EXTERNATO RIBADOURO

Tcnicas Laboratoriais de Biologia - Relatrio

Extrao de ADN de clulas

vegetais

Trabalho realizado pela aluna:

M Beatriz Andrade n 21 11 A6

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 no mbito da disciplina de Biologia e Geologia
Prof Ise Machado

Extraco de ADN de clulas vegetais

Objectivo

Pretende-se conhecer tcnicas de extraco de ADN das clulas e tambm compreender o

processo necessrio extraco do ADN.

Introduo

O DNA ou ADN, o cido desoxirribonucleico, um composto orgnico cujas molculas contm

as instrues genticas que coordenam o desenvolvimento e funcionamento de todos os seres
vivos e alguns vrus. O seu principal papel armazenar as informaes necessrias para a
construo das protenas. Os segmentos de ADN que so responsveis por carregar a
informao gentica so denominados genes. O restante da sequncia de ADN est envolvido
na regulao do uso da informao gentica.

Figura 1- Uma cadeia de ADN.

Do ponto de vista qumico, o ADN um polmero constitudo por nucletidos, cujo cerne
formado por acares e fosfato intercalados por ligaes covalentes (do tipo fosfodister).
Dentro da clula, o ADN organizado numa estrutura chamada cromossoma e o conjunto de
cromossomas de uma clula forma o caritipo. Antes da diviso celular os cromossomas so
duplicados atravs de um processo chamado replicao.
Os seres eucariontes como os animais, as plantas e os fungos tm o seu ADN dentro do ncleo,

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enquanto os procariontes como as bactrias tm-no disperso na membrana plasmtica.

O ADN responsvel pela transmisso das caractersticas hereditrias de cada espcie.

Em organismos vivos, o ADN no existe como uma molcula nica (fita simples), mas sim como
um par de molculas firmemente associadas. As duas longas fitas de ADN enrolam-se
formando uma dupla hlice (figura 1). Os nucletidos esto presentes em ambas as fitas da
dupla hlice, unidos com nucletidos da mesma fita por ligaes fosfodister e fita
complementar atravs de pontes de hidrognio formadas pelas suas bases.
A dupla hlice do ADN estabilizada por pontes de hidrognio, entre as bases presas s duas
fitas. As quatro bases encontradas no ADN so a adenina (A), a citosina (C), a guanina (G) e a
timina (T).
A dupla hlice uma espiral dextra. Como as fitas de DNA giram uma ao redor da outra, elas
deixam espaos entre cada cerne de fosfato, revelando os stios das bases que esto localizadas
na parte interna.

Figura 2 e 3 Na figura 2 est a combinao Guanina-Citosina com trs pontes de hidrognio. Na figura3 est a
combinao Adenina-Timina com duas pontes de hidrognio.

Material

Kiwi;
Almofariz;
Bisturi;
Banho-maria (37);
Gaze;
Proveta;
Lminas e lamelas;
Tubo de ensaio;
gua destilada;
Detergente da loua;
Cloreto de sdio;
Etanol;
Fucsina bsica;

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Microscpio ptico.

Procedimento

1. Aps ter descascado um kiwi, este foi cortado em pequenos cubos e esmagado no almofariz.
2. Foi adicionada uma soluo composta por:
- 100 ml de H2O;
- 10 ml de detergente da loua;
- 3 g de NaCl.
3. Continumos o processo de esmagamento.
4. A preparao foi colocada em banho-maria (37) durante 15 minutos.
5. Foi filtrado, atravs da gaze de forma a obter 5 ml de lquido para um tubo de ensaio.
6. Foi adicionado preparao, 5 ml de etanol 96% a 5C.
7. Deixmos repousar at observarmos a ascenso de uma camada gelatinosa.
8. Observmos ao microscpio, utilizando a fucsina bsica.

Observao

Aps ter-se colocado o etanol na mistura, foi possvel observar os filamentos do DNA, apesar
de no estar em perfeitas condies.

Discusso dos resultados

O objectivo desta actividade experimental foi cumprido, visto que no houve nenhuma falha
no processo utilizado, sendo possvel a observao do filamento do ADN retirado do kiwi.
Depois desta actividade experimental fiquei a saber qual a funo dos reagentes (cloreto de
sdio, detergente e etanol).

A adio do cloreto de sdio, no incio da actividade, proporciona um ambiente favorvel ao

ADN, pois o cloreto de sdio contribui com ies positivos que neutralizam a carga negativa do
ADN. E tambm, serve para ajudar a romper as paredes celulares.

O adicionamento do detergente afecta as membranas plasmticas, pois elas so constitudas

por lpidos e com a ruptura das mesmas, o contedo celular solta-se e dispersa-se na soluo.

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J o etanol faz com que o ADN no se dissolva, provocando a sua separao da soluo aquosa
inicialmente preparada, elevando-se para a camada alcolica.
Isto acontece porque o ADN menos denso que a gua e que a mistura, fazendo com que este
se mova lentamente para a superfcie, em direco ao etanol, deixando aparecer os pequenos
filamentos.
Estes juntam-se atravs do etanol, formando uns filamentos esbranquiados - ADN.
Quando por ltimo agitmos a mistura que continha o ADN, este soltou-se e precipitou-se.

Pude, assim, concluir que a molcula do ADN pouco solvel, muito pouco densa e que possui
ligaes muito fracas, isto porque estas so feitas atravs de pontes de hidrognio (as ligaes
de hidrognio so pouco intensas do ponto de vista energtico).

Concluso:

Com esta experincia podemos concluir que o ADN uma molcula existente nas clulas de
todos os seres-vivos e tambm que pode ser extrado. Para tal necessrio a utilizao de
certos componentes na sua extraco: sal, lcool e detergente.
O sal proporciona um ambiente considerado favorvel s molculas de ADN das clulas da
cebola, pois contribui com ies positivos que neutralizam, a carga negativa ADN. Por sua vez o
detergente intervm na desorganizao das membranas celulares, enquanto o lcool desidrata
as molculas de ADN, aglutinando-as e ao mesmo tempo tornando-as visveis a olho nu. Isto s
ocorre porque o ADN aparece como uma massa branca e filamentosa (cromatina).

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