UNIVERSIDAD NACIONAL

INTERCULTURAL DE LA AMAZONIA
FACULTAD DE INGENIERIA Y CIENCIAS
AMBIENTALES
CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

PLAN DE TRABAJO
PRACTICAS PRE PROFESIONALES

TEMA : Aislamiento de cepas fermentadoras del cacao y extraccin de

ADN en la regin de HUANUCO-TINGO MARIA

EJECUTOR : Melgarejo Pablo, Delcy G.

ASESOR : M.Sc. Manuel Guerrero Ochoa

DURACION : enero - abril del 2016

 GUA PARA EL DESARROLLO DE LAS PRCTICAS PRE-
PROFESIONALES
1. Ttulo de la Prctica
Aislamiento de cepas fermentadoras de Cacao y extraccin de ADN en la regin de
HUANUCO-TINGO MARIA.

2. Objetivo de la Prctica
2.1. Objetivo general
Identificar tipos de microorganismos en las diferentes etapas de fermentacin
del cacao.

2.2. Objetivo especfico

Identificacin y extraccin del ADN.
Anlisis de PCR

3. Marco Terico de la Prctica

El cacao son semillas del rbol Theobroma cacao, que vienen en una vaina. Esta
tiene entre 30 y 40 granos envueltos en una sustancia mucilaginosa de aspecto
gelatinoso. El cacao crudo tiene un sabor astringente desagradable, de manera
que debe ser tratado mediante un proceso en el que los microorganismos, a travs
de una fermentacin, modifiquen sus componentes. Posteriormente los granos son
secados y rostizados, para que se desarrollen las caractersticas sensoriales del
chocolate.
Los granos de cacao tienen un sabor cido desagradable, por lo que para obtener
cacao con el color y el sabor del chocolate deben ser fermentados, tostados y
secados. En el proceso de fermentacin participan los microorganismos que se
encuentran naturalmente en los granos, de entre los cuales actan primeramente
las levaduras. Posteriormente actan las bacterias lcticas y, finalmente,
intervienen las bacterias acticas, los Bacillus y las enterobacterias. Esta
fermentacin es esencial tanto para modificar los granos, eliminando el muclago,
como para preparar el grano que requieren las enzimas encargadas de modificar su
color, sabor y olor, produciendo tambin compuestos de sabor. La fermentacin es
una etapa del procesamiento del grano de cacao, que requiere an de
investigacin, ya que hasta la fecha sigue siendo bastante emprica. Una
 fermentacin en condiciones controladas permitir obtener cacao de buena calidad
y de caractersticas homogneas.

EXTRACCION DE ADN:
Para una extraccin de DNA efectiva usted deber conocer las caractersticas
bsicas de la muestra con la que trabajar, se debe conocer si el DNA a ser
extrado proviene de una clula procaritica o eucaritica dado que los
componentes que forman la pared y membrana celular de estos organismos es
distinta. Existen diversos mtodos de extraccin de DNA que se ajustan a las
necesidades de cada tipo de muestra, estos incluyen tratamientos fsicos, qumicos,
enzimticos o una combinacin de los mismos.
La preparacin de amortiguador de lisis para una extraccin de DNA es un ejemplo
de un mtodo qumico de extraccin. En dicho amortiguador se le aaden
detergentes tales como el SDS, CTAB o enzimas tales como la lizoenzima y
agentes qumicos los cuales promueven una lisis celular efectiva.

4. Actividades
4.1. Reconocimiento de las instalaciones:
Se reconocer las instalaciones del laboratorio de micro propagacin

4.1.1. reas
El laboratorio se encuentra siguientes reas:
rea de administracin tramitara
rea de preparacin de medios
rea de sembro.
rea de incubacin.

4.1.2. Materiales
Los materiales a usar en la presente prctica son los siguientes:
Placa petri.
Tubo de ensayo
Vaso presipitado
Asa de col, asa didtrasky
Matraz
 4.1.3. Equipos
Auto clave.
Balanza
Bao maria
Centrifuga.
Cama de flujo laminal.
Refrigeradora.
Electroforesis.
Trasluminador.
Microscopio.

4.1.4. Medios de cultivo:

Agar saburon
Agar plate count

4.2. Preparacin de medios de cultivos (selectivas): en esta parte de la prctica

se elabora los medios de cultivos como Agar Plate Count, Agar Sangre, Agar
Saboraud, en diferentes placas petri, que se dejara gelificar, para luego pasar
al siguiente paso q ser el sembro.

4.3. Colecta de las muestras de fermentacin de caf: se obtendr las muestras

de La Cooperativa Alto Huallaga de Castillo Grande.

4.4. Cultivar los microorganismos en el medio de cultivo: unas ves preparadas

los medios de cultivos y de haber obtenido las muestras se pasara al sembro
de las muestras, para luego llevar al incubado.

4.5. Analizar las cepas microbianas (codificada): se realiza el conteo de colonias

y la identificacin de los tipos de microorganismos que se han reproducido en
esa placa.

4.6. Realizar pruebas de extraccin de ADN: la extraccin del ADN mediante el

mtodo de RAPD, para poder cuantificar e identificar la informacin gentica de
los microorganismos que se encuentran en la fermentacin del cacao
4.7. Anlisis de secuencias bioinformtica.

Cacao fermentado

Medios de cultivos

Colecta de muestra

Siembra de muestra en un
MC

Anlisis de cepas
microbianas

Extraccin de ADN
 5. Cronograma
ENERO FEBRERO MARZO

ACTIVIDADES SEMANAS SEMANAS SEMANAS

SEM SEM SEM SEM SEM SEM SEM SEM SEM SEM SEM SEM
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
1. Reconocimiento de la x
instalacin
2. Reconocimiento de reas, x
materiales y equipos
3. Colecta de muestra x
4. Reconocimiento de los x x
mtodos de anlisis

4.1. Preparacin de medios x

de cultivos.

4.2. Preparar la muestra x

para analizar y hacer las
diluciones.

4.3. Hacer el sembro x

correspondiente en los
medios de cultivos.

4.3. Determinacin de x x
microorganismos en la etapa
de fermentacin

4.4. Identificacin de x
microorganismos.

x x
5. Tratamiento de datos
6. Bibliografa

Cleenwerck, I., A. Gonzlez, N. Camu, E.Engelbeen, P. de Vos, L. de Vuyst.

2008. Acetobacter fabarum, sp. Nov., an acetic acid bacterium from a
Ghanian cocoa bean heap fermentation. International Journal of Systematic
and Evolutionary Microbiology

Camu, N., De Winter, T., K. Addo S., J.S. Takrama, Bernaert, H. and L. de
Vuyst. 2008 Fermentation of cocoa beans: influence of microbial activities
and polyphenol concentrations on the flavor of chocolate. Journal of the
Science of Food and Agriculture

Hotzel, H., Mller, W. y Sachse, K. (1999). Recovery and characterization of

residual DNA from beer as a prerequisite for the detection of genetically
modified ingredients. European Food Research Technology