DESARROLLO DE UN SISTEMA DE ESCALAMIENTO DESCENDENTE PARA SIMULAR

GRADIENTES DE pH EN CULTIVOS BACTERIANOS Y DE CELULAS ANIMALES.

Jos A. Serrato, Edgar A. Sandoval, Juan M. Salazar, Mireya Gallegos, Vanessa Hernndez, y O. Tonatiuh Ramrez
Departamento de Bioingeniera, Instituto de Biotecnologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico
Av. Universidad 2001 Col. Chamilpa. C.P. 62250. Fax (7) 3138811. e-mail: tonatiuh@ibt.unam.mx

Palabras clave: escalamiento descendente, pH, oscilaciones

Introduccin. El escalamiento de la etapa de fermentacin es obtenidos en cultivos de Escherichia coli recombinante para
uno de los aspectos ms crticos para el xito de un la produccin de insulina humana.
bioproceso en la produccin de protenas recombinantes.
Especficamente al escalar una fermentacin se presentan 7.8 50
invariablemente problemas de heterogeneidad y de pH
7.6 40
gradientes de las variables ambientales ms importantes, TOD

TOD
tales como el oxgeno disuelto, dixido de carbono disuelto,

pH
7.4 30
concentracin celular y de sustratos. Debido a tales 7.2 20
gradientes los microorganismos se encuentran sometidos a
7 10
ambientes fluctuantes a lo largo de su recorrido dentro del
reactor, pasando de zonas mal mezcladas a zonas con un alto 6.8 0

grado de homogeneidad. Bajo estas condiciones, la

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productividad de la mayora de los procesos se ve afectada.
Como una alternativa para poder abordar esta problemtica, %FG
surge dentro de la bioingeniera el concepto de escalamiento 4
descendente. Esta metodologa semiemprica permite
desarrollar estrategias para simular a nivel laboratorio las -1
condiciones imperantes a gran escala. En el presente trabajo
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10.5

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se plantea desarrollar un simulador que permita estudiar
tr(h)
gradientes de pH prevalecientes en reactores industriales en
un sistema a nivel laboratorio. CO2 O2

Metodologa. El pH del cultivo se control mediante la

manipulacin de la presin parcial de CO2 a la entrada de un
bioreactor instrumentado y computarizado. El control se basa
en un algoritmo PID mediante el cual se manipula la apertura
de controladores de flujo msico para CO2, 02, N2. El sistema
permite fijar de forma predefinida el eje de oscilacin, la
amplitud y el perodo.
A travs de estos tres parmetros se simulan las condiciones
de pH en el seno del lquido, la magnitud de los gradientes de
pH y el tiempo de circulacin respectivamente.
Resultados y Discusin. El sistema de control desarrollado
nos permite simular gradientes espaciales de pH mediante
oscilaciones temporales, es decir a travs de una onda
sinusoidal se representa el trayecto de las clulas a lo largo
de un reactor a gran escala. La variacin de pH se logra
gracias a que el medio de cultivo diseado se basa en una
solucin amortiguadora carbonato/bicarbonato. De tal forma,
al aumentar la presin parcial de CO2 disminuye el pH,
mientras que el efecto inverso resulta al disminuir la pCO2. En
la fig.1 se muestra un perfil tpico de la oscilacin de pH en
un cultivo de clulas animales, especficamente hibridomas
productores de anticuerpos monoclonales. Como puede
observarse, una apertura de la vlvula de CO2 ocasiona una
disminuicin del pH del medio. Resultados similares fueron
Fig. 1. Oscilaciones de pH en cultivos de clulas animales
(eje oscilacin= pH 7.2, amplitud= 0.1 unidades de pH y
perodo= 900 s.
Conclusiones. Los resultados presentados muestran que es
posible simular gradientes de pH mediante la manipulacin
oscilante de la presin parcial de CO2, Esta estrategia evita la
acumulacin perjudicial de sales en el medio de cultivo, tal y
como ocurrira en otros esquemas de control de pH basados
en la adicin de cido y base.
Agradecimientos. Proyecto CONACyT NC-230 y Proyecto
DGAPA IN-216100.
Bibliografa.
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