Fundamento[editar]

Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen cidos grasos (cidos miclicos) de
cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la
decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se
denominan cido-alcohol resistentes. Las micobacterias como Mycobacterium
tuberculosis y M. marinum se caracterizan por sus propiedades de cido-alcohol resistencia.
La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese
la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua,
provoca una nueva solidificacin de lo cidos grasos de modo que el colorante ya no puede
salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energa cintica de las
molculas del colorante lo cual tambin facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que
resisten la decoloracin son de color rojo y las que no, se ven de color azul ya que se
utiliza azul de metileno como tincin de contraste.

Tcnica[editar]
Esta tcnica puede realizarse tanto en muestras histolgicas (variante histolgica) como
citolgicas (variante clsica).

Variante histolgica[editar]
Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina. Los reactivos
necesarios para su realizacin son los siguientes:

1. cido perydico 58%

2. carbol fucsina de Ziehl culina (fucsina fenicada). Preparar mezclando en el orden
dado:
1. 0,5 g fucsina bsica
2. 50 ml agua destilada
3. 5 ml etanol absoluto
4. 28,5 g cristales de fenol derretidos
3. hematoxilina
4. alcohol cido 1%:
1. alcohol de 35
2. cido clorhdrico
El procedimiento es el siguiente:

1. desparafinar e hidratar los cortes

2. cido peridico 5%, 10 min
3. lavar con agua destilada
4. fucsina fenicada, 15 min
5. decolorar en alcohol cido al 50%
6. lavar con agua destilada
7. hematoxilina, 10 min
8. azulidificar con, por ejemplo, carbonato de litio
9. deshidratar, aclarar y montar preparaciones
Resultados[editar]
BAAR: rojo/amarillo
Ncleos: azul semiamarillo.
Variante clsica "en caliente"[editar]
1. Hacer un frotis de la muestra.
1. La fijacin al calor asegurar de que el frotis quede adherido al
portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados
falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse
del portaobjetos durante la tincin.
2. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de tincin
con los extendidos hacia arriba.
2. Dejar el frotis sobre el puente de tincin.
3. Aplicar fucsina-fenicada.
1. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5
minutos. Mantenga el calor durante este perodo,
4. Calentar con un mechero hasta la emisin de vapores (3-5 minutos).
1. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre
y tia la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se seque el
colorante.
2. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua
corriente fra hasta que toda la tincin libre quede lavada. Lave
suavemente de manera que el extendido no se barra del
portaobjetos. Retire el exceso de agua.
5. Decolorar con alcohol-cido.
1. Cubra cada portaobjetos con la solucin decolorante, tal como
alcohol cido y mantngalo sobre el portaobjetos durante 7 minutos.
Si no se decolora suficientemente, el contenido del esputo que no son
bacilos TBC puede permanecer teido. Enjuague con agua una vez
ms los portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los portaobjetos
an estn rosa, aplique una cantidad adicional de la solucin
decolorante de 1 a 3 minutos.
6. Aplicar azul de metileno (1 minuto).
1. Aplique la solucin de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto.
7. Enjuagar con agua
1. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada
portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente, coloque
cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire.
8. Ahora coloquele una pequeita gota de aceite de inmersin y haga la
observacin al microscopio con 100 x 100
Variante clsica en "fro" (Tincin de Kinyoun)[editar]
1. Hacer un frotis.
2. Dejarlo en el puente de tincin.
3. Aplicar fucsina-fenicada (solucin con fenol y mayor concentracin de
fucsina).
4. Dejar en vasos coplin durante 20 minutos.
5. Decolorar con alcohol cido.
6. Lavar con agua del grifo.
7. Contrastar con azul de metileno
Algunos microorganismos cido-alcohol resistentes[editar]
 Mycobacterium: fuertemente cido-alcohol resistentes.1
Nocardia y Actinomices: dbilmente cido-alcohol resistentes.2
Parsitos coccdeos (Cryptosporidium) de muestras fecales.3