UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO FACULTAD DE

CIENCIAS BIOLOGICAS
1. INTRODUCCIN

La Hernia de la col, tambin llamada Hernia de la berza y Hernia de las

crucferas, as se le llama comnmente a la enfermedad causada por este
patgeno, es una enfermedad altamente destructiva que ataca las plantas de
brcoli, coliflor, coles de Bruselas, repollo y algunas crucferas silvestres.
(Cedeo et al), es causada por el protozoario Plasmodiophora brassicae y
constituye el factor que ms limita la produccin de crucfera para consumo
humano y de forraje en el mundo.

Por el efecto de esta enfermedad, algunos agricultores han abandonado el

cultivo trasladndose a nuevas reas potenciales para el cultivo de crucferas,
las cuales tambin podran resultar contaminadas con el patgeno, si no se
aplican correctas medidas de prevencin. Hasta el momento, no existe una
forma efectiva de control, por lo cual el agricultor abandona la siembra de
crucferas en lotes afectados, al menos por diez aos, mientras actan controles
naturales (Agrios, 2005 y vila De Moreno, 1992).

2. MARCO TERICO
La hernia es una enfermedad que afecta prcticamente a todas las crucferas;
se ha observado en los cultivos de repollo y coliflor, es una de las enfermedades
ms importantes del repollo, la coliflor, Cuando la enfermedad se inicia en el
semillero hay una prdida alta de plntulas durante el trasplante y cuando ocurre
en plantas en desarrollo, no hay una adecuada formacin de cabezas. La
enfermedad disminuye el tamao de las cabezas y se estima que puede causar
disminucin del 20 50% en los rendimientos (vila De Moreno, 1992).

2.1. EPIDEMIOLOGIA
La penetracin de Plasmodiophora brassicae, se produce si existe en la zona
cultivos de crucferas, incluidas las malezas crucferas, en los suelos infectados
con el patgeno, en este caso las esporas de resistencia que pueden
permanecer en latencia de 6 a 10 aos o ms producidas en las agallas
radiculares, las cuales germinaran en respuesta a exudados de las races .

Los terrenos con malos drenes permiten el movimiento y dan facilidad a las
zoosporas de trasladarse a su hospedero, la enfermedad es ms severa en
suelos hmedos que en suelos secos y el desarrollo de la misma tiene lugar
cuando el contenido de humedad se encuentra entre el 30 y el 90% de su
capacidad de campo, con un ptimo entre 45 y 70%. (Agrios, 2008).
 Un pH por debajo del neutro provoca una alta tasa de germinacin de esporas
de resistencia, la enfermedad se desarrolla mejor en suelos cidos que en
alcalinos. Suelos con pH de 5.7 favorecen la germinacin de los zoosporangios
y la penetracin de las zoosporas en las races. Por el contrario, la actividad del
patgeno decae entre pH de 5.7 y 6.2 y se inhibe por completo a pH igual o
mayor de 7.8. (Agrios 2005).
El patgeno se desarrolla mejor en suelos fros, hmedos y cidos, y
consecuencialmente, en tales condiciones el nmero de plantas enfermas es
mucho mayor. En suelos cidos la enfermedad ocurre a temperaturas que van
desde 10 C a 35 C, pero las ms favorables las comprendidas entre 20 C y
25 C. En los suelos alcalinos el rango de temperaturas favorables es mucho
menor. (Cedeo et al, 2005).

2.2. AGENTE CAUSAL Y RESEA HISTRICA

La presencia de esta enfermedad en las crucferas ha sido reconocida de varios
cientos de aos y durante ese tiempo diferentes hiptesis fueron formuladas
para explicar su causa. Los informes histricos de hernia de la raz remontan al
siglo XIII en Europa. En el siglo XIX, una epidemia severa de hernia de
crucferas destruy enormes poblaciones de la cosecha de col en San
Petersburgo, Rusia. En una tentativa de ganar ms informacin sobre la
enfermedad, la Sociedad de Horticultura Rusa ofreci un premio a alguien que
podra identificar la causa, y sugerir un control de la hernia en la raz de col.
Woronin, un cientfico ruso satisfactoriamente identific la causa de la hernia de
la raz como un " plasmodiophorous el organismo " en 1875, fue entonces para
1878 que la verdadera naturaleza de esta enfermedad fuera descubierta por el
miclogo ruso WORONIN quien reporto el hongo Plasmadiophora brassicae
Wor., demostrando ser el agente causal de la "hernia de las crucferas" (NC
State University citando a Karling J.S., 1968.)
La hernia es causada por un microorganismo llamado Plasmodiophora
brassicae, el cual vive en el suelo y provoca la enfermedad en cultivos
pertenecientes a la familia de las Crucferas y en cuatro especies de plantas de
otras familias. Plasmodiophora brassicae es un microorganismo (Protozoo),
tambin considerado moho mucilaginoso, es parasito obligado, lo cual quiere
decir que no puede crecer y multiplicarse sin un hospedero vivo, es endoparsito
necroflico de las plantas vasculares, se encuentra ampliamente distribuido en
los suelos, donde hibernan como espora de reposo, cuyo estructura somtica
son clulas multinucleadas, protoplastos sin pared, generalmente conocidos
como plasmodio, estructura que es distinta del plasmodio del filo Myxomycota.
El plasmodio se transforma en zooesporangios o esporas de reposo, que
produce abundantes zoosporas secundarias, despus de apareamiento,
penetran la raz o el tubrculo, produciendo nuevamente plasmodio y ocasiona
la enfermedad. (Agrios, 2005).
 Figura 1. Esporas de resistencia de Plasmodiophora brassicae
Imagen de referencia tomada de
Science Photo Library, 2014, con
Microscopio Electronico de Barrido
(SEM) de una seccin transversal de
raz de col infectada.

2.3. UBICACIN TAXONOMICA

El microorganismo P. brassicae se encuentra ubicado en el reino Protozoa.
Plasmodiophoromycota es bien definido como un grupo mono filetico debido a
varios caracteres incluyendo su divisin nuclear cruciforme. La mejor evidencia
disponible que sugiere que el grupo est relacionado con protistas ciliados.
(Barr, 1983; Castleburry, 1994; Alexopoulos, 1996) Esta hiptesis es respaldada
por el anlisis de Small-subunit rRNA. Anteriormente a P. brassicae se le
clasificaba en el filo Plasmodiophoromycota contiene la nica clase
Plasmodiophoromycetes con el nico orden Plasmodiophorales y la nica
familia Plasmodiophoraceae. (Karling, 1968). Descripciones breves de gnero y
especies pueden ser provistas por Dylewski (1990), quien reconoci un total de
29 especies en 10 gneros, incluyendo Plasmodiophora, Sorosphaera,
Spongospora, Sorodiscus, Octomyxa, Polymyxa y Woronina.
Este gnero est delimitado por las bases de su morfologa y distribucin de
esporas resistentes (sporosori), sin embargo se han expresado dudas sobre la
fiabilidad de tales caractersticas.

CLASIFICACIN ACTUAL

Reino: Protozoa
Phylum: Cercozoa
Clase: Phytomixea
Orden: Plasmodiophora
Familia: Plasmodiophoraceae
Gnero: Plasmodiophora
Especie: Plasmodiophora brassicae
2.4. REPRODUCCIN
Asexual
Las esporas de Plasmodiophora brassicae posee una oscura pared la cual
contiene quitina pero no celulosa. En cuanto a la germinacin usualmente
emergen zoosporas. La zooespora posee dos flagelos heterocontos anteriores,
como lo demostr Ledingham (1934), el flagelo ms largo es el que propulsa
hacia adelante y el ms cort dirige perpendicularmente. Est demostrado que
ambos de estos flagelos son de tipo ltigo septados y que ninguno de los dos
es de tipo barbulado.
La zooespora es de tipo ameboidea, en dados casos se aparean entre ellas
formando Mixamebas, al entrar en contacto con los pelos radiculares o clulas
epidrmicas de la raz del hospedero susceptible, el flagelo desaparece y un
agujero es creado en las paredes celulares del hospedero, por el cual el
amiboideo ingresa, entonces este agujero es sellado probablemente por accin
del hospedero.
Sexual: Mediante Mixoflagelados que poseen dos flagelos heterocontos y
lisos (Sobrado et al, 2013).
Haplofase: Plasmodio haploide (gametofito) + gametos + aplansporas +
zoosporas.
Diplofase: plasmodio diploide (esporofito) + zigoto (Cocucci et al, 1994)

2.5. CICLO DE VIDA

El ciclo de vida de los plasmodiophoros involucra la produccin de dos fases
plasmodiales diferentes: una fase es llamada fase Primaria o Plasmodio
esporangial y da origen a un zooesporangio de pared fina, de la cual se origina
la fase Secundaria o esporognica (o, por soma). El plasmodio produce paredes
gruesas de quitina, son las esporas de resistencia capaces de sobrevivir a
desecacin del cual germina una zoospora. Durante su crecimiento tanto
primario como secundario el plasmodio se caracteriza por distintivas fases
mitticas, las cuales por lo visto se han asociado a centriolos. Durante la mitosis
un huso intranuclear es formado, sobre el cual los cromosomas son distribuidos
en anillo alrededor del nuclolo. Al separase los cromosomas, un anillo de
cromosomas pasa a cada polo. Los nuclolos persisten por tiempos y alargan.
La elongacin del nuclolo est rodeada por el anillo de cromosomas lo cual
ofrece un aspecto semejante al de una cruz cuando es vista desde el lado.
(Alexopoulos et al. 1996).
Se puede destacar que aunque la divisin de plasmodio cruciforme es un
carcter nico entre protistas con patrones fungus, no todas las divisiones
nucleares son cruciformes en plasmodiophoros.
 Las divisiones ocurren durante la transicin de plasmodio primario a
zooesporangio y del plasmodio secundario (meiotico) a esporas de resistencia
carente de la divisin cruciforme. De la misma manera los procesos mitticos
ocurren en la fase esporangial durante zooesporogenesis, no es cruciforme.
Dispersin: Las zoosporas pueden estar presentes probablemente en el suelo o
agua como resultado de la desintegracin de tejidos infectados. Cada espora de
resistencia es capaz de germinar usualmente para formar una zoospora primaria
capaz de infectar a un hospedero apropiado. Esta movilidad permite realmente a
las zoosporas buscar" a plantas hospedantes potenciales en lugar de confiar en
los mtodos de distribucin al azar, como el viento o la lluvia. La fase de natacin
zoosporas es de corta duracin.

Penetracin: Una zoospora ataca la pared de los pelos radiculares tan pronto
como sea posible el flagelo llega a estar inactivo, por la retraccin de los axonemas
en la zoospora. Una vez dentro la zoospora enquistada desarrolla una estructura
denominada Rohr. La punta del rohr se cohesiona a la pared del hospedero que
es llenada de un tapn de tincin no-intenso. Dentro del rohr se encuentra una
espina, de tincin intensa llamada Stachel. Siguiendo una evaginacin del Rohr
para formar un similar a una estructura de apresorio bulboso que se adhiere a la
pared celular del hospedero, el Stachel tambin emerge a perforar la pared celular
del hospedero, y el protoplastos de la zoospora enquistada entra en la clula. De
acuerdo a Aist y Williams (1971), el protoplastos solo requiere alrededor de un
segundo para ingresar en el pelo radicular.

Infeccin: El protoplasto, que se asemeja a una pequea ameba esfrica, es

arrastrado por la transmisin citoplasmtica de la clula.
Continuando con la penetracin de un pelo radicular o clula epidrmica del
hospedero por una zoospora primaria enquistada, el protoplasto uninuclear
plasmodiophoro es llevado al interior de la clula por ciclosis. La divisin
mittica cruciforme ocurre y el protoplasto se enloga para formar el plasmodio
esporangial o primario. En el caso de las hernias patgenas, P. brassicae, el
plasmodio primario aparentemente se fusiona con otro. Despus el plasmodio
primario alcanza cierto tamao, determinado en gran medida por el tamao de
las clulas epidrmicas del hospedero, escinde en segmentos que se desarrolla
en zooesporangio. Tal zooesporangio puede ocurrir individualmente o pueden
estar libremente agregados. En algunas especies estn organizados en sori.
Las zoosporas secundarias estn adheridas dentro y pueden ser liberadas por el
zoosporangio ya sea directamente en otras clulas del hospedero o fuera de la
raz.
2.5.1. Colonizacin: Liberar al suelo implica desintegrar las clulas del hospedero
o la formacin de un tubo de salida por parte del zooesporangio.
De acuerdo a DAmbra y Mutto (1977), el desarrollo del tubo de salida es rico en
pequeas vesculas que se piensa contienen enzimas responsables del
ablandamiento de la pared celular del hospedero. El compartimiento
zooesporangial eventualmente penetra la pared celular, formando un tubo de
salida a travs del cual las zoosporas secundarias pasan a incrustarse en el
suelo. En seguida las zoosporas secundarias entran en contacto con tejidos de
un hospedero apropiado. Tal como el proceso descrito en las zoosporas
primarias. Una vez dentro del hospedero, el protoplasto plasmodiophoro se
desarrolla en un plasmodio secundario o esporangial el cual libera hormonas
vegetales (IAA), cido inloactico una auxina, la cual causa que las clulas
hospederas incrementen 20 veces su tamao normal.
Como plasmodio secundario, este llega a establecerse en el cortex y los tejidos
vasculares, las clulas del hospedero a menudo padecen de una extensiva
hipertrofia e hiperplasia. Eventualmente este plasmodio experimenta escisiones
para formar esporas de resistencia, que son producidas sueltas o en
asociaciones libres, las esporas de resistencia son producidas normalmente en
masas llamadas sporosori.
Las esporas de resistencia son liberadas al medio ambiente sucediendo a la
muerte y desintegracin de las clulas hospederas donde algunas quedan en
estado de latencia para germinar alrededor de 8 aos despus formando
zoosporas primarias. (Alexopoulos, 1996).
 Figura 2. Ciclo de Vida, penetracin, infeccin, colonizacin, dispersin y
germinacin de Plasmodiophora brassicae.

Ciclo de vida de Plasmo Plasmodiophora brassicae, elaborado por autores

tomando como referencia distintas fuentes, se puede observar los dos ciclos de
derecha a izquierda, infeccin primaria e infeccin secundaria, que ocurren en
el hospedero, como as mismo se puede ver el proceso de penetracin en el
pelo radicular de la raz, la funcin del apresorio y la espina para ingresar en la
epidermis es crucial en la infeccin, formando zoosporas dispersas en el suelo
que se aparean en para infectar races que colonizaran las dems clulas por el
plasmodio secundario que posteriormente producir esporas de resistencia
liberadas en el suelo por la desintegracin de los tejidos vegetales, para
germinar luego en zoosporas con el fin de perpetuar el ciclo anteriormente
mencionado.
2.6. SINTOMAS
El primer sntoma de la enfermedad en el cultivo es la presencia de
marchitamiento y clorosis de la parte area, siendo ms marcada en horas de
mayor intensidad solar, pero pueden recuperarse durante la noche, luciendo
frescas las plantas en la maana. La enfermedad puede destruir a las plantas
jvenes al cabo de un breve tiempo despus de haberse producido la infeccin,
mientras que las plantas adultas sobreviven pero no producen cosechas
comerciables (Agrios, 2005). Antes del marchitamiento aparentemente estas
presentan un normal crecimiento, pero la respuesta de este no se mantiene, por
tal motivo las plantas enfermas quedan pequeas, se tornan amarillas y
finalmente mueren. Cuando el marchitamiento ocurre lleva a pensar que el
mecanismo para la absorcin y transporte de agua han sido interrumpidos, Por
lo cual las races son examinadas, La raz presenta tumores, o hinchamientos
en forma de huso, los cuales son lisos al principio y posteriormente se vuelven
rugosos. En el caso de la raz principal, este es globoso y de un dimetro de 2
a 5 cm mientras que en las secundarias los tumores son alargados. Como
consecuencia, el desarrollo del eje principal queda detenido, dando lugar a la
produccin de numerosas raicillas anormales, largas y fibrosas (Monterroso
1974), al ocasionar dichas malformaciones en la raz se dificulta la absorcin de
agua y nutrientes a los rganos de la planta, por esto, las plantas muestran al
inicio un vigor normal, pero gradualmente se va produciendo un enanismo. La
enfermedad al marcarse severamente, puede incluso causar la muerte de la
planta (Agrios, 2005). El grado de desarrollo de esta anormalidad es
determinado por varios factores, de los cuales los ms importantes son: tiempo
de infestacin, la especie, la respuesta de crecimiento de la planta y condiciones
del suelo tales como humedad y temperatura. Cuando el ataque ocurre
temprano y es severo la planta puede morir. Ataques menos severos en plantas
jvenes ya desarrolladas producen deformaciones en las races. Cuando la
infeccin es tarda, la planta es pequea, pero puede sobrevivir. La hipertrofia
es mayor en races de tipo suculento que en races de naturaleza fibrosa.
Cunningham en base a exmenes de varios miles de plantas. inc1uyendo 28
gneros y 104 especies, describi 6 tipos de hipertrofia en las races de
crucferas.
1. Completo ahusamiento de la raz principal y races laterales como en
Brassicae oleracea.
2. Ahusamiento de la raz principal, y las raicillas laterales libres como en
Sisymbricem altissimum.
3. Ahusamiento de las races laterales con la raz principal libre como en S.
officinale, y Erysimum cheiranthoides.
4. Ahusamiento en la raz y races laterales, libres estas raicillas por encima de
1a porcin enferma como en Lepidium sativum.
 5. Ahusamiento como tumores de las races como en Raphanus sativus.
El tipo de hipertrofia reportada por Cunningham en B. Oleracea puede ser
considerada caracterstica de la enfermedad como ocurre con la mayora de las
crucferas cultivadas.

2.7. RELACIN PLANTA- PATGENO

En algunas especies el plasmodio parece ser intracelular, separado del
citoplasma del hospedero solo por la membrana plasmtica del plasmodio, el
cual en otras especies el contacto entre membranas plasmticas de ambos (la
clula hospedero y la clula plasmodio) es tan estrecho que puede provocar
interfaz hospedero- patgeno. (Aist & Williams, 1971).
El patgeno Plasmodiophora brassicae induce el incremento en los niveles de
Auxinas (IAA) en sus hospedantes correspondientes, adems de producir l
mismo la hormona. Afecta los vasos del xilema y pueden llenarse de las
estructuras del patgeno y con sustancias que ste secreta o el hospedante en
respuesta al patgeno, lo que hace que se obstruyan o destruyan, haciendo que
estos dejen de funcionar adecuadamente y evitando el ingreso de agua a travs
de ellos porque las clulas del xilema o las que se encuentran entorno a ellas
ejerzan cierta presin sobre los vasos xilemticos los cuales se comprimen y
dislocan (Agios, 2005).
2.8. DISEMINACIN
Las esporas de resistencia de P. brassicae pueden dispersarse a travs del
transporte de suelo infestado por medio de herramientas, equipos, animales y
seres humanos. Por lo general (Figura 3), en los campos no contaminados llega
en los materiales de trasplante (plntulas) infectados y tambin en las aguas
que atraviesan suelos donde se ha presentado la enfermedad. Las esporas en
reposo pueden estar presentes en el sedimento del agua del estanque,
especialmente aquellos alimentados por agua lluvia y escurrimiento, donde se
utiliza agua que para el riego. El bombeo de agua de los estanques con agua
que contiene esporas en reposo es probable que propague el patgeno en los
semilleros libres de patgenos y los campos. (vila De Moreno, 1992)
Figura 3. Potenciales fuentes de suelo infestado.

Fuente: Manitoba.ca. Los medios posibles

por los cuales suelo infestado con P.
brassicae podra propagarse de una zona
de produccin a otro.

DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
Induccin de aparicin de Estructuras
En la cmara hmeda, luego de dos semanas se puede observaron sobre las
races unas estructuras blanquecinas, 2011, quien describe que luego de este
procedimiento se pueden observar estructuras vegetativas (soma) el cual est
constituido por una masa multinucleada, sin pared celular. Dicho cuerpo
vegetativo es de tipo plasmodial.
Figura 5. Races de Brassica oleracea en cmara hmeda al cabo de 2semanas

Al cabo de 5 semanas las races presentaron un color marrn, adems de

presentar podredumbre, olor ftido.
Extraccin de P brassicae por mtodo de extraccin de bacterias.
Luego de realizar la extraccin y proceder a siembra en medio de cultivo (Agar
Nutriente), a la siguiente semana se observa el crecimiento del protozoo
Plasmodiophora brassicae, las colonias presentaron un color amarillo, bordes
finamente rugosos y brillante (Figura 7).

Figura 7. Crecimiento d Plasmodiophora brassicae en medio de cultivo Agar

Nutritivo.

Fuente: Autores
Tincin de Plasmodiophora brassicae
Luego de hacer la tincin y hacer la observacin en microscopio, no fue muy
clara la imagen, aunque puede observar algunas estructuras no muy bien
definidas (Figura 8), las cuales se tieron de azul ms intenso que el resto de la
muestra, que al compararlas con las de esporas de resistencia totalmente
identificadas son muy similares. Esto mismo fue reportado por Soler et al 2012,
quienes en la tincin de quistosoros, plasmosios o zoosporangios en
spongospora subterrnea, el colorante azul tie de azul todos los tejidos de la
planta y las estructuras de S subterrnea lo hacen de azul ms intense porque
son ms densas. Aunque tambin afirman que esta tcnica no permite
diferenciar entre estructuras de S. subterrnea con las de otros patgenos o
simbiontes de las races.
Figura 8. Tincin de esporas de reposo Plasmodiophora brassicae.

Fuente: Autores. La flecha indica la posible presencia de esporas de reposo de

Plasmodiophora brassicae.
Durante la observacin se tuvo dudas acerca de la presencia de nematodos,
surgiendo la hiptesis de ser los posibles causales de las hipertrofias, pero
segn Aballay et al, las crucferas liberan compuestos alelopticos a travs de
la volatilizacin, o exudacin de las races, o de la disolucin y descomposicin
de las plantas o residuos, donde estos numerosos de estos compuestos son
nematxicos o nematostticos sobre distintas especies de nematodos
fitoparasitos. Gommers y Bakker 1988, hablan de que las crucferas contienen
biosidas, los cuales son usados como controladores de nematodos pues
interfieren en el ciclo vital del patgeno.
Por lo cual se descarta esa hiptesis.
3. BIBLIOGRAFIA
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INFOGRAFA
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