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Etude des effets antimicrobiens des extraits de thym

1-Activation des inocula bactriens

0,25 g Lactobacillus bulgaricus (lyophilis) 0,25 Streptococcus thermophilus (lyophilis)

Ensemencement

10 ml 10 ml
Bouillon nutritif Bouillon nutritif
(Extrait de viande (Extrait de viande
+Peptone+NaCl ou +Peptone+NaCl ou
KCL) KCL)

Incubation

Etuve

37C /03 heures

0,1 ml 0,1 ml
Solution mre Solution mre

Ensemencement en surface par


inondation

Boite Ptri Boite Ptri

Milieu MRS Milieu M17

Incubation
37C/24 heures

Culture bactrienne

1
Etude des effets antimicrobiens des extraits de thym
2 -Mthode de contact direct (Bourgeois et Leveau, 1980).

Lactobacillus bulgaricus Streptococcus thermophilus

Anse de platine Anse de platine

10 ml 10 ml
Bouillon nutritif Bouillon nutritif
(Extrait de viande (Extrait de viande
+Peptone+NaCl ou +Peptone+NaCl ou
KCL) KCL)

Incubation
37C/24 heures

Etuve

Solution mre Solution mre


Lactobacillus bulgaricus Streptococcus thermophilus

1ml 1ml
1ml 1ml
A jeter A jeter
Eau
9 ml

9 ml

9 ml
9 ml

9 ml

9 ml

9 ml

9 ml

9 ml

9 ml

physiologique

10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5

Dultions dcimales Dultions dcimales


2
Dilution des extraits

Aprs extraction si on obtient 50 ml dextrait pur, les dilutions leau distille raison
de 0, 20, 40, 60, 80 et 100% doivent tres ralises comme suit :

1- On partage lextrait pur (100ml) sur 5 tubes de 10 ml


2- Les dilutions seront ralises comme suit
0% 0 ml deau distille est ajoute 10 ml de lextrait pur.

20% 10 ml dextrait pur on ajoute 2 ml deau distille

40% 10 ml dextrait pur on ajoute 4 ml deau distille

60% 10 ml dextrait pur on ajoute 6 ml deau distille

80% 10 ml dextrait pur on ajoute 8 ml deau distille

100% 10 ml deau distill (Tmoin).

3
Lactobacillus bulgaricus Streptococcus thermophilus

Ferments
9 ml

9 ml

9 ml
9 ml

9 ml

9 ml
9 ml

9 ml

9 ml

9 ml
lactiques dans
leau
physiologique

10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5
1ml 1ml

Eau distill
Eau distill

Extrait pur
Extrait pur

9 ml

9 ml

9 ml

9 ml
9 ml
9 ml
9 ml

9 ml

9 ml

9 ml

9 ml

9 ml

20% 40% 60% 80%


20% 40% 60% 80%

Incubation/37C Incubation/37C

LECTURE DES RESULTATS APRES 24, 48,72 HEURES


4
Etude des effets antimicrobiens des extraits de thym
3- Mthode des disques par diffusion sur glose (Prescott et al., 2003).

a-Confection des disques

Disque de 6mm de diamtre


Papier filtre Whatman n1

Strilisation lautoclave
120 C /20mn

b-Test de diffusion

Streptococcus thermophilus Streptococcus thermophilus


dans le bouillon nutritif dans le bouillon nutritif

1ml 1ml

Ensemencement par Ensemencement par


inondation sur boites ptri inondation sur boites ptri

15 15
MRS M17

5
Trois disques sont imbibs dans Trois disques sont imbibs dans
Lextrait pur, 20%,40%,60%,80%. Lextrait pur, 20%,40%,60%,80%.
Pendant 5mn Pendant 5mn

Disque imbib dans


lextrait pur
20%

40%

60%

80%

Pnicilline

15 boites

La lecture des diamtres dinhibition se fera aprs incubation des boites de Ptri 37C
pendant 24, 48 72 heures laide dun pied colis (Guignar, 1998).

6
Etude des effets antimicrobiens des extraits de thym

4-Dtermination de la concentration minimale inhibitrice CMI

0,25 g Lactobacillus bulgaricus (lyophilis) 0,25 Streptococcus thermophilus (lyophilis)

Ensemencement

10 ml 10 ml
Bouillon nutritif Bouillon nutritif
(Extrait de viande (Extrait de viande
+Peptone+NaCl ou +Peptone+NaCl ou
KCL) KCL)

Incubation

Etuve

37C /03 heures

0,2 ml 0,2 ml
Solution mre Solution mre

Ensemencement en tube

Contenant 2 ml (Muller-
Hinton
Extrait pur

Muller-Hinton
2 ml

2 ml
2 ml
2 ml

2 ml
2 ml

20% 40% 60% 80%

Chaque tube 3

Ex : 20 % on ajoute 0,4 de Muller Hinton lextrait 7


pur
Etude des effets antimicrobiens des extraits de thym
5-Dtermination de la concentration minimale bactricide (CMB)
La concentration minimale bactricide dune espce de germe lactique tudi reprsente la plus petite
concentration dextrait de la plante qui laisse 0,01% au moins de survivant de linoculum initial aprs
incubation (Moroh et al., 2008).

Lactobacillus bulgaricus Streptococcus thermophilus

Ferments
9 ml

9 ml
lactiques dans
leau
physiologique

10-4 10-4

Ensemencement

Par strie

Glose Mueller Hinton Glose Mueller Hinton

Incubation

37C/18-24 heures

Dnombrement

8
Le nombre de colonies de bactries obtenu sur la strie de la dilution 10-4 est compar celui de chaque
tube exprimental contenant linoculum, galement ensemenc sur le mme milieu de culture en strie de 5cm
et incub 37 C durant 18 24 heures. Ainsi, le premier tube exprimental dont le nombre de colonies
prsent sur sa strie est infrieur ou gal celui de la dilution 10-4 correspondra la CMB.

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