lui la prsence ou la concentration dune substance dans une
fait traverser un chantillon. Lintensit lumineuse sortant de solution, ce qui permet une analyse qualitative ou quantitative
lchantillon est capture et compare avec celle qui a travers de lchantillon.
Comme principe de base, on considre que la lumire est une
PHOTOGRAPHIE DE SPECTROPHOTOMTRE forme dnergie lectromagntique. Dans lespace, elle a une
vitesse constante et universelle (C) denviron 3 108 m/s. Dans
Spectrophotomtre classique tout autre milieu (transparent) quelle traverse, la lumire a
une vitesse lgrement plus faible, qui peut se calculer par la
formule :
C
v0
n
Photo avec l aimable autorisation de Beckman Coulter
dans laquelle :
v0= vitesse laquelle la lumire traverse le milieu
n = indice de rfraction du milieu : cette valeur se situe en
gnral entre 1,0 et 2,5.
69
C H A P I T R E 11 S P E C TO P H OTO M T R E
Lnergie lectromagntique possde une gamme de longueurs En ce qui concerne linteraction de la lumire avec la matire,
donde trs tendue. Le tableau ci-dessous en montre quelques la figure 27 illustre la complexit des phnomnes qui se
exemples : produisent.
Type dnergie Le diagramme de la figure 27 montre que le rayonnement

Gamme de longueurs donde incident (Io) peut subir une srie de transformations. Il peut tre
lectromagntique
rflchi (Ir), transmis (It), diffus (Id), absorb et directement
Ondes radio De quelques mtres quelques kilomtres
rmis sous forme de fluorescence (If ). Les phnomnes sur
Ondes radar De 1 10 cm lesquels se base la spectrophotomtrie sont principalement
Rayonnement infrarouge De 1 10 microns (10-6 m) labsorption et la transmission. Pour comprendre de quelle
Lumire visible De 300 700 nm (nanomtres) manire, il est ncessaire de mentionner la loi de Beer-
Lambert.
Rayons X De 0,1 0,5 (A
(Angstrm)
Rayons gamma Environ 0,0012 (Angstrm) Loi de Beer-Lambert. Aussi appele loi de Beer ou loi de Beer-
Lambert-Bouguer, elle dcrit la relation entre la concentration
Lors de la traverse ou de linteraction avec divers milieux, la dun chantillon et lintensit de la lumire transmise par cet
lumire subit une srie de phnomnes. Parmi ceux-ci figurent chantillon. La loi de Beer-Lambert utilise deux concepts : la
la rflexion, la rfraction, la diffraction, labsorption, la diffusion, transmittance (T) et labsorbance (A).
la polarisation et dautres phnomnes mesurs par divers
instruments et dispositifs. Le tableau ci-dessous montre les La transmittance (T) est la fraction du rayonnement incident de
gammes de longueurs donde utilises pour effectuer des tests longueur donde dtermine qui traverse lchantillon.
en spectrophotomtrie.
It
T
Io
Partie du spectre avec :
Gamme de longueurs donde
lumineux It = intensit du rayonnement transmis
Ultraviolet 10-200 nm (nanomtres) Io = intensit du rayonnement incident
Proche ultraviolet 200-280 nm
Lumire visible 380-780 nm
Proche infrarouge 780-3000 nm
Infrarouge moyen 3000-20 000 nm
Infrarouge lointain 30 000-300 000 nm
Figure 27. Interaction de la lumire avec la matire
Rayonnement absorb Rayonnement

transmis (It)
Rayonnement
Rayonnement dius (Id)
incident (Io))
Fluorescence (If)
Rayonnement
rchi (Ir))
70
Le pourcentage de transmittance (%T) peut sexprimer par la Les graphes ci-dessous montrent comment labsorbance (A) et
formule : la transmittance (T) varient en fonction de la concentration (c)
selon la loi de Beer-Lambert.
It
%T =100
Io
Reprsentation graphique de la transmittance
La concentration de molcules absorbant la lumire dans
un chantillon est proportionnelle labsorbance (A) de
cet chantillon. Elle sexprime mathmatiquement par la
formule :
Transmittance
A =l =c
dans laquelle :
A = absorbance mesure
= coefficient dabsorbance de la molcule (litres/
moles/cm) Concentration
l = longueur du trajet parcouru par la lumire dans A = Log 1
lchantillon (trajet optique) T
c = concentration de lchantillon (moles/litre)
Labsorbance (A) est lie la transmittance (T) par la Reprsentation graphique de labsorbance
formule :
1 I
A log10 log10 o log10 10 =c=l = c = l
T It
Le diagramme ci-dessous explique le phnomne
Absorbance
dabsorbance :
Figure 28. Phnomne dabsorbance
Concentration
Lumire Lumire transmise
incidente Io lt = lo x 10 -a(Q)*c*l A = cxx l x c

Solution absorbante
de concentration (c)
moles/litre
On peut conclure que si la concentration dune substance
augmente, la transmittance diminue, et si la concentration
Trajet optique: espace parcouru dune substance augmente, labsorbance augmente.
par la lumire dans la solution
La linarit de la relation de Beer-Lambert est affecte par les

conditions suivantes :
1. Dplacement de lquilibre chimique de lchantillon en
fonction de la concentration.
2. Dviation des coefficients dabsorbance, concentrations
suprieures 0,01 M dues linteraction lectrostatique
entre molcules voisines.
3. Modification de lindice de rfraction aux concentrations
leves de la substance analyser.
4. Diffusion de la lumire due la prsence de particules dans
lchantillon.
5. Fluorescence ou phosphorescence de lchantillon.
6. Radiation non monochromatique.
71
ELMENTS DU SPECTROPHOTOMTRE donde (ce peut tre un prisme ou une grille de diffraction), et
Le schma de la figure 29 dcrit la relation entre les diffrents une fente de sortie pour slectionner la longueur donde qui
lments dun spectrophotomtre. Les lments les plus illuminera lchantillon. Les grilles de diffraction ont lavantage
importants sont : dliminer la dispersion non linaire et dtre insensibles aux
1. La source lumineuse changements de temprature.
2. Le monochromateur
3. Le porte-chantillons Porte-chantillons
4. Le systme dtecteur Ce dispositif sert de support aux chantillons analyser. Il
5. Le systme de lecture en existe divers types adapts aux diffrents modles de
spectrophotomtres et au volume des chantillons : cuves,
Ces lments sont les lments de base des spectrophotomtres microcellules, microplaques, tubes essais, cellules flux
et ne comprennent pas les innovations techniques introduites continu, etc. Dans les spectrophotomtres classiques, le porte-
par les fabricants dans les modles rcents. La figure 29 montre chantillons est une cellule ou une cuve de forme rectangulaire.
de faon succincte la fonction de chacun de ces lments. Les cuves sont ralises en verre pour les lectures entre 340 et
1000 nm, et en silice pour les lectures dans le visible entre 220
Source lumineuse et 340 nm. Il existe aussi des cuves et autres types de porte-
Selon le type de spectrophotomtre, la source lumineuse peut chantillons (par exemple des microplaques) usage unique
tre une lampe au tungstne mettant dans le visible ou une en plastique, comme le styrne ou le polystyrne.
lampe arc au deutrium mettant dans lultraviolet. Certains
fabricants quipent les spectrophotomtres avec des lampes au Systme dtecteur
xnon de longue dure qui mettent une lumire pulse dans Le systme de dtection peut se composer de cellules
le visible et lultraviolet. Les lampes sont livres prassembles photolectriques, tubes photolectriques, photodiodes ou
sur une base qui leur assure un positionnement fixe, afin de photomultiplicateurs, selon la gamme de longueurs donde et
maintenir lajustement optique et la focalisation pendant le la sensibilit et la vitesse de rponse requises. Le systme de
fonctionnement de lappareil et lors du remplacement de dtection reoit la lumire de lchantillon et la convertit en un
lampoule. Lnergie du rayonnement mis par une lampe signal lectrique dintensit proportionnelle lnergie reue. Ce
au tungstne se situe classiquement entre 2600 et 3000 K signal lectrique peut tre trait et amplifi pour tre interprt
(degrs Kelvin). par le systme de lecture. Le tableau ci-dessous prsente les
avantages et les inconvnients des divers dispositifs normalement
Monochromateur utiliss dans les systmes de dtection.
Le monochromateur est un ensemble dlments qui sert
disperser la lumire blanche en radiations de diffrentes Systme de lecture
longueurs donde, dont lune est utilise pour lire le rsultat Le signal qui quitte le dtecteur subit diverses transformations.
de lanalyse. En gnral, il a une fente dentre qui limite le Il est amplifi et transform pour que son intensit devienne
rayonnement lumineux produit par la source et le confine un pourcentage proportionnel de la transmittance ou de
dans une zone dtermine, un jeu de miroirs pour transmettre labsorbance. Il existe des systmes de lecture analogiques
la lumire au travers du systme optique, un lment qui (qui prsentent les rsultats sur une chelle de lecture) ou
permet de sparer les radiations en diffrentes longueurs numriques (qui affichent les rsultats sur un cran).
Figure 29. Elments du spectrophotomtre
Source lumineuse Miroir
Echantillons
Systme Systme de lecture
Fente dentre dtecteur
Monochromateur
Fente de sortie
Prisme
72
Avantages et inconvnients des systmes de dtection courants
Dispositif Avantages Inconvnients

Cellules photolectriques Economiques. Gamme de longueurs donde limite : entre 400 et 750 nm.
Peu encombrantes. Faible sensibilit.
Robustes. Rpondent lentement aux changements dintensit lumineuse.
Ne ncessitent pas de sources dnergie ni damplificateurs Susent.
de signal.
Le signal dpend de la temprature.
Tubes photolectriques Fonctionnent entre 190 et 650 nm. Egalement entre 600 Ncessitent des talonnages en fonction de la temprature de
et 1000 nm. lenvironnement dans lequel ils sont installs.
Susent aux fortes intensits lumineuses.
Photodiodes Pas de parties mcaniques mobiles.
Acquisition simultane des donnes spectrales.
Large gamme dynamique.
Excellente reproductibilit des longueurs donde.
Photomultiplicateurs Plus sensibles que les cellules et tubes photolectriques. Peuvent brler sils reoivent la lumire du jour pendant le
fonctionnement.
Gamme de longueurs donde plus tendue. Prix trs lev.
Rpondent rapidement aux changements dintensit Ncessitent une source de courant haute tension.
lumineuse.
Ne susent pas comme les cellules photolectriques. Utiliss seulement sur les spectrophotomtres spcialiss.
Peuvent tre raliss avec une sensibilit dans ltendue
complte du visible et de lultraviolet (de 190 900 nm).
Les indicateurs analogiques affichent traditionnellement ENTRETIEN DU SPECTROPHOTOMTRE

les rsultats sur une chelle de lecture ou un cadran. Leur Les spectrophotomtres sont des appareils trs spcialiss
exactitude dpend entre autres de la longueur et du nombre et trs coteux. Leur intgrit dpend en grande partie de la
de divisions de lchelle (plus il y a de divisions, plus la lecture faon dont ils sont installs et utiliss. Leur environnement
est exacte). Leur principal inconvnient est que la lecture peut direct et la qualit de lalimentation lectrique sont des facteurs
tre incorrecte du fait de la fatigue de loprateur ou de la de premire importance pour que ces appareils fonctionnent
confusion entre plusieurs cadrans. conformment aux spcifications. Lentretien de routine se
compose de tches de complexit variable, allant du nettoyage
Les indicateurs numriques (aussi appels affichage digital) soigneux des lments aux oprations de maintenance
affichent les rsultats sous forme de chiffres lumineux sur un spcialises effectues par un technicien ou un ingnieur
cran. De ce fait, les erreurs de lecture sont plus rares. qualifi ayant reu une formation technique sur les diffrents
modles existants. Une utilisation soigneuse, en se conformant
aux instructions du fabricant, garantit un fonctionnement
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION de longue dure. Sur les modles rcents, les fabricants ont
Pour que le spectrophotomtre fonctionne correctement, les introduit des procdures automatises dtalonnage et de
conditions suivantes doivent tre remplies : vrification.
1. Une alimentation lectrique rpondant aux normes
nationales. Par exemple, dans les pays dAmrique le rseau On trouvera ici des recommandations gnrales sur lentretien
est en gnral aliment en 110 V/60 Hz, alors quailleurs et la maintenance, applicables une vaste gamme de
dans le monde il est aliment en 220-230 V/50-60 Hz. spectrophotomtres. Il faut noter que les oprations de routine
2. Un environnement propre, sans poussire. spcialises ne peuvent tre effectues quen se conformant
3. Une table de travail stable, lcart des appareils qui strictement aux recommandations du fabricant pour le modle
produisent des vibrations (centrifugeuses, agitateurs). considr. On trouvera ci-dessous les procdures dentretien
de routine dun spectrophotomtre en bon tat et la frquence
conseille pour les contrles.
73
Inspection de lenvironnement de lappareil 3. Vrifier que les accessoires sont propres, non fissurs et
Frquence : une fois par an que leur tat de fonctionnement est optimal.
Le secteur dans lequel le spectrophotomtre est install doit 4. Vrifier que les lments mcaniques dassemblage
faire lobjet dune inspection visuelle et de tests lectriques (boulons, vis, crous, etc.) sont bien ajusts et en bon
pour garantir la scurit de loprateur. Linspection porte tat.
sur linstallation lectrique et lensemble de lenvironnement 5. Vrifier que les cbles lectriques ne sont pas fissurs ni
physique du spectrophotomtre. rompus, et quils sont correctement relis au secteur.
6. Vrifier que les cbles lectriques ne prsentent pas de
Installation lectrique rparations de fortune, ne sont pas uss et que leur gaine
Elle doit tre vrifie et teste pour assurer que les conditions isolante est intacte.
suivantes sont remplies : 7. Vrifier que les cbles de raccordement et leurs bornes
1. Il y a une prise de courant relie la terre. sont exempts de poussire et de corrosion et ne sont
2. La prise est en bon tat et ne se trouve pas plus de pas encrasss. Ils ne doivent pas non plus tre uss ou
1,5 m du spectrophotomtre. prsenter des signes de dtrioration.
3. Le voltage est appropri et ne scarte pas de plus de 8. Vrifier que le systme de mise la terre (interne et
5 % du voltage spcifi sur la plaque de lappareil. externe) est standardis, dun type approuv, fonctionnel
4. La polarit de la prise est correcte. et correctement install.
9. Assurer que les interrupteurs et coupe-circuits, la bote
Ces tests doivent tre effectus par un lectricien qualifi fusibles et les indicateurs ne sont pas poussireux,
(technicien ou ingnieur) et les rsultats doivent tre enregistrs encrasss ou corrods.
pour permettre un suivi ultrieur. 10. Vrifier que les lments lectriques externes ne prsentent
pas de signes de surchauffe.
Secteur dinstallation
1. Vrifier quil y a un espace libre autour du spectrophotomtre, Entretien gnral
pour deux raisons. Dabord pour que les cbles de Nettoyage des claboussures
raccordement puissent passer librement et pour pouvoir En cas de fuite du porte-chantillons, les claboussures doivent
installer dautres lments ou appareils annexes (par tre nettoyes comme suit :
exemple un stabilisateur de tension). Ensuite, pour que 1. Eteindre le spectrophotomtre et dbrancher la prise
la ventilation puisse fonctionner efficacement lorsque secteur.
lappareil est en marche. 2. Utiliser une seringue pour nettoyer le porte-chantillon.
2. Vrifier que la paillasse est en bon tat et propre. Aspirer le plus possible de liquide.
3. Vrifier quaucun appareil capable de transmettre des 3. Essuyer le porte-chantillons avec un tampon de coton
vibrations (par exemple une centrifugeuse) nest install hydrophile.
proximit. 4. Utiliser du papier optique ou un chiffon doux et propre
4. Vrifier que le secteur nest pas expos des conditions pour nettoyer la fentre de la cellule photolectrique.
dhumidit, de temprature ou de poussire excessives. La 5. Nettoyer lextrieur de lappareil, y compris lcran, le
temprature ambiante approprie pour le fonctionnement panneau de contrle et le clavier, avec un chiffon humect
du spectrophotomtre se situe entre 10 et 40 C. avec de leau distille.
5. Eviter dinstaller lappareil dans un endroit expos la
lumire solaire directe. Nettoyage des cuves en quartz
6. Ne pas installer lappareil dans un secteur o il existe Il est recommand de procder comme suit pour maintenir les
des champs magntiques ou des rayonnements cuves en quartz en bon tat :
lectromagntiques intenses. 1. Laver les cuves avec une solution alcaline dilue comme
7. Assurer que le secteur dinstallation nest pas expos des NaOH 0,1 M et un acide dilu comme HCl 0,1 M.
gaz ou des substances corrosives. 2. Rincer les cuves plusieurs fois leau distille. Toujours
utiliser des cuves propres pour effectuer les mesures
Inspection visuelle de lappareil dabsorbance.
Frquence : tous les six mois 3. Nettoyer avec un soin particulier les cuves ayant contenu
Le spectrophotomtre doit faire lobjet dune inspection visuelle des chantillons qui risquent de dposer un film. Certains
destine vrifier que ltat et lintgrit de ses lments fabricants recommandent dutiliser des dtergents spciaux
restent conformes aux spcifications du fabricant. Les points pour le lavage des cuves de spectrophotomtres.
les plus importants sont : Remplacement des piles
1. Vrifier que le pitement de la table qui supporte le Divers modles de spectrophotomtres utilisent des piles
spectrophotomtre est en bon tat. pour garder en mmoire les donnes associes lanalyse,
2. Vrifier ltat extrieur gnral du spectrophotomtre. comme la date et lheure. La procdure de remplacement des
Vrifier que les boutons et interrupteurs ainsi que les piles est la mme que pour les autres appareils. La procdure
fermetures mcaniques sont monts correctement et quils recommande est la suivante :
sont clairement identifis.
74
1. Vrifier que lindicateur de batterie faible apparat sur 1. Nettoyer lextrieur du spectrophotomtre, y compris les
lcran de lappareil. boutons de commande et les crans ou cadrans. On peut
2. Eteindre le spectrophotomtre. utiliser un chiffon en tissu fin (comme du tissu mouchoirs)
3. Dbrancher le cble dalimentation lectrique. humect avec de leau distille.
4. Ouvrir le logement des piles et enlever les piles uses. 2. Inspecter et nettoyer le cble dalimentation lectrique.
5. Nettoyer les contacts lectriques. 3. Vrifier que la lampe est propre et en bon tat. Si elle
6. Mettre en place de nouvelles piles ayant les mmes ne fonctionne pas, la remplacer par une nouvelle lampe
caractristiques que les piles dorigine. ayant les mmes caractristiques que la lampe dorigine.
7. Refermer le logement des piles. Avec les spectrophotomtres modernes, ltat de la lampe
8. Rebrancher lappareil. est dtect automatiquement par un logiciel de contrle
9. Rgler la date et lheure. de ltat et du fonctionnement des divers lments de
lappareil, ce qui permet de savoir quand il est ncessaire de
Remplacement de lampoule/de la lampe la changer. Remplacer la lampe et faire les rglages comme
Lampoule est un consommable dont la dure de vie est aprs tout remplacement selon les recommandations du
limite. Il faut prvoir qu un certain moment, il sera ncessaire fabricant.
de la remplacer. Soit elle grillera, soit elle prsentera une 4. Vrifier ltat du fusible de protection. Avant douvrir le
vaporation et une mtallisation internes et la lumire mise compartiment du fusible, vrifier que le spectrophotomtre
ne rpondra plus aux spcifications de fonctionnement du est teint puis vrifier que ses contacts sont propres et en
spectrophotomtre. La procdure de remplacement de bon tat. Si ncessaire, remplacer le fusible par un nouveau
la lampe varie dun modle lautre et il faut toujours se ayant les mmes caractristiques que le fusible dorigine
conformer aux instructions du fabricant. Les tapes classiques en suivant les recommandations du fabricant.
sont les suivantes : 5. Mettre lappareil en configuration de fonctionnement.
1. Vrifier que lampoule ne fonctionne pas ou quil existe des 6. Mettre linterrupteur marche/arrt sur ON et laisser chauffer
signes de dysfonctionnement. Sur les appareils rcents, lappareil pendant cinq (5) minutes. Vrifier que :
un signal ou un code derreur saffiche sur lcran. Avec les a. Les tmoins ou voyants lumineux fonctionnent.
appareils plus anciens, la lampe ne fonctionne simplement b. Les indicateurs de lecture restent sur zro (0).
plus. c. La source lumineuse fonctionne.
2. Eteindre le spectrophotomtre. 7. Effectuer un test de courant de fuite en position ON et
3. Dbrancher le cble dalimentation lectrique. OFF.
4. Dfaire les vis de fixation du couvercle du compartiment a. Vrifier le ple de mise la terre et vrifier que la
de la lampe. polarit est correcte.
5. Dfaire les vis de fixation du support de la lampe. b. Vrifier que la polarit est correcte sans mise la
6. Dfaire les vis de fixation des fils de raccordement terre.
lectrique de la lampe (sur certains modles, cette tape c. Vrifier la polarit inverse sans mise la terre.
nest pas ncessaire car la lampe est monte sur une base 8. Etalonner le panneau de contrle du spectrophotomtre
qui possde un mcanisme de raccordement direct aux selon les instructions du fabricant.
bornes de la lampe). 9. Mesurer la sensibilit de lappareil.
7. Installer une nouvelle lampe ayant les mmes 10. Faire un test suivant la loi de Beer.
caractristiques que la lampe dorigine. Porter des gants 11. Remettre le spectrophotomtre dans sa configuration
pour viter de laisser des traces de doigts sur la lampe. initiale si ltalonnage a t ralis avec succs.
8. Remettre les vis de fixation des fils de raccordement
lectrique de la lampe.
9. Remettre les vis de fixation du support de la lampe. BONNES PRATIQUES DUTILISATION DU
10. Remettre les vis de fixation du couvercle du compartiment SPECTROPHOTOMTRE
de la lampe. 1. Etalonner le spectrophotomtre chaque fois quune
11. Rebrancher le spectrophotomtre. nouvelle srie dchantillons doit tre analyse.
12. Rallumer le spectrophotomtre (interrupteur sur ON) 2. Tenir ferm le couvercle du porte-chantillons et de son
et procder au rtalonnage selon les instructions du logement pendant la mesure pour assurer une lecture
fabricant. correcte.
3. Eviter de rutiliser les cuves usage unique.
Entretien prventif 4. Utiliser uniquement des cuves en quartz pour effectuer les
Lentretien prventif (maintenance) du spectrophotomtre analyses au-dessous de 310 nm.
doit correspondre aux oprations de routine et aux frquences 5. Eviter dutiliser des cuves en plastique si on travaille avec
recommandes par le fabricant. Les procdures de base qui des solvants organiques.
peuvent tre effectues en routine au laboratoire sont les 6. Utiliser de la verrerie en verre borosilicat de qualit
suivantes : suprieure pour prparer les talons. Eviter si possible le
verre au sodium (oxyde de sodium) car le contact prolong
avec les talons pourrait le rendre permable et fausser les
rsultats.
75
7. Nettoyer soigneusement les cuves en verre aprs usage. connues de forte concentration et de vrifier les rsultats.
Jeter celles qui sont rayes sur la face transparente. Les phnomnes qui influent sur la loi de Beer sont les
8. Utiliser des ractifs de qualit suprieure. Les ractifs de suivants :
basse qualit peuvent provoquer une contamination a) Concentration leve par association molculaire
mme trs faible concentration. Les diluants utiliss (eau despces ioniques.
et solvants) ne doivent pas contenir dimpurets. b. Variation du degr dhydratation aux faibles
9. Vrifier que les chantillons ou les talons ne dgazent pas concentrations, modifiant la nature des ions
lintrieur des cuves. Ce phnomne produit des bulles complexes.
la surface interne des cuves et entrane des erreurs de c. Pour les absorptions qui ne rpondent pas la loi
lecture. de Beer, il faut tablir une reprsentation graphique
10. Tenir compte du fait que toutes les substances nobissent des rsultats obtenus avec des talons connus. On
pas la loi de Beer. Effectuer des tests de linarit sur aura ainsi une indication de la lecture en fonction
lintervalle de concentrations qui sera utilis. Il est de la concentration, ce qui permettra de relier le
recommand de prparer une srie de solutions talons rsultat obtenu pour un chantillon de concentration
inconnue aux concentrations portes sur le graphe.
76
GUIDE DE DPANNAGE
Spectrophotomtre automatique1
Le spectrophotomtre nest pas aliment en courant Linterrupteur marche/arrt est sur OFF. Mettre linterrupteur sur ON.
lectrique
La prise de courant nest pas alimente en courant Vrifier lalimentation gnrale en lectricit. Vrifier
lectrique. quun dispositif de scurit lectrique na pas saut.
Le cble dalimentation lectrique nest pas branch Brancher correctement le cble dalimentation
correctement. lectrique.
Les touches du panneau de contrle ne rpondent Linitialisation de lappareil lors du dmarrage a t Eteindre lappareil puis le rallumer.
pas. incomplte.
Une commande incorrecte a t active pendant le
dmarrage.
Le port en srie RS 232 ne rpond pas. Linitialisation de lappareil lors du dmarrage a t Eteindre lappareil puis le rallumer.
incomplte.
Le cble de raccordement est mal connect. Vrifier la connexion.
Lcran LCD est difficile lire. Le contraste est mal rgl. Rgler le contraste.
Le systme dclairage de fond a grill. Appeler le reprsentant.
Limprimante est bloque. Il y a un bourrage de papier dans limprimante. Enlever lexcdent de papier avec des pinces fines.
Eteindre limprimante, enlever le papier et rallumer
limprimante.
Lalimentation en papier de limprimante Le papier nest pas install correctement. Eteindre limprimante, remettre le rouleau de papier
ne fonctionne pas ou le papier navance pas en place.
automatiquement.
Lavant du papier nest pas align ou est froiss. Eteindre limprimante. Remettre le rouleau de papier
en place. Couper lavant du papier et raligner le
papier dans le systme dalimentation.
La commande dalimentation en papier ne rpond Appeler le reprsentant.
pas.
La cuve ne rentre pas dans le compartiment porte- La cuve nest pas de la bonne taille. Utiliser la taille de cuve spcifie par le fabricant.
chantillon.
Le mcanisme dajustement de la cuve est mal Corriger la position du mcanisme dajustement.
positionn.
La lecture est fluctuante. Il y a des interfrences sur le trajet de la lumire. Vrifier que la cuve nest pas raye.
Vrifier quil ny a pas de particules flottant dans la
cuve.
Frotter les parois optiques de la cuve avec un chiffon
propre.
Vrifier que lintervalle de travail slectionn
convient pour lchantillon analyser.
La lecture indique des valeurs ngatives. Il ny a pas Il ny a pas dchantillon. Mettre un chantillon dans la solution.
de lecture de labsorbance.
La cuve est mal positionne. Vrifier lorientation de la fentre de la cuve.
La longueur donde slectionne est incorrecte. Rgler la longueur donde sur un intervalle
compatible avec lanalyse.
Lappareil a t talonn par erreur avec un Etalonner avec une solution blanc ou de leau
chantillon la place du blanc. distille.
1 Instruction Manual, Spectrophotometer, SmartSpecTM 3000, BIO-RAD Laboratories.
77
Spectrophotomtre non automatique1

La source lumineuse ne sallume pas. Le filament est cass. Remplacer la lampe.
Le fusible a saut. Remplacer la lampe.
Le filament de la lampe prsente une rsistance. Remplacer la lampe.
La tension est errone. Vrifier le voltage. Contrler la source dalimentation
lectrique.
Le cadran ou le galvanomtre indiquent une valeur La source lumineuse est dfectueuse. Remplacer la lampe.
trop basse.
La cellule photolectrique est sale ou dfectueuse. Nettoyer ou remplacer la cellule photolectrique.
Le circuit damplification est dfectueux. Remplacer ou rparer le circuit damplification.
La tension aux bornes de la source lumineuse est Rgler le voltage.
trop faible.
Le cadran donne des valeurs instables. Le stabilisateur de la diode Zener est dfectueux. Remplacer la diode Zener.
1 Sminaire-atelier sur le fonctionnement et la maintenance des spectrophotomtres, Projet sous-rgional sur la maintenance, Accord RE-HS-02, OPS/OMS.
78
DFINITIONS
Absorption. Phnomne physique qui se produit lorsque les atomes ou les molcules dune substance absorbent de la lumire (photons). LLnergie du photon est absorbe
par une autre entit, par exemple un atome dont les lectrons de valence passent dun niveau dnergie un autre en dtruisant le photon. LLnergie absorbe est restitue
sous forme de chaleur ou de rayonnement. Labsorbance est une mesure mathmatique de labsorption, exprime en units de densit optique (DO).
Angstrm. Unit de longueur gale 10-10 m. Son symbole est . Il est utilis pour mesurer les longueurs donde des rayons X ou des rayons gamma.
Diffraction. Phnomne provoqu par un changement de direction et dintensit subi par un groupe dondes rencontrant un obstacle ou passant par une ouverture troite
dont la taille est proche de leur longueur donde.
Extinction molaire ou coefficient dabsorptivit []. Mesure de lintensit de labsorption de la lumire par une entit chimique une longueur donde dtermine.Si la
solution contient plus dune entit chimique, labsorbance est la somme des absorbances de chaque entit. LLabsorbance, une longueur donde dtermine, dun mlange
dentits X, Y ... est donne par la formule.
A 0 C x = x
C y = y
...
dans laquelle A est labsorbance du mlange.
Grille de diffraction. Elment du monochromateur. Elle diffracte la lumire et se compose dune srie de rainures parallles graves sur une surface rflchissante au moyen
de machines protges contre les vibrations et les variations de temprature. Les grilles utilises dans les spectrophotomtres sont des copies dune grille talon qui possde
habituellement plus de 1200 rainures par millimtre. La figure 31 illustre le phnomne de diffraction.
Si langle de rflexion est connu ainsi que la largeur d des rainures, la longueur donde peut tre dtermine laide de la formule :
nh
sinb
d
Intensit (IV). Quantit de lumire mise par une source dans une direction donne par unit de temps. Plus gnralement, mesure du flux moyen dnergie par unit de
temps. Pour obtenir lintensit, on multiplie lnergie par unit de volume par la vitesse laquelle lnergie se dplace. Le vecteur rsultant est lnergie par unit de surface
et par unit de temps.
Largeur de bande (ou bande passante). Intervalle de longueurs donde quun monochromateur est capable de transmettre.
Longueur donde. Distance entre les crtes dune onde. Elle dtermine la nature des diffrentes formes dnergie de rayonnement dans le spectre lectromagntique. Pour
les ondes lectromagntiques, la longueur donde en mtres se calcule en divisant la vitesse de la lumire par la frquence (nombre de pics passant en un point dtermin
par unit de temps).
Nanomtre. Unit de longueur correspondant 10-9 m (un millime de millionnime de mtre). Il est reprsent par le symbole nm. On lutilise pour mesurer les longueurs
donde de la lumire dans le visible et lultraviolet..
Rfraction. Changement de direction qui se produit quand un rayon lumineux atteint linterface entre deux milieux.
La lumire frappe linterface sous un angle a et se rfracte sous un angle b lors du changement de milieu de propagation.
Figure 30. Rfraction de la lumire
54o N a
A
sin a
n= = Indice
sin b de rfraction
Lumire
incidente Milieu N o1
O
Milieu N o2
b
Lumire
rfracte
N B
22o
79
Spectrophotomtrie. Mthode danalyse chimique base sur labsorption ou lattnuation par la matire de la lumire dune longueur donde ou dune frquence dtermine.
La lumire interagit avec certaines caractristiques de lespce molculaire analyse : la quantit de lumire absorbe dpend de la longueur donde, de la concentration de la
molcule et du trajet du rayon lumineux. On peut ainsi en dduire des proprits telles que la concentration de substances, ce qui dans le domaine de la sant sert raliser
une grande varit danalyses qui permettront de dterminer ltat de sant dun patient.
Trajet optique. Distance parcourue par la lumire visible ou ultraviolette au travers dun chantillon dans une cellule danalyse (cuve ou puits).
Figure 31. Grille de diraction
J
J
6
5
4
3
2 SinJ = n Q
d
= diffrence de longueur donde entre deux rainures adjacentes
80
Chapitre 12
Autoclaves
Code GMDN 35366 35366 35366
Code ECRI 13-746 16-141 16-142
Dnomination Unit de strilisation, Unit de strilisation, Unit de strilisation,
vapeur sur pied de paillasse
Lautoclave est un appareil utilis pour striliser. Le mot striliser 1. Nettoyage

dsigne la destruction ou llimination de toute forme de vie 2. Dcontamination
(microbiologique, y compris sous forme de spores) prsente 3. Inspection
dans des objets inanims, par des procds physiques, 4. Prparation et emballage
chimiques ou gazeux. Le mot striliser vient du latin sterilis 5. Strilisation
(qui ne porte pas de fruits). Ce chapitre traite exclusivement 6. Stockage
des autoclaves car ceux-ci sont largement utiliss dans les 7. Distribution
tablissements de sant publique, les laboratoires danalyses
mdicales et les laboratoires de recherche. Les autoclaves
sont galement appels strilisateurs la vapeur deau. La QUOI SERT UN AUTOCLAVE
strilisation doit tre considre comme un ensemble cohrent Lautoclave est un appareil destin liminer de faon fiable1 les
de processus dimportance majeure pour que les services micro-organismes qui seraient sans cela prsents sur des objets
de sant publique puissent seffectuer dans des conditions utiliss des fins de diagnostic, de traitement ou de surveillance
dasepsie rigoureuses (strilisation de matriels, de milieux de dans les tablissements de sant (hpitaux, laboratoires). Il est
culture, dinstruments). Les processus permettant dassurer la de mme largement utilis dans lindustrie alimentaire et dans
strilit dun objet inanim sont les suivants : lindustrie pharmaceutique. Au laboratoire, le matriel et autres
objets sont striliss pour :
PHOTOGRAPHIE DUN AUTOCLAVE 1. Prparer le matriel ncessaire aux cultures bactriologiques
(tubes essais, pipettes, botes de Ptri, etc.) afin dviter
quil ne soit contamin.
2. Prparer les instruments utiliss pour prlever les
chantillons. (Tous doivent tre striles : aiguilles, tubes,
rcipients).
3. Striliser le matriel contamin.
Il existe des autoclaves de diffrentes tailles. Les plus petits

sont de type pour paillasse et les plus grands sont des appareils
complexes qui ncessitent une prinstallation soigneuse. Le
volume de la cuve de strilisation est pris comme rfrence
et est mesur en dcimtres cubes (dm3) ou en litres (l). Cest
ce volume qui dtermine la taille de lautoclave. Selon le
Photo avec l aimable autorisation de Systec GmbH
mode de contrle du fonctionnement des autoclaves, ceux-ci

peuvent se classer en modles manuels, semi-automatiques
ou entirement automatiques.
1 La Food and Drug Administration (FDA) classe la strilit dun article en se

basant sur des tudes statistiques. Un article est considr comme strile
si la probabilit de le rencontrer sous forme non strile dans une srie
darticles soumis au mme processus de strilisation est infrieure un sur
un million. Cet indice est appel Sterility Assurance Level (SAL) et dcrit le
potentiel thorique dinactivation microbienne au cours dun processus de
strilisation.
81
C H A P I T R E 12 AU TO C L AV E S
Les autoclaves utilisent les proprits thermodynamiques de Les autoclaves utilisent la vapeur sature sous pression (avec
leau, qui peut tre considre comme une substance pure. un titre en vapeur suprieur 98 %) pour transmettre de
Dans les conditions normales (au niveau de la mer et sous lnergie thermique aux lments striliser. Cette mthode est
une pression de 1 atmosphre), leau (en phase liquide) bout gnralement appele strilisation par la vapeur ou strilisation
et se transforme en vapeur (phase gazeuse) 100 C. Si la par la chaleur humide. Cette mthode est principalement utilise
pression diminue, leau bout une temprature plus basse. Si pour son efficacit, sa rapidit et son faible cot. Cependant,
la pression augmente, elle bout une temprature plus leve. tout ne peut pas tre strilis par la chaleur humide. Pour les
En contrlant la pression de la vapeur deau, lautoclave peut, lments craignant la chaleur et lhumidit, dautres mthodes
dans sa cuve hermtique, atteindre des tempratures dpassant de strilisation ont t labores. Au laboratoire, on utilise les
100 C ; inversement, en contrlant la temprature, il peut autoclaves vapeur et les tuves fonctionnant la chaleur
atteindre des pressions suprieures la pression atmosphrique. sche (en labsence dhumidit). Voir le chapitre 13 : Etuve.
Les graphiques ci-dessous montrent le comportement de leau
dans diverses conditions de temprature et de pression.
Courbe temprature/volume Courbe pression/temprature
Point Courbe de fusion

critique Phase liquide Point critique
P3
D H H
P2
Temprature
Phase
Pressure
solide Courbe de vaporisation

Courbe de
vapeur sature
G G Phase vapeur
B P1 C
Courbe de E E
liquide satur Courbe de sublimation
A
Temprature
Volume
1. Ce graphique montre deux courbes dfinies : la courbe de liquide satur 1. Ce graphique montre le comportement de leau et les relations entre les
(courbe de gauche) et la courbe de vapeur sature (courbe de droite). phases solide, liquide et gazeuse selon les conditions de temprature et de
pression.
2. Lorsque la pression augmente, la temprature augmente aussi. (Voir les lignes 2. La courbe de sublimation montre que dans des conditions dtermines,
P1, P2, P3, avec P3 > P2 > P1. si de la chaleur est transfre la phase solide, celle-ci peut se transformer
directement en phase vapeur (segment E-E) sans passer par la phase liquide.
3. A gauche de la courbe de liquide satur, leau se trouve ltat liquide 3. La courbe de fusion montre que dans des conditions dtermines, lorsquil y a
(segment A-B). Lorsquil y a transfert de chaleur, la temprature du liquide transfert de chaleur vers leau, la phase solide se transforme en phase liquide et,
augmente, passant de la temprature A la temprature B. si le transfert de chaleur se poursuit, en phase vapeur (segment H-H).
4. Entre la courbe de liquide satur et la courbe de vapeur sature (segment B-C), 4. La courbe de vaporisation montre dans quelles conditions de temprature
il y a un mlange de phase liquide et de phase vapeur, et la temprature reste leau passe de la phase liquide la phase vapeur.
constante. Plus on se rapproche du point C, plus le titre en vapeur est lev1.
5. A droite de la courbe de vapeur sature, toute leau se trouve en phase vapeur 5. Le point dintersection des trois courbes est appel point triple. Dans ces
(segment C-D). conditions, les trois phases coexistent en quilibre.
1 Titre en vapeur [X]. Relation entre la masse de vapeur et la masse totale (masse de liquide plus masse de vapeur). Quand le titre en vapeur est gal 1, cela signifie
que la vapeur est sature et que toute augmentation de temprature la surchauffera.
82
Coupe transversale dun autoclave vapeur 5. Poigne de la porte. Dispositif qui, sur certains appareils,
La figure 32 montre les principaux lments du systme de permet loprateur douvrir et de fermer la porte. En
vapeur dun autoclave. Pour une meilleure lisibilit, les parties gnral, les autoclaves de grand volume ont une porte
normalement situes autour de lautoclave (leur emplacement actionne par un dispositif motoris.
exact dpend du fabricant) ont t reprsentes au-dessus et 6. Cuve de strilisation. Aussi appele chambre de
au-dessous du corps de lautoclave. strilisation. Espace o les objets ou matriels striliser
sont dposs. Lorsque la porte est ferme, la cuve est isole
+LZJYPW[PVUKLZtStTLU[ZN\YHU[Z\YSLZJOtTH de lextrieur. Lorsque le processus de strilisation est en
On trouvera ci-dessous une description succincte des lments cours, lespace est occup par de la vapeur sous pression.
les plus courants du circuit de vapeur dun autoclave. Les 7. Tuyau dvacuation du liquide de condensation de
numros de la liste ci-dessous correspondent ceux de la la cuve. Conduite qui permet de recueillir le liquide de
figure 32. Il est noter que la configuration de ces lments condensation qui se forme dans la cuve de strilisation par
varie selon le modle et le fabricant. suite du transfert de chaleur entre la vapeur et les objets
1. Soupape de scurit. Dispositif qui empche la pression striliser.
de vapeur de dpasser une valeur dtermine. Les 8. Thermomtre. Instrument qui indique la temprature
fabricants installent une soupape de scurit dans la cuve laquelle le processus de strilisation seffectue lintrieur
de strilisation et dans la double enveloppe. de la cuve de lautoclave.
2. Manomtre de la cuve. Dispositif mcanique qui 9. Tuyau dvacuation du liquide de condensation de
indique la pression de vapeur lintrieur de la cuve de la double enveloppe. Conduite permettant dvacuer
strilisation. le liquide de condensation qui se forme lintrieur de la
3. Manomtre de la double enveloppe (jauge de pression. double enveloppe par suite du transfert de chaleur entre
Dispositif mcanique qui indique la pression de vapeur la vapeur et les parois de la double enveloppe.
lintrieur de la double enveloppe de lautoclave. 10. :V\WHWLKt]HJ\H[PVUKLSH]HWL\YLUUKLJ`JSL
4. Porte de lautoclave. Dispositif qui permet la cuve de Lorsquun cycle de strilisation est achev, la vapeur est
strilisation dtre isole de lenvironnement extrieur. vacue de lautoclave selon des procdures contrles.
Elle possde normalement des dispositifs de scurit qui 11. Rducteur du tuyau dvacuation de la vapeur
empchent de louvrir lorsque la cuve est sous pression. Elle pour les cycles de strilisation de liquides. Dispositif
est galement munie de joints qui empchent la vapeur de mcanique qui limite le passage de la vapeur pendant un
sortir de lappareil pendant le fonctionnement. Les portes cycle de strilisation de produits liquides pour permettre
de lautoclave peuvent tre actionnes manuellement ou la temprature de baisser de faon contrle et dempcher
par un systme lectromcanique. les liquides striliss de bouillir.
Figure 32. Circuit de vapeur dun autoclave
1. Soupape de scurit 10. Soupape dvacuation de la vapeur en n de cycle

1
2. Manomtre de la cuve 11. Rducteur du tuyau dvacuation de la vapeur
pour les cycles de strilisation de liquides
3. Manomtre de la double enveloppe 2 3 12. Tuyau dvacuation de la vapeur pour
les cycles de strilisation de liquides
4
4. Porte de lautoclave 13. Tuyau dvacuation de la vapeur pour
les cycles de strilisation rapide
5. Poigne de la porte 14. Conduite dalimentation de la cuve en vapeur
6. Cuve de strilisation 15. Robinet dadmission dair avec ltre

7. Tuyau dvacuation du liquide
de condensation de la cuve 16. Double enveloppe
8. Thermomtre 5 6 17. Vanne de rgulation de ladmission de vapeur

9. Tuyau dvacuation du liquide de condensation
de la double enveloppe 18. Conduite dalimentation en vapeur
# Electrovannes
19. Pige vapeur
20. Tuyau de vidange
83
12. Tuyau dvacuation de la vapeur pour les cycles de dalimentation en vapeur relis une chaudire centrale ou
strilisation de liquides. Trajet suivi par la vapeur lors leur propre gnrateur de vapeur. Ces derniers fonctionnent en
dun cycle de strilisation de produits liquides, en passant gnral avec des rsistances lectriques et sont dj intgrs
par le rducteur dcrit ci-dessus. lappareil ou fournis comme accessoires par le fabricant.
13. Tuyau dvacuation de la vapeur pour les cycles de
strilisation rapide. Trajet suivi par la vapeur lors dun
cycle de strilisation rapide. UTILISATION DE LAUTOCLAVE
14. Conduite dalimentation de la cuve en vapeur. On trouvera ci-dessous le mode demploi gnral des
Conduite qui alimente lautoclave en vapeur. Cette autoclaves. Certaines procdures pourront varier selon le
conduite possde des commandes et des accessoires qui degr dautomatisation de lappareil.
permettent la vapeur datteindre lautoclave dans les 1. Vrifier que le systme denregistrement est muni des
conditions stipules pour le cycle de strilisation. formulaires et/ou du papier ncessaires pour documenter
15. Robinet dadmission dair avec filtre. Dispositif le droulement du cycle de strilisation. Renouveler tout
permettant lentre dair filtr la fin du cycle de lment manquant (encre, formulaires, etc.).
strilisation. Il sert quilibrer la pression de la cuve de 2. Mettre lautoclave sur ON.
strilisation avec celle de latmosphre. 3. Ouvrir la porte de lautoclave. Dans les autoclaves de
16. Double enveloppe. Espace entourant la cuve de grand volume, cette opration se fait par un processus
strilisation et dans lequel circule de la vapeur. Ce lectromcanique. Elle est souvent manuelle dans les
systme sert transfrer la chaleur la cuve et rduire autoclaves de moyen et faible volume.
la condensation. La double enveloppe est relie la cuve 4. Mettre dans la cuve les paniers ou les rcipients de
et au tuyau de vidange par des conduites contrles par strilisation contenant le matriel prpar au pralable
des lectrovannes. Tous les autoclaves ne possdent pas (nettoy, lav, sch, class et emball), selon les
une double enveloppe. Certains fabricants la remplacent recommandations du fabricant concernant la rpartition
par des rsistances disposes autour de la cuve de des objets striliser.
strilisation. 5. Fermer la porte de lautoclave1.
17. Vanne de rgulation de ladmission de vapeur. 6. Slectionner le cycle de strilisation requis en fonction
Dispositif mcanique qui contrle la pression laquelle du type dobjets ou de matriels striliser2. En gnral,
la vapeur pntre dans lautoclave. Selon le cycle choisi, on appuie sur un bouton correspondant au cycle voulu et
la pression et la temprature seront diffrentes. Plus la celui-ci dmarre automatiquement. A partir de ce moment,
pression sera forte, plus la temprature sera leve. Moins le processus se droule comme suit3.:
la pression sera forte, moins la temprature sera leve. a) La phase de prtraitement commence. Au cours
18. Conduite dalimentation en vapeur. Conduite qui de cette phase, des cycles courts dvacuation et
transporte la vapeur de la chaudire ou du gnrateur de dinjection de vapeur dans la cuve de strilisation
vapeur lautoclave. se succdent de faon extraire lair et striliser
19. Pige vapeur. Dispositif destin exploiter au maximum lemballage protecteur des objets.
lnergie thermique de la vapeur. Il a pour fonction b) Lorsque lair a t limin, le remplissage et la
dempcher la vapeur de schapper du systme. Le pige pressurisation de la cuve commencent. A ce moment,
permet uniquement la sortie du liquide de condensation la vapeur entre en contact avec les objets striliser
form dans la cuve, la double enveloppe et les tuyaux de et un processus de transfert de la chaleur se met
lautoclave. en place entre la vapeur haute temprature et
20. Tuyau de vidange. Tuyau de collecte et dvacuation du les articles striliser. Lors du transfert dnergie
liquide de condensation produit dans lautoclave. thermique, une partie de la vapeur se condense
et se transforme en eau liquide dans les couches
Actuellement, les autoclaves utilisent des systmes contrls extrieures du matriau demballage, en perdant
par microprocesseurs et tous les accessoires, vannes et une partie importante de son volume. On peut alors
soupapes sont actionns selon un programme prtabli faire entrer davantage de vapeur dans la cuve de
enregistr en mmoire. Un systme denregistrement garde strilisation, o elle pntrera encore plus dans les
en mmoire toutes les oprations, ce qui permet de contrler emballages des articles. A la fin, la vapeur environne
les diffrentes tapes de la strilisation. Tous les fabricants compltement les articles striliser, et la pression
intgrent dans leurs autoclaves un systme denregistrement, et la temprature de fonctionnement stablissent.
lment indispensable pour le contrle de la qualit. c) Une fois ces conditions obtenues, le temps effectif
de strilisation (en fonction du type dobjets ou de
Production de vapeur. La vapeur utilise par les autoclaves
est produite dans des dispositifs qui transfrent de lnergie
thermique leau grce lnergie lectrique ou lnergie 1 Avant de charger lautoclave, on met la double enveloppe sous pression
produite par les combustibles fossiles. Ce sont les chaudires pour que lintrieur de la cuve soit chaud, afin de rduire la formation de
liquide de condensation au dbut du cycle de strilisation.
ou gnrateurs de vapeur et ils constituent un lment 2 Voir plus loin les informations sur les cycles de strilisation.
fondamental de lautoclave. Selon leur capacit et leur 3 La procdure dcrite concerne un cycle typique de strilisation dans un
autoclave quip dun systme dvacuation actionn par une pompe
frquence dutilisation, les autoclaves ont des systmes lectro-hydraulique.
84
matriel striliser) commence. Plus la temprature Contrle de qualit

et la pression sont leves, plus le temps ncessaire Pour quun produit soit considr comme strilis, il faut
la strilisation est court. vrifier que toutes les tapes du processus de strilisation ont
d) Une fois que la dure de strilisation programme t effectues correctement. Pour ce faire, des tests ont t
est atteinte, un processus de post-traitement se met dvelopps pour valuer les caractristiques du processus
en route. Il comporte dabord une dpressurisation et son influence sur lactivit des micro-organismes. Des
de la cuve, normalement ralise avec laide du valuations de la temprature, de la pression, du temps, de
systme dvacuation et de schage qui utilise la lhumidit et du comportement gnral de lappareil sont
chaleur transfre de la double enveloppe la cuve ralises pour certifier quil fonctionne conformment aux
de strilisation. En faisant baisser la pression, on procdures qui ont dmontr sa validit et sa fiabilit. Il existe
atteint la temprature laquelle svaporera tout aussi des tests ou des indicateurs qui permettent de certifier
rsidu du liquide qui aurait pu se former sur les objets que tous les micro-organismes sont dtruits afin de garantir la
pendant la dpressurisation. On descend jusqu un qualit du processus de strilisation. Diffrentes catgories de
vide gal 10 % de la pression atmosphrique, que tests ont t labores, dont les suivantes :
lon maintient pendant un certain temps. Lorsquon 1. Indicateurs de processus de strilisation. Ils
strilise des liquides, on ne fait pas le vide, mais on servent surveiller le fonctionnement des autoclaves.
vacue la vapeur de faon contrle au moyen dun Des instruments contrlent des paramtres comme la
rducteur pour viter quune bullition se produise temprature, le temps et la pression (thermomtres,
dans les rcipients autoclavs. manomtres, chronomtres) et enregistrent le
e) Enfin, on laisse entrer lair par des robinets munis de droulement du processus. Les systmes denregistrement
filtres haute efficacit jusqu ce que la pression des autoclaves modernes (microprocesseurs) enregistrent
dans la cuve de strilisation sgalise avec la pression tous les paramtres du cycle de strilisation et stoppent le
atmosphrique. Le cycle de strilisation est alors cycle si une anomalie est dtecte. Le test de Bowie-Dick
achev. entre galement dans cette catgorie : il value lefficacit
7. Ouvrir la porte de lautoclave. de la pompe dextraction au moyen dune feuille de test
8. Sortir le matriel strilis. qui change de couleur uniformment si le processus a
9. Refermer la porte de lautoclave une fois le matriel enlev, t effectu de faon satisfaisante. Si ce nest pas le cas, la
pour conserver la chaleur lintrieur de la cuve et faciliter couleur est irrgulire.
le cycle de strilisation suivant. 2. Indicateurs chimiques. Ce sont des tests chimiques
10. Ranger de faon approprie le matriel strilis. classiques avec changement de couleur ou dtat lorsque
les ractifs sont exposs aux diffrentes tapes du processus
Note : Les cycles de strilisation doivent tre surveills et soumis de strilisation. Les indicateurs chimiques permettent de
des tests de contrle de la qualit au moyen dindicateurs distinguer des articles soumis ou exposs un processus de
physiques, chimiques et biologiques afin dassurer quils sont strilisation russi des articles pour lesquels la strilisation
efficaces. na pas abouti. Parmi les plus connus figurent les rubans
adhsifs ou les bandelettes que lon dpose dans un
produit ou sur un emballage. La norme ISO N 11140-1
dcrit les catgories dindicateurs chimiques. Il ne faut pas
oublier que les indicateurs chimiques par eux-mmes ne
garantissent pas que le processus de strilisation rpond
toutes les spcifications : le personnel qui les utilise
doit recevoir une formation dtaille pour tre capable
Cycles de strilisation de dterminer si le rsultat obtenu est cohrent avec le
Le processus de strilisation se droule selon des cycles droulement de lensemble du processus de strilisation.
prdfinis correspondant au type darticles striliser. Il existe 3. Indicateurs biologiques. On considre quil sagit
des cycles diffrents pour les matriaux poreux, les instruments de la meilleure mthode pour contrler la qualit du
chirurgicaux, les liquides, et les matriels sensibles la chaleur. processus de strilisation. Ces indicateurs se composent
Les principaux, qui sont des cycles de strilisation des fins de micro-organismes vivants qui ont une rsistance
cliniques, seffectuent dans les conditions suivantes : 121 C/1,1 leve un processus de strilisation dtermin, ou de
kg/cm2 ou 134 C/2,2 kg/cm2. Le tableau de la page suivante ractifs chimiques qui ragissent en prsence de protines
indique leurs principales caractristiques. spcifiques de ce type de micro-organisme. Pour contrler le
processus de strilisation par la vapeur sature, le peroxyde
Note : La dure des cycles de strilisation est ajuste en dhydrogne ou le formaldhyde, on utilise gnralement
fonction de laltitude du lieu o lautoclave est install. Les des spores de Bacillus stearothermophilus. Pour contrler la
fabricants fournissent des tableaux de la compensation strilisation par la chaleur sche (processus qui seffectue
effectuer. En rgle gnrale, plus laltitude du lieu est leve, dans une tuve) et par loxyde dthylne, on utilise des
plus la dure de strilisation doit tre longue. spores de la varit Nigerr de Bacillus subtilis. Les spores
indicatrices sont places sur lobjet striliser. Aprs le
85
Matriel Temprature Pression (kg/

Cycle N Courbe type1
striliser (C) cm2)
1 t $IBSHFT 135 2,2
poreuses (+)
Pression/temprature
t 5FYUJMFT
t *OTUSVNFOUT
emballs 135o C, 7 min
t 5VCFT C
Pression
atmosphrique Temps
1 2 3 5
D
A < 50mb, 5 min
(-)
2 t *OTUSVNFOUTOPO 135 2,2

emballs
(+)
t 6TUFOTJMFT
Pression/temprature
135o C, 4 min
t 7FSSFSJF
t 3DJQJFOUT C
ouverts 4
Pression
atmosphrique
1 2 3 5 D
A < 50mb, 2 min
(-)
3 t 1SPEVJUT 121 1,1 (+)

thermosensibles
t $BPVUDIPVD
Pression/temprature
t 1MBTUJRVF
121o C, 20 min
4
Pression
atmosphrique Temps
1 2 3 5 D
A < 50mb, 5 min
(-)
4 t -JRVJEFTEBOT 121 1.1 121o C, 20 minTemps

des rcipients (+)
ouverts ou
Pression/temprature
semi-ferms .(*)
Pression
atmosphrique Temps
(-)
Convention A : Prtraitement. Alternance de cycles de vide et dinjection de vapeur.

(Processus 1, 2, 3).
Process 4 : Strilisation.
C : Post-traitement (Processus 5 : vide et schage).
D : Pressions interne et externe totalement quilibres.
Note : Le processus pour les produits liquides ne comporte pas de phase de vide aprs la strilisation. Le refroidissement est naturel.
1 Les courbes prsentes ici correspondent un autoclave avec pompe de vidange, de marque Getinge GE-660.
(*) Le temps de strilisation dpend du volume de la charge. Il ny a pas de vide pendant le refroidissement.
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processus de strilisation, elles sont incubes et analyses modle dautoclave, il faudra prvoir un amnagement
et on dtermine si le cycle a satisfait aux spcifications. En complmentaire pour assurer son bon fonctionnement. Le
gnral, on observe un changement de couleur. Ces tests schma de la figure 33 montre lespace ncessaire autour
sont standardiss et les fabricants indiquent comment de lautoclave. A proximit immdiate de lappareil en
les utiliser et en interprter les rsultats. Les indicateurs fonctionnement, la temprature peut dpasser 70 C. Le
biologiques par eux-mmes ne garantissent pas que le plancher doit tre bien horizontal et ralis en matriaux
processus de strilisation rpond toutes les spcifications. rsistants la chaleur et lhumidit.
Pour sen assurer, il faut contrler tous les paramtres du 2. Une prise de courant capable de supporter la consommation
cycle de strilisation. lectrique de lappareil. Si lautoclave est autonome, cest-
-dire sil possde son propre gnrateur de vapeur, le
Frquence des procdures de contrle de la qualit branchement lectrique doit tre tudi en dtail car la
Le tableau ci-dessous rcapitule les frquences recommandes puissance ncessaire pourrait tre nettement augmente.
en ce qui concerne lutilisation des indicateurs de contrle de La puissance ncessaire pour que le gnrateur de vapeur
la qualit des processus de strilisation. fonctionne est en gnral de 21, 38 ou 48 kW et mme plus.
La prise doit tre quipe des lments de scurit et de
protection requis. Les autoclaves ncessitent en gnral
Type dindicateur Frquence dutilisation une alimentation en 220 V/60 Hz ou en courant triphas
De processus Lors de chaque cycle de strilisation. 380 V/60 Hz.
3. Une prise deau capable de supporter la consommation
Chimique Dans chaque emballage.
de lappareil en volume et en pression : plus la capacit
Biologique Une fois par semaine, sur tout le matriel de lautoclave est grande, plus la consommation deau
de strilisation ; dans les emballages qui sera importante. Leau alimentant lautoclave devra
contiennent des implants.
tre traite pour liminer les solides en suspension, qui
pourraient nuire au fonctionnement des lectrovannes et
des dispositifs lectro-hydrauliques.
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION 4. Certains strilisateurs ncessitent une alimentation en air
Pour que lautoclave fonctionne correctement, les conditions comprim car leurs commandes sont rgies par la pression.
suivantes doivent tre remplies : En gnral, la pression ncessaire varie entre 5 105 et
1. Un espace bien ventil permettant dvacuer la chaleur 9,9 105 Pa. Le schma ci-dessous montre linstallation
et lhumidit gnres pendant le fonctionnement minimum (vanne darrt, filtre et manomtre).
de lappareil. Il faut galement un espace libre larrire et 5. Un systme de vidange conu pour recueillir leau
sur les cts de lappareil pour la maintenance technique. chaude.
Cet espace doit tre dau minimum 0,80 m. Selon le
Figure 33. Espace ncessaire autour de lautoclave
Espace libre
0,80 m
Figure 34. Alimentation en air comprim
0,80 m 0,80 m Arrive dair comprim
Matriau isolant
Autoclave
Vers lautoclave
Vanne darrt
Avant de Manomtre
lautoclave Filtre
87
6. Une alimentation en vapeur. Si lautoclave ne possde pas 7. Vrifier labsence de fuites de vapeur dans chacun des
son propre gnrateur de vapeur, il doit tre aliment par le systmes en fonctionnement dans lautoclave.
systme central de production de vapeur de ltablissement 8. Nettoyer le devant de lautoclave, les commandes, les
(salle des machines, chaudire). Linstallation doit indicateurs et les poignes avec un chiffon humide.
rpondre aux spcifications requises : vanne darrt, filtre
et manomtre ainsi quune installation approprie pour Entretien hebdomadaire
recueillir le condensat avec un filtre et un pige vapeur, Responsable
p : oprateur
p de lappareil
pp
comme indiqu sur la figure 35. 1. Nettoyer le filtre de vidange de la cuve de strilisation.
Enlever tous rsidus pouvant sy trouver.
2. Nettoyer lintrieur de la cuve de strilisation avec des
Figure 35. Alimentation en vapeur produits de nettoyage ne contenant pas de chlore. Nettoyer
galement les glissires servant mettre les paniers.
3. Nettoyer avec une solution dacide actique, si on doit
Arrive de vapeur
Vanne darrt striliser des solutions chlores. Le chlore est corrosif
mme pour les implants en acier inoxydable. Rincer ensuite
Manomtre grande eau.
4. Nettoyer les surfaces extrieures inoxydables avec un
Vers lautoclave dtergent doux. On peut utiliser un solvant comme le
Filtre chlorure dthylne, en vitant de toucher les surfaces
peintes, les marquages et les revtements en matire
Condenseur
plastique.
Pige vapeur 5. Dans les autoclaves ayant des portes ouverture manuelle,
Alternative : conduite de vapeur au sol vrifier que les mcanismes douverture et de fermeture
sont bien ajusts et fonctionnent sans -coups.
6. Vidanger le gnrateur de vapeur (si lappareil en possde
un). Pour cela, ouvrir un robinet situ au bas du gnrateur
7. Lautoclave doit tre utilis exclusivement par un personnel et qui permet den vidanger le contenu. En gnral, cette
qualifi spcialement form ces types de procdures. vidange seffectue la fin de la semaine de travail. Suivre
les recommandations du fabricant.
7. Ne jamais utiliser de laine dacier pour nettoyer lintrieur
ENTRETIEN DE ROUTINE de la cuve de strilisation.
Lautoclave est un appareil qui ncessite une surveillance et 8. Vrifier le fonctionnement adquat de lautoclave au
un entretien prventif permanents en raison des nombreux moyen dun indicateur biologique ou chimique. Pour
lments et systmes qui le composent. Lentretien comporte vrifier la temprature, utiliser des bandelettes temps-
essentiellement des oprations de routine simples qui peuvent temprature vendues dans le commerce, qui permettent
tre effectues par les oprateurs. Pour un entretien plus de contrler la dure et la temprature dexposition.
complexe, on se conformera aux instructions figurant dans le
manuel dutilisation fourni par le fabricant. Entretien trimestriel
Responsable
p : technicien de maintenance
Contrles quotidiens 1. Vrifier que les manomtres fonctionnent comme prvu.
Avant de dmarrer les processus de strilisation, il faut procder 2. Actionner les soupapes de scurit la main pour vrifier
aux vrifications suivantes : leur bon fonctionnement. Utiliser un gros tournevis pour
1. Mettre un nouveau formulaire dans lenregistreur pour actionner le levier dactivation de la soupape, normalement
documenter le droulement du cycle de strilisation. situ dans la partie suprieure de celle-ci. Faire attention
2. Vrifier que le stylo de lenregistreur ou le module de tenir le visage et le corps en dehors du trajet de la
dimpression de lautoclave ont de lencre et quil y a du vapeur. Lorsque la soupape est en action, vrifier quil ny
papier. a pas de fuites de vapeur. Sil y a des fuites, la soupape
3. Vrifier que les robinets dalimentation en eau froide, en doit tre actionne nouveau jusqu ce quelle soit bien
air comprim et en vapeur sont ouverts. hermtique.
4. Actionner linterrupteur de mise en route du chauffage
de la double enveloppe. La vapeur pntrera alors dans
la double enveloppe de la cuve de strilisation. Lorsque la
vapeur pntre dans la cuve de strilisation, le processus
de chauffage commence. Pour viter les pertes de chaleur,
tenir la porte de lautoclave ferme jusquau moment dy
introduire la charge striliser. 3. Lubrifier le joint dtanchit de la porte. Utiliser le lubrifiant
5. Vrifier que la pression de la conduite dalimentation en et la procdure recommands par le fabricant. Certains
vapeur est au moins gale 2,5 bars. fabricants recommandent la procdure suivante :
6. Vrifier ltat des manomtres et des thermomtres. a) Enlever le joint dtanchit. Pour cela, il est ncessaire
88
de le sortir de sa rainure en desserrant les lments qui d) Dconnecter les bornes des rsistances chauffantes
le maintiennent en place (vis et plaques). (thermoplongeurs).
b) Nettoyer le joint et la rainure avec de lalcool de faon e) Enlever les vis qui maintiennent le panneau avant o
ce quaucune matire trangre ne puisse nuire sont installes les rsistances et dmonter le panneau
ltanchit. La surface du joint doit tre lisse et avant.
propre. f) Contrler le joint dtanchit et le remplacer si
c) Appliquer le lubrifiant recommand par le fabricant ncessaire.
sur lensemble du joint jusqu ce quil soit entirement g) Enlever les dpts accumuls la surface des
protg. De nombreux fabricants dautoclaves rsistances chauffantes. Utiliser les produits
utilisent un lubrifiant au graphite rsistant aux hautes recommands1.
tempratures. h) Remonter lappareil en procdant dans lordre
d) Remettre le joint en place. Dans les autoclaves cuve inverse.
rectangulaire, on commence par glisser le joint dans
sa rainure au milieu dun des cts puis on procde La figure 36 reprsente le gnrateur de vapeur et ses
de proche en proche jusqu ce que le joint soit lments.
entirement insr dans sa rainure sur ce ct. On
recommence de mme pour les trois autres cts. Entretien annuel
Dans les autoclaves cuve ronde, on introduit le Responsable
p : technicien de maintenance
joint dans la rainure en commenant par le haut 1. Nettoyer tous les filtres.
puis on procde de proche en proche, sans tirer sur 2. Contrler et ajuster le niveau deau du rservoir jusqu ce
le joint, jusqu ce quil soit entirement insr dans quil se trouve environ 20 mm du niveau maximum.
sa rainure. On remet alors en place les lments qui 3. Contrler et ajuster la tension des ressorts des soupapes
le maintiennent en place diaphragme.
4. Vrifier que les joints des soupapes de scurit sont en bon 4. Dmonter, nettoyer et ajuster les soupapes de scurit.
tat. 5. Changer le filtre air.
5. Nettoyer les pointes de lenregistreur avec de leau ou de 6. Effectuer un test gnral du processus de strilisation,
lalcool et complter les niveaux dencre. En gnral, la avec contrle dtaill de la pression, de la temprature,
pression est enregistre lencre rouge et la temprature du temps ncessaire pour chaque tape du cycle, de
lencre verte. ltat des lampes tmoins du droulement du processus,
6. Nettoyer lintrieur du gnrateur de vapeur (pour et du fonctionnement de lenregistreur. Vrifier que tous
les autoclaves qui en possdent un). Procder comme les paramtres de fonctionnement se situent dans les
suit : tolrances dfinies par le fabricant.
a) Dbrancher lappareil. 7. Effectuer les contrles trimestriels de routine.
b) Faire tomber la pression de vapeur et attendre que
lappareil soit revenu la temprature ambiante.
c) Enlever le panneau avant du gnrateur.
1 Il se forme des dpts de tartre lorsque leau utilise par le gnrateur de

vapeur na pas t traite comme il convient.
Figure 36. Gnrateur de vapeur
Tuyau dvacuation de la vapeur
Jauge de niveau deau Flotteur
Bornes des rsistances Rsistances immersion
Couvercle du gnrateur de vapeur
Bride de montage
des rsistances Tuyau darrive deau
Tuyau de vidange du gnrateur de vapeur
89
C H A P I T R E 12 AU TO C L AV ES
MAINTENANCE DES LMENTS SPCIALISS 5L[[V`HNLK\S[YLn]HWL\Y

Les oprations ci-dessous doivent tre confies un technicien
de maintenance et sappliquent certains lments de
lautoclave. Etant donn quil existe une grande varit de
modles, les procdures dcrites ici ne sappliquent qu
certains appareils. 1. Soulever le couvercle.
2. Enlever le filtre.
Entretien des lectrovannes 3. Le nettoyer soigneusement.
1. Contrler le son produit par les bobines ou solnodes 4. Remettre le filtre.
(bourdonnement). Un bruit excessif est le signe dune 5. Remettre le couvercle.
surchauffe due au passage de courants lectriques
anormalement intenses dans le solnode. Le courant On trouvera ci-aprs une liste des problmes les plus frquents.
alternatif augmente lorsque limpdance du circuit (Z) Etant donn la diversit des marques, des modles et de la
diminue. Cela se produit lorsque le solnode nest pas technologie utilise, il est conseill de suivre les instructions
correctement enferm dans une cage de fer. Il peut se qui figurent dans le manuel dutilisation de lautoclave.
crer un entrefer dans le circuit magntique lorsquun
encrassement empche la cage protectrice de prendre sa
position dfinitive lorsque le solnode est sous tension.
Nettoyer soigneusement le logement de la bobine et son
noyau de faon ce que la course du piston ne soit pas
entrave par des impurets.
2. Remplacer les joints toriques entre le solnode et le corps
de la vanne aprs les avoir dmonts.
3. Avant tout dmontage, vrifier comment llectrovanne
est monte. Certaines vannes possdent des instructions
de montage claires mais dautres en sont dpourvues.
4. Lors du dmontage dune lectrovanne asservie, contrler
la position des orifices de connexion lenvironnement de
travail, de faon pouvoir la remonter.
90
GUIDE DE DPANNAGE
Lindicateur de strilisation nindique pas que le cycle La cuve de strilisation est charge de faon Contrler la rpartition et le volume de la charge.
de strilisation a correctement abouti. incorrecte ou est surcharge. Suivre les recommandations du fabricant.
Le pige vapeur est dfectueux. Contrler le pige vapeur. Le rparer ou le
remplacer.
Le temps de strilisation est insuffisant. Vrifier le temps de strilisation. Corriger en fonction
du type de cycle.
Lautoclave natteint pas la temprature et la pression Vrifier la temprature slectionne. Vrifier que la
de strilisation slectionnes. pression de vapeur correspond au cycle slectionn.
Rechercher une ventuelle fuite de vapeur au niveau
du joint de la porte ou des dispositifs de contrle du
passage de la vapeur.
La pntration de la vapeur est insuffisante. Rduire la quantit de paquets striliser, pour que
la vapeur circule mieux.
Le prtraitement est inadquat. Il reste trop dair Appeler le service technique pour faire contrler le
dans la cuve. systme dvacuation.
Lindicateur biologique ne convient pas pour le cycle Contrler les spcifications de lindicateur biologique.
effectu. Rpter le cycle de strilisation.
Le cycle de strilisation est interrompu sans raison Pression de vapeur, deau ou dair insuffisante. De ce Contrler la pression de la vapeur, de leau et de lair
apparente. fait, les rgulateurs et dispositifs de contrle asservis entrants. Ajuster les systmes de rgulation.
ne sont pas activs.
Les objets striliss sont humides. Le pige vapeur est dfectueux. Contrler et nettoyer le pige vapeur. Remplacer le
pige vapeur.
Le tuyau de vidange de la cuve de strilisation est Contrler le systme de vidange. Le nettoyer.
bouch.
Lautoclave est surcharg. Rduire la charge introduite dans la cuve. Rpter le
cycle de strilisation.
Lautoclave nest pas de niveau. Mettre lautoclave de niveau.
Lindicateur biologique est positif. Lindicateur biologique a t incorrectement Utiliser un indicateur biologique dun autre lot ou
slectionn. dun autre fabricant. Enregistrer soigneusement les
paramtres.
La pression de vapeur est trop faible. Le joint dtanchit de la porte est dfectueux. Contrler le joint. Le remplacer.
La vapeur de lintrieur fuit vers un autre lment de Contrler les piges, lectrovannes, etc.
lautoclave.
La pression de vapeur est trop forte. Lautoclave est surcharg avec des produits textiles. Rduire la charge de lautoclave.
Lautoclave nest pas talonn. Etalonner lautoclave.
91
DFINITIONS
Asepsie. Ensemble de procdures ncessaires pour liminer les micro-organismes.
Atmosphre. Ancienne unit de pression quivalente 101 325 Pa (Pascals).
Bar. Unit de pression quivalente 105 Pa (Pascals).
Chaleur humide.Mthode de strilisation qui limine les micro-organismes par dnaturation des protines, processus acclr par la prsence de vapeur deau.
Cuve de strilisation. Aussi appele chambre de strilisation. Emplacement dans lequel les objets striliser sont placs. Lors du processus de strilisation, la cuve est remplie
de vapeur deau sous pression qui atteint des tempratures directement lies la pression slectionne. Pendant le cycle de strilisation, la cuve est ferme hermtiquement
par une porte munie dun systme de scurit qui ne permet louverture que lorsque le processus de strilisation est achev et que la pression interne est redescendue la
pression atmosphrique.
Dcontamination. Procdure permettant de rduire la quantit de micro-organismes sur un objet ou dans une substance de faon ce que son utilisation ou sa manipulation
ne prsente pas de danger. Par exemple, les objets utiliss pour les soins aux patients et ayant pu tre en contact avec des liquides ou des substances biologiques ou avec des
matires organiques ncessitent une dcontamination ou mme une strilisation (voir dfinition ci-dessous).
Dsinfection. Procdure qui utilise des moyens physiques ou chimiques pour dtruire toute forme de vie vgtative dans ou sur des objets inanims ( lexclusion des
spores).
Double enveloppe. Espace clos entourant la cuve de strilisation et dans lequel on fait circuler de la vapeur. Elle a pour fonction de transfrer la chaleur vers la cuve de
strilisation lors des stades de prtraitement (vacuation de lair) et de post-traitement (schage du matriel strilis).
Electrovannes. Dispositifs lectromagntiques de contrle utiliss dans de nombreuses applications. Aussi appeles vannes lectromagntiques. La position dun piston
est contrle par une bobine (solnode) dans laquelle circule un courant lectrique ou qui se trouve au repos. Le piston permet ou empche le passage dun fluide dans un
circuit donn. Ces vannes sont utilises dans les systmes hydrauliques et pneumatiques, et dans les systmes de vapeur et de vide. Les fabricants ont dvelopp de nombreux
modles pour des applications spcialises.
Electrovannes asservies. Vannes lectromagntiques dont louverture et la fermeture sont rgies par la pression du milieu. En gnral, elles possdent une membrane
avec une petite ouverture par laquelle scoule le milieu.
Indicateur de strilisation. Indicateur chimique ou biologique qui permet de vrifier si un objet ou une substance a t strilis avec succs lissue du processus de
strilisation. Les indicateurs les plus connus sont le ruban adhsif thermosensible (qui change de couleur lorsque les conditions de temprature dtermines sont atteintes)
et les spores de B. stearothermophilus.
Inspection. Evaluation visuelle des articles lavs, dans le but de trouver des dfauts ou des impurets qui pourraient interfrer avec le processus de strilisation. Cest une
opration trs importante, pour laquelle on peut saider dune loupe afin de distinguer des dtails trs fins.
Nettoyage. Elimination mcanique de toutes les matires trangres situes la surface dobjets inanims ; en gnral, le nettoyage implique lutilisation deau propre
associe un dtergent. Il sagit dune procdure de base raliser avant de soumettre les objets leurs processus de strilisation respectifs. Le nettoyage peut tre fait la
main ou par des mthodes automatises. Il faut savoir que le nettoyage ne dtruit pas les micro-organismes, mais rduit seulement leur nombre.
Pascal (Pa). Unit de pression dans le systme international dunits, qui correspond une force dun Newton (N) sexerant sur un (1) mtre carr :
1N
Pa
m2
Pige vapeur. Dispositif destin rduire le passage de la vapeur et permettre le passage du liquide de condensation.
Strilisation. Ensemble doprations par lesquelles toutes les formes de vie sont dtruites (y compris les spores) sur des objets inanims au moyen de mthodes physiques,
chimiques et gazeuses.
Titre en vapeur. Proprit thermodynamique identifie en gnral par la lettre (X) et dfinie comme la relation entre la masse de vapeur et la masse totale dans des
conditions satures.
92
Chapitre 13
tuve
Code GMDN 21086 21087
Code ECRI 21-086 21-087
Dnomination Etuve de laboratoire Etuve de laboratoire,
circulation dair
Ltuve est utilise au laboratoire pour scher et striliser des QUOI SERT UNE TUVE
rcipients en verre et en mtal. Les fabricants ont dvelopp Ltuve est utilise pour striliser ou scher de la verrerie et
plusieurs types dtuves cette fin, les unes convection des objets en mtal servant pour les examens ou les tests
naturelle ou convection force, les autres convection par effectus au laboratoire. Sur du matriel propre, la strilisation
gravit. En gnral, une tuve fonctionne entre la temprature par lair chaud seffectue 180 C pendant deux heures. Lors
ambiante et 350 C. Les tuves sont aussi appeles fours air du chauffage par de lair sec haute temprature, lhumidit
chaud ou tuves four poupinel. svapore et la possibilit de toute activit biologique rsiduelle
est ainsi limine.
PHOTOGRAPHIE DTUVE PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT

En gnral, les tuves ont une cuve interne et un caisson
extrieur. La cuve interne est ralise en aluminium ou en
acier inoxydable, matriaux ayant de trs bonnes proprits de
transfert de la chaleur. Elle est quipe dune srie dtagres
en fil dacier inoxydable dont la conception permet lair chaud
de circuler librement autour des objets scher ou striliser.
Elle est isole du caisson extrieur par un matriau isolant
qui maintient une temprature leve lintrieur et retarde
le transfert de chaleur vers lextrieur. Le caisson extrieur
Photo avec laimable autorisation de Cole-Parmer Instrument Co.
est ralis en acier lamin recouvert dun film protecteur

de peinture lectrostatique. La chaleur est produite par une
srie de rsistances lectriques qui transfrent de lnergie
thermique la cuve. Ces rsistances sont situes dans le bas de
ltuve et la chaleur est transfre et distribue par convection
naturelle ou par convection force (dans les tuves avec
ventilateur intrieur).
93
C H A P I T R E 13 T U V E
La puissance (nergie par unit de temps) dissipe par une Tableau de temprature/temps de strilisation par la chaleur sche
rsistance lectrique peut se calculer par la formule :
Temprature (C) Temps (minutes)2
P I 2R
180 30
dans laquelle : 170 60
I = intensit du courant lectrique en ampres (A) 160 120
R = rsistance lectrique en ohms ()
150 150
Sachant que lnergie ne se cre ni ne se perd mais se transforme, 140 180
il est possible de calculer lnergie thermique quivalente aux 121 360
lments rsistifs. Dans le cas dun fil rsistif, la quantit de
chaleur (q) dissipe peut se calculer par la formule1:
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION
I 2 R q/r
02 L Pour une utilisation correcte de ltuve, les conditions suivantes
doivent tre remplies :
dans laquelle : 1. Un plan de travail vaste, robuste et de niveau.
R = rsistance du fil rsistif 2. Un espace libre dau moins 5 cm autour de ltuve et
I = intensit du courant lectrique suffisamment de place pour disposer les objets striliser
r0 = rayon extrieur du fil rsistif ou scher.
L = longueur du fil rsistif 3. Une prise de courant relie la terre et suffisante pour
q = chaleur gnre par unit de volume alimenter ltuve. Elle doit tre en bon tat et rpondre
aux normes lectriques nationales ou internationales en
La rsistance peut se calculer par la formule : vigueur dans le laboratoire, et ne doit pas tre situe plus
dun mtre de lappareil. Les tuves sont classiquement
L alimentes en 110 V ou 220 V/60 Hz.
Rl
A 4. Vrifier que le circuit lectrique possde les dispositifs de
dans laquelle : protection ncessaires pour garantir une alimentation
= rsistivit du matriau de la rsistance correcte.
A = aire de la section du fil de la rsistance
Ltuve possde une porte mtallique ayant sa propre isolation UTILISATION DE LTUVE
thermique et munie dune poigne galement isole pour Pour un fonctionnement correct de ltuve, il faut observer
empcher de se brler les mains. La porte est monte sur un certain nombre de prcautions, dont les plus importantes
la face avant de ltuve avec un systme de charnires qui sont :
permettent une ouverture un angle de 180. 1. Ne pas utiliser de matires inflammables ou explosives
Les tuves modernes sont contrles par un module dans ltuve.
command par microprocesseur, qui permet de slectionner 2. Eviter les projections de solutions acides ou la pntration
les paramtres de fonctionnement de lappareil et de fixer les de vapeurs corrosives dans ltuve afin dempcher la
consignes dalarme, et de programmer les cycles ou processus corrosion des surfaces intrieures et des tagres.
thermiques qui contrlent non seulement les tempratures 3. Utiliser des quipements de protection individuelle (gants
mais aussi leurs variations au cours des phases de chauffage isolants, lunettes de scurit) et se servir de pinces pour
et de refroidissement (naturel) et les priodes pendant introduire des substances ou objets dans ltuve ou les en
lesquelles elles doivent tre maintenues constantes. Les tuves retirer.
fonctionnent normalement entre la temprature ambiante et
350 C. Certains modles travaillent dans un intervalle plus Utilisation en routine
restreint. Les modles anciens ne possdent quune srie En gnral, les procdures dutilisation sont les suivantes :
de rsistances dont le fonctionnement est contrl par un 1. Actionner linterrupteur principal, en appuyant sur le
thermostat. bouton habituellement identifi par le symbole (I).
2. Appuyer sur la touche Programme.
Le tableau ci-dessous indique la relation entre la temprature 3. Slectionner la temprature de fonctionnement en
et le temps de strilisation par la chaleur sche dans une appuyant sur la touche (+) jusqu ce que la temprature
tuve. choisie saffiche sur lcran. Le processus de chauffage
1 Cet exemple dquation de transfert de la chaleur sapplique une

rsistance en fil mtallique de section circulaire. Pour dautres formes, il faut
utiliser des quations diffrentes.
2 Le temps est compt partir du moment o la temprature
correspondante est atteinte..
94
commencera et se poursuivra jusqu ce que la temprature Chaque fabricant fournit des instructions dtailles sur le
slectionne soit atteinte. fonctionnement de ces commandes. En gnral, elles sont
4. Avec les tuves programmables, il faut suivre les instructions situes la partie infrieure de ltuve et sont refroidies par un
du fabricant pour le rglage des autres paramtres tels que ventilateur qui fait circuler lair ambiant dans lespace o sont
le temps, les types de chauffage et les alarmes. installs les autres lments lectroniques de lappareil.
Circuit lectrique
COMMANDES DE LTUVE La figure 38 montre le circuit lectrique de base pour une
La figure 37 montre un panneau de contrle tel quon en trouve tuve, qui comprend les lments suivants :
sur les tuves modernes. On peut reconnatre les lments 1. Interrupteur principal. Il sert allumer ou teindre
suivants : ltuve.
1. Linterrupteur principal. 2. Panneau de contrle. It controls the ovens functions
2. Des crans indiquant la temprature actuelle et la (temperature, time, type of heating and cooling, selected
temprature slectionne. operation modes such as preheating, sterilization,
3. La touche de slection des paramtres (Menu). dehydration, preparation, drying and even baking).
4. La touche de programmation des c ycles de 3. Rsistances. Elments chauffants qui transforment
fonctionnement. lnergie lectrique en nergie thermique.
5. Des touches permettant daugmenter et de diminuer la 4. Systmes indicateurs. Dispositifs compltant le tableau
temprature slectionne. gnral de commande. Ils indiquent si ltuve est allume
(ON) et en cours de fonctionnement.
Figure 37. Panneau de contrle lectronique de ltuve
Temprature actuelle
Position Marche (ON)
Temprature slectionne
Position Arrt (OFF)
Menu Programme
Figure 38. Circuit lectrique de ltuve
Commande gnrale
de ltuve
Indicateur dtuve
Indicateur de
sous tension
rsistance sous tension
Prise
Rsistances
Prise de terre
95
CONTRLE DE QUALIT 3. Ouvrir la porte et enlever les tagres.

Le contrle de qualit des tuves est assez exigeant car la 4. Dconnecter la sonde du thermomtre.
strilisation par la chaleur sche a pour paramtres critiques 5. Enlever les vis de fixation du panneau infrieur.
la temprature et le temps. En gnral, des spores de Bacillus 6. Enlever le panneau infrieur.
subtilis (varit Niger) sont utilises comme indicateurs 7. Enlever les vis de fixation des cbles dalimentation
biologiques. Elles doivent tre incubes pendant plusieurs lectrique des rsistances et dconnecter les rsistances.
heures aprs la fin du processus de strilisation. La charge 8. Enlever les vis de fixation des rsistances et enlever les
en spores initiale de lindicateur se situe entre 5 105 et 1 rsistances.
106. Lefficacit du cycle dpend de la diffusion de la chaleur, 9. Installer de nouvelles rsistances ayant les mmes
de la quantit de chaleur disponible et des pertes de chaleur. caractristiques que les rsistances dorigine.
Son effet germicide est affect par la prsence de matires 10. Remettre les pices en place et reconnecter les parties
organiques ou dimpurets sur lobjet striliser. La strilisation lectriques.
par la chaleur sche doit tre rserve aux articles qui ne
peuvent pas tre striliss en autoclave. Remplacement du ventilateur de refroidissement
Frquence
q : effectuer si ncessaire
Pour changer le ventilateur de refroidissement (qui se trouve
ENTRETIEN DE ROUTINE gnralement dans le bas de ltuve), procder comme suit :
Une tuve na besoin que dun entretien simple, et aucune 1. Procder comme expliqu pour louverture du
intervention de maintenance complexe nest ncessaire en compartiment des lments lectroniques.
routine. Les procdures gnrales ci-dessous sont appliquer 2. Dconnecter les cbles dalimentation lectrique du
selon les besoins. Elles peuvent varier selon le type dtuve et ventilateur.
les diffrents modles proposs par les fabricants 3. Dfaire les vis qui maintiennent le ventilateur.
4. Installer un ventilateur ayant les mmes spcifications
que le ventilateur dorigine. Reconnecter les cbles
dalimentation du ventilateur.
5. Remettre le capot de protection en place.
Remplacement du joint dtanchit de la porte

Accs aux lments lectroniques Frquence
Frquence
q : effectuer si ncessaire Le joint dtanchit de la porte est gnralement en
Les lments lectroniques de ltuve sont souvent situs silicone.
dans la partie infrieure de celle-ci. Pour pouvoir les contrler, 1. Eteindre ltuve et ouvrir la porte.
procder comme suit 2. Dfaire les dispositifs de scurit qui maintiennent le joint
1. Dbrancher ltuve. en place.
2. Avancer ltuve jusqu ce que lavant de sa base soit align 3. Enlever le joint laide dun tournevis pour le dgager de
avec le bord du plan de travail. sa rainure. Eviter de forcer, pour ne pas endommager la
3. Placer deux cales denviron 3 cm dpaisseur sous chaque rainure.
support avant. Cela soulvera lavant de ltuve et facilitera 4. Mettre le joint de remplacement en place en commenant
linspection des lments lectroniques lorsque le capot par le haut de la porte. Puis le mettre en place de proche en
de la partie infrieure de lappareil sera enlev. proche en avanant vers les cts, et en le fixant mesure
4. Dfaire les vis de fixation du capot de la partie infrieure et avec les dispositifs qui le maintiennent en place. Procder
soulever celui-ci. Contrler les lments lectroniques de de mme pour le bas de la porte.
commande. En gnral, les lments suivants se trouvent
dans ce compartiment : Remplacement du thermocouple
a) Panneau de contrle programmable Frquence
b. Dispositif de scurit 1. Ouvrir le compartiment des lments lectroniques.
c. Interrupteur principal et coupe-circuit (ensemble) 2. Enlever les cbles du thermocouple de leurs connexions
5. Remettre le capot en place aprs avoir termin la sur la carte de contrle.
vrification.. 3. Librer le support du thermocouple qui se trouve dans le
haut de ltuve. Le tirer vers lavant jusqu ce que le cble
Remplacement des rsistances chauffantes de connexion soit dgag sur une longueur dau moins
Frquence
q : effectuer si ncessaire 15 cm.
La procdure dcrite ci-dessous doit tre effectue par un 4. Couper le cble du thermocouple et le dnuder.
personnel ayant de bonnes connaissances en lectricit. 5. Raccorder les extrmits libres des fils du thermocouple
1. Dbrancher ltuve. dfectueux avec les fils du thermocouple de rechange.
2. Enlever le thermomtre qui se trouve la partie suprieure Utiliser du ruban adhsif pour maintenir le raccord.
de la cuve. 6. Tirer doucement le thermocouple dfectueux hors du
96
compartiment des lments lectroniques en laissant les Remplacement des charnires de la porte
fils attachs pour servir de guide lors du remplacement. Frquence : effectuer si ncessaire
7. Connecter les fils du nouveau thermocouple aux ples Pour remplacer les charnires de la porte, procder comme
correspondants en veillant ce que la polarit dorigine suit :
soit respecte. 1. Ouvrir la porte et la soulever pour la sortir de ses gonds.
8. Remettre le capot de protection en place. 2. Enlever les vis de fixation des charnires dfectueuses.
3. Enlever la ou les charnires dfectueuses.
4. Mettre la ou les nouvelles charnires en place et les fixer
laide des vis de fixation.
5. Remettre la porte en place.
GUIDE DE DPANNAGE
Ltuve nest pas alimente en lectricit. Ltuve nest pas branche. Brancher ltuve sur la prise de courant.
Linterrupteur principal est sur OFF. Mettre linterrupteur sur ON.
Le coupe-circuit est dfectueux. Remplacer le coupe-circuit.
La carte de contrle est dfectueuse. Remplacer la carte de contrle.
Le cble dalimentation est dfectueux. Contrler/remplacer les cbles de raccordement.
La temprature est de temps en temps trop leve. Le thermocouple est dfectueux. Remplacer le thermocouple.
La commande de temprature est dfectueuse. Remplacer la commande de temprature .
Ltuve prsente des erreurs de chauffage. Temprature plus basse que la temprature Changer la temprature slectionne. Attendre que
slectionne. la temprature atteigne la valeur slectionne.
Le thermocouple est dfectueux. Remplacer le thermocouple.
La rsistance chauffante est dfectueuse. Remplacer la rsistance chauffante.
Le relais est dfectueux. Remplacer le relais.
La commande de temprature est dfectueuse. Remplacer la commande de temprature.
Lcran affiche le message Open ( ouvert ) Le circuit du thermocouple est ouvert. Vrifier la connexion du thermocouple ou remplacer
le thermocouple.
97
DFINITIONS
Chaleur. Forme dnergie transfre dun systme se trouvant une temprature donne un autre systme se trouvant une temprature plus basse du fait de la diffrence
de temprature entre les deux. Lorsquun systme de masse leve (M) est mis en contact avec un autre systme de masse faible (m) se trouvant une temprature diffrente,
la temprature rsultante est proche de la temprature initiale du systme ayant la masse la plus leve. On dit alors quune quantit de chaleur Q a t transfre du
systme ayant la temprature la plus leve au systme ayant la temprature la plus basse. La quantit de chaleur Q est proportionnelle au changement de temprature T.
La constante C, ou capacit calorifique du systme, permet dtablir la relation Q = CT, do lon peut dduire que lune des consquences du changement de temprature
dans un systme est un transfert de chaleur.
Coupe-circuit. Dispositif de contrle lectrique qui permet un appareil ou dispositif lectrique dtre en marche (ON) ou larrt (OFF). Aussi appel interrupteur
Rsistance. Opposition quun matriau ou un circuit lectrique exerce au passage du courant lectrique. Cest la proprit dun circuit qui transforme lnergie lectrique en
chaleur en sopposant au passage du courant. La rsistance (R) dun corps de section uniforme, comme un fil mtallique, est directement proportionnelle la longueur (l) et
inversement proportionnelle laire de la section (a). La rsistance se calcule par la formule :
l
R k=
a
dans laquelle :
Lohm () est lunit courante de rsistance lectrique ; un ohm est gal un volt par ampre.
Thermocouple lectrique.Dispositif utilis pour la mesure prcise de la temprature. Il se compose dun assemblage de deux fils mtalliques de nature diffrente relis
une de leurs extrmits, qui produit une petite diffrence de potentiel proportionnelle la diffrence de temprature entre ses deux extrmits. Ce phnomne est connu
sous le nom deffet Seebeck, du nom du physicien allemand Thomas Seebeck qui la dcouvert.
Thermostat.Dispositif qui rgule la temprature dun systme. Il agit habituellement par dilatation de lun de ses lments, qui active mcaniquement un autre lment,
par exemple un interrupteur qui contrle une fonction dtermine.
98
Chapitre 14
Incubateur
Code GMDN 35482 35483
Code ECRI 15-151 15-152
Dnomination Incubateur arobie Incubateur anarobie
Le mot incubateur vient du latin incubare qui signifie couver. dinjection de CO2 pour obtenir des conditions favorables au
Lincubateur est une enceinte dont latmosphre, la temprature dveloppement de diverses espces de micro-organismes et
et lhumidit sont contrles afin de maintenir des organismes de cultures cellulaires.
vivants dans un environnement adapt leur dveloppement.
Parmi ses applications les plus courantes figurent lincubation
de cultures bactriennes, virales, microbiologiques en gnral PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT
et cellulaires, la dtermination de la demande biochimique Lincubateur utilise divers moyens de transfert de la chaleur
en oxygne (DBO) et le stockage de produits biologiques. Il et de contrle de lenvironnement de faon obtenir les
existe divers modles de complexit diffrente. Certains ne conditions requises pour des techniques de laboratoire
contrlent que la temprature tandis que dautres contrlent spcialises. Il possde en gnral un systme de rsistances
galement la composition de latmosphre de lenceinte. Il lectriques contrl par thermostat ou par microprocesseur.
en existe aussi qui peuvent travailler des tempratures plus En ce qui concerne les systmes de transfert de la chaleur, les
basses que la temprature ambiante grce des systmes incubateurs utilisent la conduction ou la convection naturelle
de rfrigration. Selon les modles et les spcifications de ou force
ces appareils, les tempratures de travail vont de 10 C
75 C ou un peu plus. Certains incubateurs ont un systme Conduction thermique
Dans les incubateurs qui fonctionnent par conduction
PHOTOGRAPHIE DINCUBATEURS thermique, des rsistances lectriques transfrent directement
la chaleur vers les parois de lenceinte dincubation o sont
Incubateur standard dposs les chantillons. Les rsistances constituent une
rgion de haute temprature et lenceinte une rgion de basse
temprature. Le transfert dnergie thermique se fait toujours
du corps le plus chaud vers le corps le plus froid, selon la loi de
Fourier exprime par la formule :
,T
q <kA
,x
dans laquelle :
q = quantit de chaleur transfre par conduction
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k = conductivit thermique du matriau

a = aire de la surface de transfert de chaleur
T= gradient de temprature dans la direction du flux de
chaleur
Le signe moins () est ajout en vertu du deuxime principe

de la thermodynamique.
99
C H A P I T R E 14 I N C U B AT E U R
Convection thermique de rfrigration est command par le systme de contrle de

Dans les incubateurs fonctionnant par convection thermique, la temprature de lincubateur. Leau ltat liquide possde
la chaleur produite par le systme de rsistances est dabord un pouvoir lev dabsorption et de rtention de la chaleur.
transfr lair circulant dans lenceinte puis de lair aux Certains fabricants ont dvelopp des modles dincubateurs
chantillons. Lefficacit de ce processus dpend du schma dans lesquels lenceinte dincubation est entoure dune
dcoulement de lair. En gnral, lair entre par le bas de double paroi remplie deau. Ce dispositif est particulirement
lincubateur et est chauff dans un compartiment do il passe utile pour assurer la stabilit de la temprature lintrieur de
dans lenceinte dincubation o il circule selon un schma lenceinte.
uniforme. Il sort de lenceinte par un tuyau dvacuation situ
la partie suprieure de lappareil. Il existe des incubateurs avec dispositif dinjection de gaz
comme le dioxyde de carbone (CO2) dans lenceinte des
Lquation de base qui explique la convection est la concentrations stables comprises entre 3 et 5 %.
suivante1:
Le systme de contrle de la temprature de lincubateur
q hATw < Te repose sur lutilisation de thermostats (bilames ou dilatation
de liquide), thermocouples, thermistors et divers dispositifs
dans laquelle : semi-conducteurs. Ceux-ci utilisent des circuits lectroniques
q = quantit de chaleur transfre par convection qui contrlent la temprature ainsi que les fonctions de
h = coefficient de convection pour le transfert de chaleur lincubateur au moyen de microprocesseurs. Chaque fabricant
A = aire de la surface de transfert de chaleur a son propre systme. La temprature actuelle, la temprature
T W = temprature la surface de la rsistance programme et autres informations saffichent sur un cran
T = temprature du fluide (air) laide de diodes lectroluminescentes (DEL).
Certains incubateurs ont aussi des ventilateurs qui font circuler Pour que la temprature dun incubateur soit correctement
lair par convection force. Le schma de la figure 39 montre trois rgule, il doit y avoir une diffrence dau moins 5 C entre la
principes diffrents utiliss dans les incubateurs : conduction temprature de lenceinte (Tc) et la temprature ambiante (Ta).
thermique, convection naturelle et convection force. Sil faut que la temprature de lenceinte (Tc) soit plus basse que
la temprature ambiante (Ta), un systme de rfrigration est
Quand une temprature plus basse que la temprature ncessaire. Par consquent, le choix dun incubateur dpend
ambiante (Ta) est ncessaire dans lenceinte dincubation, du type de manipulations effectues au laboratoire. Les
lincubateur doit tre muni dun systme de rfrigration. spcifications doivent tre tudies et dfinies avec soin pour
Ce systme permet dextraire la chaleur de lenceinte afin de que lappareil que lon envisage dacqurir rponde aux besoins
maintenir celle-ci une temprature plus basse. Le systme rels du laboratoire.
1 Transfert de chaleur par lquation de convection tablie par Isaac Newton

(loi de refroidissement).
Figure 39. Systmes de transfert de chaleur utiliss dans les incubateurs
Conduction Convection naturelle Convection force
100
COMMANDES DE LINCUBATEUR CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION

Le schma de la figure 40 illustre le type de commandes que lon Pour que lincubateur fonctionne correctement, les conditions
trouve normalement sur les modles rcents dincubateurs. suivantes doivent tre remplies :
1. Un interrupteur principal pour mettre lappareil sur Marche 1. Une alimentation lectrique rpondant aux normes
ou sur Arrt. Certains fabricants ajoutent un coupe-circuit lectriques en vigueur dans le pays. La prise de courant
de protection. Linterrupteur a deux positions : en position alimentant lincubateur doit se trouver au maximum
Marche (ON) ou (I), lincubateur est sous tension. En position 1,5 m de lappareil. Elle doit tre alimente en 120 V/60 Hz
Arrt (OFF) ou (O), lincubateur est teint. ou en 220-240 V/50-60 Hz et tre relie la terre.
2. Un cran sur lequel saffichent les paramtres slectionns. 2. Un espace libre sur les cts et larrire de lincubateur pour
Par exemple : temprature slectionne, consignes dalarme permettre le passage des cbles et la ventilation ncessaire
(temprature maximale et minimale). son fonctionnement normal. Cet espace doit tre de 5
3. Deux touches de commande sont normalement identifies 10 cm.
par Menu et Slection (ou Set). Elles servent programmer 3. Un secteur de travail o les variations de temprature sont
lincubateur et rgler les consignes dalarme. rduites au minimum.
4. Deux touches de rglage de la temprature. Elles sutilisent 4. Une table de travail ou une paillasse solide et de niveau,
conjointement avec les touches de commande. capable de supporter le poids de lincubateur. Le poids
5. Une srie de lampes tmoins DEL qui indiquent ltat de dun incubateur avec trois tagres se situe entre 60 et
fonctionnement. Si le systme de chauffage est en fonction, 80 kg.
la DEL Chauffage est allume. Si lincubateur est en cours 5. Des rgulateurs de pression, tuyaux et raccords pour
de programmation, la DEL Programme est allume. les incubateurs travaillant sous atmosphre de dioxyde
6. Les touches de rglage et de commande sont situes sur le de carbone (CO2) et des systmes de fixation pour les
panneau de contrle de lappareil. bouteilles de CO2 sous pression.
Chaque fabricant utilise des commandes adaptes au

modle dincubateur : en gnral, les incubateurs possdent ENTRETIEN DE ROUTINE ET UTILISATION DE
les commandes mentionnes ci-dessus. On trouvera LINCUBATEUR
des instructions dans le manuel dutilisation fourni par le On trouvera ci-dessous un mode demploi gnral et une
fabricant. description des oprations dentretien courantes pour les
incubateurs. Pour les procdures exactes, on se conformera
En gnral, on slectionne le paramtre voulu au moyen de aux recommandations du fabricant.
la touche Menu. A laide des touches de rglage, on ajuste
les paramtres la valeur souhaite. On confirme ensuite le
rglage en appuyant sur la touche Slection ou Set.
Figure 40.
Ecran dachage (2)
C
Programme
Lampes tmoins (DEL) (5) Alarme Position Marche (ON)
Chauage
Position Arrt (OFF)

Panneau de control (6) Menu Slec
Interrupteur principal (1)

Touches de rglage (4)
Touches de commande (3)
101
Recommandations pour lutilisation de lappareil

1. Ne pas utiliser un incubateur en prsence de matires
inflammables ou combustibles car les lments internes
de lappareil pourraient constituer des sources dignition
pendant le fonctionnement. Lentretien de routine dcrit ci-dessous doit tre effectu
exclusivement par un personnel approuv ayant reu une
formation technique sur les incubateurs et connaissant les
2. Eviter les claboussures de solutions acides dans risques associs la manipulation de ce type dappareil. On
lincubateur. Elles pourraient endommager le matriau vrifiera ltat et le fonctionnement correct des lments
de lenceinte dincubation. Si possible, essayer dutiliser des suivants :
substances de pH neutre. Eviter dincuber des substances 1. Le joint dtanchit de la porte. Il est en gnral en
mettant des vapeurs corrosives. silicone et est garanti pour plusieurs annes dutilisation.
3. Eviter de dposer des rcipients dans le fond de lincubateur Pour remplacer le joint dtanchit, il est ncessaire de
sur la plaque qui protge les rsistances chauffantes. dmonter la porte et de dfaire les pices qui servent
4. Utiliser des lments de protection personnelle lors maintenir le joint en place. En gnral, le joint est insr
de lutilisation de lincubateur : lunettes de protection, dans une rainure. Le nouveau joint doit avoir les mmes
gants, et utiliser des pinces pour dposer et enlever les spcifications que le joint dorigine. On le monte dans sa
rcipients. rainure et on le maintient en place avec le systme de
5. Eviter de se tenir devant un incubateur ouvert. Certaines fixation qui peut tre, dans certains incubateurs, un simple
substances mettent des vapeurs qui ne doivent pas tre jeu de vis.
inhales. 2. Les lments chauffants (systme de rsistances). Les
6. Etalonner lincubateur lendroit o il est install pour lments qui constituent le corps de chauffe de lincubateur
vrifier son uniformit et sa stabilit. sont gnralement situs dans le bas de celui-ci. Pour les
7. Vrifier la temprature de fonctionnement le matin et le soir, remplacer, il est ncessaire de dmonter les panneaux
avec des instruments talonns et certifis (thermomtre, de protection et le panneau infrieur de lappareil. Dans
thermocouple, etc.). certains incubateurs, il faut galement dmonter les
8. Enregistrer sur le document ou le formulaire appropri portes (porte extrieure mtallique et porte intrieure en
toute anomalie dtecte (temprature, humidit, teneur verre). Une fois les panneaux de protection enlevs, on
en CO2) et les mesures correctrices ncessaires. dconnecte les rsistances et les capteurs de temprature
9. A faire chaque q jjour : Vrifier que la temprature dans et on les remplace par de nouveaux ayant les mmes
lincubateur ne varie pas de plus de 1 C ( 1 C). Noter la spcifications que les lments dorigine. On remonte
temprature. ensuite tous les lments et on effectue un talonnage.
10. Sil faut mettre de leau dans lenceinte dincubation pour 3. Le ventilateur de refroidissement. Sil est dfectueux,
maintenir un degr dhumidit dtermin, lui ajouter un cet lment doit tre remplac par un ventilateur ayant les
inhibiteur microbien non volatil. mmes caractristiques que le ventilateur dorigine. Pour le
remplacer, il faut ouvrir le compartiment o il est install.
Recommandations pour le nettoyage Dans certains incubateurs, il faut galement dmonter
Nettoyer rgulirement les incubateurs pour cultures les portes et certains panneaux de protection. Une fois
bactriennes ou cellulaires, au moins tous les 14 jjours et cela fait, on dconnecte le ventilateur endommag et on
aprs toute projection accidentelle de matriel infectieux, en le remplace par le nouveau, en vrifiant que lair souffle
utilisant un dsinfectant appropri. dans la bonne direction. On remonte ensuite tous les
1. Dbrancher lincubateur avant de commencer le lments.
nettoyage.
2. Utiliser des produits de nettoyage non abrasifs, par exemple Pour remplacer les lments mentionns ci-dessous, procder
un chiffon imbib dun dtergent doux, pour nettoyer les de la mme manire que pour les lments ci-dessus. Il est trs
parties intrieures et extrieures facilement accessibles. important dutiliser des pices de rechange ayant les mmes
3. Eviter tout contact entre les produits de nettoyage et les spcifications que la pice dorigine.
parties lectriques.
4. Attendre que lincubateur soit sec (quil ny ait plus 4. Ventilateur interne (pour la circulation dair).
dhumidit rsiduelle) avant de le rebrancher. 5. Systme de contrle lectronique.
6. Elments lectroniques.
Entretien de routine 7. Thermocouples.
Un incubateur bien install et correctement utilis nexige 8. Porte en verre (intrieure).
que peu dentretien et il peut scouler des annes avant 9. Poigne.
quune intervention technique soit ncessaire. Pour toute 10. Chssis de lincubateur (intrieur et extrieur).
opration dentretien, on se conformera aux recommandations
du fabricant.
102
Les situations courantes prsentes dans le tableau ci-dessous ncessitent lintervention dun personnel autoris ayant reu une formation
technique sur lutilisation et lentretien des incubateurs. Les cas spciaux doivent tre traits selon les recommandations du fabricant.
GUIDE DE DPANNAGE
Incubateur standard
Lincubateur ne fonctionne pas. Le rseau lectrique nest pas aliment. Vrifier ltat du raccordement au secteur.
Linterrupteur marche/arrt est sur OFF. Mettre linterrupteur sur ON.
Le cble dalimentation lectrique est dfectueux. Contrler ltat du cble ou le remplacer.
Lincubateur affiche des erreurs de Le systme de contrle de la temprature est dfectueux. Vrifier et rgler ou remplacer le systme de contrle de
chauffage. la temprature.
La rsistance chauffante est dfectueuse. Remplacer la rsistance par une autre ayant les mmes
caractristiques que la rsistance dorigine.
La connexion de la rsistance chauffante est dfectueuse. Nettoyer les bornes de connexion. Reconnecter
correctement la rsistance.
Le thermocouple lectrique est dfectueux. Remplacer le thermocouple lectrique.
La temprature slectionne est plus basse que la temprature Contrler les spcifications de lincubateur. Seuls les
ambiante. incubateurs rfrigrs peuvent fonctionner dans ces
conditions. Normalement, la temprature ambiante est
plus basse que celle de lincubateur.
Le ou les joints de la porte sont dfectueux. Remplacer le ou les joints de la porte.
Lalarme reste allume et la La temprature slectionne a t abaisse une valeur plus Attendre que la temprature de lincubateur descende
temprature est plus leve que la basse que la consigne dalarme. jusqu la valeur slectionne.
valeur slectionne.
Le systme de contrle de la temprature est dfectueux. Remplacer le systme de contrle de la temprature.
Lcran affiche en permanence un La diode dalarme clignote. Laisser l'incubateur refroidir jusqu' ce que la
signal derreur. En gnral, la DEL temprature atteigne la temprature slectionne et se
indique EEE. stabilise.
Incubateur basse temprature

Les commandes de lincubateur ne fonctionnent pas. Linterrupteur est sur OFF. Mettre linterrupteur sur ON.
Il ny pas dalimentation lectrique. Vrifier le circuit dalimentation lectrique.
La temprature affiche est instable. (Plus haute ou Il y a une accumulation de givre autour de Dgivrer selon la procdure indique par le fabricant.
plus basse que la valeur slectionne). lvaporateur.
Rduire la temprature de refroidissement.
La temprature de lenceinte dincubation est Il y a une accumulation de givre autour de Dgivrer selon la procdure indique par le fabricant.
uniforme, mais suprieure la valeur slectionne. lvaporateur.
La circulation de lair dans lenceinte est entrave par Rorganiser le contenu de lenceinte de faon
les chantillons. permettre lair de circuler.
La temprature est plus haute ou plus basse que la Le systme de contrle de la temprature devrait Etalonner selon la procdure indique par le
valeur slectionne. tre talonn. fabricant.
Lappareil steint en cours de fonctionnement. La tension dalimentation est incorrecte. Vrifier la tension dalimentation ; elle ne doit pas
diffrer de plus de 5 % de la tension spcifie sur la
plaque de lappareil.
Le branchement lectrique est dfectueux.
Le compresseur ne fonctionne pas alors que le La protection thermique du compresseur sest Vrifier la tension dalimentation ; elle ne doit pas
tmoin de refroidissement est allum. active.. diffrer de plus de 5 % de la tension spcifie sur la
plaque de lappareil.
La temprature affiche est plus leve que la valeur Le relais du circuit de refroidissement est dfectueux. Remplacer le relais du circuit de refroidissement.
slectionne et lalarme se dclenche plus de 40 C.
Le compresseur est dfectueux. Remplacer le compresseur. Remettre du rfrigrant
et talonner (il sagit dune procdure spcialise qui
ncessite des outils spciaux).
103
DFINITIONS
Conduction thermique. Forme de transfert de la chaleur dans une substance lorsque la chaleur passe du point dont la temprature est la plus leve au point dont la
temprature est la plus basse.
Convection thermique Forme de transfert de la chaleur par dplacement dun fluide ou dair.
DEL (Diode lectroluminescente). Dispositif lectronique largement utilis pour afficher des donnes sur un cran. Aussi appele LED (Light-emitting diode).
Demande biochimique en oxygne (DBO). Quantit doxygne dont des micro-organismes arobies ont besoin pour dcomposer les matires organiques dans un
chantillon. Elle est utilise comme indicateur du niveau de pollution de leau. La DBO est mesure par la masse en milligrammes doxygne utilise par litre dchantillon
lorsque celui-ci est incub 20 C pendant 6 jours.
Rsistance. Opposition quexerce un matriau ou un circuit lectrique au passage du courant lectrique. Cest la proprit dun circuit qui transforme lnergie lectrique en
chaleur en sopposant au passage du courant. La rsistance (R) dun corps de section uniforme, par exemple un fil mtallique, est directement proportionnelle sa longueur
(l) et inversement proportionnelle sa section (a). La rsistance se calcule au moyen de la formule :
l
R k=
a
dans laquelle :
Lohm () est lunit classique de rsistance lectrique ; 1 ohm est gal 1 volt par ampre.
Thermistor. Aussi appel thermistance. Composant lectronique dont la rsistance varie avec la temprature. Ce sont des dispositifs peu coteux utiliss dans diverses
applications, dont la plus courante est le contrle de la temprature.
Thermocouple. Dispositif utilis pour la mesure prcise de la temprature. Il se compose dun assemblage de deux fils mtalliques de nature diffrente relis une de leurs
extrmits, qui produit une petite diffrence de potentiel proportionnelle la diffrence de temprature entre ses deux extrmits. Ce phnomne est connu sous le nom
deffet Seebeck, du nom du physicien allemand Thomas Seebeck qui la dcouvert.
Thermostat. Dispositif qui rgule la temprature dun systme. Il agit habituellement par dilatation de lun de ses lments, qui active mcaniquement un autre lment,
par exemple un interrupteur qui contrle une fonction dtermine.
104
Chapitre 15
Microscope
Code GMDN 36351
Code ECRI 12-536
Dnomination Microscopes
Le mot microscope vient du grec micros qui signifie petit et Microscope binoculaire
skopien, qui signifie voir ou examiner. Ce chapitre prsente
les prcautions prendre lors de lutilisation des microscopes
employs dans la pratique clinique et leur entretien courant.
Selon le systme de contraste, il existe diverses sortes de
microscopes. Les plus courants sont :
t Microscope optique fond clair
t Microscope optique fond noir
t Microscope optique fluorescence
t Microscope optique contraste de phase
Photo avec l aimable autorisation de Nikon Instruments

t Microscope optique interfrentiel
t Microscope optique polarisant
t Microscope optique invers
t Stromicroscope
PHOTOGRAPHIES DE MICROSCOPES
Stromicroscope binoculaire Ce type de microscope utilise

divers systmes de lentilles et un
clairage contrl pour obtenir
une image agrandie de lobjet.
Photo avec laimable autorisation de Olympus
Ce type de microscope
permet dobtenir des images
tridimensionnelles (en volume) en
superposant deux images, une pour
chaque il.
105
C H A P I T R E 15 M I C RO S COPE
QUOI SERT UN MICROSCOPE PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT

Le microscope est un instrument de prcision qui possde divers Le microscope utilise les proprits physiques de linteraction
sous-systmes optiques (lentilles, filtres, prismes, condenseurs), des lentilles avec la lumire. Une lentille est un lment optique
mcaniques, pour contrler la position de lchantillon habituellement fabriqu en verre et qui rfracte la lumire.
dans lespace selon des coordonnes tridimensionnelles Ses dimensions sont calcules et elle possde en gnral des
(X, Y, Z), lectriques (transformateur et source lumineuse), surfaces paraboliques ou sphriques. Si les rayons lumineux qui
et lectroniques (appareil photo, enregistreur vido, etc.), frappent lune des faces de la lentille convergent en un point
qui interagissent pour agrandir et contrler limage dobjets unique F lorsquils en sortent, la lentille est convexe et est dite
non dcelables lil nu. Pour observer des chantillons, il convergente. Si la lentille disperse les rayons lumineux qui la
est indispensable de les prparer selon des techniques qui traversent, elle est concave et est dite divergente. Les lentilles
permettent de mettre en vidence les dtails que lon souhaite convexes reprsentes sur la figure 41 constituent les lments
observer. de base du microscope.
Le microscope constitue un outil de diagnostic de premier
ordre dans le domaine des soins de sant, notamment dans Sur la figure 41, on peut identifier le foyerr (F), point o les
des spcialits comme lhmatologie, la bactriologie et la rayons lumineux se concentrent, et la faon dont les rayons
parasitologie, et pour la formation des professionnels de lumineux sont rfracts lors de leur passage au travers de la
sant (certains microscopes sont quips daccessoires qui lentille. La distance entre la lentille et le foyer est connue sous
permettent aux tudiants de faire des observations sous la le nom de distance focale (D).
direction dun professeur). Les perfectionnements techniques
apports aux microscopes ont permis aux fabricants comme La figure 42 rsume le principe du fonctionnement des lentilles
aux chercheurs de mettre au point de nombreux modles appliqu au microscope.
spcialiss. Ces appareils jouent un rle fondamental dans les
progrs de la connaissance en gnral et dans la comprhension
des mcanismes naturels.
Figure 41. Lentille convexe (convergente)
Lentille convexe Distance focale
Rayons lumineux D
Foyer
Axe optique
de la lentille F
Front dondes planes Front dondes sphriques
Figure 42. Optique de la lentille convergente
a b
Lentille convergente
Objet
h Lobjet (h) situ une distance (a) de la
lentille produit une image (h) une distance
F h (b) de la lentille, avec h > h. Le foyer (F),
o les ondes lumineuses se rejoignent, se
trouve la distance focale (f ) de la lentille.
f f Image Voir le texte pour les dtails et quations.
106
Lorsquun objet clair (h) est plac une distance (a) devant Le grossissement (M) dune lentille, dfini par la relation entre
une lentille convergente, les rayons lumineux traversent la la taille de lobjet et la taille de limage forme, est reprsent
lentille et sont rfracts. Un rayon traversant la partie suprieure par la formule :
de lobjet croise laxe optique de la lentille au point focal (F).
Il est rfract par les deux faces de la lentille et sort dans h b
M
une direction parallle laxe optique. Le rayon qui traverse h' a
la partie suprieure de lobjet paralllement laxe optique
traverse la lentille et est rfract. Il passe ensuite par le point dans laquelle :
focal (F) du ct image jusqu ce quil croise le premier rayon (h) et (h) correspondent respectivement aux dimensions de
une distance (b) de la lentille, o se forme limage. Dans le limage et de lobjet, et (a) et (b) aux distances entre la lentille
cas illustr par la figure 42, la distance (a) est suprieure la et le point o se forme limage, et entre la lentille et le point
distance focale (f), et il se forme une image relle renverse o se situe lobjet.
la distance (b) de la lentille. La distance focale (f ) est lie aux
distances (a) et (b) par la relation :
1 1 1

f a b
Figure 43. Schma dun microscope
Oculaire [1] Tte binoculaire [3]
Revolver
porte-objectifs [4] Bras du microscope [22]
Objectifs [5]
Rglage du condenseur
en hauteur [21]
Platine porte-objet [23]
Condenseur [6]
Bouton de rglage macromtrique
Diaphragme [7] et micromtrique [20]
Verre protecteur Bouton de rglage du

avec porte-ltre [10] diaphragme de champ [3]
Eclairage
Socle [24]
107
Elments du microscope lieu dune lampe, un miroir qui dirige la lumire vers la lame
Les principaux lments des sous-systmes du microscope dpose sur la platine porte-objet. Ces microscopes sont
sont rassembls dans le tableau ci-dessous.. surtout utiles dans les zones loignes des centres urbains, o
il ny a pas dlectricit et o ils sont utiliss par des quipes
de sant mobiles. Certains types de microscopes ncessitent
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION des installations spciales : par exemple, il faut une chambre
Normalement, les microscopes sont aliments en courant noire pour faire des observations avec un microscope
110 V/60 Hz ou 220 V/60 Hz. Certains ont une source lumineuse fluorescence.
rgule qui permet den ajuster lintensit. Dautres ont, au
Figure 44. Coupe transversale dun microscope Lgende
N Systme N Elment
1
1 Tte binoculaire 1 Oculaire
3 2 2 Tube binoculaire
3 Tte binoculaire
4
2 Revolver porte- 4 Revolver porte-objectifs
5
objectifs
5 Objectifs
23
6 3 Platine et 6 Condenseur
22
21 7 condenseur
8 7 Diaphragme douverture
20 9
10 8 Porte-filtre
11 9 Lentille grand champ
12
13 21 Rglage du condenseur en hauteur
14
23 Platine porte-objet
19 18 17 16 15 4 Eclairage 10 Verre protecteur avec porte-filtre
11 Bouton de rglage du diaphragme de champ
12 Miroir concave
13 Lampe incandescence
14 Support de la lampe avec bague de rglage
15 Lentille du collecteur
16 Miroir
5 Corps du 17 Transformateur interne
microscope
18 Rhostat
19 Cble dalimentation
20 Bouton de rglage macromtrique et
micromtrique
22 Bras du microscope
24 Socle
108
PROBLEMES POTENTIELS AVEC LES MICROSCOPES intervention trs complexe qui ne peut tre confie qu
un laboratoire spcialis ou une socit de maintenance
assurant ce type de service. Si on enlve un prisme sans
une formation et un outillage adquats, on peut gravement
Figure 45. Tte binoculaire
altrer la qualit de limage et mme casser llment du
microscope.
t Miroirs. Leur surface rflchissante est directement
expose et peut se corroder. Si une rparation est
Oculaire
ncessaire, il faut dmonter le miroir, lenlever de la tte
binoculaire et le remplacer par un autre qui sera coup,
Tte binoculaire Tube binoculaire coll et align directement dans sa position dfinitive.
(prismes, lentilles et miroirs)
Figure 46. Systme dclairage
Oculaires 10
Les problmes les plus frquents avec les oculaires sont dus
la poussire et lencrassement, aussi bien sur les surfaces
11
internes que sur les surfaces externes. Ces impurets produisent 12
des ombres qui interfrent avec lobjet analys, surtout fort 13
grossissement (40X-100X). Si elles se trouvent lextrieur, il
suffit de nettoyer les lentilles. Si elles sont lintrieur, il faut
dmonter loculaire, nettoyer les surfaces internes, remonter 14
loculaire et vrifier son bon tat.
16 15
Des rayures peuvent sobserver la surface des lentilles de
10. Verre protecteur avec ltres interchangeables
loculaire, surtout si celui-ci est utilis depuis longtemps.
11. Bouton de rglage du diaphragme de champ
Elles sont dues la ngligence lors du nettoyage, du fait de
12. Miroir concave
lutilisation de matriaux inadapts. Les rayures produisent
13. Lampe incandescence
des ombres ressemblant des toiles daraigne dans le 14. Support de la lampe avec bague de rglage
champ visuel de loculaire. Avec ce type de dommage, il faut 15. Lentille du collecteur
malheureusement remplacer loculaire. Parfois, le mcanisme 16. Miroir
de rglage de la mise au point de loculaire se bloque. Pour
le rparer, il faut dmonter loculaire, appliquer un solvant
appropri sur le filetage, nettoyer le mcanisme de mise
au point et remonter loculaire. Si les lentilles de loculaire Cest un lment fondamental du microscope. Si le systme
sont casses en raison de circonstances particulires (chutes, dclairage ne fonctionne pas bien, le microscope est inutilisable
utilisation inapproprie), il faut remplacer loculaire. car lintensit lumineuse et le contraste sont indispensables pour
observer les chantillons. Plusieurs facteurs peuvent affecter
Tte binoculaire le systme dclairage ; les plus courants sont lencrassement
Ltat de la tte binoculaire a un effet direct sur la qualit et la dtrioration des miroirs et des lentilles, les dfauts de
de limage fournie par le microscope. Ses lments les plus la tension dalimentation, ou lutilisation dampoules autres
importants sont les prismes et les miroirs. Lencrassement des que celles recommandes par le fabricant. Ces anomalies
lments optiques de la tte affecte la qualit de limage. La provoquent de petites ombres dans le champ de vision et une
tte binoculaire peut dailleurs se salir lors du travail normal de intensit lumineuse trop faible, ou un manque duniformit
laboratoire, par exemple lorsquon change les oculaires, quon de lclairage.
installe des accessoires (par exemple un appareil photo) ou
simplement lorsquon oublie de remettre les protections quand Poussire et encrassement internes
le microscope nest pas en service. Cela se produit lorsque les systmes dclairage ne sont
pas scells pour empcher linfiltration de la poussire et
t Prismes. Ils ont des surfaces rflchissantes argentes qui des impurets. La prsence de poussire dans le systme
peuvent se corroder avec le temps et perdre leur pouvoir provoque un phnomne de diffusion et diminue la quantit
rflchissant. Certains prismes nont quune seule couche de lumire projete sur lchantillon. Les impurets de grande
de peinture rflchissante, que la lumire peut traverser. taille produisent des ombres qui rendent lobservation difficile.
Si la surface rflchissante est endommage, on peut Pour remdier ce problme, il faut dmonter le systme
enlever le prisme, le nettoyer, le polir ou le repeindre, le dclairage, nettoyer ses lments, le remonter et le raligner.
rinstaller et laligner dans la tte binoculaire. Il sagit dune
109
Miroirs Platine porte-objet

Les miroirs ont un revtement rflchissant directement La platine du microscope se compose dune srie dlments
appliqu sur leur surface. Dans les microscopes rcents, ils qui interagissent pour contrler la position de lchantillon
sont en gnral recouverts dune couche protectrice. Dans les observer. La platine peut se dplacer selon les axes X et
appareils plus anciens, la couche rflchissante est expose Y au moyen de boutons macromtrique et micromtrique
la corrosion indpendants. Elle possde aussi des dispositifs qui permettent
des dplacements sans -coups grce des glissires en queue
Lampe incandescence daronde, qui sont normalement lubrifies. Le dessus de la
Lampoule est un consommable dont la dure de vie platine porte des plaques ou des clips servant maintenir les
oprationnelle est limite. Son acquisition doit tre prvue lames dchantillons. Lentretien consiste assurer que ces
lavance de faon assurer quil y aura toujours une ampoule lments sont propres, lubrifis et bien ajusts.
de rechange dans le laboratoire ou ltablissement o le
microscope est install. Lampoule doit tre mise en place selon Lentretien du revolver porte-objectifs est simple. Il possde un
les instructions du fabricant. Certains appareils, comme les mcanisme interne qui assure lalignement de lobjectif utilis
microscopes fluorescence, utilisent des ampoules spciales avec le systme optique du microscope. On le fait simplement
(au mercure ou au xnon) qui ncessitent des procdures tourner jusqu ce quun mcanisme dencliquetage mette
de montage et dtalonnage qui, bien que simples, doivent correctement en place lobjectif suivant. Chaque fabricant
tre ralises selon les recommandations du fabricant. La dfinit le nombre dobjectifs qui peuvent tre monts sur le
tension dalimentation du microscope doit tre celle spcifie revolver. Dans la plupart des cas, le revolver porte de trois
par le fabricant. Sinon, on sexpose des risques inutiles qui cinq objectifs. Lentretien consiste assurer que le mcanisme
pourraient affecter la qualit de lclairage. Il faut noter que de rotation est propre, lubrifi et bien ajust.
certains microscopes ont des transformateurs internes ou
externes et des systmes de rgulation de la tension.
Figure 48. Revolver porte-objectifs
Figure 47. Platine porte-objet (platine mcanique)

4
5
23
6
4. Revolver porte-objectifs
21 7
8 5. Objectifs
9
6. Condenseur Les surfaces optiques externes des objectifs doivent tre

7. Diaphragme douverture rgulirement nettoyes. Avec les objectifs immersion, il faut
8. Porte-ltre essuyer lhuile aprs chaque utilisation de faon viter quelle
9. Lentille grand champ ne contamine les lments optiques internes par capillarit.
21. Rglage du condenseur en hauteur
23. Platine porte-objet Le corps du microscope (aussi appel statif ) est destin
recevoir les lments que lon vient de dcrire (tte binoculaire,
platine porte-objet, condenseur, revolver porte-objectifs, autres
Condenseur lments comme le transformateur, et lments lectriques et
Le condenseur rgle la faon dont la lumire est concentre lectroniques du systme dclairage).
ou contraste sur lchantillon examiner. Il se compose
dlments optiques et mcaniques. Les lments optiques Lentretien du corps du microscope consiste essentiellement
sont des lentilles et les lments mcaniques sont ceux le dbarrasser des poussires et impurets qui peuvent
qui contrlent la position des lentilles et, au moyen dun affecter son aspect extrieur et son fonctionnement. Il faut
diaphragme, la quantit de lumire qui atteint lchantillon. tre prudent avec les produits chimiques qui peuvent tre
corrosifs, par exemple les ractifs utiliss au laboratoire pour
Normalement, les lments optiques sont affects par la la coloration des lames.
prsence de poussire. Il faut lenlever comme pour les autres
lentilles, en utilisant un pinceau fin en poil de chameau. Les
lments mcaniques ncessitent des rglages au moyen
doutils spciaux, chaque fabricant ayant ses propres modles.
Lentretien courant porte sur le nettoyage, le rglage et la
lubrification.
110
Figure 49. Corps du microscope 4. Vrifier que lemplacement choisi a une prise de courant
compatible avec le systme dclairage du microscope. Elle
doit tre en bon tat et alimente en courant de voltage,
dintensit et de frquence conformes aux normes en
vigueur. Si le microscope est clair par un miroir, il doit
tre plac prs dune fentre donnant un bon clairage
mais ne doit pas tre expos la lumire solaire directe.
22
5. Installer le microscope sur une surface horizontale, qui doit
20
reposer sur une structure rigide laissant suffisamment de
place pour les jambes de loprateur. Celui-ci doit pouvoir
sapprocher du microscope avec la tte hauteur des
oculaires sans occasionner de tensions au niveau de la
colonne vertbrale, du dos et du cou.
19 18 17 6. Pour favoriser une bonne position de travail, prvoir une
chaise de hauteur rglable avec un bon soutien dorsal.
17. Transformateur interne Le cas chant, prvoir un repose-pieds devant le poste
18. Rhostat de travail (et non fix la chaise), afin que la colonne
19. Cble dalimentation vertbrale reste aussi droite que possible et que loprateur
20. Boutons de rglage macromtrique et micromtrique ne soit pas oblig de pencher la tte et les paules.
22. Bras du microscope 7. Eviter de placer le microscope proximit dappareils
produisant des vibrations, comme des centrifugeuses ou
des rfrigrateurs.
ENTRETIEN GNRAL DU MICROSCOPE 8. Essayer de ne pas dplacer le microscope, surtout sil est
Avant tout, il faut insister sur le fait que le microscope est un utilis quotidiennement de faon intensive.
instrument de haute prcision. Lintgrit de ses lments 9. Couvrir le microscope avec une housse de protection
optiques, mcaniques et lectriques doit tre prserve afin de contre la poussire si on ne lutilise pas pendant longtemps,
le maintenir dans son tat de fonctionnement optimal. Chaque en veillant ce quil ne soit pas expos une humidit
lment du microscope a t dvelopp selon les techniques de excessive. Plus lenvironnement est sec, moins on risque
fabrication les plus avances. Lassemblage a t ralis en usine de voir se dvelopper des moisissures. La housse peut tre
laide dun quipement spcialis. Pendant tout ce processus, en plastique ou en tissu fin et non pelucheux (comme du
les tolrances entre les diffrents lments composant lappareil tissu mouchoirs).
sont strictement contrles au moyen de techniques de mesure 10. Dans les zones trs humides, placer le microscope dans une
trs pousses. La propret de lenvironnement du microscope bote ou un placard clair par une ampoule de 40 W au
et le soin apport son installation et son utilisation sont maximum pendant la nuit. Cela permet dviter lhumidit
primordiaux pour assurer sa longvit. Lhumidit, la poussire, et le dveloppement de moisissures. Si on choisit cette
une alimentation lectrique en mauvais tat, un usage inadapt solution, il faut vrifier que des trous daration sont prvus
ou une installation dfectueuse sont des facteurs qui nuisent au pour que lair puisse circuler lintrieur.
contraire sa conservation. Lentretien dun microscope exige
du soin, de la patience et de lattention. Il ne doit tre ralis Procdures de nettoyage
que par un personnel qualifi disposant doutils spcialiss. On Le nettoyage du microscope est lune des oprations de
trouvera ci-aprs des recommandations gnrales qui devront routine les plus importantes et doit tre considr comme
tre appliques pour installer correctement le microscope et le indispensable. Le matriel suivant est ncessaire.
maintenir en bon tat de fonctionnement.
1. Un chiffon propre en tissu fin (comme du tissu
Installation et rangement mouchoirs).
1. Sassurer que lemplacement o sera install le microscope 2. Un flacon de solution de nettoyage pour lentilles de
est protg de la poussire et de lhumidit. Dans lidal, microscope, que lon peut se procurer chez un opticien.
il devrait y avoir un systme de climatisation garantissant Normalement, cette solution naltre pas le revtement
un air exempt de poussire ou de particules et dont le protecteur des lentilles ni les adhsifs ou colles utiliss pour
degr dhumidit et la temprature sont contrls en le montage. Lther et le xylne figurent parmi les liquides
permanence. de nettoyage les plus utiliss.
2. Vrifier que le local est sr et possde une porte ferme
cl pour prvenir tout enlvement non autoris du
microscope.
3. Vrifier que lemplacement du microscope se trouve loin
des points deau ou des secteurs o lon manipule des
produits chimiques, de faon viter toutes projections ou
claboussures. Il faut galement viter les endroits exposs
la lumire solaire directe.
111
C H A P I T R E 15 MI C R O S COPE
3. Papier optique. On peut normalement sen procurer chez de la poire en caoutchouc. Cela suffit pour nettoyer les
un opticien. Si ce nest pas possible, on peut le remplacer surfaces externes. Si ncessaire, on peut humecter la peau
par un papier absorbant doux ou par du coton hydrophile. de chamois avec de leau distille.
On peut aussi utiliser un morceau de tissu de soie. 2. Si les conditions dinstallation sont correctes, les surfaces
4. Une peau de chamois trs fine. On peut sen procurer dans internes des lments optiques ne doivent pas tre salies
les commerces de chaussures. par de la poussire ou autres particules. Si pour une raison
5. Une poire en caoutchouc (de type mouche-bb) quelconque des particules sont dtectes, il est ncessaire
pour souffler de lair. On peut fabriquer un dispositif au daccder lintrieur des lments du microscope pour
laboratoire en montant une pipette Pasteur sur la poire effectuer le nettoyage. Il ne faut jamais ouvrir un oculaire
en caoutchouc. ou un objectif sil ny a pas un environnement propre pour
6. Une housse en plastique pour protger le microscope effectuer le nettoyage. Nettoyer avec un pinceau doux et
de lenvironnement externe lorsquil nest pas utilis. On une poire en caoutchouc comme indiqu plus haut. Il est
peut aussi utiliser un sac en tissu trs fin (comme du tissu absolument dconseill de dmonter les objectifs pour
mouchoirs). ne pas modifier les tolrances de montage observes par
7. Un pinceau doux en poil de chameau ou un pinceau le fabricant. Si on dmonte un objectif, il faudra raligner
peinture fin. Il est trs important que les poils du pinceau les lments, ce qui ne sera possible quen se conformant
soient en matire naturelle, de longueur uniforme, trs strictement aux instructions du fabricant. Le nettoyage des
souples, secs et exempts de graisse. On peut sen procurer objectifs se limitera assurer la propret des deux lentilles
dans les magasins de photographie. On peut aussi trouver (postrieure et antrieure).
lquivalent au rayon cosmtiques des magasins. 3. Si on dtecte des rsidus dhuile pour immersion la
8. Un paquet de 250 g de dessiccateur (gel de silice). On surface des lentilles, les liminer laide de papier optique
lutilise pour absorber lhumidit dans la bote de stockage ou de coton hydrophile. On peut ensuite nettoyer la surface
du microscope si elle est tanche. Le gel de silice change de de la lentille avec une solution compose de 80 % dther
couleur lorsquil est satur dhumidit, ce qui indique quil de ptrole et 20 % de propane-2-ol.
faut le remplacer ou le rgnrer. Lorsquil est sec, le gel de
silice est en gnral bleu ; lorsquil est satur dhumidit, il Nettoyage du corps du microscope
est rose. 1. Le corps du microscope peut tre nettoy avec une
9. Ampoules et fusibles de rechange. Ils doivent tre du solution dtergente pour enlever les impurets externes
mme modle que les ampoules et fusibles installs par et dissoudre la plus grande partie de la graisse et de lhuile.
le fabricant ou avoir des caractristiques quivalentes. Appliquer cette solution avec un pinceau. Aprs avoir
enlev la graisse et les impurets, on nettoiera le corps
Note: Tout le matriel ncessaire pour le nettoyage du du microscope avec une solution 50/50 deau distille et
microscope doit tre tenu propre et stock dans des rcipients dthanol 95 %.
qui le protgent de lenvironnement externe. Note: Cette solution ne convient pas pour nettoyer les
surfaces optiques.
Nettoyage des lments optiques 2. Les parties intgres dans le mcanisme de rglage
Dans un microscope, il existe deux types dlments optiques : les grossier et fin (boutons de rglage macromtrique
lments externes en contact direct avec lenvironnement et les et micromtrique), de rglage du condenseur et de
lments internes, qui se trouvent dans le corps du microscope et dplacement de la platine porte-objet doivent tre
qui sont davantage protgs (objectifs, oculaires, miroirs, prismes, lubrifies intervalles rguliers avec de lhuile fine pour
condenseur, clairage, etc.). Les procdures de nettoyage, bien assurer des dplacements sans -coups..
que trs voisines, diffrent cependant par le niveau de soin et de
prcautions. Maintenance
1. Les lments optiques externes des oculaires, des objectifs, Les oprations les plus importantes pour maintenir un
du condenseur et de lclairage se nettoient laide du microscope en bon tat de fonctionnement sont, entre
pinceau doux, pour enlever la poussire. On utilise ensuite autres :
la poire en caoutchouc pour souffler les dernires particules 1. Vrifier lajustement de la platine mcanique (platine
de poussire qui se trouveraient la surface des lentilles. porte-objet). Elle doit se dplacer selon les deux axes X et
Si de la poussire adhre la surface optique, on nettoie Y et garder la position choisie par loprateur.
celle-ci en la frottant doucement, par des mouvements 2. Tester le mcanisme de mise au point. Le foyer choisi par
circulaires, avec un chiffon propre et trs doux, sans loprateur doit rester stable. La hauteur doit rester celle
appuyer. On chasse ensuite les particules restantes avec choisie par loprateur.
la poire en caoutchouc. On peut aussi utiliser une peau 3. Vrifier le fonctionnement du diaphragme.
de chamois trs fine. Dans ce cas, disposer la peau de 4. Nettoyer tous les lments mcaniques.
chamois sur lextrmit dun objet cylindrique de diamtre 5. Lubrifier le microscope selon les recommandations du
lgrement infrieur celui de la lentille. Sans appuyer, fabricant.
passer doucement la peau de chamois la surface de la 6. Vrifier lajustement des clips porte-lames.
lentille. Souffler ensuite les particules restantes laide 7. Vrifier lalignement optique.
112
Prcautions Prcautions spciales contre les moisissures en climat

1. Eviter de nettoyer les lments optiques avec de lthanol humide
car cela les endommagerait. Ne pas non plus nettoyer la En climat humide et surtout en climat chaud et humide, les
base de la platine avec du xylne ou de lactone. microscopes peuvent tre affects par le dveloppement de
2. Ne pas utiliser du papier ordinaire pour nettoyer les lentilles moisissures, principalement la surface des lentilles, dans les pas
car cela pourrait les rayer. de vis et sous la couche de peinture protectrice. Si linstrument
3. Pour viter de laisser des traces de doigts, ne pas toucher nest pas correctement protg, il risque dtre rapidement mis
les lentilles avec les doigts nus. hors dusage. Les prcautions ci-dessous aideront empcher le
4. Ne pas nettoyer les lentilles des oculaires ou des objectifs dveloppement de moisissures.
avec du tissu ou du papier car cela pourrait endommager le 1. La nuit, ranger le microscope dans une bote quipe
revtement protecteur de ces lments optiques. Nettoyer dune ampoule lectrique de 40 W maximum. Lampoule
ces surfaces avec un pinceau en poil de chameau ou en doit tre installe dans le haut de la bote, prs de la tte
soufflant de lair avec une poire en caoutchouc ou un binoculaire, et doit rester allume toute la nuit. La bote doit
mouche-bb. avoir quelques ouvertures pour que lair puisse circuler. La
5. Eviter de laisser le microscope sans les oculaires. Mettre les temprature lintrieur de la bote ne doit pas dpasser 50
capuchons de protection de ces derniers pour empcher C, pour ne pas nuire aux proprits des lubrifiants.
la poussire et les particules de pntrer dans la tte 2. Sil nest pas possible dutiliser une bote quipe dune
binoculaire. ampoule lectrique, on peut utiliser un dessiccateur
6. Ne pas laisser le microscope rang dans une bote lorsque comme le gel de silice ou simplement du riz. Si on utilise
lenvironnement est humide. un dessiccateur, vrifier que le microscope est rang
7. Eviter dappuyer lobjectif contre les lames car cela dans une bote ou protg par une housse en tissu fin
pourrait endommager la lamelle couvre-objet ou la lentille comme du tissu mouchoirs. Vrifier que le produit utilis
frontale de lobjectif. Faire la mise au point lentement et comme dessiccateur est en bon tat. Si ce nest pas le cas,
soigneusement. le remplacer.
8. Faire en sorte que la platine reste propre. 3. Nettoyer le microscope intervalles rguliers. Utiliser des
9. Ne pas dmonter les lments optiques car cela pourrait gants de latex si les lentilles doivent tre manipules. Cela
fausser lalignement. Les surfaces optiques doivent tre empchera de laisser des traces de doigts et rduira le risque
dabord nettoyes avec un pinceau en poil de chameau de dveloppement de moisissures.
puis avec une peau de chamois ou un papier optique. 4. Si aucune des alternatives mentionnes nest ralisable,
10. Utiliser les deux mains pour soulever le microscope, lune mettre le microscope dans un endroit bien ventil. Quand
tenant le bras du microscope et lautre son socle. le microscope nest pas utilis, on peut lexposer la lumire
11. Eviter de toucher lampoule avec les doigts lors de son solaire directe pendant de courtes priodes. Cela rduit
remplacement. Les traces de doigts diminuent lintensit lhumidit et le risque de dveloppement de moisissures
lumineuse. sur linstrument.
12. Vrifier que la tension dalimentation est correcte, afin de 5. La climatisation (contrle de la temprature et de
prolonger la dure de vie de lampoule. Si possible, utiliser lhumidit) empche de faon notable le dveloppement
la plus faible intensit lumineuse ncessaire pour faire les de moisissures sur les microscopes. Mais, pour un grand
observations. nombre de laboratoires, cette option nest pas envisageable.
13. Raccorder le microscope un stabilisateur de tension si le Si la climatisation ne fonctionne pas en permanence dans
voltage nest pas stable le secteur o le microscope est install, il faut prendre des
prcautions contre lhumidit.
Prcautions spciales pour les climats chauds
En climat chaud ou sec le principal problme qui affecte le Elimination des moisissures
microscope est la poussire, car elle endommage les systmes 1. Contrler et nettoyer frquemment le microscope selon
optiques et mcaniques. Pour viter ces inconvnients, les procdures dcrites dans ce chapitre. Contrler les
observer les prcautions suivantes : conditions dhumidit dans lendroit o le microscope est
1. Toujours protger le microscope avec une housse en rang. Si une ventilation adquate peut tre assure, cela
plastique lorsquil nest pas utilis. diminuera le risque de dveloppement de moisissures sur
2. Aprs utilisation, nettoyer le microscope en soufflant de le microscope.
lair avec une poire en caoutchouc. 2. Si on constate la prsence de moisissures, prendre
3. Nettoyer les lentilles avec un pinceau en poil de chameau un tampon douate (coton) tremp dans une solution
ou en soufflant de lair. Si la poussire adhre la surface antifongique, normalement de lther ou du xylol (xylne).
des lentilles, essayer de lenlever avec du papier optique, Frotter doucement en effectuant un mouvement circulaire
mais en frottant la surface trs doucement pour viter les sur toute la surface de la lentille. On peut aussi frotter en
rayures. faisant des va-et-vient de bas en haut ou de gauche
droite, en appuyant trs lgrement sur la surface de la
113
lentille. Si ncessaire, rpter lopration avec un nouveau Frquence : une fois par mois
tampon douate. 1. Enlever la poussire du corps du microscope. Utiliser un
3. Lorsque toutes les moisissures ont t enleves, nettoyer chiffon humect avec de leau distille.
avec un coton propre. 2. Enlever la poussire des oculaires, des objectifs et du
condenseur. Utiliser une poire en caoutchouc pour souffler
Entretien courant du microscope de lair afin de chasser les restes de poussire. Ensuite,
Frquence : tous les jours (aprs utilisation) nettoyer la surface des lentilles avec une solution de
1. Nettoyer lhuile immersion de lobjectif 100X. Utiliser du nettoyage pour lentilles de microscope. Ne pas appliquer
papier optique ou, dfaut, du coton hydrophile. directement la solution sur les lentilles, mais sur du papier
2. Nettoyer la platine porte-objet. optique puis frotter doucement la surface avec le papier
3. Nettoyer le condenseur. imbib de solution.
4. Mettre le rhostat de rglage de lintensit lumineuse sur 3. Retirer le mcanisme porte-lames (clips ou plaques), le
le minimum et teindre le systme dclairage. nettoyer soigneusement et le remettre en place.
5. Couvrir le microscope dune housse (en plastique ou
en tissu). Sassurer que le microscope se trouve dans Frquence : tous les six mois
un endroit bien ventil, o la temprature et lhumidit En complment des procdures dentretien mensuel, les
sont contrles. Si le microscope possde une bote de contrles suivants sont recommands :
rangement ventile et quipe dune ampoule lectrique 1. .Procder une inspection visuelle gnrale du microscope.
pour lutter contre lhumidit, le mettre dans la bote, Vrifier que tous les lments sont en bon tat, propres et
allumer lampoule et fermer la bote. bien ajusts.
2. Vrifier que de bonnes conditions de ventilation, de
temprature et dhumidit sont maintenues lendroit o
le microscope est install.
3. Contrler la qualit de linstallation lectrique qui alimente
le microscope. Vrifier lintgrit des cbles, des fusibles et
de lampoule lectrique.
114
GUIDE DE DPANNAGE
Systme dclairage
Le systme dclairage ne fonctionne pas. Le cble dalimentation lectrique est dbranch. Brancher le cble dalimentation.
Le fusible a saut. Remplacer le fusible.
Lampoule a grill. Remplacer lampoule. Vrifier quelle est bien
aligne.
Linterrupteur du systme dclairage est dfectueux. Remplacer linterrupteur.
Le systme dclairage ne donne pas une Le systme lectrique prsente des erreurs de voltage. Contrler et rparer le systme lectrique. Installer
lumire uniforme. un stabilisateur de tension entre la prise et le
microscope.
Le cble dalimentation est mal connect la prise de Brancher correctement le cble. Si un lment est
courant. dfectueux, le remplacer.
Lampoule est mal installe et a un mauvais contact. Remettre lampoule en place correctement.
Il y a des dpts mtalliques ou des taches noires sur Remplacer lampoule.
lampoule.
Lchantillon nest pas clair de faon uniforme. La source lumineuse nest pas centre. Rectifier lalignement du condenseur.
Lobjectif nest pas bien centr. Tourner lentement le revolver porte-objectif jusqu
entendre lencliquetage.
Lchantillon est insuffisamment clair. Liris du diaphragme est presque ferm. Ouvrir liris du diaphragme jusqu ce que lclairage
soit suffisant.
Le condenseur est loin de lchantillon (trop bas). Rapprocher le condenseur
Les lentilles du condenseur prsentent de la poussire ou Nettoyer le condenseur. Enlever la poussire avec un
des moisissures. pinceau. Enlever les moisissures avec une solution de
nettoyage pour lentilles de microscope.
Limage prsente un contraste excessif. Liris du diaphragme du condenseur est presque ferm. Ouvrir lgrement liris du diaphragme.
Limage est lgrement trop claire et brillante. Liris du diaphragme du condenseur est trs ouvert. Fermer lgrement liris du diaphragme.
Systme optique/mcanique
La platine ne garde pas sa position et la mise au Le rglage de tension de la platine a du jeu. Rgler le mcanisme de tension de la platine.
point de limage se drgle continuellement.
La platine ne peut tre monte au maximum. La platine est bloque un niveau trs bas. Desserrer le mcanisme de blocage de la platine.
Rgler la hauteur dsire. Resserrer le mcanisme
de blocage.
La qualit de limage est mauvaise avec Les lentilles prsentent des moisissures. Enlever les moisissures avec une solution de
lobjectif 40X nettoyage. Suivre les instructions du fabricant.
Les lentilles sont endommages. Contrler lobjectif. Vrifier si les lentilles sont rayes,
piquetes ou brches. Remplacer lobjectif.
Les lentilles sont accidentellement salies par de lhuile Enlever soigneusement lhuile avec du papier
immersion. optique.
Lobjectif immersion ne donne pas des images Lobjectif est utilis sans huile immersion. Mettre de lhuile immersion sur la lame.
claires.
Lhuile immersion a un faible indice de rfraction. Utiliser de lhuile de bonne qualit.
Il y a de lhuile immersion lintrieur de lobjectif. Nettoyer les lentilles avec du papier optique. Si le
nettoyage de lextrieur de lobjectif ne suffit pas,
envoyer lobjectif un laboratoire spcialis pour le
faire rparer. (Dmonter les lentilles, les nettoyer,
changer les joints, recoller, raligner et rassembler).
De la poussire ou des impurets apparaissent Il y a de la poussire sur la lentille du collecteur de la Enlever les poussires avec un pinceau en poil de
dans le champ de vision. source lumineuse. chameau.
Il y a de la poussire sur la lentille suprieure du Enlever les poussires avec un pinceau en poil de
condenseur. chameau.
Il y a de la poussire sur loculaire. Enlever les poussires avec un pinceau en poil de
chameau
115
DFINITIONS
Actone. Liquide incolore, inflammable, extrmement miscible leau ; cest un solvant utilis pour de nombreuses substances organiques. Point dbullition : 56 C. Formule
chimique :
CH3 CO CH3
Champ de vision. Aire de la surface qui est vue lorsquon regarde dans le microscope. Cette aire diminue mesure que le grossissement augmente. Le diamtre du champ
de vision est mesur en millimtres sur le plan mdian de limage. Le champ de vision dun microscope optique pour un grossissement donn est exprim par son diamtre
en mm ou simplement en valeur absolue (nombre de champ).
Diaphragme. Dispositif qui contrle le flux de lumire dans le microscope. Il existe deux types de diaphragmes : le diaphragme douverture, qui rgle langle douverture
du faisceau lumineux dans le microscope, et le diaphragme de champ, qui rgle la taille de limage. Dans les microscopes optiques, les diaphragmes servent viter que les
rayons lumineux prsentant de fortes aberrations natteignent le plan de formation de limage et assurer une distribution correcte de la lumire dans lchantillon et dans
le champ de limage.
Ethanol. Liquide incolore aussi appel alcool thylique. Largement utilis comme solvant industriel, par exemple dans lindustrie pharmaceutique. Masse volumique : 0,806
g/cm3 ; point dbullition : 78,3 C ; formule chimique :
CH3 CH2OH
Ether. Substance liquide drive de lthanol par limination dune molcule deau entre deux molcules dalcool. Cest un excellent solvant, pas trs miscible leau, trs
volatil et inflammable. Point dbullition : 35 C ; formule chimique :
CH3 CH2 O CH2 CH3
Foyer. Point o, du fait de la rfraction de la lumire, les rayons lumineux traversant une lentille se concentrent. Si les rayons lumineux convergent en un seul point, la lentille
est dite convergente (convexe) et limage au foyer est relle ; si les rayons lumineux divergent, la lentille est dite divergente (concave) et limage au foyer est virtuelle.
Indice de rfraction. Valeur calcule par la comparaison entre la vitesse de la lumire dans lespace et dans un second milieu plus dense. Il est normalement reprsent par
la lettre n ou n dans la littrature technique ou les formules mathmatiques.
Indice de rfraction. Valeur calcule par la comparaison entre la vitesse de la lumire dans lespace et dans un second milieu plus dense. Il est normalement reprsent
par la lettre n ou n dans la littrature technique ou les formules mathmatiques.
Oculaire. Jeu de lentilles au travers desquelles le microscopiste observe limage (image relle ou virtuelle selon la relation qui existe avec les autres jeux de lentilles du
microscope).
Ouverture numrique. Mesure de la capacit dun objectif concentrer la lumire et distinguer les dtails fins dun objet. Normalement, la valeur de louverture numrique
est inscrite sur le ct de lobjectif. Une valeur plus leve de louverture numrique permet un plus grand nombre de rayons lumineux obliques de traverser la lentille
frontale de lobjectif, ce qui donnera une meilleure rsolution de limage. Elle sexprime par la formule mathmatique :
NA nsinq
dans laquelle : Ouverture numrique Expression mathmatique

NA = ouverture numrique (Numerical Aperture)
n = indice de rfraction (n = 1 pour lair ; n = 1,52 pour NA = n x Sin
160 0.27 = 1 x
lhuile immersion)
Sin (16)
= angle douverture. Plus langle est grand, Grossissement :
plus louverture numrique est grande et meilleure est la rsolution. environ 10X
NA = n x Sin
250 0.42 = 1 x
Sin (25)
Grossissement :
environ 20X
NA = n x Sin
430 0.68 = 1 x
Sin (43)
Grossissement :
environ 40X
116
Plage de grossissement utile. La plage de grossissement utile du systme objectif/oculaire est dfinie par louverture numrique du systme. Pour percevoir les dtails
dune image, il faut un grossissement classiquement compris entre 500 et 1000 fois louverture numrique de lobjectif. (Le grossissement utile est acceptable entre 500
et 1000 NA).
Profondeur de champ. Epaisseur sur laquelle lchantillon ou lobjet est dune nettet satisfaisante pour une mise au point donne.
Profondeur de foyer. Intervalle sur lequel le plan de limage peut tre dplac tout en conservant sa nettet.
Propanol. Aussi appel alcool isopropylique, prpar par hydratation du propylne. Utilis comme solvant et galement dans la prparation de lactone. Point
dbullition : 83 C ; formule chimique :
CH3 CHOH CH3
Rsolution. Aptitude distinguer les dtails les plus fins dune prparation ou dun chantillon particulier. Parmi les facteurs qui permettent dobtenir une rsolution leve
figurent louverture numrique, le type dchantillon, lclairage, la correction des aberrations et le type de contraste utilis. Cest lune des caractristiques principales du
microscope.
Revolver porte-objectifs. Dispositif mcanique qui supporte les objectifs et qui permet de changer rapidement dobjectif par simple rotation. Le nombre dobjectifs quil
peut recevoir varie selon le type de microscope. En gnral, il peut porter entre trois et cinq objectifs.
Xylne. Isomre de lthylbenzne driv du charbon. Utilis comme solvant et dans la prparation des colorants et des laques. Point dbullition : 138-144 C ; formule
chimique :
CH3
C6H4
CH3
117
Chapitre 16
Pipettes
Code GMDN 15166
Code ECRI 15-166
Dnomination Pipettes
Les pipettes sont des dispositifs utiliss pour mesurer ou

Figure 50. Schma dune pipette
transfrer de petits volumes de liquides dun rcipient un
autre avec une grande prcision. Il existe de nombreux modles
de pipettes. Au dbut, elles taient en verre, mais actuellement Bouton-poussoir
du piston Bouton djection de la pointe
il en existe une grande varit. On sintressera surtout ici aux
pipettes volume fixe et aux pipettes volume variable avec Bouton molet pour
le rglage du volume
contrle mcanique. Des pipettes contrles par un systme
Micromtre Poigne de la pipette
lectronique ont t rcemment introduites sur le march. Le
prsent chapitre traite de lentretien et de ltalonnage1 des Raccord
Piston
pipettes mcaniques.
Ressort Joint torique
1 Axe
Ltalonnage doit tre ralis exclusivement par un personnel qualifi et en
se conformant aux normes internationales en vigueur telles que la norme
BS EN ISO 8655-6:2002 ou ses mises jour. Les instruments de travail de Manchon djection de la pointe
rfrence doivent tre dment talonns par des organismes nationaux ou
internationaux chargs de vrifier la conformit aux talons internationaux
de mesure.
PHOTOGRAPHIES ET SCHMA DE PIPETTES
Pipette simple Pipette multicanaux

Photo avec l aimable autorisation de Eppendorf AG
Photo avec l aimable autorisation de Gilson S.A.S.
119
C H A P I T R E 16 P I P E T T E S
QUOI SERT UNE PIPETTE exclusivement les pointes fournies par le fabricant ou des
Les pipettes sont des dispositifs largement utiliss dans les pointes compatibles pour garantir un ajustement correct sur
laboratoires danalyses mdicales et dans les laboratoires de le corps de la pipette et lexactitude du volume dlivr. Pour
recherche pour distribuer des quantits exactes de liquides. faciliter lidentification de ces volumes, certains fabricants ont
adopt un code de couleur qui simplifie lidentification des
volumes dlivrer. Le tableau ci-dessous donne les conventions
PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT de couleurs.
La pipette mcanique ou pipette piston fonctionne en
gnral par transmission de la force exerce manuellement sur
le bouton-poussoir du piston. La tige du piston est raccorde
Tableau des codes de couleur pour les pipettes
au corps du piston qui se dplace dans un cylindre de longueur
fixe, en forant un volume prdtermin de liquide vers Plage de volume en microlitres
lextrieur ou lintrieur de la pipette. (l) Couleur
0,12,5 l Noir
Il existe deux types de pipettes piston : la pipette volume
0,510 l Gris
fixe, avec un volume de liquide prdtermin appel volume
nominal (VN), et la pipette volume variable, qui permet 2,020 l Gris/jaune
dajuster le volume dlivr dans un intervalle dtermin qui 10100 l Jaune
dpend des spcifications de la pipette. Le rglage du volume 50200 l Jaune
se fait en modifiant la course du piston dans le cylindre.
1001000 l Bleu
Dans les pipettes volume variable, le volume nominal est le
volume maximum utile de la pipette selon les spcifications 5002500 l Rouge
du fabricant.
Les pipettes volume fixe et volume variable peuvent se CONDITIONS REQUISES POUR LUTILISATION
subdiviser en deux types, le type A et le type B. Les pipettes Pour une utilisation correcte des pipettes, il faut que le
de type A sont appeles pipettes dplacement dair car il y laboratoire soit propre et bien clair. Les conditions gnrales
a un volume dair (coussin dair) entre le corps du piston et remplir sont les suivantes :
le liquide qui se trouve dans le cylindre (voir pipette N 1 de 1. Vrifier que la temprature du laboratoire est stable, avec
la figure 44). Les pipettes de type B sont appeles pipettes une temprature optimale de 20 C et un intervalle de
dplacement positif car le piston est en contact direct avec le variation de 5 C (entre 15 C et 30 C).
liquide (voir pipette N 2). La figure 44 montre les diffrences 2. Vrifier que lhumidit relative (degr hygromtrique)
entre ces deux types de pipettes. est suprieure 50 %. Les pipettes et les chantillons ou
substances liquides doivent squilibrer avec les conditions
Les pipettes dplacement dair ont lavantage de prsenter du laboratoire. Il est en gnral recommand de les laisser
moins de risques de contamination en cas dutilisation squilibrer au laboratoire pendant deux trois heures
intensive. Mais elles ne sont pas aussi prcises que les pipettes avant de commencer le travail.
dplacement positif lorsquon travaille avec de trs petits 3. Eviter de travailler avec des pipettes la lumire solaire
volumes de liquide, du fait de la compressibilit de lair. Toutes directe.
les pipettes piston ont des pointes jetables pour limiter 4. Utiliser un quipement protecteur appropri pour travailler
les risques de contamination. Il est recommand dutiliser avec des substances toxiques ou comportant un risque
biologique
Figure 51. Types de pipettes
Tige du piston Coussin dair

Piston Cylindre
Pointe
1. Pipette dplacement dair

Piston Pointe
Tige du piston
2. Pipette dplacement positif
120
UTILISATION DE LA PIPETTE 3. Pour une meilleure justesse du pipetage, humidifier les

Pour obtenir des rsultats prcis, exacts et fiables, il est pointes des pipettes dplacement dair. Pour cela, aspirer
ncessaire que les oprateurs connaissent en dtail les de la solution de travail plusieurs reprises en la vidant
procdures correctes de pipetage. Ils doivent pour cela dans un bac dchets. On rduit ainsi le risque daspirer des
suivre une formation puis une mise jour rgulire de leurs bulles dair lorsquon travaille avec des liquides denses ou
connaissances sur lutilisation des pipettes. On trouvera ci- hydrophobes. Cette faon de faire permet aussi dobtenir
dessous un aperu gnral de lutilisation approprie des une humidit homogne lintrieur du coussin dair de
pipettes. la pipette (espace entre la base du piston et la surface
du liquide). Il nest pas ncessaire de pr-humidifier les
pipettes dlivrant des volumes infrieurs ou gaux 10 l.
Il nest pas non plus ncessaire dhumidifier les pipettes
dplacement positif.
4. Aprs avoir rempli la pointe de la pipette, liminer les
Recommandations gnrales gouttes qui pourraient rester sur la pointe en la faisant
1. Vrifier que la pipette est en position verticale pour aspirer doucement glisser le long de la paroi du tube contenant
un liquide. Cette position garantit labsence dincertitude le liquide. Il peut tre ncessaire dutiliser un matriau
due de petites variations de la surface du liquide. absorbant, en vitant de toucher lextrmit de la pointe
2. Suivre les recommandations du fabricant pour la profondeur et en prenant les prcautions voulues, si le matriel prlev
minimale laquelle la pointe doit tre immerge pour prsente des signes de contamination.
aspirer des liquides. Cette profondeur varie selon le type 5. Pour dlivrer le liquide prlev, placer la pointe contre
et la capacit de la pipette. Le tableau ci-dessous donne la paroi du tube receveur. La pointe de la pipette doit
des indications gnrales ce sujet1: former un angle compris entre 30 et 45 avec le tube, une
distance de 8 10 mm au-dessus de la surface du liquide
Profondeur dimmersion de la pointe selon la plage de volume de Technique de pipetage correcte

la pipette
On trouvera ci-dessous une description de la procdure
Plage de volume de la pipette Profondeur dimmersion gnrale suivre lors de lutilisation dune pipette mcanique
(l) (mm) dplacement dair. Loprateur doit tenir compte des
recommandations spcifiques du fabricant. Cette rgle vaut
1100 23
galement pour les pipettes lectroniques. Le schma de la
1001000 24 figure 52 dcrit les tapes de la procdure.
1 0005000 25
1 Blues, J., Bayliss, D., Buckley, M., The calibration and use of piston pipette, UK,
National Physical Laboratory, Teddington, Middlesex, 2004, page. 6.
(www.npl.co.uk)
Figure 52. Etapes de lutilisation dune pipette

Position
A 1 2 3 4 5 6 F
B
C
121
1. Mettre une nouvelle pointe sur lembout selon les Inspection:

spcifications de la pipette. Eviter de contaminer la pointe Frquence : une fois par jour
avec dautres substances. Vrifier quelle est bien ajuste. Les pipettes doivent tre frquemment inspectes afin de
2. Appuyer doucement sur le piston jusqu ce quil atteigne dtecter toute usure ou dtrioration anormales et/ou de
le premier cran. Jusqu ce moment, la pointe de la pipette vrifier quelles sont en bon tat de marche. Linspection doit
ne doit pas toucher le liquide. porter sur les aspects suivants :
3. Plonger lextrmit de la pointe dans le liquide. Vrifier la 1. Vrifier lintgrit et lajustement des mcanismes. Ils
profondeur indique dans le tableau de la page 121 ou doivent jouer librement. Le piston doit se dplacer sans
suivre les recommandations du fabricant. Vrifier que la -coups.
pipette est en position verticale. Cette tape correspond 2. Vrifier que lembout de fixation de la pointe ne prsente pas
la position 1B (la premire en partant de la gauche) sur de distorsions ni de signes dusure, car il est indispensable
la figure 52. pour lexactitude des mesures. Vrifier lajustement des
4. Tirer doucement sur le piston pour que la pipette aspire le pointes.
liquide (position 2A). Vrifier que le piston est entirement 3. Mettre une pointe en place et la remplir deau distille. La
remont. Attendre au moins deux secondes avant de sortir pipette ne doit prsenter aucune fuite.
la pointe du liquide.
5. Placer la pointe de la pipette contre la paroi du tube Nettoyage et dcontamination
receveur. Vrifier que langle form par la pointe avec la 1. Vrifier tous les jours que la pipette est propre. Si elle parat
paroi du tube se situe entre 30 et 45. Si le tube receveur sale, la nettoyer avec un solvant appropri ou un dtergent
contient dj du liquide, viter dy plonger la pointe de la doux en solution. Consulter les recommandations du
pipette (position 3A). fabricant sur la compatibilit de la pipette avec les solvants
6. Distribuer le contenu de la pipette en appuyant doucement afin de choisir celui qui convient.
mais fermement sur le piston, jusquau premier cran 2. Striliser la pipette selon les instructions du fabricant.
(position 4B). Laisser la pointe de la pipette au contact de Certaines pipettes peuvent tre strilises en autoclave,
la paroi du tube. Faire doucement glisser la pointe le long avec un cycle de 121 C pendant 20 minutes environ.
de la paroi du tube jusqu une distance de 8 10 mm du Certaines devront tre dmontes pour permettre la
bord du tube pour assurer quil ne reste aucune goutte de vapeur dentrer en contact avec les lments internes1.
liquide sur la pointe de la pipette. Pour le dmontage, il faut dgager et dvisser le corps
7. Appuyer doucement sur le piston jusquau deuxime cran central de la pipette selon le mode demploi indiqu
(position 5C). Cela permet dexpulser toute fraction de par le fabricant. Pour dmonter ou remonter certaines
liquide restant dans la pointe de la pipette en chassant pipettes, il faut utiliser un jeu doutils (cls) fourni par le
lair rsiduel par lorifice de la pointe. Maintenir le piston au fabricant au moment de lachat de la pipette. Aprs le
deuxime cran tout en retirant la pipette du tube receveur. cycle de strilisation, attendre que la pipette soit revenue
Une fois la pipette sortie du tube, librer doucement le la temprature ambiante pour la remonter. Il faut aussi
piston jusquau cran suprieur. vrifier que les lments sont secs. Certains fabricants
8. Jeter la pointe de la pipette. Pour cela, appuyer sur le recommandent de striliser les pipettes avec une solution
bouton djection (position 6). disopropanol 60 %, laver les lments leau distille, les
scher et les remonter.
Note: Si on utilise une pipette volume variable, il faut dabord 3. Si une pipette a t utilise avec des substances
choisir le volume distribuer. Suivre pour cela les instructions dangereuses, lutilisateur doit sassurer quelle est
du fabricant. Normalement, le dispositif de rglage du volume entirement dcontamine avant dtre utilise pour
se trouve sur la partie suprieure de la pipette. Il est ncessaire dautres manipulations ou dtre sortie du laboratoire. Il est
que loprateur sache distinguer les diffrentes chelles de conseill de prparer sans tarder un rapport indiquant la
volume. marque, le modle et le numro de srie de la pipette, les
substances contaminantes et les produits ou procdures
ENTRETIEN DE ROUTINE employs pour la traiter ou la nettoyer
On trouvera ci-aprs les grandes lignes des procdures
dentretien courant des pipettes mcaniques. Les interventions
spcifiques devront tre ralises sur les diffrents modles en
se conformant au manuel dutilisation fourni par le fabricant.
1 Les pipettes strilisables la vapeur ont une marque qui indiquent cette
proprit ; le fabricant fournit le mode demploi pour le dmontage..
122
Maintenance 3. Lubrifier la tige et le piston avec de la graisse silicone1

Frquence
q : deux fois par
p an spcialement conue pour les pipettes. Toujours utiliser le
Une pipette utilise quotidiennement doit tre soumise lubrifiant recommand par le fabricant. Enlever tout excs
aux procdures suivantes afin de garantir son bon de lubrifiant avec un papier absorbant.
fonctionnement : 4. Remonter la pipette en procdant dans lordre inverse.
1. Dmonter la pipette. Suivre le mode opratoire dcrit dans 5. Etalonner la pipette avant emploi.
le manuel dutilisation (ce mode opratoire varie selon la
marque et le modle). Normalement, on spare le corps de Notions dtalonnage des pipettes
la pipette du systme djection de la pointe en dvissant Ltalonnage des pipettes est ralis selon des procdures
le corps de la pipette du cylindre. standardises.
2. Nettoyer les joints toriques, la tige du piston et lintrieur
du cylindre avant de les lubrifier. En cas de contamination La mthode dtalonnage dpend principalement du volume
accidentelle des lments internes de la pipette, les manipul par la pipette. Plus la plage de volume est faible, plus
nettoyer avec un dtergent doux puis leau distille. Si ltalonnage est compliqu et coteux. On trouvera ci-dessous
les joints toriques ou les joints dtanchit doivent tre une description succincte de la mthode gravimtrique utilise
changs, les joints de rechange doivent avoir les mmes avec les pipettes dlivrant des volumes compris entre 20 l
caractristiques que ceux dorigine. Le type de joint varie (microlitres) et 1 ml (millilitre).
selon la marque, le type et le modle de pipette.
Matriel et appareillage ncessaires2
1. Balance danalyse
2. Thermomtre lectronique ayant une rsolution dau
moins 0,1 C, un intervalle de temprature appropri et
une sonde submersible
Figure 53. Dmontage dune pipette
3. Hygromtre ayant une incertitude type de 10 % ou
moins
4. Baromtre ayant une incertitude type de 0,5 kPa ou
moins
Couvercle de Bouton-poussoir 5. Minuteur
la poigne 6. Micropipettes de divers volumes
7. Pointes jetables de divers volumes
Ejecteur de pointe 8. Flacons fond plat
Poigne Ressort de ljecteur de pointe 9. Eau bi- ou tri-distille dgaze
10. Un oprateur qualifi.
Fentre indicatrice de volume
Frquence recommande pour ltalonnage des

pipettes
Assemblage Manchon de ljecteur de pointe
(Une fois par trimestre)
du piston
Principe
La procdure est base sur la mesure du volume dun
chantillon deau partir de la masse deau dlivre par la
Ressort secondaire
Piston pipette, en divisant cette masse par la masse volumique
de leau. En pratique, on effectue un groupe de mesures,
auxquelles on apporte des corrections pour compenser toutes
variations par rapport aux conditions standard de temprature
Embout conique et de pression atmosphrique et toute vaporation importante
Joint torique survenue pendant la dure des tests.
Support du ressort
Ressort du piston
Filtre
1 Il existe diffrentes spcifications pour la graisse silicone ; il faut donc

utiliser celle qui est recommande par le fabricant.
2 Lappareillage utilis pour talonner les pipettes doit tre certifi par un
laboratoire dtalonnage accrdit.
123
Ce type de test permet de procder aux vrifications 2. Convertir chaque masse en un volume 20 C en divisant
suivantes : la masse par la masse volumique de leau ajuste sur la
1. Comparer diffrents types de pipettes entre elles pour temprature mentionne.
rechercher dventuelles diffrences.
Mi
2. Vrifier la prcision et lexactitude dune pipette. Vi
3. Vrifier lexactitude et la prcision dun lot de pipettes. D
4. Vrifier les facteurs imputables lutilisation dune mme 3. Calculer la moyenne des volumes calculs au point 2.
pipette par plusieurs oprateurs. (Somme des volumes divise par le nombre dchantillons).
Faire les corrections pour les phnomnes tels que la
Procdure1 pression de lair sur la masse (flottabilit). Pour cela,
La procdure dcrite ci-dessous est valable pour les pipettes multiplier chaque valeur de la masse par un facteur de
dplacement dair. Elle comporte les tapes suivantes : correction (Z).
1. Mettre une nouvelle pointe sur la pipette.
2. Pipeter de leau distille et la vider dans un bac dchets. X -V i n = Z
Rpter au moins 5 fois pour stabiliser lhumidit
lintrieur de la pipette. 4. Calculer lcart type de lchantillon.
3. Mettre de leau dans le rcipient de pese jusqu ce que n
le niveau de liquide atteigne au moins 3 mm. 1 2
SD = - X i < X AV
4. Noter la temprature de leau, la pression atmosphrique n <1 i1
et lhumidit relative.
5. Le cas chant, couvrir le rcipient de pese. 5. Calculer le coefficient de variation.
6. Noter le poids indiqu par la balance ou appuyer sur la
touche de tarage pour mettre la balance sur zro (0). S
7. Remplir la pipette avec de leau prise dans le rcipient Cv CV (%) =100
X AV
de stockage et la vider dans le rcipient de pese, en
expulsant bien toute leau. Procder de la mme faon Le tableau ci-dessous rcapitule les formules mathmatiques
que pour lusage quotidien des pipettes (voir point 7 de mentionnes.
la section Technique de pipetage correcte).
8. Noter le nouveau poids indiqu par la balance.
9. Rpter les tapes 7 et 8 encore neuf (9) fois en notant le Tableau des formules mathmatiques
poids enregistr par la balance la fin de chaque cycle.
10. Noter la temprature du liquide dans le rcipient de pese
la fin du dixime cycle et mesurer le temps coul depuis S
le dbut des mesures. X -V i n = Z Cv CV (%) =100
X AV
11. Vrifier si lvaporation a t importante (ce point est
fondamental lorsquon travaille avec des pipettes de trs
petit volume). Si cest le cas, il faut laisser scouler un
n
laps de temps (Ta) gal au temps coul pendant les dix 1 2 X < X Nom
SD = - X i < X AV D% AV
mesures, et au bout de ce temps refaire une mesure. n <1 i1 X Nom
12. La masse de leau perdue par vaporation au cours de la
priode supplmentaire (Ta) est divise par le nombre total
dchantillons analyss (dix). Cela donne une indication de Mi
E s X < Vn Vi
la perte moyenne de liquide par vaporation pour chaque D
cycle. Cette valeur doit tre ajoute chaque lecture de la Conventions : Conventions :
masse.
X =volume moyen CV(%) = coefficient de variation
SD = cart type D(%) = erreur
Calculs Z = facteur dajustement2 en l/mg
Procder comme suit :
1. Calculer la masse deau dlivre par la pipette chaque
cycle. Soustraire la valeur enregistre la fin du cycle
prcdent de la valeur enregistre pour le cycle en cours.
Procder de mme pour toutes les mesures. Le cas chant,
ajouter la masse moyenne correspondant au calcul de la
quantit vapore par cycle.
1 La procdure dcrite ici est un guide gnral. Pour plus de dtails, consulter
la norme BS EN ISO 8655-6:2002 ou ses mises jour.
2 La valeur de Z dpend de la temprature et de la pression pour leau
distille. Se rfrer aux publications spcialises telles que la norme BS EN
ISO 8655-6:2002, Annexe A.
124
GUIDE DE DPANNAGE
La pipette prsente des fuites. La pointe est mal ajuste sur la pipette. Monter la pointe selon les indications du fabricant.
Il y a des corps trangers entre la pointe et lembout. Nettoyer le raccord. Retirer la pointe et nettoyer
lembout. Mettre une nouvelle pointe.
Il y a des corps trangers entre le piston et le joint Dmonter et nettoyer lensemble cylindre/piston.
torique dans le cylindre. Lubrifier et remonter.
Le piston et/ou le joint torique ne sont pas assez Dmonter et lubrifier.
lubrifis.
Le joint torique est tordu ou endommag. Remplacer le joint torique. Dmonter, nettoyer,
remplacer le joint, lubrifier et remonter.
Le piston est sale. Nettoyer le piston et lubrifier lgrement.
Lembout est mal ajust. Ajuster lembout.
Des gouttes sont visibles dans la pointe de la pipette. Lhumidification de la paroi en plastique nest pas Mettre une nouvelle pointe.
homogne.
La pipette est inexacte. La pipette est utilise de faon incorrecte. Contrler la technique de pipetage et corriger les
erreurs observes.
Il y a des corps trangers sous le bouton-poussoir. Nettoyer lassemblage du bouton-poussoir.
Le montage de la pointe sur la pipette est incorrect. Vrifier si la pointe est adapte la pipette. Monter
une pointe diffrente adapte aux spcifications de
la pipette.
Il y a des interfrences dans ltalonnage. Rtalonner la pipette en utilisant une procdure
standardise. Vrifier la procdure dutilisation.
La pointe est sale. Mettre une nouvelle pointe.
La pointe prsente des inexactitudes avec certains Ltalonnage est inadquat. Rtalonner la pipette en utilisant une procdure
liquides. standardise.
Rgler ltalonnage en cas dutilisation de liquides de
forte viscosit.
Le bouton-poussoir prsente des -coups ou Le piston est sale. Nettoyer et lubrifier lgrement.
rencontre une forte rsistance.
Le joint est sale. Dmonter la pipette, nettoyer tous les joints, ou les
remplacer si ncessaire. Lubrifier lgrement.
Le piston est endommag. Remplacer le piston et les joints du piston. Lubrifier
lgrement.
Des vapeurs de solvant ont pntr dans la pipette. Dvisser le raccord central de la pipette. Ventiler,
nettoyer le piston et lubrifier lgrement.
125
DFINITIONS
Coefficient de variation. Paramtre statistique reprsentant le quotient de lcart type dune distribution par sa moyenne.
Ecart type. Mesure de la dispersion dun ensemble de donnes par rapport sa moyenne. Plus les donnes dont disperses, plus lcart type est grand. On lutilise comme
paramtre statistique pour dterminer lerreur globale sur la mesure dun chantillon. Souvent abrg en SD (Standard Deviation).
Erreur (dune mesure). Diffrence entre la valeur mesure et la valeur correcte.
Exactitude. Concept en relation avec les erreurs de mesure. On dit quun instrument est exact lorsque la valeur dun groupe de mesures est suffisamment proche de la
valeur relle.
Intervalle de mesure. Diffrence entre la valeur maximale et la valeur minimale quun instrument lit ou mesure.
Masse. Proprit physique des corps lie la quantit de matire quils contiennent, exprime en kilogrammes (kg). En physique, on donne le nom de masse deux quantits :
la masse gravitationnelle, qui est une mesure de la faon dont un corps interagit avec lacclration de la pesanteur (si la masse du corps est petite, il subit une force plus faible
que si sa masse tait plus grande), et la masse inertielle, qui est une mesure quantitative ou numrique de linertie dun corps, cest--dire de sa rsistance lacclration.
Masse volumique. Relation entre la masse dun corps et le volume quil occupe. La masse volumique moyenne dun objet est gale au quotient de sa masse totale par
son volume total. Elle est identifie par la lettre grecque (ro). Dans le systme international dunits, la masse volumique est exprime en kilogrammes par mtre cube
(kg/m3).
Microgramme (g). Unit de poids quivalente 1 10-6 grammes (g).
Microlitre (l). Unit de capacit quivalente 1 10-6 litres (l). Un (1) l deau pse exactement un (1) mg et a un volume de 1 mm3.
Milligramme (mg). Unit de poids quivalente 1 10-3 grammes (g).
Millilitre (ml). Unit de capacit quivalente 1 10-3 litres (l). Un (1) ml deau pse exactement un (1) g et a un volume de 1 cm3.
Prcision. Concept en relation avec les erreurs de mesure. Un instrument ou une mthode sont prcis lorsquen rptant une mesure lors dessais indpendants, on obtient
des rsultats similaires.
Volume. Quantit despace physique quoccupe une masse. On le calcule en divisant la masse du corps par sa masse volumique moyenne.
126
Chapitre 17
Agitateur chauffant
Code GMDN 36815
Code ECRI 16-287
Dnomination Plaques chauffantes
Lagitateur chauffant ou plaque chauffante avec agitateur est PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT

conu pour chauffer et mlanger des liquides contenus dans En gnral, lagitateur chauffant possde une surface plane sur
des rcipients de laboratoire tels que des fioles Erlenmeyer, des laquelle on place les rcipients contenant les liquides chauffer
tubes essais et des bchers. et agiter. Cette surface est faite dun matriau bon conducteur
de la chaleur, comme laluminium (Al) ou la cramique. Certaines
plaques chauffantes utilisent exclusivement une source de
PHOTOGRAPHIE DUN AGITATEUR CHAUFFANT rayonnement infrarouge (lumire infrarouge) pour chauffer.
Les agitateurs chauffants possdent un lment chauffant (une
rsistance lectrique) et un systme de contrle (interrupteur
marche/arrt, commande de lagitateur, moteur de lagitateur).
Les moteurs utiliss dans ce type dappareils sont en gnral
des moteurs asynchrones monophass appels moteurs
bagues de dphasage1. La plage de vitesse dpend du nombre
Photo avec l aimable autorisation de Cole-Parmer Instrument Co.
de ples et de la frquence du courant dalimentation.
Temprature :
De la temprature ambiante environ 500 C.
Vitesse de rotation :
De 60 tours/minute (t/min ou RPM) environ 1200 t/min.
COMMANDES DE LAGITATEUR CHAUFFANT

Le schma de la figure 54 montre un panneau de contrle tel
quon en trouve classiquement sur un agitateur chauffant. Le
schma correspond une plaque chauffante contrle par
microprocesseur, dispositif qui quipe la plupart des appareils
modernes.
Figure 54. Panneau de contrle dun agitateur chauant
Achage de la temprature Achage de la vitesse

slectionne/temprature relle slectionne/vitesse relle
Mode temprature:
Marche / Arrt Mode agitation: Marche/Arrt
HEATw AGIT
Touches de Touches de rglage de

rglage de la temprature RESET la vitesse dagitation
1 Ces moteurs ont une puissance
denviron 1/20 ch ; ils se
Touche de slection Touche dannulation de la slection caractrisent par un faible
de lchelle de temprature couple et sont peu coteux.
127
C H A P I T R E 17 AG I TAT E U R C H A U F FA N T
Le panneau de contrle possde des touches de rglage ENTRETIEN DE ROUTINE

de la temprature et de la vitesse dagitation. Ces fonctions Lagitateur chauffant est conu pour fonctionner dans des
peuvent tre utilises de faon indpendante ou combine. conditions de travail normales et nexige quun entretien
Pour slectionner les paramtres, on appuie sur la touche mimimal. Sil est correctement install et utilis, il peut
correspondante et on effectue le rglage de la temprature fonctionner sans problmes pendant plusieurs annes.
ou de la vitesse, selon le cas. On trouvera ci-dessous une description des procdures
dentretien de routine recommandes par les fabricants. Pour
les procdures spcialises, on suivra soigneusement les
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION recommandations du fabricant.
Lagitateur chauffant doit tre branch sur une prise de courant
en bon tat et relie la terre. Lalimentation lectrique doit Nettoyage
tre compatible avec lappareil et conforme aux normes Frquence : une fois par mois
lectriques nationales et internationales. Les agitateurs 1. Nettoyer lappareil en le laissant en position verticale
chauffants fonctionnent en gnral sous 230 V/50-60 Hz ou pour viter que les produits de nettoyage natteignent
120 V/60 Hz. les lments internes.
2. Utiliser un dtergent doux. Appliquer sur les surfaces
Pour fonctionner normalement, lagitateur chauffant doit tre externes avec un chiffon en tissu trs fin (comme du
pos sur une surface horizontale suffisamment robuste pour tissu mouchoirs).
supporter le poids de lagitateur plus celui des rcipients et 3. Vrifier que lappareil est bien sec avant de le
de leur contenu. rebrancher.
Remplacement de la surface en cramique

UTILISATION DE LAGITATEUR CHAUFFANT Frquence : effectuer si ncessaire
On trouvera ci-dessous des recommandations gnrales
Prcautions concernant le remplacement de la surface en cramique.
1. Toujours brancher lagitateur chauffant sur une prise de 1. Vrifier que la plaque chauffante est dbranche et
courant en bon tat et relie la terre. refroidie, afin dviter le risque de choc lectrique et de
2. Dbrancher lappareil avant toute intervention brlure.
dentretien. 2. Manipuler lappareil avec la plus grande prudence
3. Eviter dutiliser lappareil en prsence de matriaux car une surface en cramique casse a des bords trs
combustibles ou inflammables. Eviter dutiliser lappareil coupants.
en prsence de vapeurs corrosives. 3. Retourner lappareil ct cramique vers le bas.
4. Vrifier soigneusement si les substances ont un point 4. Dfaire les vis de fixation du panneau infrieur et enlever
dclair bas. Si leurs vapeurs entrent en contact avec la le panneau.
surface de la plaque chauffante cette temprature, cela 5. Localiser et dconnecter les cbles dalimentation
pourrait provoquer un incendie ou une explosion. des rsistances lectriques (sur les modles avec
5. Lors du travail avec des liquides inflammables, utiliser rsistances).
un quipement protecteur : gants et lunettes de 6. Dconnecter les cbles qui relient le panneau de
protection. contrle aux rsistances.
6. Tenir compte du fait que la surface de lagitateur peut 7. Dfaire les vis qui fixent le panneau suprieur au socle
rester chaude longtemps aprs que lappareil a t de lappareil. Vrifier quelles sont sans rapport avec les
teint ou dbranch. connexions aux rsistances chauffantes.
7. Eviter de dposer sur la plaque chauffante : 8. Mettre la nouvelle surface en cramique en place.
a) Des lamins mtalliques 9. Observer comment sont disposs les lments de
b) Des matriaux isolants scurit de la plaque casse. Les enlever et disposer les
c) De la verrerie bas point de fusion lments chauffants et isolants sous la nouvelle plaque,
8. Laisser un espace libre autour de lappareil pour faciliter en conservant lalignement et le positionnement
le raccordement lectrique et pour pouvoir dposer le dorigine. Remettre les lments de scurit.
matriel et les produits ncessaires. Certains fabricants 10. Reconnecter les lments en procdant dans lordre
recommandent un espace libre denviron 15 cm. inverse.
9. Eviter de placer des matriaux combustibles proximit
de lappareil.
10. Eviter dutiliser des rcipients dont le poids dpasse la
capacit indique par le fabricant.
128
Remplacement des fusibles 1. Mettre linterrupteur principal sur OFF et dbrancher le

Frquence : effectuer si ncessaire cble dalimentation.
Si lagitateur chauffant est branch et que linterrupteur 2. Enlever le couvercle de la bote fusibles avec un
principal est sur ON mais que la plaque ne chauffe pas, il se tournevis bout plat.
peut quun fusible doive tre chang. La procdure est la 3. Remplacer le fusible par un nouveau ayant les mmes
suivante : caractristiques que le fusible dorigine.
4. Remettre le couvercle de la bote fusibles.
GUIDE DE DPANNAGE
Il ny a pas de courant lectrique. Il y a un dfaut au niveau du fusible de protection. Remplacer le fusible.
Il y a un dfaut dans le raccordement lectrique Vrifier ltat du raccordement lectrique.
alimentant lappareil.
Lappareil est dbranch. Brancher lappareil sur la prise de courant.
Le cble dalimentation lectrique est dfectueux. Remplacer le cble dalimentation lectrique.
La plaque ne chauffe pas. La fonction de chauffage na pas t slectionne. Activer la fonction de chauffage sur le panneau de
contrle.
La rsistance chauffante est hors service. Remplacer la rsistance chauffante. Les pices de
rechange doivent avoir les mmes caractristiques
que les pices dorigine.
Lagitateur ne tourne pas. La fonction de rotation na pas t slectionne. Activer la fonction de rotation sur le panneau de
contrle.
DFINITIONS
Fiole Erlenmeyer. Rcipient en verre utilis au laboratoire pour mettre ou mesurer des substances.
Moteur bagues de dphasage. Moteur asynchrone utilis dans les petits appareils. Il se caractrise par une bobine (rotor en cage dcureuil) ncessitant un champ
magntique tournant pour se mettre en marche. Une partie de chaque ple est encercle par une bague de dphasage (anneau de cuivre) dont les courants induits provoquent
un dsquilibre au sein du flux magntique par rapport lautre portion du ple, ce qui cre un couple sur le rotor. Ces moteurs sont peu coteux et ont un faible rendement.
On peut calculer leur vitesse par la formule
120 f
n(rpm)
p
Figure 55. Moteur bagues de dphasage
dans laquelle :
[n] = vitesse synchrone en tours par minute
[f] = frquence de la tension applique
[p] = nombre de ples du stator
Bobine principale
Le schma ci-dessous montre les lments internes du circuit lectrique.
Bobine secondaire
Stator
Rotor
Ples
Point dclair. Temprature laquelle les molcules dune substance ragissent avec loxygne de lair en dclenchant une combustion.
129
Chapitre 18
Rfrigrateurs et conglateurs
Code GMDN 13315 13315 17157 35486 40513 15145
Code ECRI 13-315 15-170 17-157 15-171 22065 15-145
Dnomination Rfrigrateurs Rfrigrateurs Rfrigrateurs Rfrigrateurs Conglateur Conglateur
de biologie de laboratoire pour banque de laboratoire, de laboratoire
de sang ultra-basse
temprature
RFRIGRATEURS ET CONGLATEURS PHOTOGRAPHIE DUNE ENCEINTE RFRIGRE

Les rfrigrateurs et conglateurs sont parmi les appareils
les plus importants utiliss au laboratoire. Ils assurent un
environnement de temprature contrle (enceinte rfrigre)
pour divers produits et substances. A basse temprature,
lactivit chimique et biologique est rduite, ce qui entrane une
meilleure conservation des produits. Pour cela, la temprature
lintrieur de lenceinte rfrigre doit tre infrieure la
temprature ambiante. Au laboratoire, on utilise diffrents
types de rfrigrateurs et de conglateurs. Selon lintervalle
de temprature, on distingue :
t Rfrigrateurs conservateurs, de 2 8 C.
t Conglateurs basse temprature, de 15 35 C.
t Conglateurs ultra-basse temprature, de 60 86 C.
On choisira un appareil dot de fonctions appropries, selon

les activits du laboratoire. Par exemple, sil est ncessaire
de conserver du sang total, il faudra utiliser un rfrigrateur
pour banque de sang, qui assure des tempratures comprises
entre 2 et 8 C. Si en revanche on doit conserver des souches Photo avec l aimable autorisation de Cole Parmer Instrument Co.
virales ou microbiennes, il faudra un conglateur ultra-
basse temprature. Les rfrigrateurs et conglateurs sont
indispensables pour conserver les substances biologiques et
les ractifs. Le prsent chapitre traite du fonctionnement et de
lentretien des rfrigrateurs conservateurs et des conglateurs
ultra-basse temprature.
131
C H A P I T R E 18 R F R I G R AT E U R S E T C O N G L AT E U R S
QUOI SERT UNE ENCEINTE RFRIGRE Circuit de rfrigration

Les rfrigrateurs et conglateurs servent conserver le sang Le circuit de base prsent sur la figure 56 montre comment
et ses drivs, les liquides et tissus biologiques, les ractifs, les fonctionne un rfrigrateur. Sur le ct gauche, on distingue
produits chimiques et les souches de micro-organismes. En les lments suivants : vaporateur, condenseur, compresseur,
gnral, plus la temprature est leve, plus lactivit chimique dtendeur, filtre et tubulures de raccordement. Un gaz
et biologique est intense. En abaissant la temprature, on rfrigrant circule dans chacun de ces lments.
peut contrler les effets de celle-ci sur la composition et la
structure des substances conserver. Au laboratoire, on utilise Sur le ct droit de la figure se trouve un graphe reprsentant la
des systmes de rfrigration pour conserver des substances relation entre la temprature (T) et lentropie (S), qui dmontre
comme des ractifs et des matriels biologiques qui sans cela le fonctionnement dun cycle de rfrigration idal 1. Les
se dcomposeraient ou perdraient leurs proprits. En tant que numros qui figurent sur le schma de gauche montrent
technique, la rfrigration assure des conditions qui rendent les points des processus adiabatiques (compression (1-2) et
possible la conservation dlments, tels que le sang et ses tranglement (3-4)) et des processus impliqus dans le transfert
drivs, ncessaires pour le diagnostic, la surveillance et les de chaleur (entre lvaporateur et lenceinte rfrigre (4-1) et
services de sant. Il est possible datteindre des tempratures entre le condenseur et lextrieur (2-3)). Le cycle complet est
extrmement basses, comme celles qui sont utilises pour reprsent par la squence 1-2-3-4-1.
conserver les souches de rfrence (86 C), ou dassurer le
maintien de tempratures comprises entre 2 et 8 C, qui suffisent Evaporateur. Se compose dun rseau de tuyaux dans lesquels
pour conserver les ractifs et divers produits biologiques. circule le gaz rfrigrant. Dans lvaporateur, un processus de
transfert de la chaleur (QI) seffectue pression constante. Pour
que le processus de rfrigration se produise, lenvironnement
PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT refroidir doit tre entour par un systme disolation thermique.
Les rfrigrateurs et conglateurs fonctionnent selon les lois Ce systme vite que lnergie thermique ne pntre dans la
de la physique qui rgissent le transfert dnergie en prsence zone dinfluence de lvaporateur une vitesse gale celle de
de diffrences de temprature. En vertu du deuxime principe labsorption par le gaz rfrigrant. Le gaz rfrigrant pntre
de la thermodynamique, on sait que, si de lnergie thermique sous forme liquide dans lvaporateur au point 4 (idal) ou
doit tre transfre dun point de basse temprature un autre 4 (rel) et pendant quil traverse le rseau de lvaporateur il
point de temprature leve, une action mcanique doit tre absorbe de la chaleur (QI) et se transforme progressivement en
produite. Les rfrigrateurs et conglateurs modernes sont des vapeur. Lorsquil atteint le point 1, il est entirement sous forme
systmes thermiques qui fonctionnent principalement selon de vapeur. Il est alors aspir par le compresseur au moyen dune
un cycle dit de compression, qui utilise un gaz rfrigrant dot tubulure daspiration.
de proprits spciales grce auxquelles il effectue le transfert
de chaleur. Ce chapitre explique comment fonctionnent les
rfrigrateurs et conglateurs compression.
1 Le cycle rel diffre du cycle idal par certains processus irrversibles, non
indiqus sur le graphe pour des raisons de clart et de simplicit.
Figure 56.
Zone de haute Fluide rfrigrant : cycle de compression idal

Extrieur Ta
Qh Qh Qh Qh Qh Qh Qh
2 pression [2-3] T 2
Dtendeur 3
Condenseur 3 2
QI QI QI QI QI QI QI
Filtre Compresseur
1 4 4
4
Zone de Isolation
basse Evaporateur thermique
pression [4-1] Enceinte rfrigre Ta
S
132
Compresseur. Habituellement actionn par un moteur lappareil de rfrigration fonctionne selon les spcifications
lectrique, le compresseur aspire basse pression le gaz du fabricant. Seul le fabricant et les techniciens spcialiss
rfrigrant sortant de lvaporateur ltat de vapeur sature, ont accs ces robinets (non indiqus sur le schma de la
et au moyen dun piston ou dun jeu de pistons exerce sur ce figure 56).
gaz une compression adiabatique (sans transfert de chaleur)
entre les points 1 et 2. A la sortie du compresseur, la vapeur Protection thermique. Systme de protection qui est activ et
est chaude du fait de la compression et arrive au condenseur qui dconnecte le compresseur en cas de surcharge touchant
au point 2. les bobines dans le champ du compresseur. (Il fait partie du
systme lectrique et nest pas indiqu sur le schma du circuit
Condenseur. Systme analogue celui de lvaporateur, avec de rfrigration).
un rseau de tuyaux dans lesquels circule le gaz rfrigrant.
Comme la temprature du rfrigrant est suprieure la Note : Lvaporateur ainsi que le condenseur sont raliss en
temprature ambiante (Ta), il se produit un transfert de chaleur matriaux bons conducteurs de la chaleur comme laluminium
(Qh) du rfrigrant vers lenvironnement pression constante. (Al) et le cuivre (Cu). Pour amliorer le transfert de chaleur,
Pour faciliter le transfert de chaleur, les tuyaux du condenseur il existe des systmes de ventilation qui produisent une
ont de fines ailettes qui augmentent la surface dchange. A convection force. Pour atteindre les diffrentes tempratures
mesure quil perd de la chaleur (Qh) par transfert, le rfrigrant exiges au laboratoire ou dans lindustrie, les fabricants ont
retourne ltat de liquide satur jusqu ce quil atteigne le dvelopp divers modles et systmes rfrigrants adapts
point 3, o il pntre dans le dtendeur. au but recherch.
Dtendeur. En faisant circuler le rfrigrant de manire

contrle, le dtendeur oppose une rsistance au passage CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION
du rfrigrant pour viter tout transfert de chaleur par un Pour que les rfrigrateurs et conglateurs fonctionnent
processus adiabatique. La pression dans le dtendeur est donc correctement, les conditions suivantes doivent tre
trs fortement rduite au point 4. Un filtre est en gnral mont remplies :
la sortie du dtendeur. Certains fabricants remplacent le 1. Un raccordement lectrique avec prise de terre appropri
dtendeur par un tube capillaire qui a un effet dtranglement pour le voltage et la frquence de lappareil. Selon leur
quivalent sur le passage du gaz rfrigrant. capacit, les rfrigrateurs et conglateurs fonctionnent
en gnral sous 115 V/60 Hz ou 220-240 V/50 Hz. Il faut
Filtre. Retient lhumidit et les impurets qui pourraient se prvoir des raccordements lectriques conformes aux
trouver dans le rfrigrant. A la sortie du filtre, le systme est normes lectriques nationales et internationales en
nouveau connect lvaporateur au point 4 et le cycle ci- vigueur dans le laboratoire.
dessus se rpte. 2. Si plus dun appareil est install sur le mme circuit
lectrique, il faut vrifier que la puissance dlivre et
Collecteur de liquide. Elment mont par certains fabricants les dispositifs de scurit suffiront pour alimenter ces
avant lentre du rfrigrant dans le compresseur. Il sert appareils.
retenir toute partie du rfrigrant encore en phase liquide pour 3. Brancher directement lappareil sur la prise. Ne jamais
assurer que seule la phase vapeur pntre dans le compresseur utiliser de prises multiples ni de prises prsentant des
(non indiqu sur le schma de la figure 56). dfauts de voltage. Eviter lemploi de prolongateurs. La
prise de courant ne doit pas se situer plus de 2 mtres
Isolation thermique. Ensemble constitu de matriaux de lappareil.
ayant la proprit de ralentir le transfert de chaleur. Lisolation 4. Installer lappareil sur une surface plane et horizontale
thermique sert viter que lnergie thermique provenant de en laissant un espace libre autour. Les rfrigrateurs
lenvironnement natteigne lenceinte rfrigre une vitesse et conglateurs ont leur base un systme de calage
gale la vitesse dabsorption de lnergie thermique interne qui permet de compenser les petites irrgularits du
par le systme. Tous les appareils de rfrigration possdent plancher. Il est dusage de laisser un espace de 15 cm
une isolation thermique adquate dans ce but. Les matriaux sur les cts et larrire de lappareil pour faciliter la
isolants les plus utiliss sont la mousse de polyurthane et la ventilation du condenseur.
laine de verre. De mme, les surfaces internes sont couramment 5. Eviter dinstaller lappareil dans un endroit expos la
ralises en matriaux tels que le plastique ABS. lumire solaire directe ou prs dune source de chaleur
comme un radiateur ou autre appareil de chauffage. Se
Robinets de service. Robinets utiliss pour charger le souvenir que plus la diffrence de temprature entre
circuit en gaz rfrigrant. Ils servent connecter le systme lenvironnement et le condenseur est grande, plus le
de remplissage et le systme de vidange de faon ce que processus de transfert de la chaleur sera efficace.
133
CIRCUIT DE CONTRLE DU RFRIGRATEUR UTILISATION DU RFRIGRATEUR

Le schma de la figure 57 reprsente un circuit de contrle
type que lon trouve dans les rfrigrateurs et conglateurs. Rfrigrateurs conservateurs
Il donnera une ide de la faon dont les divers sous-systmes Le fonctionnement des rfrigrateurs conservateurs
sont relis entre eux. Le circuit de contrle de chaque modle est en gnral trs simple. Chaque fabricant donne des
varie selon les caractristiques adoptes par le fabricant. recommandations de base. Certaines sont indiques
ci-dessous.
Les lments principaux sont : 1. Brancher le cble dalimentation lectrique sur une
1. Linterrupteur principal. Il alimente le rfrigrateur en prise de courant relie la terre et ayant une capacit
courant lectrique. suffisante pour fournir la puissance requise.
2. Linterrupteur de porte. Il allume la lumire lorsque la 2. Mettre linterrupteur sur ON. Sur certains modles,
porte est ouverte. linterrupteur est une touche sur laquelle on appuie.
3. Le compresseur. Attendre que le rfrigrateur atteigne sa temprature
4. Les ventilateurs de lvaporateur. de fonctionnement avant dy entreposer des produits.
5. Le sous-systme de dgivrage. Linterrupteur, les Les fabricants rglent la temprature des rfrigrateurs
rsistances, le temporisateur (5, 5, 5, 5, 5). sur 4C environ.
6. Le sous-systme de rsistances pour le dgivrage ou 3. Slectionner la temprature laquelle lalarme doit tre
pour assurer en permanence labsence de glace sur les active. Suivre les instructions du fabricant.
lments (dgivrage automatique). 4. Charger le rfrigrateur selon la capacit fixe par le
7. Le thermostat. fabricant.
Figure 57. Circuit de contrle du rfrigrateur
2. Interrupteur de porte
Lumire du rfrigrateur
5 Interrupteur de dgivrage 2
Interrupteur du ventilateur 4. Ventilateurs de lvaporateur
de lvaporateur 2
115 V/ 60 Hz
6. Rsistances frontales
6. Rsistance du condenseur
5 Rsistance de dgivrage
5 Commande du limiteur de dgivrage
5 Temporisateur de dgivrage
5. Interrupteur de
dgivrage 3. Compresseur
1. Interrupteur Ventilateur du condenseur

principal 7. Thermostat
5 Moteur du
Scurit temporisateur
du compresseur de dgivrage
134
5. Rpartir la charge uniformment dans le rfrigrateur. OMS Manual on management, maintenance and use of cold
Luniformit de la temprature dpend de la libre chain equipment, 2005 ((version franaise sous presse) pour les
circulation de lair lintrieur de lappareil. oprations et les calendriers de maintenance prventive pour
6. Eviter de laisser la porte ouverte pendant longtemps les rfrigrateurs pour banque de sang, les conglateurs de
afin dempcher lnergie thermique et lhumidit plasma, et les chambres froides et conglateurs utiliss dans
de lair de pntrer dans lenceinte du rfrigrateur. la chane du froid pour le sang.
Cela entranerait la formation de givre et lverait la
temprature du systme. Nouvrir la porte que pour Nettoyage de lintrieur
dposer ou enlever des objets Frquence
q : une fois par
p trimestre
1. Vrifier que les tagres intrieures du rfrigrateur
Commandes des rfrigrateurs conservateurs sont propres. Elles sont en gnral en fil mtallique
La figure 58 prsente le schma dun panneau de contrle inoxydable. Avant de les nettoyer, enlever du
de modle rcent pour les rfrigrateurs conservateurs (par rfrigrateur tout ce qui pourrait gner. Faire glisser les
exemple un rfrigrateur pour banque de sang). tagres vides vers lavant. Humecter un chiffon avec
un dtergent doux et frotter doucement les surfaces
Le schma montre les lments suivants : nettoyer. Essuyer et remettre en place.
1. Interrupteur principal, actionn par une touche 2. Si le rfrigrateur a des tiroirs, procder de la mme
2. Tmoins de porte ouverte, de batterie faible et de faon pour les nettoyer. Vider les tiroirs et les sortir de
problmes techniques leurs glissires. Les sortir du rfrigrateur.
3. Touches de rglage des paramtres 3. Une fois les tagres et les tiroirs sortis du rfrigrateur,
4. Ecran daffichage nettoyer les parois internes de celui-ci avec un dtergent
doux. Les scher avant de remettre les lments internes
en place.
ENTRETIEN DE ROUTINE DES RFRIGRATEURS 4. Nettoyer les tiroirs avec un chiffon imbib de dtergent
Les rfrigrateurs sont en gnral peu exigeants en termes de doux. Bien frotter. Essuyer les tiroirs et les remettre sur
maintenance, mais sont exigeants en ce qui concerne la qualit leurs glissires dans le rfrigrateur.
des systmes dalimentation lectrique. Sils sont connects
des circuits lectriques de bonne qualit et que lair peut
circuler librement autour, ils peuvent fonctionner pendant des
annes sans intervention technique. Le circuit de rfrigration
est scell lors de la fabrication et ne possde aucun lment qui
ncessite un entretien de routine. On trouvera ci-dessous les
principales oprations effectuer en routine. Voir la publication
Figure 58.
Tmoin de service technique Ecran dachage

Touche daugmentation de la temprature
Thermomtre
Interrupteur Slecteur pour les paramtres
principal de temprature et dalarme
Alarme sonore
Tmoin de porte ouverte Touche de diminution de la temprature

Tmoin de batterie faible
135
Nettoyage du condenseur
Frquence
q : tous les six mois
1. Dbrancher le cble dalimentation lectrique.
2. Vrifier la position du condenseur. Les fabricants le
mettent en gnral larrire et en bas de lappareil. Sur
certains rfrigrateurs, il se trouve en haut.
3. Enlever la grille de protection du condenseur et le filtre
(qui ne se trouve pas sur tous les modles).
4. Enlever la poussire et les impurets dposes la
surface du condenseur. Utiliser un aspirateur quip
dune brosse aspirante. Passer la brosse sur toute la Dgivrage
surface du condenseur pour enlever la poussire et Frquence
q : tous les six mois
les impurets. Vrifier que la surface des tubes ainsi De nombreux conglateurs modernes ont des cycles
que celle des ailettes est propre. Passer galement de dgivrage automatique de lvaporateur afin dviter
laspirateur sur le filtre, si lappareil en est quip. laccumulation de glace. Normalement, ces cycles utilisent
5. Remettre la grille de protection. des rsistances qui liminent rapidement le givre. Certains
6. Rebrancher le rfrigrateur. modles ne possdent pas de dgivrage automatique et le
processus seffectue manuellement selon un calendrier dfini
lavance. La procdure recommande pour le dgivrage est
la suivante :
1. Vrifier que lpaisseur de givre est suprieure 8 mm.
2. Enlever le contenu du compartiment de conglation.
3. Dbrancher le conglateur.
4. Laisser la porte ouverte.
=tYPJH[PVUK\QVPU[Kt[HUJOtP[tKLSHWVY[L 5. Enlever leau mesure quelle saccumule dans les
Frquence
q : une fois par
p trimestre compartiments. Utiliser une ponge ou un chiffon
Le joint dtanchit de la porte est un lment qui doit rester absorbant.
en bon tat pour que lappareil fonctionne correctement. Pour 6. Placer une serviette pour viter que la glace qui fond
vrifier son tat, procder comme suit : ne mouille le devant et lintrieur du rfrigrateur.
1. Ouvrir la porte.
2. Glisser une bande de papier de 5 cm de large entre le
joint de la porte et le bord du chssis du rfrigrateur.
3. Fermer la porte.
4. Tirer doucement le papier vers lextrieur. Le papier doit
opposer une rsistance lorsquon le tire vers lextrieur.
Si on ne sent pas de rsistance, il faut remplacer le joint.
Rpter cette opration en procdant par 10 cm la fois
sur la totalit du joint.
136
GUIDE DE DPANNAGE
Lappareil ne fonctionne pas. Le fusible a saut. Vrifier le fusible.
Lappareil est dbranch. Vrifier le raccordement au secteur.
La prise de courant nest pas alimente ou le courant Tester la connexion lectrique.
est insuffisant.
Vrifier linterrupteur principal (coupe-circuit).
Le conglateur fonctionne en permanence mais ne Le thermostat est rgl trop haut. Vrifier le rglage du thermostat.
refroidit pas.
Rgler le thermostat sur une temprature plus basse.
Lappareil contient trop de givre. Dgivrer lappareil.
La temprature de lappareil est fluctuante. Le rglage de la temprature nest pas talonn. Etalonner la temprature de fonctionnement selon
la procdure indique par le fabricant.
Le condenseur est sale. Nettoyer le condenseur selon la procdure indique
pour lentretien de routine.
La temprature de lappareil est trop leve. La porte est ouverte. Vrifier que la porte est bien ajuste et ferme.
La fermeture de la porte nest pas tanche. Mettre lappareil de niveau et ajuster la fermeture ou
remplacer le joint.
Il y a un dfaut dans lalimentation lectrique. Vrifier que la connexion lectrique fonctionne
correctement.
Une charge chaude (liquide ou solide) a t Attendre que le rfrigrateur ait refroidi la charge.
introduite dans le rfrigrateur.
Le compresseur ne fonctionne pas. Vrifier le fonctionnement du compresseur.
Rechercher si une des alarmes sest dclenche.
Le compresseur fonctionne mais il ny a pas de glace Vrifier si les ventilateurs de lvaporateur
dans lvaporateur. fonctionnent.
Le compresseur fonctionne, mais il ny a pas de Une vrification complte du systme de
glace dans lvaporateur et les ventilateurs de rfrigration est ncessaire. Appeler le service
lvaporateur fonctionnent. technique.
Le niveau de gaz rfrigrant est bas. Appeler le service technique.
Lorsquon met lappareil en marche, on entend un La protection thermique du compresseur sest Vrifier que la tension dalimentation est correcte.
bruit de cliquetis. active.
Fonctionnement bruyant. Le plancher nest pas stable ou lappareil nest pas de Dplacer lappareil vers un endroit plus adapt ou
niveau. ajuster le niveau laide des vis de calage.
Le plateau du systme de dgivrage vibre. Ajuster le plateau ou le caler.
Les pales du ventilateur touchent le couvercle ou le Appeler le service technique.
compresseur est mal ajust.
Le compresseur fonctionne en permanence. La circulation dair autour de lappareil est Dplacer lgrement lappareil pour quil y ait assez
insuffisante. despace libre. Le changer de place si ncessaire.
Le thermostat est dfectueux. Appeler le service technique.
La fermeture de la porte nest pas tanche. Vrifier le joint et ajuster la fermeture de la porte.
La pice est trop chaude. Assurer une ventilation adquate de la pice.
La porte est ouverte trop souvent ou nest pas Limiter les ouvertures de la porte ou refermer la
referme. porte.
Linterrupteur de lclairage est dfectueux. Vrifier que la lumire steint lorsque la porte est
ferme.
137
UTILISATION DES CONGLATEURS ULTRA-BASSE Procdures

TEMPRATURE 1. Brancher le cble dalimentation lectrique sur la prise
de courant.
Conglateurs ultra-basse temprature 2. Allumer lappareil (interrupteur sur ON). Lcran doit
Lutilisation des conglateurs ultra-basse temprature implique sallumer et indiquer la temprature de la cuve. Une
de suivre la procdure recommande par le fabricant pour diode lectroluminescente indique que lappareil est
atteindre les performances stipules pour lappareil. Les sous tension. La mise sous tension entrane le dmarrage
recommandations communes tous les conglateurs ultra- du compresseur et des ventilateurs de lvaporateur et
basse temprature sont les suivantes : du condenseur.
1. Brancher lappareil sur une prise de courant relie 3. Slectionner la temprature de fonctionnement de
la terre spcialement rserve cet appareil. La prise lappareil. En gnral, plusieurs touches sont actives
de courant doit tre en bon tat et pouvoir fournir simultanment : la touche de commande de temprature
la puissance ncessaire pour le fonctionnement et les touches de rglage de la temprature. Une fois la
de lappareil. Elle doit aussi satisfaire aux normes temprature slectionne, les commandes sont actives.
lectriques nationales et internationales. La tension ne Lcran indique la temprature de fonctionnement
doit pas varier de plus de + 10 % ou 5 % par rapport slectionne. Attendre un temps suffisant pour que
au voltage spcifi sur la plaque de lappareil. Certains lappareil atteigne la temprature slectionne.
conglateurs ultra-basse temprature ncessitent une 4. Slectionner les limites de temprature qui activeront les
puissance denviron 12 kW. Il est donc indispensable alarmes. Ces tempratures ne scartent en gnral pas
de disposer dun branchement lectrique capable de de plus de 10 % de la temprature de fonctionnement.
supporter une telle puissance. Habituellement, on rgle les alarmes lorsque lappareil
2. Choisir un emplacement ayant un plancher solide et de a atteint une temprature proche de sa temprature
niveau (horizontal dans toutes les directions). Il doit tre de fonctionnement. La procdure consiste activer
bien ventil et lcart de la lumire solaire directe et de la commande dalarme et slectionner les limites de
toutes sources de chaleur. Certains fabricants stipulent temprature maximale et minimale qui dclencheront
que la temprature ambiante doit se situer entre 10 lalarme en cas de dpassement. Suivre la procdure
et 32 C. Il doit y avoir un espace libre dau moins 15 recommande par le fabricant. En gnral, le panneau de
cm autour de lappareil (cts et arrire). La porte doit contrle possde une touche qui permet de dsactiver
pouvoir souvrir un angle de 90. Normalement, les les alarmes et aussi de tester leur fonctionnement.
fabricants installent un dispositif de calage la base de 5. Les conglateurs ultra-basse temprature possdent
lappareil, sur les roulettes. une autre srie dalarmes qui avertissent loprateur en
cas dincidents qui peuvent affecter le fonctionnement
correct de lappareil. Ce sont entre autres les suivants :
MISE EN MARCHE t Un dfaut dalimentation lectrique.
Pour comprendre le mode de fonctionnement des conglateurs t Une baisse de tension.
ultra-basse temprature, un schma reprsentant un panneau t Une temprature ambiante excessive.
de contrle similaire ceux qui se trouvent sur ces appareils t Un dpassement de la limite infrieure de
est donn la figure 59. Il sagit dun schma gnrique, temprature.
cest--dire quil y aura certainement des diffrences selon la
marque et le modle. Les recommandations qui suivent sont
communes tous les conglateurs.
Figure 59. Panneau de contrle dun conglateur ultra-basse temprature
Touche de rinitialisation
de lalarme
Unit de temprature
Touche de test dalarme Ecran dachage Commande de temprature
Interrupteur Alarme de temprature ambiante extrme

marche/arrt trois positions Alarme de ltre sale
Alarme de batterie faible
Alarme de tension faible
Commande dalarme de temprature maximale

Commande dalarme de temprature minimale Touches de rglage
de la temprature (plus/moins)
138
ENTRETIEN DE ROUTINE DES CONGLATEURS Dgivrage

ULTRA-BASSE TEMPRATURE Frquence
q recommande : une fois tous les six mois
Les oprations de routine effectuer sur les conglateurs ultra- Chaque fois quil est ncessaire de dgivrer le conglateur, il
basse temprature concernent principalement les lments faut procder comme suit :
dcrits ci-dessous. Pour lentretien courant et la maintenance 1. Transfrer les produits congels dans un autre
prventive des conglateurs pour plasma et des chambres conglateur ayant les mmes caractristiques de
froides utiliss dans la chane du froid pour le sang, consulter la fonctionnement.
publication OMS Manual on management, maintenance and use 2. Eteindre lappareil et laisser lintrieur de la cuve
of cold chain equipment, 2005 (version franaise sous presse). remonter la temprature ambiante.
3. Enlever la glace et leau accumules lintrieur de la
Nettoyage du condenseur cuve.
Frquence
q : tous les six mois 4. Si on peroit des odeurs trangres, laver lintrieur
1. Enlever la grille de protection. de la cuve avec du bicarbonate de sodium et de leau
2. Enlever et nettoyer le filtre. Sil est trop obstru, chaude.
le remplacer par un nouveau ayant les mmes 5. Nettoyer lextrieur avec un dtergent doux, le scher
caractristiques que le filtre dorigine. et appliquer une cire protectrice si ncessaire.
3. Vrifier le fonctionnement du ventilateur.
4. Passer laspirateur sur le condenseur et ses ailettes
diffusantes.
5. Remettre la grille de protection et le filtre.
Entretien de la pile du systme dalarme

Frquence
q : tous les deux ou trois ans environ
La pile du systme dalarme doit tre change lorsquelle est
0U[tNYP[tK\QVPU[Kt[HUJOtP[tKLSHWVY[L use. Pour la remplacer, procder comme suit :
Frquence
q recommande : une fois parp trimestre 1. Enlever le panneau avant. En gnral, la ou les piles sont
Il est recommand de contrler priodiquement lintgrit du situes juste derrire le panneau avant.
joint dtanchit de la porte. Il doit rester en bon tat et ne pas 2. Dconnecter les bornes de la pile.
prsenter de craquelures, de perforations ni de fissures. 3. Enlever la pile use.
4. Installer une nouvelle pile ayant les mmes
caractristiques que la pile dorigine.
5. Reconnecter les bornes.
6. Remettre le panneau avant.
139
GUIDE DE DPANNAGE
Le tmoin de tension insuffisante est allum. La prise de courant dlivre une tension insuffisante. Vrifier la tension dalimentation. Tester la connexion
et ses dispositifs de scurit.
Le tmoin de filtre sale est allum. Vrifier la propret du filtre. Nettoyer le filtre de protection du condenseur. Sil est
encrass, le remplacer par un autre ayant les mmes
caractristiques que le filtre dorigine.
Le tmoin de batterie faible est allum. La pile est use. Remplacer la pile par une nouvelle ayant les mmes
spcifications que la pile dorigine.
Lappareil ne fonctionne pas. Lappareil est dbranch. Brancher lappareil sur la prise de courant.
Le fusible a saut. Remplacer le fusible par un autre ayant les mmes
caractristiques que le fusible dorigine.
Lappareil fonctionne en permanence. La temprature de fonctionnement slectionne est Augmenter la temprature slectionne.
trs basse.
Lappareil fonctionne en permanence mais ne Le condenseur est sale. Nettoyer le condenseur.
refroidit pas.
La ventilation est insuffisante. Vrifier et corriger la ventilation.
Une accumulation de glace nuit lisolation. Dgivrer lappareil. Si le problme persiste, appeler
le service technique.
Accumulation rapide de givre dans lvaporateur. Le joint de porte fuit. Ajuster les charnires de la porte. Si le problme
persiste, appeler le service technique.
La porte du compartiment de conglation est Le chauffage du joint de porte est dfectueux. Appeler le service technique.
bloque par le gel.
Fonctionnement bruyant. Le plancher nest pas stable ou lappareil nest pas de Dplacer lappareil vers un endroit plus adapt ou
niveau. ajuster le niveau laide des vis de calage.
Le plateau du systme de dgivrage vibre. Ajuster le plateau ou le caler.
Les pales du ventilateur touchent le couvercle ou le Appeler le service technique.
compresseur est mal ajust.
Le compresseur fonctionne en permanence. La circulation dair autour de lappareil est Dplacer lgrement lappareil pour quil y ait assez
insuffisante. despace libre. Le changer de place si ncessaire.
Le thermostat est dfectueux. Appeler le service technique.
La fermeture de la porte nest pas tanche. Vrifier le joint et ajuster la fermeture de la porte.
La pice est trop chaude. Assurer une ventilation adquate de la pice.
La porte est ouverte trop souvent ou nest pas Limiter les ouvertures de la porte ou refermer la
referme. porte.
Linterrupteur de lclairage est dfectueux. Vrifier que la lumire steint lorsque la porte est
ferme.
Les autres procdures de maintenance ncessitent des outils et un appareillage spcialiss.
140
DFINITIONS
BTU. Unit utilise pour dfinir le transfert de chaleur dans le systme anglais. BTU signifie British Thermal Unit. Une unit BTU est la quantit de chaleur qui doit tre
transfre pour augmenter la temprature dune livre (pound) deau de 63 F 64 F.
Calorie. Quantit de chaleur qui doit tre transfre un gramme deau pour augmenter sa temprature de 1 C. Cette dfinition sapplique dans les conditions normales
(pression atmosphrique gale 760 mm Hg, acclration de la pesanteur gale 9,81 m/s2) ; la temprature dun gramme deau passe de 14,5 C 15,5 C.
Chaleur. Forme dnergie transfre dun systme se trouvant une temprature donne un autre systme se trouvant une temprature plus basse, du fait de la diffrence
de temprature entre les deux systmes. Lorsquun systme de masse leve (M) est plac au contact dun autre systme de masse plus petite (m) une temprature diffrente,
la temprature rsultante finale est proche de la temprature initiale du systme ayant la masse la plus leve. On dit alors quune quantit de chaleur Q a t transfre du
systme dont la temprature tait plus leve au systme dont la temprature tait moins leve. La constante proportionnelle (C), appele capacit calorifique du systme,
permet dtablir la relation Q = CT, do lon dduit que lune des consquences du changement de temprature dun systme est le transfert de chaleur.
Chaleur latente. Quantit dnergie thermique ncessaire pour quun changement de phase se produise dans une substance, par exemple de la phase liquide la phase
vapeur.
Chaleur sensible. Quantit dnergie ncessaire pour augmenter la temprature du gaz rfrigrant par absorption de chaleur. Par exemple, quantit de chaleur ncessaire
pour faire passer la temprature de 15 20 C ou de 30 40 C.
Chaleur spcifique. Quantit de chaleur ncessaire pour augmenter dun degr la temprature dune unit de masse.
Entropie. Mesure de lnergie dun systme qui nest pas utilise pour le travail, ou du degr de dsordre dun systme. Le diffrentiel rversible dentropie sexprime par
la formule.
dQ
dS
T
dans laquelle :
dQ: chaleur absorbe depuis une rserve la temprature T pendant un changement dtat infinitsimal rversible.
T: temprature de la rserve
La formule suivante sapplique tout changement rversible au sein dun cycle.
dQ
6S 0 dS T
0
Si le cycle est irrversible, la formule devient

dQ
6S 0 T
0
Gaz rfrigrant. Substance utilise comme milieu dabsorption de la chaleur.
Processus adiabatique. Processus dans lequel il ny a pas de transfert de chaleur. Cela suppose Q = 0.
Systme thermique. Systme fonctionnant dans un cycle thermodynamique et qui effectue une certaine quantit positive de travail comme rsultat du transfert de chaleur
entre un corps temprature leve et un corps basse temprature.
141
Chapitre 19
Analyseurs de chimie clinique
Code GMDN 35513 34549*
Code ECRI 15-551 18-505 15-551
Dnomination Analyseurs de chimie Analyseurs portables Analyseur en chimie
clinique sche
* Sous-catgorie du code GMDN 35513
Les analyseurs de chimie mesurent la concentration de (UHS`ZL\YKLWHPSSHZZLJOPTPLZuJOLH]LJHJJLZZVPYLZ

substances dans le sang ou autres liquides biologiques
en utilisant des ractions chimiques spcifiques dont les
rsultats sont lus par des mthodes photomtriques. Leurs
Photo avec l aimable autorisation de F. Hoffmann-La Roche AG

applications vont du diagnostic clinique et de la surveillance de
la consommation de drogues aux analyses de mdecine lgale,
etc. Les analyseurs de chimie comprennent essentiellement
les analyseurs en chimie sche qui utilisent des bandelettes
imprgnes dchantillon sur lesquelles des ractions chimiques
sont dtectes, et les analyseurs en chimie liquide, qui dtectent
les substances en solution. Il existe de nombreux modles,
dont certains ne mesurent quun paramtre, par exemple les
appareils de mesure de la glycmie et les hmoglobinomtres,
et dautres en mesurent plus de dix. Les analyseurs de chimie
existent sous forme dappareils de paillasse avec divers degrs
dautomatisation, et dappareils portables. Certains modles,
conus pour les climats tropicaux, ont des composants
lectroniques protgs contre lhumidit. Les analyseurs
de chimie recouvrent toute une famille dinstruments dont
des photomtres et des colorimtres (voir chapitre 20). Ils
sont souvent appels du nom de lanalyse quils servent (UHS`ZL\YLUJOPTPLSPX\PKL
effectuer.
PHOTOGRAPHIES DANALYSEURS DE CHIMIE
(UHS`ZL\YWVY[HISLJOPTPLZuJOL
Photo avec l aimable autorisation de F. Hoffmann-La Roche AG
Photo avec laimable autorisation de Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. 2008
143
C H A P I T R E 19 A N A LY S E U R S D E C H I M I E C L I N I Q U E
QUOI SERVENT LES ANALYSEURS DE CHIMIE la lumire dans les chantillons liquides daprs la loi de
Au laboratoire danalyses mdicales, lanalyseur de chimie est Beer-Lambert (voir chapitre 11). Lanalyseur en chimie liquide
utilis pour mesurer une ou plusieurs substances (analytes) utilise en gnral comme source lumineuse une lampe
comme le glucose, lure, la cratinine, lhmoglobine, le halogne munie de filtres. Les modles les plus rcents utilisent
cholestrol, etc. dans le sang, lurine, le srum ou le plasma. Il une ou plusieurs lampes DEL mettant des longueurs donde
sert galement effectuer des tests de fonction hpatique. spcifiques. Les tests sur chantillons liquides sont bass sur
la production dun driv color de la substance analyser en
prsence de ractifs spcifiques. La couleur est directement
PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT proportionnelle la concentration de la ou des substances
dans la solution. Les mesures sont classiquement effectues
(UHS`ZL\YLUJOPTPLZuJOL entre 304 et 670 nm ou avec des filtres supplmentaires.
Lanalyseur en chimie sche est un photomtre rflectance. Certains appareils peuvent effectuer des mesures cintiques
La figure 27 du chapitre 11 montre linteraction de la lumire de la concentration en fonction du temps.
avec la matire et notamment la rflexion, dont la mesure est
appele rflectance. Le photomtre rflectance donne une
mesure quantitative de lintensit dune raction chimique LMENTS DES ANALYSEURS
ou biochimique produisant une couleur sur une surface (par
exemple lame de microscope, bandelette ractive, btonnet (UHS`ZL\YLUJOPTPLZuJOL
ractif ou patch). La lumire est mise une longueur Il existe divers types danalyseurs en chimie sche. Lun des
donde spcifique sur la bandelette par la source lumineuse lments de base de ces analyseurs, dont la conception varie
de lappareil (par exemple une diode lectroluminescente selon le fabricant, est le compartiment ou la fentre qui reoit la
ou DEL). Le produit color absorbe cette longueur donde bandelette ractive. Le compartiment est ferm par un couvercle
lumineuse. Plus la concentration de la substance analyser abattant, ou la bandelette est introduite manuellement ou au
dans lchantillon est leve, plus la coloration est intense moyen dun dispositif de chargement. La source lumineuse
et moins la lumire est rflchie. Le dtecteur de lappareil est habituellement une diode lectroluminescente (DEL), ou
mesure la rflectance de cette raction colore enzymatique plusieurs DEL de longueurs donde spcifiques. La mthode
ou chimique sur le btonnet ractif ou la bandelette ractive de mesure de la rflectance diffre selon le type dappareil.
et la convertit en un signal lectronique. Ce signal est traduit La mesure peut tre effectue directement, comme le montre
en concentration correspondante de la substance analyser la figure 60, ou dans un compartiment de forme cubique ou
dans le liquide biologique test et le rsultat est imprim ou sphrique. La figure 61 montre une sphre dUlbricht (aussi
affich sur un cran digital cristaux liquides (LCD). appele sphre dintgration ou sphre intgratrice) et la faon
dont elle mesure la rflectance.
(UHS`ZL\YLUJOPTPLSPX\PKL
Lanalyseur en chimie liquide est un photomtre. Contrairement Dans les sphres dUlbricht, une ou plusieurs DEL de longueur
au spectrophotomtre, il ne possde pas de prisme ni de grille donde dtermine, par exemple 567, 642 et/ou 951 nm, servent
de diffraction. On utilise un filtre color (un parmi plusieurs de source lumineuse pour divers tests. Les rcepteurs sont deux
filtres ou un filtre unique) pour mesurer labsorption de photodiodes symtriques, la photodiode de rfrence (DR) et
Figure 60. Diagramme simpli de la photomtrie par rectance sur bandelette ractive.
Les ches reprsentent le trajet de la lumire. Les pointills reprsentent le changement
dintensit d leet de la couleur prsente sur la zone de raction de la bandelette.
Zone de raction
Bandelette ractive
DEL Dtecteur
144
Figure 61. Sphre dUlbricht. CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION

1. Dballer avec soin lanalyseur de chimie.
2. Sassurer que lappareil est plac lcart de la lumire
Photo avec l aimable autorisation de Gigahertz-optik GmbH

solaire directe, de toute lumire parasite et de toutes
sources de chaleur.
3. Placer lappareil sur une paillasse solide, prs dune prise
de courant (pour les appareils ne fonctionnant pas sur
piles).
a. La prise de courant doit tre relie la terre pour
assurer la protection et la scurit de loprateur et de
lappareil. Les analyseurs de chimie fonctionnent en
gnral sous 110-120 V/60 Hz ou 220-230 V/50 Hz.
b. Les analyseurs ne fonctionnant pas sur piles
doivent tre protgs des sautes de tension par un
stabilisateur de tension.
4. Suivre les spcifications du fabricant pour linstallation
une photodiode de mesure (D). La lumire mise par la DEL est des diffrents modles.
uniformment rflchie par la paroi interne blanche de la sphre. 5. Conserver lemballage dorigine de lappareil pour
La photodiode DR mesure lintensit de la lumire diffuse (I0) et une utilisation future ou pour renvoyer lappareil en
la photodiode D mesure lintensit lumineuse rflchie de faon rparation.
diffuse par la partie ractive de la bandelette (I). Le rapport I0/I 6. Pour plus de scurit, certains modles danalyseurs
est proportionnel la valeur de la rflectance R. La rflectance peuvent tre rangs dans un placard fermant cl
mesure est convertie en une valeur de la concentration ou de lorsquils ne sont pas utiliss.
lactivit de la substance analyser au moyen de courbes talons
spcifiques du test.
UTILISATION DE LANALYSEUR EN CHIMIE SCHE
(UHS`ZL\YLUJOPTLSPX\PKL Seul un personnel qualifi et autoris doit pouvoir utiliser
Les analyseurs en chimie liquide sont eux aussi de conception lanalyseur en chimie sche. La procdure dcrite ci-dessous
trs variable. Les lments de base communs tous les types sapplique un type dappareil dtermin. Pour les autres
dappareils sont les lments photomtriques schmatiss sur modles, se reporter au manuel dutilisation fourni par le
la figure 56. Les accessoires supplmentaires peuvent tre trs fabricant.
diffrents selon le degr dautomatisation et de complexit 1. Brancher lappareil sur la prise de courant et lallumer.
de lappareil. Les analyseurs en chimie liquide sont souvent 2. Le temps de chauffage saffiche en secondes. Pour
quips dun ordinateur et dune imprimante, intgrs ou non. les autres appareils, attendre 15 minutes avant de
Les appareils les plus volus donnent les concentrations des commencer les mesures, ou suivre les indications du
substances analyser dans les units de mesure choisies. fabricant.
Figure 62. Elments de base dun photomtre. (Noter que sur certains appareils, le ltre est plac entre la cuve et le dtecteur).
Lampe Monochromateur Cuve Dtecteur Multiplicateur Enregistreur/cran dachage
145
3. Lorsque lindication READ apparat sur lcran ou que le -YtX\LUJL!\ULMVPZWHYQV\Y

temps spcifi est coul, commencer le test. 1. Toute claboussure sur lappareil ou proximit doit
4. Sortir une bandelette ractive du flacon. tre immdiatement nettoye.
5. A laide dune pipette, prlever la quantit approprie 2. A la fin de la journe de travail, selon le type
dchantillon (par exemple 32 l) en vitant la formation dalimentation lectrique, teindre lappareil en mettant
de bulles dair dans la pointe. linterrupteur sur OFF et le dbrancher, ou dconnecter
6. Enlever la feuille daluminium de la zone dapplication les bornes de la pile (interrupteur sur OFF).
(zone ractive) de la bandelette, sans la plier. 3. Pour les analyseurs en chimie sche : Ne pas laisser de
7. Dposer lchantillon au centre de la zone dapplication bandelettes dans lappareil. Nettoyer rgulirement la
rouge, en vitant de toucher la bandelette avec la fentre ou le compartiment recevant les bandelettes et
pointe de la pipette. fermer le couvercle. Utiliser un couvillon propre, doux
8. Soulever le couvercle, mettre la bandelette sur le guide et humide.
et linsrer horizontalement dans lappareil jusqu ce 4. Pour les en chimie liquide : Vider et maintenir ferm le
quun dclic se fasse entendre. compartiment chantillon lorsque lappareil nest pas
9. Fermer le couvercle. Laffichage sur lcran confirme utilis.
que le code magntique spcifique du test a t lu par 5. Couvrir lappareil aprs usage.
lappareil, par exemple GLU pour le glucose. 6. Ranger correctement lappareil labri de la poussire.
10. Le dlai restant avant que les rsultats apparaissent est
affich en secondes. Frquence : effectuer si ncessaire
11. La concentration de la substance analyser est 1. Remplacer les fusibles et lampes usags selon les
habituellement exprime en mg/dl. instructions du fabricant.
12. Aprs utilisation, ouvrir le couvercle et retirer la 2. Si lappareil est dfectueux, consulter un ingnieur
bandelette. qualifi dans le domaine biomdical.
13. Selon le type dalimentation lectrique, teindre
lappareil en mettant linterrupteur sur OFF et le Frquence : une fois par mois
dbrancher, ou dconnecter les bornes de la pile Inspecter la fentre et/ou la surface frontale du photodtecteur
(interrupteur sur OFF). et les nettoyer avec du papier optique.
Frquence : tous les six mois

UTILISATION DE LANALYSEUR EN CHIMIE LIQUIDE 1. Inspecter visuellement lappareil pour vrifier lintgrit
Seul un personnel qualifi et autoris doit pouvoir utiliser de tous ses lments conformment aux spcifications
lanalyseur en chimie liquide. La procdure dcrite ci-dessous du fabricant.
sapplique un analyseur portable semi-automatique avec 2. Vrifier que les boutons et interrupteurs ainsi que les
filtres intgrs et affichage numrique. Pour les autres modles, fermetures mcaniques sont monts correctement et
se reporter au manuel dutilisation fourni par le fabricant. quils sont clairement identifis.
1. Brancher lappareil sur la prise de courant et lallumer. 3. Vrifier que tous les accessoires sont propres et
2. Le temps de chauffage saffiche en secondes. intacts.
3. Prparer sur un portoir toutes les solutions en tubes 4. Vrifier que les lments mcaniques dassemblage
essais : blanc, talons, solutions analyser. (boulons, vis, crous, etc.) sont bien ajusts et en bon
4. Lorsque lappareil est prt, faire une mesure blanc. tat.
5. Faire une mesure avec chacun des tubes essais. 5. Vrifier que les cbles lectriques ne sont pas fissurs ni
6. Enregistrer les rsultats. rompus, et quils sont correctement relis au secteur.
7. Selon le type dalimentation lectrique, teindre 6. Pour les analyseurs aliments par le secteur :
lappareil en mettant linterrupteur sur OFF et le a. Vrifier que les cbles de raccordement et leurs
dbrancher, ou dconnecter les bornes de la pile bornes sont exempts de poussire et de corrosion
(interrupteur sur OFF). et ne sont pas encrasss.
b. Vrifier que les cbles lectriques ne montrent pas
de signes de rparations de fortune et ne sont pas
ENTRETIEN COURANT DES ANALYSEURS DE CHIMIE uss.
Certains analyseurs de chimie nexigent quun entretien c. Vrifier que le systme de mise la terre (interne et
minimal et effectuent automatiquement des procdures externe) rpond aux normes de scurit lectrique.
dauto-talonnage. On trouvera ci-dessous des procdures 7. Assurer que les interrupteurs et coupe-circuits, la bote
gnrales applicables la plupart des analyseurs de chimie. fusibles et les indicateurs ne sont pas poussireux,
Pour ltalonnage, les contrles priodiques et la maintenance encrasss ou corrods.
de lanalyseur utilis au laboratoire, toujours suivre les 8. Vrifier lalignement de la lampe si le fabricant le
instructions du fabricant. recommande.
146
Frquence : une fois par an INTERVENTIONS HORS ROUTINE ET CONDUITE

Ces tests doivent tre effectus par un lectricien (pour les TENIR EN CAS DE PANNE
appareils aliments par le secteur), un ingnieur ou autre On trouvera ci-dessous des directives gnrales pour la
personnel qualifi. Les rsultats doivent tre enregistrs et conduite tenir en cas de panne des analyseurs de chimie.
conservs pour permettre un suivi ultrieur. Comme il existe de nombreux modles, il faut toujours se
1. Contrler la scurit de linstallation lectrique rfrer au manuel dutilisation fourni par le fabricant et suivre
(uniquement pour les appareils aliments par le secteur) la procdure recommande.
et de lenvironnement physique de lappareil. 1. Sil ny a pas de lumire dans le systme, ou si son
2. Pour les appareils aliments par le secteur : intensit nest pas constante, remplacer lampoule.
a. Vrifier que le voltage est appropri et ne scarte 2. Sil y a de la lumire dans le systme mais quaucune
pas de plus de 5 % du voltage figurant dans les rponse ne saffiche, remplacer la photodiode.
spcifications de lappareil. 3. Toujours remplacer les fusibles et ampoules usags en
b. Vrifier que la polarit de la prise est correcte. suivant les instructions du fabricant.
3. Vrifier quil y a suffisamment despace autour de 4. Si lappareil est dfectueux, consulter un ingnieur
lappareil pour les cbles de raccordement et pour la qualifi dans le domaine biomdical.
ventilation. 5. Si lanalyseur ne sallume pas, contrler la prise de
4. Vrifier que la paillasse est en bon tat et propre. courant. Brancher et vrifier le fusible ou les bornes de
5. Vrifier que lanalyseur nest pas situ proximit la pile.
dappareils produisant des vibrations et nest pas expos 6. En cas de panne grave, consulter un ingnieur qualifi
la lumire solaire directe. dans le domaine biomdical.
6. Vrifier que lappareil nest pas expos des conditions
dhumidit, de temprature ou de poussire
excessives.
7. Sassurer quil ny a aucune source de fumes, de gaz ou
de vapeurs corrosives proximit.
147
GUIDE DE DPANNAGE
Lanalyseur ne dmarre pas. Linterrupteur marche/arrt est sur OFF. Mettre linterrupteur sur ON.
La prise de courant nest pas alimente. Vrifier lalimentation lectrique gnrale. Vrifier
quun dispositif de scurit na pas t activ.
Le cble dalimentation lectrique nest pas branch Brancher correctement le cble dalimentation.
correctement.
Les piles sont uses ou mal installes. Vrifier ltat et linstallation des piles. Les remplacer
ou les recharger si ncessaire.
pas. incomplte.
dmarrage.
incomplte.
limprimante.
automatiquement.
pas.
La cuve ne rentre pas dans le compartiment porte- La cuve nest pas de la bonne taille. Utiliser la taille de cuve spcifie par le fabricant.
chantillon de lanalyseur en chimie liquide.
positionn.
La bandelette nest pas lue par lanalyseur en chimie La bandelette na pas t place correctement dans Vrifier que le dclic sentend lorsque la bandelette
sche. lanalyseur. est mise en place (selon le type dappareil).
Vrifier que la bandelette a t place dans le bon
sens dans lanalyseur, avec la face noire vers le bas.
Lanalyseur sur en chimie sche ne fonctionne pas La bandelette utilise ne convient pas pour le test. Vrifier que la bandelette correspond au test
comme prvu. effectu. Si ncessaire, refaire le test avec une
bandelette correcte.
Lappareil est dfectueux. Effectuer les contrles selon les recommandations
du fabricant. Certains appareils fournissent des
indications sur lcran et sont livrs avec des
bandelettes de contrle de la qualit pour vrifier le
systme optique.
DFINITIONS
Analyte. Cest la substance analyser. Constituant dun liquide biologique (sang, urine, etc.) qui ne peut lui-mme tre mesur, mais dont on peut mesurer certaines
proprits en utilisant un dispositif mdical conu cette fin. Par exemple, le lactate ne peut tre dos, mais sa concentration peut tre mesure. Les analytes (on les appelle
souvent simplement paramtres) couramment tudis en chimie clinique sont le cholestrol, lure, la cratinine, le glucose, etc., que lon mesure pour valuer ltat de
sant des patients.
Bandelette ractive. Dispositif sous forme de bandelette contenant des ractifs et autres produits, et destin un usage diagnostique. Il existe des bandelettes ractives
de divers degrs de complexit. Elles peuvent consister simplement en bandes de papier filtre sur lesquelles est li un ractif, ou en un systme labor comprenant du
papier ractif, des fibres de transport, des couches de ractifs et dindicateurs, et jusqu des bandelettes magntiques contenant des donnes codes. La zone de test ou
de raction est la partie de la bandelette o la raction a lieu et o elle est lue par un analyseur en chimie sche ou directement par un oprateur.
Rflectance (R). Rapport entre lintensit de la lumire rflchie sur une surface (I0) et celle de la lumire incidente (I), I0/I.
Note : Voir aussi dautres dfinitions au chapitre 11.
148
Chapitre 20
Colorimtres
Code GMDN 36910 38837 15146
Code ECRI 18-257 18-258 15-146
Dnomination Photomtre filtre, Photomtre filtre, Analyseurs
automatique manuel dhmoglobine
(hmoglobinomtres)
PHOTOGRAPHIE DE COLORIMTRES les lments de lappareil sont protgs par un revtement

spcial qui empche la corrosion. Les colorimtres peuvent tre
Hmoglobinomtre portable manuels ou semi-automatiques. Les lectures de labsorbance
se font sur un cadran ou sur un cran affichage numrique.
Lhmoglobinomtre est un colorimtre portable conu pour
donner une lecture directe et exacte de la concentration
dhmoglobine en g/dl ou en g/l. Il est galement dcrit dans
le prsent chapitre.
Photo avec l aimable autorisation de Hemocue AB
Un colorimtre utilise des filtres pour produire de la lumire
sur une seule longueur donde slectionne en fonction de la
couleur de la solution analyser. La lumire colore traverse
lchantillon et la quantit de lumire mergente est mesure
sur une chelle dabsorbance. Labsorbance est directement
proportionnelle la concentration du compos color dans
la solution, selon la loi de Beer-Lambert (voir chapitre 11).
On peut habituellement mesurer avec une bonne fiabilit
des absorbances comprises entre 0 et 0,7 units. Les facteurs
dtalonnage sont plus levs pour les colorimtres que pour
les photomtres car ces appareils sont moins sensibles. Les
QUOI SERT UN COLORIMTRE facteurs dtalonnage correspondant diverses mthodes
Un colorimtre est un appareil lectrique qui mesure la et divers ractifs sont en gnral fournis par le fabricant ou
concentration de substances analyser dans des solutions trouvs dans la littrature.
colores. Cest une version simplifie du photomtre. En raison Les hmoglobinomtres mesurent la concentration
de la diffrence de qualit de ses filtres, il est moins sensible dhmoglobine dans le sang. La plupart des modles
quun photomtre. Le colorimtre est utilis en chimie clinique, fonctionnent manuellement et sont aliments par le secteur ou
principalement pour dterminer les taux dhmoglobine. par piles. Les nouveaux modles ont des batteries rechargeables
Plusieurs fabricants proposent divers modles comportant des et/ou utilisent lnergie solaire comme source dlectricit.
filtres individuels amovibles ou des filtres (jusqu dix longueurs Avec la plupart des hmoglobinomtres, il faut diluer le sang
donde diffrentes) monts sur un support pivotant. Certains avant de procder la mesure. Certains modles utilisent
modles sont adapts une utilisation en climat chaud et un dispositif spcial pour recueillir le sang sans dilution ; ces
humide : les filtres en glatine sont protgs par des plaques dispositifs sont usage unique (jetables), ce qui augmente le
de verre pour empcher le dveloppement de moisissures, et cot de lanalyse.
149
C H A P I T R E 20 C O LO R I M T R E S
LMENTS DU COLORIMTRE gnral sous 110-120 V/60 Hz ou 220-230 V/50 Hz.

Les lments de base du colorimtre sont les mmes que ceux b. Si lappareil ne fonctionne pas sur piles, le protger des
du photomtre, illustrs la figure 56 du chapitre 19. Comme sautes de courant par un stabilisateur de tension.
on la dj vu au dbut de ce chapitre, ces appareils sont 4. Suivre les instructions du fabricant pour linstallation
plus simples et, en raison de la qualit de leurs filtres, moins des divers modles.
sensibles. La source lumineuse peut tre une lampe diode 5. Pour plus de scurit, lappareil peut tre rang dans
mettant une lumire monochromatique. On peut aussi utiliser une armoire fermant cl lorsquil nest pas utilis. Ce
la lumire dune lampe au tungstne ou dune lampe halogne, nest peut-tre pas possible pour les grands modles,
filtre de faon obtenir la longueur donde voulue. Selon le mais on peut les protger dune autre faon si on le juge
modle, le panneau de contrle de lappareil peut comporter ncessaire.
les lments suivants :
1. Fentre daffichage
2. Touche marche/arrt (ON/OFF) UTILISATION DU COLORIMTRE
3. Compartiment chantillon Seul un personnel qualifi et autoris doit pouvoir utiliser
4. Touche Test le colorimtre. La procdure dcrite ci-dessous sapplique
5. Touche Rfrence un colorimtre portable avec filtres intgrs et affichage
6. Touche de slection du mode de fonctionnement, par numrique. Pour les autres modles, les procdures peuvent
exemple Absorbance/% Transmittance, Cintique (pas tre diffrentes et il faudra se reporter au manuel dutilisation
sur tous les modles). fourni par le fabricant.
1. Brancher lappareil sur la prise de courant et lallumer
(interrupteur sur ON).
CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION 2. Attendre 15 minutes pour laisser chauffer les systmes
1. Il faut un environnement propre, sans poussire, vapeurs optique et lectronique de lappareil.
ni fumes, et non expos la lumire solaire directe. 3. Slectionner la longueur donde requise pour la
2. Dballer lappareil avec soin et, le cas chant, substance analyser, par exemple 540 nm pour la
lassembler selon les instructions du fabricant. cyanmthmoglobine.
3. Placer lappareil sur une paillasse solide et si ncessaire 4. Slectionner le mode Absorbance avec la touche de
proximit (pas plus de 1,5 m) dune prise de courant slection du mode de fonctionnement.
relie la terre. 5. Prparer sur un portoir toutes les solutions
a. La prise de courant doit tre relie la terre pour ncessaires : blanc (ractif seul, sans chantillon),
garantir la protection et la scurit de loprateur talon de concentration connue et solutions
et de lappareil. Les colorimtres fonctionnent en analyser (chantillons).
Figure 63. Commandes dun colorimtre portable
Fentre daffichage
TTouche de mode Absorbance/

% Transmittance
T
Touche ON/OFF
Compartiment chantillon avec

Photo avec l aimable autorisation de Biochrome Ltd
cuve
T
Touche T
Test
T
Touche Rfrence
TTouche de mode Cintique
150
6. Nettoyer soigneusement la cuve avec un chiffon doux 11. Retirer le blanc du compartiment chantillon et le
non pelucheux ou du papier optique pour viter de remettre dans son tube essais dorigine.
la rayer. Toujours tenir la cuve par son ct dpoli 12. Verser la solution talon dans la cuve et placer celle-ci
opaque. dans le compartiment chantillon.
7. Verser la solution de blanc dans la cuve et placer celle- 13. Fermer le couvercle et attendre 3 secondes. Noter la
ci dans le compartiment chantillon avec les cts valeur lue sur lcran digital.
transparents face au rayon lumineux. 14. Retirer ltalon du compartiment chantillon et le
8. Fermer le compartiment chantillon et mettre laffichage remettre dans son tube essais dorigine.
zro avec la touche SET BLANK (rgler blanc). 15. Verser la solution chantillon dilue dans la cuve et
9. Enlever la cuve du compartiment chantillon et remettre placer celle-ci dans le compartiment chantillon.
la solution de blanc dans son tube essais dorigine. 16. Fermer le couvercle, attendre 3 secondes et noter la
10. Verser la solution talon dans la cuve et faire une lecture valeur lue sur laffichage digital.
de labsorbance. 17. Retirer lchantillon du compartiment et le remettre
11 Rpter ltape 9. dans son tube essais dorigine.
12. Faire de la mme faon la lecture de labsorbance sur 18. Rpter les tapes 15 17 pour chaque chantillon
les solutions analyser. analyser.
13. A laide dun tableau des valeurs obtenues daprs la 19. Rincer la cuve leau distille. La laisser sgoutter,
courbe dtalonnage de lappareil, lire la concentration lemballer dans un tissu doux et la ranger dans une
des chantillons daprs la valeur de labsorbance. petite bote pour la protger des rayures.
14. Aprs emploi, dbrancher lappareil et le couvrir pour 20. Selon le type dalimentation lectrique, teindre
le protger de la poussire. lappareil en mettant linterrupteur sur OFF et le
15. Rincer la cuve leau distille, la laisser sgoutter et dbrancher, ou dconnecter les bornes de la pile
lemballer dans un tissu doux. La ranger soigneusement (interrupteur sur OFF).
dans une petite bote pour viter les rayures et la 21. Ranger lappareil dans un tiroir fermant cl ou tout
poussire. autre endroit appropri.
UTILISATION DE LHMOGLOBINOMTRE ENTRETIEN DE ROUTINE

Seul un personnel qualifi et autoris doit pouvoir utiliser Lentretien des colorimtres doit tre effectu par un personnel
lhmoglobinomtre. La procdure dcrite ci-dessous qualifi. On trouvera ci-aprs les procdures gnrales
sapplique un hmoglobinomtre portable avec source dentretien de routine des colorimtres et hmoglobinomtres.
lumineuse DEL et affichage numrique. Pour les autres modles, Certains modles peuvent ncessiter des procdures
les procdures peuvent tre diffrentes et il faudra se reporter diffrentes. Toujours suivre soigneusement les instructions
au manuel dutilisation fourni par le fabricant. du fabricant pour les contrles priodiques et la maintenance
1. Brancher lappareil sur la prise de courant et mettre des colorimtres et hmoglobinomtres.
linterrupteur sur ON ou utiliser lalimentation lectrique
interne de lappareil. -YtX\LUJL!\ULMVPZWHYQV\Y
2. Mettre linterrupteur marche/arrt sur ON. 1. Toute claboussure sur lappareil ou proximit doit
3. Choisir lunit qui sera utilise en routine, par exemple tre immdiatement nettoye.
g/dl. 2. A la fin de la journe de travail, selon le type
4. Le temps de chauffage saffiche en secondes sur certains dalimentation lectrique, teindre lappareil et le
modles. Pour les autres modles, attendre 15 minutes dbrancher, ou dconnecter les bornes de la pile.
ou le temps recommand par le fabricant. 3. Vider et maintenir ferm le compartiment chantillon
5. Prparer sur un portoir toutes les solutions en tubes lorsque lappareil nest pas utilis.
essais : blanc, talons, solutions analyser. 4. Couvrir lappareil aprs usage. Le ranger correctement,
6. Laisser les solutions squilibrer la temprature labri de la poussire.
ambiante pendant 10 minutes.
7. Pendant ce temps, nettoyer soigneusement la cuve en Frquence : effectuer si ncessaire
utilisant un chiffon doux pour viter de la rayer. 1. Remplacer les fusibles et lampes usags selon les
8. Eviter de toucher les cts de la cuve qui font face au instructions du fabricant.
rayon lumineux ; tenir la cuve par ses cts opaques, 2. Si lappareil est dfectueux, consulter un ingnieur
qui ne sont pas sur le trajet de la lumire. qualifi dans le domaine biomdical.
9. Verser la solution de blanc dans la cuve et placer celle-
ci dans le compartiment chantillon avec les cts Frquence : une fois par mois
transparents face au rayon lumineux. Inspecter la fentre et/ou la surface frontale du photodtecteur
10. Faire le blanc de lappareil : fermer le couvercle et et les nettoyer avec du papier optique.
attendre environ 3 secondes, puis rgler le bouton de
laffichage sur zro (0:00).
151
Frquence : tous les six mois Entretien gnral

1. Inspecter visuellement lappareil pour vrifier lintgrit Se reporter la section sur lentretien gnral des
de tous ses lments conformment aux spcifications spectrophotomtres au chapitre 11 pour le nettoyage des
du fabricant. claboussures et le remplacement des piles.
2. Vrifier que les boutons et interrupteurs ainsi que les
fermetures mcaniques sont monts correctement et Utilisation et entretien des cuves
quils sont clairement identifis. Les cuves doivent tre rigoureusement propres pour que les
3. Vrifier que tous les accessoires sont propres et mesures soient exactes. Les nettoyer comme dcrit au chapitre
intacts. 11. Les recommandations supplmentaires suivantes sont
4. Vrifier que les lments mcaniques dassemblage applicables :
(boulons, vis, crous, etc.) sont bien ajusts et en bon 1. Toujours tenir les cuves par leurs parois opaques, non
tat. optiques.
5. Vrifier que les cbles lectriques ne sont pas fissurs ni 2. Sauf instructions contraires du fabricant, ne faire
rompus, et quils sont correctement relis au secteur. aucune mesure sans avoir fait une lecture blanc au
6. Pour les analyseurs aliments par le secteur : pralable.
a. Vrifier que les cbles de raccordement et leurs 3. Utiliser une cuve unique ou un jeu de cuves assorties
bornes sont exempts de poussire et de corrosion pour un fonctionnement optimal de lappareil.
et ne sont pas encrasss. Note : Labsorbance des cuves ne doit pas dpasser
b. Vrifier que les cbles lectriques ne montrent pas 0,01 lorsquon fait la mesure sur de leau distille.
de signes de rparations de fortune et ne sont pas Pour viter des rsultats incorrects, une cuve dont
uss. labsorbance dpasse cette limite ne doit pas tre
c. Vrifier que le systme de mise la terre (interne et utilise dans une srie sauf si elle est apparie avec une
externe) rpond aux normes de scurit lectrique. cuve ayant la mme absorbance avec leau distille.
7. Assurer que les interrupteurs et coupe-circuits, la bote 4. Enlever les bulles prsentes dans la solution en tapotant
fusibles et les indicateurs ne sont pas poussireux, doucement la cuve avec le doigt.
encrasss ou corrods. 5. Vrifier que le niveau de solution dans la cuve est
8. Vrifier lalignement de la lampe si le fabricant le suffisamment haut (au-dessus du faisceau lumineux)
recommande. pour que la rflexion de la lumire la surface du liquide
ninterfre pas avec la mesure.
Frquence : une fois par an 6. Toutes les solutions utilises et lchantillon analyser
Ces tests doivent tre effectus par un lectricien, un ingnieur doivent tre limpides. Si le mlange entre la solution de
ou autre personnel qualifi. Les rsultats doivent tre enregistrs ractif et lchantillon est trouble, la mesure doit tre
et conservs pour permettre un suivi ultrieur. refaite aprs avoir vrifi et confirm la transparence
1. Contrler la scurit de linstallation lectrique et de et la propret de la cuve.
lenvironnement physique de lappareil. 7. Si on effectue une mesure cintique sur une longue
2. Pour les appareils aliments par le secteur : priode, fermer hermtiquement la cuve pour viter
a. Vrifier que le voltage est appropri et ne scarte lvaporation, qui donnerait des rsultats faussement
pas de plus de 5 % du voltage figurant dans les levs.
spcifications de lappareil. 8. Lorsquon effectue des mesures sur une srie
b. Vrifier que la polarit de la prise est correcte. dchantillons, refaire le zro toutes les 5 10 mesures
3. Vrifier quil y a suffisamment despace autour de en faisant une mesure blanc, pour viter une drive
lappareil pour les cbles de raccordement et pour la du zro.
ventilation. 9. Ne pas laisser la cuve dans lappareil.
4. Vrifier que la paillasse est en bon tat et propre. 10. Si on utilise des micro-cuves ou des semi-micro-cuves,
5. Vrifier que lanalyseur nest pas situ proximit assurer un positionnement correct sur le trajet lumineux
dappareils produisant des vibrations et nest pas expos pour viter de fausser les rsultats du fait de la rflexion
la lumire solaire directe. partielle de la lumire.
6. Vrifier que lappareil nest pas expos des conditions 11. Conserver les cuves dans une bote labri de la
dhumidit, de temprature ou de poussire poussire pour viter de les endommager, car des
excessives. cuves rayes ou endommages peuvent conduire des
7. Assurer quil ny a aucune source de fumes, de gaz ou rsultats incorrects.
de vapeurs corrosives proximit.
152
<[PSPZH[PVUL[LU[YL[PLUKLZS[YLZVW[PX\LZ Alignement de la lampe

1. Manipuler les filtres amovibles en les tenant par leurs La procdure ci-dessous indique comment procder
bords pour viter toute contamination. lalignement dune nouvelle lampe. Se reporter aux instructions
2. Conserver les filtres de rechange dans une bote labri du fabricant pour vrifier que la procdure est conforme aux
de la poussire afin dviter quils ne se cassent ou se spcifications du modle utilis.
rayent.
3. Vrifier quun filtre se trouve dans son logement Raligner la nouvelle lampe comme suit :
lorsquon allume la lampe pour viter dendommager 1. Mettre une cuve propre emplie deau distille en place
la cellule photolectrique. Ranger les filtres dans leur dans lappareil.
bote quand lappareil nest pas utilis. 2. Mettre lindicateur la moiti de lchelle de lecture, par
4. Lorsque lappareil est froid et teint (interrupteur sur exemple 50 % de transmission.
OFF), nettoyer les filtres et la fentre optique avec du 3. Dplacer lgrement chaque lment optique et vrifier
papier optique selon les instructions du fabricant. si la lecture est modifie.
4. Si ncessaire, ajuster lalignement de la lampe pour
Utilisation et entretien de la source lumineuse obtenir une transmission maximale.
1. Eteindre la lampe aprs chaque utilisation pour 5. On peut aussi placer un carton blanc en face de la cellule
prolonger sa dure de vie. Certains fabricants photolectrique (certains instruments le permettent).
recommandent de tenir un registre de lutilisation de Observer limage de la lampe sur le carton. Elle doit
la lampe du colorimtre. tre verticale et nette. Si non, ajuster lalignement de la
2. Contrler la lampe intervalles rguliers. La lampe jusqu ce quon obtienne la meilleure image.
remplacer si elle est lorigine de linstabilit du signal
dabsorption.
153
On trouvera ci-dessous un guide de dpannage pour les colorimtres. Comme il existe de nombreux modles diffrents, tenir compte en priorit
de ce qui suit :
1. Toujours se reporter au manuel dutilisation fourni par le fabricant.
2. Si un appareil ne sallume pas, contrler la prise de courant (pour les appareils fonctionnant sur secteur). Brancher lappareil et contrler le
fusible ou les bornes des piles.
3. En cas de panne grave, consulter un ingnieur qualifi dans le domaine biomdical.
GUIDE DE DPANNAGE
Colorimtre automatique
Le colorimtre ne dmarre pas. Linterrupteur marche/arrt est sur OFF. Mettre linterrupteur sur ON.
La prise de courant nest pas alimente. Vrifier lalimentation lectrique gnrale. Vrifier
quun dispositif de scurit nest pas activ.
Le cble dalimentation lectrique nest pas branch Brancher correctement le cble dalimentation.
correctement.
pas. incomplte.
dmarrage.
incomplte.
limprimante.
automatiquement.
pas.
La cuve ne rentre pas dans le compartiment La cuve nest pas de la bonne taille. Utiliser la taille de cuve spcifie par le fabricant.
chantillon.
positionn.
La lecture est fluctuante. Il y a des interfrences sur le trajet de la lumire. Vrifier que la cuve nest pas raye.
Vrifier quil ny a pas de particules flottant dans la
cuve.
Frotter les parois optiques de la cuve avec un chiffon
propre.
Vrifier que lintervalle de travail slectionn
(longueur donde et dilution) convient pour
lchantillon analyser.
La lecture indique des valeurs ngatives. Il ny a pas Il ny a pas dchantillon. Mettre un chantillon dans la solution.
de lecture de labsorbance.
La cuve est mal positionne. Vrifier lorientation de la cuve. Ses cts
transparents doivent tre face au rayon lumineux.
La longueur donde slectionne est incorrecte. Rgler la longueur donde sur un intervalle
compatible avec lanalyse.
Lappareil a t talonn par erreur avec un Etalonner avec une solution blanc ou de leau
chantillon la place dune solution talon. distille.
154
Colorimtre non automatique

La lampe source ne sallume pas. Le filament est cass. Remplacer la lampe.
Le fusible a saut. Remplacer le fusible.
Il y a une rsistance dans le filament de la lampe. Remplacer la lampe.
Le voltage est incorrect. Contrler le voltage. Contrler la source
dalimentation.
La lecture du cadran ou du galvanomtre est trop La lampe source est dfectueuse. Remplacer la lampe.
faible.
La cellule photolectrique est sale ou dfectueuse. Nettoyer ou remplacer la cellule photolectrique
Le photomultiplicateur est dfectueux. Remplacer ou rparer le photomultiplicateur.
La tension aux bornes de la lampe source est faible. Ajuster le voltage.
DFINITIONS
Comme ces appareils sont bass sur le principe du photomtre, voir les dfinitions la fin du chapitre 11.
155
Bibliographie
American Society for Testing and Materials, Annual book of Standards 1994. Water Hardness Determination. Method ASTM
D1126-92.
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The Laboratory Safety Guidelines, Public Health Agency of Canada.
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PA, USA 2000.
158
C ONTAC T
Diagnostic et technologie
de laboratoire
Organisation mondiale de la Sant
20 Avenue Appia
CH-1211 Genve
Suisse
E-mail: diagnostics@who.int
www.who.int/diagnostics_laboratory
ISBN 92 4 2596359

Manuel de Maintenance Des Appareils de Labo

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Manuel dentretien et de

Dpartement technologies essentielles de la Sant

Dpartement technologies essentielles de la Sant

Manuel dentretien et de maintenance pour lquipement de laboratoire. 2e d.

1.Laboratoire. 2.Maintenance. 3.Manuel. I.Organisation mondiale de la Sant. II.Organisation Panamericaine de la Sant.

Organisation mondiale de la Sant 2008

Composition et mise en page : LIV Com Srl, Morges Switzerland

This document is available at www.who.int/diagnostics_laboratory

Table des matires

TABLE DES FIGURES viii

*/(70;9,ENCEINTE DE SCURIT BIOLOGIQUE 35

Conditions requises pour linstallation 61

*/(70;9,AGITATEUR CHAUFFANT 127

*/(70;9,RFRIGRATEURS ET CONGLATEURS 131

*/(70;9, ANALYSEURS DE CHIMIE CLINIQUE 143

Utilisation de lanalyseur en chimie sche 145

Figure 1 Matriel utilis pour les tests ELISA 2

Figure 40 Commandes de lincubateur 101

Le lecteur de microplaques, aussi appel lecteur PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT

Les chantillons tester sont dposs dans des plaques

puits o la raction a lieu. Les plaques couramment utilises

Note : Certains des puits sont utiliss pour les

Ordinateur 1 Pour des explications plus dtailles, se reporter

Enzyme. Protine qui acclre (catalyse) les ractions chimiques.

TMB. Ttramthylbenzidine, substrat pour la peroxydase de raifort (enzyme).

Le laveur de microplaques, aussi appel laveur de microplaques PRINCIPES DE FONCTIONNEMENT

V ou fond en U), ou encore des bandelettes, les volumes

Figure 2. Laveur ELISA

Figure 3. Prols de puits

Fond plat Fond en U Fond en V Lavage facile

t Distribution et aspiration simultanes. Dans certains =tYPJH[PVUKLSHWYVJtK\YLKLSH]HNL

1 Procdure labore par PANBIO, ELISA Check Plus, Cat. N E-ECP01T.

A QUOI SERT UN PH-MTRE

Photo avec l aimable autorisation de Consort

la cathode de llectrode de rfrence se trouve dans le corps LMENTS DU pH-MTRE

Figure 4. Schma dun pH-mtre

Figure 5. Types dlectrodes

Electrode combine Electrode de rfrence (au calomel)

Fil de platine (Pt)

Fil dargent (Ag) Mercure (Hg)

Electrode de rfrence Chlorure mercureux (HgCl ou calomel)

Chlorure de potassium (KCl)

Figure 6. Circuit lectrique type pour le pH-mtre

Description des lments du circuit lectrique type

CONDITIONS REQUISES POUR LINSTALLATION Description de la procdure dtalonnage

2. Plonger les lectrodes dans la solution 5. Eteindre le pH-mtre.

1 Vrifier le type de solution dtalonnage recommand par le fabricant de

* Uniquement pour les appareils fonctionnant sur piles.

Dans toute solution aqueuse il existe un quilibre exprim par la relation :

a tant la concentration ionique effective (activit)

Balance mcanique Balance lectronique

Photo avec l aimable autorisation de Acculab Corporation

A QUOI SERT UNE BALANCE Figure 7. Balance ressort

dune substance, ou son poids. Au laboratoire, la balance sert

4. Balance plateau suprieur (balance guides

Les balances de laboratoire fonctionnent sur le principe de la

La figure 14 prsente cette classification sous forme

Dans la classification mtrologique des balances lectroniques,

1 Kupper, W., Balances and Weighing, Mettler Instrument Corp., Princeton-

Commandes des balances lectroniques Utilisation de la balance lectronique

1 Field Services Handbook for High Precision

Tableau de classication des poids de rfrence selon lOIML1

Tableau dutilisation des poids standard en fonction de la capacit de la balance

1 Guidelines for calibration in laboratories, Drinking Water Inspectorate by

*/(70;9,ENCEINTE DE SCURIT BIOLOGIQUE 35

*/(70;9,AGITATEUR CHAUFFANT 127

*/(70;9,RFRIGRATEURS ET CONGLATEURS 131

*/(70;9, ANALYSEURS DE CHIMIE CLINIQUE 143