J.

Salgado (UVEG – 2005-06)

Tema 4
Enzimas
 Catalizadores Biológicos

• Catalizador: Ejemplos de reacciones catalizadas

– Aumenta la velocidad de
Anhidrasa
reacción carbónica
– No varía ∆G de la
reacción
– Facilita la reacción en
condiciones no extremas • Convierte 6x105 moléculas por
segundo
– No se consume durante la • 107 veces más rápida que sin enzima
reacción
• Los catalizadores
biológicos son: Proteasa

– Casi siempre proteínas

(enzimas) Péptido o
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– Excepcionalmente RNA proteína

catalítico (zibozimas) • 1011 veces más rápida que sin enzima
• La especifidad depende del grupo R1
 El Centro Activo
• Las enzimas son Ejemplo de un centro activo
específicas por sus
sustratos
– Interacción precisa enzima- Uracilo
sustrato (parte del
Sustrato)
– Sitio de interacción: “centro
activo”
• Hendidura tridimensional
• Zona pequeña de la enzima Treonina
• Propiedades especiales para
la unión y para la catálisis
del sustrato Serina iv o
ac t
– Sustrato y centro activo ntro
C e
tienen formas
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complementarias
– Interacción a través de Ribonucleasa
enlaces débiles
 El Estado de Transición
Explicación termodinámica
• La reacción transcurre
a través de un estado S S* P
de transición (S*)
– Intermedio entre S y P Estado de

– Mayor energía que S transición S* Energía de

activación
• Barrera de energía de (No catali-
activación zada)
(catalizada)
• La enzima facilita la
formación de S* Sustrato (S)

Energía libre
– Reduce la energía de De
activación reacción

• Acelera la reacción
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– S* es complementario Producto (P)

con el centro activo
Progreso de la reacción
 Modelos del Complejo Enzima-Sustrato

• La llave y la cerradura
(Fisher, 1890) Sustrato

– Centro activo y sustrato

son perfectamente
complementarios Complejo ES
• Reconocimiento molecular
Enzima

• Ajuste inducido Estado de

(Koshland, 1958) transición

– La unión del sustrato Sustrato

induce un cambio en el
centro activo que
aumenta la
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complementariedad Complejo ES
• Reconocimiento molecular
dinámico Enzima
 Tipos de Enzimas
• Oxidoreductasas
– Catalizan reacciones de
oxidoreducción
• Deshidrogenasas, oxidasas,
oxigenasas, reductasas,
peroxidasas
• Transferasas
– Catalizan transferencias de
grupos químicos
• Transcarboxilasas,
transaminasas,
transmetilasas
• Hidrolasas
– Catalizan la rotura de
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enlaces por adición de agua
• Esterasas, fosfatasas,
peptidasas
• Liasas
– Catalizan la eliminación de
grupos para formar un doble
enlace
• Descarboxilasas,
deshidratasas, desaminasas
• Isomerasas
– Catalizan reordenamientos
moleculares
• Epimerasas, mutasas
• Ligasas
– Catalizan formaciones de
enlace entre dos sustratos,
con energía aportada por la
hidrólisis de ATP
 Cofactores Enzimáticos

• Componentes no proteicos requeridos

para la actividad de la enzima
– Apoenzima + cofactor = holoenzima
– Dos tipos
• Iones metálicos
– Mg2+, Zn2+, Cu2+, Mn2+, ...
• Coenzimas
– Moléculas orgánicas pequeñas
– Muchas derivan de las vitaminas
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 Vitaminas

• Moléculas orgánicas pequeñas necesarias en

la dieta
– Los organismos superiores no pueden
sintetizarlas
• Han de ser ingeridas
• Su carencia provoca enfermedades
• Dos tipos, según su solubilidad:
– Hidrosolubles
• La mayoría son precursoras de coenzimas
– Liposolubles
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• Participan directamente en funciones importantes

 Vitaminas Hidrosolubles
Consecuencias de la
Vitamina Coenzima Reacción típica
deficiencia
Beriberi (pérdida de
Pirofosfato de Transferencia de
Tiamina (B1) peso, problemas de
tiamina aldehído
corazón)
Flavina adenina Estomatitis angular,
Riboflavina (B2) Oxidación-reducción
dinucleótido (FAD) dermatitis

Transferencia de grupo Depresión,

Piridoxina (B6) Fosfato de piridoxal
químico en aminoácidos convulsiones

5’-desoxiadenosil- Transferencia de grupos Anemia perniciosa,

B12
cobalamina metilo acidosis metilmalónica

Ácido nicotínico Nicotinamida adenina Pelagra (dermatitis,

Oxidación-reducción
(niacina) dinucleótido (NAD+) diarrea, depresión)

Transferencia de grupos
Ácido pantoténico Coenzima A Hipertensión
acilo
Anemia, defectos en
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Ácido fólico Tetrahidrofolato Síntesis de timina

tubo neural (en niños)
Escorbuto (inflama-
Ácido ascórbico (C) Antioxidante ción y hemorragia de
encías)
 Vitaminas Liposolubles

Consecuencias de la
Vitamina Función en la que interviene
deficiencia

Visión, crecimiento,
reproducción
A Precursora del retinal (pigmento de
la visión) y del ácido retinoico
(activador de la transcripción)
Ceguera nocturna, lesión en la
córnea y en aparatos digestivo
y respiratorio

Regulación del metabolismo del

calcio y del fosfato Raquitismo (en niños)
D
Precursora de la hormona 1,25- Osteomalacia (en adultos)
dihidroxicolecalciferol (1,25-DHCC)

Antioxidante Inhibición de la producción de

E Neutraliza especies reactivas de esperma, lesiones musculares
oxígeno (radicales libres) y nerviosas
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Coagulación sanguínea
K Participa en la carboxilación de Hemorragias subdérmicas
residuos de glutamato
 Nociones de Cinética Química
• Velocidad de reacción • En condiciones de
equilibrio
k1
A B
k -1

Consumo Formación
de A de B

En el equilibrio v = 0
Velocidad
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Constante de
velocidad
 Nociones de Cinética Química
• Reacciones sucesivas
– La velocidad depende del paso más lento
k1 k2
A B C B = Intermediario

k
Si k2 << k1, entonces B 2
C es el paso limitante de la reacción,
y la velocidad depende sólo de k2

– Cuando la primera reacción es reversible, la

llamamos preequilibrio
k1 k2
A B C
k -1
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Si k2 << k-1, entonces A y B pueden llegar virtualmente al equilibrio, y

decimos que se alcanza un estado estacionario
 Cinética de la Catálisis Enzimática
Preequilibrio
Producto
k1 k2
E+S k -1
ES E+P
Complejo
enzima-sustrato
(intermediario)

Fase de afinidad: unión Fase de catálisis:

de S al centro activo de E y transformación de S en P y
formación del complejo ES recuperación de E

Es el paso limitante
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Constante de
disociación del
complejo ES Constante
catalítica (kcat)
 Modelo Cinético de Michaelis-Menten

• Relaciona la velocidad de catálisis con la

concentración de sustrato
• Parte de los siguientes supuestos
1. P no se convierte en S
– Es cierto cuando [P] es muy baja (al inicio de la
reacción). Consideramos velocidades iniciales (V0)

2. K2 << k-1
– Se alcanza el estado estacionario
– [ES] se considera constante
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3. [E] << [S]

– [S] ≈ [S]inicial
 Estado Estacionario

Concentración

Equilibrio

Estado estacionario: d [ES] / d t ≈ 0 [E]

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Estado Tiempo
Pre-estacionario
 Ecuación de Michaelis-Menten
k1 k2
E+S k -1
ES E+P

1 Velocidad Inicial:

2 En el estado estacionario:

Constante
de Michaelis

V0 alcanza el valor máximo

cuando [ES]=[E]total
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Ecuación de Michaelis
(curva hiperbólica):
 Representación de la Ecuación de Michaelis
• Se representan valores de velocidad inicial , V0 , para distintos valores de
concentración inicial de sustrato [S]1, [S]2, etc
• V0 aumenta al aumentar [S], hasta llegar a la saturación ([ES] ≈ [E]total, se
alcanza Vmax)
• KM representa la [S] para la cual se alcanza la mitad de la Vmax
• Vmax es un valor asintótico (se alcanza para [S] = ∞ ). No se puede obtener de
la representación hiperbólica

Equilibrio

[S]4

Velocidad de reacción
[S]3
Producto

[S]2
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[S]1

Tiempo
Concentración de sustrato [S]
 Linealización de la Ecuación de Michaelis
• Para determinar Vmax y KM con precisión la ecuación de Michaelis se
transforma en una función lineal
• Representación de Lineweaber-Burk (o de dobles inversos)

Inverso
Pendiente:
1/ V0
KM / Vmax

1/ Vmax

Recta
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Ordenada en
Pendiente 1/ [S]
el origen
-1/ KM
 Significado de la KM

• Dos significados
– KM es la [S] para cual V0 = ½Vmax
• Nos dice cuál es la [S] necesaria para que ocurra una catálisis
significativa
– Cuando k2 << k-1, KM ≈ KS (constante de disociación del
complejo ES)

≈
• Nos informa de la afinidad de la enzima por el sustrato (si KM
es grande, KS es grande y la afinidad es pequeña, y viceversa)
• KM Tiene unidades de concentración (M)
• Para una enzima determinada
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– KM varía según el sustrato y las condiciones (pH,

temperatura, fuerza iónica, ...)
 Significado de Vmax y de k2 (kcat)

• La Vmax revela el número de recambio de la

enzima
– Número de recambio = kcat
• número de moléculas de sustrato convertidas en producto
por unidad de tiempo y por cada molécula de enzima, en
condiciones de saturación
k1 k2
E+S k -1
ES E+P

1 / kcat es el tiempo
necesario para la
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Unidades: Unidades: Unidades: conversión de una molécula

M s-1 M s-1 de sustrato en producto (un
ciclo catalítico)
 Eficacia Catalítica (kcat / KM)

• En condiciones fisiológicas las enzimas

no se encuentran saturadas ([S] < KM)
– En estas condiciones

• Constante de velocidad para la interacción entre

EyS
• Representa la eficacia catatalítica de la
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enzima
• Sirve para comparar la preferencia de una
enzima por diferentes sustratos
• Unidades: M-1s-1
 Inhibición Enzimática

• Inhibición: Disminución de la actividad de

una enzima por acción de un inhibidor
– Irreversible
• El inhibidor se une fuertementa a la enzima
– Ejemplos:
» La ampicilina: Modifica covalentemente una
transpeptidasa responsable de la síntesis de la pared
celular bacteriana
» La aspirina: Modifica covalentemente una
ciclooxigenasa que produce señales inflamatorias
– Reversible
• El inhibidor se une a la enzima por enlaces débiles, y el
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complejo EI se encuentra en equilibrio con las formas

libres (E e I)
 Inhibición Reversible Competitiva
Inhibidor
• El inhibidor se une a Sustrato competitivo

la enzima libre
– Compite con el
sustrato
• Puede ser superada a
[S] elevada. No afecta
a la Vmax (ni a la kcat)
• Afecta a la KM
– Aumenta la KM, que Sin inhibidor

Velocidad de reacción
llamamos aparente
(KM aparente > KM)
– Suelen ser moléculas
similares al sustrato
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o análogos del
estado de transición
[S]
 Inhibición Reversible No Competitiva
Sustrato
Inhibidor
no competitivo
• El inhibidor se une tanto
al E y como al complejo
ES
– Se une en un sitio distinto
del sitio activo
• No se supera con [S] Sin inhibidor
elevada

Velocidad de reacción
• Vmax disminuye
– Vmax aparente < Vmax
• No afecta a La KM
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[S]
 Análisis Gráfico de la Inhibición

Inhibición competitiva Inhibición no competitiva

+ Inhibidor + Inhibidor
competitivo no competitivo

Sin Sin
1/Vmax inhibidor -1/Vmaxap inhibidor

-1/KM
1/Vmax

-1/KMap
-1/KM
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 Mecanismos Moleculares de Regulación Enzimática

• Permiten la adaptación de la actividad a

necesidades fisiológicas, estados del
desarrollo o condiciones ambientales
– Regulación temporal/espacial
• Utilización de isoenzimas
– Regulación lenta
• Control de la disponibilidad y de la vida media de la
enzima
– Regulación rápida
• Control alostérico
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• Modificación covalente
– Reversible
– Irreversible
 Isoenzimas

• Son distintas formas de una misma

enzima
– Enzimas homólogas presentes en un
mismo organismo
• Cada isoenzima en un tejido diferente o en un
momento distinto del desarrollo
• Catalizan la misma reacción, pero con
pequeñas diferencias
– Pequeñas diferencias en su secuencia
» Diferencias en su estructura
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» Distintos valores de KM y/o Vmax

» Distintas propiedades reguladoras
 Vida Media y Disponibilidad de las Enzimas

• Muchas enzimas presentan una vida

media corta
– En las células existe un recambio proteico
constante
– La concentración de las enzimas se
encuentra regulada
• A través de la regulación de su síntesis
– Regulación de la transcripción y de la traducción
• A través de la regulación de su degradación
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– Mediada por la ubiquitina y ejecutada por el

proteasoma
 Enzimas Alostéricas
• Contienen varios centros de
unión y varias subunidades V
– Centros activos
– Centro reguladores
• Efecto alostérico
– A través de cambios
conformacionales [sustrato]

• Alosterismo homotrópico
– Entre centros equivalentes Estado R
• Cooperatividad
– Curvas sigmoides
V
– No siguen la cinética de
Michaelis-Menten Estado T

• Alosterismo heterotrópico
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– Efecto de centros reguladores

sobre centros activos
sustrato
 Regulación de rutas Metabólicas
• Control a nivel de sustrato
– La acumulación de producto inhibe la acción de
la enzima que lo genera
Glucosa + ATP Hexoquinasa
Glucosa-6-P + ADP
Inhibición

• Control por retroinhibición

– El producto final de una ruta inhibe el primer
paso de la ruta
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A B C D N
Retroinhibición
 Modificación Covalente

• Irreversible • Reversible
– Activación por rotura
proteolítica de
precursores inactivos
(zimógenos)
• Enzimas de la
digestión
• Cascada de
coagulación
• Activación de caspasas
en la apoptosis
J. Salgado (UVEG – 2005-06)
– Unión covalente de
un grupo químico
que altera las
propiedades
catalíticas de la
enzima
• Fosforilación-
desfosforilación
• Oxidación-reducción
• Acetilación-

desacetilación
J. Salgado (UVEG – 2005-06) Cascada de la Coagulación
 Regulación por Fosforilación Reversible

• Fosforilación
– Transferencia de grupo fosforilo desde el ATP a
grupos –OH de Ser Thr o Tyr
– Es cataliza por proteínas quinasa
– A menudo desencadena efectos amplificados
• Una sola quinasa activa centenares de otras enzimas
que. A su vez cada una de ellas activará centenares de
otras enzimas, ...etc.
• Desfosforilación
– Eliminación de grupo fosforilo de proteína
J. Salgado (UVEG – 2005-06)

fosforilada
– Catalizada por proteína fosfatasa