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GUIA DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA APLICADA EMI

LABORATORIO # 1

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD

OBJETIVO:

Al finalizar esta prctica el estudiante ser capaz de:

Aplicar las medidas de bioseguridad y de proteccin necesaria para para el desempeo


correcto de las prcticas laboratoriales de Bioqumica Aplicada.
INTRODUCCION

Todas las personas que trabajan con reactivos qumicos deben estar conscientes de los peligros
potenciales asociados a estos agentes, adems deben estar entrenadas en las prcticas y tcnicas
requeridas para manejar estos materiales de una manera segura.

Es por ello que antes de comenzar con las actividades prcticas, todas las personas involucradas
(estudiantes y profesores) tenemos la obligacin de conocer cules son las normas de seguridad a
seguir en el laboratorio de manera tal que el trabajo se realice con un riesgo mnimo de
exposicin, tanto para las personas que lo ejecutan como para el medio ambiente.

BIOSEGURIDAD - CONCEPTO

Conjunto de medidas preventivas que tienen como objetivo proteger la salud y la seguridad del
personal, de los usuarios y de la comunidad, frente a diferentes riesgos producidos por agentes
biolgicos, fsicos, qumicos y mecnicos

El reglamento interno de laboratorio, son un conjunto de reglas que se establecen para un mejor
desarrollo y mayor aprovechamiento de las practicas laboratoriales.

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD

Las siguientes normas deben ser observadas y cumplidas estrictamente en todas las secciones de
prctica de Bioqumica.

El estudiante debe tomar consciencia del riesgo al que est expuesto al manipular material
qumico, sospechar y tomar como peligrosa todas las sustancias analizadas.

No comer, ni ingerir, ningn lquido en laboratorio

No fumar en el laboratorio

Est prohibido que el estudiante realice experimentos por su propia cuenta, sin
supervisin del docente.

Cuando caliente algo, asegrese que la boca del recipiente que lo contiene no est dirigida
hacia otra persona. El lquido puede ser inflamable y salpicar.

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No se debe correr, gritar o jugar en laboratorio, este siempre atento a las indicaciones
para evitar cualquier tipo de accidente.

Leer claramente la etiqueta de todos los reactivos que est utilizando, para evitar
cualquier confusin.

Considere peligroso todas las sustancias qumicas del laboratorio, no los pruebe, ni las
toque sin autorizacin previa.

Uso obligatorio de elementos de proteccin personal como mandil blanco, manga larga,
correctamente abotonado, zapatos cerrados, y ocasionalmente guantes, barbijo y gorro.

REGLAMENTO INTERNO PARA EL LABORATORIO DE BIOQUIMICA

El cabello debe estar recogido totalmente, para evitar contaminacin con material
infeccioso, reactivos o quemaduras

Mantener las uas cortas para evitar el acumulo de material contaminado debajo de ellas.

El ingreso a laboratorio es a las 14:15 a.m. con una tolerancia mxima de 10 minutos, el
estudiante no podr ingresar despus de este tiempo.

Debe registrar en su libreta de apuntes todas sus observaciones, y elaborar con estos
datos y con la ayuda de su gua de laboratorio un informe que debe ser presentado al
inicio de la prxima prctica.

El estudiante que no estuvo presente en la prctica de laboratorio, no tiene derecho a


presentar su informe y pierde su nota.

Al inicio y al final de cada prctica debe desinfectarse adecuadamente los mesones de


trabajo, primero con una esponja y detergente neutro, luego enjuagar con agua y
finalmente pasar con un algodn embebido en alcohol por toda la superficie.

Los materiales de trabajo deben ser lavados primero con detergente neutro, enjuagar 3
veces con agua de grifo y luego pasarles etanol para su secado, antes de su uso y al
finalizar la prctica. No devolver materiales ni equipos sucios.

Al finalizar la prctica debe lavarse bien las manos con agua y jabn y desinfectarse con
alcohol.

CUESTIONARIO

1. Disear una etiqueta de laboratorio, con los datos correctos que debe contener.
2. Buscar pictogramas de bioseguridad para reactivos, peligrosos, nocivos, inflamables,
corrosivos, venenosos, etc. (Por lo menos 10 pictogramas)

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3. Que cuidados debe tener al manipular cidos concentrados.


4. Indique las medidas de primeros auxilio en caso de accidente con: cidos concentrados,
lcalis concentrados y sustancias orgnicas peligrosas.
5. Indique el sistema de clasificacin de sustancias qumicas peligrosas por colores.

BIBLIOGRAFIA

El estudiante colocara la bibliografa consultada para la elaboracin de este informe.

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LABORATORIO # 2

EL AGUA COMO ELECTROLITO Y pH

1.- OBEJTIVOS

- Verificar la conductividad elctrica del agua y otras sustancias qumicas.


- Determinar el pH de electrolitos dbiles y fuertes explicando el grado de disociacin para
cada sustancia.

2.- FUNDAMENTO TEORICO

Debido a su polaridad el agua puede solubilizar sustancias polares e inicas que actan como
electrolitos fuertes o dbiles y que actan como conductores elctricos.

3.- DESARROLLO DE LA PRCTICA

EXPERIENCIA # 1
CONDUCTIVIDAD ELECTRICA

Preparar las siguientes soluciones, y determinar si son conductores buenos, malos, o no conducen
la electricidad, explique en su conclusin cada uno de los resultados.

- 50ml de solucin de HCl 1 M


- 50 ml de solucin de CH3COOH (g)
- 50 ml de solucin de CH3COOH 1M
- 50 ml de solucin de NaOH 1 M
- 50 ml de solucin de NH3 1 M
- 50 ml de solucin de NaCl 1 M
- 50 ml de solucin de CH3COONa 1 M
- 50 ml de solucin de sacarosa al 5%
- 50 ml de H2O (d)
- 50 ml de mezcla de H2O (d) + CH3COOH (g)

EXPERIENCIA # 2
DETERMINACION DE pH

Determinar el pH de las soluciones preparadas anteriormente

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Colocar una gota de cada solucin sobre papel pH universal y leer en la escala de pHmetro.
Calcular el pH terico de cada solucin preparada tomando en cuenta que
Ka CH3COOH 1,8X10-5
EXPERIENCIA # 3

PREPRARACION DE UNA SOLUCION BUFFER

- Preparar 50 ml de la siguiente solucin tampn: 22 ml, CH3COOH 1M /28 ml, CH3COONa


1M
- Al tampn preparado medir el pH
- Adicionar 1 ml de una solucin de HCl 1M, luego medir el pH. Continuar la adicin hasta
verificar que el tampn se hubiese roto, finalmente dibujar la curva de titulacin.

4.- CONCLUSION
El estudiante debe realizar una conclusin por cada experiencial.

5.- BIBLIOGRAFIA
El estudiante colocara la bibliografa que consulto para la elaboracin del informe.

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LABORATORIO N 3

IDENTIFICACION DE PROTEINAS

1.- OBJETIVOS

Identificar protenas azufradas, aromticas

2.- FUNDAMENTO TEORICO

Las protenas son macromolculas compuestas por C, O, H y N. La mayora contiene


tambin S y P. Estos compuestos forman en primer lugar a los aminocidos, que son
los monmeros que conforman a las protenas. Los aminocidos presentan un
Carbono en el centro, un grupo amino (NH2), en uno de sus extremos, un grupo
carboxilo (-COOH) en otro y un grupo R de longitud y composicin variable. Dos
aminocidos se unen mediante enlace peptdico de tipo amida, con la correspondiente
perdida de agua. La unin de aminocidos da origen a los pptidos y a las protenas.

Identificacin de protenas azufradas

Las protenas que contienen azufre en su composicin pueden ser fcilmente


identificadas mediante la formacin de precipitados de sulfuro con la adicin de algn
metal al medio. Los precipitados de azufre son precipitados oscuros, marrn o
negruzcos en su mayora.

Reaccin xantoproteica

Es un mtodo que se puede utilizar para determinar la presencia de protenas solubles


en una solucin, empleando cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo
en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos aromticos,
especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza
con un lcali, se torna color amarillo oscuro a naranja.

La reaccin xantoproteica se puede considerar como una sustitucin electroflica


aromtica de los residuos de tirosina de las protenas por el cido ntrico dando un
compuesto coloreado amarillo a pH cido.

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La reaccin es cualitativa, no cuantitativa. Por ende determina la presencia o no de


protenas

Reaccin de Biuret

Es aquella que detecta la presencia de protenas, pptidos cortos y otros compuestos


con dos o ms enlaces peptdicos.

El reactivo de Biuret contiene hidrxido potsico (KOH) y sulfato cprico (CuSO4),


junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4H4O64H2O). El reactivo, de color azul,
cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa cuando se combina con
polipptidos de cadena corta. El hidrxido de potasio no participa en la reaccin, pero
proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un mtodo colorimtrico que permite


determinar la concentracin de protenas de una muestra mediante espectroscopia
ultravioleta-visible a una longitud de onda de 560 nm (para detectar el ion Cu2+).

Coagulacin de protenas

Las protenas debido a su gran tamao, forman con el agua sustancias coloidales.
Estas soluciones pueden precipitar con formacin de coagulo a temperaturas
superiores a 70C o al ser tratadas con soluciones salinas, acidas o alcohol, etc. La
coagulacin de protenas, es un proceso irreversible, y se debe a su desnaturalizacin
por los agentes indicados, que al contacto con la protena destruye su estructura
secundaria, terciaria y cuaternaria.

3.- DESARROLLO DE LA PRCTICA

EXPERIENCIA # 1

IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS AZUFRADOS

Procedimiento

- Colocar en un tubo de ensayo 1 ml de albumina (de huevo).


- Adicionar 1ml de NaOH al 20%
- Con ayuda de una pipeta pasteur aadir 5 gotas de Pb(CH3COO)2 al 5%
- Observar el resultado obtenido.

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EXPERIENCIA # 2

REACCION XANTOPROTEINICA

Procedimiento

- En un tubo de ensayo colocar 2 ml de albumina (de huevo).


- Anadir 10 gotas de HNO3 concentrado.
- Llevar a bao mara, hasta ebullicin.
- Enfriar
- Adicionar 10 gotas de NaOH al 20%
- Observar el precipitado formado

EXPERIENCIA # 3

REACCION DE BIURET

Procedimiento

- En un tubo colocar 2 ml de albumina (de leche)


- Adicionar 2 ml de NaOH al 20% y agitar
- Adicionar 5 gotas de CuSO4 al 1%
- Observar los resultados

EXPERIENCIA # 4

DESNATURALIZACION DE PROTEINAS

Procedimiento

- En un tubo de ensayo colocar 2 ml de albumina (de huevo) diluida


- Calentar a un mechero
- Observar la desnaturalizacin de las protenas

4.- CUESTIONARIO

1.- Investigue las caractersticas de los precipitados de sulfuro


2.- En la reaccin de biuret, cual es el compuesto que se forma al final de la reaccin.
3.- Explique el proceso de desnaturalizacin de protenas
4.- Para qu tipo de aminocidos se utiliza la reaccin xantoproteinica.

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LABORATORIO # 4

IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS

1.- OBJETIVOS
- Identificar la presencia de azcares reductores mediante la reaccin de Fehling
- Demostrar que el almidn es un polisacrido compuesto por muchas molculas de
azcares sencillos (glucosa).
- Comprobar la existencia de amilasa en la saliva.

2.- FUNDAMENTO TEORICO


Los carbohidratos son compuestos orgnicos formados por carbono, hidrgeno y
oxgeno. Estos forman parte e intervienen en una gran cantidad de procesos de los
seres vivientes. Los ms importantes son de tres tipos: energticos, de reserva y
estructurales. Desde el punto de vista energtico uno de los carbohidratos ms
sencillos, la glucosa constituye el material de ms rpido aprovechamiento en el
organismo y su oxidacin satisface las necesidades energticas y calricas del
mismo.

Como materiales de reserva, los carbohidratos existen en reino vegetal en forma de


almidones y en el reino animal en forma de glucgenos; tanto uno como el otro son
susceptibles de convertirse en glucosa para poder ser utilizados. Y en el aspecto
estructural, los carbohidratos llevan a cabo una importante funcin en los vegetales
debido a que la clula, que es su estructura leosa o esqueleto, est constituida por
cadenas de azcares simples. En los animales tambin sucede lo anterior, as
tenemos que el exoesqueleto de muchos artrpodos est constituido tambin por
cadenas de carbohidratos simples.

Los monosacridos y la mayora de los disacridos (excepto la sacarosa) son


azcares reductores debido a la presencia de un grupo carbonilo libre capaz de
oxidarse y pasar a cido. En medio alcalino, reducen con facilidad a agentes
oxidantes suaves como los iones metlicos Cu2+, Fe3+, Ag+. Estas reacciones redox
constituyen la base de las pruebas de Fehling y Benedict, que permiten identificar, e
incluso cuantificar, la presencia de azcares reductores en un material biolgico y han
sido frecuentemente utilizadas en la determinacin del contenido de glucosa en
sangre y orina para el diagnstico de la diabetes mellitus.
Si el azcar es reductor se oxida al reaccionar con el reactivo de Fehling, el carbono
carbonlico se oxida a cido carboxlico, mientras que el in cprico (Cu+2), antes de
color azul intenso, se reduce a in cuproso (Cu+2) que precipita de la disolucin en
forma de xido cuproso (Cu2O) de color rojo ladrillo.

La glucosa es un monosacrido y por tanto reductor. La reaccin positiva se


manifiesta con la formacin de un precipitado de color rojo de xido cuproso. Con el
zumo de uva la reaccin es positiva, contiene azcares reductores (la glucosa y la
fructosa abundan en estado libre en las frutas). La sacarosa no tiene grupo carbonilo
libre por lo que no da reaccin positiva con el Fehling.

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3.- DESARROLLO DE LA PRCTICA

EXPERIENCIA # 1

CAPACIDAD REDUCTORA DE AZUCARES

- Preparar 50 ml de solucin de glucosa al 3%


- Preparar 50 ml de solucin de sacarosa al 3%
- Preparar 50 ml de solucin de almidn al 0,1%
- Colocar en un tubo de ensayo 3ml de glucosa
- Aadir 1ml de Reactivo de Fehling A
- Aadir 1ml de Reactivo de Fehling B
- Llevar el tubo a Bao Mara o calentamiento directo por unos 2 minutos,
hasta la aparicin de un color rojo ladrillo si la reaccin es positiva.
- Repetir el mismo procedimiento con solucin de sacarosa y almidn.

EXPERIENCIA # 2

IDENTIFICACION DE ALMIDON

- Colocar en un tubo de ensayo 3ml de solucin de almidn


- Aadir 2 a 3 gotas de lugol
- Observar los resultados, se formara un complejo azul oscuro si al reaccin
es positiva.
- Repetir este mismo procedimiento con solucin de sacarosa y glucosa.
- Explicar los resultados obtenidos.
- Llevar este tubo a bao mara por unos minutos.
- Observar y explicar los resultados.

EXPERIENCIA # 3

IDENTIFICACION DE AMILASA EN LA BOCA


- Colocar en un tubo de ensayo 5 ml de saliva
- Aadir 3 ml de solucin de almidn
- Agitar vigorosamente
- Aadir 2 a 3 gotas de solucin de lugol
- Observar y explicar los resultados.

4.- CONCLUSION
El estudiante redactara una conclusin de acuerdo a los resultados obtenidos para cada
experiencia.

5.- CUESTIONARIO
1.- Explique por qu la glucosa es un azcar reductor mientras que sacarosa y el almidn
no lo son.
2.- Explique el fundamento de la reaccin de Fehling
3.- Cual es la diferencia estructural entre almidn y celulosa. Por qu los seres humanos
no podemos usar celulosa como fuente energtica.
4.- Cual es la composicin qumica del lugol, como se prepara en laboratorio.

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LABORATORIO N 5

EXTRACCION E IDENTIFICACION DEL ALMIDON

1.- OBJETIVOS

Extraer el almidn proveniente de diferentes fuentes naturales (cereales y


tubrculo)
Determinar el origen vegetal del almidn segn sus caractersticas microscpicas
por comparacin con datos bibliogrficos.
Identificar qumicamente el almidn.

2.- FUNDAMENTO TEORICO

2.1.- Caractersticas qumicas

El almidn, es un polisacrido de reserva de vegetales. Se trata de un polmero de


glucosa, formado por dos tipos de molculas: amilosa (20 a 30%), ligadas a travs de un
enlace (1 - 4) para formar un polmero lineal, que se encuentra enrollado en forma de
hlice, y amilopectina (80 a 70%), formado por enlaces (1 4) y (1 6) formando un
polmero altamente ramificado. El almidn da una coloracin azul intenso con soluciones
de yodo. Puede ser hidrolizado mediante la accin enzimtica (amilasa) o en presencia de
soluciones acidas, dando molculas de glucosa, que fcilmente puede ser identificado con
el reactivo de fehling, Tollens y otros.

2.2.- Propiedades fsicas

El almidn se presenta en masas irregulares, angulosos, en forma de polvo blanco. Es


insoluble en agua fra, pero forma una solucin coloidal por ebullicin, por enfriamiento se
forma una jalea traslcida conocido como engrudo de almidn. El engrudo de almidn se
colorea en azul intenso con solucin de yodo, color que desaparece por calentamiento a
93 C, reapareciendo por enfriamiento.

2.3.- Caractersticas Microscpicas

El almidn formado en la clula vegetal, se acumula en forma de granos que van


creciendo a partir de un punto o hilo, que puede ser central o excntrico. Los granos con

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hilo excntricos suelen ser ms largos que anchos.

El grano de almidn se forma a partir de capas sucesivas que giran alrededor del hilo,
pudiendo observarse claramente la presencia de anillos o estriaciones concntricas,
siendo estas importantes para la caracterizacin e identificacin. El aspecto final del grano
de almidn es variable y caracterstico de un vegetal, como se puede detallar a
continuacin:

a) Almidn de Papa

Proveniente del tubrculo Solanum tuberosum L. (Solanceas). Son granos aislados de


forma ovoide, tamao variable, hilo excntrico situado en la parte ms estrecha del grano
y estras visibles.

b) Almidn de Maz

Proveniente de los frutos del Zea mays L. (Gramneas). Son granos aislados o en grupos
de 2 a 3, forma polidrica, tamao ms o menos uniforme (15 ), con hilo central y sin
estras visibles.

c) Almidn de Arroz

Proveniente de Oryza sativa L. (Gramneas). Son granos aislados o compuestos, estos


granos compuestos se disocian fcilmente frotando ligeramente el cubre sobre el
portaobjeto. Forma polidrica, tamao alrededor de 5 , hilo central, sin estras visibles.

d) Almidn de Trigo

Proveniente de Triticum sativum L. (Gramneas). Son granos aislados de forma ms o


menos redondeada, tamao variable, granos pequeos de 2 20 y granos grandes de
alrededor de 30 , hilo central, estriaciones concntricas pero bien dbiles.

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e) Almidn de Yuca

Proveniente del tubrculo Manihot utilsima (Eurphorbiaceae). Son granos de 2 a 7


corpsculos reunidos. La superficie de contacto de unos con otros son planas, la mayora
son subesfricas o redondas-polidricas, presenta hilo punteado o hendido y estriaciones
concntricas.

f) Almidn de Leguminosas

Granos de forma generalmente arrionada y estratificaciones concntricas muy visibles.


En el centro presentan una gran hendidura de la cual parten hacia la periferia del grano
una serie de ranuras radiales, cortas y anchas tomando el aspecto de palo bifurcado,
todas las leguminosas tienen el mismo tipo de almidn diferencindose solo en el tamao.

Figura 1: Grnulos de almidn A) Papa; B) Maz; C) Avena; D) Trigo

3. PARTE PRCTICA

EXPERIENCIA N 1

EXTRACCION DEL ALMIDON

PROCEDIMIENTO

1. Si se parte de cereales, triturar a polvo grueso, si es a partir de tubrculos,


primeramente y rallar para hacer como especie de papilla.
2. En primer caso (polvo triturado), tamizar.
3. El polvo obtenido, o la papilla, se deja remojar en agua destilada, para que los
granos de almidn (parte solida) pase a la fase liquida (agua destilada).
4. Dejar en reposo durante media hora para completar la disolucin de los granos de
almidn en la fase liquida.
5. Lavar con tres aguas, las aguas del lavado se guardan, debido a que los granos se
encuentran sobrenadando en este medio.

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6. Dejar reposar durante media hora, los granos de almidn sedimentan como polvo
blanco.
7. Decantar toda el agua.
8. Se recoge todo el polvo blanco obtenido en papel filtro.
9. Se deja secar.

EXPERIENCIA N 2

IDENTIFICACION MICROSCOPICA

Los almidones pueden ser caracterizados mediante un examen microscpico. Los granos
de almidn tienen un tamao, forma y estructura determinada, segn su procedencia. Por
lo que es posible distinguir los almidones procedentes de especies distintas segn sus
caractersticas.

a) Se debe observar las siguientes caractersticas:


b) Estado del grano (aislado o en masas de formas definidas).
c) Forma y dimensin.
d) Presencia o ausencia de hilo, su forma y posicin.
e) Presencia o ausencia de estras.
PROCEDIMIENTO

1. Realizar un montaje con agua


2. En un portaobjeto, colocar una gota de agua destilada
3. Suspender en esta gota una pequea porcin de la muestra
4. Cubrir con un cubreobjeto, evitando la formacin de burbujas de aire
5. Observar al microscopio con objetivo 40 X
6. Describir las caractersticas observadas

EXPERIENCIA N 3

CARACTERIZACION QUIMICA

La amilosa reacciona con el yodo formando un complejo de color azul intenso, mientras
que la amilopectina presenta coloracin azul-violeta en presencia de yodo.

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HIDRLISIS ACIDA DEL ALMIDON

La hidrlisis acida del almidn tiene lugar utilizando cidos inorgnicos; esta degradacin
acida, da lugar a varios compuestos intermedios, antes de obtener la glucosa.

Durante el proceso de la hidrlisis tanto la amilosa como la amilopectina se van


desdoblando o rompiendo los enlaces (1-4) en el primer caso, y los enlaces (1-6) en el
segundo caso, dando lugar a la formacin de polisacridos de cadena corta pero
ramificadas las llamadas dextrina, que segn el color que dan al reaccionar con el yodo
en solucin de Lugol, se denomina:

Amilodextrina + I2 = Rojo violeta


Eritrodextrina + I2 = Rojo
Acrodextrina + I2 = Amarillo (color del lugol)

PROCEDIMIENTO

1. Tomar 1g de almidn obtenido, preparar una suspensin en 10 ml de agua,


obtenindose una suspensin lechosa.
2. Llevar a ebullicin 200 ml de agua, verter los 10 ml de suspensin del almidn,
hasta que se torne transparente la suspensin.
3. Tomar de esta solucin 5 ml y dividir en dos tubos, en el primer tubo se aade 1
gota de lugol, al segundo tubo 0.5 ml del reactivo de fehling (Fehling A: CuSO4
disuelto en H2O y Fehling B: NaOH y tartrato Na-K disuletos en agua), observar
las reacciones (fehling reacciona en medio bsico).
4. Al resto de la solucin que continua en ebullicin se agrega 5 ml de HCl
concentrado, pasados 5 minutos se procede a tomar 5 ml. Se divide en dos tubos
y se siguen los mismos pasos indicados en la anterior etapa.
5. Continuar con los pasos ya indicados hasta observar en el tubo con la solucin de
lugol un color amarillo y el tubo con el reactivo de fehling aparece un precipitado
anaranjado o rojo ladrillo, que indican que se llev a cabo la hidrlisis total, dando
por consiguiente la siguiente reaccin.

CuSO4 + 2NaOH Cu(OH)2 + Na2SO4 (azul)


Cu (OH)2 + RCOH Cu2O + RCOOH+H2O(rojo ladrillo)

Esta reaccin indica la presencia de molculas de glucosa; dando lugar por

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