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Aulas 5 e 6
Espectrofotometria no UV
UV--Vis
FLUORESCNCIA molecular no UV
UV--Vis
Plano de aula:
aula:
- Definio de espectrofotometria
- Aspectos conceituais da ABSORO MOLECULAR
- Medidas de absoro e anlises quantitativas
- Instrumentos para anlises espectrofotomtricas
- Aspectos prticos
- A quimioluminescncia
- Espectrofluorimentria (princpios e aplicaes)
- Instrumentao para espectrofluorimetria
Bibliografia
Anlise Instrumental
F Cienfuegos, D Vaitsman; 2000
Espectrofotometria:
Espectrofotometria:
Medida da luz que absorvida ou emitida por uma espcie qumica
Alguns exemplos:
Compostos nitrogenados
Frmacos (c
(c.. acetil saliclico)
Fenis
Gorduras (colesterol)
ANALITOS INORGNICOS
Alguns exemplos:
on cloreto
amnia, fosfato, nitrato e sulfaTO
Elementos metlicos em geral, As e B
ASPECTOS CONCEITUAIS
LUZ O espectro eletromagntico
(nm)
Aspecto ondulatrio da radiao eletromagntica
Modelo matemtico
E inversamente proporcional ao
Na espectrofotometria os mximos de absoro so a principal
diferena que se observa no espectro de substncias diferentes:
fenmeno menos energtico
Grupos cromforos:
So grupos funcionais que apresentam absoro caracterstica na regio do
ultra--violeta ou do visvel
ultra
Absorve em vrios
comprimentos de onda diferentes
(vrios grupos funcionais)
As substncias absorverem radiao por causa dos
Grupos Cromforos
Outros grupos cromforos:
Carboxila (-
(- COOH): 200 210 nm
Nveis de energia
vibracional
Nveis de energia
eletrnicos
As substncias absorverem radiao por causa dos
Grupos Cromforos
Envolvem diferenas
energticas menores
Cada nvel de
ENERGIA VIBRACIONAL (e
(en):
Subnveis de
ENERGIA ROTACIONAL
Envolvem diferenas
energticas ainda menores
ENTRETANTO tomos no estado gasoso tambm podem absorver
radio no UV
UV--Vis
Exemplos de medidas ESPECTROSCPICAS
EspectroMETRIA
EspectroMETRIA ATMICA
EspectroFOTO
EspectroFOTOMETRIA
METRIA MOLECULAR
ENTRETANTO tomos no estado gasoso tambm podem absorver
radio no UV
UV--Vis
Representao das transies eletrnicas que podem ocorrer no tomo de sdio
NaCl
Representao genrica para os eltrons que sofrem
transies em medidas espectroscpicas:
1 etapa:
etapa:
excitao eletrnica da molcula M
M + hv M*
2 etapa:
etapa:
relaxao
M* M + calor
M* M + M (fotodecomposio
fotodecomposio))
M* M + hv
hv (luminescncia)
Caracterstica dos processos de absoro na regio do visvel
Soluo verde-
verde-amarelada absorve violeta
amarela violeta--azul
violeta
laranja azul
vermelha azul--verde
azul
prpura verde
violeta verde
verde--amarelo
violeta--azulado
violeta amarelo
azul laranja
azul--esverdeado
azul vermelho
verde prpura
a) Em %Transmitnci
%Transmitnciaa versus c
a) b) Em Absorbncia versus c
Relao entre absoro e concentrao = ANLISE QUMICA
(Lei de Lambert-
Lambert-Beer
Beer))
A=abC
a= absortividade molar (
(: L mol -1cm-1)
b= caminho ptico (cm)
C= concentrao em (mol L-1)
=ab
Concentrao
- Concentraes desconhecidas
- OU determinar o valor de a para se obter o de
Determinao da Concentrao
1) PREPARAR PADRES DE CALIBRAO TCNICA INSTRUMENTAL
LD = (C
(Cbco + 3xSdbco)/S em termos concentrao
LQ = (C
(Cbco + 10xSdbco)/S em termos concentrao
LD = limite de deteco
LQ = limite de quantificao (o INMETRO recomenda usar o primeiro ponto da curva analtica de calibrao)
Considerar as espcies
independemente (no existe interao)
A = M . b . cM + N . b . cN
A = M . b . cM + N . b . cN
Vlida para:
para:
Ex de instabilidade qumica
qumica::
Ex de erro instrumental
instrumental::
I
II
I II
A A
FOTMETROS
(COLORMETROS) ESPECTROFOTMETROS
REGIO DO ULTRA-
ULTRA-VIOLETA REGIO DO VISVEL
LEDs
(diodos emissores de luz)
Lmpadas de Xennio
FONTE DE LUZ
FILTROS:
FILTROS
Monocromador de Czerny-Turner
Instrumentao
3) COMPARTIMENTO (OU SUPORTE) DA AMOSTRA
CELAS OU CUBETAS DE QUARTZO (UV-
UV-Vis
Vis)) face para
CELAS OU CUBETAS DE VIDRO (Vis) manipulao
CELAS OU CUBETAS DE ACRLICO (Vis)
CILNDRICAS
menor custo mas que conferem menor repetibilidade
LIMPEZA:
1- gua e detergente diludo
2- enxague com gua purificada e, depois, com a prpria amostra
Instrumentao
4) DETECTORES (TRANSDUTORES) DE SINAL
- Fototubos
Fototubos,, fotomultiplicadoras e semicondutores de silcio
Juno pn
e- Anodo _ _
+ +
Amplificador
- +
+ _
90 V DC
_ + + _
p n
INSTRUMENTOS FEIXE
FEIXE NICO
NICO E DUPLO
DUPLO FEIXE
FEIXE
cela do
solvente
ajuste 100% T
%T
a. fotmetro de feixe
nico
detector
%T detector de zero
ESPECTROFOTOMETRIA NO UV-
UV-Vis
CONSIDERAES GERAIS
Tipos de equipamentos
Portteis De bancada
Anlise Instrumental
F Cienfuegos, D Vaitsman; 2000