Manual Diagnostika PDF

Manual de Anatomia
Patolgica e
Patologia Molecular
Manual
de Anatomia
Patolgica
e Patologia
Molecular
1 Edio 2015
NDICE
Manual de Anatomia Patolgica
NDICE
09 Introduo
11 Apresentao
13 Sobre o Grupo Hermes Pardini
16 Unidades
17 Modalidades de exames oferecidos
18 Corpo Clnico
27 Interpretao
27 Instrues especficas e solicitao de exame
28 Instrues gerais de envio
31 Anlise de bipsia simples ou bipsias mltiplas

32 Espcime
32 Material utilizado para fixao
32 Procedimento de Fixao
33 Recomendaes para alguns tipos de amostras
34 Observao importante
34 Solicitaes
34 Amostras inadequadas
37 Anlise de pea cirrgica (radical ou simples)

38 Espcime
38 Material utilizado para acondicionamento
38 Acondicionamento do material e fixao
39 Orientaes para clivagem das peas cirrgicas
43 Solicitaes
45 Anlise citolgica no ginecolgica (puno-bipsia de rgos variados)

46 Espcime
46 Material utilizado fixao e acondicionamento
47 Solicitaes
4
NDICE
49 Anlise citolgica no ginecolgica (citologia geral)
50 Espcime
51 Material utilizado para fixao e acondicionamento
53 Solicitaes
55 Anlise de colpocitologia onctica

56 Espcime
59 Solicitaes
61 Imunohistoqumica e imunocitoqumica
62 Geral
62 Espcime
63 Solicitaes
65 Hibridizao in situ
66 Geral
66 Espcime
67 Solicitaes
69 Reviso de lminas
70 Geral
70 Material necessrio
70 Solicitaes
71 Limitaes para a avaliao
5
73 Imunofluorescncia direta
74 Geral
74
Recomendaes importantes
74
Observao importante
75
Solicitaes
75
Amostras inadequadas
77 Patologia Molecular
78 Diagnsticos Moleculares
78
1P e 19Q, perda de heterozigosidade associada oligodendroglioma
79
Anlise de 18Q, perda de deterozigosidade associada carcinoma colorretal
79
BCL1-IGH T(11;14), PCR qualitativo
80
80
BCL1/JH, PCR
81
BCL2/JH, PCR
81
BRAF, mutao V600E
82
BRCA1 | BRCA2 - delees e duplicaes por MLPA
82
BRCA1 | BRCA2 - Sequenciamento gnico completo
83
Cncer de mama, painel Next Generation Sequencing (NGS)
84
Cncer de pulmo, mutao driver - Lung Scan
85
Cncer de pulmo, painel Next Generation Sequencing (NGS)
85
Chlamydia pneumoniae, PCR
86
Citomegalovrus, PCR
87
C-KIT, pesquisa de mutao no gene
88
Clonalidade B, PCR FR1, FR2, FR3
88
Clonalidade B, PCR FR1 em bloco de parafina
89
Clonalidade B, PCR FR2 em parafina ou bipsia
89
89
Clonalidade T, PCR gamma
89
Epstein BARR, PCR
90
EGFR, estudo de mutaes do gene
91
EML4-ALK, transloo do gene, FISH
92
Herpes simples vrus 1 e 2, PCR e genotipagem
93
HER-2 (ERBB2), pesquisa de mutao no gene
93
HER-2, pesquisa de amplificao, FISH
94
HHV6,PCR
94
HHV7,PCR
95
HPV, captura hbrida
95
IDH1 e IDH2 (xon 4), anlise de mutao nos genes
96
Instabilidade de microssatlites
6
NDICE
96 JC vrus, PCR
97 KRAS, estudo molecular da mutao do gene
97 Legionella, PCR
98 Leishmania, PCR
99 MGMT, anlise do promotor do gene, PCR
100 Mycobacterium Sp, PCR
100 Mycobacterium tuberculosis, PCR
101 Mycoplasma pneumoniae, PCR
101 N-MYC, amplificao do gene, FISH
102 NRAS, pesquisa mutao do gene
102 PDGFR ALFA, pesquisa mutao
103 Protooncogene RET - CMT esporadico - xons 16 e 15
104 TP53, estudo molecular do gene
106 Toxoplasmose, PCR
106 Varicela Zoster Vrus, PCR
7
INTRODUO
Grupo Hermes Pardini
Presidente Conselho de Administrao: Dr. Victor Cavalcanti Pardini

Presidente Executivo: Dr. Roberto Santoro Meirelles
Vice-Presidente de Medicina Diagnstica: Dr. Ricardo Dupin Lustosa
Diretor Presidente Diagnstika: Dr. Alessandro Clayton S. Ferreira
Diretor Geral (CEO) | Diagnstika: Vlamir Ramos
Diretor Clnico | Diagnstika: Dr. Roberto El Ibrahim
Diretor Tcnico | Diagnstika: Dr. Filadfio Venco
Responsvel Tcnico: Dr. Filadelfio Venco CRM:36522-SP

INTRODUO
1. Apresentao
SOBRE A DIAGNSTIKA:
A Diagnstika um dos mais completos laboratrios de Patologia

Cirrgica do Brasil. Criada em 1984 por mdicos renomados, tem o
compromisso de evoluo constante, pautada em garantir equipes
mdicas multidisciplinares formadas por especialistas de alto nvel
orientados para a inovao cientfica.
Reconhecida por desenvolver solues de elevado valor agregado

a toda a cadeia dependente da Anatomia Patolgica e Patologia
Cirrgica, oferece apoio s decises diagnsticas e teraputicas de alta
complexidade em hospitais, clnicas e outros laboratrios, processando
cerca de 500 mil exames por ano. Com a expertise de centenas de
profissionais, desenvolveu sistema lean e parque automatizado para
operao em rede multirregional.
A equipe de especialistas atende vrias reas mdicas, consolidando o

objetivo a misso dos fundantes de desenvolver e aplicar um modelo de
patologia cirrgica, global e reprodutvel.
As principais especialidades contempladas so:
- Cabea e Pescoo
- Citologia
- Dermatologia
- Fgado e Vias Biliares
11
- Gastroenterologia
- Ginecologia
- Imunopatologia
- Mastologia
- Molstias infecciosas
- Nefrologia
- Neurologia
- Oncologia
- Patologia Geral
- Patologia Peditrica
- Pneumologia
- Transplantes
- Urologia
Assim se traduz o cotidiano da Diagnstika: modernidade em Patologia

Cirrgica e Citologia com segurana, confiabilidade, rapidez, preciso
e foco na gerao de laudos criteriosos e integrados, que indiquem o
melhor e mais personalizado tratamento para cada caso.
INTRODUO
SOBRE O GRUPO HERMES PARDINI
Desde 1959, o Hermes Pardini referncia em Medicina Diagnstica e

Preventiva. Ao longo dos anos, a marca foi incorporando novos servios
ao seu portfolio e conta, hoje, com muitos outros servios de alta
relevncia no mercado diagnstico e de preveno em sade.
Para ampliar e qualificar ainda mais sua oferta, o Hermes Pardini iniciou
um processo de expanso em 2012, tornando-se um grupo de Medicina
Diagnstica e Preventiva que oferece solues completas para mdicos,
hospitais, laboratrios conveniados, indstria farmacutica e pacientes,
que vo desde exames de rotina a testes preditivos para neoplasias
hereditrias.
A entrada da Diagnstika para o Grupo permitiu a ampliao da expertise

e do potencial de produo na realizao de exames de patologia
cirrgica, citopatologia, imunohistoqumica e patologia molecular.
13
Prezado(a) colega,
O Manual de Anatomia Patolgica foi criado com o objetivo de

disponibilizar informaes tcnicas e cientficas relevantes para a
rotina dos patologistas. Esta publicao refora nosso compromisso
com a Medicina Diagnstica e Preventiva de qualidade e baseada em
evidncias.
A Diagnstika nasceu do pensamento diferenciado de patologistas

renomados que se anteciparam ao futuro, percebendo que, se a
especializao uma tendncia mundial em sade, nos diagnsticos de
alta complexidade no poderia ser diferente.
O laboratrio implantou um moderno sistema de Telepatologia, que

permite transformar a lmina em uma imagem digital de alta resoluo
a ser analisada em qualquer parte do mundo.
A busca por excelncia nos servios prestados aos clientes gera

reconhecimento. A Diagnstika participa dos programas de proeficincia
do Colgio Americano de Patologias, com ndices de concordncia de
100% para Her-2, alm das certificaes reconhecidas na rea de sade
como a ONA- Organizao Nacional de Acreditao.
A Diagnstika est cada vez mais presente nas salas cirrgicas,

estreitando a parceria com a classe mdica. A empresa conta tambm
com o apoio de parceiros para promover discusses cientficas.
Esperamos que esta publicao possa contribuir para o trabalho de

todos que, a cada dia, tratam cada paciente como o mais importante.
Boa leitura e sucesso a todos.
Dr. Filadlfio Venco

Dr. Roberto El Ibrahim
15
INTRODUO
2. Unidades
www.diagnostika.med.br | (11) 3549-2222
Unidade So Paulo
Rua Frei Caneca, 1.119 - Consolao
So Paulo - SP - 01307-003
Unidade Rio de Janeiro
Av. Presidente Vargas, 962 / 3 andar - Centro

Rio de Janeiro - RJ - CEP 20071-002
16
INTRODUO
3. Modalidades de exames ofertadas
3.1 Antomo Patolgico
O Antomo Patolgico consiste na avaliao macro e microscpica de

tecidos e clulas de um paciente. um procedimento realizado por
mdicos especializados em Patologia Cirrgica Geral e necessrio
no diagnstico de doenas ou para estabelecer o estadiamento de
tumores.
Com o material coletado na bipsia possvel identificar os aspectos

antomo-patolgicos do tumor e informaes que determinam o perfil
da doena, seu tipo histolgico, grau de malignidade e prognstico.
3.2 Citopatologia
A equipe de especialistas em Citopatologia capacitada para oferecer

preciso diagnstica qualificada, fornecendo informaes relevantes
das principais doenas (neoplsicas e infecciosas) em diversos stios
anatmicos, incluindo lquido asctico, pleural, cfalo-raquidiano
(lquor), pericrdico e outros, contribuindo para que o mdico
responsvel oferea o melhor tratamento a cada paciente.
3.3 Diagnsticos Moleculares
O Diagnstico Molecular uma rea crescente em Medicina

Diagnstica, Teraputica e Preventiva. A Diagnstika oferece uma
ampla lista de exames que auxiliam no diagnstico e na identificao
de fatores prognsticos que colaboram para a definio da conduta
mdica e teraputica. Os testes moleculares so realizados por
modernas tcnicas de sequenciamento, hibridizao e PCR em
materiais de bipsia ou resseco cirrgica emblocados em parafina,
citologia em meio lquido, puno aspirativa por agulha fina e sangue.
17
3.4 Imunohistoqumica (Isolada ou painel)
Nenhum procedimento obteve tamanha importncia em medicina

diagnstica, nas ltimas dcadas, como a Imunohistoqumica, j includa
na rotina diagnstica de material citolgico e histolgico. Complementar
aos exames da maioria das especialidades contempladas pela
Diagnstika, os exames de Imunohistoqumica possibilitam preciso
cada vez maior e prescrio cada vez mais personalizada de tratamento
para cada indivduo. Por meio da reao antgeno-anticorpo no corte
histolgico, possvel detectar a presena de molculas especficas.
4. Corpo Clnico
A Diagnstika concentra em sua equipe os mais consagrados

especialistas das principais reas mdicas, viabilizando um modelo de
atuao nico, global e reprodutvel em Patologia Cirrgica que permite
realizar e integrar toda a gama de exames de alta complexidade.
CITOPATOLOGIA
Dr. Daniel Chang CRM-SP: 94.194

Graduao -Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto-USP
Residncia mdica- Anatomia Patolgica e Dermatopatologia HC-FMRP-USP
Mestre em Cincias Mdicas e Patologia Humana - FMRP-USP
Doutor em Medicina-Dermatologia - FMUSP
Especializao - Administrao Geral
MBA - Gesto Estratgica-Habilitao em Servios
Dr. Bruno Ctenas CRM-SP: 112.005

Graduao - Faculdade de Medicina USP
Residncia mdica em Anatomia Patolgica pelo Departamento de Patologia da
FMUSP
Ttulo de Especialista em Patologia pela SBP
MBA Executivo pelo INSPER em Gesto de Sade Einstein
Prmio Young Scientist no European Respiratory Society Congress de 2007 (ERS
Congress 2007) pelo trabalho apresentado VCAM-1 and ICAM-1 expression in
lung leptospirosis
Dr Fabio Daniel Molinari CRM-SP: 132.947

Graduao - Faculdade Evangelica de Medicina do Paran 2002
Residncia mdica Hospital Universitrio Evanglico do Paran 2006
Especializao patologia cirrgica HIAE 2008
Estgio em neuropatologia Hospital MD Anderson 2008
18
INTRODUO
Titulo de Especialista em Patologia -SBP
MBA em gesto em sade (em andamento)
Dra. Danielle Azevedo Chacon CRM-SP: 120.630

Graduao: Universidade de Santo Amaro - UNISA, So Paulo, SP
Residncia Mdica: Hospital Helipolis, So Paulo
Ttulo de especialista em citopatologia - Certificao em rea de Atuao em
Citopatologia (2012)
Dra Claudia Lopes Pires CRM-RJ: 54356-1

Residncia mdica - Anatomia Patolgica e Citopatologia -UFF (Universidade
Federal Fluminense)
Especialista em Anatomia Patolgica - CRM
Especializao em Patologia Oncolgica - INCA
Especializao em Citopatologia- INCA
Especializao em Dermatopatologia
Patologista Do Instituto Nacional de Cancer desde 1998.
DIAGNSTICOS MOLECULARES
Dra. Ellen Caroline Toledo do Nascimento CRM-SP: 117.386

Graduao FAMERP
Residncia - Patologia FAMERP
Especialista em Patologia SBP
Doutora em Cincias, rea Patologia da FMUSP
PATOLOGIA CIRRGICA GERAL
Dr. Lucas Mendes de Oliveira CRM-SP: 51.263

Graduao Faculdade de Medicina da Santa Casa de SP
Residncia - Anatomia Patolgica - Departamento de Cincias Patolgicas - Santa
Casa SP
Especializao - Anatomia Patolgica SBP
USCAP 2006, United States and Canadian Academy of Pathology. Atlanta,
Georgia
III Curso internacional de Patologia Mayo Clnic/SBP(2000)
Dra. Marcela Regina Longo Borsato CRM-SP: 130.387

Graduao - Faculdade de Medicina de Marlia (FAMEMA)
Residncia - Anatomia Patolgica FMUSP
19
Dra. Candice I. Ronchi CRM-SP: 128674

Graduao UFPR
Residncia em Anatomia Patolgica- Hospital Erasto Gaertner
Dr. Floriano Rodrigues Riva Neto CRM-SP: 148.861

Graduao: Universidade de Cuiab-UNIC, Cuiaba, MT
Residncia mdica: Fundao Antonio Prudente, Hospital AC Camargo
Titulo de Especialista em Patologia SBP
Dr Fabio Daniel Molinari CRM-SP: 132.947

Graduao medicina Faculdade Evangelica de Medicina do Paran 2002
PATOLOGIA DE CABEA E PESCOO
Dr. Humberto Setsuo Kishi CRM-SP: 97.414

Graduao FMUSP
Residncia - Anatomia Patolgica - FMUSP
Estgios - Centro Nacional de Cncer em Tquio e Tokio Medical and Dental School
Estgio - Brigham and Womens Hospital. Harvard Medical School
Mdico patologista - Diviso de Anatomia Patolgica HC FMUSP
Dra. Juliana Pignatari Micelli CRM-SP: 108.438

Graduao UNOESTE
Residncia - Patologia FMSJRP
PATOLOGIA BUCAL
Dra. Juliana Pignatari Micelli CRM-SP: 108.438

Graduao UNOESTE
Residncia - Patologia FMSJRP
Dra Julizia Foloni May CRM-SP:109727

Graduao Faculdade de Medicina do ABC
Residncia Patologia pela FM ABC
Extenso universitria - Anatomia Patolgica - Hospital Israelita Albert Einstein
Estgio em Dermatopatologia no Hospital MD Anderson
20
INTRODUO
PATOLOGIA PULMONAR E TORCICA
Dra. Ellen Caroline Toledo do Nascimento CRM-SP: 117.386

Graduao FAMERP
Residncia - Patologia FAMERP
Doutoranda FMUSP
PATOLOGIA GASTROINTESTINAL, PNCREAS E VIAS BILIARES
Dr. Filadelfio Euclides Venco CRM-SP: 36.522

Graduao e Residncia - Patologia FMUSP e Hospital das Clnicas
Especializaes:
- Patologia Gastrointestinal - Institute of Basic Medical Sciences, University of
Tsukaba, Japo
- Patologia do Transplante Heptico - Liver Laboratory, Universidade de
Birminghan, Inglaterra
Referncia nacional em Patologia Gastrointestinal, fgado e pncreas
Desenvolveu com seus pares expertise em microhistologia de bipsias
pancreticas guiadas por ecoendoscopia
Primeiro patologista latino-americano a apresentar sua experincia nacional na
Associao Japonesa do Cncer Gstrico, em Nigata, Japo
Prmio Empreendedores do ano pela Ernst Young e Empreendedores do Novo
Brasil pela Voc S/A. (2007)
Dr. Roberto El Ibrahim CRM: 39.832

Graduao FMUSP
Residncia - Departamento de Patologia FMUSP e Hospital das Clnicas
Especializao - Colposcopia Sociedade Brasileira de Patologia Cervical Uterina
e Colposcopia
Certificado da Educacional Comission for Foreign Medical Graduates (EUA )
Clinical and Research Fellow, Brigham and Womens Hospital Harvard University
(EUA)
Bolsista - JICA, Japan International Cooperation Agency - Curso de Patologia
Gastrointestinal Estgio Hospitalar - Institute of Basic Medical Sciences - University
of Tsukuba (Japo)
Dra. Daurita Darci de Paiva CRM-RJ: 151.124

Graduao UFRN
Mestrado - Anatomia Patolgica UFRJ
Doutorado - Medicina Tropical - Fundao Oswaldo Cruz
Professora Adjunta UFRJ
21
Dr. Humberto Setsuo Kishi CRM-SP: 97.414

Graduao FMUSP
Residncia - Anatomia Patolgica FMUSP
Estgios:
- Centro Nacional de Cncer em Tquio e Tokio Medical and Dental School
- Brigham and Womens Hospital. Harvard Medical School. Boston, EUA
Mdico patologista - Diviso de Anatomia Patolgica HC, FMUSP
HEPATOPATOLOGIA

Especializaes:
Tsukaba, Japo
- Patologia do Transplante Heptico - Liver Laboratory, Universidade de Birminghan,
Inglaterra
Desenvolveu com seus pares expertise em microhistologia de bipsias pancreticas
guiadas por ecoendoscopia
Dr. Roberto El Ibrahim CRM-SP: 39.832

Graduao FMUSP
Especializao - Colposcopia Sociedade Brasileira de Patologia Cervical Uterina e
Colposcopia
(EUA)
of Tsukuba (Japo)
Dr. Francisco Arajo Jnior CRM-SP: 146515

Graduado em medicina pela Universidade Federal do Cear
Residncia em patologia pela UNIFESP
Ttulo de especialista em patologia pela SBD
22
INTRODUO
NEFROPATOLOGIA
Dra. Denise M. A. Costa Malheiros CRM-SP: 56.703

Graduao Faculdade de Medicina da Santa Casa SP
Especializao - Patologia Renal - Universit Paris Descartes
Residncia Mdica - Patologia FCMSCSP
Doutorado - Patologia - FMUSP
Professora convidada FCMSCSP
Pesquisadora - FMUSP e Membro da Renal Pathlogy Society
Experincia em Medicina - Anatomia Patolgica e Patologia Clnica - Transplante
Renal, Rejeio, Histopatologia, Imunohistoqumica
DERMATOPATOLOGIA
Dr. Daniel Chang CRM-SP: 94.194

Graduao -Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto-USP
Residncia mdica- Anatomia Patolgica e Dermatopatologia HC-FMRP-USP
Mestre em Cincias Mdicas e Patologia Humana - FMRP-USP
Doutor em Medicina-Dermatologia - FMUSP
Especializao - Administrao Geral
MBA - Gesto Estratgica-Habilitao em Servios

Dr. Bernard Kac CRM-RJ:57779-0

Graduao - Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ
Residencia - Santa Casa da Misericordia do Rio de Janeiro
Especialista em Anatomia Patologica - AMB
Especializaco em Dermatopatologia
Residencia em Dermatologia - Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro
- UniRio
Dra Claudia Lopes Pires CRM-RJ: 54356-1

Residncia mdica - Anatomia Patolgica e Citopatologia -UFF (Universidade
Federal Fluminense)
Especialista em Anatomia Patolgica - CRM
Especializao em Patologia Oncolgica - INCA
Especializao em Citopatologia- INCA
Especializao em Dermatopatologia
Patologista Do Instituto Nacional de Cancer desde 1998.
23
PATOLOGIA GINECOLGICA
Dra. Cristiane da C. Bandeira A. Nimir CRM-SP: 98.920

Graduao - UFG
Residncia FMUSP
Especialista - Anatomia Patolgica SBP

PATOLOGIA MAMRIA
Dra. Cristiane da C. Bandeira A. Nimir CRM-SP: 98.920

Graduao - UFG
Residncia FMUSP
UROPATOLOGIA

Graduao FMUSP
Especializao - Colposcopia Sociedade Brasileira de Patologia Cervical Uterina e
Colposcopia
(EUA)
of Tsukuba (Japo)
PATOLOGIA DO SISTEMA ENDCRINO

Especializaes:
Tsukaba, Japo
24
INTRODUO
Inglaterra

Graduao FMUSP
e Colposcopia
(EUA)
Gastrointestinal Estgio Hospitalar - Institute of Basic Medical Sciences -
University of Tsukuba (Japo)
PATOLOGIA DE OSSOS E PARTES MOLES

Especializaes:
Tsukaba, Japo
- Patologia do Transplante Heptico - Liver Laboratory, Universidade de
Birminghan, Inglaterra

Graduao FMUSP
e Colposcopia
25
(EUA)
of Tsukuba (Japo)
Dr Floriano Rodrigues Riva Neto CRM-SP: 148.861

Graduao: Universidade de Cuiab-UNIC, Cuiaba, MT
Residncia mdica: Fundao Antonio Prudente, Hospital AC Camargo
NEUROPATOLOGIA
Dr. Srgio Rosemberg CRM-SP: 13.077

Graduao PUC SP
Doutorado em Medicina PUC SP
Atual Professor Titular do Depto de Patologia da FMUSP
Professor Titular do Depto de Pediatria FCMSCSP
Ampla experincia em Medicina, Anatomia Patolgica e Neurologia Peditrica.
Dr. Denilson Mayrink CRM-SP: 124.218

Graduao FURB
Residncia - Patologia - Santa Casa SP
Dr Fabio Daniel Molinari - CRM-SP 132.947

Graduao medicina Faculdade Evangelica de Medicina do Paran 2002
PATOLOGIA PEDITRICA

Especializaes:
Tsukaba, Japo
Inglaterra
Desenvolveu com seus pares expertise em microhistologia de bipsias pancreticas
guiadas por ecoendoscopia
26
INTRODUO

Graduao FMUSP
e Colposcopia
(EUA)
Gastrointestinal Estgio Hospitalar - Institute of Basic Medical Sciences -
University of Tsukuba (Japo)
5. Interpretao
Os resultados so relatados em um laudo formal. Resultados de

testes auxiliares so relatados em laudos separados. A equipe de
patologistas est disponvel para discutir os casos diariamente via
contato telefnico.
6. Instrues especficas e solicitao de exame

A interpretao do exame necessita de um adequado preenchimento
da solicitao mdica, pois a informao clnica fundamental
para melhor acurcia diagnstica. O nome do mdico o registro
no Conselho Regional so imprescindveis no pedido mdico.
Recomendamos acrescentar o nmero de telefone de contato para
facilitar a comunicao entre o patologista e o mdico solicitante, caso
seja necessrio.
27
7. Instrues gerais de envio
Ao enviar exames de Anatomia Patolgica o material deve ser

acondicionado corretamente. Cada tipo de exame tem um
acondicionamento especfico. Os itens abaixo so pertinentes a todos
os casos:
1- Identificao do paciente: para garantir a segurana dos dados do

nosso laudo e a melhor conduo mdica, o recipiente contendo o
material e o pedido mdico devem estar identificados com o nome,
idade/data de nascimento e sexo do paciente.
2- Identificao do material: para garantir a segurana dos dados do

nosso laudo e a melhor conduo mdica, os recipientes devem ser
identificados com a topografia/rgo submetidos anlise em cada
frasco ou saco enviado. Essas informaes tambm devem constar
no pedido mdico encaminhado em conjunto.
3- Pedido Mdico:
Deve-se sempre informar no pedido mdico, alm das informaes
supracitadas, os informes do caso, explicando o motivo do exame,
suspeita clnica e antecedentes mdicos relevantes;
Resultados de exames laboratoriais clnicos e de imagem so

importantes para a adequada correlao com os achados antomo-
patolgicos;
Descrio macroscpica da leso, localizao e tamanho observados

no intra-operatrio devem ser acrescentados;
Laudos de exames utilizados para a obteno do material a ser

analisado e/ou detalhes macroscpicos da leso observados por
esses exames (ultrassonografia com puno, endoscopias digestiva
alta, colonoscopia, etc.) devem ser anexados solicitao mdica de
antomo-patolgico;
O pedido mdico deve vir protegido do restante do material, de
28
INTRODUO
preferncia em uma pasta/saco plstico impermevel. Desta forma,
evitaremos derrames, borres e desaparecimento da escrita e dos
informes.
Esses procedimentos garantem segurana, facilitam nosso

entendimento, agilizam a emisso a entrega dos laudos e melhoram
sua qualidade.
29
1 - ANLISE DE
BIPSIA SIMPLES OU
BIPSIAS MLTIPLAS
ANLISE DE BIPSIA SIMPLES OU BIPSIAS MLTIPLAS
Espcime
Material (tecido) previamente fixado em formalina tamponada 10% e

preferencialmente acondicionado em kit do Laboratrio Diagnstika
para preservao. Kits para acondicionamento de materiais podem ser
fornecidos pelo Laboratrio Diagnstika por solicitao prvia.
Em geral, a formalina est disponvel em estado absoluto e deve ser

diluda a 10%. A soluo de formolaldedo a 10% deve ser equilibrada
quanto ao pH, denominada soluo de formalina tamponada 10%.
O pH dessa soluo deve ser neutro (de 7,0 a 7,4). Segue abaixo a
recomendao para diluir e tamponar a formalina:
Fixador Formol tamponado 10% 10 litros
1 litro de formol 37-40%;

9 litros de gua destilada;
16,25g fosfato de sdio dibsico;
10g fosfato de sdio monobsico monohidratado.
Material utilizado para fixao
Frasco com tampa ou kit Diagnstika;

Formol tamponado 10%.
Procedimento de Fixao
Acondicionar o fragmento no frasco contendo formalina tamponada

10%;
Se o frasco estiver vazio, inserir o fragmento e em seguida adicionar
a soluo fixadora (formol tamponado 10%) no volume mximo de
4 ml;
O volume ideal de formol para tecido de 10 volumes de formol
32
para um volume de tecido;
Deixar o material submerso em formol por, no mnimo, 8 horas;
No momento do envio, descartar o formol em local adequado e
acrescentar pequeno volume de soro fisiolgico 0,9% at cobrir o
material biolgico;
Colocar o(s) frasco(s) com as amostras em embalagem plstica
(bags);
Acondicionar os pedidos mdicos em uma embalagem plstica
parte e, ento, colocar junto s amostras. Esta etapa importante
para proteger as informaes do pedido mdico caso o contedo
lquido do frasco extravase;
Lacrar a embalagem plstica.
Recomendaes para alguns tipos de amostras
Microscopia ptica para bipsias renais, medula ssea e

testculos:
Materiais utilizados para acondicionamento
Lquido de Bouin fornecido pela Diagnstika;

Formol tamponado 10 %.
Bipsia de rim e testculo
A amostra deve ser imersa no lquido de Bouin por um perodo ideal

de 30 minutos e no mximo 1 hora. Aps este perodo, o lquido de
Bouin deve ser drenado e substitudo por formol tamponado 10%.
Bipsia Medula
A bipsia de medula ssea deve ser imersa pelo Bouin por um

perodo maior, sendo 60 minutos no mnimo e, no mximo 90
minutos. Aps este perodo o lquido de Bouin deve drenado e
substitudo por formol tamponado 10%.
33
A permanncia da amostra em lquido de Bouin por um perodo

superior a 3 horas pode danificar a amostra e prejudicar o
processamento histolgico.
Observao importante
Todos os materiais devem ser enviados acompanhados de pedido

mdico conforme as especificaes relatadas no item 7, pgina 28
(instrues gerais de envio).
Solicitaes
Solicitaes de embalagens e outros insumos necessrios para envio

de amostras devem ser direcionadas Central de Relacionamento com
Cliente Diagnstika: (11) 3549 2222.
Fixador Bouin
Fixao inadequada;
Preenchimento incorreto ou incompleto do pedido mdico conforme

as especificaes relatadas no item 7, pgina 28 (instrues gerais de
envio).
Miocardite.
34
35
2 - ANLISE DE
PEA CIRRGICA
(RADICAL OU SIMPLES)
ANLISE DE PEA CIRRGICA
Espcime
Material (tecido) previamente fixado em formalina tamponada 10%
e preferencialmente acondicionado em saco cirrgico de tamanho
adequado fornecido pelo Laboratrio Diagnstika. Os sacos cirrgicos
para acondicionamento de materiais so fornecidos pelo Laboratrio
Diagnstika por solicitao prvia.
Em geral, a formalina est disponvel em estado absoluto e deve ser

diluda a 10%. A soluo de formolaldedo a 10% deve ser equilibrada
quanto ao pH, denominada soluo de formalina tamponada 10%.
O pH dessa soluo deve ser neutro (entre 7,0 e 7,4). Segue abaixo a
recomendao para diluir e tamponar a formalina:
Fixador Formol tamponado 10% 10 litros
1 litro de formol 37-40%;

9 litros de gua destilada;
16,25g fosfato de sdio dibsico;
10g fosfato de sdio monobsico monohidratado.
Material utilizado para acondicionamento
Saco cirrgico de tamanho adequado fornecido pela Diagnstika;

Formalina tamponada 10%.
Acondicionamento do material e fixao
Clivar a pea orientaes a seguir;

Acondicionar a pea em saco cirrgico;
Colocar a amostra em formalina tamponada 10%, o mais breve possvel,
aps a retirada cirrgica;
O volume ideal de formol para tecido de 10 volumes de formol
para um volume de tecido;
Aps fixao do material biolgico de no mnimo 8 horas e no
38
ANLISE DE PEA CIRRGICA (RADICAL OU SIMPLES)
mais que 48 horas em formalina tamponada 10%, a formalina da
embalagem dever ser drenada;
Fechar o saco cirrgico de forma a impedir o vazamento de
lquidos;
Enviar o pedido mdico separadamente da amostra em outra
embalagem plstica, presa externamente por um elstico, na
embalagem da pea, para evitar extravio ou danos do pedido caso
haja extravasamento de lquidos.
Orientaes para clivagem das peas cirrgicas
Peas Ocas: estmago, vescula biliar e intestinos.
Devem ser clivadas no sentido do maior comprimento, lado oposto

gordura (contra lateral a gordura), lavadas e imersas em formalina
tamponada 10% por no mnimo 8 horas (conforme especificaes
acima - B3) para fixao.
ESTMAGO
Cortar com o auxlio de uma tesoura pelo seu maior comprimento;
Limpar seu contedo;
Submergir a pea em formalina tamponada 10% por no mnimo
8 horas (conforme especificaes acima - B3);
Drenar o formol e embalar no saco cirrgico.
VESCULA BILIAR
Com o auxlio de uma tesoura, abrir a vescula biliar pelo fundo;
Esvaziar seu contedo;
Submergir em formalina tamponada 10% por no mnimo 8 horas
(conforme especificaes acima - B3);
Drenar o formol e embalar em saco cirrgico.
INTESTINO DELGADO E GROSSO

Com o auxlio de uma tesoura, abrir o intestino pelo seu maior
eixo;
Abrir o intestino pelo lado oposto da gordura;
39
Esvaziar seu contedo;

Submergir em formalina tamponada 10% por 8 horas, no mnimo
(conforme especificaes acima - B3);
Drenar o formol e embalar em saco cirrgico.
Peas macias: fgado, bao, tero, mama rim e pulmo
FGADO E BAO
Fazer cortes paralelos, transversais ao maior eixo, de 1,0 a 2,0 cm,
acima e abaixo do hilo heptico sem separar os cortes totalmente;
Submergir em formalina tamponada 10% at adequada fixao
(mnimo 8 horas e mximo de 48 horas, conforme especificaes
acima - B3);
Drenar o formol e embalar em sacos cirrgicos.
TERO
Introduzir a pina pelo orifcio do colo;
Cortar com instrumento prfuro-cortante, fazendo o corte apoiado
na pina at prximo do final do tero;
Evitar a segmentao do tero em duas partes;
acima - B3);
Drenar o formol e acondicionar em sacos cirrgicos.
MAMA
Com o auxlio de instrumento prfuro-cortante, fazer cortes
paralelos de 2 cm pela face oposta a pele;
No terminar os cortes at o final da pea;
acima - B3);
Drenar o formol e acondicionar.
RIM
Fazer um corte sagital, paralelo ao maior eixo, acima do hilo renal
sem dividir a pea totalmente;
40
acima - B3);
Drenar o formol e acondicionar em sacos cirrgicos.
PULMO
Abrir longitudinalmente o brnquio maior e todos os seus
segmentos com uma tesoura;
Cortar longitudinalmente o pulmo em seu maior eixo, sem
separar os cortes totalmente e sem seccionar o hilo pulmonar;
(mnimo 8 horas, em geral, utiliza-se fixar overnight);
Drenar o formol e embalar em sacos cirrgicos.
FETO
Recebemos apenas peas que obedeam as condies estabelecidas

abaixo:
Peso mximo: 499g;
Idade Gestacional: at 19 semanas e 6 dias;
Estatura 24 cm (aceitvel).
O atestado mdico obrigatrio nos seguintes parmetros:

O hospital ao declarar o bito dever direcionar o feto para SVO ( servio de
verificao de bito ).
Idade gestacional: 20 semanas ou mais ;
Peso: 500 gramas ou mais ;
Estatura: 25 cm ou mais .
Fonte: Ministrio da Sade.
41
Transporte
Aps fixao com formalina tamponada 10% (conforme
especificaes acima - B3), o lquido dever ser drenado e o feto
enviado embalado em saco cirrgico.
OSSO
O material dever ser fixado em formalina tamponada 10% (conforme

especificaes acima - B3);
imprescindvel que os exames de imagem da leso ssea sejam

anexados a solicitao de antomo-patolgico (pedido mdico);
Este material submetido a processo de descalcificao, portanto, o

tempo de exame maior a depender do tamanho do espcime.
MEMBROS AMPUTADOS
Recomenda-se encaminhar para o Laboratrio Diagnstika somente

amputaes por motivos oncolgicos. Em casos de amputaes por
complicaes vasculares e diabetes, sugerimos o envio da bipsia da
leso e dos vasos principais;
Caso a pea cirrgica seja grande e no possa ser submergida

em formalina tamponada 10% nas propores adequadas, deve-se
providenciar o transporte imediato da mesma para o laboratrio;
Recomenda-se at o transporte manter a pea refrigerada a 4C.;
Envio de peas a fresco para o Laboratrio Diagnstika requer contato

telefnico prvio e indicao no pedido mdico do horrio da retirada
da pea no ato cirrgico.
Transporte
O limite para transporte de 4 Kg ou 4 litros de material biolgico.
Para autorizao da companhia area, precisamos apresentar o
pedido mdico, com a especificao da parte do corpo (topografia) e
o exame a ser realizado;
42
Se um membro tiver peso superior a 4 Kg entrar em contato
previamente com a Diagnstika: (11) 3549-2222.
Observao importante

Solicitaes

de amostras devem ser direcionadas Central de Relacionamento
com Cliente Diagnstika: (11) 3549-2222.
Fixao inadequada;
Preenchimento incorreto ou incompleto do pedido mdico conforme as

especificaes relatadas no item 7, pgina 28 (instrues gerais de envio).
43
3 - ANLISE
CITOLGICA NO
GINECOLGICA (PUNO-
BIPSIA DE RGOS VARIADOS)
ANLISE CITOLGICA NO GINECOLGICA

(MATERIAL DE PUNO-BIPSIA DE RGOS VARIADOS)
Espcime
Citologia de puno/bipsia aspirativa por agulha fina (PAAF/BAAF):

obtida por insero de agulha em leso com aplicao de presso
negativa e aspirao de clulas a serem submetidas a avaliao
morfolgica (exemplos: PAAF de tireide, linfonodo, mama, glndula
salivar, pulmo, etc.).
Material de puno aspirativa previamente fixado em lcool absoluto.
Material utilizado fixao e acondicionamento
lcool 95% ou fixador celular (Kolpofix, Carbowax, etc.). Na ausncia

desses, produtos, pode-se utilizar o lcool 70%, sob risco de pior fixao e
consequente limitao de avaliao;
Lminas de vidro;
Frascos (porta-lmina) de citologia para acondicionamento.
Nos esfregaos diretos podem ser fixados por lcool 95% ou fixador
celular (Kolpofix, Carbowax, etc.) ou deixadas a seco (sem uso de fixador).
Recomenda-se o envio dos dois tipos de lmina, j que as anlises das
diferentes formas de fixao so complementares;
O material residual da agulha utilizada na puno deve ser lavada em

frasco com pelo menos 1ml de fixador. Devem ser feitas pelo menos
cinco passagens de fixador pela seringa (aspirando o lquido fixador e
devolvendo dentro do frasco original do fixador), de forma a retirar a
maior quantidade possvel de material de dentro do mbolo da agulha.
Aps lavar bem a agulha a mesma deve ser descartada em um coletor de
perfuro-cortantes no mesmo local da coleta. Quando forem realizadas
mais de uma puno do mesmo ndulo, pode-se usar o mesmo volume
46
de fixador para mais de uma agulha, repetindo o procedimento,
embora recomende que materiais csticos ou hemorrgicos sejam
processados a parte, devendo ser acondicionados como tal;
Identificar cada lmina com o nome, rgo, regio e lateralidade do

paciente anotado na parte fosca;
Colocar a(s) lmina(s) no frasco citolgico;
Fixar a etiqueta de identificao do paciente na parte externa do

porta-lminas.
Observao importante

Solicitaes

Fixao inadequada;
Preenchimento incorreto ou incompleto do pedido mdico (conforme

especificaes relatadas no item 7, pgina 27).
47
4 - ANLISE
CITOLGICA NO
GINECOLGICA
(CITOLOGIA GERAL)

(CITOLOGIA GERAL)
Espcime
Citologia geral (exfoliativa): obtida por esfregao de mucosas, lavados

de vias anatmicas ou lquidos espontneos, patolgicos ou no,
com avaliao das clulas obtidas no processo (exemplos: citologia
anal, lavado broncoalveolar, urina, esfregaos de vias biliares, lquido
peritoneal, lquido pleural, lquido pericrdico, etc.).
Citologia de lquidos: fixar em partes iguais (um volume de lquido a ser

fixado e um volume da lcool 95% ou fixador celular - exemplos: Kolpofix,
Carbowax, etc.). Na ausncia desses produtos, pode-se utilizar o lcool
70%, sob risco de pior fixao e consequente limitao de avaliao.
Importante: mais de 4 horas fora da geladeira ou mais de 24 horas em

geladeira, sem fixao, inutiliza o material.
Topografias de citologia geral no ginecolgica
- Anal
- Raspado conjuntival
- Descarga papilar
- Escovado de vias biliares
- Escovado brnquico
- Lquido pericrdico
- Lquido peritoneal/asctico
- Lquido pleural
- Lquido cfalo-raquidiano (lquor)
- Lavado broncoalveolar
50
- Pele
- Peniana
- Contedo de tnica vaginal
- Urina/vias urinrias
Material utilizado para fixao e acondicionamento
lcool 95% ou fixador celular (Kolpofix, Carbowax, etc) na ausncia

destes produtos pode-se utilizar o lcool 70%, sob risco de pior fixao e
Lminas de vidro (em casos de esfregaos);
Frascos de citologia para acondicionamento.
Raspados e esfregaos
Dispor o esfregao lquido na lmina e cobrir com o fixador (lcool

95% ou fixador celular - Kolpofix, Carbowax, etc.). Na ausncia desses
produtos, pode-se utilizar o lcool 70%, sob risco de pior fixao e
Identificar cada lmina com o nome do paciente anotado na parte

fosca;
Fixar a etiqueta de identificao do paciente na parte externa do porta-

lminas.
Lquidos
Fixar na proporo de um volume de material a ser fixado e um volume

de lcool absoluto ou 95% (1:1);
51

fosca;

recipiente para transporte.
CITOLOGIA PENIANA
O paciente no deve realizar higiene ntima 24 horas antes da coleta e

deve abster-se de relao sexual 24 horas antes da coleta.
Realizar uma coleta de glande/prepcio e uma de uretra separada.
CITOLOGIA DE SECREO DE MAMA
Geralmente a coleta realizada pelo mdico por meio de expresso

mamilar.
CITOLOGIA ONCTICA URINRIA
Orientaes gerais
No colher a 1 urina da manh; ficar no mnimo 2 horas e no
maximo 3 horas sem urinar;
Colher a urina aps deambulao (movimentao normal; ato
de andar). Um tempo razovel seria entre 20 e 30 minutos. Caso o
cliente tenha caminhado e se sentado aps, no h necessidade de
caminhar novamente;
Recomenda-se a coleta de trs amostras, obtidas em dias diferentes,
para melhorar a sensibilidade do exame.
Orientao para pacientes do sexo feminino

Preferencialmente, no fazer a coleta de urina durante o perodo
menstrual.
52
Orientao para pacientes peditricos (criana)
A coleta deve ser realizada aps movimentao leve / moderada
da criana, como por exemplo, brincar de cavalinho, correr ou
pular sem exageros ou esforo demasiado por cinco ou 10 minutos.
Observao importante

Solicitaes

Fixao inadequada;
Preenchimento incorreto ou incompleto do pedido mdico
(conforme especificaes relatadas no item 7, pgina 28)
53
5 - ANLISE DE
COLPOCITOLOGIA
ONCTICA
ANLISE DE COLPOCITOLOGIA ONCTICA

Espcime
Citologia onctica crvico-vaginal;
Citologia hormonal simples ou seriada.
Citologia onctica crvico-vaginal

O exame visa detectar leses de natureza pr-maligna e maligna do
colo uterino. possvel tambm diagnosticar agentes infecciosos,
tais como bactrias, fungos, parasitas e vrus; processos proliferativos
benignos; anormalidades epiteliais benignas dos epitlios escamoso
e glandular; alteraes inflamatrias crnicas e agudas; e alteraes
epiteliais ocasionadas por agresso ao epitlio, como radioterapia e
cauterizaes.
Citologia hormonal simples ou seriada

O exame visa avaliar alteraes do ciclo menstrual, estudar ciclos
anovulatrios ou ovulatrios e acompanhar tratamentos hormonais.
O grau de maturao do epitlio escamoso do trato genital feminino
e hormnio dependente. Portanto, a variao no grau de maturao
dessas clulas serve como ndice para avaliar a situao endcrina da
mulher. O resultado final leva em considerao o aspecto citolgico ,
dados e informes clnicos da paciente.
Frascos de citologia para coleta do material fornecidos pela Diagnstika

(kit Sure Path - BD) e escova com cabea destacvel.
56
Lminas de vidro.;
Fixador celular ou lcool absoluto ou 95%;
Frascos de citologia para acondicionamento.
Instrues de coleta
Inserir a esptula de ayre (plstica) at o final do colo e girar 360
graus em torno de toda a ectocrvice;
Quebrar a cabea da esptula de ayre dentro do frasco de coleta

BD SurePath;
Inserir a escova endocervical at que apenas as cerdas inferiores

fiquem expostas;
Girar delicadamente de a volta em uma nica direo ;

Quebrar a cabea da escova endocervical dentro do frasco de
coleta BD SurePath.
57
Importante
Em comum nos dois kits, as extremidades das escovas da esptula
devem estar dentro do frasco de Sure Path para encaminhar ao
laboratrio.
Instrues de coleta
A coleta sempre realizada pelo mdico e os esfregaos devem ser
feitos segundo as orientaes abaixo;
O material deve ser espalhado na lmina uniformemente;
Aps confeco do esfregao, fixar o material com fixador celular

ou lcool absoluto ou 95%;

fosca;

porta-lminas ou tubetes.
Importante
O exame pode ser realizado com coleta nica isolada ou com coletas
seriadas em das diferentes fases do ciclo menstrual. Sugere-se o
seguinte esquema de coleta:
Primeira lmina da primeira fase (ate o 8 dia do ciclo menstrual);

Segunda coleta devera ser feita em torno do perodo ovulatrio
(13, 14 e 15 dia do ciclo menstrual);
Terceira lmina a partir do 18 dia do ciclo menstrual;
ltima lmina em torno do 26 e 28 dia do ciclo.
Evitar
Duchas e lavagens vaginais, cremes e talcos vaginais, relaes sexuais
58
(24 horas antes da coleta), coleta no perodo menstrual, estar em
uso de medicao hormonal (se no for possvel, indicar qual tipo
de hormnio e tempo de uso).
As pacientes no podem estar com processos inflamatrios ou

infecciosos durante as coletas, sendo necessrio tratamento prvio.
Observao importante

Solicitaes

Fixao inadequada;
Preenchimento incorreto ou incompleto do pedido mdico no item 7,

pagina 28 (instrues gerais de envio).
59
6 - IMUNOHISTOQUMICA
E IMUNOCITOQUMICA
IMUNOHISTOQUMICA E IMUNOCITOQUMICA
Geral
A Imunohistoqumica representa um conjunto de procedimentos que

utilizam anticorpos como reagentes de grande especificidade para a
deteco de antgenos que marcam estruturas teciduais e celulares. De
forma geral, o emprego de tcnicas imunohistoqumicas visa ampliar
a quantidade de informaes que o patologista consegue obter do
material, melhorando a conduo do caso pelo mdico responsvel.
Espcime
Tecido fixado em formol tamponado 10% ou material histolgico

processado e includo em bloco de parafina.
O material deve vir acompanhado do pedido mdico do resultado do

exame anatomopatolgico (laudo anterior).
Esse exame tambm pode ser realizado em material de emblocado em

parafina proveniente de citologia.
Ver recomendaes no item 7, pgina 27.
Observao importante

mdico conforme as especificaes relatadas no item 7, pgina 28.
62
IMUNOHISTOQUMICA E IMUNOCITOQUMICA
Solicitaes

de amostras devem ser direcionados Central de Relacionamento
Fixao inadequada;
Preenchimento incorreto ou incompleto do pedido mdico no item 7,

pagina 28 (instrues gerais de envio).
63
7 - HIBRIDIZAO
IN SITU
HIBRIDIZAO IN SITU
Geral
Hibridizao in situ uma tcnica usada para detectar sequncias de

nucleotdeos em clulas e tecidos. O mtodo baseia-se na ligao
complementar da sequncia de interesse (RNA ou DNA) sonda
de nucleotdeos. As sondas (ou probes) podem ser marcadas com
fluorescncia ou antgeno e diferentes tcnicas podem ser utilizadas para
a visualizao dos sinais. A hibridizao in situ tem grande importncia
na prtica clnica, principalmente para definio de diagnstico e
prognstico.
Exames realizados no Laboratrio Diagnstika
Hibridizao in situ para HER2 (DDISH);
Hibridizao in situ para HPV (sondas de alto e baixo risco).
Espcime
Tecido fixado em formol tamponado 10% ou material histolgico

processado e includo em bloco de parafina.
O material deve vir acompanhado do pedido mdico e resultado do

exame anatomopatolgico (laudo anterior).
Ver recomendaes no item 7, pgina 28.
66
HIBRIDIZAO IN SITU
Observao importante

Solicitaes

Fixao inadequada;
Preenchimento incorreto ou incompleto do pedido mdico no item

7, pagina 28 (instrues gerais de envio).
67
8 - REVISO DE
LMINAS
REVISO DE LMINAS
Geral
Havendo necessidade de reavaliar o material ja processado por outro
laboratrio, o mdico responsvel pelo caso pode solicitar aos nossos
patologistas uma segunda opinio. essencial o envio das lminas,
blocos e do laudo prvio para conferncia de dados relevantes como
identificao, descrio do material enviado e dados de macroscopia.
fundamental o envio das lminas e blocos de parafina pertinentes ao
caso, devidamente identificados.
Material necessrio
Lminas e/ou blocos do material emblocado em parafina;
Cpia do laudo original;
Histria clnica detalhada;
Nos casos que forem necessrios exames complementares, os blocos

de parafina so imprescindveis para a realizao de tais exames.
Observao importante
Todos os materiais devem ser enviados acompanhados de pedido mdico

conforme as especificaes relatadas no item 7, pgina 28. (instrues
gerais de envio).
Solicitaes
Dvidas relacionadas s solicitaes de envio de material ou laudo podem

ser direcionados Central de Relacionamento com Cliente Diagnstika: (11)
3549-2222.
70
REVISO DE LMINAS
Limitaes para a avaliao
Material sub-timo;
Escassez de informaes clnicas e resultados dos demais exames do

paciente necessrios para a adequada correlao clnica/radiolgica/
antomopatolgica.
71
9 - IMUNOFLUORESCNCIA
DIRETA
IMUNOFLUORESCNCIA DIRETA
Geral
A Imunofluorescncia direta um exame complementar que pode

ser realizado em qualquer fragmento de tecido, importante para
identificar depsitos de imunoglobulinas e complementos que no
podem ser identificados pelas tcnicas habituais.
Exames realizados no Laboratrio Diagnstika
O exame realizado em todos os tecidos, como: tecido de renal e pele.
Soluo de Michel ou Meio de Transporte fornecida pela

Diagnstika.
A amostra destinada ao exame de imunofluorescncia deve ser imersa

diretamente na soluo de Michel (sinnimo: Meio de Transporte),
sem passar por outros fixadores antes. O frasco com a amostra deve
ser conservado em temperatura ambiente.
A amostra devidamente acondicionada na Soluco de Michel deve ser

entregue no posto de coleta em at 24 horas.
Observao importante

74
IMUNOFLUORESCNCIA DIRETA
Solicitaes

com Cliente Diagnstika: (11) 3549 2222.
Fixao inadequada;
Preenchimento incorreto ou incompleto do pedido mdico o item 7,

pagina 28.(instrues gerais de envio).
75
10 - PATOLOGIA
MOLECULAR
DIAGNSTICOS MOLECULARES
Seguindo o que h de mais moderno e inovador em diagnstico, a
Diagnstika oferece um amplo menu de exames moleculares que
colaboram para a definio da conduta mdica e teraputica.
1P e 19Q, perda de heterozigosidade associada

oligodendroglioma
A perda de heterozigosidade nas regies 1p e 19q indica presena
de delees nessas regies e esto associadas com o diagnstico
e prognstico do oligodendroglioma. A presena de deleo 1p
e a combinao de delees em 1p e 19q apoiam o diagnstico de
oligodendroglioma. Um resultado negativo no afasta o diagnstico
de oligodendroglioma. Essas alteraes esto tambm relacionadas
com uma melhor resposta a qumio/radioterapia. A perda 1p e 19q
preditiva para determinao de quimiosensibilidadede a agentes
alquilantes (nitrosourea e temozolamida) em gliomas de baixo grau.
Principais aplicaes
Valor prognstico independente do grau do tumor em pacientes

com oligodendroglioma.
O exame indicado em casos de diagnstico de oligodendroglioma,

baixo grau (WHO grau II) e anaplsico (WHO, grau III).
O exame tambm pode ser til para o diagnstico de tumores

com uma morfologia hbrida complexa, que requer a distino entre
astrocitoma puro e uma diferenciao de linhagem oligodendroglial.
Condies
Amostra de tecido tumoral para comparao: Bloco de parafina

(Tecido fixado e impregnado em parafina, FIP).
78
PATOLOGIA MOLECULAR
Anlise de 18Q, perda de heterozigosidade associada
carcinoma colorretal
A perda de heterozigosidade na regio 18q est claramente

associada ao carcinoma colorretal. Aproximadamente 70%
dos casos de cncer colorretal primrio apresentam perda da
heterozigocidade (LOH) na regio 18q, sendo que este percentual
aumenta significativamente quando comparados com o estgios
avanados da doena. A perda allica na regio 18q est associada
com menor sobrevida e maior recorrncia em pacientes com
cncer colorretal, estadiamento II e III, e tem valor prognstico no
tratamento adjuvante com 5-fluorouacil.
Condies
Tecido tumoral em bloco de parafina.
Este exame tem como objetivo o diagnstico diferencial entre

Linfoma do manto versus outras linfoproliferaes B de clulas
pequenas (LF, LLC), a caracterizao das formas agressivas do LM
(LM blastide e pleomrfico), ou das variantes morfolgicas que
simulam focos de zona marginal.
Observao quanto a sensibilidade do teste
Enquanto um resultado positivo indica a presena de Linfoma de

Manto devido a estrutura molecular da t(11;14), o mtodo de PCR
(ponto de quebra mcl) capaz de detectar somente 50% dos casos
de translocao em que esta ocorreu em outra parte do gene. Um
resultado negativo no exclui a presena de t(11;14).
Condies
Tecido fixado e impregnado em parafina (FIP) e Bloco parafina.
79
Este teste tem como objetivo auxiliar no diagnstico diferencial entre

Linfoma Folicular versus Hiperplasia folicular reativa, diferencial
entre Linfoma Folicular versus outras linfoproliferaes a clulas
pequenas (Leucemia Linfoctica Crnica, Linfoma de Manto, Linfoma
Zona Marginal nodal), o estadiamento da doena e a monitorao
teraputica (doena residual mnima).
Nota sobre a sensibilidade do teste
Enquanto um resultado positivo indica a presena de Linfoma

Folicular; um resultado negativo no exclui a presena de t(14;18),
devido os testes moleculares podem detectar ate 75% dos casos que
possuem a translocao.
Condies
Tecido fixado e impregnado em parafina (FIP) e Bloco de Parafina.
BCL1/JH, PCR
Esse exame tem como objetivo o diagnstico diferencial entre

Linfoma do manto de linfoproliferaces B de clulas pequenas (LF,
LLC), a caracterizao das formas agressivas do LM (LM blastide e
pleomrfico), ou das variantes morfolgicas que simulam focos de
zona marginal.
Estadiamento da doena. Monitorao teraputica (doena residual

mnima).
Observao quanto a sensibilidade do teste
Enquanto um resultado positivo indica a presena de Linfoma de

Manto, devido a estrutura molecular da t(11;14), o mtodo de PCR
(ponto de quebra mcl), capaz de detectar somente 50% dos casos
80
PATOLOGIA MOLECULAR
de translocao, em que esta ocorreu em outra parte do gene. Um
resultado negativo no exclui a presena de t(11;14).
Condies
Bipsia de material suspeito em meio RPMI1640 com antibiticos.
BCL2/JH, PCR
Esse teste tem como objetivo auxiliar no diagnstico diferencial entre

Linfoma Folicular versus Hiperplasia folicular reativa, outras
linfoproliferaes a clulas pequenas (Leucemia Linfocitica Crnica,
Linfoma de Manto, Linfoma Zona Marginal nodal), o estadiamento
da doena e a monitorao teraputica (doena residual mnima).
Nota sobre a sensibilidade do teste
Enquanto um resultado positivo indica a presena de Linfoma

Folicular; um resultado negativo no exclui a presena de t(14;18),
devido a que os mtodos moleculares podem detectar at 75% dos
casos que possuem a translocao.
Condies
Bipsia de material suspeito em meio RPMI 1640 com antibiticos.
BRAF, mutao V600E
A mutao V660E do gene BRAF foi descrita em diferentes tipos de

cncer, principalmente melanoma, cncer de tireide e cncer
colorretal (CCR). Est presente em cerca de 20% do total de CCR e de
30% a 83% de CCR com instabilidade de microsatlites. A mutao
V600E do BRAF no foi detectada simultaneamente s mutaes
nos genes de reparo (MMR) em pacientes com a sndrome de Lynch.
Esses achados indicam que BRAF possa ser utilizado como marcador
gentico para critrio de incluso de CCR espordico e excluso de
sndrome de Lynch. A pesquisa da mutao V600E tambm pode
auxiliar na forma do tratamento, conforme alguns estudos recentes
81
que mostram que a sobrevida aumenta nos pacientes com a mutao

V600E e tratados com Vemurafenib (Zelboraf).
Condies
Bloco parafina ou Tecido tumoral fresco conservado em soluo

salina.
BRCA1 | BRCA2 - delees e duplicaes por MLPA
Aproximadamente 5-15% dos casos de cncer de mama hereditrio

relacionados com os genes BRCA exibem alteraes no nmero de
cpias de um ou mais xons destes genes. Uma grande variedade de
delees e duplicaes em diferentes xons dos genes BRCA j foram
observadas e catalogadas (http://research.nhgri.nih.gov/bic/).
Essas delees e duplicaes podem no ser detectadas pela anlise

por sequenciamento direto dos genes BRCA.
O nmero de diferentes alteraes identificadas tem aumentado

exponencialmente, tornando a anlise por MLPA uma alternativa que
complementa com sensibilidade e abrangncia o sequenciamento
direto dos genes BRCA para o rastreamento de rearranjos
cromossmicos.
Condies
Sangue total (EDTA).
BRCA1 | BRCA2 - Sequenciamento gnico completo
A anlise gentica dos genes BRCA1 e BRCA2 recomendado para:
Avaliao de risco para cncer de mama e ovrio hereditrio;
82
PATOLOGIA MOLECULAR
Indivduos com uma histria pessoal ou familiar de cncer de
mama antes dos 50 anos ou cncer de ovrio em qualquer idade;
Indivduos com dois ou mais diagnsticos primrios de cncer de

mama e/ou ovrio;
Indivduos descendentes de Judeus Ashkenazi, que no so

portadores das mutaes mais frequentes com histria familiar de
cncer de mama antes dos 50 anos ou de ovrio em qualquer idade;
Cncer de mama em homens;
Resultados negativos para alteraes genticas nos genes BRCA1 e

BRCA2 no excluem o risco de predisposio gentica para o cncer
de mama.
Condies
Sangue total (EDTA).
Cncer de mama, painel Next Generation Sequencing (NGS)
Mutaes germinativas nos genes BRCA1 e BRCA2 so responsveis

por, aproximadamente, 50% do total do risco para o cncer de
mama hereditrio. As prevalncias estimadas para portadores
de mutaes em BRCA1/2 so, respectivamente, 0,11% e 0,12%
na populao geral e entre 12,8% - 16% em famlias de alto risco
com trs ou mais casos de cncer de mama ou ovrio. Publicaes
recentes na rea de sequenciamento em larga escala identificaram
que os restantes 50% dos casos de cncer de mama se devem a
uma combinao dos efeitos produzidos por mutaes em genes
de alta, moderada e baixa penetrncia. Vrios desses genes j foram
previamente identificados e associados a outras neoplasias. Os
genes pesquisados nessa metodologia so:
83
PAINEL CANCER DE MAMA NGS (Genes: ATM (11q22.3), BARD1

(2q34-q35), BRIP1 (17q22-q24), CHEK2 (22q12.1), CDH1 (16q22.1),
MRE11A (11q21), NBN (8q21), PTEN (10q23.3), PALB2 (16p12.1),RAD50
(5q31), RAD51C (17q25.1), RAD51D (17q11), STK11 (19p13.3), TP53
(17p13.1) e XRCC2 (7q36.1).
Esse painel se destina a estudo complementar para o cncer de mama

hereditrio e deve ser aplicado quando os estudos moleculares dos
genes BRCA1 e BRCA2 no forem conclusivos e a suspeita persistir.
Condies
Sangue total em EDTA.
Cncer de pulmo, mutao driver - Lung Scan
Este exame tem como objetivo a avaliao simultnea de vrias

mutaes driver em adenocarcinoma de pulmo. Nesse painel,
realizado um rastreamento completo das principais mutaes
associadas ao cncer de pulmo atravs de sequenciamento de DNA
de nova gerao (Next GenerationSequencing, NGS). Neste teste so
avaliados mutaes nos seguintes genes: AKT1, ALK, BRAF, CTNNB1,
DDR2, EGFR, ERBB2/HER2, ERBB4, FBXW7, FGFR1, FGFR2, FGFR3, KRAS,
MAP2K1, MET, NOTCH1, NRAS, PIK3CA, PTEN, SMAD4, STK11 e TP53. A
definio da presena de mutaes nestes genes fornece informaes
importantes para tomada de decises teraputicas e para definio
de prognstico do paciente.
Condies
Bloco de parafina (Tecido fixado e impregnado em parafina, FIP);
OBS: Enviar, quando possvel, o bloco de parafina da metstase.
84
PATOLOGIA MOLECULAR
Cncer de pulmo, painel Next Generation Sequencing (NGS)
Perfil gentico de pacientes com cncer de pulmo de no pequenas

clulas (adenocarcinoma) visando a estratificao para utilizao de
terapias alvo especificas. Anlise de mutaes especificas nos genes:
AKT1 (14q32.32), ALK (2p23) , BRAF (7q34), CTNNB1 (3p21), DDR2
(1q23.3), EGFR (7p12), ERBB2/HER2 (17q12), ERBB4 (2q33.3-q34),
FBXW7 (4q31.3), FGFR1 (8p12), FGFR2 (10q26), FGFR3 (4p16.3),
KRAS (12p12.1), MAP2K1 (15q22.1-q22.33), MET (7q31), NOTCH1
(9q34.3), NRAS (1p13.2), PIK3CA (3q26.3), PTEN (10q23.3), SMAD4
(18q21.1), STK11 (19p13.3), e TP53 (17p13.1) so amplificados em
regies especificas e os produtos de PCR sequenciados pela tcnica
de sequenciamento de nova gerao IonTorrent (next generation
sequencing - NGS).
Condies
Bloco de parafina (Tecido fixado e impregnado em parafina, FIP)
Chlamydia pneumoniae, PCR
Chlamydia pneumoniae causadora de pneumonia atpica. A

apresentao mais comum de um infiltrado intersticial localizado ou
difuso. O curso pode ser arrastado com boa evoluo ou fulminante,
evoluindo com insuficincia respiratria. Testes sorolgicos auxiliam
a selar o diagnstico de forma retrospectiva. A cultura apresenta
baixa sensibilidade. A PCR um teste rpido, com sensibilidade de
82,5% e especificidade de 99%.
Condies
Bipsia de pulmo.
85
Citomegalovrus, PCR
O Citomegalovrus (CMV) um vrus de DNA que pertence famlia dos

herpes vrus. Em adultos saudveis, o CMV em geral assintomtico, e
s vezes, pode apresentar quadro clnico semelhante a mononucleose
infecciosa. encontrado na saliva, urina e outros fluidos corpreos
como o smen a secreo vaginal. A importncia da infeco pelo
CMV maior quando ocorre a transmisso da gestante para o feto,
dado seu poder de interferir na formao de rgos e tecidos fetais.
Manifestaes graves podem ocorrer quando o CMV adquirido ou se
reativa em pacientes imunossuprimidos (transplante, AIDS).
A PCR til nas seguintes situaes:
Meningoencefalite ou outras alteraes neurolgicas; a PCR pode ser

realizada no lquor com sensibilidade que varia nos trabalhos de 80% a
92%, e especificidade de 98%.;
Diagnstico pr-natal: quando a gestante apresenta um quadro de

infeco aguda e pretende-se afastar a possibilidade de infeco intra-
uterina. A PCR pode ser realizada no lquido amnitico;
Infeco do recm-nascido: a deteco do CMV na urina ou sangue

do recm-nascido nas trs primeiras semanas de vida define a infeco
congnita. A sensibilidade e especificidade so de 98% e 100%,
respectivamente;
Infeco localizada em rgo alvo: a PCR-CMV pode ser feita em

lquidos corporais ou material de bipsia de leses ou rgos suspeitos.
Condies
Fragmento de bipsia.
86
PATOLOGIA MOLECULAR
C-KIT, pesquisa de mutao no gene
Tumores estromais do trato gastrointestinal (GIST) so

tipicamente caracterizados por mutaes ativadoras nos genes c-KIT
e receptor tipo alfa para fator de Crescimento Derivado de Plaquetas
(PDGFR). Aproximadamente 80% dos GIST possuem uma mutao
ontognica no gene KIT e 15% dos GIST possuem uma mutao
no gene PDGFR sendo KIT negativo. A presena de mutaes nos
genes c-KIT e PDGFR do suporte ao diagnstico de GIST e tem valor
preditivo na resposta ao tratamento com o medicamento Gleevec
(imatinib).
As respostas de pacientes com GIST aos inibidores de tirosina

quinase, como o imatinib, variam de acordo com o tipo de mutao
observada. Pacientes com mutaes no xon 11 doc-KIT tendem
a mostrar uma resposta maior e mais duradoura ao imatinib, que
pacientes com mutaes no xon 9 ou pacientes sem expresso.
Cerca de 35% dos pacientes com mutaes de PDGFRA sero

beneficiados pelo tratamento com imatinib. Este teste de rastreio de
mutaes no tem o objetivo de confirmar o diagnstico de GIST.
A presena ou ausncia de uma mutao no confirma nem afasta o

diagnstico de GIST. Mutaes de c-KIT so tambm encontradas em
21% de melanomas de mucosas, em 11% de melanomas acrais, e em
17% dos melanomas que surgem em pele cronicamente danificada
pelo sol. Estes casos tm uma aparente boa resposta aos inibidores
de tirosina quinase.
Aplicaes principais
Estratificao para uso de inibidor de tirosina quinase em pacientes

diagnosticados com GIST ou melanoma.
Condies
Bloco de parafina (FIP)

87
Clonalidade B, PCR FR1, FR2, FR3
A amplificao dos rearranjos de regies variveis do gene IGH permite

a anlise de rearranjos do gene da cadeia pesada de Imunoglobulina,
regies FR1-JH, FR2-JH e FR3-JH.
Condies
Bloco de parafina (tecido devidamente fixado e impregnado em

parafina) com laudo histopatolgico.
Clonalidade B, PCR FR1 em bloco de parafina
A amplificao dos rearranjos da regio varivel do gene IGH permite

regio FR1-JH.
Condies

parafina) e laudo histopatolgico.

regio FR2-JH.
Condies

parafina) ou fragmento de tecido fresco em soro fisiolgico/gua
destilada acompanhados por laudo.
88
PATOLOGIA MOLECULAR

regio FR3-JH.
Condies

parafina) ou fragmento de tecido freco em soro fisiolgico/gua
destilada acompanhados por laudo histopatolgico.
Clonalidade T, PCR gamma
Aplicao clnica
Linfoproliferaces T clonais versus hiperplasias reativas;
Definio de linhagem em leucemias agudas indiferenciadas (linfoide

T versus B ou mielide).
Condies

parafina).
Epstein BARR, PCR
A infeco pelo vrus Epstein-Barr extremamente comum. Nos

adolescentes e adultos jovens, a infeco primria caracterizada
pelo quadro de mononucleose infecciosa. O EBV pertence famlia
Herspesviridae, infectando clulas epiteliais da nasofaringe e
linfcitos B que espalham o vrus pelo organismo. Cerca de 90% dos
infectados evoluem para infeco crnica e complicaes podem
estar associadas ao EBV. A PCR um dos mtodos mais sensveis para
a deteco do genoma viral. A PCR no plasma, em conjunto com o
89
painel de sorologia, til como teste confirmatrio da infeco, uma

vez que parte dos pacientes no apresenta anticorpos heteroflicos e
a IgM VCM tem carter transitrio.
Em pacientes HIV positivos com linfadenopatia generalizada

persistente, a presena de DNA do EBV srico apresenta risco
aumentado do desenvolvimento de linfoma. A deteco do EBV DNA
no lquor uma abordagem prtica e alternativa sorologia ou
cultura para pacientes com complicaes no SNC, que ocorrem em
1% dos casos, podendo ser a nica manifestao clnica da infeco
pelo EBV.
No lquor, a PCR positiva em pacientes com AIDS e leses focais

cerebrais um forte indicador de linfoma cerebral. O DNA do EBV
pode ser encontrado em tecidos de diversos tumores malignos e
benignos, incluindo linfomas, carcinomas nasofaringeo e carcinomas
gstrico.
Condies
EGFR, estudo de mutaes do gene
O receptor do fator de crescimento epidrmico (EGFR) considerado

um alvo teraputico para o tratamento de cncer de pulmo e
carcinoma colorretal metasttico.
Existem atualmente dois tipos de drogas que bloqueiam o EGFR:
A primeira classe inclui os anticorpos monoclonais panitumumab e

cetuximab;
A segunda classe inclui pequenas molculas, como os inibidores
90
PATOLOGIA MOLECULAR
de tirosino-quinase fitinib e erlotinib. Ambos os tipos de drogas
inibem a sinalizao molecular deflagrada por EGFR.
Uma resposta favorvel s terapias anti-EGFR no adenocarcinoma

de pulmo so observadas em pacientes com mutaes especficas
do gene EGFR, especialmente no tratamento com gefitinib. O teste
recomendado para estratificao e uso de terapia alvo especfica
em pacientes diagnosticados com cncer de pulmo de clulas no
pequenas (adenocarcinoma).
Condies
Bloco de parafina (Tecido fixado e impregnado em parafina, FIP).

Enviar, quando possvel, o bloco de parafina da metstase.
EML4-ALK, transloo do gene, FISH
O teste de FISH para ALK nos permite detectar rearranjos

envolvendo a regio do gene ALK no cromossomo 2. Translocaces
envolvendo o gene ALK so frequentes em linfoma de grandes
clulas anaplsico (ALCL) e linfoma no-Hodgkin de clulas T.
Alm disso, uma inverso envolvendo o gene ALK frequentemente

identificado em CEC ou adenocarcinoma de pulmo e suas variantes
(antigo cncer de pulmo de no pequenas clulas). Esta inverso
implica predio resposta teraputica quando houver rearranjo
com outro gene chamado EML4, tambm detectado por FISH.
O FISH realizado em cortes histolgicos utilizando dupla colorao

para o gene ALK na regio 2p23. Esta sonda flanqueia o gene
por inteiro. So avaliadas 50 clulas por ensaio. O rearranjo ALK
considerado POSITIVO quando mais de 15% das clulas analisadas
apresentam separao do sinal verde e vermelho e a distancia >2
vezes o tamanho do sinal ou observado apenas o sinal vermelho
(3ALK). O rearranjo ALK considerado NEGATIVO quando 15% ou
91
menos clulas apresentam distncia menor que o tamanho de dois

sinais.
Condies
Biopsia fixada em bloco de parafina.
Herpes simples vrus 1 e 2, PCR e genotipagem
Os Herpes Simples Vrus (HSV) dos tipos 1 e 2 esto relacionados a

uma grande variedade de manifestaes clnicas, variando desde
uma estomatite leve at uma doena fatal. A encefalite e o herpes
neonatal so fatais em 70% dos casos, com sequelas neurolgicas na
maioria dos sobreviventes. Leses mucocutneas podem ser graves
e de evoluo prolongada no paciente imunocomprometido. Como
o tratamento antiviral pode alterar o curso da infeco pelo HSV, o
diagnstico precoce de extrema importncia.
O uso da PCR necessrio nos casos de
Encefalite herptica: apresenta sensibilidade em detectar o DNA do

HSV no lquor de 98% e a especificidade de 99%.;
A PCR , atualmente, o mtodo padro-ouro recomendado para o

seu diagnstico;
Sndromes neurolgicas em pacientes com AIDS (apesar de

incomum) ou nos pacientes com meningites recorrentes;
Suspeita de herpes neonatal (lquor, aspirado nasofarngeo);
Presena de leses cutneas de etiologia indefinida ou durao

prolongada.
92
PATOLOGIA MOLECULAR
Condies
Fragmentos de bipsia.
HER-2 (ERBB2), pesquisa de mutao no gene
Este exame tem como objetivo a avaliao da presena de mutaes

no xon 20 do gene HER2 (ERBB2) em adenocarcinoma de pulmo.
Aproximadamente 2-4% de pacientes diagnosticados com cncer
de pulmo de clulas no pequenas apresentam inseres no
xon 20 do gene HER2. A definio da presena de mutaes neste
gene fornece informaes importantes para tomada de decises
teraputicas quanto ao uso de terapias alvo especficas.
Condies
Tecido fresco/bipsia em soluo salina estril ou meio de

transporte;
Bloco de parafina.
HER-2, pesquisa de amplificao, FISH
A principal indicao deste exame para pacientes que foram

diagnosticados com cncer de mama ou de estmago e tem
fraca marcao para HER-2/NEU no exame de imunohistoqumica,
sendo considerado resultado duvidoso (escore 2+). Neste caso,
a amplificao gnica pode ser comprovada ou descartada pelo
mtodo de hibridizao in situ por fluorescncia (FISH). Pacientes
cujo resultado demonstre amplificao do gene HER-2/NEU
podem sem beneficiados pela imunoterapia baseada na injeo
de anticorpos especficos anti-HER2, onde o medicamento ataca
apenas clulas tumorais que apresentem grandes quantidades
deste receptor em consequncia da amplificao gnica. Pacientes
com neoplasia sem amplificao no possuem alvo teraputico,
portanto no so submetidos imunoterapia.
93
Condies
Bipsia de tumor de mama fixado em formalina 10% e includo em

parafina.
HHV6, PCR
Associaes em pacientes submetidos transplante hematopoitico:
Pneumonite intersticial, encefalites, mielossupresso, rash, GVHD,
falha do enxerto, febre, microangiopatia trombtica e sinergismo com
reativao do citomegalovirus (CMV);
Associaes em pacientes submetidos transplante de rgos:

Pneumonite intersticial, encefalites, mielossupresso, rash, febre,
rejeio, reativao do CMV e infeco fngica;
Diagnstico de febre de causa indeterminada, doena tipo

mononucleose, hepatite fulminante e linfocitose atpica em pacientes
imunocomprometidos;
Avaliao de causa concorrente em infeces virais e fngicas em

pacientes imunocomprometidos.
Condies
Bloco de parafina.
HHV7, PCR
Investigao, no paciente imunocomprometido e submetido a
transplante, de febre, rash, mielosupresso, encefalite e pneumonites;
Investigao de agravamento da doena por CMV, doena fngica

invasiva e disfuno do enxerto;
Avaliao do risco de rejeio do enxerto aps reativao do CMV em

transplante renal.
94
PATOLOGIA MOLECULAR
Condies
Bloco de parafina.
HPV, captura hbrida
Teste semi-quantitativo, til no diagnstico e acompanhamento

da infeco pelo HPV. Identifica 18 tipos do HPV divididos em
sondas de baixo e alto risco para neoplasia cervical. Permite
a deteco de 1 pg/mL de DNA-HPV, equivalente a 0,1 cpia
de vrus por clula. Considera-se positivo quando as relaes
RLU/PCA para os vrus do grupo A (6,11,42,43 e 44) e/ou RLU/
PCB para os vrus do grupo B (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,
58,59 e 68) forem iguais ou maiores que 1. O teste semi-
quantitativo.
Condies
Bipsia (colo uterino, vulva, pnis, nus, etc.).
IDH1 e IDH2 (xon 4), anlise de mutao nos genes
Exame para deteco de mutaes no xon 4 dos genes IDH1 e

IDH2 em Leucemia Mielide Aguda citogeneticamente normal e
gliomas. O gene da Isocitrato desidrogenase 1 e 2 (IDH1 e IDH2)
catalisa a descarboxilao oxidativa do isocitrato alfa-cetoglutarato.
Mutaes no gene IDH1 e raramente no gene IDH2 ocorrem em >
70% de astrocitomas OMS grau II e grau III e em oligodendrogliomas
e nos glioblastomas que desenvolveram a partir destas leses de
menor grau, tambm ocorrem em 15% a 22% dos casos de LMA
citogeneticamente normais. Mutaes associadas a tumores nos
genes IDH1 e IDH2 esto limitadas ao xon 4, sendo essas mutaes
polimorfismos de um nico nucleotdeo (SNP).
Determinao de risco para pacientes recm-diagnosticados com

LMA citogeneticamente normal e determinao de risco para
pacientes com gliomas.
95
Condies
Tecido fixado impregnado em parafina (TFIP).
Instabilidade de microssatlites
Este exame tem como objetivo avaliar a instabilidade de microssatlite

das regies dos marcadores BAT26, BAT25, BAT40, APC, D2S123,
D17S250 nos tecidos tumorais por comparao com amostra de sangue
total do prprio paciente. Esse teste caracteriza a populao de clulas
tumorais quanto a ausncia ou a baixa instabilidade de microssatlite
RER (-) e quanto presena de instabilidade de microssatlites RER
(+). Essa informao importante na orientao do tratamento e na
determinao do prognstico do Cncer de Colo Retal (CCR).
A sensibilidade de deteco da instabilidade dependente das

populaes celulares capturadas no momento da bipsia, e no
momento do processamento da amostra para a execuo de DNA
para o teste. Diferentes populaes celulares do mesmo tumor podem
apresentar caractersticas moleculares diferentes.
Condies
Fragmento de tumor coloretal em bloco de parafina;
Tecido fresco
JC Vrus, PCR
Diagnstico de Leucoencefalopatia multifocal progressiva.
Investigao de leses demielinizantes em pacientes

imunocomprometidos.
Condies
Tecido a fresco;
Bipsia em soluo salina estril ou meio de transporte viral;
96
PATOLOGIA MOLECULAR
Bloco de parafina.
KRAS, estudo molecular da mutao do gene
Vrios genes que codificam protenas-chave na cascata de sinalizao

de EGFR encontram-se mutados em cnceres como colorretal e de
pulmo, em particular, mutaes ativadoras do gene KRAS.
A maioria destas mutaes ocorrem nos cdons 12 e 13 do xon 2,

mas ocasionalmente no xon 3. As mutaes resultam em ativao
constitutiva de KRAS, independente da regulao normal por EGFR.
Por isso, as mutaes em KRAS impedem o mecanismo de ao
das drogas anti-EGFR. As mutaes de KRAS so identificadas em
15% a 30% de adenocarcinomas de pulmo e em 30% a 40% dos
adenocarcinomas colorretais.
A deteco de mutaes de KRAS em pacientes com adenocarcinomas

de pulmo e colorretal fornece uma ferramenta para seleo de
pacientes com alta probabilidade de responder s drogas anti-EGFR.
Em julho de 2009, a FDA aprovou o teste de KRAS prvio ao

tratamento com cetuximab e panitumumab em pacientes com
adenocarcinoma colorretal.
Condies
Bloco de parafina (Tecido fixado e impregnado em parafina, FIP)
OBS: Enviar, quando possvel, o bloco de parafina da metstase.
Legionella, PCR
Dentre os agentes etiolgicos associados a um quadro de pneumonia

comunitria lista-se a Legionella pneumophila. A infeco causada
97
por L. pneumophila tem maior DPOC, alcolatras, usurios crnicos

de corticosterides e imunodeprimidos. Dos agentes atpicos o
que mais acomete idosos. A apresentao clnica varia de um quadro
gripal autolimitado que poupa o pulmo, at as formas mais graves
com evoluo para insuficincia respiratria. Opacidades alveolares
(com broncograma areo) uni ou bilaterais e nodulaes podem
estar presentes na radiografia do trax. Raramente, h cavitao ou
derrame pleural.
Dos testes utilizados para o seu diagnstico, a cultura tem sensibilidade

baixa, em torno de 50% a 60% dos casos. A sorologia mais til na
avaliao retrospectiva do diagnstico, sendo que cerca de 25% dos
pacientes no apresentam aumento significativo dos ttulos.
Testes para a pesquisa de antgeno (imunofluorescncia direta e

pesquisa de antgeno urinrio) detectam apenas espcies de L
pneumophila soro grupo 1 (Lp1), responsvel por 70% dos casos.
Entretanto, varias espcies de Legionella podem causar doena. A PCR

um teste sensvel e especfico capaz de detectar as vrias espcies
de Legionella. Pode tambm demonstrar a presena de organismos
no cultivveis e DNA livre, aumentando a chance de diagnstico em
pacientes parcialmente tratados empiricamente com antibiticos.
Condies
Bipsia de pulmo.
Leishmania, PCR
A Leishmaniose uma doena parasitria causada por protozorios

do gnero Leishmania. transmitidas pela picada de um mosquito do
grupo dos flebtomos, que normalmente encontrado nas regies
tropicais e subtropicais do mundo. Os reservatrios da Leishmania
incluem roedores, ces e seres humanos infectados. Vrias espcies do
98
PATOLOGIA MOLECULAR
gnero so agentes etiolgicos da Leishmaniose visceral, cutnea e
mucocutnea.
A Leishmaniose visceral ou Calazar , essencialmente, causada pelo

complexo donovani que inclui:
Leishmania donovani;
Leishmania infantum;
Leishmania chagasi.
A Leishmaniose visceral fatal na ausncia de tratamento e as

drogas atualmente disponveis so caras e causam srios efeitos
colaterais. Vrios estudos tm demonstrado que a PCR (reao em
cadeia da polimerase) altamente especifica e mais sensvel do que
mtodos clssicos utilizados para o diagnstico da leishmaniose e
pode ser usada de rotina em humanos e ces. A deteco do DNA
da Leishmania sp em sangue perifrico est associada ao nvel
de parasitemia e pode ser negativa mesmo em pacientes com o
diagnstico parasitolgico confirmado.
Condies
Bipsia de leses.
MGMT, anlise do promotor do gene, PCR
O glioblastoma o tumor primrio cerebral mais comum e mais

agressivo. A metilao do promotor do gene de reparo de DNA,
MGMT (O6-methylguanineDNAmethyltransferase) leva ao seu
silenciamento e tem valor prognstico e preditivo de benefcios
na quimioterapia de glioblastoma. A metilao do promotor de
MGMT e/ou baixa expresso da protena codificada pelo MGMT
so frequentemente observadas em glioma de baixo grau e
oligodendrogliomas anaplsicos.
99
O silenciamento epigentico do gene MGMT por metilao foi

associado com maior sobrevida global e melhor resposta ao
tratamento com radioterapia combinada com os quimioterpicos
alquilantes carmustina (BCNU) ou temozolomide.
Aplicaes principais
Prognstico e predio de resposta teraputica no glioma.
Condies
Bloco de parafina: Temperatura mxima de envio 20-25C. Durante o

envio, os blocos devem ser acondicionados em embalagens fechadas,
que permitam proteger o material de formaes mecnicas e calor.
Mycobacterium Sp, PCR
Diagnstico rpido de tuberculose pulmonar atpica e

neurotuberculoses atpicas. Implementao rpida de medidas de
controle de infeco hospitalar e de sade pblica.
Condies
Tecidos moles/bipsia em soluo salina estril ou meio de

transporte viral; bloco de parafina.
Mycobacterium tuberculosis, PCR
Diagnstico rpido de tuberculose por anlise do patgeno

diretamente de espcimes clnicos. Implementao rpida de medidas
de controle de infeco hospitalar e de sade pblica.
Condies

parafina).
100
PATOLOGIA MOLECULAR
Mycoplasma pneumoniae, PCR
O M. pneumoniae o agente mais comum entre os germes atpicos

associado a um quadro de pneumonia comunitria. Na maioria
das vezes subestimado pelo difcil preferencialmente escolares,
adolescentes e adultos jovens. Os sintomas so generalizados,
ocorrendo normalmente faringite e traqueo-bronquite.
Inicialmente, h um infiltrado intersticial localizado, que pode

evoluir com preenchimento alveolar difuso. Derrame pleural muito
incomum. Hipoxemia pode estar presente, com evoluo franca para
insuficincia respiratria em alguns casos. Manifestaes articulares,
hematolgicas, hepticas, renais, oculares e pancreticas podem
estar associadas. As limitaes dos testes laboratoriais disponveis
levaram ao desenvolvimento de tcnicas de amplificao de seu
DNA, que apresentam sensibilidade de 92% e especificidade de
100%.
Condies
Bipsia de pulmo.
N-MYC, amplificao do gene, FISH
O teste de FISH para NMYC detecta a amplificao deste gene. A

identificao desta amplificao representa importante fator de
pior prognstico em neuroblastoma. Em menor frequncia, esta
amplificao tambm pode ser encontrada em retinoblastoma,
neoplasia pulmonar de pequenas clulas e astrocitoma. O gene NMYC
est localizado na regio cromossmica 2p24.3 e sua amplificao
pode ser encontrada em 25% dos casos de neuroblastoma e est
fortemente associada rpida progresso tumoral, estadiamento
avanado da doena e pior prognstico. Ainda, o status desta
amplificao j est sendo usado para a estratificao de pacientes
para diferentes protocolos de tratamento.
101
Condies
Bipsia de tumor de medula fixado em formalina e includo em

parafina.
NRAS, pesquisa mutao do gene
Mltiplos estudos demonstraram que pacientes com mutaes

no gene NRAS tm reduzidas taxas de resposta a terapia com
anticorpos anti-EGFR, seja em monoterapia ou em combinao com
quimioterapia. Foi observado que mutaes nos cdons 12, 13, 61,
117 e 146 nos principais genes da famlia de oncogenes RAS (KRAS e
NRAS) resultam na elevao dos nveis da protena ativada RAS-GTP
sendo considerada como biomarcador preditivo de resposta negativa
a terapia com anticorpos anti-EGFR.
Condies

Enviar, quando possvel, o bloco de parafina da metstase.
PDGFR ALFA, pesquisa mutao
Aproximadamente 80% dos tumores estromais do trato

gastrointestinal (GIST) possuem uma mutao ontognica no gene
KIT, enquanto outro 5% a 7% dos GIST tm uma mutao no gene
relacionada PDGFR. Essas mutaes levam a ativao constitutiva
da atividade tirosina-quinase das protenas KIT e receptor do fator
de crescimento derivado de plaquetas, respectivamente. Entre 10% e
15% dos GIST no tem mutao detectvel em KIT ou PDGFR. Essas
mutaes so mutuamente excludentes. As respostas de pacientes
com GIST aos inibidores de tirosina quinase, como o imatinib, variam
de acordo com o tipo de mutao observada.
Pacientes com mutaes no xon 11 do KIT tendem a mostrar uma
102
PATOLOGIA MOLECULAR
resposta maior e mais duradoura ao imatinib, que pacientes com
mutaes no xon 9 ou pacientes em expresso. Aproximadamente
35% dos pacientes com mutaes de PDGFR sero beneficiados
pelo tratamento com imatinib.
Esse teste de rastreamento de mutaes no tem o objetivo de

confirmar o diagnostico de GIST. A presena ou ausncia de uma
mutao no confirma nem afasta o diagnstico de GIST.
Aplicaes principais
Estratificao para uso de inibidor de tirosina quinase em

pacientes diagnosticados com GIST.
Condies
Bloco de parafina (FIP).
Protooncogene RET - CMT Espordico - xons 16 E 15
Exame indicado para excluso de origem familiar. Se negativo,

confirma a classificao de carcinoma medular tireoide (CMT)
espordico. Se positivo, identifica um primeiro caso familiar de
CMT. Se a anlise for realizada somente no material tumoral, e no
for acompanhada por pesquisa de mutao no SP, os pacientes
recebero, nos casos positivos para a mutao no tecido tumoral, a
classificao de caso aparentemente espordico.
O CMT represente aproximadamente 510% dos carcinomas de

tireides diagnosticados; cerca de 25% destes casos so familiares.
A identificao de mutaes no gene RET especificada para o CMT,
sua deteco permite no s classificar, mas tambm diagnosticar
o CMT. Na forma hereditria a mutao do RET encontrada em
todas as clulas (tumorais ou no tumorais), na forma espordica
a mesma s encontrada nas clulas tumorais.Confirmao da
natureza espordica importante para avaliao de prognstico
103
individual e risco familiar. O planejamento de tiroidectomia profiltica,

assim como a predio de risco de CMT agressivo pode ser orientado
pela posio das mutaes no oncogene RET.
Aplicaes principais
Confirmao do diagnstico de CMT espordico (ausncia de

sndromes associadas p.e. feocromocitoma, doena de paratireide, e
ausncia de casos familiares)
Condies
Bloco de parafina (Tecido fixado e impregnado em parafina, FIP)ou

tecido fresco de tumor em soluo salina.
TP53, estudo molecular do gene
Para este estudo molecular uma mutao ou um conjunto de

mutaes presentes em um dos xons do gene P53 identificada
por sequenciamento. A escolha da regio sequenciada se orienta
de acordo com resultados familiares para cada um dos pacientes
estudados.
Sndrome de Li-Fraumeni
Esta sndrome se caracteriza pela apario de sarcoma e cncer de

primeiro grau antes dos 45 anos e se herda de maneira autossmica
dominante. As mutaes germinais so variadas, mas a maioria se
localiza nos xons 4 a 10 do gene p53. O gene TP53 o nico gene
comprovadamente associado com a LFS e a LFL.
O teste gentico molecular utilizado para LFS o sequenciamento

completo do gene TP53 (xons 2-11). Este procedimento identifica
95% das mutaes no TP53 que em sua grande maioria so mutaes
missense, podendo tambm ocorrer mutaes nonsense, frameshift ou
inseres de sequncias repetitivas.
104
PATOLOGIA MOLECULAR
Existem duas formas da Sndrome de Li-Fraumeni reconhecidas
clinicamente:
Sndrome de Li-Fraumeni classica (LFS) e
Sndrome de Li-Fraumenilike (LFL).
As simplificaes clnicas da disfuno desse gene incluem:
Cncer de pele: Mutaes em TP53 se detectam em 40% dos

carcinomas de clulas basais e escamosas enquanto que so
infrequentes em melanoma maligno; 25% dos casos de cncer
de mama apresenta mutaes em TP53; 40-60% dos cnceres
de cabea e pescoo apresentam mutaes em TP53; 40% dos
cnceres de pulmo apresentam mutaes G >T nos cdons 157,
158, 245, 248, 249 e 273 no gene TP53; 45% de cnceres de esfago
apresentam mutaes nos cdons 175, 176, 248, 273, 282 no gene
TP53; 20-50% dos casos se d perda de 1p, 4q, 5p, 5q, 8q, 13q, 16p,
16q, y 17p. Tambm aparece mutao no cdon 249 relacionado
com a aflatoxina B1 na zona de China e frica; 30% dos cnceres
gstricos apresentam mutaes em TP53.
Enfermidade hematolgica
20 - 30% dos casos de CML;
5% dos casos MDS e 15% de ANLL;
2% de ALL;
15% de CLL;
5-10% de mielomas mltiplos.;
60-80% da enfermidade Hodgkin.
Condies
105
Toxoplasmose, PCR
O Toxoplasma gondii um protozorio parasita intracelular

obrigatrio. Usualmente assintomtica, a infeco importante em
imunocomprometidos, gestantes e naqueles com acometimento
ocular. A infeco adquirida em imunocompetentes sintomtica em
apenas 10% dos pacientes, a maioria com linfonodo megalia auto-
limitada. Podem apresentar febre, urticria, hepatoesplenomegalia,
rash maculopapular e corioretinite. Neste caso, o diagnstico
facilmente estabelecido pelos testes sorolgicos. A PCR indicada nas
seguintes situaes:
Definir o diagnstico no paciente imunodeprimido.
Na presena de acometimento do sistema nervoso central (SNC).
Detectar a presena de acometimento ocular.
Estabelecer o diagnstico de Toxoplasmose congnita: diagnstico

pr-natal e ps-natal.
Condies
Varicela Zster Vrus, PCR

O Vrus Varicela Zster (VVZ) o agente etiolgico da Varicela
(catapora) e do Herpes Zster. A presena de complicaes so mais
frequentes quando a infeco primria ocorre apos 12 anos de idade.
As mais comuns so a encefalite, pneumonia e infeco secundria das
leses. Pacientes imunocomprometidos podem apresentar evoluo
desfavorvel com infeco disseminada, pneumonite, hepatite e
encefalite. Raramente, a transmisso congnita do Varicela Zster
pode levar a infeco neonatal grave.
As indicaes da PCR so as seguintes:
Acometimento do sistema nervoso central;
Complicaes oculares;
106
PATOLOGIA MOLECULAR
Leses vesiculares atpicas;
Lquidos corporais ou tecidos de bipsia (lquido sinovial, lavado

brnquico, etc.);
Infeco congnita: anlise do lquido amnitico, a partir da 15

semana.
Condies
Bipsia
107
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Manual de Anatomia

31 Anlise de bipsia simples ou bipsias mltiplas

37 Anlise de pea cirrgica (radical ou simples)

45 Anlise citolgica no ginecolgica (puno-bipsia de rgos variados)

55 Anlise de colpocitologia onctica

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3.1 Antomo Patolgico

O Antomo Patolgico consiste na avaliao macro e microscpica de

Com o material coletado na bipsia possvel identificar os aspectos

A equipe de especialistas em Citopatologia capacitada para oferecer

3.3 Diagnsticos Moleculares

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3.4 Imunohistoqumica (Isolada ou painel)

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