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VALPARAISO, BANCO SE SANGRE 1- 2012

INMUNOHEMATOLOGIA

REACTIVOS PARA TIPIFICACION DE GRUPOS SANGUINEOS

En 1900 Landsteiner descubrio que el suero de ciertos individuos tenia la


capacidad de aglutinar los globulos rojos de otros y que este fenomeno podia
utilizarse para clasificar a la personas en distintos fenotipos de grupos sanguineos.

Se reconocen 4 fenotipos comunes: O,A,B, y AB. El fenotipo ABO de un individuo


se determina

comunmente por las reacciones de aglutinacion de sus globulos rojos con los
antisueros:

Anti-A, Anti-B, y Anti-AB.

Al probar muestras de sangre de adultos, se puede obtener la confirmacion del


grupo Sanguineo ABO por la reaccion del suero del individuo con las
suspensiones de globulos rojos testigo A y B ( Contraprueba)

En la actualidad se conocen al menos 29 sistemas de grupos sanguneos con sus


propios antgenos y anticuerpos.

Algunos de los sistemas que renen casi todos los antgenos son el ABO, el Rh y
existe un sistema diferente como es el HLA. Los antgenos leucocitarios humanos,
HLA (Human leukocyte antigen).

La determinacin de grupos sanguneos es una de las pruebas que se pueden


realizar en el laboratorio de Inmunohematologa, esta se puede llevar a cabo en
lmina portaobjeto, en tubo y actualmente en tarjetas las cuales presentan
columnas de gel.

La palabra clave en esta historia es aglutinacin

Sueros Clasificadores

Son anticuerpos monoclonales secretados por lineas celulares de hidridomas


murinos desarrolados en cultivos in vitro.

Cada hibridoma produce un solo anticuerpo con caracteristicas bien


definidas.Estos anticuerpos puedenser usados solos o en mezclas, para producir
potentes reactivos de especificidad predefinida.

Los reactivos son formulados de acuerdo a las normas de FDA de Estados Unidos
y se entregan coloreados de Azul el suero Anti-A y Amarillo el suero Anti-B, e
Incoloro el Suero Anti-AB.

T.M.Mg. Oscar Ortiz Fuentes


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Todos los reactivos se suministran estandarizados y listos para ser usados en


tecnicas de hemoaglutinacion en tubo o en lamina.

Suero Anti A :

Suero clasificador de grupo sanguneo en presentacin de 10ml, preparado a


partir de anticuerpos monoclonales de ratones para proveer un test especifico en
la deteccin de Antgeno "A" en sangre humana. Se usa Azida de Sodio al 0.1%
como preservativo.

Suero Anti B :

Suero clasificador de grupo sanguneo en presentacin de 10ml, preparados a


partir de anticuerpos monoclonales de ratones para proveer un test especifico en
la deteccin de Antgeno "B" en sangre humana. Se usa Azida de Sodio al 0.1%
como preservativo.

Suero Anti AB

Suero clasificador de grupo sanguneo en presentacin de 10ml, preparado a


partir de anticuerpos monoclonales de ratones para proveer un test cualitativo
especifico en la deteccin de Antgeno "A y B" en sangre humana. Se usa Azida de
Sodio al 0.1% como preservativo.

Suero Anti D

Suero clasificador de grupo sanguneo en presentacin de 10ml, preparado a


partir de anticuerpos IgM monoclonales anti D y suero humano que contiene Anti D
Policlonal para proveer un test cualitativo especifico en la deteccin de Antgeno
"D" en sangre humana. Se usa Azida de Sodio al 0.1% como preservante.

Condiciones de almacenamiento:

Los reactivos deben ser almacenados entre 2 y 8 grados centigrados Son estables
por lo menos durante 18 meses.

T.M.Mg. Oscar Ortiz Fuentes


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Recoleccion de muestras:

Las muestras de sangre deben ser recolectadas en forma aseptica, con o sin
adicion de anticoagulante.Cuando se retrasa el examen de las muestras, estas
deben almacenarse entre 2 y 8 grados. Las muestras recolectadas en heparina o
EDTA deben tipificarse dentro de 48 Horas.

Tecnicas recomendadas:

Tecnica en lamina

Son tcnicas de uso rpido cuya resultante es una aglutinacin macroscpica


visible sobre una fuente de luz, no necesita sedimentacin o centrifugacin, la
suspensin celular concentrada en contacto con los sueros clasificadores
desarrollan rpidamente la aglutinacin.

Tecnica en tubo- centrifugacion inmediata

A diferencia de la tcnica anterior esta se realiza en tubo de vidrio (Khan), aqu


adems de identificar el grupo ABO y Rh del paciente o dador con sueros
clasificadores, se realiza una contraprueba utilizando glbulos rojos testigos
lavados A+ y B+.

Tecnica en tarjetas

Las tarjetas de gel estn conformadas por 8 columnas, las cuales contienen
microesferas mezcladas con los Ac especficos y los hemates aglutinan al entrar
en contacto con ellas.

Durante la centrifugacin las aglutinaciones son atrapadas a lo largo de la


columna y dependiendo de su tamao se observan distintas intensidades.

Las suspensiones de globulos rojos en estudios se pueden preparar en suero


fisiologico, en tampon fosfato salino pH 7 (PBS) o en salino de baja fuerza
ionica (LISS)

Otros Grupos Sanguneos

Existen otros grupos sanguneos, tambin clasificados por letras como, por
ejemplo M, N, S y P y otros conocidos por el nombre de las personas en las que
se identificaron los anticuerpos por primera vez (Kell, Duffy, etc.).

T.M.Mg. Oscar Ortiz Fuentes


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Se han definido mas de 100 sistemas de grupos sanguneos formados por ms de


500 antgenos. Entre ellos existen algunos (denominados pblicos o de alta
incidencia) es decir que estn presentes en casi todos los individuos, mientras que
otros son raros (denominados privados o de baja incidencia).

Otras Tcnicas

En el laboratorio inmunohematolgico se realizan otras determinaciones adems


de la clasificacin de grupo sanguneo, como son la prueba de coombs directo e
indirecto, pruebas de compatibilidad

Investigacion de Anticuerpos eritrocitarios:

Anticuerpos IGM o completos, regulares, naturales

Anticuerpos IGG o incompletos, irregulares , bloqueantes, no naturales

Anticuerpos IGM o completos, regulares, naturales:

Cuando los eritrocitos se suspenden de solucion salina las celulas estan


separadas (cargas negativas iguales), y los IGM que poseen varios (5X2) sitios de
union se unen a un eritrocito y otros punto de union a otro eritrocitos (PM
1000000).

1.- isoaglutininas ABO de presentacion natural

2.- Isoanticuerpos RH de exposicion inicial

Anticuerpos IGG o incompletos, irregulares , bloqueantes, no naturales:

Esta moleculas son mas pequeas (PM 160000)por lo tanto no puede reaccionar
con dos celulas en solucion salina, por lo tanto recubren la celula pero no son
capaces de aglutinar y ocupan sitios (bloquean)

1.- isoanticuerpos RH por exposicion repetida al antigeno.

T.M.Mg. Oscar Ortiz Fuentes


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2.- autoanticuerpos (anemias hemoliticas idiopaticas o adquiridas)

Deteccin de Ac. Irregulares

Test de Coombs Directo

Esta Tcnica se utiliza para determinar la presencia de anticuerpos que ya estn


adheridos a la membrana de los glbulos rojos

Prueba de Coombs directa, para la comprobacion del anticuerpo IGG que


recubre los eritrocitos circulantes.

Se aade una gota de suero de Coombs a la suspension en solucion salina


de los hematies lavados del paciente.

Si hay IGG fijada al hematie esta IGG reacciona con el anticuerpo para la
globulina humana.

Test de Coombs Indirecto

El examen de Coombs indirecto identifica anticuerpos presentes en el suero del


paciente que reaccionen contra ag de glbulos rojos comerciales (serascan I y II).

Los Ac. irregulares o no naturales tambin estn presente en gran porcentaje de


los individuos, estos pueden ser determinados a travs de la prueba de coombs
indirecto las cuales determinan la presencia de dichos Ac. circulando en el plasma.

Estos anticuerpos irregulares son atpicos no como los A o B que son naturales del
sistema ABO, estos Ac atpicos reaccionan a 37C y casi siempre son capaces de
destruir los glbulos rojos transfundidos que tengan el Ag en particular.

Prueba de Coombs indirecta, para la comprobacion del anticuerpo IGG libre en el


suero del paciente.

Este suero es incubado con una mezcla de hematies del grupo O, Luego hematies
se lavan, se suspenden en solucion salina y se agrega el suero de Coombs.

Si el suero del paciente contiene anticuerpo libre que pueda fijarse a los eritrocitos
de prueba durantela incubacion preliminar, estos eritrocitos se aglutinan, al
agregar el suero de Coombs.

T.M.Mg. Oscar Ortiz Fuentes


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Otras pruebas:

Pruebas de Compatibilidad

Tcnica utilizada para determinar si una unidad de sangre puede ser administrada
a un posible donante, aqu se contrastan los glbulos de la unidad con el suero del
paciente.

EJERCICIOS:

1.- Completar el siguiente cuadro:

T.M.Mg. Oscar Ortiz Fuentes


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2.- Completar el siguiente cuadro:

Anexo de respuestas:

1.-

T.M.Mg. Oscar Ortiz Fuentes


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2.-

T.M.Mg. Oscar Ortiz Fuentes