I.

INTRODUCCION:
La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en el laboratorio
bacteriolgico y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su
utilidad prctica es indiscutible y en el trabajo microscpico de rutina del Laboratorio de
Microbiologa, las referencias a la morfologa celular bacteriana (cocos, bacilos,
positivos, negativos, etc.) se basan justamente en la tincin de GRAM. Esta tincin se
denominada as por el bacterilogo dans Christian Gram, quien la desarroll en 1844.
Sobre la base de su reaccin a la tincin de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos
grupos, Gram positivas y Gram negativas (en este caso, los trminos positivo negativo
no tiene nada que ver con carga elctrico, sino simplemente designan dos grupos
morfolgicos distintos de bacterias).
Las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas tien de forma distinta debido a las
diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la clula
bacteriana sirve para dar su tamao y forma al organismo, as como para prevenir la lisis
osmtica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el
peptidoglicano. La pared de la clula Gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas
interconectadas de peptidoglicano, as como algo de cido teicoico. Generalmente,
80%-90% de la pared de la clula Gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la clula
Gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho ms delgada, nicamente de
peptidoglicano y est rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolpidos,
lipopolisacridos, y lipoprotenas. Slo10% - 20% de la pared de la clula Gram-negativa
es peptidoglicano.
Debido a su importancia en taxonoma bacteriana y a que indica diferencias
fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aqu con
algn detalle la tincin de Gram y las interpretaciones que actualmente se hacen sobre
el porqu de su funcionamiento. Las clulas Gram positivas, a causa de sus paredes
celulares ms espesas (tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no son permeables
al disolvente ya que ste deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo as
el espacio entre las molculas provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede
atrapado dentro de la pared celular.
Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin de
contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina
bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas Gram negativas son rojas,
mientras que las Grampositivas permanecen azules.
CUESTIONARIO
3 podra Ud. variar el colorante primario y contrastante obteniendo los mismos
resultados?
No, ya que el colorante primario es el cristal-violeta que su labor es teir a todas las
bacterias de morado y la contraste es la safrina que tie de rojo. Sin estas o el cambio en
aquellas variara de forma total a la tincin de Gram, ya que no se podra apreciar el color
y as poder diferenciarlas, no se lograra tener los mismos resultados.

4 Cul es la influencia del pH en la reaccin Gram?

El pH del medio tiene gran influencia en la tincin ya que permite una mayor o menor
disociacin electroltica del grupo auxocromo, permitiendo de esta manera una
mayor o menor afinidad por los grupos qumicos sobre los cuales se une.
Si se aumenta el pH del medio existe una mayor afinidad del colorante por la
bacteria, sucediendo lo contrario si el pH se hace ms cido.

5. Liste cinco ejemplos de bacterias Gram positivas y cinco de Gram negativas,

sealando su importancia.

Gram positiva:
Streptococcus sanguis: Causante de endocarditis, cuando ingresa al torrente
sanguneo a travs de lesiones en su hbitat, la boca y la mucosa dental.
Clostridium tetani: Bacterias responsables de los ttanos, entran al cuerpo desde el
suelo por traumatismos en las extremidades.
Bacillus antracis: Se trata de la conocida bacteria del ntrax, tanto en su versin
cutnea como en la pulmonar.
Clostridium botullinum: Causante del botulismo clsico y el infantil, habita en el suelo
y en los alimentos mal conservados.
Clostridium perfringes: Esta bacteria segrega toxinas que destruyen la pared celular, y
es responsable de las gangrenas gaseosas, la enteritis necrosante y la endometritis.

Gram negativa:
Neisseria meningitidis: Peligrosa bacteria causante de meningitis y
meningocococemias, coloniza las vas respiratorias humanas y asciende a las meninges
por va sangunea.
Neisseria gonorrhoeae: Conocidsima por ser la causante de la gonorrea, comn
enfermedad de transmisin sexual.
Escherichia coli: Habitante usual del colon humano, est involucrada en las llamadas
diarreas del viajero, as como en meningitis neonatal, sepsis e infecciones urinarias.
Salmonella typhi: Bacteria responsable de la enfermedad conocida como fiebre
tifoidea, suele transmitirse por va fecal-oral: contaminacin de aguas, mala
disposicin de excretas o higiene defectuosa.
Salmonella enteritidis: Suele ocasionar enterocolitis y septicemia con abscesos si llega
a pasar del intestino a la sangre.