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EVALUACION DE UN BIORREACTOR DE LECHO EMPACADO PARA EL
DESARROLLO DEL HONGO Beauveria bassiana
ARLEY DAVID ZAPATA ZAPATA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
SEDE MEDELliN
FACULTADES DE CIENCIAS Y CIENCIAS AGROPECUARIAS
POSGRADO EN BIOTECNOLOGiA
MEDELliN
2001
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EVALUACION DE UN BIORREACTOR DE LECHO EMPACADO PARA EL
DESARROLLO DEL HONGO Beauveria bassiana
ARLEY DAVID ZAPATA ZAPATA
Tesis para optar altitulo de Magister en Biotecnologia
Director
MARIO ARIAS ZABALA
t Ingeniero Quimico, MsC
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
SEDE MEDELliN
FACULTAD DE CIENCIAS Y CIENCIAS AGROPECUARIAS
POSGRADO EN BIOTECNOLOGiA
MEDELliN
2001
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DEPTO. DE BIBLIOTECAs
IIULIOTECA "EFE" n"H.,fR,i
Nota de aceptaci6n
Presidente del Jurado
Jurado
\
Jurado
Ciudad y fecha (dia, mes, alio)

A mis padres, a mis
hermanos, a mi novia, por el
apoyo y confianza que me
brindaron.
v
AGRADECIMIENTOS
EI autor expresa sus agradecimientos a:
Guillermo Le6n Hernandez, Bi610go y Zootecnista, Gerente de la empresa
Biocaribe S.A por todo el apoyo brindado durante el transcurso del trabajo.
Mario Arias Zabala, Ingeniero Quimico MsC, profesor de la Universidad
Nacional de Colombia, Sede Medellin y Director de la Investigaci6n, por sus
valiosas orientaciones.
Evelio Gomez, Ingeniero Agr6nomo, Profesor de la Universidad Nacional de
Colombia, Sede Medellin, por sus valiosos aportes en la etapa de formulaci6n
del proyecto.
Kenneth Roy Cabrera, MsC. Profesor de la Universidad Nacional de Colombia,
Sede Medellin, por su valiosa colaboraci6n en el analisis estadistico de los
resultados.
Juan Carlos Quintero, Ing. Quimico MsC. Profesor de la Universidad de
! Antioquia, por sus valiosos aportes en la etapa de formulaci6n del proyecto.
I!
vi
I
I Olga Montoya, MsC. Profesora de la Universidad Nacional de Colombia, Sede
I I
Medellin, por su valiosa asesoria en la parte Microbiol6gica.
Sonia Jaramillo, MsC. Profesora de la Universidad Nacional de Colombia, Sede
Medellin, por su confianza y apoyo logistico.
AI Laboratorio de Bioconversiones y de Ciencias Termicas de la Universidad
Nacional de Colombia Sede Medellin, por sus aportes logisticos.
vii
CONTENIDO
pag
INTRODUCCION 18
1. MARCO TEORICO 20
1.1 FERMENTACION EN MEDIO SOLIDO, FMS 20
1.1.1 Definicion de Fermentacion en Medio Solido 20
1.1.2 Caracterfsticas de la Fermentacion en Medio Solido 21
1.1.2.1 Cantidad y actividad del agua 22
1.1.2.2 Intercambio de gases 23
1.1.2.3 Control de temperatura 23
1.1.3 Efecto de las condiciones de operacion sobre la 24
Fermentacion en estado solido
1.1.3.1 Efecto de la temperatura del aire y de su

humedad relativa
1.1.3.2 Efecto de la velocidad del aire 26
1.1.3.3 Efecto del coeficiente convectivo de transferencia 27
de calor
1.1.4 Transferencia de calor en biorreactores de lecho 28
empacado
1.1.4.1 Efecto de la relacion altura I diametro (HID) 31
1.1.4.2 Efecto de la temperatura del aire a la entrada 32
1.1.4.3 Densidad del sustrato en el lecho 34
1.1.4.4 Rata especifica de crecimiento 34
1.1.4.5 Maxima den sid ad de biomasa 34
viii
i
.I '!
!
I
! 1.2 HONGOS ENTOMOPATOGENOS 36
1.2.1 Generalidades 36
1.2.2 Requerimientos de uso 37
1.2.3 Modo de accion de los hongos entomopatogenos 37
1.3 PRINCIPALES CARACTERrSTICAS DEL 38
ENTOMOPATOGENO
1.3.1 Caracteristicas del genera Beauveria 38
1.3.2 Hospederos 39
1.3.3 Modo de accion 40
1.3.4 Uso 42
1.3.5 Produccion 42
1.3.6 Efecto sobre la braca del cafe 42
2. MATERIALES Y METODOS 44
2.1 LA CEPA 45
2.2 SUSTRATO 46
2.3 DESCRIPCION DEL BIORREACTOR DE LECHO 47
EMPACADO
2.4 PREPARACION DEL MEDIO PARA LA FERMENTACION 49
: 2.5 INOCULACION DEL MEDIO 50
2.6 ESTERILIZACION DEL BIORREACTOR 50
2.7 METODO PARA DETERMINAR LA CONCENTRACION 51
DE ESPORAS
2.8 DISENO EXPERIMENTAL 53
3. RESULTADOS 56
3.1 VARIABLE RESPUESTA TEMPERATURA 56
3.2 VARIABLE RESPUESTA CONCENTRACION 64
i
I
DE ESPORAS
4. ANALISIS DE RESULTADOS Y DISCUSION 74
4.1 ANAuSIS DE LA VARIABLE RESPUESTA 75
TEMPERATURA
4.2 ANAuSIS DE LA VARIABLE RESPUESTA 76
CONCENTRACION DE CONIDIAS
4.3 INTERPRETACION DE RESULTADOS ESTADisTICOS 78
4.3.1 Variable Temperatura
4.3.1.1 Analisis de Varianza 78
4.3.1.2 Evaluaci6n de la diferencia estadistica de medias 78
4.3.1.3 Analisis de medias para cada nivel y sus interacciones 80
4.3.2 Variable con'centraci6n de conidias 83
4.3.2.1 Analisis de varianza 83
4.3.2.2 Efecto de los factores y sus interacciones 83
4.4 COMPARACION DE RESULTADOS ENTRE EL 85
BIORREACTOR DE LECHO Y UN METODO
TRADICIONAL (BOTELLAS)
5. CONCLUSIONES 88
6. RECOMENDACIONES 91
BIBLIOGRAFiA 94
AN EXOS 100
I
I
x
.L1STA DE TABLAS
Tabla 1. Definicion de niveles para cada variable de operacion 53
Tabla 2. Definicion de cada nivel para la variable posicion 54
Tabla 3. Combinacion entre los niveles de los dos factores 55
que definen el numero de experimentos.
Tabla 4. Anova para el modelo de la variable respuesta 75
temperatura
Tabla 5. Anova para los factores e interacciones dobles 75
y triples sobre la variable respuesta temperatura.

Tabla 6. Anova para el modelo de la variable respuesta 76
concentracion de conidias.
Tabla 7. Anova para los factores e interacciones dobles 77
y triples sobre la variable respuesta concentracion de conidias.
Tabla 8. Cantidad total de conidias para diferentes alturas .84
dellecho.
xi
- .------------------------------------------------------
LlSTA DE FIGURAS
pBg
Figura 1. Diferentes posiciones a nivel radial y axial 25

en una columna .
Figura 2. Efecto de la velocidad superficial del aire sobre 27

el perfil de temperatura y la concentraci6n de biomasa,
en diferentes posiciones del biorreactor
Figura 3. Simulaci6n de perfiles de temperatura en 31

direcci6n radial y axial
Figura 4. Efecto de la raz6n HID sobre el perfil de 32
temperatura y la concentraci6n de biomasa, en
diferentes posiciones del biorreactor
Figura 5. Efecto de la temperatura del aire que entra 33
sobre el perfil de temperatura y la concentraci6n de biomasa,
en diferentes posiciones del biorreactor
Figura 6. a) Efecto de velocidad especifica de crecimiento 35
sobre el perfil de temperatura b) Efecto de la maxima
densidad de biomasa sobre el perfil de temperatura
Figura 7. Especies de Beauveria 39
Figura 8. Broca infectada con el hongo Beauveria bassiana 40
Figura 9. Estructura molecular de Beauvericin aislada de 41
Beauveria bassiana
Figura 10. Broca del cafe 43
Figura 11. Cepa de hongo Beauveria bassiana 46
Figura 12. Biorreactor de lecho empacado 49
Fig'ura 13. Ubicaci6n de las posiciones trabajadas en el 54
Biorreactor de lecho empacado
Figura 14. Temperatura del !echo a diferentes alturas 57
manteniendo el flujo = 3.7 Umin y posicion 1
xii
I
I Figura 15. Temperatura dellecho a diferentes alturas
manteniendo el flujo = 7.9 Umin y posici6n 1
57
Figura 16. Temperatura dellecho a diferentes alturas 58

manteniendo el flujo = 12.3 Umin y posici6n 1
Figura 17. Temperatura dellecho, manteniendo 59

Flujo = 3.7 Umin y posici6n 2, a una altura determinada



manteniendo flujo = 3.7 Umin y posici6n 3



Figura 24. Temperatura dellecho a diferentes alturas ,63


Figura 26. Concentraci6n de esporas a diferentes alturas 65



Figura 29. Concentraci6n de esporas, manteniendo 67

flujo=3.7 Umin y posici6n 2, a una altura determinada
Figura 30. Concentraci6n de esporas, manteniendo 68

Flujo = 7.9 Umin Y posici6n 2, a una altura determinada
Figura 31. Concentracion de esporas, manteniendo 68
Flujo = 12.3 Umin y posicion 2, a una altura determinada
Figura 32. Concentracion de esporas a diferentes alturas 69
manteniendo flujo = 7.9 Umin y posicion 3
Figura 38. Perfil aparente de flujo de aire obtenido en el 79
biorreactor
Figura 39. Concentracion de conidias, con el metodo tradicional 86
Figura 40. Concentracion de conidias para el comportamiento 86
optimo en el biorreactor
xiv
LlSTA DE ANEXOS
pag
Anexo A. Isometrico del biorreactor de lecho empacado 100
Anexo B. Corte transversal del biorreactor de lecho 101
Empacado
Anexo C. Matriz de Resultados 102
Anexo D. Prueba de tukey sobre cada factor, para evaluar 111
las diferencias estadisticas significativas entre medias.
Anexo E. Evaluaci6n de medias de la variable respuesta 114
temperatura, cada factor y sus interacciones
xv
RESUMEN
Se disetio un biorreactor de lecho empacado con el objetivo de evaluar el
desarrollo del hongo Beauveria bassiana y comparar este desarrollo con el
obtenido en un sistema tradicional como el de bote lias. Para ello se analizo" el
efecto de algunos parametros operacionales sobre el crecimiento del hongo.
Dicha evaluacion se hizo con base en las variables temperatura y
concentration de conidias del hongo Beauveria bassiana, durante su
crecimiento en un medio solido constituido p~r trigo entero. Se tomaron como
parametros de operacion. la altura dellecho, el flujo de aire, la posicion radial y
axial dentro del biorreactor y el tiempo de operacion.
Se encontro p~r medio de un analisis de varianza que los para metros
evaluados, mencionados anteriormente, son significativos para ambas

"
variables respuesta, aunque la prueba Tukey de analisis de medias, muestra
que sobre un mismo factor existen niveles sin una diferencia estadfstica
significativa entre medias tanto de temperatura como de concentracion de
esporas.
Se pudo observar que bajo unas condiciones de operaci6n adecuadas como la

.-- . -
relacion Altura I Diametro dellecho igual a.0.9 y flujo de aire de 12.3 Umin, S9
, .. ). ..,... ..~' -~ \' ,. - ,. , .
xvi
obtienen unos resultados que con respeeto a la desarrollo del hongo, son
,
mueho mejores a los obtenidos utilizando un metodo tradieional de desarrollo
en botellas ya que la produetividad se ve'inerementad~ aproxi'madamente en
un 1500%, bajo la eseala ensayada.
xvii
INTRODUCCI6N
En el proceso de protecci6n de los cultivos contra plagas y enfermedades se
esta dando un gran cambio ya que se esta dejando a un lado el uso de los
lradicionales pesticidas qu[micos, para darle cabida al uso de sistemas de
control biol6gico (Samsinaka, 1981, 169). En nuestro pais el cambio a(m no se
ha dado de forma tan radical como en los paises europeos, pero va
encaminado en la misma direcci6n.
Biocaribe S.A. es una empresa colombiana que desarrolla hongos utilizados
para el control biol6gico de plagas y enfermedades en diferentes cultivos. EI
80% de su producci6n esta concentrada en el hongo Beauveria bassiana, el
cual es de gran utilidad en el control especialmente de la broca del cafe, 10 que
hace que en nuestro medio sea de gran interes el estudio de sus mecanismos
de acci6n y de desarrolio.
La producci6n tradicional de este hongo en Biocaribe se basa en el sistema de
bandejas localizadas en grandes salones con humedad y temperatura
controladas,' 10 que hace que el costa de operaci6n sea elevado y no se cuente
con versatilidad en el proceso, ademas de tener algunas otras limitaciones
operacionales, las cuales la empresa pretende minimizar, por 10 que emprendi6
la tarea de optimizar el proceso productiv~, buscando:
18
Q Producir mas en menor espacio, aumentando asf la productividad.
Q Desarrollar en el mismo espacio diferentes hongos.
Q Ahorro energetico.
Q Controlar y regular las condiciones de operaci6n con mayor faciJidad.
Q Reducir costos de operaci6n y de equipos.
Luego de analizar el biorreactor de lecho empacado como una alternativa de
soluci6n al problema antes mencionado (Viesturs, 1994, 84), ~e estudi6 la
viabilidad de su utilizaci6n con el hongo Beauveria bassiana.
EI analisis se hizo partiendo de un diseno del biorreactor, que permiti6
monitorear adecuadamente algunas variables que limitan el trabajo en
el mismo, como son la altura del lecho y el flujo de aire, analizando la
temperatura y la concentraci6n de esporas como respuesta a estas variables.
Se utiliz6 adem as semilla de trigo como sustrato, la cual cumple con los
requisitos de operaci6n en el biorreactor; ademas se fij6 como tiempo de
operaci6n doce (12) dfas, por ser este un tiempo en el cual se pueden observa
resultados con los metodos tradicionales utilizados para el desarrollo del
hongo.
. .
19
1. MARCO TE6RICO
1.1 FERMENTACI6N EN MEDIO S6L1DO, FMS
1.1.1 Definici6n de Fermentaci6n en Medio S6lido ( FMS). La fermentaciOn en
estado s6lido, la cual constituye una alternativa importante en el campo de la
biotecnologia para producir aJimentos, productos de alto valor agregado y otros,
se define como el desarrollo de microorganismos sobre y/o dentro de sustratos
sOlidos, humedos e insolubles, donde el contenido de humedad esta al nivel
correspondiente al de Ja actividad del agua y sin exceder el maximo nivel de
retenci6n de liquido del s61ido (Pena, 1998, 1).
EI proceso de fermentaci6n en medio s6lido puede ser definido como un
sistema de cuatro fases: gas, so porte s6lido, liquido contenido en el medio
sOlido y la fase bi6tica (Auria, 1994, 289).
La utilizaci6n de sustratos s61idos es probablemente el metodo mas antiguo
usado por el hombre para obtener productos de interes trabajando con
microorganismos (Mathot, 1991, 1612).
Dos de las areas de trabajo que aun se encuentran en pleno desarrollo por su
importancia para la aplicaci6n a gran escala son el estudio de criterios de
escalado y de modo inseparable con la anterior, el diseno del biorreactor. La
20
informaci6n disponible al respecto es muy escasa 0 esta clasificada para
mantenerla en secreto (Ramfrez, 1998, 2).
1.1.2 Caracteristicas de la Fermentaci6n en Medio S6lido. Como toda
actividad biol6gica cesa por debajo de una humedad de 12%, este valor
establece eJ limite mas bajo en el cual la fermentaci6n s61ida puede ocurrir. EI
Ifmite superior para sistemas en estado s6lido es una funci6n de la absorbancia
y contenido de humedad el cual varra con eJ tipo de material 0 sustrato; por
ejemplo: el agua se hace visible cuando se trabaja con cortezas de arboles a
un nivel de 40%, mientras que en trigo apenas es notable a un nivel del 75%.
En la mayor parte de los materiales utilizados para la fermentaci6n de sustrato
s6lido, el agua aparece cuando la humedad alcanza mas del 80% (1).
Muchos microorganismos son capaces de crecer en sustrato s6lido, pero
unicamente los hongos 'filamentosos son capaces de desarrollarse
eficientemente en ausencia de agua libre. Tambien las bacterias y levaduras
crecen en sustratos s6lidos con porcentaje de humedad entre 40 y 70% tales
como compostajes y ensilages aero bios 0 anaerobios, aunque el crecimiento y
propagaci6n deorganismos, siempre requiere de agua libre (Gutierrez, 1994,
189). Entre los hongos 1'ilamentosos tres han ganado importancia practica: los
Phicomycetos, tales como los generos Mucor y Rhyzopus, los Ascomycetos
como los generos Aspergillus y Penicillum y los Basidiomycetos (Ramfrez, 1).
Todos los procesos de aplicaci6n de la FMS, requieren del conocimiento 0 el
dominic de un cierto numero de parametros: caracterrsticas de crecimiento,
21
importancia de la calidad y actividad del agua, control del medio ambiente y de
los intercambios gaseosos, control de la temperatura, papel del pH y
estimacion de la biomasa. Estos aspectos se consideran esenciales para la
FMS (2). Sin embargo, las limitaciones mas importantes para el estudio de la
fermentacion en medio solido son los procesos de monitoreo y control (Auria,
289)
1.1.2.1 Cantidad y actividad del agua. EI requerimiento de agua de los
microorganismos puede ser expresado cuantitativamente en terminos de la
actividad de agua {aw } la cual es un para metro termodinamico (Gutierrez,
194), que se define en el equilibrio, con relacion al potencial qufmico del agua
como {Dorta, 1994, 563}:
r - r'= R T log aw
donde:
r =potencial qufmico del agua en el producto

r'= potencial qufmico del agua pura a la misma temperatura
R = constante de los gases
T = temperatura en K
La actividad del agua define tres regiones de disponibilidad para los
microorganismos: Baja disponibilidad ( 0 < aw < 0.2 ), disponibilidad intermedia
( 0.2 < aw < 0.6 ) y una ultima zona donde el agua permite el desarrollo
microbiano ( 0.6 < aw < 0.99). Es dentro de esta ultima region, correspondiente
a humedad 50% , que la FMS se neva a cabo (Luz, 1997, 119).
22
En todos los casos el agua libre debe ser la que permita el desarrollo
microbiano sin reducir la porosidad del material, ni disminuir el intercambio de
gases (Ramfrez, 3).
1.1.2.2 Intercambio de gases. En la mayor parte de los procesos de FMS,
tanto a nivel de laboratorio como a nivel industrial, la aireacion de los medios
de cultivo se lIeva a cabo por inyeccion de aire a traves de los fennentadores.
EI intercambio de gases se realiza entre el aire y la matriz solida .
La composici6n en CO2 y D2 de la fase gaseosa afecta de una manera muy
importante el metabolismo de los microorganismos cultivados en FMS. La
producci6n elevada de enzimas 0 de otros metabolitos esia directamente ligada I!'
I
a la aireaci6n. Gracias a estas observaciones, se han disenado diversos ii.,. i
.... il
sistemas de regulaci6n de la aireacion, conduciendo a la renovaci6n completa " 'I

, '1
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de laatmosfera gaseosa dentro del fermentador, 10 que mejora el intercambio ! . I~
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I,. '."11'1' .:
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; 1'1'
de gases y los resultados de la FMS. Los metodos de cuantificaci6n mas I!
comunes son las cromatografias gaseosa y el empleo de analizadores
especrficos para el CD2 y el O2 (3).
1.1.2.3 Control de temperatura. La temperatura es una de las variables que
mas inciden en la eficiencia de los procesos de FMS (Luz, 117).
EI aumento de la temperatura ~n el medio se debe basicamente a las
concentraciones elevadas del sustrato y microorganismos, al bajo contenido de
,
23
agua, a la ausencia de mezclado en las FMS estaticas, asi como a la baja
conductividad termica de los materiales biologicos.
Cuando la energfa metabolica se acumula aumentando asr la temperatura del
sistema, se favorecen tres aspectos negativos:
a) La actividad microbiana se desacelera 0 inactiva.
b) Deshidrata el medio solido.
c) EI metabolismo se desvra como un mecanisme de defensa ante el
incremento de temperatura 0 la deshidratacion (Ramirez, 4).
EI exceso de temperatura se ha tratado de controlar utilizando metod os de
remocion convencionales y recientemente los lIamados no convencionales.
Los metodos convencionales incluyen la remocion de calor via conduccion y
vra conveccion forzada. Se ha demostrado que los primeros no son tan
efectivos como los segundos. Los metodos de remocion de calor convectivo t
para ser efectivos, requieren de altas velocidades de aireacion que con
frecuencia deshidratan el medio. Los metod os no convencionales se refieren a
la utilizacion del calor latente de vaporizacion del agua para disminuir las altas
temperaturas generadas p~r el metabolismo de manera rapida, incluyendo la
incorporacion de aire parcialmente saturado y a baja temperatura (4).
1.1.3 Efecto de las condiciones de operacion sobre la fermentacion en estado
solido. Los parametros que mas influyen en la fermentacion en estado solido
son: velocidad de fJujo de aire, humedad relativa del aire que entra,
24
temperatura del aire de entrada y coeficiente de transferencia de calor entre la
pared exterior del fermentador y el aire en el incubador. EI aire tiene como
objetivo, aparte de propiciar un ambiente aerobio, enfriar la mas a fermentada
por efecto de evaporaci6n de agua (Sargartanis, 1993.149).
Las variaciones en los perfiles de temperatura y de humedad estan acopladas.
La dependencia de la rata maxima especffica de crecimiento Jlm Y la maxima
concentraci6n de biomasa, Xm con la temperatura y la humedad, afecta la
producci6n de biomasa, ya que ambas varran durante la fermentaci6n. EI perfil
de temperatura 6ptimo para FMS con respecto al tiempo de fermentaci6nes
muy similar al perfil de variaci6n del contenido de agua.
La figura 1 muestra una columna en la cual se senalan diferentes posiciones
. tanto a nivel radial como axial. Esta figura sera muy importante para el
entendimiento de los resultados que se muestran en las figuras posteriores.
Figura 1. Diferentes posiciones a nivel radial y axial en un /echo empacado.
(romado de Sangsura~k, 1995, 202).
25
-_._ -----------------------
1.1.3.1 Efecto de la temperatura del aire y de su humedad relativa. EI efecto
de la disminucion de la temperatura del aire a la entrada es similar al efecto de
Ia disminucion de la humedad relativa. Esto implica que el calor sensible
producido por la diferencia entre la temperatura del aire y el solido fermentado
es muy pequeno comparado con la eficiencia de remoci6n de calor por
evaporacion del agua.

,,
La producci6n de biomasa muestra un maximo en un punto determinado de
humedad relativa 0 de temperatura del aire. Una reduccion de la temperatura
de entrada de aire de 2 C, puede causar un drastico incremento en la
producci6n de biomasa siempre y cuando bajo esta temperatura no se
produzca la muerte celular la cual se da a temperaturas mayores de 40C. En
otros casos, la disminucion de la temperatura de entrada resulta ser mejor
para enfriar pero adversamente afecta la productividad de biomasa debido a la
disminucion del contenido de humedad afectando Xm Y J.lm (154).
1.1.3.2 Efecto de la velocidad del aire. EI incremento en la velocidad de flujo
de aire produce un importante efecto sobre la produccion de biomasa. EI
funcionamiento de FMS mejora a altas velocidades de flujo de aire, pero e\
contenido de biomasa no alcanza mejores niveles debidos a la reduccion de la
humedad que ocasiona estas altas velocidades de flujo de aire, sin contar
ademas que no se han considerado los efectos sobre los factores fisiol6gicos
de los cultivos, 10 cual puede ocasionar que no se alcancen mejores niveles en
el contenido de biomasa (155),
26
La figura 2 muestra el efecto de la velocidad del aire sobre la temperatura y la
concentraci6n de biomasa, en diferentes puntos del biorreactor, los cuales se
muestran en la figura 1. Esto con base en resultados obtenidos por
Sangsurasak, 1995.
120
OJ
315
90 o
60 3
........ 310 c
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;1:"'
'.0
310 30
0 20 40 60800 20 40 6080
Time (h)
Figura 2. Efecto de la velocidad superficial del aire sobre el perfil de temperatura y la

concentraci6n de biomasa, en diferentes posiciones del biorreactor......... v= 0.5
mIs, - - v= 0.3 mIs, v= 0.1 m/s.
(Tornado de Sangsurasak, 1995, 202).
1.1.3.3 Efecto del coeficiente convectivo de transferencia de calor. Aunque no
fue una variable en el trabajo, es bueno decir que el aumento en el coeficiente
de transferencia de calor total, tambim aumenta la producci6n de biomasa,
siendo una buena forma de controlar el proceso combinado con el flujo de aire
saturado. Este resultado puede ser err6neo ya que el contenido de humedad
aumenta rapidamente con el aumento en el coeficiente de transferencia de
calor, 10 que genera una disminuci6n en el concentraci6n de biomasa.
27
Incrementando el coeficiente de transferencia de calor hA, mas alia del Irmite
de convecci6n libre, no se percibe un mejoramiento en la producci6n total de
biomasa, aunque la aparici6n de fa maxima cantidad de biomasa seca ocurre
en un muy corto tiempo'.
EI coeficiente hA en realidad no puede usarse como el coeficiente de
transferencia de calor total, ya que no incluye la resistencia a la transferencia
de calor del s61ido fermentado (156).
1.1.4 Transferencia de calor en biorreactores de lecho empacado. Sangsurasak
y Mitchell, (1998,739), validaron un modelo que describe la transferencia de
calor en dos dimensiones para el crecimiento de Aspergillus niger durante la
fermentaci6n de sustrato s6lido en biorreactores de columna, el cual describe
los gradientes de temperatura radial y axial.
Los fen6menos de transporte, como la transferencia de calor, se ven altamente
influenciados tanto por . las caracterfsticas del sustrato como del
microorganismo, p~r ejemplo la densidad del empaque, la velocidad maxima
especffica de crecimiento y la maxima concentraci6n de biomasa (Stuart,
1998,383). las cuales se tend ran en cuenta como facto res muy importantes de
estudio. Los resultados obtenidos p~r Sangsucasak and Mitchell se pueden
aplicar al crecimiento de otro tipo de hongos (742),
Los fen6menos de transferencia de gas no son muy importantes en estos
28
sistemas, ya que st la aireacion satisface los requerimientos de enfriamiento,
tambitm lograra suplir efectivamente la necesidad del medio de oxigeno y a su
vez de remover el dioxido de carbono el cual es indeseable como se explico
previamente (Ramirez, 4).
Por el contrario, la transferencia de masa no gaseosa sf es muy importante en
el sistema, ya que los efectos de evaporacion que pueden ocurrir durante la
fermentacion podrian disminuir la actividad del agua en el sustrato y limitar el
crecimiento, aunque segun Sangsurask and Mitchell (1995, 199), el crecimiento
es limitado principal mente p~r las altas temperaturas mas que por la no
disponibilidad de agua; por eso se recomienda ignorar este efecto.
Sangsurasak and Mitchell, proponen dos estrategias que ayudan a abolir las
limitaciones del crecimiento por baja cantidad de agua disponible; primero,
preparando el sustrato con un alto contenido inicial de agua para que'los
cambios en asta no sean muy notorios y segundo, reaprovisionando hasta
donde sea posible el agua dentro del sustrato; tambiEm hay que tener en cuenta
que el cambio en peso del solido seco es despreciable (203).
Segun Van Lier se recomienda una altura del sustrato de 0.4 - 1.2 m en
sistemas con aireacion forzada. Se debe tratar de lograr el flujo de aire
solamente en direcci6n axial con velocidad constante (Sangsurasak, 1998,
740).
29
EI efecto de las altas temperaturas sobre el crecimiento no es claro; segun
Saucedo-Castaneda, la rata especifica de crecimiento ~, permanece
aproximadamente constante con incrementos en la temperatura si el
crecimiento comienza en el valor de la temperatura 6ptima de crecimiento
(746).
En la figura 3 se muestran los perfiles de temperatura como una funcion del
tiempo y de la posici6n, la cual se referencia en la figura 1. Esta simulaci6n
predice que la temperatura de la columna sube inicialmente y continua con un
decremento. En esta figura se observa tambilm que durante la fermentaci6n, el
gradiente de temperatura axial esta establecido, pero el gradiente de
temperatura radial es insignificante, 10 que indica que la transferencia de calor
convectivo domina sobre la conducci6n radial.
Ya que la convecci6n es el mecanismo que domina la transferencia de calor en
el biorreactor, la velocidad del aire debe tener gran influencia sobre los perfiles
de temperatura. La temperatura maxima lograda y por consiguiente el alto
gradiente de temperatura se debe incrementar con el decremento de la
velocidad del aire (747).
30
.320 lOll
315
-':::.C
.........
.u
'-
310
320 7 8
....0
:3
315
'
v
a... 310
E
0>
E
320 4 5
315
J I ()
o 20 4.0 60 80 20 40 60 80
Time (h)
Figura 3. Simulaci6n de perfiles de temperatura en direcci6n radial yaxial (Ver Figura 1).
(Tornado de Sangsurasak. 1995,202).
Ghidyal et ai, obtuvieron resultados que concordaron can el modelo. En
particular, cuando el lecho fue aireado a 30C, la maxima temperatura
alcanzable en el media de la columna fue 52C can una velocidad de aireaci6n
de 5 Llmin, pero solo de 36C can una velocidad de aireacion de 25 Llmin
(747).
1.1.4.1 Efecto de la relacion altura I diametro (HID). Un cambia en la relacion
HID del lecho empacado afectara eJ area superficial disponible para la
transferencia conductiva de calor; par ella la relacion HID es importante como
parametro de diselio del biorreactor. EI modelo predice que los gradientes de
temperatura son mas altos can el incremento de la relaci6n HID (Sangsurasak,
1995,202).
31
En la practica, la relaci6n HID 6ptima dependera de c6mo la velocidad de flujo
de aire es cambiada con una modificaci6n en la geometria, 0 c6mo esta afecta
la transferencia convectiva de calor.
La figura 4 muestra como se afectan los perfiles de temperatura y
concentraci6n de biomasa con variaciones en la relaci6n HID, en diferentes
posiciones del biorreactor, como se muestra en la figura 1.
320 . 120
CJ
90 o
315 3
60
310 1 .30
o
I.~
til
n
o
120 g
<lI
::l
~
~
o
o 20 'lO 60 BOO 20 40 60 80
iim~ (h)
Figura 4. Efecto de la raz6n HID sobre et perfil de temperatura y ta concentraci6n de

biomasa, en diferentes posiciones del biorreactor (Ver Figura. 1)......... HID= 0.5,
- - - HID= 1.5. __ H/D= 3.0.
(Tornado de Sangsurasak. 1995.203).
1.1.4.2 Efecto de la temperatura del aire a la entrada. La temperatura del aire
a la entrada es facilmente controlada y puede afectar significativamente la
temperatura en el interior del lecho (203).
32
La temperatura optima del aire sera aquella que simultaneamente minimice el
sobreenfriamiento en el fondo dellecho; ademas, a medida que la fermentaci6n
progrese y la energfa metab61ica generada se incrementa, la temperatura del
aire debera disminuir.
La figura 5 muestra el comportamiento de la temperatura y la concentraci6n de
esporas con variaciones en la temperatura de entrada del aire, en diferentes
posiciones del biorreactor, como se muestra en la figura 1.
Time (11)
Figura 5. Efecto de la temperatura del aire que entra sobre el perfil de temperatura y la
concentraci6n de biomasa, en diferentes posiciones del biorreactor (Ver Figura. 1).
........ 310 K, - - 305 K, __ 298 K.
(Tornado de Sangsurasak, 1995. 203).
A continuaci6n se comentan algunas propiedades ffsicas tanto del sustrato
como de los microorganismos y se estudia su efecto sobre otros tip os de
33
variables (Sangsurasak, 1998,746).
1.1.4.3 Densidad del sustrato en el lecho. Tanto la geometria como la
densidad del sustrato, pueden limitar el crecimiento de los hongos (Molin, 1993,
385). Una disminuci6n en la fracci6n de vacio afecta significativamente la
predicci6n del modelo presentado por Sangsurasak, 1998, ya que el aumento
de temperatura p~r unidad de volumen aumenta. La disminuci6n severa de los
problemas de sobrecalentamiento con bajas densidades de sustrato, sugiere
que ese problema se podrfa minimizar con la utilizaci6n del sustrato con un
material inerte, p~r ejemplo materiales celul6sicos como el bagazo, pero con
esto se disminuye la productividad de la fermentaci6n.
1.1.4.4 Velocidad especifica de crecimiento (f.1g). Este es un parametro
cinetico clave p~r estar directamente asociado al crecimiento. En la FMS
puede variar en un amplio intervalo; el perfil de temperatura es muy sensible a
la velocidad especifica de crecimiento (Sangsurasak, 1998,746).
Durante la primera etapa de crecimiento, el modelo predice una aceleraci6n en
el crecimiento, pero este tiende a seguir con decrecimiento cuando supera la
temperatura 6ptima de crecimiento.
1.1.4.5 Maxima densidad de biomasa. Segun el modelo, la maxima velocidad
de crecimiento ocurre cuando la densidad de biomasa es igual a la mitad de la
maxima densidad. Tanto la velocidad de crecimiento como el aumento de
34
temperatura en el sistema, se incrementan con el aumento en la maxima
densidad de biomasa, la cual a su vez tambie!n incrementa la maxima
temperatura alcanzada (746). Las altas densidades de inoculo pueden afectar
adversamente el crecimiento.
En conclusi6n, los problemas de sobrecalentamiento en biorreactores de lecho
empacado, no estan solamente afectados por variables de operaci6n, sino
tambiem por las propiedades del microorganismo y del sustrato, especial mente
aquellas que afectan la temperatura del sistema como la densidad del lecho
(sustrato), la velocidad especifica de crecimiento y la maxima concentraci6n de
biomasa (748). En la FIgura 6 se muestran los efectos tanto de la rata
especffica de crecimiento, como de la maxima densidad de biomasa, sobre la
temperatura.
Tiempo (horas)
o 10 20 3D 40 SO EO 0 10 20 30 40 50 60
P..L._ _ _ ' - - - '_ _ _ _,
1 I 1 1 I I
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I
'>L ~305 I
1
Figura 6. (a) Efecto de velocidad especifica de crecimienta (119 en h ) sabre el perfil de
temperatura.
(b) Efecto de la maxima densidad de biomasa (Xm en Kg I Kg de sustrato) sabre el
perfil de temperatura. (Tomada de Sangsurasak, 1998, 746).
35
1.1 HONGOS ENTOMOPAT6GENOS
1.2.1 Generalidades. Son organismos que se utilizan para el control biologico
de plagas y enfermedades en diferentes cultivos. Entre los principales se
encuentran los gemeros Beauveria y Mefarhizium (Perez, 1997,20).
Estos hogos, tambien lIamados Micoinsecticidas, son potencialmente muy
buenos en aspectos de seguridad humana y ambiental; no obstante, muchas
de las fallas provienen de investigacion basica inadecuada en la mayoria de los
aspectos, desde la seleccion del patogeno hasta la aplicacion en campo
(Marin, 1999, 159). Se debe destacar que el hongo Beauveria bassiana no es
un veneno, ni un contaminante; solo ataca insectos y no ataca a las plantas ni
a los animales vertebrados (Cenicafe, 1993,1).
Las propiedades que presentan los hongos entomopatogenos, que los
constituyen como una alternativa de uso masivo son (Feng, 1993, 5):
Alto poder patogeno yalta estabilidad.
Conservacion de la virulencia en la propagacion, antes de la dispersion del
inoculo en el campo.
La especificidad, definida como el conjunto de adaptaciones redprocas entre
microorganismo patogeno y sus hospederos, en relacion con las condiciones
del medio en las cuales se encuentran.
Inocuidad para insectos parasitos, depredadores, peces y mamiferos.
36
1.2.2 Requerimientos de uso. La utilizacion exitosa de este tipo de
microorganismos en el control biologico de plagas y enferrnedades, depende
de diferentes aspectos tales como (5):
Biologia y caracteristicas conocidas del insecto huesped y del
microorganismo parasito.
Habitat apropiado y comun de ambos.
Alta densidad de poblacion delinsecto para que actUe el entomopatogeno,
ya que las enfermedades son un factor de mortalidad de tipo densidad
dependiente.
EI entomopatogeno debe ser especifico, permanente, patogenico e inocuo al
ambiente ( biodegradable) y ademas debe ser economicamente rentable en
su multiplicacion y conservacion.
1.2.3 Modo de accion de los hongos Entomopatogenos.
Los hongos Entomopat6genos pueden causar infeccion en cualquier estado
de desarrollo del insecto : huevos, larvas, ninfas y adultos (Cenicafe, 1).
Las esporas al entrar en contacto con la cutfcula del insecta inician el
proceso de germinacion el cual requiere de condiciones especrficas de
temperatura (20C - 30C) y humedad relativa de aproximadamente 90%,
penetrando por una combinacion de mecanismos qurmicos ( enzimas
extracelulares) y frsicos ( presion mecanica ) (1).
Durante la etapa de germinacion, producen enzimas que destruyen la pared
del exoesqueleto.
37
Luego que las hifas penetran, se reproducen vegetativamente hasta Henar
todo el interior del insecta y matarlo por dano mecanico, deficiencia
nutricional 0 por Iiberaci6n de toxinas (Perez, 28).
1.3 PRINCIPALES CARACTERISTICAS DEL ENTOMOPAT6GENO
Beauveria bassiana
1.3.1 Caracteristicas del genero Beauveria.
Micelio blanco.
Conidi6foros sencillos.
Irregularmente agrupador 0 en grupos verticilados.
Son gruesos en la base y delgados en la porci6n que sosliene la conidia.
Conidias en forma de zig-zag despues de que varias conidias se producen.
(Bustillo, 1991,92).
Segun Kuno et al. 1982, las especies mas frecuentemente aisladas y

estudiadas son Beauveria bassiana (Balsamo) y Beauveria brongniartii, las
cuales se diferencian en que Beauveria bassiana presenta mas del 50% de las
conidias redondeadas, mientras que Beauveria brongniartii tiene alrededor del
98% de conidias ovoides. Otras especies encontradas son Beauveria ve/ata
en el Ecuador y Beauveria amorpha en el Brasil; ambos en cultivos de cacao
(92).
La forma de la espora, segun Mugnai et al. 1989, es la caracterlstica mas util
38
para distinguir entre especies, por 10 tanto la separacion de Beauveria en sus
especies, se basa en conceptos purarnente morfol6gicos como se muestra en
la figura 7 (92),
Segun Ferr6n, 1981, el estudio de la conidiogimesis ha demostrado ser
inadecuado para identificar razas; algunos autores han usado tecnicas
electroforeticas e inmunoelectroforeticas combinadas con actividad enzimatica
y tecnicas serol6gicas para tal fin (92).
A B
~
U.U
0000
OE) o Q
0000
c 010
Figura 7. Especies de Beauveria. A) Beauveria bassiana, a) conidi6foro, b) fialida, c) conidias;

B) Beauveria brongniartii, d) conidi6foro, e) fialida, f) conidias.
(Tornado de Bustillo, 1991, 93).
1.3.2 Hospederos. Se han registrado mas de 200 especies de insectos
hospederos para las diferentes especies de Beauveria. Beauveria bassiana se
ha encontrado en mas de 60 especies de insectos en el mundo. En Colombia
se han aislado mas de 30 especies pertenecientes la mayoria a Lepid6pteros y

Cole6pteros (92).
39
Es muy frecuente en cultivos de palma africana donde ataca diferentes
Lepid6pteros, en arroz atacando Spodoptera frugiperda, en cultivos de cacao
atacando Mona/onion dissinulatum, en maracuya ataca larvas de Agraulis juno,
edemas en lulo ataca Leptinotarsa undecimlineata y en plata no se encuentra
sobre Metamasius hemfpteros y Cosmopolites sordidus.
Hay que destacar los aislamientos que se han obtenido de este hongo en la
broca del cafe, Hypothenemus hampei. Los insectos afectados se caracterizan
por un crecimiento algodonoso blanco, como se muestra en la figura 8 (93).
Figura 8. Broca infectada con el hongo Beauveria bassiana.
(Tom ada de Mejia, 1999).
1.3.3 Modo de acci6n. Segun Ramoska 1984, la esporulaci6n de B. bassiana
en Blissus leucopterus, ocurre bajo humedades relativas del 75%,
incrementandose a medida que aumenta la humedad. Su patogenicidad y
habilidad para sobreponerse a los mecanismos de defensa de sus huespedes
se deben en gran parte a la producci6n de toxinas (97)"
40
Segun Miller et al 1983, el compuesto t6xico mas estudiado ha sido el
Beauvericin aislado de B. Bassiana, cuya f6rrnula quimica se muestra en la
figura 9. Esta toxina es t6xica a larvas de mosquito adulto de mosca casera,
crustaceos y bacterias; aparentemente es inocua a Lepid6pteros (97).
Figura 9. Estructura molecular de Beauvericin aislada de Beauveria bassiana.
(Tornado de Bustillo. 98)
En general la gerrninaci6n de las conidias de B. bassiana ocurre en un periodo
de 12 horas despues de la inoculaci6n. EI hongo penetra a traves del
integumento del insecto por acci6n mecanica y efectos enzi maticos , 10 cual
toma unas 12 horas. Despues de las 72 horas de la inoculaci6n el insecto esta
totalmente colonizado. Este tiempo varia con la especie atacada y las
condiciones ambientales, afectando as! tambien la efectividad del hongo,
Algunas condiciones de microclima como luz solar y actividad biol6gica de
otros organismos afectan la habilidad de B. bassiana para sobrevivir e iniciar
infecciones. Las condiciones ambientales mas favorables, segun Alves 1986,
son Ia-humedad relativa alta (>90%) y tel'1'lperatura entre 23 y 28C (98).
'-1
1.3.4 Uso. B. bassiana y B. brongniariii aplicada con dosis bajas de
irisecticidas quimicos, pueden actuar sinergrsticamente para causar mortalidad
en las poblaciones de insectos susceptibles, menciomidos anteriormente.
,I
Aunque el uso de este hongo en paises de Europa y China, entre otros, es
mucho mayor que en Colombia, aca se esta expandiendo de forma muy rapida,
siendo su principal aplicacion el control de la broca del cafe. Es importante
destacar que el hongo se aplica en el campo usando maquinas de aspersi6n
convencionales 0 aparatos nebulizadores motorizados (99).
1.3.5 Producci6n. Las especies de Beauveria, se desarrollan facilmente en
medios de cultivo como PDA y Sabouraud. Para el uso masivo se han utilizado
tecnicas de cultivo sumergido 0 fermentaci6n en bandejas, 0 una mezcla de
ambos. Ademas de forma tradicional se pueden utilizar las botel/as
(produccion en fincas). Todas las tecnicas de fermentacion en estado s6lido
son te6ricamente factibles para el desarrollo del hongo (99).
Muchos experimentos han mostrado que el hongo B. bassiana requiere de
condiciones esteriles, sin importar la forma de produccion, siendo los
contaminantes mas comunes las bacterias y otros hong os como los del genero
Aspergillus, los cuales se pueden desarrollar facilmente sobre los hongos
entomopatogenos (Samsinaka, 1966, 395).
1.3.6 Efecto sobre la broca del cafe. Diferentes hongos pueden atacar la broca
del cafe, Hipothenemus hampei; la cual se muestra en 'a figura 10, sin
42
embargo, el (mico hongo que se encuentra atacando la broca de forma natural
es B. bassiana.
Figura 10. Broca del cafe.
(Tom ada de Mejia, 1999).
Las evaluaciones del ataque del hongo ala broca hechas en diferentes parses,
muestran como resultado que en el 35% de esos paises causa mortalidad
minima del 50%. La broca es mas danina, bajo condiciones humedas, que son
precisamente las condiciones bajo las cuales B. bassiana es mas efectivo; sin
embargo, se desconocen muchos aspectos basicos sobre el manejo del hongo,
como la determinaci6n de las razas mas virulentas contra la broca, una
tecnologia facil y econ6mica para producirlo, diferentes fonnulaciones del
hongo e infonnaci6n sobre equipos y metodologras de aspersi6n en los
cafetales que garanticen un buen cubrimiento y penetraci6n del producto.
Ademas faltan evaluaciones en campos mas severos (Bustillo, 101).
43
2. MATERIALES Y METODOS
EI presente trabajo se realiz6 en el Laboratorio de Bioconversiones de la
Facultad de Ciencias de la Universidad Nacional de Colombia Sede MedelUn.
Las pruebas microbiol6gicas se realizaron en la Empresa Biocaribe S.A Para
el efecto se utilizaron diferentes equipos y materiales, de los cuales los mas
importantes se enumeran a continuaci6n.
Equipos:
Biorreactor de Lecho Empacado (Disenado por el autor).
Compresor de aire. Marca: Compresores limitada. Referencia: M8-3.
. Medidor de flujo de aire. Marca: Cole - Parmer Instrument Company.
Referencia: 03218-45. .
Filtro de aire. Marca: Gelman Sciences. Referencia: 12144.
Camara de flujo laminar. Fabricada por Fomento Industrial ALVEL.
Autoclave. Marca: All American. Referencia: 25X.
Camara de conteo Neubeauver. Marca: Precicolor HBG, Germany
Microscopio de Luz Binocular. Mrca: Olympus, Objetivo 40X.
Lampara de [uz Ultravioleta.
Term6metros. Rango: (-10 -110) C. Presici6n: 1C.
44
Materiales y Reactivos:
Cepa del hongo Beauveria bassiana (Biocaribe S.A)
Sustrato (Trigo entero)
Acido Lactico
Tween 80
Azul de Lactofenol
Agua esteril
Soluci6n de Hipoclorito de Sodio al 2.5%
Agar Saboureau
Harina de trigo, levadura y azllcar
Botellas de 375 ml y frascos de 400 ml boca ancha
2.1 LACEPA
EI proceso seguido por la empresa Biocaribe para reproducir la cepa del hong6
Beauveria bassiana, parte de tomar el insecto Franklinie//a oxidente/is (Trips) e
infectarlo con el hongo. Posteriormente, este insecta se lIeva a una caja ~e
petri con agar saboureau (dextrosa), donde se desarrolla el hongo.
Se utilizan botellas de 375 ml que contienen como sustrato harina de trigo,
levadura y azllcar, se esterilizan y posteriormente se inoculan con el hongo
tomado de la caja de petri como se observa en la figura 11. AI cabo de 15 dras,
manteniendo las botellas en cuartos frescos, la concentraci6r{ del hongo en la
botella, medida con ayuda de la camara de conteo NeJbeauver, es en
promedio de 5.0 x 1010 conidias I gramo.
45
Figura 11 . Cepa de hongo Beauveria bassiana.
( Foto Autor ).
2.2 SUSTRATO
Uno de los requisitos para trabajar fermentaci6n en estado s61ido en un
biorreactor de lecho empacado es utilizar un sustrato con una porosidad alta
para permitir la adecuada dispersi6n del aire en el medio y de esa forma evitar
que sectores del lecho no cuenten con el adecuado suministro de oxigeno, 10
cual repercutiria directamente, tanto en el desarrollo del hongo, como en los
problemas de sobrecalentamiento del hongo, ademas, de producir una alta
caida de presi6n en el medio. Por este motivo se utiliza como sustrato el trigo
entero, el cual cumple con los requerimientos nutricionales del hongo y con
requerimientos de operaci6n del biorreactor, ya que el tamano del grano
permite una adecuada dispersi6n del aire en el medio.
46
2.3 DESCRIPCI6N DEL BIORREACTOR DE LECHO EMPACAOO
EI biorreactor consta de varias partes: la primera es un cilindro elaborado en
acrflico como todas las demas partes, con una altura de 70 cm y un diametro
de 20 cm, este contiene el sustrato el cual, es soportado en la parte inferior por
una malta fabricada en acero inoxidable sostenida por un sistema de bridas que
une la parte cilindrica del biorreactor con la parte inferior (bano
termostatizado). Con el objeto de evitar fugas de aire 0 generar posibles
contaminaciones, se cuenta con empaques. de caucho entre la malla y las
bridas. EI cilindro cuenta con orificios provistos de empaques para evitar la
salida del aire y la posible contaminaci6n dellecho por el contacto con el medio
ambiente. Estos orificios localizados en diferentes posiciones, permiten la
medici6n de la temperatura tanto en forma radial como axial. Tambien se
cuenta con boquillas para la toma de muestras, localizadas en diferentes
posiciones del biorreactor. Para un mejor entendimiento observar la FIgura 12..
En la parte superior del cilindro, esta ubicada otra malla en acero inoxidable,
que sostiene una capa de algodon hidr6fobo. La tapa, la cual se une al cilindro
por un sistema de bridas de forma similar a las localizadas en la parte inferior,
cuenta con una tuberfa para la salida del aire y de. los gases generados en la
fermentaci6n.
EI bano termostatizado esta provisto con un sistema de refrigeracion que
cuenta con un compresor, un condensador, un ventilador y)uberra de cobre
que circula al interior del recipiente p~r la cual va a f1uir Ia sustancia refrigerante
47
'que sera la que entre en contacto con el agua que se quiere enfriar. Esto con
el fin de que el aire que se va a suministrar sea burbujeado a traves del agua
con el proposito de disminuir su temperatura a 18C aproximadamente, para
rnejorar las condiciones de desarrollo del hongo. Para mas detalles del
biorreactor, ver esquema en los Anexos A y B.
Ademas se utiliz6 un compresor, un filtro de aire y medidor de f1ujo (rota metro) ,
para suministrar, purificar y controlar el f1ujo de aire dentro dellecho.
Por ser el tamalio de la burbuja de aire un factor determinante para que se
adquieran las condiciones deseadas de temperatura y de humedad, se dispuso
de un difusor de aire, fabricado en vidrio y diseliado con cinco salidas para que
se logre mayor dispersion del aire en el agua. Cada una de estas salidas,
cuenta con un filtro poroso p~r el cual saldra la burbuja de aire a un tamal'io
definido p~r el tamano del poro y p~r la velocidad de salida ( ver Anexo A).'
48
Figura 12. Biorreactor de Lecho Empacado.

( Foto Autor).
2.4 PREPARACION DEL MEDIO PARA LA FERMENTACION
Se pesan 230 9 de trigo en frascos de vidrio de 400 ml de boca ancha, del
numero de frascos utilizados depende la altura del lecho en el biorreactor. A
cada frasco se Ie agregan 150 ml de agua con un contenido previo de 1 ml de
acido lactico par cada 1000 ml de agua, con el objeto de evitar contaminaci6n
par bacterias.
Se utilizan balsas de plastico de alta densidad para envolver cada frasco, los
cuales son lIevades al autoclave para esterilizar el trigo por un tiempo de 25
minutos. Posteriormente se procede a trasladar cada frasco a la camara de
flujo laminar, preferiblemente caliente para evitar contaminaciones. Luego de
49
que el trigo se halla enfriado se procede a retirar los frascos vaciando el
contenido de trigo en la bolsa que envolvia dicho frasco, todo al interior de la
camara.
2.5 INOCULACION DEL MEDIO
La inoculaci6n se hace dentro de la camara de f1ujo laminar, para 10 cual se
emplean dos botellas de 375 ml que contienen la cepa del hongo, siendo la
concentraci6n del in6culo dependiente del numero de frascos que contienen el
trigo.
Cada botella de cepa se diluye con 150 ml de agua esteril y se agita para
garantizar una buena diluci6n del hongo. Posteriormente se agregan
cantidades iguales de esta soluci6n a cada bolsa con trigo y se mezcla bien. EI
trigo inoculado se lIeva rap idamente y con la bolsa sellada al biorreactor,
previa mente esterilizado, donde se descarga cuidadosamente para evitar
contaminaciones.
2.6 ESTERILIZACION DEL BIORREACTOR
Se procede inicialmente a lavarlo con detergente y desinfectarlo
introduciemdolo en una soluci6n de hipoclorito de sodio al 2.5 % por un periodo
de una hora aproximadamente. Posteriormente se somete a la ~ ultravioleta

par un periodo de una h~ra.
t~~
50
2.7 METOOO PARA DETERMINAR LA CONCENTRACI6N DE ESPORAS
La concentracion de esporas fue la base parael seguimiento del desarrollo del
hongo y por tanto se determino SU valor periodicamente durante el tiempo que
duro. la fermentacion (12 dras aproximadamente), la concentracion se
determino cada 2 dias.
Conteo en camara de Neubeauver - Metodo para evaluar la concentracion
de esporas (Biocaribe, 1999, 80):
Preparacion de solucion (agua + Tween) esteril :
Mezclar 999 ml de agua + 1 ml de Tween 80.
Verter la solucion en botella de vidrio de 375 ml.
Tapar las bote lias con una tapa plastica negra (resistente a alta temperatura).
Introducir las botellas en forma vertical en el autoclave.
Esterilizar a 121 0 C Y 15 Ib de presion por 30 minutos.
Preparacion de solucion madre:
Pesar 0,5 gramos del producto del hongo a evaluar.
Mezclar con 100 ml de so lucian de agua esteril.
Solucion para conteo:
Se toma 1 ml de la solucion madre y se completa el volumen a 100 ml.
Se Ie adicionan 5 gotas de azul de lactofenol con el objeto de colorear las
esporas y poder contarlas facilmente.
51
De esta nueva solucian se toman alfcuotas para leer en la camara de
Neubeauver.
Conteo en Camara de Neubeauver: .
Con la aHcuota se IIenan las dos camaras de conteo limpiando el excedente de
. so lucian.
Realizar el conteo en la cuadrfcula central de la siguiente forma:
a. Contar la cantidad de esporas en cinco cuadros del area central. de las dos
camaras (Esporas contenidas en X volumen)
b. Sacar el promedio del conteo de las dos camaras.
c. Hacer tres repeticiones del con teo .
Calculo de la cantidad de esporas I gramo:
Cantidad de esporas I gramo =(A * B * C) I D

Donde
A = Promedio Suma de esporas.

B =Factor de camara, si es en. 5 cuadros de la camara es 5x104, si es en 25
cuadros es 1x104.
C = Inverso de la disolucian.
D =gramos del hongo.
52
1;, l
III, ...
. ,
. ,. i
, ;
2.8 DISENO EXPERIMENTAL
Se trabaj6 con un diseiio factorial, donde se estudi6 el efecto de cuatro
factores: altura del lecho, f1ujo de aire, posici6n en et biorreactor y tiempo de
fermentaci6n, sobre las variables - respuesta, concentraci6n de esporas y
temperatura, analizando la evoluci6n de la fermentaci6n, y por ende, el
desarrollo del hongo dentro del biorreactor. Es importante notar que los
comportamientos en el biorreactor se han descrito con base en la relaci6n
altura I diametro que es 10 que interesa cuando se piensa en el escalado, pero
en vista de que para este trabajo el diametro permanece constante, el analisis
es igual cuando se hace con base solo en la altura dellecho. En la Tabla 1 se
muestran los niveles ensayados para cada uno de los factores analizados.
Tabla 1. DefiniciOn deniveles para cada variable de operaci6n
FACTOR No. NIVELES VALORES UNIDADES
Altura dellecho 3 13,17,23 Centimetros

Flujo de aire 3 3.7, 7.9, 12.3 Litros I minuto
Posici6n 4 1,2,3,4
Tiempo 12 1-12 Dias
/
Los niveles para las variables altura del lecho y f1ujo de aire fueron
seleccionados tanto por recomendaciones. de trabajos realizados
previamente para otro tipo de microorganismos, como por algunos ensayos
previos al diseno de experimentos que marcaron tendencia sobre
comportamientos ( Sargantanis, 149).
53
,F"""
);> Los niveles para la variable posici6n estan definidos como muestra la tabla
2 Y la figura 13.
Tabla 2. Definici6n de cada nivel para la variable posici6n.
Nivel
Distancia axial (desde la
Distancia radial (desde la
base del cilindro) en cm.

pared del cilindro) en cm.
1
16
10
2
16
6
3
6
10
4
6
6
10 em

1 2
16 em
t--I
Gem
Flgura13. Ubleacl6n de las posiciones trabajadas
en .el blorreactor de lecho empacado.
);> Con base en la tabla 2 y la figura 13, se debe observar que tanto el nivel 1
como el 2, estan referidos a una distancia axial de 16 em; por 10 tanto,
existen limitaciones en la medici6n de la variable posiciOn ,con relaciOn a la
altura trabajada del lecho, 10 eual no sucede con los niveles 3 y 4. Se
observa claramente que en los ensayos cuya altura del lecho sea de 13
54
cm, no se podra contar con los niveles 1 y 2 de la variable posicion, por
estar estos a una altura superior a la maxima altura dellecho. Ademas, en
los ensayos cuya altura del lecho sea de 17 cm, es complicado tener los
dos niveles 1 y 2 de posici6n, por 10 que en esos ensayos, se hizo la
medici6n de dicha variable solo para el nivel 1, ademas del 3 y 4 que no
tienen ninguna limitacion. Para los ensayos cuya altura fue de 23 cm, no
existe limitacion alguna sobre la variable posicion.
)- EI tiempo maximo de fermentacion se ha definido en 12 dras, ya que es el
tiempo promedio que tarda el hongo Beauveria bassiana en germinar y
esporular utilizando los metodos tradicionales de produccion.
EI numero total de experimentos fue definido por la totalidad de las
combinaciones entre los niveles de dos factores: altura del lecho y f1ujo de aire
como muestra la tabla 3. Para cada uno de los experimentos, se hizo la
medici6n de las variables - respuesta bajo los distintos niveles de los factores
posicion en el biorreactor y de tiempo de fermentacion
Tabla 3. Combinaci6n entre los niveles de los dos factores. que definen el numero de
experimentos.
FLUJO DE ALTURA DEL LECHO (cm)

AIRE (Umin) 13 17 . 23
3.7 X X X
7.9 X X X
12.3 X X X
55
3. RESULTADOS
3.1 VARIABLE RESPUESTA TEMPERATURA
Graficamente se muestra la temperatura en funcion del tiempo, evaluando cada
combinacion de altura dellecho, flujo de aire y la posici6n (recordar que el nivel
permitido de posiciOn depende de la altura dellecho).
Las evaluaciones se hacen de forma independiente para cada posicion en el
biorreactor. En todas las figuras solo se tiene el parametro de altura del lecho,
siendo el flujo de aire constante para cad a grafica, pero variable entre las
diferentes graficas, permitiendo asi en una misma grafica observar solo el
efecto de la altura dellecho sobre la temperatura y evaluar el efecto del flujo de
aire al hacer las comparaciones entre las diferentes graficas.
> Evaluaci6n de la altura dellecho y el flujo de aire sobre la temperatura en la

Posici6n 1.
En las figuras 14 a 16 se grafica el comportamiento de la temperatura a
diferentes alturas dellecho en la posiciOn 1 del biorreactor, evall:'ando el efecto
del flujo de aire entre las diferentes graficas.
56
Figura 14. Temperatura del lecho a diferenles
alturas, manteniendo el flujo = 3,7 Umin y
posici6n 1.
40
38
_ altura =17cm
u 36
_ 34
; 32
.......... altura =23cm
!30
8. 28
~ 26
t- 24
22
20 +---~----r---~---+----+---~--~
o 2 4 6 8 10 12 14
Tiempo, dlas
Figura 15. Temperatura dellecho a diferentes

alturas, manteniendo el flujo 7.9 Umin y =
posici6n 1.
36
34
~ 32 -...- allu'a = 17em
I! 30
~
! 28
-+- aItu"a = 23cm
8.
E
26
~ 24
22
20
0 2 4 6 8 10 12 14
Tiempo, dlas
57

=
alturas, manteniendo eI flujo 12.3 Um!n y
posici6n 1.
34
32
_ altura = 17cm
~30
~ 28 .-.-aItura = 23cm
l!
8,26
~
I
24
22
~ -.~--~~~~---+---+---+--~
o 2 4 6 8 10 12 14
TIempo, dlas
En estas graficas se observa clara mente que mientras mayor es la altura del
lecho es mas alta la temperatura, excepto un comportamiento diferente al inicio
de la fermentaci6n cuando se trabaja con un flujo de 12.3 L I min. Se observa
ademas el promedio de la temperatura disminuye al aumentar el flujo de aire.
En todas las graficas se observan tendencias diferentes en ,las curvas de
temperatura.
~ Evaluaci6n del flujo de aire sobre la temperatura, en la Posici6n 2, y para
una altura del lecho de 23 cm.
En las figuras 17 a 19 se grafica el comportamiento de la temperatura en la
posiei6n 2, solamente a una altura de 23 em, por las limitaeiones existentes en
el montaje como se explico previamente. Se presenta ademas el
comportamiento de la temperatura al variar ei flujo de aire.
58
Figura 17. Temperatura dellecho, manteniendo
flujo = 3,7 Umin y poslcl6n 2, a una
altura detenninada.
40
38
36
P34
:!:::I 32
f30
8, 28
i
I
26
24
22
-
20
0 2 4 6 8 10 12
14
Tlempo. dlas
=
flujo 7,9 Umin y poslci6n 2, a una
altura detennlnada.
34
32
P 30
~ 28
I!
8,26
i24
I
22
20
0 2 4 6 8 10 12 14
Tlempo. dlas
59
=
fluJo 12,3 Urnin y posici6n 2, a una
altura determlnada.
34
32
p30
ri
~ 28
f
!. 26
E
~ 24
22
20
0 2 4 6 8 10 12 14
Tiempo, diu
En las graficas se puede observar que el promedio de la temperatura,
disminuye a medida que aumenta el flujo de aire. EI comportamiento de las
curvas de temperatura siguen siendo muy diferentes entre las graficas.
~ Evaluaci6n de la altura del lecho y el flujo de aire sobre Ia temperatura en la .
Posici6n 3.
diferentes alturas de lecho en la posici6n 3 de biorreactor, evaluando tambilm
el efecto del flujo de aire entre las figuras.
60
=
alturas, manteniendo f1ujo 3,7 Umin y posicion 3.
38
36
34
~ arura = 13cm
u 32
I!
~30 _ arura = 17em
I!
&. 28 - . - altura = 23cm
E
~26
24
22
20 1 - - 1 - - - + - - -1 '- -\1 - - 1
o 2 4 6 8 10 12 14
Tlempo, dlas

alturas, manteniendo f1ujo = 7.9 Umin y
posicion 3.
36
34
u 32 ~ altlxa = 13cm
0.,; 30
______altura = 17em
.
~
i
28
26 -+--altlxa =23em
~ 24
I 22
20
18
o 2 4 6 8 10 12 14
Tiempo, dlas
61

=
alturas, manteniendo flujo 12.3 Umin y posicion
3.
38
36
34
-+- altura = 13cm
u _ altura =17cm
o.32
f
~30 - . - altura =23cm
&28
i
I
26
24
22
20 +---+---+---+---r-~r-~--~
o 2 4 6 8 10 12 14
Tlempo, dies
Con respecto a la altura dellecho en la figura 20 se observa que el promedio
de temperatura aumenta cuando se aumenta la altura del lecho, mientras que
en la FIgura 22 se observa una tendencia inversa, ya que a menor altura de
lecho se presenta una mayor temperatura promedio. Con respecto al flujo de
aire graficamente no se observa una tendencia clara entre las graficas, por 10
que el analisis es basado solo con la parte estadistica.
~ Evaluaci6n de la altura dellecho y el flujo de aire sobre la temperatura en la
Posici6n 4.
diferentes alturas de lecho en la posici6n 4 del biorreactor, evaluando tambiem
el efecto del flujo de aire entre las diferentes graficas.
62
Figura 23. Temperatura del lecho a diferentes
alturas, manteniendo f1ujo = 3.7 Umin y posicion 4
36
34
-+- altura = 13cm

32
~ _ altura = 17em
f'30
f= 28
-A- altura = 23cm
~26
I 24
22
20
0 2 4 6 8
10 12 14
TIempo, dlas

=
alturas, manteniendo f1ujo 7.9 Umin y posicion 4.
34
32
~ 30
-:-+- altura = 13cm
ti
,a 28
- 4 -altura = 17em
..
8,26 -A- altura = 23cm

E

I 24
22
20
0 2 4 6 8 10 12 14
~.
-
Tlempo, dills
63

alturas, manteniendo fluJo = 12.3 Umin y
posicion 4.
38
36 -+-atura = 13cm
u 34 ___ atura = 17em
320
f
.=30 - ' -altura = 23cm
i 28
~ 26
... 24
22
20 ~~~~---+---r--~--4--- 1
0 2 4 6 8 10 12 14
Tlempo, dlas
Igual que en la posicion 3, los comportamientos de la temperatura con la altura
dellecho no son constantes ya que en la figura 23 se sigue la tendencia normal
que es a mayor altura de lecho, mayor es la temperatura promedio,
comportamiento que cambia en la FIgura 25 donde se invierte siendo mayor la
temperatura promedio a menor altura de lecho. Con respecto al flujo de aire
tampoco se observa una tendencia clara entre las graficas, por tal motivo su
analisis se basa solo con ayuda de la parte estadistica.
3.2. VARIABLE RESPUESTA CONCENTRACI6N DE ESPORAS
La evaluaci6n de la concentracion de esporas como conidias I gramo, se hizo
cada dos dias aproximadamente. Los resultados se muestran en funcion del
tiempo y para cada combinaci6n de altura del lecho, flujo de aire y posici6n,
recordando la limitaci6n con los niveles de este ultimo factor.
64
Las evaluaciones se hicieron de igual forma que para la variable respuesta
temperatura, evaluando la posici6n en el biorreactor de forma independiehte.
En cada figura se toma solo el parametro altura dellecho, siendo el flujo de aire
constante para cada grafica pero variable entre las diferentes graficas,
permitiendo evaluar en una misma FIgura solo el efecto de la altura del lecho
sobre la temperatura y poder evaluar el efecto del flujo de aire haciendo
comparaci6n entre las diferentes graficas.
~ Evaluaci6n de la altura dellecho y el flujo de aire sobre la concentraci6n de
conidias en la Posici6n '1.
En las figuras 26 a 28 se grafica la concentraci6n de conidias a diferentes
alturas dellecho en la posici6n 1 del biorreactor, y de igual manera se evalua el
efecto del flujo de aire entre las diferentes figuras.
Figura 26. Concentraci6n de esporas a dlferentes

=
alturas, manteniendo f1ujo 3.7 Umin y posici6n 1.
6,10E+OO
~ 5,10E+OO
o
u
{ 4,10E+OO
. atura=17cm
I 3,10E+OO altura = 23cm
'
0 2,1OE+OO
U
1,10E+OO
1,00E+07 .j..!h~-+-~"-t-----II!"'-t-----I!oI-+-~
o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
TIempo, dlas
65
Figura 27. Concentraci6n de esporas a diferentes

=
alturas, rnantenlendo flujo 7.9 Urnln y posici6n 1.
1,01 E-+<l9
9,10E+08
'8
CD
8,10E+08
~
~
7,10E+08
6,10E+08
1___ . 17=1
o citura = 23crn
: ,5,10E+08
4,10E+08
".> 3,10E+08
~ 2,10E+08
1,10E+08
1,OOE+{)7 lib , ., ,I . , 0,
o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tlempo, dlas

alturas, rnantenlendo flujo = 12.3 Urnln y
posici6n 1.
4,01E-+<l9
~ 3,51E+<l9
8 3,01E+<l9
l 2,51E-+<l9
: 2,01 E+<l9 . altura =23cm
-3 1,51E+<l9
8
~ 1,01E+<l9
5,10E+08
,I I
1,DOE+{)7 -J-+-r---t~---+'"'"t--'fA-+
I . . I.I"'!&-
' +---1
o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
TIempo, dlas
Se observa que la mayor concentraci6n de conidias se obtiene cuando se
trabaja con una altura de lecho menor, aunque cuando se trabaja a un f1ujo de
3,7 Umin, el mayor valor de concentraci6n se obtiene para una altura de lecho
mayor, aunque esta concentraci6n cae bruscamente a los dos dias. Con
66
respecto al flujo de aire el mayor valor de concentraci6n se obtiene a flujos de
aire mayores, pero el desarrollo del hongo tarda mas tiempo, mientras que con
menores flujos de aire de todas formas se logr6 una buena concentraci6n pero
en un men or tiempo de fermentaci6n.
~ Evaluaci6n del flujo de aire sobre la concentraci6n de esporas en la
Posici6n 2, Y para una altura del lecho de 23 cm.
En las figuras 29 a 31 se grafica la concentraci6n de conidias en la posici6n 2
del biorreactor, solamente a una altura de lecho de 23 cm, por las limitaciones
en el montaje que ya se conocen. Se evalua ademas el efecto del flujo de aire
entre las diferentes graficas.
Figura 29. Concentracion de esporas, manteniendo
flujo = 3,7 Umin y posicion 2, a una
altura detenninada.
6,10E+08
~ 5,10E+08
! 4,10E+08 . I altura = 23cm I

iIII
3,10E+08
'0 2,10E+08
U
~ 1,10E+08
1,OOE+07 .j.IrI-+---I-..........l......t~--..II!--...,t-----"~+----1
o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tlempo, dl..
67
Figura 30. Concentracl6n de esporas, manteniendo

flujo = 7.9 Umin y posici6n 2, a una altura
detennlnada,
7,OOE+07
~ 6,OOE+07
5u
,,; 5,QOE-+{)7
I!!
o
~ 4,QOE+07
I_attn = 23cm I
II
~ 3,QOE-+{)7

.;
c
<3 2,00E+07
1 ,OOE+07 .j.L..-+-~-+---1--'f!-+---+-""""-+----4
o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo, dlas
Figura 31. Concentracion de esporas, manteniendo
=
flujo 12.3 Umin y posici6n 2, a una
altura detenninada.
1,90E+08
CD 1,70E+08 .
gu 1.5OE+08
,,; 1,30E+08
~ 1.10E+08
CI.
1-.. . -
..... a
= 23cm I
:= 9,OOE-+{)7
~ 7,00E+07
.;
5 5.00E+07 n
(.) 3,00E-+{)7 ~ 1I
1.00E-+{)7 +-+----+--+-. . .-+--+-....-I--I
o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo, dills
EI comportamiento mas favorable corresponde a un flujo de aire alto, 12.3
Umin, ya que la concentraci6n de conidias siempre esta en crecimiento,
aunque el mayor valor de concentraci6n se logra con un flujo de aire bajo,
68
3.7 Umin, que como en la ,",osici6n 1, se logra en menor tiempo pero cae a los
. dos dias posteriores.
~ Evaluaci6n de la altura dellecho y el f1ujo de aire sobre la concentraci6n
de esporas en la Posici6n 3.
al.turas dellecho en la posici6n 3 del biorreactor. Se evalua ademas el efecto
del f1ujo de aire entre las diferentes figuras.

alturaS, manteniendo flujo = 3.7 Umin y posicion 3.
CII 4,50E+08
1 4,OOE+08
i 3,5OE+08 atura = 13cm
~ 3,OOE+08
. aItura=17cm
I 25OE+08
-3 ' altura = nan
= 2,OOE+08
~ 1,50E+08
~ 1,OOE+08
83 5,OOE+07
u 2,OOE+01 .f--II!iIL+-+-~~----'~"""'t--II!'
o 1 234 5 6 7 8 9 1
Tlempo, dlas
69
Figura 33. Concentracion de esporas a diferentes

alturas, rnanteniendo flujo = 7.9 Urnin y
posicion 3.
9,OOE-+OO
r:. 8,OOE-+OO
. ~ 7,OOE-+OO
Ii 6,OOE-+OO altura = 13cm
i 5,OOE-+OO
altura = 17em
I 4,OOE-+OO
-8 3,OOE-+OO altura =23cm
~ 2,OOE-+OO
o 1,OOE-+OO
O,OOE+OO ~It--t--ll""'-+-,I.ja--+-A-;&I""""'-'-'
o 1 2 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo. dlaa
Figura 34. Concentracion de esporas a diferenles

alturas, rnanteniendo flujo. 12,3 Urnin y
posicion 3.
1,61E+OO
~ 1,41E+09
altura = 13cm
B 1,21E+09
Ii
C 1,01E+{)9
t 8,10E+08 altura = 23cm
-! 6,1OE-+OO
~ 4,10E+08
o 2,10E+08
1,OOE+07 .,......+--~~---'~---'"-~
.. ~
o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
TIempo. diu
Se observa que la altura de 17 em es mas favorable por obtener un desarrollo
de conidias mayor en un menor tiempo. Si se analiza solo con respecto a esta
altura se observa un buen desarrollo en menor tiempo a un flujo de aire menor,
pero el mayor desarrollo se obtiene a flujos mayores pero gastando mas tiempo
70
para ello. Inexplicadamente la altura de 23 cm es favorable al trabajar con
flujos menores, pero algo 16gico es que la menor altura de lecho es favorable a
f1ujos de aire rnenores.
~ Evaluacion de la altura del lecho y el f1ujo de aire sobre la concentracion de
esporas en la Posicion 4.
alturas de lecho en la posici6n 4 del biorreactor. Se evalua ademas el efecto
del f1ujo de aire entre las diferentes figuras.

aHuras, manteniendo f1ujo 3.7 Umin y =
posici6n 4.
4,5OE+08 .
01 4,OOE+{)8
g... 3,5OE+{)8 altura = 13cm
" 3,OOE+{)8
i 2,50E+{)8
:: 2,00E+08 altura =23cm
-8 1,50E+{)8
u
g 1,OOE+{)8 -
u 5,OOE+07
O,OOE+OO .,u....+---l~~~-'f'L~........+-"'I'
o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tlempo,dlaa
71
Figura 36. Concentraci6n de esporas a dlferantes

atturas, manteniendo fluJo = 7.9 Umln Y posicl6n 4.
9,10E+08
8,10E+08
CII
'8 7,10E+08 altura = 13cm
u
ri 6,10E+08
i 5,10E+08
. eIIura=17cm
altura = 23cm
I 4,10E+08

~ 3,10E+08
u
8
u 1,10E+08
2,10E+08
1,OOE+07
L
~~~L--+-----+,.-"-+~----+,........~~ll.....--.IIi
o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tiempo, dlaa
Figura 37. Concentraci6n de esporas a dlferentes

alturas, mantenlendo flujo 12.3 Umln y =
posicl6n 4.
1,61E+09
i 1,41E+09
altura 13cm
u 1,21E+09
I' 1,01E+09
~
I
810E+08
' altura = 23cm
-! 6,10E+08
g 4,10E+08
8 2,10E+08
I
1,OOE+07 ~'"-+--+~LJ-"'-""""~........--i.fL-I~
'. .
o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
TIampo, diu
EI comportamiento es muy similar al analisis de la posiei6n 3, donde se
eoneluye que es mas favorable una altura de lecho de 17 em, siendo de igual
manera el desarrollo del hongo mayor a rnenor tiempo de fermentaei6n euando
se trabaja con flujos de aire menores, pero euando el flujo de aire es mayor se
72
r
I
obtiene la mayor concentraci6n de conidias requiriendo eso si un mayor tiempo , i
i
de fermentaci6n. EI comportamiento cuando se trabaja con la altura de lecho
mayor, 23 cm, es exactamente el mismo, por 10 que se concluye que la
posici6n 3 Y 4 no difieren en su comportamiento con respecto a la
concentraci6n de conidias, de forma significativa.
73
-r ,p1'
i' i:
. : I.
i" i
4. ANALISIS DE RESULTADOS Y DISCUSION
Se hizo un amJlisis de varianza a cada una de las variables respuesta
(temperatura y concentraci6n de esporas), con el animo de observar si cada
factor 0 sus respectivas interacciones son 0 no slgnificativas en el modelo.
Posteriormente se realiz6 una prueba Tukey ( Walpole,1998. 509) con et objeto
de hacer un analisis de medias para la temperatura, sobre cad a lIno de los
factores y sus interacciones, y observar si hay diferencias estadfsticas
significativa entre elias. Para ello se utiliz6 el programa SAS (anexo D).
Analizando las medias de la variable respuesta temperatura para los factores y
sus interacciones, se busco cuales de elias se asemejan mas a la temperatura
optima de crecimiento del hongo, sin dejar de lado el estudio de la desvia~ion
estandar, para garantizar que no existe una gran dispersi6n entre cada uno de
los datos con respecto a su media y con ello lograr que se convierta en un
parametro real de comparacion (anexo E). De esta forma se pudo encontrar la
combinaci6n .entre los facto res que mejor6 las condiciones para el desarrollo
del hongo, dentro de los niveles ensayados.
La busqueda de la maxima concentracion de conidias entre los facto res y sus
interacciones, permiti6 conocer tambi~n las condiciones 6Pt~rrias de operaci6n
74
, .
,
en el biorreactor.
. i
Se observo si existe congruencia entre las dos forrnas de analisis permitiendo
lIegar a conclusiones similares.
4.1 ANALISIS DE LA VARIABLE RESPUESTA TEMPERATURA
En la tabla 4 se presenta el analisis de varianza del modelo de temperatura y
en la tabla 5 se presenta el analisis de varianza para cada factor y sus
interacciones, permitiendo observar su significancia en el modelo de
temperatura.
Tabla 4. Anova para el modelo de la variable respuesta Temperatura.
Suma de Media de
Fuente DF cuadrados cuadrados Valor F Pr> F
Modelo 158 4738.559414 29.990882 53.84 <.0001
Error 165 91.918981 0.557085
Total 323... ."4830.478395
R2 =0.980971
Coeficiente de Varianza =2.491269

Tabla 5. Anova para los factores e interacciones dobles y triples en la variable respuesta
Temperatura.
Fuente DF Surna de Media de Valor F Pr> F

cuadrados cuadrados
ALTURA 2 320.300154 160.150077. 287.48 <.0001
FLUJO 2 382.913580 191.45679,0 343.68 <.0001

'":
POSICION 3 40.675926 13.558642 24.34 <.0001
75
I',!,
"II'
!~
i
:
i
TIEMPO 11 2620.404321 238.218575 427.62 <.0001
ALTURA*FLUJO 4 421.952160 105.488040 189.36 <.0001

Ii
I
ALTURA*POSICION 3 120.863426 40.287809 72.32 <.0001 "
I: " :
~
ALTURA *TIEMPO \ 22 78.079475 3.549067 6.37 <.0001 , .:1
!:' II
I "
FLUJO*POSICION 6 21.379630 3.563272 6.40 <.0001 r',
I':
,1: i
FLUJO*TIEMPO 22 187.382716 8.517396 15.29 <.0001
POSICION*TIEMPO 33 42.935185 1.301066 2.34 0.0002
ALTURA *FLUJO*POSICIO 66 64.476852 10.746142 19.29 <.0001
ALTURA*FLUJO*TIEMPO 44 437.195988 9.936272 17.84 <.0001
4.2 ANALISIS DE LA VARIABLE RESPUESTA CONCENTRACI6N DE
CONIDIAS
En la tabla 6 se presenta el analisis de varianza del modele de concentraci6n
de conidias y en la tabla 7 se presenta en amJlisis de varianza para cada factor
y sus interacciones, observando su significancia en el modelo de concentraci6n

de conidias.
Tabla 6. Anova para el modelo de la variable respuesta Concentraci6n de conidias
Sumade Media de
Fuente OF cuadrados cuadrados ValorF Pr> F
Modelo 104 2.0181029E19 1.9404836E17 72.30 <.0001
Error 10 2.6837829E16 2.6837829E15
Total 114 2.0207867E19 "

;i
'.
76
R2 = 0.998672
Coeficiente de Varianza = 18.64857

'i!l:
"
Tabla 7. Anova para los factores e interacciones dobles y triples en la variable respuesta ~ <:: 11
, ' ri
i',
Concentraci6n de conidias. "
Fuente OF Suma de Media de ValorF Pr> F

cuadrados cuadrados
; :,t'
j
ALTURA 2 3.5128911 E18 1.7564456E18 654.47 <.0001
FLUJO 2 8.1971379E17 4.0985689E17 152.72 <.0001
POSICION 3 3.5885698E17 1.1961899E17 44.57 <.0001
TIEMPO 9 6.3002217E18 7.0002464E17 260.84 <.0001
ALTURA *FLUJO 4 2.5444049E18 6.3610123E17 237.02 <.0001
ALTURA*POSICION 3 1.9866889E17 6.6222965E16 24.68 <.0001
ALTURA*TIEMPO 11 9.9350636E17 9.031876E16 33.65 <.0001
, FLUJO*POSICION 6 2.5222685E17 4.2037808E16 15.66 0.0001
FLUJO*TIEMPO 10 8.7237873E17 8.7237873E 16 32.51 <.0001
POSICION*TIEMPO 23 2.0282632E18 8.8185357E16 32.86 <.0001
ALTURA*FLUJ*POS 6 1.0361692E17 1.7269486E16 6.43 0.0053
FLUJO*POS*TIEM. 25 2.1962795E18 8.7851181E16 32.73 <.0001

LI !
T
4.3 INTERPRETACION DE RESULTADOS ESTADfsTICOS
'" I' t'
4.3.1 Variable Temperatura
4.3.1.1 Amllisis de Varianza. Se observa que todos los factores e
interacciones dobles y triples son significativas en el modelo; adem as el valor
de R2 y coeficiente de varianza muestra que el modelo explica adecuadamente
los resultados.
4.3.1.2 Evaluaci6n de la diferencia estadfstica significativas entre medias. Con
base .en la prueba Tukey se' analiz6 si existen diferencias estadfsticas
significativas entre cada nivel de los factores, bajo un Irmite de confianza del
95%. Con esto se evalu6 si el nivel es realmente util para el estudio de los
comportamientos del biorreactor en diferentes condiciones de operaci6n (anexo
D).
Las combinaciones pareadas de los niveles para el factor altura del lecho,
muestran que, para toda combinaci6n de los niveles existen diferencias
estadisticas entre las medias con un rango estudentizado es de 3.344776.
Con respecto al factor f1ujo de aire, se evalu6 las agrupaciones que forman
cada nivel de dicho factor, encontrandose que dichos niveles estan' en
grupos diferentes, 10 que muestra tambiem la existencia de diferencias
78
r
\
estadfsticas significativas entre medias, con un rango estudentizadoies de
3.344776.
!' I
I ~
1
Las combinaciones pareadas para los niveles del factor posiciOn, muestran
I'J
,
~ ! I .' ~
diferencias estadisticas significativas, excepto entre los niveles 4 y 1, !: .
mostrando que, a diferencia de 10 que se esperaba, la posiciOn radial ejerce'
una gran influencia sobre la temperatura, con 10 que se concluye que no
. existe una adecuada dispersiOn del aire dentro dellecho (flujo piston).
Con respecto a los resultados se observO que existe un perfil de flujo que va
dirigido desde las paredes del biorreactor en la parte inferior, hacia el centro del
lecho en la parte superior como se muestra en la figura. Este hecho genero
regiones con mayor apelmazamiento que es 10 que crea elincremento en la
temperatura en esas regiones.
3 -4

Figura 38. Perfil aparente de flujo de aire J
obtenido en el, biorreactor.
79
r
..',
Para el factor tiempo se observ~ que hasta el dra seis existen diferencias
; ;
significativas entre las medias de temperatura; despues del dla seis esta
diferencia se hace estadrsticamente despreciable por 10 que las
temperaturas permanecen constantes.
4.3.1.3 Analisis de Medias para cada nivel y sus interacciones. Con base en
las medias y sus desviaciones estandar se hizo una comparacion con la
temperatura optima de crecimiento del hongo. Siendo favorable e1 valor medio
de temperatura que este en el rango de la temperatura optima, 2SOC :I: 1DC
(anexo E).
En primer lugar se analizan las medias para los facto res de forma
independiente y posteriorrnente se analizan sus interacciones.
La altura que presenta un comportamiento favorable cuando se analiza
indivJdualmente es de 17 em (intermedia) con una media de temperatura de
2S.6DC y una desviacion estandar 3.154 que corresponde a la mas baja
entre las otras medias.
EI fJujo de aire alto, de 12.3 Umin, presento un comportamiento mas
favorable, ya que la media de temperatura de 28.9 C esta en el rango
optimo, pero presenta una desviacion estandar de 4.04, ligeramente superior
a lasdemas.
so
"'
Como se explic6 previamente, se esperaba que la temperatura no dependa
significativamente de la posici6n, hecho que no se cumpli6, 10 que obliga a
seleccionar la posici6n en don de se desarrolla mas favorable mente el hongo.
Esa posici6n puede ser tanto la 1 con una media de temperatura de 29.4C y
desviaci6n estandar de 3.944 como la 4 con una media de temperatura de
29.-rC y desviaci6n estandar de 3.572. Aunque ambas se salen ligeramente

, "
del rango" 6ptimo de temperatura, se selecciona la posici6n 1 por estar mas
cerca de este rango y por presentar una desviacion estandar ligeramente
menor.
Con respecto al tiempo, la temperatura siempre se increment6 a medida que
este aument6, estabilizandose, como ya se explic6, en el dfa 6, pero entre
los dras 3 y 4 se logran las condiciones te6ricamente mas favorables para el
desarrollo del hongo.
AI analizar la interacci6n Altura - FJujo, tanto la combinacion de 17 cm - 7.9
Umin con una media de temperatura de 27.3 C Y desviaci6n estandar de
2.505, como la combinaci6n de 17 cm - 12.3 Umin con una temperatura
media de 28.8 C Y desviacion estandar de 2.919, estan en el rango optimo
de temperatura, presentando desviaciones estandar bajas, por 10 tanto
ambas combinaciones son favorables.
La interacci6n Altura - Posicion, encontro un punto favorable en todas las
combinaciones de posicion con la altura de 17 cm. Este hecho es muy
81
favorable ya que indica que el factor posici6n, se hace menosimportante en
combinaci6ncon el factor Altura. Pero al igual que en anteriores analisis se
seleccion6 la combinaci6n entre 17cm y posici6n 1, por tener menor
desviaci6n estandar, mostrando una temperatura media de 27.4C y

" .,1, ,I
"
'
desviaci6n estandar 1.825.
La interacci6n Flujo - Posici6n, mostr6 un 6ptimo en todas las
combinaciones de posici6n con el f1ujo 12.3 Umin. Igualmente sigue siendo
favorable ya que reafirma el hecho de que cuando se combina el factor
posici6n con otros factores, este se hace menos importante.
Todas las interacciones tanto dobles como triples, con respecto al tiempo,
presentaron un comportamiento creciente de temperatura con respecto a el,
por 10 que no aportan informaci6n importante al analisis.
Si se analiza la interacci6n triple, altura - f1ujo - posici6n, se observan los
comportamientos mas favorables en las ,combinaciones que incluyen una
altura de 17 cm, con 10 cual se reafirman las tendencias enunciadas
anteriormente; ademas algo muy i,mportante se' puede deducir y es el hecho
de que esta altura de 17 cm combinada tanto con un f1ujo de 7.9 Umin, como
de 12.3 Umin, presentaron las temperaturas medias mas favorables por

.)
estar en rango 6ptimo, conteniendo unas desviaciones estandar bastante
bajas; la importancia de esto es que eJ factor posici6n pierde importancia,
que como se mencion6 previamente, era 10 que se buscs en este tipo de
82
;I
I'
"I" .
,
,
biorreactor. Claro esta que hay que destacar que en la combinacion 17 cm I, :
12.3 Umin - posici6n 1, se presento tambien una temperatura media 6ptima.
de 27.7 C Y una combinacionde 1.557. que es menor a la reportada para
las otras combinaciones.
4.3.2 Variable Concentracion de Conidias. Es importante tener presente que
el optimo para esta variable es el maximo valor de concentracion reportado; por
esta raz6n, no es importante evaluar las diferencias estadrsticas entre los
factores, ni el valor de las medias como se hizo para la variable temperatura,
solamente se analiz6 los resultados de forma puntual.
4.3.2.1 Analisis de varianza. Se observ6 en la Tabla 7, que cada factor y sus
interacciones, sonsignificativas en el modelo, y ademas, con los valores
reportados en esta tabla de R2 = 0.998672 Y de coeficiente de varianza de
18.64857, se concluy6 que los resultados son explicados adecuadamente por
el modelo.
4.3.2.2 Efecto de los factores y sus interacciones. Se buscaron en forma
puntual las condiciones de operaci6n que hallan generado la mayor
concentraci6n de conidias; para e"o se hizo referencia a los resultados y no a
valores de medias. .Tambieln el tiempo fue un factor importante en la
optimizaci6n del proceso. buscando que los mejores resultadbs se den a' un
menor tiempo, 10 que influiffi notablemente en la economfa del proceso.
83
" I
, .
,
.
"
AI analizar las ftguras 25 a 36, en las cuales se grafica la concentraci6n de
conidias con respecto al tiempo, se observaron algunos comportamientos que
corroboran la informaci6n suministrada por el analisis de medias de
temperatura la cual dice que la combinaci6n entre el nivel 17 cm del factor
altura de lecho y el nivel 12.3 L I min del factor flujo deaire, presentan las
temperaturas mas 6ptimas para el desarr:ollo del hongo que ademas
precisamente es 10 que se observ~, siendo la maxima concentraci6n de
conidias del orden de 2 x 109 conidias I gramo. A diferencia d~ la mayoria de
combinaciones, donde el maximo desarrollo se obtuvo a los 9 dras, en esta
combinaci6n de altura y flujo, el maximo desarrollo se obtuvo a los 7 dias de
fermentaci6n, optimizando economicamente el proceso.
5e hizo la comparaci6n de las conidias totales que se pueden obtener en el
biorreactor, tomando la maxima concentraci6n de conidias, en cada altura de
lecho trabajada, con 10 cual se tiene un indicio de la productividad alcanzada en
el proceso.
Tabla 8. Cantidad total de conidias en diferentes alturas dellecho.
Altura dellecho, cm. Cantidad de trigo, g. Conidias totales
13 1380 5.93 X 1011
17 1840 6.46 X 1012
23 2530 r 1.72 X 1012
84
En la tabla 8 se pueden observar incrementos en la cantidad de trigo de
aproximadamente 35% entre las diferentes alturas del lecho, favoreciendose el
desarrollo del hongo, bajo cantidades intermedias de trigo correspondiente a
una altura de 17 cm.
En terminos de la relaci6n altura I diametro del biorreactor, la 6ptima
corresponde a un valor de 0.90.
4.4 COMPARACI6N DE RESULTADOS ENTRE EL BIORREACTOR DE
LECHO EMPACADO Y UN METODO TRADICIONAL (BOTELLAS).
Con et objeto de comparar los mejores resultados obtenidos en el biorreactor
de lecho empacado con los obtenidos utilizando el metodo tradicional de
botellas, se desarroll6 el hongo en elias, utilizando tambien trigo entero como
sustrato por un periodo de doce dras. Cada botella contenfa 50 g de trigo y ta

fermentaci6n se hizo con 70 botellas. Los resultados se muestran en las
figuras 39 Y 40.
\
\
85
r
Metodo tradicional (botellas) 1 ...
Figura 39. Coocentraci6n de coniclias. en eI metodo

tradiciooal
\ 0) 1,40E+09
~ 1,20E+09
.,
,,)
( :2 >
1,OOE+09
:a 8,OOE+08
.'0 6,OOE+08
-8 4,OOE+08
0
6 2,OOE+08
(.) O,OOE+OO +-r-r--,.--,-.,..-....-a,..-,...a,--,-..,......,.....,
(") It) ..... CI)
....
....
....
(")
Ttempo. dlas
Biorreactor de lecho empacado
Figura 40, Concentraci6n de conidias. para el

comportamiento 6ptimo en el biorreactor. Altura
17 em, Flujo 12.3 Umin.
1,61E+09
~ 1.41E+09
8 1,21E+09
~ 1,01E+09
lB 8,10E+08
-8

6,10E+08
4,10E+08
(.) 2.10E+08
I
1.00E+07 +,1.IL,--r-t.....--r&.,...-,.....--r&.,.....,
o 2 4 6 8 10
TIeITJPO, dlas
86
- - --- - - -----------,------------~
La maxima concentraci6n de conidias en las botellas se present6 en el dra 12,
y fue de 1.2 x 109 conidias I gramo, por 10 tanto en el total de las botellas, se
desarrollaron 4.2 x 1012 conidias aproximadamente.
Comparando el numero total de conidias en la botellas con el numero total de
conidias en el biorreactor de lecho empacado bajo las mejores condiciones de
operaci6n (altura de 17 cm y flujo de aire de 12.3 Umin), se observa que la
cantidad en gramos necesarias para obtener un numero semejante de conidias,
fue mayor en las botellas, con el agravante de la necesidad de un mayor
tiempo de fermentaci6n, por 10 cuaJ se resalta la importancia del biorreactor de
-(echo empacado para aumentar la productividad en el proceso, 10 que redunda
en beneficios econ6micos para la empresa.
En resumen para las botellas:
Conidias totales: 1.2 x 10E12
Cantidad de sustrato: 3500 g.
Tiempo de fermentaci6n: 12 dras
Productividad: 2.86 x 10E10 conidias I (Kg.dra)
Para el biorreactor.
Conidias totales: 6.46 x 10E12
Cantidad de sustrato: 1840 g.
Tiempo de fermentaci6n: 7 dias
Productividad: 5.02 x 10E11 conidias I (Kg.dia)
87
r
i
,, ,
5. CONCLUSIONES
, ]
1 :\1
I I
I '
I
La temperatura es uno de los panlmetros mas influyentes enun biorreactor I
! i'
I
de lecho empacado para fermentacion en estado solido, ya que los
problemas de sobrecalentamiento que se generan en ellecho, pueden inhibir
el desarrollo de los hongos, ya sea alejandolos de su temperatura optima de
crecimiento de 28 1 0 C, como del grado optimo de humedad de 90%..
La adecuada dispersion del aire en el lecho es un factor muy importante
tanto en el disetio del biorreactor de lecho empacado, como en la selecci6n
del sustrato utilizado en la fermentacion en estado s6lido, ya que se debe
evitar la presenCia de zonas muertas por donde el aire no fluya libremente,
generando apelmazamientos indeseables en el sustrato que causan a su vez
sobrecalentamiento y por 10 tanto, disminuci6n en el desarrollo del hongo
La altura del lecho en un biorreactor de lecho empacado esta ligada con los
problemas desobrecalentamiento en el medio y por 10 tanto con la
necesidad de una adecuada dispersion del aire. Esto se da ya que a medida
que la altura del lecho aumenta, se aumenta la resistencia del aire a fluir
libremente, por 10 que se requiere un aumento en la velocidad del aire que
permits vencer estas resistencias y de esa forma controla~ los problemas de
sobrecalentamiento que se generan cuando no fluye adecuadamente el aire
88
a traves del medio, impidiendo asf la transferencia de calor por medios
convectivos.
La ausencia de aire en algunas zonas dellecho, causa la disminuci6n enel
crecimiento del hongo en elias por sobrecalentamiento generado, hasta un
valor tal que el microorganismo no encuentra su condici6n de desarrollo
6ptima.
EI desarrollo del hongo Beauveria bassiana es muy sensible a temperaturas
superiores a 30C, ya que las temperaturas superiores causan inhibici6n de
su desarrollo y ademas favorecen la contaminaci6n por otro tipo de hongos
como los del genero Penicillium evidenciado algunas veces en la
fermentaci6n, el cual es mucho mas resistente a condiciones adversas.
. EI desarrollo del hongo Beauveia bassiana en este tipo de biorreactor, se
favorece cuando se utiliza una relaci6n Altura I Diametro de 0.90 a la escala
ensayada y siendo bajo esta relaciOn y escala, un nivel de flujo de aire
Optimo de 12.3 L I min, con 10 cual se mantiene una temperatura 6ptima en
el proceso.
Se deben buscar las condiciones de altura del lecho y flujo de aire en el
biorreactor, que generen que la temperatura del medio y' por ende el
desarrollo del microorganismo, no varfe significativamente con la posici6n en

, .. '
el biorreactor, ya que de esta forma el proceso serfa' 'poco eficiente en
89
"
i
productividad. Justamente ICi relaci6n de altura I diametro y el f1ujo de aire
que fue optimo para el proceso, favorece el hecho de que la posici6n en el
biorreactor no sea un factor influyente en los resultados.
Comparando los resultados de crecimiento del hongo tanto en el biorreactor
de lecho empacado como en el metodo tradicional de crecimiento en
botel/as, se !ogro una mayor concentraci6n de conidias como conidias I
gramo de sustrato, en menor tiempo de fermentaci6n, aumentando la
productividad aproximadamente en un 1500 % en el biorreactor de !echo
empacado.
90
6. RECOMENDACIONES
Con el objetivo de mejorar el proceso de fermentacion en estado solido para el
desarr<;lllo del hongo Beauveria bassiana en un biorreactor de lecho empacado
para futuros trabajos relacionados con este hongo 0 con otro tipo de
microorganismos, 0 para la implementacion de este a una mayor escala, se
deben tener en cuenta las siguientes recomendaciones:
Las soldaduras acrflicas utilizadas para la union de cualquier parte del
biorrector, deben ser mucho mas pulidas para evitar que cualquier bacteria 0
esporas de hongos permanezcan alii y propicien las contaminaciones de la
fermentacion como efectivamente sucedio con algunos montajes de
fermentacion.
Se deben tener mas sitios para medicion de temperaturas y toma de
muestras en posiciones axiales con el objetivo de hacer mayor numero de
mediciones cuando la altura dellecho es baja y poder asr obtener resultados
mas confiables.
Es conveniente contar con instrumentos automaticos para la medicion de la
temperatura, evitando de esta forma el posible movimiento del lecho a la
91
'\"
,I
I
.hora de tomar la medida que genere contaminaciones, lecturas imprecisas 0
que generen cambios en el perfil de aire.
AI momento de tomar la muestra para ser analizada, se debe tener mucho
cuidado en no generar canalizaciones permanentes, influyendo asi en el ,J ,

. I
I.
perfil de f1ujo de aire.
Es importante evaluar algunas otras variables de operaci6n importantes en
este tipo de' biorreactor como la temperatura del aire a la entrada y la
humedad del medio, para ello se debe contar con instrumentos adecuados
que permitan controlar la temperatura del agua garantizando que el aire que
f1uye a traves del agua permanezca tambiem a temperatura constante.
La muestra debe ser pequena para no afectar significativamente la cantidad
total de sustrato.
Un ~istema de agitaci6n leve al agua en el bano termostatizado tendra
algunos beneficios importantes, como el de. poder mantener la temperatura
del agua homogemea 0 tambien evitar la contaminaci6n por falta de oxigeno
que se produce en el agua estancada.
EI ensayo con un sistema de serpentrn dentro del fermentador de lecho
empacado, puede ser un buen metodo para mejorar la transferencia de calor
via conducci6n.
92
i'
Otro tipo de recomendaciones que se deben tener en cuenta con este tipo de
biorreactores son: : ,",
La distribuci6n pareja del sustrato en el biorreactor puede ayudar a disminuir
los problemas de mala distribuci6n del aire, evitando la formaci6n de canales , ,i'
, ,t'
de f1ujo ya que el aire busca las zonas por donde se requiera menor esfuerzo
para su transporte.
Con respecto alsustrato es bueno evaluar como se afectaria la fermentaci6n
cuando se agrega un material soporte de tipo fibroso que aumente el area
superficial del lecho y favorezca el adecuado f1ujo de aire, evitando el
apelmazamiento y tam bien produzca un mayor desarrollo del
microorganismo a causa de un mejor aprovechamiento del area especifica
del sustrato.
93
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99
Anexo A. Isometrico del Bioreactor de lecho Empacado ,I '
I
,I
1
1
i
Nota: todas las medidas estim en centimetros
100
J::
! ..
Anexo B. corte lateral del Bioreactor de lecho Empacado I'I
I !
~!"
I '
I
:
!11 .
, I:
r",
I,
~ 1 i
'",
"Ir.~
Nota: todas las medidas estan en centimetros
. 101
Anexo C. Matriz de Resultados
ALTURA FLUJO DE POSICION TIEMPO TEMPER. CONC. DE CONID.

em AIRE, L/min dias C eonidias I gramo
13 3,7 3 O' 7,25E+07

13 3,7 3 1 27
13 3,7 3 2 28
13 3,7 3 3 '-'\
29 5,96E+07, j
I
13 3,7 3 4 30
13 3,7 3 5 29 1,OOE+08 J
13 3,7 3 6 30
13 3,7 . 3 (
7 31 1,02E+08. ,
13 3,7 3 8 32
13 3,7 3 9 32
13 3,7 3 10 31 4,23E+08 . I
13 3,7 3 11 31 I ,
13 3,7 3 , 12 31 I
13 3,7 4 0 7,25E+07 I
13 3,7 4 1 27
13 3,7 4 2 28
13 3,7 4 3 29 5,96E+07
13 3,7 4 4 30
13 3,7 4 5 29 1,OOE+08 ,
13 3,7 4 6 30 .,
13 3,7 4 7 31 1,02E+08
13 3,7 '4 8 31 i
13 3,7 4 9 32 ,
13 3,7 4 10 32 4,23E+08
13 3,7 4 11 32
13 3,7 4 12 32
13 7,9 3 0 7,25E+07 ,
13 7,9 3 1 24
13 7,9 3 2 26
13 7,9 3 3 28
13 7,9 3 4 29 1,68E+08 ,
13 7,9 3 5 30
13 7,9 3 6 31 4,08E+08
13 7,9 3 7 32
102

13 7,9 3 8 33 2,89E+08
13 7,9 3 9 32 I
13 7,9 3 10 32 4,36E+08 !
13 7,9 3 11 32
13 7,9 3 12 33
13 7,9 4 0 7,25E+07
13 7,9 4 1" 24
13 7,9 4 2 26
13 7,9 4 3 28
13 7,9 4 4 29 1,68E+08
13 7,9 4 5 30
13 7,9 4 6 31 4,08E+08 I
13 7,9 4 7 32
13 7,9 4 8 33 2,89E+08 I
13 7,9 4 9 32 .
13 7,9 4 10 32 4,36E+08
13 7,9 4 11 32
13 7,9 4 12 33
13 12,3 3 0 7,25E+07
13 12,3 3 1 22
13 12,3 3 2. 22
13 12,3 3 3 22 I
13 12,3 3 4 27 i
13 12,3 3 5 33 i
13 12,3 3 6 35 4,OOE+07
I
13 12,3 3 7 36
13 12,3 3 8 36
13 12,3 3 9 36
13 12,3 3 10 36
13 12,3 3 11 35
13 12,3 3 12 33
13 12,3 4 0 7,25E+07
13 12,3 4 1 22
I
13 12,3 4 2 .. 22
13 12,3 4 3 22 I
13 12,3 4 4 27 4,50E+07 I
13 12,3 4 5 32 ,
13 12,3 4 6 34 6,50E+07
13 12,3 4 7 34
13 12,3 ,
4 8 35
13 12,3 4 9 36 .
13 12,3 4 10 34
;I ,
,

13 12,3 4 11 34
13 12,3 4 12 33
17 3,7 1 0 5,43E+07
17 3,7 1 1 25
17 3,7 1 2 24
17 3,7 1 3 25
17 3,7 1 4 25 2,70E+08
17 3,7 1 5 26
17 3,7 1 6 27 2,90E+08
17 3,7 1 7 28
-
17 3,7 1 8 29 3,Q3E+08
17 3,7 1 9 29
17 3,7 1 10 29 3,7'IE+08
17 3,7 1 11 29
17 3,7 1 12 29
17 3,7 3 0 5,43E+07
17 3,7 3 1 26
17 3,7 3 2 26
17 3,7 3 3 27
17 3,7 3 ~
4 29 3,50E+08
17 3,7 3 5 30
I 17 3,7 3 6 32 2,36E+08
I' 17 3,7 3 7 33
I 17 3,7 3' 8 35 1,63E+08
I
17
17
3,7
3,7
3
3
9
10
35
35 2,94E+08
17 3,7 3 11 35
17 3,7 3 12 35
17 3,7 4 0 5,43E+07
17 3,7 4 1' 26
17 3,7 4 '2 25
17 3,7 4 3 26
17 3,7 4 4 28 '3,50E+08
17 3,7 4 5 29
17 3,7 4 6 31 2,36E+08
1J 3,7 4 7 32
17 3,7 4 8 33 1,63E+08
17 3,7 4 9 34
17 3,7 4 10 33 "
2,94E+08
17 3,7 4 11 33
17 3,7 4 12 34
17 7,9 1 0 5,43E+07
104

17 7,9 1 1 22
17 7,9 1 2 25
17 7,9 1 3 27
17 7,9 1 4 28 1,52E+08
17 7,9 1 5 29
17 7,9 1 6 29 I
17 7,9 1 7 29 6,90E+08
17 7,9 1 8 28
17 7,9 1 9 28 9,06E+08
17 7,9 1 10 28
17 7,9 1 11 28
17 7,9 1 12 28
17 7,9 3 0 5,43E+07 I
17 7,9 3 1 20
17 7,9 3 2 23
17 7,9 3 3 26
17 7,9 3 4 28 7,60E+07
17 7,9 3 5 30
17 7,9 3 6 30
17 7,9 3 7 29 3,17E+08
17 7,9 3 8 28
17 7,9 3 9 28 7,88E+08
17 7,9 3 10 28
17 7,9 3 11 28
17 7,9 3 12 28
17 7,9 4 0 5,43E+07
17 7,9 4 1 21
17 7,9 4 2 23
17 7,9 4 3 26
17 7,9 4 4 27 7,60E+07
17 7,9 4 5 29
17 7,9 4 6 29 I
17 7,9 4 7 29 3,17E+08
17 7,9 4 8 28
17 7,9 4 9 29 7,88E+08
17 7,9 4 10 29
17 7,9 4 11 29
17 7,9 4 12 29
' }
,.. ' .
17 12,3 1 0 5,43E+07
17 12,3 1 1 24' .
17 12,3 1 2 26 .;';'
17 . , 12,3 1 . 3 29 ",,7,98E+08
it I:
ALTURA FLUJO DE POSICION TIEMPO TEMPER. CONC. DE CONID. I

em AIRE, L Imin dias C eonidias I gramo
17 12,3 1 4 27
17 12,3 1 5 29 1,17E+09
17
17
17
12,3
12,3
12,3
1
1
1
6
7
8
29
28
27
7,40E+08 d
I
I"
.1
17 12,3 1 9 27 3,50E+09
17 12,3 1 10 28
17 12,3 1 11 29
17 12,3 1 12 29
17 12,3 3 0 5,43E+07
17 12,3 3 1 21
17 12,3. 3 2 25
17 12,3 3 3 28 3,83E+08
17 12,3 3 4 28
17 12,3 3 5 30 9,62E+08
17 12,3 3 6 30 !
17 12,3 3 7 30 1,35E+09
17 12,3 3 8 30
17 12,3 3 9 32 8,80E+08
17 12,3 3 10 32
17 12,3 3 11 33
17 12,3 3 12 33
17 12,3 4 0 5,43E+07
17 12,3 4 1 22
17 12,3 4 2 25
17 12,3 4 3 28 3,83E+08
17 12,3 4 4 28
17 12,3 4 5 30 9,62E+08 I
17 12,3 4 6 30
17 12,3 4 7 30 1,35E+09
17 12,3 4 8 30
17 12,3 4 9 . 31 8,80E+08
17 12,3 4 10 32
17 12,3 4 11 33
17 12,3 4 12 ~: 33
23 3,7 1 0 3,95E+07
~
23 3,7 1 1 24 ...
23 3,7 1 2 28
.,
23 3,7 1 3 31 2,OOE+08
23 3,7 1 4 36
23 3,7 1 5 36 ..
23 3,7 1 6 37 5,80E+08
106
23 3,7 1 7 39
23 3,7 1 8 38 3,18E+08
23 3,7 1 9 38 I
23 3,7 1 10 35 :
23 3,7 1 11 36 I
23 3,7 1 12 37 I
23 3,7 2 0 3,95E+07 i
23 3,7 2 1 24 I
I
23 3,7 2 2 28
23 3,7 2 3 31 2,OOE+08
23 3,7 2' 4 35
23 3,7 2 5 38
23 3,7 2 6 38 5,80E+08
23 3,7 2 7 39
23 3,7 2 8 37 3,18E+08 I
23 3,7 2 9 37 !
23 3,7 2 10 35 i
23 3,7 2 11 35 I
23 3,7 2 12 33 i
23 3,7 3 0 3,95E+07 !
23 3,7 3 1 24
23 3,7 3 2 28
23 3,7 3 3 30 1,06E+08
23 3,7 3 4 34
23 3,7 3 5 34
23 3,7 3 6 35 3,91E+08
23 3,7 3 7 36 i
23 3,7 3 8 35 4,13E+08 i
23 3,7 3 9 35
23 3,7 3 10 34
23 3,7 3 11 35
23 3,7 3 12 35
23 3,7 4 0 3,95E+07
23 3,7 4 1 24
23 3,7 4 2 '.
"
28
23 3,7 4 3' 29 1,06E+08
23 3,7 4 4 33 .~ I
23 3,7 4 5 34 ,
23 3,7 4 6 34 .;
3,91E+08
23 3.7 4 7 35
23 3,7 4 8 34 4,13E+08
23 3,7 4 9 34
'.
23 3,7 4 10 . 33
23 3,7 4 11 34
23 3,7 4 12 34
23 7,9 1 0 3,95E+07
23 7,9 1 1 24
23 7,9 1 2 28 3,44E+07 ,
23 7,9 1 3 32
23 7,9 1 4 34
23 7,9 1 5 32 3,57E+07 I
23 7,9 1 6 33 J
23 7,9 1 7 32 I
23 7,9 1 8 32 6,68E+07
23 7,9 1 9 32
23 7,9 1 10 33
23 7,9 1 11 31
23 7,9 1 12 33
23 7,9 2 0 3,95E+07
23 7,9 2 1 24
23 7,9 2 2 28 3,44E+07 !
23 7,9 2 3 32 I
23 7,9 2 4 33
23 7,9 2 5 32 3,57E+07
23 7,9 2 6 33
23 7,9 2 7 33
23 7,9 2 8 32 6.68E+07
23 7,9 2 9 33 I
23 7,9 2 10 32 i
23 7,9 2 11 33
23 7,9 2 12 33 I
23 7,9 3 0 3,95E+07
23 7,9 3 1 23
23 7,9 3 2 26 2,86E+07
23 7,9 3 3 30
23 7,9 3 4 32 i
23 7,9 3 5 ".' 32 5,40E+07 I
23 7,9 3 6' 32 I
23 7,9 3 7 32 . I
23 7,9 3 8 32 ' 7,35E+07
23 7,9 3 9 33 ','
23 7,9 3 10 34
23 7,9 3 11 32 .,
23 . 7,9 3 12 33 " .
23 7,9 4 0 3,95E+07 I
23 7,9 4 1 22
23 7,9 4 2 26 2,86E+07 I
23 7,9 4 3 29 i
23 7,9 4 4 30
23 7,9 4 5 30 5,40E+07
23 7,9 4 6 30
23 7,9 4 7 30
23 7,9 4 8 32' 7,35E+07
23 7,9 4 9 32
23 7,9 4 10 32
23 7,9 4 11 32
23 7,9 4 12 32
23 12,3 1 0 3,95E+07
23 12,3 1 1 25
23 12,3 1 2 22 4,69E+07
23 ' 12,3 1 3 24
23 12,3 1 4 26
23 12,3 1 5 26 1,27E+08
23 12,3 1 6 31
23 12,3 1 7 30
23 12,3 1 8 30 1,66E+08
23 12,3 1 9 31
23 12,3 1 10 32
23 12,3 1 11 32
23 12,3 1 12 32
23 12,3 2 0 3,95E+07
23 12,3 2 1 25
23 12,3 2 2 23 4,69E+07
23 12,3 2 3 26
23 12,3 2 4 27
23 12,3 2' 5 27 1,27E+08
23 12,3 2 6 31
23 12,3 2 7 30
23 12,3 2 8 30 1,66E+08
23 12,3 2 9 32 ,
23 12,3 2 10 33 .
23 12,3 2 11 33
23 12,3 2 12 33
23 12,3 3 0 3,95E+07
23 12,3 3 1 ' 24
23 , 12,3 3 2 22 4,08E+07
23 12,3 3 3 22
23 12,3 3 4 24
23 12,3 3 5 24 6,32E+07
23 12,3 3 6 30
23 12,3 3 7 29
23 12,3 3 8 29 7,50E+07
23 12,3 3 9 30
23 12,3 3 10 31
23 12,3 3 11 31
23 12,3 3 12 31
23 12,3 4 0 3,95E+07
23 12,3 4 1 24
23 12,3 4 2 21 4,08E+07
23 12,3 4 3 24
23 12,3 4 4 24
23 12,3 4 5 25 6,32E+07
23 12,3 4 6 30
23 12,3 4 7 29
23 12,3 4 8 29 7,50E+07
23 12,3 4 9 30
23 12,3 4 10 31
23 12,3 4 11 31
23 12,3 4 12 31
Anexos D. Prueba de Tukey para evaluar diferencias estadisticas significativas
de la variable respuesta Temperatura.
Las diferencias estadisticas significativas de las medias, para cada factor en un
nivel de significancia de 0.05, estan indicadas par ***, en otros casos por
grupos de letras diferentes.
Tabla D1. Diferencias estadlsticas entre la temperatura, para eJ factor aHura.
Diferencia
ALTURA entre Limite de confianza
Comparaci6n Medias del 95 %
23 -13 0.43750 0.18271 0.69229 **..
23 -17 2.22454 1.99983 2.44924 ***

......
13 - 23 -0.43750 -0.69229 -0.18271
13 -17 1.78704 1.51846 2.05561 ***
17 -23 -2.22454 -2.44924 -1.99983 ***
17 -13 -1.78704 -2.05561 -1.51846 ......
111
Tabla 03. Oiferenclas estadlsticas de temperatura para eJ factor posici6n.
Diferencia
POSICION entre Limite de confianza
Comparaci6n Medias del 95 %
2 -3 1.5648 1.1920 1.9376 ***

2 -4 1.9259 1.5531 2.2987 ***
2 -1 2.1944 1.7990 2.5899 ***
3 -2 -1.5648 -1.9376 1.1920 ***
3 -4 0.3611 0.0975 0.6247 ***
3 -1 0.6296 0.3349 0.9244 ***
4 -2 -1.9259 -2.2987 -1.5531 ***
4 -3 -0.3611 -0.6247 -0.0975 ***
4 -1 0.2685 -0.0262 0.5632
1 -2 -2.1944 -2.5899 -1.7990 ***
1 -3 -0.6296 -0.9244 -0.3349 ***
1 -4 -0.2685 -0.5632 0.0262
Tabla 04. Oiferencias estadlstlcas de temperatura para el factor tiempo.
Agrupaci6n Tukey Media N TIEMPO
A 32.2222 27 9
A 32.2222 27 12
A 32.1481 27 11
A 32.0741 27 10
A 31.7778 27 7
A 31.7778 27 :: 8
A 31.5556 27 6
B 30.1852 27 5
C 29.1852 27 4
:":-,
112
D 27.4074 27 3
E 25.2593 27 2
F 23.7037 27 1
v X7 ~Gn- RiCE 7i'ii!r=;:33WT?'''
lj' ..
Anexo E. Evaluaci6n de medias de la variable temperatura para los factores e
interacciones.
Tabla E1. Media de temperatura para el factor altura dellecho.
Nivel de TEMPERATURA
ALTURA N Media Desv. Estandar
------
13 72 30.3611111 3.72772466
17 108 28.5740741 3.15400266
23 144 30.7986111 4.14691706
Tabla E2. Media de temperatura para el factor flujo de aire.
FLUJO N Media Desv. Estandar
3.7 108 31.4537037 3.89676180
7.9 108 29.5277778 3.17542648
12.3 108 28.8981481 4.03707078
Tabla E3. Media de temperatura para el factor posicion.
Nivel del TEMPERATURA

POSICION N Media Desv. Estandar
"
"
1 72 29.4166667 . 3.92446282
2 36 31.6111111 4.10071616
3 108 30.0462963 3.93257248
4 108 29.6851852 3.57208321

(:~
114
~ ";:C~-
= 'i' 0
i
I'
I
!i
.,1,
"
,j
Tabla E4. Media de temperatura para el factor tiempo.
TIEMPO N Media Desv. Estandar
i
1 27 23.7037037 1.77189197
2 27 25.2592593 2.33027883
II.
j:
:1
Ii
3 27 27.4074074 2.91229832
,qJt
1\
4 27 29.1851852 3.27034504 Ii
~i
01,
5 27 30.1851852 3.18695704 ]i,. .'
"I
I,
6 27 31.5555556 2.57701875 ,Ii
!f
7 27 31.7777778 3.05505046
.'
:'!I
":1
I: .
8 27 31.7777778 " 2.95261727
9 27 32.2222222 2.80567191
10 27 32.0740741 2.21751638
11 27 32.1481481 2.21365871
12 27 32.2222222 2.17208396
Tabla E5. Media de temperatura para la interacci6n altura - flujo de aire.
Nivel de Nivel de TEMPERATURA

ALTURA FLUJO N Media Desv: Estandar
13 3.7 ' 24 30.1666667 1.60614761
13 7.9 24 30.1666667 2.82329851
13 12.3 24 30.7500000 5.66645353
17 3.7 36 29.6388889 3.57093647
17 7.9 36 27.3055556 2.50507422
17 12.3 36 28.7777778 2.91901266
23 3.7 48 33.4583333 4.04210990

23 7.9 48 30.8750000 2.92185456
23 12.3 48 28.0625000 3.54548709
Tabla E6. Media de temperatura para interaccion altura - posicion.

ALTURA POSICION N Media Desv. Estandar
13 3 36 30.4444444 3.87257349
13 4 36 30.2777778 3.63012090
17 1 36 27.3888889 1.82487225
17 3 36 29.3333333 3.75689842
17 4 36 29.0000000 3.27762981
23 1 36 31.4444444 4.41066528
23 2 36 31.6111111 4.10071616
23 3 36 30.3611111 4.16895175
23 4 36 29.7777778 3.77291938
Tabla E7. Media de temperatura para interaccion f1ujo - posicion.

FLUJO POSICION N Media Desv. Estandar
3.7 1 24 30.8333333 5.14711119
3.7 2 12 34.1666667 4.50924975
3.7 3 36 31.5000000 3.27326835

,',
i '
3.7 4 36 30.9166667 2.97008898 '
7.9 1 24 29.3750000 3.09013156
7.9 2 12 31.5000000 2.74689908
116
7.9 3 36 29.4166667 3.34984008
7.9 4 36 29.0833333 3.06477685
12.3 1 24 28.0416667 2.72634756
12.3 2 12 29.1666667 3.45972498
12.3 3 36 29.2222222 4.69717916
12.3 4 36 29.0555556 4.29580822
.",
Tabla Ea. Media de temperatura para la Interacci6n altura - flujo - poslcl6n.
Nivel de Nivel de Nivel de TEMPERATURA

ALTURA FLUJO POSICION N Media Desv. Estandar
13 3.7 3 12 30.0833333 1.56427929
13 3.7 4 12 30.2500000 1.71225529
13 7.9 3 12 30.1666667 2.88675135
13 7.9 4 12 30.1666667 2.88675135
13 12.3 3 12 31.0833333 6.02205542
13 12.3 4 12 30.4166667 5.53432813
17 3.7 1 12 27.0833333 1.97522534
17 3.7 3 12 31.5000000 3.72948936
17 3.7 4 12 30.3333333 3.36650165
17 7.9 1 12 27.4166667 2.02072594
17 7.9 3 12 27.1666667 2;91807325
17 7.9 4 12 27.3333333 2.70801280
17 12.3 1 12 27:6666667 1.55699789
17 12.3 3 12 29.3333333 3,49891758
17 12.3 4 12 29.3333333 3.22865954
23 3.7 1 12 34.5833333 4.56186432
117
23 3.7 2 12 34.1666667 4.50924975
23 3.7 3 12 32.9166667 3.65459445
23 3.7 4 12 32.1666667 3.35297245
23 7.9 1 12 31.3333333 2.74137767
23 7.9 2 12 31.5000000 2.74689908
23 7.9 3 12 30.9166667 3.20392751
23 7.9 4 12 29.7500000 3.01887998
23 12.3 1 12 28.4166667 3.57919070
23 12.3 2 12 29.1666667 3.45972498 . ..

"
23 1"2.3 3 12 27.2500000 3.69582074
23 12.3 4 12 27.4166667 3.55370059

I

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EVALUACION DE UN BIORREACTOR DE LECHO EMPACADO PARA EL

DESARROLLO DEL HONGO Beauveria bassiana

ARLEY DAVID ZAPATA ZAPATA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTADES DE CIENCIAS Y CIENCIAS AGROPECUARIAS

EVALUACION DE UN BIORREACTOR DE LECHO EMPACADO PARA EL

DESARROLLO DEL HONGO Beauveria bassiana

ARLEY DAVID ZAPATA ZAPATA

Tesis para optar altitulo de Magister en Biotecnologia

MARIO ARIAS ZABALA

t Ingeniero Quimico, MsC

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS Y CIENCIAS AGROPECUARIAS

~.'\D NACIONALOO CoLC"'..:::;

Presidente del Jurado

Ciudad y fecha (dia, mes, alio)

hermanos, a mi novia, por el

apoyo y confianza que me

EI autor expresa sus agradecimientos a:

Guillermo Le6n Hernandez, Bi610go y Zootecnista, Gerente de la empresa

Mario Arias Zabala, Ingeniero Quimico MsC, profesor de la Universidad

Nacional de Colombia, Sede Medellin y Director de la Investigaci6n, por sus

Evelio Gomez, Ingeniero Agr6nomo, Profesor de la Universidad Nacional de

Colombia, Sede Medellin, por sus valiosos aportes en la etapa de formulaci6n

Kenneth Roy Cabrera, MsC. Profesor de la Universidad Nacional de Colombia,

Sede Medellin, por su valiosa colaboraci6n en el analisis estadistico de los

Juan Carlos Quintero, Ing. Quimico MsC. Profesor de la Universidad de

! Antioquia, por sus valiosos aportes en la etapa de formulaci6n del proyecto.

I Olga Montoya, MsC. Profesora de la Universidad Nacional de Colombia, Sede

Sonia Jaramillo, MsC. Profesora de la Universidad Nacional de Colombia, Sede

Medellin, por su confianza y apoyo logistico.

AI Laboratorio de Bioconversiones y de Ciencias Termicas de la Universidad

Nacional de Colombia Sede Medellin, por sus aportes logisticos.

1.1 FERMENTACION EN MEDIO SOLIDO, FMS 20

1.1.1 Definicion de Fermentacion en Medio Solido 20

1.1.2 Caracterfsticas de la Fermentacion en Medio Solido 21

1.1.2.1 Cantidad y actividad del agua 22

1.1.2.2 Intercambio de gases 23

1.1.2.3 Control de temperatura 23

1.1.3 Efecto de las condiciones de operacion sobre la 24

Fermentacion en estado solido

1.1.3.1 Efecto de la temperatura del aire y de su

1.1.3.2 Efecto de la velocidad del aire 26

1.1.3.3 Efecto del coeficiente convectivo de transferencia 27

1.1.4 Transferencia de calor en biorreactores de lecho 28

1.1.4.1 Efecto de la relacion altura I diametro (HID) 31

1.1.4.2 Efecto de la temperatura del aire a la entrada 32

1.1.4.3 Densidad del sustrato en el lecho 34

1.1.4.4 Rata especifica de crecimiento 34

1.1.4.5 Maxima den sid ad de biomasa 34

! 1.2 HONGOS ENTOMOPATOGENOS 36

1.2.2 Requerimientos de uso 37

1.2.3 Modo de accion de los hongos entomopatogenos 37

1.3 PRINCIPALES CARACTERrSTICAS DEL 38

1.3.1 Caracteristicas del genera Beauveria 38

1.3.3 Modo de accion 40

1.3.6 Efecto sobre la braca del cafe 42

2.3 DESCRIPCION DEL BIORREACTOR DE LECHO 47

2.4 PREPARACION DEL MEDIO PARA LA FERMENTACION 49

: 2.5 INOCULACION DEL MEDIO 50

2.6 ESTERILIZACION DEL BIORREACTOR 50

2.7 METODO PARA DETERMINAR LA CONCENTRACION 51