ANLISIS DE PROTENAS EN EL EXOESQUELETO DEL CAMARN

Metodologai

DESMINERALIZACION DE LA MUESTRA

Pesar aproximadamente 1g de muestra seleccionada, colocar en un baln 250ml la

muestra pesada en relacin 1/10 con HCl 2N (1g muestra / 10ml HCl 2N). Agitar en un
periodo de dos horas con una revolucin de 1600 rpm.

Para finalizar el procedimiento de desmineralizacin de la muestra lavarla hasta mantener

un pH aproximadamente neutro.ii

DESPROTEINIZACIN DE LA MUESTRA

Una vez neutralizada la muestra colocarla en un baln de 250ml y aadir NaOH 3% en una
relacin 1/20 (1 g muestra/ 20ml de NaOH 3%). A la mezcla (muestra + NaOH) Calentarla
durante 2h a una temperatura de 70C a 1400 rpm.

Una vez el tiempo transcurrido filtrar la solucin resultante. Consrvese el filtrado para
posteriores pruebas.

PRUEBA DE BIURET

Preparar tres tubos de ensayo para cada replica. Adems un tubo para BLANCOiii.
(10 tubos en total). Preparar una secuencia de estndares a diferentes concentraciones
(VER TABLA N1).

Una vez preparados los diferentes estndares introducir en el bao termostatizado a una
temperatura de 37C en un tiempo de 15 minutos. Una vez transcurrido el tiempo indicado
proceder a analizar las muestras en un espectro fotmetro con un barrido simple. (VER
MANUAL DE USO).

Terminado el anlisis realizar los clculos para determinar la concentracin de protenas en

la muestra seleccionada.

PREPARACIN DEL REACTIVO DE BIURET

Pesar 1.5 g de CuSO45H2O y 6.0 g de tartrato de sodio y potasio. Disolver en 500 mL de

agua destilada y adicionar 300 mL de una solucin de NaOH al 10%.

A la solucin anterior aforar a 1000 mL con agua destilada y almacenar el reactivo en un

frasco mbar.
 ANEXOS
TABLA N1

Biuret Volumen
Tubos ml H2O ml (ml) Total
H2O (ml)
Blanco 0 0 0 3000 3 1 4
1 1500 1,5 1500 1,5 1 4
M1 2 1750 1,75 1250 1,25 1 4
3 3000 3 0 0 1 4
4 1500 1,5 1500 1,5 1 4
M2 5 1750 1,75 1250 1,25 1 4
6 3000 3 0 0 1 4
7 1500 1,5 1500 1,5 1 4
M3 8 1750 1,75 1250 1,25 1 4
9 3000 3 0 0 1 4

i
El procedimiento se realiz con tres replicas de la muestra original.
ii
Para llegar a un pH neutro si es necesario lavar usando una solucin de NaOH 0,03%. Utilizar
(H2O TIPO I)
iii
Muestra para corregir la Abs. y calibrar el equipo.