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INTRODUCCIN
En estas reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos,
las cuales se convierten en molculas diferentes denominadas productos. Casi todos
los procesos en las clulas necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas
significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones
enzimticas.
Debido a que las enzimas son extremadamente selectivas con sus sustratos y su
velocidad crece solo con algunas reacciones, el conjunto (set) de enzimas sintetizadas
en una clula determina el tipo de metabolismo que tendr cada clula. A su vez, esta
sntesis depende de la regulacin de la expresin gnica.
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I. OBJETIVO:
Estudiar algunos factores que afectan la actividad enzimtica, como la temperatura, el pH,
la concentracin del sustrato y de la enzima y la presencia de inhibidores.
Determinar la actividad enzimtica.
Efecto del pH
Las enzimas actan dentro de
lmites estrechos de pH (pH ptimo
de la reaccin). Por ejemplo, la
pepsina (enzima estomacal) tiene
un pH ptimo de 2, al graficar su
actividad enzimtica para valores
crecientes de pH, comenzando
desde la zona cida, se obtiene una
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curva en forma de campana. El mximo de la curva corresponde al pH ptimo en el cual la
enzima tiene su mxima actividad. En medios muy cidos o muy alcalinos, la enzima se
desnaturaliza y se inactiva. Otras enzimas en cambio tienen una actividad ptima a pH
alcalino como la tripsina (enzima intestinal).
Temperatura
La velocidad de las reacciones
enzimticas aumenta, por lo
general, con la temperatura,
dentro del intervalo en que la
enzima es estable y activa. La
velocidad por lo general se
duplica por cada 10C de
aumento trmico. La actividad enzimtica mxima se alcanza a una temperatura ptima,
luego la actividad decrece y finalmente cesa por completo a causa de la desnaturalizacin
progresiva de la enzima por accin de la temperatura. A bajas temperaturas, las
reacciones disminuyen mucho o se detienen porque decrece la cintica molecular, pero la
accin cataltica reaparece cuando la temperatura se eleva a valores normales para la
enzima. No olvidar que una enzima humana tpica posee su ptimo a 37 C, en cambio
otros organismos como, por ejemplo, las bacterias termfilas resistentes a altas
temperaturas tienen su ptimo de actividad cercano a los 80 C.
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Concentracin de sustrato
Principalmente, la velocidad
de la reaccin o catlisis vara
de acuerdo a la
concentracin del sustrato.
Al aumentar la concentracin
de sustrato, la actividad
enzimtica aumenta, hasta
alcanzar la velocidad
mxima, punto donde la
enzima se satura, debido a
que las enzimas tienen todos
sus sitios activos ocupados.
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III. MATERIALES Y REACTIVOS:
Materiales.
Reactivos.
IV. PROCEDIMIENTO:
ACTIVIDAD ENZIMTICA.
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Agregar 2g de levadura,
disolverlas en agua
destilada y colocar las
muestras en probetas.
Llevar a
incubacin
a 26.5C
PRUEBA DE UREASA.
En 2 tubos de ensayo
Agitar y tapar los
agregar 2g de torta y
tubos e incubar a
aadir 5ml de urea al
37C durante 1
2,0.
hora
Medir el pH con
papel pH
PRUEBA DE LA AMILASA.
Agregar a todos los
Tomar 10 tubos de ensayo tubos 1ml de sol. de
enumerado del 1-10, se le almido y a los tubos
aadir 5ml de sol. de pares amilasa salival
miel de abeja al 20%. (2,4,6,8,10) y
colocarlos a bao
maria a 37C.
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Tomar el tiempo de 0 a
cada 15min. De 2 en 2 y
agregar 2 gotas de sol.
de yodo y 2 gotas de sol.
de yoduro de potasio.
PRUEBA DE LA CATALASA.
Repetir el mismo
procedimiento con
hgado de pollo
cocido.
V.RESULTADOS.
Actividad enzimtica.
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Prueba ureasa.
T-1 T-2
Prueba de amilasa.
T. T. TIEMPO COLOR T. COLOR IMPARES PARES
IMPARES PARES (MIN) IMPARES T.
PARES
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Prueba de catalasa.
VI.CUESTIONARIO:
Cules son las enzimas presentes en la levadura y cules son sus funciones?
enzimas: las exaenzimas, que actan en la parte externa a la clula (en el sustrato) y que tienen como
funcin principal desdoblar las sustancias en materia asimilable para ellas; y las endoenzimas, que
actan en su interior encargndose de sintetizar el material celular y efectuar reacciones catablicas, de
las cuales se desprende energa empleando parte de ella para su crecimiento.
Las coenzimas son Compuestos orgnicos que ayudan a la actividad de las enzimas. Las enzimas que
requieren coenzimas son Inactivas sin ellas. Si la parte coenzimtica es un compuesto inorgnico
entonces se llama cofactor. Ejemplos: las amilasas requieren ion cloruro, la carboxilasa requiere co-
carboxilasa, etc.
Las levaduras para cumplir su cometido segregan un tipo especial de enzimas llamadas diastasas, las
principales son:
La cimasa, es el conjunto de enzimas y coenzimas que hacen posible la transformacin de la glucosa en
etanol, CO2 y caloras
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La deshidrasa, o alcoholasa, que convierte el
acetaldehdo en etanol al proporcionarle
hidrgeno:
VII.CONCLUSIONES:
La temperatura es un factor determinante en las reacciones enzimticas porque acelera o
retarda la accin de las enzimas, lo que se evidencia con la produccin de burbujas.
Para que la catalasa funcione correctamente debe tener un pH neutro y temperatura
ambiente.
VIII.BIBLIOGRAFA:
Bergmeyer, H. U. "Methods of Enzymatic Analysis", Vol. 4, Academic Press (New York,
NY:1974), pp.2066-2072
Passonneau, J. V., and Lowry, O. H. "Enzymatic Analysis. A Practical Guide", Humana Press
(Totowa, NJ:1993), pp.85-110.
Todd MJ, Gomez J. Enzyme kinetics determined using calorimetry: a general assay for enzyme
activity? Anal Biochem. 2001 Sep 15; 296(2)
Cowan DA (1997). Thermophilic proteins: stability and function in aqueous and organic
solvents. Comp. Biochem. Physiol. A Physiol. 118 (3)
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