INSTITUTO TECNOLGICO DE TAPACHULA

INGENERA QUMICA

MICROBIOLOGA DE ALIMENTOS

REPORTE DE LA PRACTICA DE LABORATORIO

Esterilizacin de materiales y uso de equipos en microbiologa

PRCTICA No. 1

Integrantes del equipo:

Guzar Daz Cristian

Herrera Garca Jazmn Carolina

Hidalgo Martnez Sheila

Hidalgo Sols Viviana

Jimnez Velsquez Marcos

Lpez de Len Mara Luisa

Docente: Mendoza Orozco Gabriela Mayanin

FECHA DE REALIZACIN: FECHA DE ENTREGA:

28/08/17 05/09/17

1
 NDICE

1. INTRODUCCIN ......................................................................................................................... 3

2. OBJETIVO GENERAL ................................................................................................................ 4

2.1 Objetivos especficos ............................................................................................................ 4

3. RESUMEN .................................................................................................................................... 4

4. FUNDAMENTO DE LA TCNICA ............................................................................................. 5

5. MARCO TERICO ...................................................................................................................... 5

6. MATERIAL Y MTODOS ........................................................................................................ 8

6.1 Material............................................................................................................................... 8
6.1.1 Material............................................................................................................................. 8
6.1.2 Equipo .............................................................................................................................. 8
6.2 METODOLOGA .................................................................................................................... 9
6.2.1 Envoltura de instrumentos planos. .............................................................................. 9
6.2.2 Envoltura de instrumentos volumtricos. .................................................................... 9
6.2.3 Envoltura de pipetas. ..................................................................................................... 9
6.2.4 Uso de la autoclave.......................................................................................................... 10
6.2.5 Uso de la campana de flujo laminar. ............................................................................. 11
6.2.6 Uso de la estufa de incubacin. ............................................................................... 11
7. RESULTADOS ........................................................................................................................... 11

8. DISCUSIONES ........................................................................................................................... 11

9. CONCLUSIONES ...................................................................................................................... 12

10. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS ..................................................................................... 13

2
1. INTRODUCCIN

Los microorganismos son seres que han acompaado al ser humano todo el tiempo,
e incluso existi antes que ste, sin embargo, hasta hace poco se conoci la
existencia de estos seres diminutos, el estudio de stos ha dado un gran avance en
muchas reas de estudio, pues a partir del estudio de stos se han podido detectar
enfermedades, fuentes de infeccin, medicamentos, nuevas vacunas, alimentos,
conservacin de stos, tratamiento de aguas, y un sinfn ms.

No obstante, el anlisis de stos llev muchos aos, y una gran evolucin de

tcnicas, puesto que una de las ms grandes dificultades fue poder analizarlos por
separado, sin que llegaran a mezclarse con los microorganismos propios del
ambiente, ya sea del aire, el agua, instrumentos utilizados, manos del investigador,
etc., un sinfn de medios por el cual poda generarse una contaminacin de la
muestra.

Tras la necesidad de realizar estos estudios, las tcnicas fueron siendo cada vez
ms rgidas y, por ende, eficaces. A partir de eso se cuidaron todos los procesos o
etapas por la que pasa un cultivo, desde la preparacin de materiales para crear el
cultivo o analizarlo, como el medio en que se trabaja o su almacenamiento.

Para la preparacin de los materiales se ide la esterilizacin de stos, la cual

consiste en eliminar todo microrganismo y producto de ellos mediante procesos
fsicos y/o qumicos, para que, de tal manera el cultivo que est en contactos con
estos instrumentos no sea contaminado. As tambin para su gestin, se inventaron
equipos que proveen un ambiente limpio, de incluso equipos para almacenar dichos
cultivos manteniendo sus caractersticas no alteradas.

Para poder analizar de manera ms detalla en el presenta formato se plasma la

prctica realizada en la que se abordan los puntos mencionados.

3
2. OBJETIVO GENERAL

Aprender a aplicar correctamente la metodologa de esterilizacin de materiales

mediante el uso de autoclaves, as como el funcionamiento de ste y otros equipos
utilizados en prcticas de microbiologa de alimentos.

2.1 Objetivos especficos

1. Realizar adecuadamente la envoltura de los instrumentos utilizados en las

prcticas de microbiologa de alimentos, tomando en cuenta las necesidades
segn el equipo utilizado (autoclave).
2. Llevar a cabo la metodologa para la esterilizacin mediante un uso adecuado
del autoclave, conociendo como opera ste.
3. Aplicar mtodos eficientes para determinar si la esterilizacin se llev de forma
exitosa.
4. Identificar el funcionamiento y utilizacin de la campana de flujo laminar.
5. Conservar cultivo mediante el manejo de estufas de incubacin.

3. RESUMEN

En esta prctica se llev a cabo la demostracin de cmo envolver adecuadamente

los instrumentos bsicos utilizados en las prcticas de microbiologa de alimentos
para ser esterilizados, as como las medidas utilizadas en este proceso de envoltura
para evitar contaminaciones futuras, y el cuidado de estos instrumentos, y por
consiguiente las herramientas usadas y materiales de envoltura. Adems, se explic
el funcionamiento del autoclave para llevar a cabo la esterilizacin, desde su
encendido, apertura, sellado, instrucciones de uso para su buen funcionamiento,
hasta su apagado; como tambin las precauciones necesarias durante su operacin
y en el manejo de los materiales. Aunado a esto se explicaron indicaciones para
una mayor eficiencia en el funcionamiento y la utilidad de la campana de flujo
laminar durante el desarrollo de manejo de cultivos, y finalmente cmo almacenar
los cultivos, haciendo uso de estufas de incubacin identificando sus caractersticas
y modos de operacin.

4
4. FUNDAMENTO DE LA TCNICA

En el ambiente y objetos de transporte existen microorganismos, por lo cual el uso

de stos sin ser esterilizados genera error en el resultado del anlisis. Las formas
de contaminacin del material se dan de forma instantnea, por lo cual es necesario
que este est envuelto y adems en el empleo de la esterilizacin por vapor a
presin el envoltorio debe de estar protegido para evitar rupturas por la humedad, y
por ende evitar contaminacin.

Para trabajar con cultivos de microorganismos, adems de material esterilizado, es

indispensable un ambiente adecuado, por lo cual se emplea la campana de flujo
laminar, que hace esto permisible; as como las estufas de incubacin para su
almacenamiento.

5. MARCO TERICO

Para llevar a cabo procesos con resultados eficientes debemos contar con equipos
que permitan la no contaminacin de nuestras muestras, desde la preparacin del
material, la operacin del cultivo y su almacn.
Preparacin del material.
Para que un proceso se lleve en condiciones favorable reduciendo las
probabilidades de obtener un resultado errneo, el material usado debe de estar
esterilizado
La esterilizacin comprende un conjunto de mtodos empleados en los laboratorios
de microbiologa, para destruir, inhibir o separar a los microorganismos presentes
en los diferentes objetos, compuestos orgnicos, medio ambiente, etc., donde se
requiere su eliminacin.
Concepto: esterilizacin significa: destruccin o eliminacin de todas las formas de
vida, no limitndose exclusivamente a la estructura vegetativa, sino incluyendo
adems a sus esporas.
Diferentes agentes empleados en la esterilizacin: para la esterilizacin se emplean
diferentes agentes fsicos y qumicos, los agentes fsicos ms utilizados son: el
calor, las radicaciones y la filtracin. En relacin con los agentes qumicos,
solamente algunos, como, por ejemplo. El formaldehido y el xido de etileno ejercen
un efecto letal sobre las esporas.

5
Para reducir el riesgo de contaminacin post-esterilizacin, los materiales a
esterilizar deben ser envueltos previamente, para que, al ser esterilizados, estn
protegidos del ambiente, para ello existen metodologas de envoltura ara cada tipo
de instrumentos, en ocasiones es necesario proteger tambin la envoltura; Esto se
hace necesario cuando se usa un ambiente muy hmedo, como en el caso de vapor
a presin en la autoclave.
Prototipo estndar de la autoclave:

Cmara.
Cuerpo cilndrico de aproximadamente un metro de largo por 50 a 60 cm de
dimetro, siendo el lugar desinado para la colocacin de los objetos y materiales
que se desean esterilizar.
Algunos modelos disponen de una segunda cmara denominada externa, que
debido a su mayor dimetro rodea a la cmara interna, quedando las paredes de
ambas separadas entre s por varios centmetros. En este espacio se acumula el
vapor de agua proceden de la caldera que posteriormente pasa a la cmara interna.

Puerta.
La puerta est articulada con bisagras en la parte anterior del equipo, a unos pocos
centmetros de la cmara interna estando provista de un numero variable de
metlicas en posicin radial que al ser cerradas mediante el de una manivela
ubicada centralmente, penetran en un reborde perifrico situado en la parte frontal
de la autoclave propiciando un cierre hermtico.

Vlvula.
Las autoclaves poseen dos vlvulas, una para extraer el aire que quedo en el interior
del equipo al cerrarse y la otra para propulsar la salida del vapor cuando la presin
sobrepasa los lmites admisibles. Esta ltima se denomina vlvula de seguridad.

Caldera.
Segn del modelo del que se trate la caldera puede estar ubicada junto o separa de
la cmara. En su interior se deposita el agua (destilada) hasta alcanzar el nivel
adecuado.

Fuente de calor.
La fuente de calor empleada para calentar el agua contenida en la caldera y se
produzca vapor de agua, puede ser elctrica o de gas.
Estos equipos disponen de un termmetro y un manmetro que permiten ir
monitoreando la temperatura y la presin existente en el interior de la autoclave,
durante su funcionamiento.

6
 Manejo del cultivo.
Para evitar contaminar nuestros cultivos durante su manipulacin, las condiciones
ambientales deben adecuarse, principalmente los microorganismos en el aire, para
esto se suele trabajar en una campana de flujo laminar.
Las campanas de flujo laminar son instrumentos que se utilizan principalmente para
trabajar en ambientes libres de contaminacin microbiolgica; y para garantizar
esto, no basta con tener un producto de calidad con filtros adecuados, sino que
tenemos que mantener el equipo limpio en todo momento. Lo ideal es utilizar el
lquido recomendado por el fabricante, pero tambin se pueden utilizar
desinfectantes genricos o alcohol etlico al 70%. Lo ms importante es que nunca
se use agua y jabn.
Recordemos que en ocasiones se trabaja dentro de la campana con material
biolgico, qumicos corrosivos u organismos infecciosos, por lo que aquel que
realice la limpieza de la campana debe colocarse guantes, lentes, cubre boca, bata
y zapatos cerrados. Si en el laboratorio se trabaja con vapores nocivos, ser
necesario utilizar una mscara.
Antes de iniciar es necesario prender la campana y dejar que el aire empiece a
circular por lo menos 5 minutos para dejar que se equilibre. Mientras tanto se puede
hacer una inspeccin visual de la cabina, buscar manchas, escombro o material que
se haya dejado olvidado ah; es recomendable nunca dejar material en la campana
pues pueden ser foco de contaminacin; sin embargo, si a la hora de la inspeccin
encontramos algo ah, este material deber meterse a esterilizar a la autoclave.
Almacenamiento del cultivo.
Para evitar que se contamine durante su almacenamiento se suele emplear un
sistema cerrado bajo ciertas condiciones, para lo cual se emplean las estufas
incubadoras microbiolgicas:
El diseo industrial de las incubadoras es similar a las de un horno, en lo referente
a su forma, estructura y tamao. Se trata de un mueble rectangular o cuadrado de
unos 80 cm3, provisto de mltiples paneles, calentadores y doble puerta, la interna
de cristal y la externa metlica, con excepcin de algunos modelos ya en desuso
construidos de madera. Al igual que el horno, el lado o debajo de la puerta externa,
dispone de un panel donde se encuentra el interruptor, el botn para regular la
temperatura, el cual est rodeado de una escala metrada y un bombillo piloto que
indica mediante su apagado o encendido de forma automtica, el funcionamiento
del termostato. En su interior, la incubadora esta provista de un numero variable de
parrillas metlicas intercambiables, donde se colocan los materiales a incubar.

7
6. MATERIAL Y MTODOS
6.1 Material

6.1.1 Material

Algodn
Gasa
Cinta Masking
Tijeras
Papel
Bolsas de polipapel
Pipetas
Vaso de precipitado
Tubos de reaccin
Vidrio de reloj
Caja de Petri

6.1.2 Equipo

Campana de flujo laminar

Autoclave
Microscopio
Estufa

8
6.2 METODOLOGA

6.2.1 Envoltura de instrumentos planos.

Envoltura de instrumentos planos como esptulas, cajas de Petri, vidrios de reloj,
pinzas, etc.

1. Se recorta papel para envolver, ya sea hojas reutilizadas, papel

estraza, u otros, de forma cuadrada o rectangular segn las
dimensiones y forma del material.
2. Se cubre el instrumento con el papel, haciendo los dobleces
pertinentes para que quede totalmente envuelto y se aseguran
stos con cinta masking.
3. Se colocan dentro de bolsas de polipapel y sta se sella con un nudo.

6.2.2 Envoltura de instrumentos volumtricos.

Envoltura de instrumentos volumtricos como tubos de ensayo, probetas,
matraces, etc.

1. Se coloca un pliegue cuadrado de gasa sobre la boca de los

instrumentos que contengan un orificio de entrada.
2. Se enrolla un poco de algodn de un tamao acorde al
orificio y tamao del instrumento y se introduce a ste, de
forma que empuje la gasa puesta.
3. Se acomoda bien el algodn y se levantar las orillas de la gasa y se hace un
amarre de forma que la gasa rodee completamente el algodn, empleando cinta
masking.
4. Finalmente se cubre toda la parte superior, incluyendo el tapn elaborado, con
otra tapa elaborada mediante dobleces del papel usado para envolver.

6.2.3 Envoltura de pipetas.

1. Se coloca un rollo de algodn en la boca superior,
de forma que este permita la succin, es decir, a
baja presin.

9
2. Se recorta papel envolvente en tira larga y se va envolviendo la pipeta en l en
forma espiral.
3. Finalmente se sellan los extremos con cinta masking.

6.2.4 Uso de la autoclave.

1. Se destapa la autoclave y se saca el contenedor de materiales.
2. Se deposita agua destilada hasta que el nivel del agua en el tubo indicador llegue
al aforo.
3. En el contenedor de materiales se depositan los instrumentos a esterilizar,
colocando los tubos y pipetas en latas o vasos de precipitados con el fondo
relleno de papel para evitar que toque directo con la base. El contenedor debe
ser llenado a un 75% de su capacidad y uno de los instrumentos puede ser
sellado con cinta testigo o aadir un cultivo indicador.
4. Se introduce el contenedor
semilleno y se procede a cerrar
la autoclave, de forma que los
seguros vayan siendo cerrados
estn formando el dimetro de la
tapa.
5. Se enciende el equipo y se
espera a que la presin sea la requerida. Llegando a sta se comienza el conteo
de 30 minutos a una presin constante, para lo cual se manipulan las llaves de
fuga de presin.
6. Transcurridos los 30 minutos, se abren las llaves de salida de presin y cuando
sta ya haya bajado de abre la autoclave y se puede sacar el contenedor de
materiales, y as poder sacar stos.
7. Se comprueba la eficiencia del proceso, notando si la cinta testigo present
lneas oscuras o si el cultivo muestra cambia de color con el tiempo.

10
6.2.5 Uso de la campana de flujo laminar.
1. Se enciende la campana de flujo laminar alrededor de
media hora antes de su uso.
2. Transcurridos los 30 minutos, se procede a operar el cultivo
a estudiar, estando sentado frente a la campana y usando
la luz para agilizar el estudio.
3. Finalizando el anlisis del cultivo en cuestin, se apaga la campana.

6.2.6 Uso de la estufa de incubacin.

1. Se abre la estufa de incubacin, y se acomodan las rejillas
segn el tamao del contenedor del cultivo.
2. Se introduce el cultivo sobre una de las rejillas, nunca en
la base de la parte interna de la estufa. Adems, se coloca
un termmetro dentro para verificar su funcin,
3. Se cierra la estufa y se regula la temperatura a la requerida, generalmente 30C.

7. RESULTADOS

Como resultado de todo el proceso detallado se obtienen instrumentos estriles, los

cuales son adecuados para realizar estudios de poblaciones microbiolgicas, o de
la misma ndole.

8. DISCUSIONES

No hay resultados que discutir, debido al carcter informativo de la prctica.

11
9. CONCLUSIONES

Es importante reconocer la importancia de manejar todo un proceso libre de posibles

contaminaciones a nuestros cultivos, para que, de esta manera al realizar los
estudios pertinentes, los microorganismos presentes sean los propios de la muestra
en cuestin y no de la muestra y el ambiente, obteniendo datos errneos.

Con base en lo anterior se recalca la importancia de cada una de las etapas por las
que pasa nuestro cultivo, desde los materiales para su preparacin, como para su
almacn.

Se hace hincapi en la necesidad de conocer los mtodos de envoltura para evitar

posibles contaminaciones post-esterilizacin, as como el conocer la tcnica de
esterilizacin, no solo para llevar a cabo este proceso de forma exitosa, si no para
saber qu condiciones requiere el empaquetado.

Finalmente, como se ha mencionado es importante conocer cada equipo, desde su

funcionamiento, manera de empleo, formas preservar su funcionalidad, y los riesgos
que estos generan, para as tomar medidas y aplicarlas, obteniendo mejores
resultados en nuestros anlisis.

12
10. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Organizacin Panamericana de la Salud. Manual para el diagnstico

bacteriolgico de la tuberculosis, Parte ll: Cultivo. 2008

FAO. Principios bsicos de la esterilizacin y funcionamiento e instalacin de

autoclaves. 1970.

Toro C., Daniel Ricardo. Manual de introduccin al laboratorio de

microbiologa. 2005

Lazo Garca, Elvia .Manual de seguridad en laboratorios de microbiologa

molecular. 2004.

13