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PRACTICA No. 1
PROPIEDADES INICAS DE LOS AMINOACIDOS
H H
R-C-COOH R-C-COO-
NH NH +
Forma sin disociar Ion dipolar o zwitterin
Sustancias que tienen esta propiedad se conocen como substancias anfotricas o anfolitos.
Algunos aminocidos poseen adems otros grupos ionizables, situados en el radical R, que
esta unido al carbono alfa (Grupos p-hidroxifenil, sulfhidrlo, guanidino, imidazol, carboxilo y
amino). Cada uno de estos grupos posee propiedades cido base.
Materiales:
Solucin de glicina al 1.5%
Hidrxido de sodio 0.2N
Acido sulfrico 0.2N
Potencimetro
Bureta
Procedimiento:
1. Titular 25 ml de agua destilada, con cido sulfrico 0.2 N, utilizando una bureta y el
potencimetro. Anotar el pH inicial antes de empezar a agregar el cido. Efectuar la
titulacin, agregando suficiente cido para que el pH cambie 0.2 unidades cada vez.
Anote la cantidad en mililitros de cido agregados para obtener dichos cambios de pH.
Titule hasta llegar a un pH de 1.2.
2. Titular en la misma forma, siempre con cido sulfrico 0.2 N, 25 ml de una solucin de
glicina al 1.5%. Titular hasta llegar a un pH de 1.2 o hasta emplear ms de 5 ml de cido
para disminuir el pH en 0.2 unidades.
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Presentacin de resultados:
Para determinar cul es la curva de titulacin se necesita saber cuanto titulante se usa para
titular el solvente, en este caso agua, a cada valor de pH. Este valor se resta de cantidad
total de titulante usado para obtener ese pH, en la titulacin del aminocido.
Cuestionario:
1. De acuerdo a su curva de titulacin obtenida, indique los valores de pH para los grupos
alfa-amino y alfa-carboxilo de la glicina.
2. Indique la estructura de los otros grupos ionizables presentes en los aminocidos, que
tienen propiedades cido-base. Para cada uno de ellos indique cul es la ecuacin del
par conjugado.
3. Escriba la estructura de la glicina a pH 1, 7 y 12. Indique cul es el pH isoelctrico de este
aminocido.
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PRACTICA No. 2
SEPARACION E IDENTIFICACIN DE
AMINOACIDOS POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA
Por consiguiente, una sustancia polar se mover muy lentamente con relacin al frente de un
solvente apolar, mientras que una sustancia no polar se mover ms rpido. Bajo ciertas
condiciones experimentales, el movimiento de una sustancia en particular es constante, el
movimiento de una sustancia en particular es constante, con respecto al movimiento del
frente de un disolvente determinado. Esta constante se llama Valor Rf y se define como:
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Procedimiento:
PRECAUCION: Durante todo el procedimiento, evitar tocar la capa de silicagel con los
dedos.
1. Activar una cromatoplaca de silicagel colocndola en un horno a 1100 C durante 15 30
minutos. Sacarla y dejarla enfriar.
2. Trazar una lnea paralela a uno de los extremos de la cromatoplaca, a una distancia de
1.5 cm, de separacin y numerarios 1 y 2.
3. Aplicar las siguientes soluciones en las marcas:
Hacer dos aplicaciones de cada una de las soluciones, utilizando para ello tubos
capilares, y dejando secar la primera aplicacin antes de aplicar la siguiente. La
mancha de cada aplicacin no debe ser mayor de 2 mm. de dimetro.
4. Despus que las aplicaciones estn secas colocar la cromatoplaca en un recipiente, que
contenga en el fondo una capa de disolvente (n-propanol - agua, 7:3) y en una de las
paredes un pedazo de papel filtro con un extremo introducido en el disolvente. La
cromatoplaca se introduce con el extremo donde se aplicaron las muestras hacia abajo,
de forma tal que el nivel del disolvente quede por debajo de la lnea de aplicacin de las
muestras.
5. Cerrar el recipiente y efectuar la cromatografa hasta que el frente del disolvente ascienda
a una distancia aproximada de 10 cm. (30 - 40 minutos)
6. Remover la cromatoplaca del recipiente y marcar con un lpiz la posicin del frente del
disolvente, antes de que se evapore. Dejar secar la cromatoplaca a temperatura ambiente
primero y luego a 80 C.
7. Rociar las placas con un spray de ninhidrina (0.3 g. de ninhidrina en 100 ml de n-butanol y
3 ml de cido actico glacial). Secar la cromatoplaca a temperatura ambiente primero y
luego colocarla en un horno a 1100 C, durante 5 minutos.
8. Marcar alrededor de las manchas con un lpiz y mediar la distancia, en centmetros,
desde el centro de ellas a la marca inicial. Calcular el valor de Rf para todas manchas.
9. Con base en los valores de Rf obtenidos, identificar la muestra desconocida.
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PRACTICA No. 3
ALGUNAS PROPIEDADES FISICAS DE LAS PROTEINAS
Procedimiento:
Hacer 3 series de 9 tubos cada una.
A la primera serie de 9 tubos aadir 0.1 ml de sulfato de cobre de 2%.
A la segunda serie de 9 tubos aadir 0.1 de sulfato de sodio al 2%.
La tercera serie de tubos prepararla siguiendo las indicaciones como se muestra en el
cuadro de abajo, colocar primero la solucin de casena 0.5% en acetato de sodio 0.4 N y
luego el agua, mezclando en seguida. Luego aadir la cantidad indicada de cido actico
al tubo No. 1 y mezclar rpidamente. Observar. Colocar 1 ml en uno de los tubos con
sulfato de sodio. Notar si hay precipitado luego aadir la cantidad indicada de cido actico
al tubo No. 2 y repetir el proceso. Continuar igual con los otros 7 tubos.
Tubo No. 1 2 3 4 5 5 7 8 9
ml de casena 0.5% en acetato
1 1 1 1 1 1 1 1 1
de sodio 0.4 N
ml de agua destilada, mezclar 8.38 7.75 8.75 8.50 8.00 7.00 5.00 1.00 8.00
ml de cido actico 0.04 N
0.62 1.25 - - - - - - -
Mezclar
ml de cido actico 0.4 N - - 0.25 0.50 1.00 2.00 4.00 8.00 -
ml de cido actico 4 N - - - - - - - - 1.00
Luego de haber terminado la parte anterior, examinar los tubos con sulfato de cobre y
sulfato de sodio cada 10 minutos. Anotar las observaciones. Notar si hay opalescencia o
precipitado. Estimar la cantidad de precipitado por O, +, ++, +++, ++++. Calcular el pH
terico de cada tubo. Estimar lo ms cercano posible, el pH isoelctrico de la casena.
Informar en un cuadro as:
Tubo No. 1 2 3 4 5 5 7 8 9
Al mezclar
Mezclado con CuSO4
Na2SO4
Despus de 10 min
Despus de 20 min
pH calculado
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B. Desnaturalizacin:
1. Desnaturalizacin de la albumina:
Calentar una solucin de albmina de huevo sobre una llama de mechero, hasta que el
tubo este caliente, pero sin que hierva la solucin, luego aada 2 a 3 gotas de cido
actico al 1% a la solucin caliente, y observe el efecto.
2. Desnaturalizacin de la catalasa:
Mediante esta experiencia, vamos a ver una propiedad fundamental de protenas, que es
la desnaturalizacin.
Ya que la catalasa qumicamente es una protena, podemos desnaturalizarla al someterla
a altas temperaturas. Al perder la estructura terciaria, perder tambin la funcin y como
consecuencia su funcin cataltica, por lo que no podr descomponer el agua oxigenada y
no se observar ningn tipo de reaccin cuando hagamos la experiencia anterior con
muestras de tejidos hervidos.
Preguntas:
1. Qu es punto isoelctrico?
2. Explique los resultados obtenidos al mezclar CuSO4 y Na2SO4 con las soluciones
bufferizadas de casena.
3. Describa la estructura helicoidal de la cadena peptdico. indique el papel de los puentes
de hidrgeno.
4. Qu cambios ocurren en la molcula de protena durante la desnaturalizacin?
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PRACTICA No. 4
ALGUNAS PROPIEDADES QUMICAS DE LAS PROTEINAS
An cuando todas las protenas son compuestos formados por aminocidos unidos por
enlaces peptdico. Estas sustancias presentan variaciones considerables en sus propiedades
qumicas y biolgicas. El propsito de este experimento es para familiarizar al estudiante con
algunas propiedades qumicas comunes a las protenas, especialmente aquellas propiedades
por medio de las cuales las protenas se pueden diferenciar unas de otras.
Albmina de huevo (Ovo albmina), una de las principales protenas del huevo, casena la
principal protena de la leche, gelatina de protena muy conocida que puede extraerse del
tejido conectivo, peptona un grupo de sustancias complejas de peso molecular intermedio,
las cuales pueden ser obtenidas por hidrlisis de protenas y Glicina, un aminocido.
a) Reaccin de Biuret:
Para que se de esta reaccin tiene que haber 2 ms enlaces peptnicos. 1 como
mnimo.
El in cobre formar un complejo con las protenas de una manera similar al que forma
con el amonio. El complejo en el caso de las protenas es rojo o violeta, y azul en el caso
del amonio. Los aminocidos libres y los dipptidos no dan el color rojo o violeta; se
necesitan al menos dos uniones peptdicas para obtener dicha coloracin. La sustancia
ms simple que tiene esa estructura requerida es (NH 2CONH2)2 y se llama Biuret y esta
es la razn por la cual esta reaccin lleve el nombre de Biuret.
Parte experimental
Lleve a cabo la reaccin de Biuret en soluciones al dos por ciento de glicina, peptona,
casena, gelatina y albmina de huevo. A 2 cc. de las soluciones anteriores agregue 2 cc.
de hidrxido de sodio 6 N y una gota de solucin de sulfato de cobre al 0.5% mezcle bien
y agregue ms sulfato de cobre gota a gota hasta distinguir un color Rosado o violeta, sin
el color no aparece rpidamente deje reposar el tubo durante 10 15 minutos. Note
cualquier diferencia en el color obtenido en las diferentes soluciones.
Preguntas
1. Describa las bases qumicas de la reaccin.
2. Por qu debe ser alcalina la solucin?
3. Cul es el mnimo de aminocidos que deben estar presentes para que d positiva la
reaccin?
4. Escriba la formula del complejo que se forma
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Parte Experimental
Haga la reaccin en las soluciones al 2% de glicina, peptona, gelatina, casena y
albmina. Ponga 2 3 cc. de las soluciones en un tubo de ensayo y agregue de 2 a 3 cc.
de cido ntrico concentrado. Caliente a ebullicin muy lentamente o hasta que se
disuelva el precipitado que se form al agregar el cido, enfri la solucin y agregue
hidrxido de sodio 6 N en exceso. El color amarillo cambia a naranja.
Preguntas
1. Por qu el cido Ntrico colorea la piel de amarillo?
2. Todas las protenas da positiva la reaccin, Xanto Proteica?
3. Describa las bases qumicas de la reaccin.
c) Reaccin de Milln:
La reaccin es especfica para el grupo fenlico, el aminocido tirosina contiene este
grupo como parte integral de sus molculas. Como consecuencia, todas las protenas
que contienen este aa en su molcula darn positiva esta reaccin. El reactivo de
Milln es una mezcla de sales de mercurio, el cual se encuentra disuelto en cido
ntrico. El color que se observa al realizar la reaccin es debido a la formacin de
sales de mercurio del grupo cido del fenol.
Parte experimental: Colocar de 2-3 cc de las soluciones de protenas, agregue unas
pocas gotas del reactivo de Milln, caliente gradualmente la solucin y llvela a
ebullicin, la presencia de tirosina es indicada por el desarrollo de un color rojo el cual
permanece despus de la ebullicin. Si el color no aparece ser necesario agregar
ms reactivo de Milln, pero bajas concentraciones del reactivo son las deseables. El
color puede desaparecer si continua el calentamiento por lo cual es necesario hacer
gradualmente el calentamiento.
Preguntas:
- Describa las base qumicas de la reaccin?
d) Reaccin de Hopkins-Cole:
Las protenas que contengan triptfano darn positivas esta reaccin. El color es
debido a la condensacin del anillo de indel del triptfano con un aldehdo presente en
el reactivo.
Parte experimental:
Coloque de 2 a 3 cc de las soluciones de protenas en un tubo de ensayo y agregue 3
cc del reactivo (sal magnsica del cido glioxlico) y mezcle vigorosamente. En un
tubo de ensayo conteniendo la solucin de protenas, agregue cuidadosamente
(resbalado por las paredes del tubo) 5 cc de H2SO4 concentrado. Caliente en un bao
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de agua hirviendo por dos minutos y deje reposar, aparecer un color rojo violeta, este
aparece en la unin de las dos fases si el triptfano est presente.
Preguntas:
- Escriba la estructura del cido glioxlico
- Describa las bases qumicas de la reaccin.
e) Reaccin de Erlich-Diazo:
El cido sulfanlico diazotizado se condensa con el anillo fenlico e imidazlico de la
tirosina y de la histidina para dar productos coloreados. Con histidina se obtiene un
color cereza intenso y con la limosina da un color rojo naranja.
Parte experimental:
Coloque en un tubo de ensayo 1 cc de la solucin sulfanlico al 0.5 % en HCl al 2%,
agregue igual volumen del solucin de NaNO3 al 0.5 % mezcle bien y despus de
medio minuto agregue 1 cc de las soluciones de protenas, mezclar nuevamente y
agregar NH4OH NH4 CO3 hasta hacer alcalina la mezcla. La histidina da un color
rojo naranja y la tirosina da un color naranja.
Preguntas:
Describa las bases qumicas de la reaccin.
g) Reaccin de Molisch:
La reaccin de Molisch es general para Carbohidratos. Como consecuencia, las
glucoprotenas, dan positiva esta reaccin, por ser protenas conjugadas que contienen
como grupo prosttico carbohidratos. En esta reaccin los carbohidratos son
deshidratados por cidos fuertes a furfural o derivados del furfural el cual se condensa
con el alfanaftol para formar un producto coloreado rojo violeta.
Parte experimental
A 2 cc. de las soluciones de protenas agregue 2 gotas de solucin de alfanaftol al 5% en
etanol y cuidadosamente agregue cido sulfrico resbalndolo por las paredes del tubo
para formar dos capas. En la unin de las dos capas aparecer un anillo rojo violeta, el
cual indica la presencia de carbohidratos.
Preguntas
- Describa las bases qumicas de la reaccin.
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h) Deteccin de fsforo:
Las protenas conjugadas las cuales contienen como grupo prost0tico al fsforo,
cuando se ponen a digerir con H2SO4 se libera fosfato inorgnico, el cual puede ser
detectado por la formacin del fosfomolibdato de amonio de color amarillo.
Parte experimental:
Pipete 5 cc de las soluciones de protenas en un tubo de ensayo largo (NNP) y
agregue 1 cc de H2SO4 6 N y concentre la solucin por ebullicin en la llama directa
(agite continuamente el tubo para evitar las proyecciones) si ocurre un exceso de
vapores, esto se puede evitar con la adicin de una gota de alcohol octlico. Contine
calentando hasta que los vapores blancos del trixido de azufre aparezcan. La
protena puede carbonizarse en este punto. Agregue cuidadosamente una gota o dos
de HNO3 conc. Colocando la boca del tubo de ensayo en sentido contrario a donde se
encuentran sus compaeros. Caliente nuevamente para lograr el punto de
carbonizacin, y repita la adicin de HNO3 . Contine calentando hasta que la solucin
sea incolora. Cuando los vapores del trixido de azufre sean visibles en el tubo.
Enfre y agregue 5 cc de agua destilada, aada NH 4OH hasta que la solucin sea
alcalina. Ajuste la solucin nuevamente con H2SO4 6N y acidifquela, caliente la
solucin a 700C y agregue 2 cc del reactivo de molibdato de amonio. Deje reposar, la
aparicin de un precipitado amarillo indica la presencia de fsforo.
Preguntas:
- Qu clase de prote nas contienen fsforo?
- Nombre de tres protenas que contengan fsforo.
- Describa qu clase de unin existe entre la protena y el fsforo.
- Describa la reaccin que se verifica para la deteccin de fsforo.
-
REACCIONES DE PRECIPITACIN DE LAS PROTEINAS
Parte Experimental
Aada 1 cc. de solucin de cloruro de sodio al 5% a 2 3 cc. de las soluciones de
protenas. Caliente a ebullicin y observe la cantidad de coagulacin en cada tubo.
Preguntas
- Explique las diferencias entre coagulacin y desnaturalizacin.
- Todas las protenas coagulan con el calor?
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de estos cidos se combinan con las protenas ( las cuales tienen carga positiva neta
en el lado cido del punto isoelctrico), para formar complejos insolubles en los cuales
la protena y los aniones estn unidos por uniones electrostticas. Estas reacciones
son muy usadas para separar a las protenas de fluidos biolgicos.
Parte experimental:
Colocar en tubos de ensayo 5 cc de las soluciones de protenas, acidifique con cido
actico, y agregue 2 cc de cido pcrico concentrado.
Repita el procedimiento colocando esta vez 2cc de cido tricloroactico al 10 %. Anote
los resultados obtenidos.
Preguntas:
- Describa un mtodo por medio del cual pueda preparar una solucin libre de
protenas de un fluido biolgico tal como la sangre.
- Indique cul de los dos medios cido o alcalino favorece la precipitacin de las
protenas por reactivos alcaloidales. Razone su respuesta.
Parte experimental
A 5 c.c.. De las soluciones de protenas agregue muy lentamente una gota de una
solucin de cloruro frrico 1%, observe el resultado en los diferentes tubos, y luego
agregue un exceso de cloruro frrico al 1%. Repita usando sulfato de Cobre al 2%,
nitrato de plata al 2%. En el caso del sulfato de cobre agregue unas pocas gotas de
hidrxido de sodio 6 N cada tubo.
Preguntas
lndique qu medio si el alcalino o el cido favorecen la precipitacin de protenas.
Razone su respuesta.
Servira la clara de huevo como antdoto contra envenenamiento por metales pesados?
Para cul de los metales anteriores servir ms? Razone su respuesta.
Parte Experimental
A 3 cc. De una solucin de clara de huevo, agregue cido ntrico concentrado
resbalando ste por las paredes del tubo para formar una capa debajo de la solucin de
protenas. Observe el precipitado que se forma en la unin de las capas. Repita la
reaccin con cido clorhdrico concentrado. Lleve a cabo esta reaccin con una solucin
de peptona y una de gelatina.
Preguntas
Es la albmina una constituyente normal de la orina?
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Qu es el anillo de Heller?
Parte Experimental
Ponga 25 ml de agua destilada en un beacker y agregue lentamente con agitacin, 1g
de albmina de huevo. Agite por varios minutos y deje reposar durante 5 minutos. Filtre
la solucin a travs de un papel filtro. Si la solucin de albmina est ya preparada
pipetear 5 ml y contine con el mismo procedimiento. Pipetee 5 ml. del sobrenadante y
pngalos en un tubo de centrifuga de 12 ml. Agregue 5 ml de solucin saturada de
sulfato de amonio. La solucin estar ahora media saturacin con sulfato de amonio.
Agite el tubo y note la aparicin de una nubosidad en la solucin, debido a la
precipitacin de las globulinas presentes en la clara. Deje descansar el tubo por 5
minutos y entonces centrifugue por 10 minutos. Ponga el sobrenadante en un segundo
tubo de centrifuga y vaya agregando pequeas cantidades de sulfato de amonio slido
con vigorosa agitacin, hasta que la solucin este saturada con sulfato de amonio.
Cuando la solucin esta saturada algunos cristales de sulfato de amonio puede ser
observados. Centrifugue la solucin por 10 minutos, para colectar la albmina.
Preguntas
Cul es la diferencia entre albmina y globulina?
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PRCTICA No. 5
ALGUNAS PROPIEDADES QUMICAS DE LOS CARBOHIDRATOS
Existen algunas reacciones generales de los carbohidratos, tales como el test de Molisch,
que son utilizadas para identificar la presencia de carbohidratos, incluso glucoprotenas.
Otras reacciones son utilizadas para demostrar la presencia de carbohidratos reductores,
basndose casi todas ellas en la reduccin del in cprico, en medio alcalino, para formar
xido cuproso (Test de Benedict, Fehling, etc.). Los carbohidratos reductores se caracterizan
por poseer sus grupos aldehdos o cetnicos libres, es decir que no forman parte de uniones
glucosdicas. En los carbohidratos los grupos aldehdicos y cetnicos se encuentran en forma
de hemiacetales, por lo que su poder reductor tambin vara entre los diferentes tipos de
carbohidratos (aldosas y cetosas, monosacridos y disacridos), por lo que el tiempo en que
se realiza la reduccin del cobre, a una temperatura controlada, permite identificar en una
muestra el tipo de carbohidratos reductor que se encuentra presente. La identificacin
precisa de un determinado carbohidratos requiere de la preparacin de derivados cuya forma
cristalina a punto de fusin sean determinables, o bien de la utilizacin de mtodos
cromatogrficos.
Los monosacridos y disacridos pueden deshidratarse con cidos minerales fuertes, con la
formacin de furfural o derivados de ste. Esta propiedad se utiliza con fines analticos, ya
que los furfurales reaccionan con compuestos fenlicos, como el alfa-naftol o la resorcina,
para dar complejos coloreados, que se pueden medir colorimtricamente.
Los azcares reductores (aldosas y cetosas) reaccionan con la fenilhidrazina, para formar
cristales de formas caractersticas, llamados osazonas. La observacin de estos cristales, en
el microscopio, permite la identificacin tanto de microorganismos como de carbohidratos.
Reactivos
1. Soluciones al 1 % de:
- Manosa
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- Glucosa
- Galactosa
- Fructosa
- Ribosa
- Maltosa
Procedimiento
1. Test de Molisch
Colocar en un tubo de ensayo 2 ml de la solucin que contiene la muestra de
carbohidratos. Aadir 2 gotas de solucin de alfa-naftol al 5 %, directamente en la
solucin de carbohidratos y mezclar. Agregar 3 ml de cido sulfrico concentrado,
resbalndolo por las paredes del tubo, con el objeto de formar dos capas. En la zona de
separacin aparecer un anillo rojo violeta, el cual indica la presencia de carbohidratos.
2. Test de fermentacin
Preparar una serie de tubos (12 x 75 mm) etiquetados y aadirles 2 ml de las soluciones
de (fructosa, maltosa y glucosa al 1 %). Aadir a todos los tubos una pequea cantidad
de levadura seca y suficiente cantidad de agua destilada para cubrir la campana de
durham, asegurndose que la campana este completamente llena de la solucin. Tapar el
tubo con un corcho y dejarlo en reposo, a temperatura ambiente, durante dos a tres
horas, haciendo una marca a la altura de la solucin antes de dejarlo este tiempo. La
prueba ser positiva se aparece una burbuja de gas en el interior de la campana de
durham o si hay desplazamiento de la campana.
3. Hidrlisis de almidn
3.1 Hidrlisis enzimtica
Colocar, en un Erlenmeyer de 125 ml, 5 ml de la solucin de almidn al 1 %.
Agregar 1 ml de la solucin de amilasa diluida, mezclar, e inmediatamente despus
tomar 1 ml de la mezcla, colocndolo en un tubo de ensayo marcado como tiempo
0.
Introducir inmediatamente el tubo en un bao de agua hirviente y mantenerlo all por
dos minutos. Al cabo de este tiempo, sacar el tubo y dejarlo enfriar.
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PRACTICA No. 6
HIDROLISIS DE POLISACARIDOS
Reactivos
1. Solucin de almidn soluble, al 2%.
Para preparar 100 ml, pese 2 g de almidn, mzclelos bien con un poco de agua
destilada, mientras hace hervir 90 ml de agua aproximadamente. Cuando haya formado
una pasta con el almidn humedecido, agregue a dicha pasta el agua hirviendo, agitando
intensamente. Deje enfriar un poco y complete a 100 ml. Filtre si es necesario.
2. HCI concentrado - 50 ml.
3. NaOH al 20%- 100 ml.
4. Solucin indicadora de lugol.
Mezcle bien 2 g de KI y 1 g de Yodo; disuelva esta mezcla en agua destilada, calentando
ligeramente si es necesario. Complete a 100 ml.
5. Reactivo de Lucas
Disuelva 136 g de ZnCl2 en 89 ml de HCI concentrado.
Material Biolgico
Saliva (amilasa salival): Recolectar unos 25 ml de saliva, filtrada a travs de gasa y evitando
que tenga espuma.
Procedimiento
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Resultados
Los colores que se obtienen con con lugol deben interpretarse as:
Color azul, lila o negro: AlmidnHidrlisis ()
Color rojizo: AcrodextrinaHidrlisis parcial.
Color amarillo como el del lugol: Reaccin () Hidrlisis total.
Tiempo requerido para la hidrlisis cida del almidn: ______________________________
Resultados de las pruebas en la hidrlisis de celulosa: _____________________________
Hidrlisis enzimtica: a) Color a los 15: _________________________________________
b) A lo s 30: _____________________________________________
Preguntas
1. Cules son los productos de la hidrlisis parcial y total del almidn y de la celulosa?
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PRACTICA No. 7
EXTRACCION Y SEPARACION DE ALGUNOS LIPIDOS
Reactivos
1. Disolventes orgnicos: acetona, cloroformo, etanol, ter de petrleo y ter etlico (200 ml
de cada uno). Mantnganse perfectamente tapados y en recipientes secos.
2. Sulfato de sodio anhidro (100 g).
Materiales biolgicos:
1 yema de huevo, un hgado de rata, pollo o conejo; un cerebro de conejo.
Procedimiento
1. Extraccin y separacin de lecitina y cefalina de huevo
Separe la yema de un huevo en un vaso de precipitados de 100 ml o en un matraz
erlenmeyer de 100 ml. Agregue ter hasta cubrir totalmente la yema y agite con una
varilla de vidrie para homogeneizar bien. Agregue lentamente y sin dejar de agitar, un
volumen de acetona igual al de ter. Se observar que la acetona provoca la precipitacin
de los fosfolpidos, en tanto que las grasas y el colesterol permanecen disueltos. Filtrar,
despus de dejar en reposo unos minutos. El precipitado que contiene lecitina y
cefalina se lava con alcohol bien fro, recibiendo el filtrado en un tubo seco y limpio. La
lecitina es ms soluble en el alcohol fro por lo tanto queda en el filtro nicamente
cefalina, Para obtener la lecitina, evapore el alcohol lentamente en bao de vapor. Deje
secar los dos precipitados y pselos.
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proporcin 3: 1; que se calienta a 70C y se filtra en la misma forma. Repita por tercera
vez la extraccin con otros 10 ml de mezcla alcoholter.
Evapore el ter de los filtrados reunidos, colocando el matraz en el bao caliente, sin
flama, hasta que ya no se desprenda olor a disolventes. Enfre el matraz y agregue 10 ml
de ter de petrleo, agitando, para volver a disolver los lpidos. Filtre, recibiendo el filtrado
en una probeta seca y lavando el residuo con ter de petrleo hasta completar su
volumen total de filtrado de 25 ml.
Preguntas
1. Escriba las frmulas estructurales de todos los productos de hidrlisis de la1 - - lecitina
(dioeil fosfatidil colina).
2. Escriba la frmula general de una cefalina
3. En qu consiste la condicin patolgica conocida como hgado graso, y cules son sus
causas ms frecuentes?
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BIBLIOGRAFIA
2 BHAGABAN, N.y. Bioqumica. 2a.ed. Trad. Lpez G.; Mxico. Interamericana, 1983.
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