POTENCIALES BIOELCTRICOS

OBJETIVOS:
- Entender y comprender las propiedades elctricas de la neurona
ya que ella es el elemento bsico que explica la generacin y
propagacin de los impulsos elctricos.
- Comprender la importancia de la concentracin de los iones sodio
y potasio en el interior y exterior de la membrana para la
generacin de los potenciales de reposo y de accin.
- Explicar los mecanismos de generacin del potencial de reposo y
los potenciales de accin en clulas excitables.
- Mediante la simulacin por computadora calcular los potenciales
de equilibrio de los iones, el potencial de membrana de reposo y el
potencial de umbral.
- Comprender la importancia del potencial de umbral en la
generacin del potencial de accin.
- Estudiar y analizar el comportamiento de la clula ante un
estmulo de corriente (pulsos de corriente) haciendo uso de la
computadora.
- Analizar cada uno de los parmetros fsicos de la membrana.

MATERIALES Y EQUIPOS:
- Una computadora.
- Un tutorial interactivo: C-Clamp y V-Clamp (versin 3.2)
- Papel milimetrado.

PROCEDIMIENTO:
UTILIZANDO C-CLAMP

EXPERIMENTO 01: POTENCIAL DE EQUILIBRIO.

Nota: Grafique en forma aproximada todas las curvas que se observaran
1. Entre al programa C-Clamp.
2. Presione la tecla O para abrir el archivo y cargue el archivo
REST.CCS y luego presione para seleccionar este parmetro
del archivo. Ahora Ud.puede empezarla simulacin presionando la
tecla B.
3. Esta simulacin representa el potencial de reposo de la membrana
del axn gigante de calamar. Calcule:
a) El potencial de equilibrio del sodio ENA= -100 mV
b) El potencial de equilibrio del potasio EK= +40 mV
c) El potencial de reposo de la membrana. Em= -60 mV
4. En este modelo la membrana solo es permeable a dos tipos de
iones Na y K. estad dos permeabilidades pk y pNa intervienen para
calcular el potencial de reposo de membrana de la clula, el cual
es calculado usando la ecuacin de campo constante de GHK
(Goldman- Hodgkin-Katz).

Em= (KT/Ze) Ln {(pk. [Kp] + pNa. [Nao])/(pK. [Ki] + pNa. [Nai]}(3)

Aqu Emdepende de las concentraciones y de las permeabilidades relativas

de los iones. En la mayora de las membranas neuronales pNa es mucho
ms bajo que pk, alrededor del 2 a 6 %. Para examinar la influencia de las
permeabilidades respecto al sodio y potasio pNay pk en el potencial de
membrana, primero presione la tecla R para regresar al men de la
pantalla (lo cual ser realizado despus de cada simulacin cuando se
quiera retomar al men de la pantalla). En la computadora cambia p Na=
0.06 por pNa= 0 y presione la tecla B y anote el potencial de membrana
Em= -100 mV , lo mismo haga con el potasio.

EXPERIMENTO 2: EFECTOS DEBIDO A LOS CAMBIOS DE CONCENTRACIN DE

LOS IONES

1. Regrese al men de la pantalla y cambia las concentraciones de iones de

potasio: [K+0]=135 y [K+i]=135. Luego presione a tecla Y para determinar
la superposicin del ltimo grfico con el presente y has lo mismo con el
sodio Na+ y en cada caso anote el potencial de membrana.
Em=0 mV, para igual concentracin de potasio
Em= -87 mV, para igual concentracin de sodio

2. Para examinar el potencial de membrana con nicamente la conductancia

para el sodio, presione la tecla O y cargue el archivo REST.CSS. Presionela
tecla B para repetir el experimento bajo condiciones de control. Ahora
 cambie pk= 1 por pk= 0 y anote el potencial de membrana y explique el
porqu de dicho resultado.

El potencial de membrana es 40 mV. Esto se da porque se ha disminuido la

permeabilidad de la membrana con respecto al potasio. El potasio al interior de la
membrana se acumula generando un mayor potencial.

3. Reemplace pk= 0 por pk= 10 y anote el potencial de membrana y explique

el porqu de dicho resultado.

El potencial de membrana es -95 mV. Se debe a que al aumentar la

permeabilidad de la membrana con respecto al potasio, el flujo de iones aumenta
hacia el exterior generando una carga negativa hacia el interior y por ello un
menor potencial..

EXPERIMENTO 3: PROPIEDADES PASIVAS DE LA MEMBRANA

1. Es posible tambin registrar los potenciales de membrana neuronas

(axones) inyectando corriente elctrica. La respuesta de la membrana
debido a la corriente cambia sus propiedades pasivas de la membrana a las
propiedades activas de los canales inicos localizados en dicha membrana.
Usando la tecla O cargue y corra el archivo PASSIVE.CCS. Introduzca un
pequeo Pulso Cuadrado de corriente, por ejemplo para 0.5, 1.0, 1.5, 1.6
nA. Anote tus resultados y comente brevemente porqu el potencial de
membrana tiene la forma que se muestra en la pantalla.
Cuando se le administr una corriente de 0.5 nA se not en la grfica una
diferencia de potencial aproximada de 5mV , cuando se le introdujo una
corriente de 1 nA se produjo una diferencia de 10 mV ,cuando se le
introdujo una corriente 1.5 nA se produjo una diferencia de 15mV y
finalmente cuando se le introdujo una corriente de 1.6mA se produjo una
diferencia de 16 m V . La forma que se muestra en la pantalla se debe
A que cuando a la membrana se le suministra una corriente genera que los
canales ionicos se activen por lo que se distinguen dos curvas, una
ascendente debido al canal del sodio que entra a la clula elevando el
potencial y la otra curva descendente en la cual se expresa la salida de
potasio tratando de normalizar la membrana.

2. Encuentre el potencial del umbral en forma aproximada.

Potencial Umbral: Eu=-65 mV a una corriente inyectada de 1.65 nA
3. Vare la corriente de inyeccin de 2 nA a 10 nA y anote tus observaciones
relacionados con el potencial.
Al realizar la variacin de corriente inyectada observamos que en todos
existe un pico que sobresale y persiste a lo largo de este proceso a
diferencia de los otros picos que poco a poco si bien han aumentado el
numero de estos han disminuido su tamao hasta llegar a nivelarse de lo
que podemos concluir que el potencial de membrana aumenta segn la
corriente inyectada.

4. Calcule la resistencia y la conductividad de la membrana para los estmulos

pasivos de la corriente, desde 0.5 a 1.5 nA. Anote los resultados en la tabla
1.

TABLA 1

Corriente de Inyeccin Voltaje de Resistencia Conductancia

(nA) Membrana(mV) () (S)
7
0.5 5 10 0.1
7
1 10 10 0.1
7
1.5 15 10 0.1

EXPERIMENTO 4: PROPIEDADES ACCTIVAS DE LA MEMBRANA

Con la aplicacin de un pulso de corriente Ud. Deber pasar el umbral para

generar los potenciales de accin. Para ello cargue el archivo PASSIVE.CCS.
y cambie la corriente de inyeccin de 1,5 nA a 2 nA luego presione la tecla
B. Anote lo observado.
Al aumentar la cantidad de corriente inyectada apreciamos la aparicin de
5 picos alcanzando el mayor potencial el primer pico a diferencia del primer
caso en los cuales no existan esos picos.

EXPERIMENTO 5: EFECTOS DE LOS IONES SOBRE LA GENERACIN DE

IMPULSO

Cargue el archivo ACTIVE.CCS. y cambie las concentraciones de los iones

en el exterior a 0,1 mM y cada vez que lo haga presione la B, recuerde
restaurar los valores originales cargando el archivo ACTIVE.CCS. con la
tecla O despus de haber cambiado la concentracin de un in en particular
Qu iones son particularmente significativos en el potencial de
membrana?
 El sodio y el potasio son iones significativos debido a que al variar su
concentracin en el exterior muestran clara diferencia en los grficos ya
que al inicio apreciamos picos lo que no se evidencia al variar estos iones.

Cargue ACTIVE.CCS y presione la tecla B. Ahora reduzca la concentracin

de [K+]0 a 0,1 mM y luego presione la tecla Y. Ud. Notar que los resultados
de sta manipulacin en el potencial de membrana de reposo se
hiperpolariza. Para compensar este cambio en el potencial de membrana
cambie la corriente base a 0,8 nA y luego presione la tecla B. La
disminucin de la concentracin de potasio [K+]0 elimina la generacin de
potencial de accin? Por qu?
No, porque al haber menor cantidad de K en el exterior la clula va a
buscar compensar esta falta tratando de retener la mayor cantidad de
iones K debido a que si pierde estos iones va a hiperpolarizarse y con esto
no lograra alcanza el equilibrio requerido.

UTILIZANDO V-CLAMP

EXPERIMENTO 06: ANLISIS DEL VOLTAJE CLAMP DE LAS CORRIENTES

DE SODIO Y POTASIO

Entre al programa V-Clamp, presione O y cargue NA_K.VCS+.

Presione B, en este experimento Ud. Tiene que llevar el potencial
de membrana de 100 mV y medir la corriente que Ud. Tuvo que
aplicar para mantener este potencial de membrana constante el
cual, en un sistema cerrado es igual a la corriente que fluye por
los canales inicos.

EXPERIMENTO 07: EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE IONES SORE

LAS CORRIENTES INICAS

Cargue NA_K.VCS y luego cambie las concentraciones de [Na +],

[K+] en el interior y el exterior (no olvide restaurar los valores
originales despus de cada cambio). Por ejemplo cambie [Na +]o a
30 mM y luego anote tus observaciones respecto a las corrientes
del Na+y K+.
Los valores normales oscilan entre -200 a 125 nA y al variar la
corriente en el [Na+]o la diferencia de corrientes es de 125 nA y al
cambiar el [K+]o la diferencia de corrientes es de -200 nA.
Ahora restaure su valor original de [Na +]o= 145 y cambie la
concentracin del potasio [K+]i a 3.1 mM de tal modo que la
corriente del potasio quede eliminado. Presione B. Notar que la
corriente del Na+ y la corriente de K+difieren en varios aspectos.
Cules son esas diferencias?
Cuando variamos el potasio observamos que solo queda el sodio
por ende la curva mantiene su pendiente y llega a 0 mientras que
al variar el sodio solo queda el Potasio por ende su pendiente
desaparece e incluso su curva es de menor tamao.