PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA DEL ECUADOR

ESCUELA DE BIOANALISIS
CARRERA DE MICROBIOLOGA
MICROBIOLOGA 2

Lcda. Elena Granda M.

TEMA 7: Escala McFarland
Objetivo:
El estudiante aprenda a:
Preparar estndares para su utilizacin a nivel del laboratorio
Realizar comparaciones con cultivos inoculados con microorganismos

Introduccin
El patrn o la escala de McFarland consiste en una serie de tubos hermticamente cerrados,
previamente calibrados y con una densidad ptica diferente originada por la aparicin de un
precipitado de sulfato de bario (SO4Ba) resultante de la reaccin entre el cloruro de bario (Cl2Ba) al
1,175% (0,048 M) y el cido sulfrico (H2SO4) al 1% (0,36N).
Esta turbidez puede interpretarse pticamente o por mtodos espectrofotomtricos y cada una de
ellas se corresponde a una concentracin conocida de bacterias/ml.
Para cada cepa bacteriana hay que establecer la equivalencia entre la turbidez de cada tubo y la
masa o la concentracin de bacterias (cl/ml) que genera una turbidez similar.
Para asegurar la densidad del estndar de McFarland as preparado puede ser chequeado usando
un espectrofotmetro con una celda de cuarzo de 1cm; para el estndar 0,5 de McFarland, la
absorbancia a una longitud de onda de 625 nm puede estar entre 0,08 a 0,1.
Alternativamente, el aseguramiento del estndar de McFarland puede ser verificado por ajuste de
una suspensin de una cepa control (por ejemplo, E. coli ATCC 25922) a la misma turbidez,
preparando diluciones seriadas 1:10, y realizando el respectivo recuento en placa. La suspensin
as ajustada puede tener un conteo de 1,5x108 ufc/ml.

Materiales:
Agar Plate count fundido
Tubos con 5 ml de BHI
Cajas petri estriles
Caja petri con cepa ATCC pura E.coli
Asas
Puntas azules estriles
Cloruro de Bario al 1%
cido sulfrico al 1%
Perillas de seguridad
Pipetas serolgicas de 1ml

Equipos
Pipetas automticas (1ml)
Incubadora 35-37C
Turbidmetro
Espectrofotmetro
Mecheros
Bao Mara
Procedimiento:
Preparacin:
Se adicionan cantidades crecientes (o decrecientes segn corresponda) de BaCl2*2H2O al 1 % (p/v)
en H2SO4 al 1% (v/v) de acuerdo a la siguiente tabla para obtener la equivalencia deseada:

Primera parte:
Para preparar la escala de McFarland 05, proceda de la siguiente manera:

Tubo Cl2Ba 1% H2SO4 1% UFC/ml

0,5 0,05 9,95 1,5 x 108

Segunda Parte:
Leer en el turbidmetro la escala de McFarland realizada y copiar las DO obtenidas de acuerdo a
cada tubo de la escala
Leer en el espectrofotmetro en el filtro 546nm la escala de McFarland realizada y copiar las
DO obtenidas de acuerdo a cada tubo de la escala
Comparar las DO obtenidas en los dos equipos
Tercera Parte:
A partir del tubo que contiene caldo BHI realice una escala McFarland 0.5, con la cepa pura que
se encuentra en la caja
Lea en el turbidmetro la DO de su siembra y compare con la DO obtenida en la escala
McFarland
Si el resultado no es el esperado y est sobre el valor, aumente caldo BHI estril al tubo
inoculado y vuelva a realizar las mediciones de DO, si al contrario est por debajo del valor
esperado aumente colonias.
Al obtener la DO esperada sta preparacin con una pipeta automtica colocar el 1 ml de caldo
BHI inoculado a la caja petri estril y aadir 15 ml de medio de cultivo TSA fundido, realizar los
movimientos respectivos (sentido de las manecillas de reloj, de arriba hacia abajo, en L y en
contra de las manecillas del reloj)para homogenizar la muestra.
Espere a que se solidifique el agar e incube a 37C por 48 horas
 Realice un recuento y compare si los resultados obtenidos concuerdan con lo esperado es decir
1.5 x 108 UFC/ml.

Anexo:
Conservacin:
El estndar de McFarland puede ser almacenado hasta por 6 meses en la oscuridad y a
temperatura ambiente entre 22 a 25C. Sin embargo, se recomienda almacenarse a ser
posibles en refrigeracin.
Cuidados
Descartar despus de 6 meses o antes si su volumen es menor. Antes de cada uso, debe
agitarse muy bien usando un shaker, hasta que el precipitado blanco de sulfato de bario se
haya disuelto en todo el medio.

Consulta:
1. Casos en los que se puede utilizar esta escala de turbidez. Fundamntelos

Bibliografa correspondiente