Protenas para el transporte de agua y nutrientes minerales a travs de las membranas de

clulas vegetales

La captacin y transporte de iones de agua y minerales estn entre los temas ms antiguos en
fisiologa vegetal, y numerosos estudios han descrito estos procesos a nivel de toda la planta
ya nivel de rgano (por ejemplo, con races escindidas).

El trabajo posterior se bas en vesculas de membrana aisladas y electrofisiologa para

caracterizar los procesos de transporte a nivel de la membrana. La clonacin reciente de

Los genes para un gran nmero de protenas de transporte y la disponibilidad de mutantes

knockout hacen posible diseccionar los procesos de transporte con mayor detalle y comenzar a
comprender las interacciones entre los procesos de absorcin de iones que se haban
observado a menudo a nivel de rgano. Este artculo resume los avances recientes en la
caracterizacin de los genes y las protenas implicadas en el transporte de agua y nutrientes
minerales principales.

La membrana plasmtica de la clula vegetal es una barrera selectivamente permeable que

asegura la entrada de iones y metabolitos esenciales en la clula. Junto con la membrana
vacuolar (tonoplast), permite al citoplasma mantener la homeostasis intracelular. Estas
membranas consisten principalmente en bicapas de fosfolpidos con protenas transmembrana
que permiten el paso de agua, iones y metabolitos y el mantenimiento de un pH citoslico que
es una a tres unidades ms alto que el del exterior de la clula o la vacuola. Las bicapas
fosfolpidas puras son permeables a los gases, tales como O2 y CO2, pero son apenas
permeables al agua y casi impermeables a los iones inorgnicos y otros solutos hidrfilos,
como la sacarosa y los aminocidos. Las protenas son necesarias para el transporte de
protones, iones inorgnicos, y solutos orgnicos a travs de la membrana plasmtica y el
tonoplast a tasas suficientes para satisfacer las necesidades de la clula. Las membranas
contienen diferentes tipos de protenas de transporte:

ATPases o bombas alimentadas con ATP, protenas de canal y cotransportadores (para otras
revisiones sobre este tema, vase Lalonde et al., 1999, Sze et al., 1999, en este nmero).
Algunas de estas protenas estn bien caracterizadas y su localizacin subcelular es conocida.
Los ADNc para otros han sido clonados, pero faltan datos funcionales, bioqumicos y
citolgicos.

ATPases utilizar la energa liberada por la hidrlisis de ATP para mover los iones a travs de la
membrana plasmtica contra gradientes qumicos y elctricos. En las clulas vegetales, las H1-
ATPasas bombean protones a travs de la membrana plasmtica o tonoplast para acidificar la
matriz extracelular o la vacuola, respectivamente (Sze et al., 1999). Las protenas del canal
facilitan la difusin del agua y de los iones en gradientes energticamente favorables. Estas
protenas forman canales a travs de los cuales los iones o molculas de agua pasan en un solo
archivo a velocidades muy rpidas-de 106 a 107 por segundo por canal. Las actividades de los
canales pueden ser reguladas: se pueden abrir y cerrar. En las clulas vegetales, tanto

Agua y canales de iones han sido estudiados en detalle. Los cotransportadores, la tercera clase
de protenas de transporte de membrana, pueden mover solutos hacia arriba o hacia abajo
gradientes a velocidades de 102 a 104 molculas por segundo. Sin embargo, dependiendo de
las condiciones bajo las cuales se ensayan, los transportistas a veces se comportan como
canales, y viceversa, de modo que la distincin entre ellos ya no est clara. Los modelos
clsicos suponan que los canales inicos y los cotransportadores son protenas claramente
distintas. Sin embargo, estudios recientes de un solo canal sobre transportadores de animales
han demostrado que los cotransportadores tambin pueden funcionar como canales inicos
(Fairman et al., 1995; Cammack y Schwartz, 1996). Por lo tanto, los investigadores animales ya
no distinguen estrictamente entre los canales inicos y los cotransportadores, y se han
derivado modelos que explican los modos de canal de los transportadores (Larsson et al.,
1996, Su et al., 1996). En los sistemas de plantas, el anlisis del transportador HKT1 de trigo ha
proporcionado evidencia de dos modos de transporte por la misma protena (Rubio et al.,
1995; Gassmann et al., 1996).

Entre los cotransportadores, distinguimos uniporters, antiporters, y symporters. Uniporters,

como canales, mover las sustancias en un gradiente de concentracin, aunque mucho ms
lentamente. Los intermediarios, tambin llamados intercambiadores, pueden mover una
determinada sustancia contra su propio gradiente de concentracin, cuya energa no proviene
del ATP, sino que se satisface con un potencial elctrico y / o un gradiente qumico de una
sustancia secundaria. El movimiento de un soluto contra su gradiente de concentracin est
as acoplado al movimiento de la sustancia secundaria; en las plantas esto es a menudo un
protn por su gradiente de concentracin. Por lo tanto, la alta concentracin de protones en el
apoplast impulsa el movimiento hacia adentro de ciertos iones, tales como el nitrato, por un
symporter. Los gradientes de protones pueden potenciar de manera similar el movimiento de
iones dentro de la vacuola por el antitransformador de protn-sodio o el anti-calcio de protn-
calcio.

Aquaporinas son abundantes protenas que pueden representar el 5 al 10% de la protena total
en una membrana. De hecho, cuando las protenas de membrana intrnsecas se someten a
SDS-PAGE, las acuaporinas, con masas moleculares de 27 a 30 kD, usualmente

Forman la banda de polipptidos ms abundante. Los mtodos convencionales de purificacin

de protenas permiten la purificacin de cantidades sustanciales de acuaporinas, siempre y
cuando

El suministro de membranas est disponible (Johnson et al., 1989, Johansson et al., 1996). Las
acuaporinas son generalmente altamente antignicas, de modo que los anticuerpos
preparados para las fracciones totales de membrana a veces reconocen aquaporinas
especficamente. Protenas

Adems de las acuaporinas pueden formar tambin canales de agua y permitir el paso de agua
a travs de las membranas. Las Aquaporinas Son Tetrmeros de Polipptidos con Seis

Dominios que abarcan la membrana Las acuaporinas son miembros de la principal familia de
protenas intrnsecas (MIP). Todos los miembros de esta familia se caracterizan por la
presencia de seis dominios que abarcan la membrana y la secuencia de la firma Asn-Pro-Ala
(NPA). Este motivo NPA est presente dos veces, una vez en un bucle entre el segundo y tercer
dominios de membrana y una vez en un bucle entre el quinto y sexto dominio de la membrana
de los dominios. Se cree que estos dos bucles estn implicados en la formacin del poro
acuoso a travs del cual se mueve el agua. Un modelo de estructura de acuaporina se presenta
en la Figura 1. Todos los miembros de la familia MIP no son aquaporinas. Algunos miembros,
como la protena GlpF de Escherichia coli, facilitan el paso de glicerol, mientras que otros
miembros transportan urea. Algunos MIPs mamferos tienen una doble funcin, permitiendo
el paso de pequeos solutos, como el glicerol, y el agua, pero todava no hay evidencia
publicada sobre aquaporinas dualfuncin en las plantas. Sin embargo, Hertel y Steudle (1997)
observaron recientemente que los pequeos solutos orgnicos (es decir, los alcoholes) pueden
deslizarse a travs de los canales de agua de Chara corallina y concluyeron que los canales de
agua pueden no ser tan selectivos como se cree generalmente. El reto ser identificar los
sustratos fisiolgicos de las acuaporinas de doble funcin, ya que incluso si se encuentran que
las acuaporinas vegetales transportan glicerol, puede que ste no sea su sustrato fisiolgico.
Todas las acuaporinas no son igualmente eficaces para permitir el paso de agua a travs de las
membranas. Mediante el estudio de la base de datos de etiqueta de secuencia expresada por
Arabidopsis, encontramos 23 diferentes expresados MIPs (Weig et al., 1997). Muchos de estos
han sido verificados como aquaporinas expresando las protenas en oocitos de Xenopus y
midiendo el aumento resultante en la conductividad hidrulica de la membrana plasmtica del
ovocito. No sabemos si estos 23 miembros son todos acuaporinas o si algunas de ellas tienen
otras funciones o funciones duales. Las comparaciones de secuencias de aminocidos
muestran que los MIP de Arabidopsis forman tres grupos principales: un grupo de protenas
tonoplast (TIP) y dos grupos de membrana plasmtica

Protenas (PIP1 y PIP2) -con algunas acuaporinas adicionales no relacionadas con estos tres
grupos. La estructura tridimensional de las acuaporinas de mamfero se ha establecido a partir
de datos de dispersin de rayos X de cristales de acuaporina. Estas protenas forman
tetrmeros con una depresin central entre las subunidades. Los dos bucles con los motivos
NPA estn orientados hacia una depresin central en el tetrmero, y los bucles de las cuatro
subunidades probablemente interactan. Las membranas que tienen abundantes acuaporinas
tienen una energa de activacin baja para el movimiento del agua, z16 kJ mol21, que es
similar al movimiento del agua a granel. Se cree que las molculas de agua pasan a travs del
poro acuoso en un nico archivo, y una diferencia osmtica de 100 mM puede permitir el paso
de z106 molculas de agua por segundo por poro. Dentro de los canales, las molculas de agua
experimentan un entorno similar al del agua a granel. A pesar de la estructura tetramrica de
las acuaporinas, el canal acuoso no se forma entre las cuatro subunidades, sino que cada
polipptido de 27 kD es una unidad conductora de agua. Para aquellas aquaporinas de
mamfero que transportan pequeos solutos, es posible que el paso de las molculas de soluto
ocurre a travs del centro del tetrmero y resulta de un cambio en la forma en que los bucles
NPA interactan entre s (Echevarra et al., 1996). La evidencia reciente demuestra que dos
mutaciones de aminocidos en el sexto dominio transmembrana de una acuaporina de insecto
la convierten de un canal de agua a un canal de glicerol (Lagre et al., 1999).

Aquaporinas son abundantes protenas que pueden representar el 5 al 10% de la protena total
en una membrana. De hecho, cuando las protenas de membrana intrnsecas se someten a
SDS-PAGE, las acuaporinas, con masas moleculares de 27 a 30 kD, usualmente

Forman la banda de polipptidos ms abundante. Los mtodos convencionales de purificacin

de protenas permiten la purificacin de cantidades sustanciales de acuaporinas, siempre y
cuando

El suministro de membranas est disponible (Johnson et al., 1989, Johansson et al., 1996). Las
acuaporinas son generalmente altamente antignicas, de modo que los anticuerpos
preparados para las fracciones totales de membrana a veces reconocen aquaporinas
especficamente. Protenas

Adems de las acuaporinas pueden formar tambin canales de agua y permitir el paso de agua
a travs de las membranas. Las Aquaporinas Son Tetrmeros de Polipptidos con Seis
Dominios que abarcan la membrana Las acuaporinas son miembros de la principal familia de
protenas intrnsecas (MIP). Todos los miembros de esta familia se caracterizan por la
presencia de seis dominios que abarcan la membrana y la secuencia de la firma Asn-Pro-Ala
(NPA). Este motivo NPA est presente dos veces, una vez en un bucle entre el segundo y tercer
dominios de membrana y una vez en un bucle entre el quinto y sexto dominio de la membrana
de los dominios. Se cree que estos dos bucles estn implicados en la formacin del poro
acuoso a travs del cual se mueve el agua. Un modelo de estructura de acuaporina se presenta
en la Figura 1. Todos los miembros de la familia MIP no son aquaporinas. Algunos miembros,
como la protena GlpF de Escherichia coli, facilitan el paso de glicerol, mientras que otros
miembros transportan urea. Algunos MIPs mamferos tienen una doble funcin, permitiendo
el paso de pequeos solutos, como el glicerol, y el agua, pero todava no hay evidencia
publicada sobre aquaporinas dualfuncin en las plantas. Sin embargo, Hertel y Steudle (1997)
observaron recientemente que los pequeos solutos orgnicos (es decir, los alcoholes) pueden
deslizarse a travs de los canales de agua de Chara corallina y concluyeron que los canales de
agua pueden no ser tan selectivos como se cree generalmente. El reto ser identificar los
sustratos fisiolgicos de las acuaporinas de doble funcin, ya que incluso si se encuentran que
las acuaporinas vegetales transportan glicerol, puede que ste no sea su sustrato fisiolgico.
Todas las acuaporinas no son igualmente eficaces para permitir el paso de agua a travs de las
membranas. Mediante el estudio de la base de datos de etiqueta de secuencia expresada por
Arabidopsis, encontramos 23 diferentes expresados MIPs (Weig et al., 1997). Muchos de estos
han sido verificados como aquaporinas expresando las protenas en oocitos de Xenopus y
midiendo el aumento resultante en la conductividad hidrulica de la membrana plasmtica del
ovocito. No sabemos si estos 23 miembros son todos acuaporinas o si algunas de ellas tienen
otras funciones o funciones duales. Las comparaciones de secuencias de aminocidos
muestran que los MIP de Arabidopsis forman tres grupos principales: un grupo de protenas
tonoplast (TIP) y dos grupos de membrana plasmtica

Protenas (PIP1 y PIP2) -con algunas acuaporinas adicionales no relacionadas con estos tres
grupos. La estructura tridimensional de las acuaporinas de mamfero se ha establecido a partir
de datos de dispersin de rayos X de cristales de acuaporina. Estas protenas forman
tetrmeros con una depresin central entre las subunidades. Los dos bucles con los motivos
NPA estn orientados hacia una depresin central en el tetrmero, y los bucles de las cuatro
subunidades probablemente interactan. Las membranas que tienen abundantes acuaporinas
tienen una energa de activacin baja para el movimiento del agua, z16 kJ mol21, que es
similar al movimiento del agua a granel. Se cree que las molculas de agua pasan a travs del
poro acuoso en un nico archivo, y una diferencia osmtica de 100 mM puede permitir el paso
de z106 molculas de agua por segundo por poro. Dentro de los canales, las molculas de agua
experimentan un entorno similar al del agua a granel. A pesar de la estructura tetramrica de
las acuaporinas, el canal acuoso no se forma entre las cuatro subunidades, sino que cada
polipptido de 27 kD es una unidad conductora de agua. Para aquellas aquaporinas de
mamfero que transportan pequeos solutos, es posible que el paso de las molculas de soluto
ocurre a travs del centro del tetrmero y resulta de un cambio en la forma en que los bucles
NPA interactan entre s (Echevarra et al., 1996). La evidencia reciente demuestra que dos
mutaciones de aminocidos en el sexto dominio transmembrana de una acuaporina de insecto
la convierten de un canal de agua a un canal de glicerol (Lagre et al., 1999).

La actividad de algunas aquaporinas se regula por fosforilacin

Estn las acuaporinas siempre "abiertas", o es su actividad de alguna manera

regulado? Dos grupos han comparado la permeabilidad hidrulica de las vesculas aisladas de
tonoplast y de membrana plasmtica y encontraron que las vesculas de tonoplast eran 10 a 50
veces ms permeables al agua que las vesculas de membrana plasmtica (Maurel et al.,
1997b). Por otra parte, la energa de activacin medida para el movimiento del agua a travs
de los dos tipos de membranas indic que el movimiento del agua a travs de las vesculas
tonoplast probablemente involucr aquaporinas (baja energa de activacin), mientras que el
movimiento del agua a travs de la membrana plasmtica probablemente ocurri por difusin
a travs de la bicapa lipdica Energa de activacin). Este resultado bastante sorprendente
indica que las vesculas de membrana plasmtica particulares utilizadas (a partir de clulas de
tabaco y races de trigo) tenan pocas acuaporinas o acuaporinas que eran en gran parte
inactivas. Recientes resultados (Maurel et al., 1997b, Johansson et al., 1998) indican que la
actividad de la acuaporina puede ser regulada por fosforilacin. Las acuaporinas han
conservado motivos de fosforilacin en los que ciertos residuos de serina son fosforilados in
vivo (Johnson y Chrispeels, 1992, Johansson et al., 1996). La fosforilacin aumenta la actividad
de la acuaporina tonoplast a-TIP de la acuaporina PM28A de la membrana de frijol y de plasma
de la espinaca. Esta conclusin se basa no slo en la expresin de aquaporinas de tipo salvaje y
mutante (serina a alanina) en ovocitos de Xenopus, sino tambin en la determinacin de las
tasas de hinchamiento de ovocitos en presencia de inhibidores de protenas quinasas y
fosfatasas de protenas. Curiosamente, la PM28A est pobremente fosforilada bajo dficit
hdrico, lo que lleva a la sugerencia de que las clulas vegetales pueden al menos parcialmente
cerrar sus acuaporinas con una prdida de turgencia. Johansson et al. (1998) propusieron un
modelo en el cual la prdida de turgencia causada por el dficit hdrico resulta en la
desfosforilacin de PM28A para disminuir la actividad de la acuaporina y conservar agua.

Los genes de la acuaporina de la planta se expresan diferencialmente

Con tantas acuaporinas y / o MIPs, no es sorprendente que los genes correspondientes estn
regulados diferencialmente. A travs de los anlisis de fusin de glucuronidasa-promotor-b
(GUS) y hibridacin in situ con sondas especficas de genes, se ha investigado la transcripcin
de una serie de genes de acuaporina. Estos estudios muestran diferencias dramticas en la
expresin del gen aquaporin entre diversos tejidos y tipos de clulas, pero si las diferencias en
la transcripcin se correlacionan con los niveles de aquaporina no est claro. Sin embargo, esta
expresin gnica o, ms correctamente, los estudios de abundancia de ARNm han llevado a las
siguientes conclusiones: (1) muchas acuaporinas estn altamente expresadas en tejidos
vasculares; (2) algunas acuaporinas tonoplastas estn altamente expresadas en meristemas
(donde tiene lugar la biognesis vacuolar); Y (3) las acuaporinas estn altamente expresadas en
tejidos que pueden experimentar flujo elevado de agua o metabolito (vase Barrieu et al.,
1998, y referencias en el mismo).

La expresin diferencial de los genes acuaporina se ha postulado para explicar tres aspectos
del equilibrio hdrico en las plantas. En primer lugar, la alta expresin de las acuaporinas
tonoplastas en las clulas meristemticas es necesaria para mantener la biognesis de las
vacuolas y preparar las clulas para el rpido aumento del volumen vacuolar que acompaa al
agrandamiento celular (para una revisin de la biognesis de las vacuolas, vase Marty, 1999, .
En segundo lugar, en tejidos o clulas que experimentan altos flujos de metabolitos, el
equilibrio osmtico rpido del citosol con agua de la vacuola puede ser un requisito previo.
Tercero, en los tejidos que experimentan el flujo de agua transcelular, las acuaporinas
reduciran en gran medida la resistencia a este flujo. Adems, debido a que la permeabilidad
del tonoplast es mucho mayor que la de la membrana plasmtica (Maurel et al., 1997b,
Niemietz y

Tyerman, 1997), la regulacin de este flujo puede ocurrir bien en la membrana plasmtica.

Investigaciones funcionales de las acuaporinas en la planta

Gran parte de la evidencia de la funcin de las acuaporinas vegetales se ha reunido en

sistemas heterlogos. Qu sabemos acerca de las acuaporinas vegetales in vivo? Maggio y
Joly (1995) encontraron que el cloruro de mercurio reduce rpidamente el flujo de agua de raz
inducido por presin en plantas de tomate decapitadas y que esta inhibicin se invierte en
gran medida mediante el tratamiento subsiguiente con b-mercaptoetanol. De manera similar,
muchas acuaporinas tambin son inhibidas reversiblemente por el cloruro mercrico, lo que
llev a los autores a concluir que las acuaporinas explican en gran medida la conductividad
hidrulica del sistema radicular. Tazawa et al. (1996) hicieron observaciones similares con las
clulas de Chara. Barone et al. (1997) demostraron recientemente que el cloruro mercrico
induce cambios conformacionales en los MIP de las plantas, y esta observacin puede
proporcionar una explicacin de la inhibicin observada del transporte de agua. Sin embargo,
no puede excluirse la posibilidad de que el cloruro mercrico y el b-mercaptoetanol ejerzan
sus efectos a travs de otras protenas de membrana o procesos celulares. Utilizando una
sonda de presin celular, Hertel y Steudle (1997) midieron la conductividad hidrulica, la
permeabilidad del soluto y los coeficientes de reflexin de los entrenudos de C. corallina en el
rango de temperatura de 10 a 358C. Ellos encontraron que el agua realmente usa canales de
agua para atravesar la membrana y que los cambios en el coeficiente de reflexin con la
temperatura son una medida sensible para el estado abierto / cerrado de los canales. Cuando
los canales estn abiertos, la energa de activacin es z10 a 15 kJ mol21, pero cuando se
cierran, la energa de activacin aumenta de 40 a 60 kJ mol21. Las plantas transgnicas
demuestran que los canales de agua son importantes tanto a nivel celular como a nivel de toda
la planta. Kaldenhoff et al. (1995, 1998) expresaron una construccin de PIP1b de Arabidopsis
en la orientacin antisentido. Las plantas antisentido haban reducido los niveles de estado
estacionario de los ARNm de PIP1a y PIP1b, y no haba reactividad cruzada detectable con
anticuerpos a la protena PIP1a. Los protoplastos de las plantas transgnicas, adems, se
hincharon y reventaron ms lentamente cuando se expusieron a condiciones hipotnicas que
los de las plantas control.

Correspondientemente, el coeficiente de permeabilidad al agua osmtico de las clulas se

redujo tres veces en las plantas antisentido. Curiosamente, la masa de races de las plantas
antisentido fue cinco veces mayor que la de las plantas testigo, aunque ambas lneas tenan
masas de brotes similares y se desarrollaron de manera similar. Los autores sugirieron que la
permeabilidad reducida del agua de las membranas plasmticas caus que las plantas
sobreproduzcan races como un mecanismo compensatorio para mantener el flujo de agua en
el xilema. Estos hallazgos argumentan que el flujo de agua es generalmente regulado por la
membrana plasmtica en lugar de por el tonoplast.

ADMISION DE NITRATO, FOSFATO Y SULFATO

Energtica, Mecanismos y Regulacin de la Captacin de Aniones

El nitrgeno, el fsforo y el azufre son macronutrientes que son necesarios para el crecimiento
y la reproduccin de las plantas. Estos elementos estn presentes en la solucin del suelo
como formas orgnicas e inorgnicas, incluyendo las especies aninicas nitrato, fosfato y
sulfato. La captacin de estos aniones presenta un desafo a las plantas porque su
concentracin en el suelo puede variar de dos a tres rdenes de magnitud y porque su
absorcin ocurre a menudo contra concentracin y gradientes elctricos. Para hacer frente a
estos desafos, las plantas han desarrollado sistemas de transporte activos que se regulan en
respuesta a los cambios en las condiciones ambientales e internas. El anlisis fisiolgico de la
absorcin de iones por las races de las plantas ha revelado varias clases distintas de
actividades de transporte reguladas. La obra original de Epstein clasific estas actividades en
dos mecanismos (revisados en Epstein, 1966, 1972). El mecanismo I opera a concentraciones
por debajo de 200 mM y se comporta como un portador saturable. A concentraciones ms
altas, el mecanismo II se hace evidente y muestra una cintica de saturacin lineal o mltiple.
Estos mecanismos tambin han sido llamados sistemas de captacin de alta y baja afinidad,
respectivamente. La figura 2 muestra una representacin grfica de estos tipos de cintica.
Para la captacin de aniones, tanto los sistemas de alta y baja afinidad tienen un rasgo
caracterstico: son electrognicos. Cuando las clulas vegetales estn expuestas a nitrato,
sulfato o fosfato, se induce una despolarizacin inicial de la membrana, haciendo que el
interior de la clula sea ms positivo (por ejemplo, vase Ullrich y Novacky, 1990, Glass et al.,
1992, Meharg y Blatt, 1995). La despolarizacin es seguida por la repolarizacin de la
membrana, que se ha atribuido a la actividad de H1-ATPasa mejorada en la membrana
plasmtica. La amplitud de la despolarizacin inicial es inversamente proporcional al pH de la
solucin del bao y est asociada con una alcalinizacin del medio extracelular. Estos datos
indican que la captacin de aniones requiere el co-transporte de dos o ms protones para cada
anin, aunque no se puede descartar hidrxido antiport. Otra caracterstica de la captacin de
aniones es que est regulada (revisada en Clarkson y Luttge, 1991, von Wiren Et al., 1997;
Crawford y Glass, 1998; Schachtman et al., 1998). En el caso de fosfato y sulfato, las
actividades de transporte de alta afinidad se desreprimen cuando las plantas se ven privadas
del nutriente. En el caso del nitrato, los transportadores de alta afinidad son inducidos por el
nitrato y son retroactivos inhibidos por formas reducidas y orgnicas de nitrgeno. Estas
respuestas permiten a las plantas ajustar la absorcin de aniones a las condiciones
ambientales y al metabolismo interno. Los estudios fisiolgicos descritos anteriormente han
sentado las bases para el anlisis molecular y gentico de la captacin de aniones (revisado en
Tanner y Caspari, 1996, von Wiren et al., 1997, Crawford y Glass, 1998, Forde y Clarkson, 1998,
Schachtman et al , 1998). Un reto importante ha sido

Para identificar los componentes de cada sistema de absorcin y determinar la contribucin

que cada uno hace a la absorcin de nutrientes y al crecimiento de las plantas. Muchos genes
transportadores de aniones han sido clonados, y todos han predicho topologas de membrana
encontradas en cotransportadores con 12 dominios que abarcan la membrana. Muchos de los
genes clonados tambin muestran expresin regulada y producen productos funcionales en
clulas heterlogas

Como levaduras o ovocitos de Xenopus. En un caso, las plantas con mutaciones en el gen
transportador se han identificado y utilizado para el anlisis funcional. Las conclusiones
iniciales de este trabajo son que mltiples genes regulados estn involucrados
En la captacin de un anin particular y que los transportadores de plantas comparten la
secuencia y la similitud funcional con protenas equivalentes en hongos y levaduras (vase ms
adelante).

La identificacin de los transportadores de fosfato regulados de alta afinidad

En la mayora de los suelos, el fosfato no es mvil y se agota rpidamente de la rizsfera. A

menudo, las plantas deben absorber fosfato inorgnico soluble a partir de concentraciones de
10 mM, manteniendo al mismo tiempo concentraciones citoslicas de 5 a 10 mM (Lee y
Ratcliffe, 1993). Las races de las plantas tienen un sistema de captacin de alta afinidad que
est especficamente desreprimido por la privacin de fosfato (revisado en Clarkson y Luttge,
1991, Schachtman

Et al., 1998). La clonacin y el anlisis de los genes transportadores de fosfato de las plantas se
hicieron posibles por la disponibilidad de mutantes y clones transportadores de hongos y
levaduras. Los genes de las plantas muestran una gran similitud de secuencia entre s, y
muestran la regulacin en respuesta a la inanicin de fosfato (revisado en Schachtman et al.,
1998). Se aislaron inicialmente genes transportadores de fosfato eucaritico de alta afinidad a
partir de Saccharomyces cerevisiae (PHO84, Bun-ya et al., 1991), Neurospora crassa (PHO-5,
Versaw, 1995) y el hongo micorrzico arbuscular Glomus versiforme

(GvPT, Harrison y van Buuren, 1995). Los clones de cDNA con secuencias relacionadas se
identificaron entonces en las bases de datos de etiqueta de secuencia expresadas por
Arabidopsis. Despus,

Los genes transportadores de fosfato se aislaron de Arabidopsis (Muchhal y col., 1996, Lu et

al., 1997, Smith et al., 1997a), tomate (Daram et al., 1998, C. Liu et al., 1998) (Leggewie et al.,
1997) y Medicago truncatula (H. Liu et al., 1998). Los genes de las plantas muestran
tpicamente entre el 75 y el 85% de identidad entre ellos y entre el 25 y el 35% de identidad
con los transportadores de hongos en el nivel de aminocidos. En un caso, dos genes (APT1 y
APT2) son 99% idnticos y estn genticamente vinculados (Smith et al., 1997a). Todos los
genes de la planta responden a la privacin de fosfato con un aumento dramtico en los
niveles de transcripcin, y la mayora de las protenas correspondientes se localizan en las
races. Para los genes del tomate, la expresin se limita principalmente a la epidermis de la raz
(C. Liu et al., 1998). Curiosamente, ambos genes M. truncatula son downregulated cuando las
races son colonizadas por hongos micorrzicos (H. Liu et al., 1998). Por ltimo, el anlisis
funcional de los transportadores de fosfato vegetal mostr que la mayora complementa la
levadura pho84

Un mutante transportador de fosfato de alta afinidad (Bun-ya et al., 1991).

Los hallazgos resumidos anteriormente indican que los genes de plantas clonados codifican
transportadores de fosfato de alta afinidad. Por lo tanto, se esperara que estos
transportadores tuvieran un Km entre 1 y 10 mM para la absorcin de fosfato. Sin embargo,
los valores de Km medidos para los transportadores de plantas expresados en levadura son
todos superiores a 30 mM: 130 mM para StPT2 y 280 mM para StPT1 de papa, 192 mM para
MtPT1 de

M. truncatula y 31 mM para LePT1 a partir de tomate (Leggewie et al., 1997, Daram et al.,
1998, H. Liu et al., 1998). Para explicar esta discrepancia, un informe reciente sugiere que los
altos valores de Km observados en la levadura se deben al ambiente extrao en el que se
expresan estas protenas vegetales (Mitsukawa et al., 1997). Este trabajo encontr una mayor
actividad de absorcin de fosfato en clulas de cultivo de tejido de tabaco que sobreexpresan
el transportador de APT2 (tambin denominado AtPT1 y PHT1) aunque no se detect ninguna
complementacin de APT2 del mutante pho84 de levadura. La actividad de absorcin de
fosfato en tabaco atribuida al gen APT2 tena un Km de 3 mM y fue inhibida por protonforos,
lo que indica que APT2 es un simportador de protn / fosfato de alta afinidad.

Para explicar la diferencia de actividad o valores de Km entre levadura y plantas,

Se ha sugerido que los transportadores de fosfato de plantas pueden ser modificados en

plantas. Alternativamente, pueden interactuar con otras protenas vegetales (como se ha
postulado en levadura [Bun-ya et al., 1996]) para generar un complejo de transporte con
propiedades cinticas alteradas (Mitsukawa et al., 1997; Smith et al., 1997a ). Los genes
fngicos descritos anteriormente son todos simbolos H1-fosfato; Sin embargo, los hongos
tambin poseen simipantes de Na1-fosfato. Una bsqueda en la base de datos del genoma
muestra que en el genoma de Arabidopsis existe un homlogo al simportador fosfato de Na1
PHO-4 (nmero de acceso a GenBank X97484), lo que indica que el acoplamiento de Na1
tambin puede existir en plantas superiores (vase ms adelante para acoplamiento a K1).

Identificacin de Transportadores de Sulfato con Diferentes Afinidades para Sulfato y

Diferentes Patrones de Expresin

La absorcin de sulfato se caracteriza por un sistema de alta afinidad inducido por la inanicin,
con un Km entre 10 y 20 mM, junto con un sistema de baja afinidad no saturada y no saturada
(Legget y Epstein, 1956, revisado en Clarkson y Luttge, 1991, Hawkesford et al. , 1993). Los
genes transportadores de sulfato de alta afinidad se identificaron originalmente en N. crassa
(Ketter et al., 1991) y levadura (Smith et al., 1995b). Se us un mutante de levadura para
clonar tres clones de ADNc transportador de sulfato de la leguminosa tropical Stylosanthes
hamata (Smith et al., 1995a). Las protenas SHST1 y SHST2 son idnticas en un 95% y, cuando
se expresan en levaduras, muestran una captacin de sulfato aumentada con cido con un Km
de 10 mM. La expresin de los genes SHST1 y SHST2 es especfica de la raz y desreprimida por
la privacin de sulfato. El tercer gen, SHST3, pertenece a una clase diferente porque es z50%
idntico a los dos primeros genes (en el nivel de aminocidos), muestra un mayor Km (100
mM) para la absorcin de sulfato en la levadura, y expresa mucho menos mRNA en Plantas
que los genes SHST1 y SHST2. El gen SHST3 tiene otra propiedad interesante: sus niveles de
ARNm son ms altos en brotes que en races de plantas suministradas con azufre adecuado
pero pueden disminuir (en las hojas) en condiciones de limitacin de sulfato. Se han
identificado ms recientemente genes transportadores de sulfato adicionales en Arabidopsis
(AST56 y AST68, Takahashi et al., 1996, 1997) y cebada (HVST1, Smith et al., 1997b). La
protena HVST1 es ms similar en secuencia y actividad a las protenas SHST1 y SHST2 de S.
hamata. HVST1 expresado en levadura muestra un Km de 7 mM para la absorcin de sulfato, y
su ARNm se encuentra exclusivamente en las races, aumentando en abundancia en respuesta
a la privacin de sulfato. Sin embargo, los productos de los dos genes de Arabidopsis son ms
similares a SHST3 (60% de identidad de secuencia peptdica) que a las protenas SHST1 y SHST2
(50% de identidad). Los patrones de expresin AST56 y AST68 tampoco son especficos de la
raz. AST56 se expresa constitutivamente, mientras que AST68 se induce con hambre sulfato.
Estos hallazgos indican que la clase SHST1 / SHST2 / HVST1 de transportadores de sulfato es
parte del sistema de captacin de alta afinidad inducida por la inanicin en las races de las
plantas. Se cree que la segunda clase (compuesta por SHST3, AST56 y AST68) contiene
transportadores de baja afinidad que cargan sulfato en el tejido vascular en las races y
descargan el sulfato en clulas foliares (para AST68, Takahashi et al., 1997) o transporte
Sulfato internamente entre compartimentos celulares o subcelulares (para SHST3, Smith et al.,
1995a). No se han asignado transportadores a un sistema de captacin de sulfato de baja
afinidad en la raz.

Identificacin de afinidad alta y baja

Transportadores de Nitrato

La nutricin nitrogenada inorgnica difiere de la del fosfato y del sulfato en que no se utilizan
fcilmente una sola pero dos formas inorgnicas, amonio y nitrato, (adems, el N2 gas es
usado por los fijadores de nitrgeno). Para muchas plantas, la presencia de amonio y nitrato es
ptima para el crecimiento, pero el nitrato se absorbe en la mayor cantidad. La captacin de
nitrato de alta afinidad se caracteriza por valores de Km para nitratos entre 7 y 80 mM y
saturacin por debajo de 200 mM (revisado en Glass y Siddiqi, 1995; Crawford y Glass, 1998).
La actividad de absorcin de alta afinidad tambin muestra regulacin tanto positiva como
negativa. En plantas que no han sido expuestas a nitrato, la actividad de absorcin de alta
afinidad se detecta a un nivel basal. Cuando una raz se expone a nitrato, aumenta la actividad
de absorcin de alta afinidad y aparece una nueva actividad con un Km distinto. Si el nitrato se
acumula en la raz o si la raz est expuesta a amonio oa ciertos aminocidos, la absorcin se
regula negativamente. Las plantas tambin poseen otra actividad de captacin que es
detectable a concentraciones de nitrato por encima de 0,2 a 0,5 mM y que muestra cintica
lineal (no saturada). Esta actividad de baja afinidad no parece inducida por el nitrato en plantas
como la cebada. A partir de estos hallazgos, se propuso que las plantas tienen tres sistemas de
captacin de nitratos: un sistema constitutivo de captacin de alta afinidad (cHATS), un
sistema de alta afinidad inducible (iHATS) y un sistema constitutivo de baja afinidad (cLATS)
Siddiqi, 1995; Crawford y Glass, 1998). La actividad de absorcin de alta afinidad tambin
muestra regulacin tanto positiva como negativa. En plantas que no han sido expuestas a
nitrato, la actividad de absorcin de alta afinidad se detecta a un nivel basal. Cuando una raz
se expone a nitrato, aumenta la actividad de absorcin de alta afinidad y aparece una nueva
actividad con un Km distinto. Si el nitrato se acumula en la raz o si la raz est expuesta a
amonio oa ciertos aminocidos, la absorcin se regula negativamente. Las plantas tambin
poseen otra actividad de captacin que es detectable a concentraciones de nitrato por encima
de 0,2 a 0,5 mM y que muestra cintica lineal (no saturada). Esta actividad de baja afinidad no
parece inducida por el nitrato en plantas como la cebada. A partir de estos hallazgos, se
propuso que las plantas tienen tres sistemas de captacin de nitratos: un sistema constitutivo
de captacin de alta afinidad (cHATS), un sistema de alta afinidad inducible (iHATS) y un
sistema constitutivo de baja afinidad (cLATS) Siddiqi, 1995, Crawford y Glass, 1998).

La actividad de absorcin de alta afinidad tambin muestra regulacin tanto positiva como
negativa. En plantas que no han sido expuestas a nitrato, la actividad de absorcin de alta
afinidad se detecta a un nivel basal. Cuando una raz se expone a nitrato, aumenta la actividad
de absorcin de alta afinidad y aparece una nueva actividad con un Km distinto. Si el nitrato se
acumula en la raz o si la raz est expuesta a amonio oa ciertos aminocidos, la absorcin se
regula negativamente. Las plantas tambin poseen otra actividad de captacin que es
detectable a concentraciones de nitrato por encima de 0,2 a 0,5 mM y que muestra cintica
lineal (no saturada). Esta actividad de baja afinidad no parece inducida por el nitrato en plantas
como la cebada. A partir de estos hallazgos, se propuso que las plantas tienen tres sistemas de
captacin de nitratos: un sistema constitutivo de captacin de alta afinidad (cHATS), un
sistema de alta afinidad inducible (iHATS) y un sistema constitutivo de baja afinidad (cLATS)
Siddiqi, 1995, Crawford y Glass, 1998). Los esfuerzos para identificar los componentes de estos
tres sistemas de captacin llevaron a la clonacin y caracterizacin de varios genes
transportadores de nitrato (revisado en Crawford y Glass, 1998). Dos familias de genes,
denominadas NRT1 y NRT2, han sido identificadas hasta el momento. El primer gen
identificado en la familia NRT2 fue crnA de Aspergillus nidulans (Unkles et al., 1991). Una
mutacin en este gen reduce la captacin de nitrato de dos a cuatro veces en las conidiosporas
y los micelios jvenes, pero no en los micelios ms antiguos (Brownlee y Arst, 1983).
Posteriormente, un par de genes de algas relacionadas con crnA (Nrt2; 1 y Nrt2; 2,
originalmente llamado nar-3 y nar-4) fue aislado de Chlamydomonas (Quesada et al., 1994).
Las mutaciones en estos genes afectan la absorcin de nitrato de alta afinidad. Algn tiempo
despus, los genes NRT2 fueron identificados en plantas superiores (revisado en Crawford y
Glass, 1998). La expresin de estos genes es especfica de la raz.

Por qu existen mltiples mecanismos de transporte de absorcin de nutrientes?

Todava no se han determinado experimentalmente las razones fisiolgicas de la existencia de

grandes familias de genes para el transporte de nutrientes vegetales. Sin embargo, varias
consideraciones proporcionan explicaciones plausibles. En primer lugar, la redundancia en los
mecanismos esenciales para la acumulacin de nutrientes puede ser importante para la
supervivencia de las plantas. En segundo lugar, como se discuti anteriormente, la gran
variacin fisiolgica en el suelo y las concentraciones apoplsicas de nutrientes y iones
competidores txicos pueden requerir una serie de mecanismos de transporte de nutrientes
para asegurar la absorcin de nutrientes dependiente de la condicin. Tercero, la expresin en
membranas diferentes (por ejemplo, membrana plasmtica frente a tonoplast) y tejidos (por
ejemplo, pelos radicales frente a floema) es importante y an no se ha analizado en detalle,
particularmente para transportadores K1. Cuarto, alta afinidad constitutiva e inducible

Los componentes de absorcin pueden responder a la disponibilidad de nutrientes y

condiciones inicas cambiantes. Por ejemplo, se inform que los niveles de expresin de AKT1
no estaban afectados por la inanicin de K 1 en las races de Arabidopsis (Lagarde et al., 1996).
Por lo tanto, AKT1 ha sido la hiptesis de contribuir a la constitutiva K1 captacin en
Arabidopsis (Lagarde et al., 1996). Estudios en los ltimos tres aos y la investigacin anterior
de Kochian et al. (1989) muestran que los modelos ms antiguos que asumen una va principal
para la captacin de K1 de alta afinidad no son adecuados para analizar la complejidad
biolgica subyacente de la nutricin K1.

Problemas no resueltos en el transporte de potasio

Se han hecho avances significativos en la caracterizacin de ADNc y en el anlisis de los

mecanismos de transporte biofsicos de cada uno de los transportadores de plantas K1. Sin
embargo, hallazgos recientes sealan muchas cuestiones centrales no resueltas con respecto a
la absorcin de nutrientes K1 integrada en la planta. La incapacidad hasta ahora para resolver
los mecanismos de absorcin de K1 de alta afinidad individual en races enteras de plantas
terrestres sugiere que las familias transportadoras discutidas anteriormente, y tal vez otras
an desconocidas, pueden funcionar en paralelo. Las mutaciones de prdida de
funcionamiento, tales como chl1 y akt1-1, pueden proporcionar una visin de las
contribuciones de los genes individuales a la absorcin de nutrientes en diferentes condiciones
de crecimiento. Importantes preguntas abiertas, incluyendo la expresin especfica de tejido,
membrana

Los mecanismos de regulacin postraduccionales y las respuestas normativas a las diferentes

condiciones ambientales. La capacidad de interrumpir genes individuales en especies vegetales
como Arabidopsis y maz, junto con anlisis interdisciplinarios, proporcionar enfoques para
determinar los papeles de los transportadores individuales de K1 a muchos procesos
fisiolgicos de las plantas esenciales.