Sebenta de BMC

1 Ano

Elaborado por:
Joana Marques

2010/2011
 Introduo

Ol!!! :D

Bom, quero que saibas que esta sebenta surge de muitos pergaminhos de linho com muitas rasuras
e manchas de caf derramado Assim, e a pedido de muitas famlias decidi tornar a coisa mais ecolgica e
tecnolgica, resultando nesta simptica sebenta.

Compreendo que estejas assustado com as 731 pginas do Essential (?) Cell Biology e com a
complexidade das matrias Mas no desesperes

Apesar de no substituir o manual escolhido para BMC, esta sebenta pode ajudar a orientar-te num
estudo mais contnuo ao longo do semestre ou se estiveres aflito na altura dos exames [Faam o favor de
ver os bonecos todos! As imagens ajudam muito mesmo]

Na minha opinio, considero fulcral ter uma ideia das aulas tericas, uma vez que a prof. Carmo
salienta aspectos importantes (mesmo s 8h da manh) que muitas vezes so determinantes para o exame
e no se mostram to relevantes no manual. Assim sendo, esta sebenta contempla no s os contedos (e
imagens bonitas) do Sr. Alberts como tambm o sumo (do bom e do melhor) das aulas tericas da Big Boss
(excelentssima professora doutora Maria do Carmo Fonseca).

Tomei ainda em considerao a organizao das aulas para orientar a construo desta sebenta,
uma vez que permite estabelecer relao entre matrias divididas por vrios captulos diferentes do livro.
Constam ainda alguns tpicos abordados nas TPs e Ps que se relacionam com cada bloco de aulas.

Quero alertar-te para o facto de este exame ser um pouco mais chatinho do que mdulo II e III,
uma vez que precisas mesmo de exercitar esses neurnios (os que te restaram de Anatomia). Por isso
prepara-te! Estuda, diverte-se e acredita: BMC fixe! :D

Joana Marques

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 Bloco II Genes, Genoma,
Engenharia Gentica e
Medicamentos Recombinantes

Estrutura do DNA
Do ponto de vista qumico, o DNA constitudo por duas cadeias polinucleotdicas.

Cada nucletido constitudo por trs componentes: um grupo fosfato, uma pentose
(desoxirribose) e uma base azotada (A, T, G e C). Os nucletidos ligam-se entre si atravs de ligaes
fosfodister, que se estabelece entre o grupo fosfato (carbono 5) e a pentose (carbono 3), repetindo-se
sempre esta ligao no sentido 53. As extremidades podem ser distinguidas como 3 (grupo hidroxilo da
pentose) e 5 (fosfato).

O modo como os nucletidos se ligam d cadeia de DNA polaridade: todas as ligaes se fazem
segundo a mesma orientao. As duas cadeias polinucleotdicas esto unidas por pontes de hidrognio que
se estabelecem entre as bases azotadas (que se encontram no centro da hlice). Estas so anti-paralelas,
ou seja, orientam-se com polaridade oposta, permitindo a formao da dupla hlice. Esta conformao
energeticamente favorvel: uma vez que as bases azotadas so mais hidrfobas, o enrolamento da
molcula ir proteger o seu ncleo do contacto com a gua.

Genoma
O genoma humano refere-se sequncia de nucletidos completa presente nos 24 cromossomas
(22 autossomas e 2 sexuais). constitudo por cerca de 3,2x109 nucletidos, mas apenas uma pequena
fraco (2%) composta por exes e zonas reguladoras.

Elementos genticos:

Sequncias nicas Sequncias repetidas

Sequncias Elementos genticos mveis Repeties Duplicao de

Genes
reguladoras simples segmentos

Retro-
Intres Exes LINE's SINE's Transposes
transposes

O genoma humano muito grande. Este facto permite, por um lado, proteger as partes
codificantes e reguladoras do genoma de serem afectadas por mutaes que provoquem a perca de
funcionalidade. Por outro lado, a existncia de vrias sequncias repetitivas permite que ocorram
mutaes nessas sequncias com aumento da variabilidade gentica que est na base da evoluo (as
vrias sequncias repetidas rearranjam-se e podem gerar protenas com novas caractersticas mais
adaptadas a mudanas do meio sem se perderem funes das protenas actuais).

3
Produo de Protenas por Engenharia Gentica
Os genes so pores do DNA que codificam informao que vai ser traduzida em protenas, que
iro desempenhar diversas funes no organismo.

1. O primeiro passo para produzir protenas por engenharia gentica obter por transcrever o
RNA que codifica a protena a ser produzida.

O RNA um polmero de nucletidos linear, unidos por ligaes fosfodister. Difere do DNA na ose
utilizada (ribose) e contm a base azotada uracilo no lugar da timina. So capazes de possuir formas
que permitem desempenhar funes importantes para a clula.

2. De seguida, pela utilizao da transcriptase reversa vai ser possvel obter uma poro de DNA que
possui apenas regies codificantes da protena. Esta poro de DNA vai chamar-se cDNA e vai ser
seccionada nas extremidades por nucleases, geralmente enzimas de restrio .

As enzimas de restrio so capazes de quebrar as ligaes

fosfodister entre dois nucletidos. Estas localizam sequncias
especficas de 4 a 8 nucletidos com simetria reversa.

3. A mesma vai ser utilizada para seccionar um vector , de modo a introduzir o cDNA no mesmo,
utilizando ligases para unir os fragmentos.

Contm uma origem de replicao, que lhe permite replicar-

se independentemente; possui uma zona que pode ser
reconhecida por vrias enzimas de restrio distintas.
4. O vector introduzido na clula hospedeira (tratam-se as bactrias com clcio forma de fazer o DNA
entrar na clula).
5. O vector multiplica-se, produzindo inmeras cpias idnticas.
6. Seleco das bactrias com plasmdeo por recurso a um antibitico (nos plasmdeo est presente um
gene com resistncia a antibitico).
7. Ocorre a produo de protenas por transcrio do DNA para RNA que posteriormente traduzido.

Transcrio
Todo o RNA da clula produzido atravs da transcrio.

Em Procariotas
1. As cadeias de DNA so percorridas pela RNA polimerase. Ao reconhecer o local do promotor (capaz de
efectuar o reconhecimento em forma de cadeia dupla e para o qual tem afinidade) a dupla hlice aberta.
2. Uma das cadeias de DNA ir ser utilizada como molde para a sntese de RNA. [A escolha da cadeia
depende do promotor: este assimtrico, induzindo a direco que a DNA polimerase deve tomar. Para alm disso,
verifica-se que a RNA polimerase estabelece ligaes com as duas cadeias, quela que se liga de forma mais forte
fica bloqueada, sendo utilizada a outra como molde].
3. So adicionados ribonucletidos por complementaridade de bases alongando a cadeia de RNA (de
53). Os nucletidos ligam-se entre si covalentemente, reaco catalisada pela RNA polimerase.

4
4. O RNA no fica ligado cadeia de DNA. medida que os ribonucletidos so adicionados,
desprendem-se da cadeia de DNA e reforma-se a estrutura em hlice.
5. Quando a RNA polimerase encontra o sinal terminal esta solta-se, bem como toda a cadeia de RNA.

Em Eucariotas
Nem todas as protenas podem ser produzidas em clulas procariotas.

Em clulas eucariticas existem trs tipos de RNA polimerase que so responsveis pela
transcrio de diferentes tipos de RNA.
A RNA polimerase eucariota necessita da presena de protenas acessrias que se ligam aos
promotores e permitem a iniciao da transcrio (factores de transcrio).
Os mecanismos que controlam a transcrio so mais complexos: os genes so separados entre
si por mais de 100 000 nucletidos, permitindo a existncia de vrias sequncias reguladoras.
Tem em considerao a compresso dos nucletidos no nucleossoma.
O promotor eucariota designado por TATA box.
A transcrio ocorre dentro do ncleo e, por isso, necessrio que o RNA saia pelos poros
nucleares. A sada do ncleo depende do reconhecimento de protenas ligadas aos sinais que surgem no
RNA atravs dos passos finais, transformando-o em mRNA:
Capping modificao da extremidade 5. Adiciona-se um nucletido de guanina ligada a
um grupo metilo. Ocorre quando a cadeia tem cerca de 25 nucletidos.
Poliadenilizao modificao da extremidade 3. Uma enzima corta a extremidade da
cadeia numa determinada sequncia; outra enzima adiciona uma cadeia de adeninas
repetida (cadeia de poli-A).
Splicing corresponde remoo dos intres da cadeia sintetizada e unio dos exes. A
identificao dos intres feita por sequncias curtas de nucletidos que
se encontram no ou perto dos intres (iguais em todos os intres da
clula). Ocorre por interveno de snRNA em conjunto com outras
protenas, que reconhecem as ligaes intro-exo forma o
spliceossoma .
Verifica-se que existem trs sequncias importantes para a ocorrncia do
splicing. Existe uma adenina que reage com a extremidade 5 do intro
(estabelece ligao covalente) formando um anel. Este anel removido,
libertando a extremidade 3 do exo, a qual se vai unir ao exo seguinte.
Todos estes acontecimentos so promovidos pelos conjuntos formado
pelos snRNAs e protenas.
Existem zonas em torno dos locais especficos de reconhecimento do
splicing que tambm vo influenciar a ligao dos snRNAs.

Controlo da Transcrio
O controlo da produo de protenas pode ser feito em vrias etapas que vo do DNA protena:

Quando e quo frequente um gene transcrito.

Como o RNA transcrito spliced ou processado;
Escolhendo qual mRNA sai do ncleo;

5
 Seleccionando qual mRNA degradado no citosol;
Seleccionando quais molculas de mRNA so traduzidas;
Activando ou inactivando protenas depois de terem sido produzidas.

O controlo da expresso gentica normalmente efectuado ao nvel da transcrio. Isto possvel

pela existncia de sequncias de DNA reguladoras operador - s quais possvel a ligao de protenas
chamadas reguladoras da transcriptase - regulador. Diferentes protenas reconhecem sequncias
diferentes de nucletidos e por isso ligam-se a diferentes zonas do DNA (formam ligaes por pontes de
hidrognio, inicas ou interaces hidrofbicas que no quebram as ligaes entre as duas cadeias de DNA)
regulando a expresso de genes distintos.

Compreenda-se que, no que diz respeito ao controlo da expresso gentica nos procariotas, uma
poro do promotor o operador. Assim, quando o repressor se liga ao operador, a transcrio do gene
impedida, j que a RNA polimerase no se consegue ligar ao promotor.

Os reguladores so protenas alostricas:

Activador: na sua forma activa promove a transcrio do gene. Neste caso, apenas quando
o regulador est ligado na cadeia possvel RNA polimerase ligar-se e transcrever. A zona
de ligao imediatamente antes do promotor.
Repressor: na sua forma activa (com um substrato ligado ao centro alostrico) reprime a
transcrio do gene. A zona de ligao no meio do promotor.

O opero LAC (nos procariotas) controlado por um nico promotor. A transcrio deste opero
controlada por um repressor LAC (activo na presena de glicose) e um activador CAP (activo na presena de
lactose). A expresso deste opero responsvel pela produo da -glicosidase (enzima que degrada a
lactose em glicose) e s ocorre na presena de lactose (activador CAP activo) e ausncia de glicose
(repressor LAC inactivo).

Este tema ser aprofundado no Bloco IX, no que diz respeito ao controlo em clulas eucariotas.

Traduo
A traduo no corresponde a uma correspondncia directa entre nucletidos e aminocidos. Cada
conjunto de 3 nucletidos corresponde a um aminocido, de acordo com o cdigo gentico .

universal para todos os organismos.

redundante (h aminocidos codificados por codes diferentes).
No ambguo (um codo codifica apenas um aminocido).

Para a formao da protena, existe um RNA intermedirio que faz a ligao entre os codes e os
aminocidos. Esta cadeia de RNA, o tRNA, adquire uma estrutura tridimensional em forma de trevo, por
formao de ligaes de complementaridade entre vrias pores da cadeia. Nesta forma adquirem-se
duas pores no ligantes:
Anticodo 3 nucletidos complementares do mRNA.
Brao de aceitao de aminocidos - regio da estrutura em cadeia simples na extremidade
3 onde se liga o aminocido correspondente. A reaco catalisada pelo enzima

6
 aminoacil-tRNA sistetase que efectua a ligao covalente do aminocido cadeia do tRNA.
Existe um enzima especfico para cada um dos 20 aminocidos.

A traduo necessita da utilizao de ribossomas (formado por 50 protenas e cadeias de rRNA que
se juntam numa conformao muito compacta): possui uma subunidade menor que faz a
correspondncia entre o tRNA e o codo do mRNA: possui uma zona para a ligao ao mRNA e trs locais
para a monitorizao da ligao dos tRNA (A, P e E) [O tRNA liga-se sempre no local A; estabelece ligao com o
aminocido que se encontra ligado ao tRNA do local P; depois de estabelecer ligao com o aminocido seguinte
ejectado ao passar para o local E]; a subunidade maior que catalisa a formao de ligaes peptdicas entre
os aminocidos.

Os codes de iniciao e stop indicam o incio e final da traduo:

A traduo inicia-se com o codo AUG, o qual determina a janela de leitura da cadeia. O tRNA
correspondente metionina ligado subunidade menor e percorrem a cadeia de mRNA at encontrarem
este codo. Nesta altura, a subunidade maior liga-se a estas.
A traduo termina com o aparecimento de um dos codes stop, que, no sendo reconhecidos
por qualquer tRNA, no adicionado mais nenhum aminocido sendo dada a ordem para terminar a
traduo.

Quando termina a traduo, a cadeia peptdica libertada no citosol e o ribossoma dissocia-se nas
suas duas subunidades.

Por cada traduo existem duas regies no traduzidas (UTR): uma na extremidade 5, desde o
nucletido +1 at ao codo de iniciao e outra na extremidade 3, desde o codo stop at cadeia poli-A.

Procariotas vs. Eucariotas

O mecanismo de seleccionar o codo de iniciao diferente entre eucariotas e procariotas:
Os ribossomas eucariotas ligam-se cadeia de mRNA na extremidade 5, uma vez que
reconhecem o cap como local para ligao. A subunidade menor, ligada com o tRNA de metionina,
percorrem a cadeia at surgir o codo AUG.
Os ribossomas procariotas ligam-se a sequncias de 6 nucletidos que antecedem o codo AUG
Shine Dalgarno . Assim, estes tm a capacidade de se ligar directamente a um codo de iniciao (que
seja precedido pela sequncia de nucletidos especfica) mesmo que este se encontre no meio da cadeia.
Isto ocorre porque o mRNA bacteriano policistrnico, ou seja, vrias protenas so codificadas por um
mesmo mRNA.

Muitos procariotas no so capazes de produzir algumas protenas devido s alteraes

ps-traducionais (maturao das protenas) que estas necessitam:
Estruturais: os procariotas no possuem chaperones (seguram a cadeia polipeptdica para que
no final a possam ajudar a dobrar de forma apropriada)
Modificaes covalentes: fosforilaes
Ligao de co-factores
Associao a outras protenas.

A compreenso da traduo nos eucariotas ser um pouco mais aprofundada no Bloco III, uma vez
que se fala de membranas.

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 Bloco III Membranas e
Compartimentos Intracelulares

Protenas e Compartimentos Intracelulares

As clulas eucariotas possuem sistemas de membranas internas com diferentes origens:
Invaginaes da membrana plasmtica primitiva membrana nuclear, retculo
endoplasmtico, complexo de Golgi, endossomas e lisossomas.
Simbiose com outras clulas fagocitadas mitocndrias e cloroplastos tm origem em
clulas procariotas aerbias e fotossintticas, respectivamente (possuem DNA prprio e
duas membranas)

As protenas que cada organelo recebe so distintas, dependendo da funo que necessrio
realizar. O interior do ncleo, as mitocndrias e os cloroplastos recebem as protenas directamente do
citosol, onde so formadas. O Complexo de Golgi, os endossomas, os lisossomas e as membranas nuclear e
plasmtica recebem as protenas indirectamente via retculo endoplasmtico que o centro de sntese de
lpidos (RE liso) e de protenas (RE rugoso).

A traduo inicia-se sempre no citosol da clula. O destino da protena depende da sequncia de

aminocidos da mesma que poder conter um sorting signal que envia a protena para onde esta
necessria.

A traduo realiza-se
Sem sorting signal
completamente no citosol

Entra no ncleo
Ncleo atravs dos poros
nucleares (1)
A traduo
termina no citosol As protenas
Mitocndrias e atravessam ambas as
Cloroplastos membranas dos
Com sorting signal organelos (2)

Intramembranares Ficam no RER

A traduo Transmembranares
termina no RER (3) (possuem zonas
hidrofbicas) Complexo de Golgi (4)

Vesculas de
transporte (5)

Endossomas Membrana

Lisossomas Nuclear

Plasmtica

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 Como possvel verificar, a traduo nos eucariotas est intimamente relacionada com os
organelos para os quais as protenas se dirigem.

Protenas Nucleares (1)

A entrada das protenas no ncleo feita atravs dos poros nucleares, nos quais se localizam
protenas que fazem o reconhecimento do sinal. Esta entrada feita custa da hidrlise de GTP, o qual
permite direccionar o transporte.

Protenas de Mitocndrias e Cloroplastos (2)

A entrada em mitocndrias e cloroplastos feita em locais que as membranas, interna e externa,
esto em contacto, permitindo atravessar as duas membranas simultaneamente. Para atravessar a
membrana a protena desdobrada, retomando a sua forma (auxiliada pela actuao de chaperones) no
interior do organelo. O sinal removido.

Protenas sintetizadas no RER (3)

Quando o sinal indica que a sntese ser concluda no RER, a SRP (signal-recognition particle) liga-se
a este sinal e impede que a traduo continue. Esta SRP ir ligar-se ao seu receptor localizado na
membrana do RER. Desta ligao resulta
a libertao da SRP e o recomeo da
sntese da protena que, enquanto
traduzida vai entrando para o lmen do
RER pelo canal de translocao.

Se a protena intramembranar,
ou solvel, entra completamente para o
lmen do RER. O sinal clivado e a
protena poder ser transportada por vesculas de transporte para outros organelos.

A protena tambm poder ser

transmembranar, necessitando de zonas
hidrofbicas que estabelecem ligaes com
lpidos da membrana conformao em
hlice-. Quando estas zonas se ligam ao
canal de translocao, pra a entrada da
protena no RER e continua a sua sntese no
citosol. O aparecimento de mais zonas
hidrofbicas far com que a protena
atravesse a membrana mais vezes. Nestes
casos os sinais no so clivados.

Ainda no RER podem ocorrer modificaes ao nvel das protenas:

Conformacionais: a presena de chaperones fundamental para que as protenas adquiram

uma conformao apropriada.
Formao de ligaes bissulfido: uma reaco catalisada por enzimas presentes no lmen do
RER em que ocorre oxidao de pares de cistena. Isto vai estabilizar a estrutura das protenas.
Formao de glicoprotenas: ocorre a transferncia de um oligossacrido (ligado a um dolichol
da membrana) para um aminocido de asparagina que se encontra integrado numa sequncia especfica de
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aminocidos, formando uma ligao covalente. A formao de glicoprotenas importante uma vez que o
oligossacrido pode impedir a degradao da protena ou funcionar como guia para que a protena seja
integrada na vescula de transporte adequada ao seu destino.

Algumas protenas (intra ou transmembranares) permanecem no RER, onde so necessrias para

desempenhar as suas funes. Outras, saem do RER por vesculas que se formam na membrana e vo at
ao complexo de Golgi, fundindo na parte cis do complexo.

Modificao de Protenas no Complexo de Golgi (4)

A passagem no Complexo de Golgi vai favorecer a ocorrncia de mais mudanas ao nvel das
glicoprotenas. No fundo, estas vo passando de uma cisterna para a seguinte encontrando vrias enzimas
em cada uma delas que vo provocando mudanas graduais e ordenadas at se atingir a protena
perfeitamente maturada.

Vesculas de Transporte (5)

As vesculas de transporte formam-se continuamente na parte trans do complexo de Golgi, tendo
estas vrios destinos:

Vesculas secretoras:
Vesculas de secreo constitutiva formam-se e fundem-se de forma contnua com a
membrana plasmtica.
Vesculas de secreo regulada so acumuladas protenas especficas nestas vesculas.
Estas localizam-se junto membrana e fundem-se com a mesma aps estmulos
especficos.
Endossomas:
Lisossomas (vesculas de digesto)

Doena de Gaucher
A doena de Gaucher deve-se falta da produo da enzima -glicocerebrosidase. Na ausncia da
mesma verifica-se a incapacidade de destruir membranas, nomeadamente, glicolpidos.

O que ocorre a acumulao que todas as vesculas de endocitose e autofagia no interior das
clulas, uma vez que estas nunca so digeridas. Assim, uma das reaces mais evidentes o aumento do
bao e fgado (rgos responsveis pela reciclagem do sangue) uma vez que todos os glbulos vermelhos
(composio maioritria so membranas), que j no so funcionais, vo ser fagocitados por macrfagos e
acumulados em vesculas sem ser possvel que ocorra a sua digesto. Para alm disso, verifica-se o
aumento do tamanho das clulas globalmente, devido acumulao de vesculas no seu interior. de
referir que o tamanho dos lisossomas dentro de uma mesma clula ser equilibrado j que os lisossomas
no tm especificidade [dentro de todos os lisossomas haver aproximadamente as mesmas enzimas, para
degradar produtos variados].

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 Bloco IV A origem da Variao Gentica

Replicao do DNA
A replicao ocorre segundo a hiptese semiconservativa, na qual cada cadeia de DNA serve de
molde sntese da nova cadeia [Se tivermos uma cadeia S e outra S emparelhadas, significa que a cadeia S servir
de molde formao de uma cadeia S e a cadeia S a uma cadeia S]. Assim, sempre conservada uma cadeia de
DNA me na dupla cadeia da macromolcula filha.

A replicao inicia-se na origem de replicao , uma sequncia de nucletidos maioritariamente

constitudos por bases A e T (justificado pela existncia de menos pontes de hidrognio entre ambas). Este
local aberto por protenas iniciadoras que quebram as ligaes por pontes de hidrognio
(individualmente so fracas, no envolvendo o gasto de muita energia).

A formao de novas cadeias de DNA d-se ao nvel da forquilha de replicao (ocorre a

separao das duas cadeias originais e sntese das cadeias novas usando as originais como molde). Existem
sempre duas forquilhas de replicao para cada origem que se dirigem em direces opostas
bidireccional.

Ao nvel desta forquilha temos que reconhecer a presena da mquina de replicao, um conjunto
de vrias protenas que permitem a replicao do DNA. Este complexo constitudo por:

DNA primase responsvel pela colocao de primers (com nucletidos de RNA).

DNA polimerase catalisa a formao de ligaes fosfodister entre os nucletidos.
tambm responsvel pela deteco de erros na cadeia de DNA enquanto esta se est a
formar.
DNA helicase responsvel por separar as duas cadeias de DNA, utilizando a energia da
hidrlise do ATP.
Single-strand binding proteins mantm a cadeia simples alongada.
Sliding clamp mantm a polimerase ligada cadeia molde (necessria uma na transcrio
da cadeia leadind; necessria uma por cada fragmento de Okasaki).

Para que a sntese de novas cadeias se inicie necessria a ligao de um

primer de RNA cadeia de DNA, uma vez que a DNA polimerase no capaz de
sintetizar sem a pr-existncia de uma dupla cadeia. Este primer colocado por
uma DNA primase.

Dependendo do sentido da cadeia de DNA que est a ser sintetizada

distinguem-se:
Cadeia leading (lder) sintetizada de forma contnua. Necessita
apenas de um primer inicial. A DNA polimerase junta nucletidos no mesmo
sentido e catalisa a formao de ligaes fosfodister entre os nucletidos.
Cadeia lagging sintetizada de forma descontnua, uma vez que o
crescimento da cadeia tem que ser feito no sentido 53. Assim, sintetizada em
pequenos fragmentos, custa de movimentos de retrocedimento da DNA

11
polimerase. Cada um destes fragmentos chama-se fragmento de Okasaki e todos eles necessitam de um
primer para iniciar a sntese de DNA.
No entanto, para produzir uma cadeia contnua de DNA so necessrios trs enzimas adicionais:
uma nuclease que remove o fragmento de RNA, uma polimerase de reparao para fazer a substituio
por desoxinucletidos e uma ligase para unir os fragmentos de DNA.
Visto que esta cadeia feita em pequenos fragmentos, verifica-se que no final de cada
replicao a cadeia lagging encurtada. Este fenmeno de facto verifica-se em todas as clulas somticas
do organismo. H, no entanto um mecanismo de solucionar este problema durante a fase embrionria e
em clulas germinais. O que ocorre a introduo de sequncias especficas no final das cadeias
(telmeros) pela enzima telomerase. Esta utiliza uma sequncia de RNA, que parte do prprio enzima,
para a adicionar mltiplas vezes. Estas zonas funcionam como molde e permitem aumentar o comprimento
da cadeia lagging.
[ fundamental compreender a importncia do encurtamento dos telmeros ao longo da vida. Na
verdade, este mecanismo de extrema importncia para a boa vida da clula, uma vez que permite determinar o
nmero de vezes que a clula se poder dividir, o seu tempo de vida, no fundo. Esta condicionante boa, uma vez que
ao condicionar o nmero de divises da clula, controla-se o nmero de mutaes que so acumuladas, havendo
menos probabilidade de serem afectadas zonas codificantes do genoma. ]

Reparao do DNA
Erros durante a replicao - reparao pela DNA polimerase
S catalisa a ligao fosfodister entre nucletidos se este for complementar ao da cadeia
molde.
Quando comete um erro capaz de reparar por proofreading. Isto significa que um
nucletido s adicionado se o anterior for o correcto. Se no for, o nucletido retirado
(uma nuclease quebra a ligao) e substitudo por outro. Esta funo est intimamente
relacionada com a necessidade da dupla cadeia para sintetizar o DNA, uma vez que os
erros so detectados atravs das alteraes da espessura da cadeia.
Erros na colocao de base (verificao feita aps a replicao concluda): as bases que so
incorrectas so removidas por uma nuclease; a DNA polimerase de reparao substitui os nucletidos e
efectua o proofreading; a ligase une os nucletidos.
Mutaes qumicas:
Depurinao: perda espontnea de bases pricas (A e G).
Desaminao: perda do grupo amina da citosina, produzindo uracilo.
Devido radiao UV: as bases de duas timinas seguidas unem-se formando um dmero
de timina (ligao covalente).
Quebra das duas cadeias de DNA:
Non-homologous end-joining as duas cadeias so simplesmente ligadas, havendo perda
de informao.
Recombinao homloga as extremidades das cadeias so digeridas por nucleases,
obtendo-se uma extremidade 5 em cadeia simples. A cadeia simples vai formar um ponto
de contacto com uma molcula de DNA homloga, utilizando-a como molde sntese do
DNA (utiliza DNA polimerase de reparao). A cadeia sintetizada e vai unir-se a outro
fragmento, que forma a sua cadeia por complementaridade. No final uma ligase une as
cadeias.

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 Produo de Variabilidade Gentica
Mutao num nico gene:
Alterao de uma base
Inseres
Deleces
Duplicaes
Vo alterar a actividade ou estabilidade da protena; modificam a localizao da protena
na clula; altera a interaco com outras protenas.
Mutaes nas sequncias reguladoras
Duplicao de genes (pequenas fraces, gene ou todo o genoma)
Permite adquirir novas mutaes mantendo a protena anterior.
Pode aumentar simplesmente a produo.
Rearranjo de exes
Genes existentes so divididos e rearranjados, colocando em contacto sequncias
afastadas.
Transferncia horizontal de genes
Pores de DNA podem ser transferidos de uma clula para outra.

Mutaes
As mutaes tm maior probabilidade de ocorrer com o aumento da idade. De facto, ao longo da
vida, as clulas vo ficando com alteraes nos seus genomas e acumulando gradualmente cada erro, cada
mutao que vai ocorrendo.

O facto do ser humano ter um genoma grande possibilita que estas mutaes atinjam pores no
codificantes. Mesmo que um gene seja atingido, possvel que a mutao seja silenciosa ou redundante,
no alterando a funcionalidade da protena. H ainda a possibilidade que a mutao seja de tal modo grave
que a clula morra. Apesar destas duas hipteses pode tambm ocorrer uma modificao do genoma em
que h a afectao de uma sequncia codificante, com perda da funcionalidade relacionada mas no
coincide a morte celular. Nestes casos, as mutaes podem atingir:

Genes controladores da reparao do DNA (a mutao mais grave, pois permite que a
probabilidade de mutaes noutros genes ocorra)
Genes que controlam a apoptose celular
Genes que controlam a diviso celular
Genes inibidores da telomerase
Promotores e operadores
Genes que controlam protenas

Estas mutaes so consideradas as mais importantes na propagao de um cancro.

As mutaes podem ser encaradas tambm como uma dificuldade ao tratamento de doenas: o
facto do genoma de um vrus estar em constante mudana (a RNA transcriptase introduz muitos erros
quando realiza a transcriptase reversa) faz com que a anti-viral perca rapidamente o efeito, pois j no lida
com a mesma estirpe viral.

O conhecimento da sequncia do vrus que se pretende tratar permite fabricar o medicamento que
possa ser mais eficaz no tratamento da doena.
13
PCR/Sequenciao/Electroforese (TP e P)
O conhecimento do genoma possvel atravs de vrias tcnicas que foram desenvolvidas e
permitem o seu estudo.

Em primeiro lugar a PCR fundamental uma vez que permite, a partir de um fragmento de DNA
obter vrios fragmentos iguais entre si. As vrias tcnicas que se baseiam na anlise do DNA utilizam, numa
primeira instncia a PCR, pois necessria uma grande quantidade de DNA para serem obtidos bons
resultados. Baseia-se na capacidade da DNA polimerase em sintetizar cadeias de DNA a partir de uma
cadeia molde.

1. Colocam-se na preparao a cadeia molde, DNA polimerase, dois primers e nucletidos.

Os dois primers (cerca de 23 nucletidos, o que permite serem nicos no genoma) vo ligar
extremidade 3 de cada uma das cadeias. Assim, um igual poro inicial da cadeia dada (forward)
e o outro complementar dos nucletidos do final da cadeia, lido no sentido 53 (reverse) [ lido
no sentido inverso, portanto].

2. A temperatura elevada at cerca de 90OC provocando a desnaturao da dupla cadeia de DNA em

duas cadeias simples.
3. Reduz-se a temperatura permitindo a hibridao dos primers por complementaridade nas
extremidades opostas da sequncia em alvo.
4. A temperatura ligeiramente elevada e a DNA polimerase sintetiza o DNA no sentido 53 por
extenso a partir de cada primer.
5. Promovem-se ciclos sucessivos dos passos 2, 3 e 4 obtendo-se uma ampliao exponencial da
sequncia inicial de interesse.

Existe uma variante da tcnica de PCR, a RT-PCR em que so analisados fragmentos de RNA. Com
esta tcnica existe apenas um passo anterior aos descritos para a PCR: ocorre transcriptase reversa
obtendo-se cDNA, que ento amplificado. Esta tcnica muitas vezes utilizada para detectar a expresso
gnica de clulas (apenas o RNA presente transcrito, correspondendo aos genes activados).

A anlise do DNA , normalmente, realizada por electroforese. Esta tcnica baseia-se nas
caractersticas elctricas da cadeia de DNA para separar vrios fragmentos com diferentes comprimentos.
O DNA colocado num gel (agarose ou poliacrilamida diferem na resoluo obtida) que percorrido por
corrente elctrica. Deste modo, o DNA, que possui caractersticas negativas, ir migrar em direco ao
nodo. Na anlise de uma electroforese verifica-se que os fragmentos de maior comprimento se localizam
mais perto do ctodo e os menores migram mais e encontram-se mais perto do nodo.

Ainda com recurso electroforese poder efectuar-se a sequenciao de um fragmento de DNA, ou

seja, determinar a sequncia de nucletidos de determinado fragmento.

1. Coloca-se a cadeia de DNA a ser sequenciada, um nico primer (conhecido), DNA polimerase,
nucletidos e didNTP (nucletidos modificados que param a elongao da cadeia) numa mesma soluo.
2. As cadeias de DNA so desnaturadas a altas temperaturas.
3. Diminui-se a temperatura, o que permite a ligao do primer e a sntese do DNA atravs da DNA
polimerase.

14
4. Os didNTP so introduzidos aleatoriamente, em diferentes locais da cadeia, ao repetir vrias vezes os
primeiros passos.
5. O resultado depois analisado em gel de poliacrilamida (sendo para isso necessria a utilizao de 4
tubos de reaco nos quais se colocam diferentes didNTP) ou em fluorogramas (utilizam-se cores diferentes
para cada um dos didNTP).

15
 Bloco V Mecanismos moleculares e
Gerao de diversidade Linfocitria
O sistema imunitrio de importncia extrema para o organismo. De facto, quando um indivduo
sofre da ausncia de um sistema imunitrio eficiente, no capaz de resistir a qualquer infeco.

As clulas hematopoiticas esto envolvidas na origem das clulas do sangue, apesar de nem todas
pertencerem ao sistema imunitrio (como eritrcitos e megatrcitos). Os linfcitos adquirem uma
importncia especial devido sua especificidade: possuem receptores especficos para o reconhecimento
de determinada molcula.

Linfcitos B Linfcitos T
Molculas de regio varivel (VRM) possuem uma sequncia no montona.

Heterodmeros: cadeia leve e cadeia pesada. A

Heterodmeros: emparelhamento - e -.
estrutura duplicada.

Dois locais de ligao a protenas (cada brao do Y). Um local de reconhecimento.

Responsvel pela imunidade humoral, mediada

pelos humores (fluidos em circulao) Envolvidos no reconhecimento de clulas e das
molculas que elas expressam. Reconhece clulas
Produo de anticorpos que so secretados, cancergenas, infectadas por vrus, etc.
ligando-se a protenas tambm em circulao.
Interaco protena (anticorpo) protena. Interaco clula clula.
BCR (B cell receptor) TCR (T cell receptor)
Os locais de ligao ao antignio esto ligados
Anticorpos so secretados.
membrana.

Reconhecem o exterior das molculas em circulao. Com base nestas informaes podem saber
informaes sobre o que se encontra no interior da clula.

16
 As BCR e TCR possuem:
Regio constante, montona (azul) que deriva de uma sequncia de DNA fixa. So a base
estrutural.
Regio varivel (vermelha) formada por recombinao somtica/rearranjo VDJ e adio de
nucletidos. So os locais de ligao ao antignio, de reconhecimento daquilo para o qual estas molculas
vo ser especficas.

O sistema imunitrio universal, completo e capaz de reagir perante todos os corpos estranhos.
Verifica-se que h sempre uma resposta a uma infeco, mesmo que no seja completamente eficaz
(Paradoxo de Landsteiner). Isto significa que perante uma infeco o organismo j possui meios para
combat-la (reservas). Constitui, efectivamente uma vantagem evolutiva: antes da infeco j existem
anticorpos no organismo que a combatam, uma vez que a existncia desta diversidade aleatria vai
possibilitar que haja imunidade contra infeces que surgiro amanh.

Uma vez que este processo aleatrio, poder ocorrer a criao de anticorpos ou linfcitos contra
agentes infecciosos que ataquem clulas do prprio organismo. Nestas situaes ocorrem doenas
auto-imunes.

Gerao de diversidade
Verifica-se que existem cerca de 1012 VRMs diferentes. Sabendo que apenas existem cerca de 105
genes codificados no genoma humano, como se poderia alcanar uma diversidade to grande? A produo
das VRMs ter que estar ligada a um processo especial para a sua formao.

Na verdade, a gnese destas protenas no est contidas num gene normal, ou seja, no
corresponde transcrio e traduo, onde existe um promotor, a ligao da RNA polimerase, etc. Assim
sendo, a sequncia dos anticorpos no herdada dos progenitores. O que herdado ser o mecanismo
(enzimtico) para a produo dos anticorpos, este sim, corresponder a transcrio e traduo de um gene,
com origem de enzimas funcionais.

Recombinao Somtica/Rearranjo VDJ

O primeiro mecanismo utilizado ser
o Rearranjo VDJ, ilustrado ao lado. No fundo
verifica-se que so escolhidos 3 segmentos
de cada grupo - V, D e J -, os quais so
combinados para originar um anticorpo
especfico. Ser esta sequncia que vai
formar o gene de um determinado anticorpo
(por exemplo).

Este mecanismo de corte e costura

do DNA levado a cabo pelas RAG , as quais
so expressas apenas nos linfcitos. Este
facto de extrema importncia, uma vez que
seria extremamente grave que todas as
clulas do organismo realizassem alteraes aleatrias no seu genoma.

17
 Os linfcitos B e T tm a necessidade de modificar o seu DNA de modo a passar a expressar o seu
receptor especfico e assim se diferenciarem. A nica forma de o fazerem ser modificar definitivamente o
seu DNA, de modo que fragmentos distncia fiquem justapostos e possam formar um gene funcional
codificante do receptor.

A enzima responsvel
por este mecanismo ser uma
endonuclease, a RAG
(recombination activated gene).
Sero necessrias, de facto dois
tipos de RAG: a RAG-1 que
catalisa a juno dos fragmentos
dos grupos D e J e a RAG-2 que
permite a juno dos dois
ltimos com o fragmento do
grupo V.

A expresso das
endonucleases RAG so
exclusivas dos linfcitos B e T,
bem como dos seus precursores na medula ssea. Em todas as outras clulas o locus da RAG est
completamente fechado, no sendo expresso de todo. Mesmo nos linfcitos B e T s est activa durante a
formao dos receptores [uma vez o receptor chegado membrana envia uma mensagem para o ncleo
para indicar que est funcional e que a expresso de RAG deve ser interrompida].

No entanto h que assegurar que a aco da RAG apenas se verificar nos locais do V, D e J, onde a
sua actividade til, devendo apenas actuar nos locais da BCR e TCR, para linfcitos B e T respectivamente.
O que ocorre que nesse locus gentico, os fragmentos vo possuir sequncias especficas que indicam o
local de aco das RAG, designada RSS (recombinational signal sequences).

Permite a obteno de cerca de 106 molculas diferentes.

Insero aleatria de nucletidos

Permite amplificar a diversidade criada pela recombinao somtica. Consiste na insero aleatria
de nucletidos nos locais de juno dos segmentos gnicos. Este processo vai ser catalisado pela enzima
TdT (terminal deoxynucleotide tranferase), cuja funo ser inserir nucletidos aleatoriamente entre os
fragmentos recombinados no rearranjo VDJ.

Vai permitir a formao de 1012 combinaes diferentes, que permitem reconhecer uma grande
variedade de antignios.

Resumindo, a gerao da diversidade advm de:

Juno de combinaes diferentes entre cadeia pesada e leve.

Recombinao somtica.
Diversidade de junes.

18
Linfcitos B
Derivam de clulas hematopoiticas estaminais, que se diferenciam na medula ssea.
Produzem anticorpos.
Caracterizadas pela expresso de BCR, os quais surgem superfcie da clula.
Configurao: quatro cadeias, duas pesadas e duas leves, sendo que as VRMs das cadeias
pesadas e so diferentes das leves. Os dois braos possuem afinidade para o mesmo antignio, sendo que
um anticorpo possibilita a ligao a dois antignios em simultneo.
Desenvolvimento: (o objectivo obter um BCR na membrana)
So formadas na medula do osso.
HSC/CLP no possui modificaes (locus original)
Pr-B iniciam a recombinao somtica (juno de D e J) na cadeia pesada. Ainda no h
nenhum gene funcional.
Pr-B a recombinao somtica da cadeia pesada est terminada. [como um
heterodmero, necessitam que se ligue uma cadeia montona leve enquanto a cadeia leve no se
encontra completa. Estabilizam o receptor. Forma de poupar energia: se a cadeia pesada no for
formada correctamente, no ser produzida a cadeia leve funciona como checkpoint]
Clulas B j possuem as cadeias leve e pesada completas. [h um novo checkpoint em que se
verifica se existe um VRM na membrana da clula]
Durante a fase pr-B e pr-B expresso o IL-7 que impede o atrofio das clulas.
dependente da expresso de RAG.
Hipermutao Somtica e mudana de classe ocorrem aps as clulas B funcionais sarem
da medula ssea. Modificam o tipo de receptor que se encontra superfcie.
Doenas:
Agammaglobulinmia no h formao de receptores. As clulas B so bloqueadas em
pr-B. Relacionado com uma mutao ligada ao cromossoma X.

Linfcitos T
Diferenciam-se no Timo (enquanto feto no fgado)
Matam alvos especficos e secretam citocinas que ajudam outras clulas do sistema imunitrio,
como macrfagos e clulas B a exercer a sua funo (enviam sinais de crescimento ou activao).
Caracteriza-se pela presena do TCR na membrana da clula.
Configurao: heterodmero ou .
Os receptores que se encontram superfcie interagem com os antignios e enviam sinais para
dentro das clulas quando acoplados protena Cd3
Desenvolvimento:
Depende da presena de Cd4 e Cd8.
fundamental a expresso de IL-7 (s se produzem rearranjos VDJ na presena dos sinais
da IL-7)
Pr-T possui apenas a cadeia . emparelhada com uma cadeia montona, dada a sua
instabilidade. Ocorre aqui o primeiro checkpoint.
T possuem o heterodmero completo e funcional.

19
Tcnicas que utilizam anticorpos (TP/P)
Para deteco de protenas:
Ensaio imunolgico: baseiam-se na ligao especfica que ocorre entre uma
imunoglobulina/antignio e a molcula que reconhece especificamente anticorpo.
ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay): detecta a presena ou quantifica um
anticorpo especfico. Neste caso, coloca-se o antignio especfico imobilizado. Se a amostra
do paciente contm o anticorpo, este vai ligar-se ao antignio. adicionado um 2
anticorpo ligado a uma enzima que permite a deteco do complexo antignio-anticorpo.
Pode ainda detectar a presena ou quantificar um antignio especfico. Assim, imobilizado
o anticorpo especfico ao qual adicionado a amostra biolgica. adicionado um 2
anticorpo ligado a uma enzima. Reflectir ento a presena e quantidade do antignio.
Western Blot: permite a deteco de um antignio especfico numa amostra biolgica com
recurso a anticorpos especficos. Neste teste aplicada a tcnica de electroforese
amostra, permitindo a separao das protenas segundo a massa molecular. As protenas
depois de separadas so transferidas para uma membrana de celulose e incubada com
anticorpos especficos que permitam a deteco de protenas especficas na membrana.
Imunohistoqumica e imunocitoqumica: determina a presena de antignios em clulas e
tecidos. Nesta tcnica as clulas ou tecidos bem preservados so incubados com a soluo
que contm um anticorpo especfico. Estes anticorpos podero estar ligados a um
fluorocromo. utilizado, por exemplo na deteco de marcadores tumorais.
Para deteco de cidos nuclecos:
Hibridao in situ: utilizada para detectar a presena de sequncias especficas de DNA e
RNA. So utilizadas sondas especficas que iro hibridar com o local que pretende ser
detectado. A sonda marcada com um marcador molecular (biotina ou digoxigenina), os
quais podem ser detectados por anticorpos especficos conjugados com um fluorocromo ou
com um enzima. Tambm podero ser utilizados marcadores fluorescentes que sero
detectados por tcnicas de FISH. A sua aplicao inclui a deteco de sequncias especficas
em cromossomas mitticos (metafsicos): localizao de genes, deteco de translocaes
e identificao de trissomias.

20
 Bloco VI Citosqueleto e Movimentao
Celular
O citosqueleto formado por uma rede complexa de filamentos. So compostos por polmeros
(molculas organizadas de forma linear numa sequncia repetitiva especfica).

So estes polmeros: filamentos de actina, microtbulos e filamentos intermdios.

Permitem clula adoptar uma grande variedade de formas, organizar os componentes do seu
interior, interagir mecanicamente com meio envolvente e possibilita movimento. Nas clulas eucariotas,
permite suportar as grandes quantidades de citoplasma. No interior da clula est envolvido no transporte
de organelos de um local para outro, segregao de cromossomas durante diviso celular.

Filamentos de Actina
So responsveis por:
Formao de microvilosidades (em clulas do intestino, por exemplo) A
Contraco celular B
Podem formar estruturas
temporrias (como as salincias
formadas na extremidade dos
fibroblastos). C
Formao do anel contrctil
necessrio citocinese. - D
Gerao de foras (relacionado com movimentos dos filamentos)
Forma da clula
Transporte intracelular
Fagocitose (filamentos possibilitam a mudana de forma)
Movimento celular
Os monmeros so a actina.
Os filamentos so enrolados, possuindo polaridade.
O crescimento dos filamentos
de actina feito por adio de actina na
extremidade positiva (preferencialmente).
Cada monmero, antes de ser adicionado,
est ligado a um ATP. Aps a ligao,
ocorre hidrlise e o monmero passa a
estar ligado a um ADP. Esta modificao
torna a ligao menos estvel, provocando
a libertao dos monmeros na
extremidade negativa.
Protenas que se ligam aos filamentos de actina:
Timiosina regula a polimerizao da actina, ao criar reservas de actina sob a forma de
monmeros.

21
 Fimbrina permite a estabilidade de filamentos de actina, colocados paralelamente entre
si.
Filamina permite formar redes de filamentos de actina cruzados.
Arp 2/3 inicia ramificaes nos filamentos de actina.
Cofilina provoca a quebra dos filamentos. Poder permitir que um gel de actina se torne
mais fludo.
Miosina protenas motoras que formam feixes contrcteis.
Integrinas e caderinas so protenas transmembranares s quais se ligam os filamentos
de actina.
A polimerizao de actina na extremidade da clula, seguida de contraco ir permitir o
movimento das clulas.
A recepo de informaes do exterior por parte de receptores ligados a GTP poder provocar
alteraes no citosqueleto.
A contraco muscular est intimamente ligada com a interaco de filamentos de actina e
miosina.

Microtbulos
Os monmeros so de dois tipos: tubulina e , formando dmeros.
As cadeias enrolam-se formando um tubo de interior oco. Crescem a partir do centrossoma, que
controla a sua formao e orientao.
As cadeias tambm possuem polaridade.
O crescimento ocorre num mecanismo semelhante ao da actina sendo que o crescimento e a
destruio ocorrem na extremidade livre. Utiliza o GTP.
Responsvel por:
Transporte intracelular: as vesculas
caminham ao longo dos microtbulos,
com gasto de ATP. So auxiliadas pelas
protenas dinenas (+-) e cinesinas
(- +)
Polaridade celular: as clulas so
diferentes nas duas extremidades (por
exemplo, nas clulas nervosas, numa
extremidade encontram-se as dentrites
e na outra o axnio; as clulas
secretoras tm o complexo de golgi
correctamente posicionado, etc)
Alinhamento do retculo endoplasmtico e complexo de Golgi.
Gerao de foras (fuso acromtico na mitose)
Movimento celular: clios, cuja funo ser movimentarem fluidos superfcie da
membrana; e flagelo que permite movimento a toda a clula. Os microtbulos organizam-
se em 9+1 dupletos.
A colchicina um medicamento que inibe a polimerizao da tubulina, impedindo assim que a
mitose ocorra.

22
 Deficincias ciliares provocam obstruo dos pulmes, infeces, assimetrias de rgos e
espermatozides sem mobilidade

Filamentos Intermdios
No existe um monmero, mas sim um conjunto de protenas que os constituem.
Formam filamentos que se enrolam sobre si mesmos e entre vrios filamentos.
So responsveis por:
Resistncia estrutural
Elasticidade
Permite suportar o stress mecnico quando uma clula alongada
Nas clulas epiteliais designa-se queratina; nas clulas musculares, do tecido conjuntivo e da glia
so vimentinas; nas clulas nervosas so neurofilamentos. Na membrana nuclear designam-se lminas
nucleares.
Os filamentos intermdios interagem com os das clulas vizinhas, atravs dos desmossomas.
Perturbaes nestes filamentos provocam doenas de pele, uma vez que as clulas so
altamente vulnerveis aco mecnica.

Junes celulares
Nome Funo
Formada por claudinas e ocludinas.
Selam a passagem de molculas entre
Junes de duas clulas vizinhas. (Muito teis no
Ocluso ou intestino, por exemplo, sem as quais a
Tight Junction aco de transporte activo seria ftil e a
composio entre os dois locais seria
uniforme.
Formada por caderinas. Liga os
filamentos de actina de uma clula aos
filamentos de clulas vizinhas (liga as
Junes de
clulas do epitlio entre si). Protege a
Adeso
clula da aco de foras mecnicas. Vai
permitir a formao de vesculas ou
invaginaes.
Formada por caderinas que se ligam a protenas que contactam directamente com os
filamentos intermdios. Permite o contacto entre os filamentos intermdios de duas
Desmossomas
clulas vizinhas (liga as clulas do epitlio entre si). Protege a clula da aco de foras
mecnicas.

Formado por integrinas que contactam com protenas que medeiam o contacto com
Hemi-
filamentos intermdios. Permite o contacto entre os filamentos intermdios e as clulas
desmossomas
da lmina basal. Faz a ligao entre o epitlio e a lmina basal.
Gap Junctions Forma canais que permitem a passagem de molculas solveis em gua e ies entre
ou Junes de clulas. (por exemplo, no corao, so fundamentais para a propagao da
Hiato despolarizao)
Adeses Focais Esto ligados matriz extracelular e esto ligadas rede de actina atravs de integrinas.

23
 Bloco VII Relao gentipo-fentipo:
Testes Genticos
Os seres vivos procariotas reproduzem-se por mitose: ocorre a replicao do DNA e as clulas filhas
possuem a mesma informao gentica que a clula que lhes deu origem.

O ser humano utiliza a reproduo

sexuada. Este tipo de reproduo vai juntar a
informao gentica de dois indivduos diferentes.
Para isso necessrio que ocorra a meiose,
atravs da qual se formam clulas haplides (com
metade da carga gentica, ou seja, apenas um
cromossoma homlogo). Estas clulas so
formadas a partir das clulas da linha germinal.
Duas clulas haplides unem-se pela fertilizao,
originando um novo indivduo diplide que
combina a informao gentica dos dois gmetas,
formando uma nova combinao de
cromossomas.

Quando pensamos em transmisso de

informao para a descendncia h que considerar
que apenas as clulas da linha germinal e a
informao que estas contm podem ser passadas
s geraes futuras. Isto significa que a ocorrncia
de mutaes no genoma de clulas somticas, que
provoquem alguma disfuno no indivduo, no ir
provocar a mesma insuficincia/incapacidade na descendncia j que esta informao no ser
transmitida. Ser apenas quando a mutao ocorrer nas clulas germinais que ser possvel de ser
transmitida para a descendncia.

Doenas Genticas
Cada clula possui vrios cromossomas. Designa-se por locus (plural loci) o local do cromossoma
onde se encontra codificado determinado gene. As vrias formas alternativas do gene designam-se por
alelos . H que ter em conta que as variantes podem ser polimrficas benignas polimorfismos ou
formas mutadas do gene que conduzam ao aparecimento de doena.

A partir da noo de diplidia, fcil compreender que um indivduos que possua dois alelos iguais
para o mesmo gene ser homozigtico para o gene X, enquanto que se forem dois alelos distintos ser
heterozigtico para o gene X.

24
 No que diz respeito s doenas genticas (Sabemos que uma doena hereditria se: Existem
antecedentes desta doena na histria familiar?), podem ser:
Doenas hereditrias autossmicas: a mutao verifica-se ao nvel dos genes que se encontram
nos cromossomas somticos. (A doena verifica-se em ambos os sexos?)
Dominante: basta que se encontre um dos alelos mutado para que haja fentipo.
Podem ocorrer duas situaes. Por um lado, o alelo mutado codifica uma protena no
funcional. Verifica-se que a produo de protenas normais apenas por um alelo, o qual no
suficiente para suportar as necessidades do organismo. Por outro lado, o alelo mutado
super-expresso com superproduo de uma protena mutada. Esta protena poder
interferir com a aco da protena saudvel, provocando o aparecimento da doena.
Recessiva (Os progenitores so saudveis e o filho afectado pela doena?):
necessrio que ambos os alelos sejam mutados para que haja fentipo. Neste caso, poder
haver diminuio da produo da protena na clula, mas a produo pelo alelo normal
mostra-se suficiente para as necessidades do organismo.
Doenas ligadas ao sexo: a mutao ocorre ao nvel dos cromossomas sexuais. Distingue-se por
afectar principalmente homens ao longo da rvore genealgica.

Doenas Lisossomais
As doenas lisossomais so provocadas por uma alterao gentica que condiciona uma deficincia
numa ou mais enzimas lisossomais o que provoca uma diminuio ou mesmo ausncia da actividade
enzimtica. Isto ir provocar a acumulao progressiva do substrato respectivo. A doena de Gaucher,
especificamente, autossmica recessiva, condicionada pela deficincia funcional da enzima
-glicoceribrosidase.

Considerando todas as doenas lisossomais (de causa gentica) que podero existir, verificam-se
mutaes ao nvel de:

Enzimas hidrolases (so especificas do interior do lisossoma). O caminho que estas percorrem
at ao lisossoma ser:

Sorting signal Vesculas com protenas

Lmen do Interior de
para entrar no transmembranares Lisossoma
RER vesculas
RER receptoras (manose 6P)

Protenas transmembranares [Sem estas, as hidrolases no so especificamente transportadas at aos

lisossomas, por no existirem receptores para elas. Na sua ausncia o transporte no especializado, verificando-se
que as enzimas que podem chegar aos lisossomas so em nmero reduzido]
Enzima que catalisa a reaco de adio do acar e fosforilao (formao da manose 6P) [O
receptor das hidrolases no funcional]
Claterinas (a sua aco envolve a formao de vesculas) no ser considerada uma doena
lisossomal porque est envolvido com a formao de todas as vesculas, no especificamente com os
lisossomas.
Rabs e SNAREs (responsveis pela fuso das vesculas com a membrana apropriada)
Transportador de ies H+ para o interior do lisossoma. [no interior do lisossoma no existem as
condies de pH ptimas ao funcionamento das hidrolases]

Assim sendo, o mesmo fentipo (disfuno dos lisossomas) pode ser provocado por gentipos
distintos.
25
 Por outro lado, as doenas podem ser sentidas em diferentes intensidades dependendo do tipo de
mutao que ocorra:

Deleces e inseres: provoca a modificao do quadro de leitura (grave, j que a estrutura da

protena totalmente modificada)
Modificao de 1 aminocido pode introduzir um codo stop.
Modificao de 1 aminocido com introduo de um aminocido com caractersticas diferentes
(aminocidos cidos vs. Bsicos; polares vs. Apolares) pode introduzir modificaes nas interaces
electrostticas, formao de pontes de hidrognio ou atraces entre aminocidos (poder apenas
diminuir a capacidade de funcionamento da protena)

H ainda que ter em considerao que a mesma mutao gentica poder dar origem a fentipos
diferentes devido existncia de polimorfismos. Ou seja, devido conjugao de pequenas variaes
genticas que individualmente permitem que o indivduo seja saudvel mas quando combinadas vo
provocar a disfuno do organismo.

Hipercolesterolmia Familiar
A hipercolesterolmia familiar uma doena gentica hereditria autossmica dominante que se
caracteriza por elevados nveis de colesterol no sangue. Estes, vo conduzir formao de depsitos de
colesterol nos vasos e possivelmente a ocorrncia de doena coronria prematura.

A presena do colesterol fundamental para o correcto funcionamento do organismo,

nomeadamente para controlar a fluidez das membranas. ainda precursor de hormonas esterides e dos
cidos biliares. Assim sendo, o nosso organismo, para alm de utilizar o colesterol obtido por via exgena,
ir tambm ele produzi-lo nas prprias clulas (os monmeros so a acetil-CoA e catalisado pela enzima
HMG-redutase).

Uma vez que o colesterol poder ser obtido atravs de duas vias, ter que existir uma comunicao
entre elas, de modo a evitar nveis de colesterol muito elevados. Esta regulao ser feita atravs da HMG
redutase. Num indivduo normal ocorre:

Ao nvel das clulas existem

Colesterol em circulao
receptores especficos que As LDL entram na clula
encontra-se nas lipoprotenas
reconhecem as apoprotenas da em vesculas endocticas
LDL.
LDL

Fundem-se com
endossomas
As LDL vo para os lisossomas As molculas de colesterol
O pH mais baixo e provoca a
separao da LDL ao receptor e so degradados so libertadas
O receptor reciclado

As enzimas HMG so A produo endgena

inibidas bloqueada

26
 Quando nos referimos a indivduos com hipercolesterolmia familiar, significa que o colesterol
obtido por via exgena no est a comunicar com a HMG redutase, no bloqueando a produo endgena.
Por norma, verificam-se mutaes ao nvel do receptor das LDL:
Na parte que fica do lado extra-celular e onde ocorre a ligao s LDL. Deste modo, no
ocorre a ligao das LDL ao seu receptor.
Na zona que fica do lado intra-celular. No fazem a ligao s adaptatinas que por sua vez
se ligam claterina. Logo, no h internalizao.

A hipercolesterolmia familiar uma doena sem tratamento. Os nveis de colesterol devem ser
regulados atravs da alimentao (reduzindo a quantidade de alimentos com colesterol) e prtica de
exerccio fsico. Se estas medidas no forem suficientes, podem ser administrados medicamentos que
controlem a colesterolmia.

Fibrose Cstica
A Fibrose Cstica uma doena hereditria, autossmica recessiva. Verifica-se que ocorre a
mutao do gene CFTR, responsvel pela codificao do canal de cloro das clulas. A mutao desta
protena transmembranar vai impedir a sada de cloro da clula, com aumento da presso osmtica.

Assim, os indivduos afectados vo sofrer alteraes especialmente ao nvel da fluidez das mucosas,
uma vez que a gua que seria necessria para conferir a fluidez necessria entra por osmose para o interior
da clula devido s altas concentraes de cloro.

Verificam-se complicaes ao nvel dos brnquios, j que no ocorre a sua drenagem normal para
eliminao de microorganismos. Consequentemente vo ocorrer vrias infeces. No tubo digestivo, a
movimentao dos alimentos ao longo do tubo no facilitada, ocorrendo obstipao. No canal
pancretico tambm se observa um muco espesso, no sendo possvel a chegada das lipases ao intestino,
no ocorrendo a emulso dos lpidos. Verificam-se fezes gordurosas. O refluxo do Na+ impedido nos
canais sudorparos, constatando-se por um sabor salgado da pele.

Huntington
uma doena gentica autossmica dominante. provocada pela adio de sequncias repetitivas
de CAG no mesmo exo vrias vezes. A existncia de um nmero excessivo dessas repeties (que
codificam o aminocido glutamina) vai provocar a produo de uma protena anormal que conduz
destruio dos neurnios.

uma doena degenerativa, irreversvel, em que os doentes, num estado avanado da doena,
apresentam problemas musculares e cognitivos.

27
 Bloco VIII Homem e Mulher que
diferenas moleculares?
A nvel cromossmico verifica-se as mulheres e os homens possuem um par sexual diferente que
vai provocar o aparecimento de diferenas morfolgicas, hormonais, etc.

Considerando que o cromossoma Y codifica cerca de 70 genes e que o cromossoma X codifica 2500
genes, ser desde logo bvio o aparecimento de caractersticas diferentes nos dois sexos. Sabemos que os
genes que se encontram no Y so especialmente direccionados para a diferenciao sexual (expresso de
protenas responsveis pela diferenciao de embries, formao de testculos, produo de testosterona).
Por seu lado, o cromossoma X ir conter vrios genes que so fundamentais para o correcto funcionamento
do organismo.

Assim sendo, como poder ser assegurado que em ambos os sexos seja produzida a mesma
quantidade de protenas? Teoricamente, a mulher, que possui 2 cromossomas X iria produzir o dobro das
protenas codificadas pelo X. No entanto, isto no se verifica. Em ambos os sexos produzida a mesma
quantidade de protenas. Isto assegurado pelo silenciamento de um dos cromossomas X da mulher. A
escolha de qual dos homlogos ser silenciado aleatria, existindo, por norma, em todos os rgos alguns
cromossomas X maternos e paternos activos, formando um mosaico gentico. Esta escolha ser feita ao
10 dia do desenvolvimento embrionrio. O que ocorre a condensao de um dos cromossomas,
assegurando a produo da quantidade correcta de protenas.

Doenas ligadas ao X
As doenas sexuais vo apresentar incidncia, principalmente no sexo masculino. Em doenas
ligadas ao Y, por serem apenas os homens que o possuem, sero exclusivas do sexo masculino. As doenas
ligadas ao X tambm tero especial incidncia nos homens, j que estes possuem apenas um cromossoma
X. Se o nico exemplar que possuem se encontra mutado, ir desde j manifestar a doena. As mulheres s
iro manifestar a doena no caso de ambos os cromossomas X se encontrarem mutados (o pai doente e a
me portadora probabilidade de ocorrncia baixa).

Hemofilia
O alelo mutado provoca o no funcionamento de factor de coagulao. No homem, todas as clulas
do fgado possuem o alelo mutado, no possuindo qualquer factor de coagulao. Na mulher
heterozigtica, nem todos os hepatcitos possuem o gene mutado, dependendo de qual dos cromossomas
ser condensado. Ser o acaso a determinar a quantidade de factor de coagulao funcional.

Daltonismo
O alelo mutado provoca a ausncia de alelos normais nos cones da retina. O homem que possui o
alelo mutado no capaz de distinguir cores. A mulher heterozigtica normalmente no consegue
visualizar com grande definio. Poder ser mais ou menos grave dependendo do mosaico gentico.

Outras doenas ligadas ao X: Distrofia muscular de Duchenne, calvice, etc.

28
Aneuploidia
A alterao numrica de cromossomas do zigoto decorre da fuso de gmetas que no
transportavam o nmero correcto de cromossomas. Esta alterao decorrer da no disjuno dos
cromossomas homlogos (anafase I) ou dos cromatdeos (anafase II).

Se esta no disjuno ocorrer nos cromossomas somticos o indivduo apresenta uma trissomia,
como por exemplo a trissomia 21 (trs cromossomas 21) ou uma monossomia.

Se a no dijuno ocorrer nos cromossomas sexuais podero apresentar-se as sndromes:

De Turner (45, X0): o zigoto recebe apenas um cromossoma sexual de um dos progenitores.
De Klinefelter (47, XXY): o zigoto recebe dum dos gmetas um cromossoma sexual e no outro
dois cromossomas.
De Jacobson (47, XYY): o zigoto recebe pelo gmeta materno o cromossoma X e pelo gmeta
paterno dois cromossomas Y.
Indivduos Y0 no so viveis.

Daqui se conclui a importncia do cromossoma Y para que determinar o sexo do individuo, sendo
que:
A ausncia de Y torna o indivduo mulher.
A presena de Y torna o indivduo homem.
A presena de um nico cromossoma X no torna o indivduo homem.
A presena de dois cromossomas X no torna o indivduo mulher.

DNA Mitocondrial
As mitocndrias desempenham funes de extrema importncia na clula a nvel metablico, j
que ser neste compartimento que ir ocorrer: a -oxidao, o ciclo de Krebs, respirao aerbia,
tornando-se fundamental para a obteno de energia pelas clulas.

As mitocndrias, segundo a teoria endossimbitica, correspondem a clulas procariotas com

caractersticas aerbias. Estas foram endocitadas por clulas de maiores dimenses, estabelecendo
relaes simbiticas (favorveis para ambas). Esta teoria apoiada pela existncia de dupla membrana nas
mitocndrias, DNA circular prprio com poucos intres e poucas regies no codificantes (caracterstico de
procariotas) e capacidade de replicao autnoma.

Segundo a teoria da Eva Mitocondrial as mitocndrias so transmitidas de me para filha ao longo

das geraes. Isto ocorre porque todas as mitocndrias presentes no zigoto so as existentes no ocito. Os
espermatozides, apesar da grande necessidade energtica que tinham, s fornecem material gentico
sendo que as mitocndrias deste no entram para o interior do zigoto. Deste modo, a herana mitocondrial
designa-se por Herana Uniparental Materna .

Doenas mitocondriais
O DNA mitocondrial est sujeito a sofrer mais danos ao nvel da informao gentica uma vez que:
no possuem os mesmos mecanismos de reparao existentes no ncleo da clula e encontram-se
expostos a espcies reactivas do oxignio, que podem provocar alteraes no DNA mitocndrial.

29
 Quando ocorre mitose as mitocndrias existentes na clula so repartidas pelas duas clulas filhas
aleatoriamente. Desta diviso poder ocorrer a presena de um maior ou menor nmero de mitocndrias
com o genoma mutado. Designa-se por homoplasmia a presena de genoma idntico em todas as
mitocndrias presentes na clula e por heteroplamia a presena de genomas mitocondriais diferentes
dentro da mesma clula. Assim, a manifestao das doenas mitocondriais (e/ou intensidade) vai depender
da quantidade de mitocndrias com DNA mutado na clula.

Apesar da herana mitocondrial ser exclusivamente materna, as doenas mitocondriais podem

tambm ser transmitidas de forma autossmica dominante ou recessiva se as mutaes se verificarem ao
nvel dos genes (contidos no ncleo da clula) que codificam protenas que vm do citosol para as
mitocndrias.

Doena de LHON Neuropatia ptica Degenerativa

Ainda no est totalmente provada a origem desta doena, sabendo-se que est relacionada com o
funcionamento mitocondrial. Cr-se que a mutao que d origem a esta doena seja do DNA mitocondrial,
havendo a hiptese de existirem genes mutados ao nvel do cromossoma X que podero estar relacionados
com o aparecimento desta doena.

Esta mutao afecta a NADH desidrogenase, responsvel pelo Complexo I da cadeia respiratria.
Isto ir provocar um decrscimo na produo de ATP e tambm a acumulao de O2, com formao de
superxidos. Estas desregulaes culminam na apoptose celular.

Esta doena reflecte-se na perda de viso, uma vez que o nervo ptico afectado. Isto verifica-se
porque as suas necessidades energticas so muito elevadas.

30
 Bloco IX Dos Genes ao Organismo

Clulas estaminais
Sabemos que todas as clulas do organismo contm a totalidade da informao gentica, apesar de
ocorrer diferenciao e depois haver expresso diferenciada, consoante o tipo de clulas e tecidos. As
experincias de clonagem confirmam estas informaes, uma vez que a utilizao de clulas somticas
permitiu o desenvolvimento total de um novo organismo. Isto significa que, apesar de diferentes clulas
produzirem diferentes protenas, o material gentico no perdido, ficando apenas condensado.

Muitas das clulas, aps terem sofrido diferenciao perdem a sua capacidade mittica. Apesar
disso, clulas do sangue ou epiteliais necessitam de ser substitudas continuamente. A substituio destas
clulas feita a partir de clulas estaminais, as quais so pluripotentes. As clulas estaminais quando se
dividem podem dar origem a clulas que se mantm como clulas estaminais ou que entram no processo
de diferenciao (irreversvel). A partir destas clulas possvel obter qualquer tipo de clula, se estiverem
sob influncia de estmulos especficos.

As clulas estaminais podem ser utilizadas em prticas teraputicas. Podem ser utilizadas para
renovao normal dos tecidos e reparao de tecidos que sofreram leses. Neste caso, as clulas com
melhor eficcia para serem aplicados em tratamentos sero as clulas estaminais embrionrias, j que
possuem o maior potencial, uma vez que se verifica que podem proliferar indefinidamente, com
capacidade para substituir qualquer tipo de clulas.

A clonagem em humanos se for realizada para fins teraputicos permitida (no no sentido de
produzir um indivduo idntico, mas sim de produzir clulas geneticamente iguais). Estas tcnicas tm por
objectivo a obteno de clulas estaminais produzidas em cultura. O maior problema que esta tcnica
enfrenta a obteno de clulas estaminais que possam proliferar, uma vez que as existentes no adulto j
possuem alguma diferenciao. Actualmente, torna-se frequente o congelamento das clulas estaminais do
cordo umbilical, uma vez que estas podem ser facilmente desprogramadas, permitindo obter qualquer
tipo de clulas.

Diferenciao celular
Para o desenvolvimento do organismo fundamental que ocorra diferenciao, que decorre de
uma expresso diferencial de protenas. Naturalmente, haver muitas protenas que so comuns a todas as
clulas do organismo multicelular, tais como: protenas estruturais dos cromossomas, RNA polimerases,
enzimas reparadoras de DNA, protenas ribossomais, enzimas envolvidas em processos metablicos como a
gliclise ou outros que sejam comuns s clulas, ou protenas que formam o citosqueleto.

A diferenciao vai decorrer da produo especializada de protenas, que lhe vai conferir
propriedades especficas. Esta capacidade de regular a expresso dos genes vai ser absolutamente
fundamental para o desenvolvimento de organismos multicelulares.

31
 Esta expresso poder ser feita a vrios nveis como ilustrado na imagem:

Verifica-se que o controlo da expresso gentica (e tambm do controlo de qualidade) feito em

vrias etapas, desde o DNA at protena activa.

O controlo da transcrio um dos mais utilizados para a diferenciao celular. Tomando como
exemplo o desenvolvimento da Drosophila, foram feitas vrias experincias no sentido de desvendar como
os fenmenos de diferenciao ocorrem:

A larva j assimtrica, ou seja, os ncleos que do origem cabea so distintos dos que do
origem cauda.
Ao cortar a zona com informao para a cabea, o embrio no possui cabea.
Ao injectar alguns ncleos da cauda na poro da cabea, o embrio possui duas caudas.
Colocando clulas que do origem aos olhos no local da pata, desenvolve-se um olho na
pata.

As diferenas que se verificam resultam, em primeiro lugar, de diferentes expresses de

reguladores de transcrio nos vrios ncleos da larva. Mas seria legitimo perguntar: como que se
obtm expresses diferentes dos reguladores de transcrio? Ainda no havendo uma resposta totalmente
clara e explcita, cr-se que resultar de pequenas variaes respeitantes disponibilidade de oxignio ou
de nutrientes.

Ser fundamental agora compreender o modo como esses reguladores de transcrio actuam.

Controlo de Transcrio (1)

de notar que a transcrio no significa expresso gentica, j que corresponde apenas ao
primeiro passo para a obteno de uma protena.

Este controlo j foi abordado no Bloco II, no que diz respeito aos procariotas. Os eucariotas
possuem um sistema bastante mais elaborado no que diz respeito a estes mecanismos.

Para haver transcrio necessrio:

Promotor: regio do gene que atrai a RNA polimerase, orientando-a na direco correcta a
transcrever. Inclui um local de iniciao onde a transcrio realmente iniciada e uma sequncia com cerca
de 50 nucletidos que contm os locais necessrios para a RNA polimerase se ligar ao promotor.
designado por TATA box nos eucariotas.
32
 Sequncias reguladoras: utilizadas para activar ou desactivar o gene. So curtas nos procariotas,
com cerca de 10 nucletidos, reconhecidas por uma nica protena reguladora; nos eucariotas so muito
longas (podendo chegar a mais de 10 000 pares de bases, a qual possui vrias regies onde se ligam
protenas diferentes, de acordo com as suas caractersticas.
Nos procariotas, como um mRNA transcrito vai permitir formar vrias protenas
simultaneamente, a ligao de um repressor (ou de um activador) ao operador vai inibir (ou
activar) a transcrio simultnea de um mRNA que d origem a protenas diferentes.
Activadores: activam a transcrio do gene.
Repressores: inibem a transcrio do gene.
Nos eucariotas, as sequncias reguladoras encontram-se distncia, sendo, por isso
necessrio que o DNA adquira uma conformao que permita o contacto entre as protenas
e a RNA polimerase, por intermdio de uma protena mediadora.
Estas protenas reguladoras vo
alterar a estrutura da cromatina, o
que provoca alteraes na
acessibilidade dos factores de
transcrio e RNA polimerase ao
promotor.
Activadores: activam a
transcrio, j que empurram
a protena mediadora, fazendo
deslocar a RNA polimerase no
sentido da transcrio. Tambm
atraem as histona-acetil-
-transferases que coloca grupos
acetil em lisinas especficas da
cauda da histona, provocando a descondensao, podendo ocorrer a transcrio.
Inibidores/Repressores: inibem a transcrio, j que prendem a protena mediadora,
bloqueando a transcrio. Por outro lado, atrai as histonas-diacetilases responsveis
pela remoo de grupos acetil da cauda das histonas, provocando a condensao. Deste
modo, o incio da transcrio inibido.
Assim para que um gene seja transcrito necessria a presena de activadores e ausncia de
repressores (mais frequente nos eucariotas haver um conjunto de protenas).

de referir a importncia da transcrio para a diferenciao gentica. Na realidade torna-se um

ciclo vicioso, j que a expresso de uma protena poder influenciar a expresso de outra e assim
sucessivamente. Alguns reguladores de transcrio importantes so MyoD (presentes para a diferenciao
em clulas musculares) e o Sonic hedgehog. A diferenciao necessria para a formao de um rgo pode
ser condicionada por um nico regulador de transcrio.

Processamento do RNA transcrito (2)

Como j foi descrito no Bloco II, para que se obtenha um mRNA maturado ter que ocorrer a adio
da cadeia de poli-A, bem como a adio do CAP inicial. O splicing tambm ocorre nesta etapa. Algo que
ainda no foi referido a ocorrncia de splicing alternativo . Isto significa que o spliceossoma pode
escolher retirar alguns exes para formar a cadeia de mRNA maturada. Os padres de splicing alternativo

33
so caractersticos das clulas ou podem ser modificados de acordo com sinais exteriores. Estes padres
so possveis devido existncia de protenas reguladoras do splicing: vo inibir a ligao a ligao do
snRNA em algumas zonas. Para que haja um padro as protenas tornam-se especficas de um tipo de
clula, sendo expressas apenas a.

Doenas relacionadas com o splicing

A Distrofia Muscular de Duchenne uma doena gentica causada pela deleco do exo 50. Esta
deleco vai provocar a alterao do quadro de leitura, o que provoca a eliminao do mRNA pelo controlo,
no havendo produo de protena.

O tratamento utilizado nesta desta doena passa pela introduo de uma protena que iniba o
splicing entre os exes 49 e 52, ocorrendo a remoo do exo 51. Apesar de a protena no se manter igual
original, mantida a janela de leitura, pelo que se obtm uma protena funcional.

Controlo da Traduo (5)

Aps ter sido sintetizado o mRNA, uma das formas mais comuns de regular a quantidade de
protena produzida controlar a traduo.

Nos procariotas existe uma sequncia de reconhecimento da cadeia pelos ribossomas alguns
nucletidos antes do codo de iniciao. O controlo ser feito nessa zona atravs de bloqueio (ou
exposio) da zona de reconhecimento do ribossoma podendo ser inibida (ou activada) a traduo.
Nos eucariotas o mRNA possui CAP inicial que permite a ligao dos ribossomas. Existem
repressores que se ligam no UTR a 5 inibindo a progresso do ribossoma.

Micro RNA (4)

Descobertas recentes verificaram a presena de molculas de RNA no codificantes que
desempenham um papel importante na regulao da traduo. So designados por microRNAs (miRNA)
devido ao seu tamanho reduzido. Estes miRNA so
processados e, juntamente com outras protenas,
formam o RISC (RNA induced silencing complex). O
RISC procura no citosol sequncias de mRNA que
sejam complementares da do miRNA que transporta
consigo (normalmente localizadas nas UTR).
Se a ligao do miRNA ao mRNA for
total o RNA destrudo por uma
nuclease presente no RISC.
Se a ligao for parcial o mRNA vai ser
traduzido em menor quantidade e
eventualmente ser destrudo por uma
nuclease presente no citoplasma.
Os miRNA so muitas vezes especficos de
determinado tecido ou tipo de clulas, contribuindo
para a diferenciao dos tecidos.

Sendo que o miRNA vai ser um importante regulador da traduo, a ocorrncia de mutaes
poder provocar o aparecimento de patologias. Isto porque:
A sequncia de mRNA que era regulada pelo miRNA passa a ser mais expresso.
34
 O miRNA passa a ligar-se a outros mRNA diferentes inibindo a sua produo.

Para controlar as doenas provocadas pelo miRNA pode-se produzir o miRNA em falta em
laboratrio; ou inibir a aco de miRNA em excesso por administrao de miRNA complementar.

RNA de Interferncia
Algumas das protenas que so utilizadas para a maturao de miRNA podem tambm ser utilizadas
para produzir RNAi (RNA de interferncia). Estas so utilizadas para destruir molculas de RNA de cadeia
dupla que no pertencem prpria clula. Estas cadeias vo ser clivadas por nucleases contidas num Dicer
em fragmentos pequenos designados siRNA. Os pequenos fragmentos so includos numa RISC, permitindo
a identificao de cadeias semelhantes, eliminando-as.

Activao de Protenas (6)

Existem protenas que aps a traduo ainda no so totalmente funcionais. Podem necessitar de
alterao de conformao, fosforilaes, acetilaes ou conjugao com outras protenas.

35
 Bloco X A vida da clula: Proliferao e
Morte

Ciclo Celular
Sequncia de acontecimentos que permitem originar duas clulas filhas geneticamente iguais entre
si e iguais que lhes deu origem. Para isto, necessrio que o material gentico seja duplicado (replicao
ver Bloco IV), bem como os organelos, outras macromolculas e ainda o tamanho. Todo este ciclo
regulado pelo sistema de controlo do ciclo celular.

O ciclo celular compreende 4 fases:

Interfase: a clula aumenta em tamanho.

G1 (gap)
S (sntese): ocorre a replicao do DNA nuclear
G2
Nas fases G a clula monitoriza as condies internas e externas decidindo se estas so
favorveis para a progresso para a fase seguinte.
Fase M:
Mitose: processo pelo qual ocorre a diviso equitativa do material gentico pelos dois
ncleos das clulas filhas.
Citocinese: o citoplasma da clula dividido pelas duas clulas filhas.

O sistema de controlo do ciclo celular garante que os acontecimentos do ciclo celular ocorrem na
sequncia correcta e que cada processo completo antes que se d incio ao seguinte. Assim existem
vrios checkpoints que asseguram a qualidade do precesso.

No final de G1 confirma-se se o ambiente ser favorvel para a proliferao celular (nutrientes

suficientes e sinais moleculares especficos provenientes do meio extracelular). Se as condies forem
desfavorveis podem permanecer em G1 ou ficar em G0 (algumas clulas incluindo clulas musculares e
nervosas permanecem em G0 por longos perodos).
Existe um novo checkpoint no final de G2 que assegura que a clula no entra em mitose caso a
clula possua erros no DNA.
O terceiro checkpoint encontra-se durante a mitose e responsvel por assegurar que os
cromossomas esto correctamente ligados ao fuso acromtico.
Falhas nos checkpoints torna as clulas egostas e est intimamente relacionado com o
aparecimento de cancros.

A ocorrncia da diviso celular activa, isto significa que uma clula s se dividir aps receber a
informao para tal. Por exemplo, aps um corte na pele h destruio de clulas:
As clulas da epiderme so estimuladas a dividirem-se para reconstruir o epitlio.
Os fibroblastos so estimulados a dividirem-se e produzir matriz extracelular e colagnio
para reconstituir o tecido conjuntivo.

36
 As clulas do endotlio so reparadas pela formao de redes de fibrina. A formao do
cogulo para alm de estancar a hemorragia produz factores de crescimento (PDGF) que
do a informao s clulas para se dividirem.

Activam domnios
Factores de Receptores Protenas so
de tirosina no
crescimento especficos fosforiladas
prprio receptor

Ligam-se a outras protenas que Activao da Activao sucessiva de trs

ficam activas. RAS cinases

Activam protenas
mudanas na actividade de protnas
(ex: ciclase)
mudanas na expresso gentica

Uma das protenas que se torna funcional aps esta cascata a Ciclina . Por sua vez a ciclina vai
ligar-se Cdk formando um complexo fundamental para que ocorra a mitose. Este complexo, quando
fosforilado est activo e vai activar a expresso de genes necessrios replicao do DNA. Existem vrios
tipos de ciclina (M, S, G1/S, etc) fundamentais para a ocorrncia de cada fase do ciclo celular. Uma das
aces da ciclina-S a fosforilao da protena Rb que a inactiva. Quando inactiva a Rb vai libertar
reguladores de transcrio ocorrendo, por fim, a replicao do DNA.

Um dos complexos ciclina-Cdk ainda responsvel pelas fosforilaes dos vrios componentes do
invlucro nuclear, os quais no so perdidos mas sim permanecem na clula at se reconstituir o ncleo.
Tambm a condensao dos cromossomas realizada atravs de associao a protenas que so
fosforiladas pelo complexo ciclina-Cdk.

O rpido desaparecimento da ciclina aps a mitose fundamental e deve-se activao da

destruio em massa das protenas. Esta degradao ocorre aps a marcao da ciclina pela ubiquitina, que
a conduz para o proteossoma (existente no citosol e no plasma nuclear). Aqui, existe uma grande
quantidade de enzimas hidrolticas que vo degradar as protenas. A degradao da ciclina fundamental
para que ocorra a libertao dos cromossomas dos microtbulos, a formao do invlucro nuclear (por
remoo de fosforilaes) e a descondensao do DNA.

Se num checkpoint uma das protenas detectar uma alterao no material gentico, estas vo
enviar um sinal que activa a p53. Por sua vez, induz a traduo de uma protena p21 que se vai ligar ao
complexo ciclina-Cdk, impedindo a diviso celular (apesar de ser estimulado pelos factores de crescimento).

Morte Celular
A morte celular pode ocorrer por necrose, ou seja, por aco de uma leso traumtica (aco de
microorganismos, queimaduras, falta de oxignio, etc.) ou por apoptose, isto , uma morte celular
programada.

37
 A ocorrncia da apoptose um fenmeno natural e de extrema importncia para o bom
funcionamento do organismo. Ocorre de uma forma totalmente controlada, em que a clula morre por
dentro, continuando com o contedo celular delimitado por membrana (no perturba as outras clulas;
no h sinal inflamatrio). Depois desta degradao interna os fragmentos so removidos por macrfagos
que reconhecem os receptores de fosfatidilserina que passam do lado intracelular da membrana para a
camada extracelular da mesma.

Durante o desenvolvimento embrionrio a ocorrncia da apoptose extremamente importante na

formao de estruturas corporais e rgos, como a formao dos dedos a formao dos espaos
interdigitais ocorre por apoptose. As clulas que sofrem frequentemente este fenmeno sero os glbulos
brancos, a camada interna do tero (periodicamente), clulas infectadas por vrus (os vrus, ao longo dos
tempos, desenvolveram protenas inibidoras da apoptose), clulas com leses do DNA.

Para que ocorra a apoptose enviado um estmulo protena transmembranar Bax que se
encontra na membrana das mitocndrias. Estas vo-se abrir libertando citocromo C o qual se vai associar a
adaptadores e com protenas hidrolticas (proteases), designadas caspases. As caspases so produzidas
numa forma inactiva (procaspases), necessitando de ser clivadas. Quando formado, todo o complexo vai
actuar sobre a membrana nuclear, clivando-a (irreversvel) e sobre protenas citoslicas.

Uma clula poder receber estmulos para se dividir, se manter viva (Bcl2 inibe a apoptose) ou
sofre apoptose.

Cancro
Antes de mais h que esclarecer que existem vrias mutaes que podem provocar a ocorrncia de
cancro:

Oncogene : mutao que aumenta a produo da protena expressa. uma protena que
quando se encontra activa promove a diviso celular (da o perigo de se tornar sempre activa). Tm um
efeito dominante, ou seja, o erro em apenas uma cpia suficiente para causar a sobrevivncia excessiva
da clula e sua proliferao. A forma normal deste gene designada por proto-oncogene. Exemplos:
protena RAS.
Gene supressor do cancro : o perigo recai sobre mutaes que destruam a funo do gene.
Quando activo, bloqueia a proliferao da clula. Tm geralmente um efeito recessivo, uma vez que
ambas as cpias tm que ser afectadas para que se verifique a sobrevivncia excessiva e proliferao.
Exemplos: protena Rb ou p53.
Para escapar apoptose. Ex: Bcl2 sempre activo (oncogene)
Proliferao sem limites. Ex: telomerase sempre activa (oncogene)
Induo de vascularizao
Os cancros acabam por provocar invaso e metastizao.

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