Preinforme de Bioprocesos 2da Unidad B2

Grupo B2: Preinforme de
Bioprocesos 2da Unidad Cultivo

Celular por lote alimentado con
aireacin de Saccharomyces
Cerevisiae ATCC 4126
Curso:
Bioprocesos
Docente:
Augusto Castillo Caldern
Integrantes:
Diestra Galarreta Alex

Escudero Jaramillo Fred
Guzman Serrano
Wilmer
Jara Paz ngel
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
2
LABORATORIO DE BIOPROCESOS
CULTIVO CELULAR POR LOTE ALIMENTADO CON

AIREACIN DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE ATCC
4126
I. OBJETIVOS
1.1. Generales:
Disear y realizar una experiencia de cultivo celular por lote alimentado (CLA) con
alimentacin constante utilizando una cepa de Saccharomyces Cerevisiae ATCC
4126.
1.2. Especficos:
Disear un medio de cultivo

Realizar la activacin celular y desarrollo del inoculo.
Identificar y describir las partes, accesorios y geometra, conocimiento de la
operacin del fermentador, esterilizacin, carga y descarga y toma de muestras.
Identificar en el fermentador los instrumentos de medicin y control automtico,
as como la calibracin de los sensores.
Puesta en marcha el CLA. En el cultivo por lote determinar Max y .
Obtener los perfiles de masa celular, fuente de carbono y oxigeno disuelto a travs
del tiempo total de fermentacin en el birreactor.
Observar las zonas de crecimiento exponencial y limitado.
Determinar y del CLA.
DESARROLLO DEL INOCULO Y CULTIVO CELULAR POR LOTE

3
II. METODOLOGIA EXPERIMENTAL:
2.1. Diseo del Medio de Cultivo
Para disear un medio de cultivo es necesario conocer la composicin elemental del

M.O. Diseo de los medios de Mantencin, Activacin y Cultivo para Saccharomyces
Cerevisiae ATCC 4126. m = 0.37 h-1 en sacarosa a 35C.
MEDIO NUTRIENTE CONCENTRACIN (G/L)
3
Extracto de levadura
5
Peptona
SLIDO DE MANTENCIN 3
Extracto de Malta
20
Agar
10
Glucosa
15
Sacarosa
3
ACTIVACIN
5
Extracto de Malta
T 35C, 200 rpm Solucion de Sales 5ml/L
Sacarosa 15
Extracto de Levadura 1.8
Sulfato de Amonio (NH4)2SO4 0.23077

PRE-FERMENTACIN
Fosfato de Potasio KH2PO4 0.0036
35C y 150 rpm Sulfato de Magnesio 0.5173
Heptahidratado MgSO4.7H2O
Solucin de Sales 10ml/L
Tampn Citrato pH 4.2 100ml/L

4
Sacarosa 0.32

FERMENTACIN en CLA
Para 2 litros Fosfato de Potasio KH2PO4 0.037
Sulfato de Magnesio 0.022
pH 4.2
Composicin de Solucin de Sales 100 veces concentrado, utilizadas en los medios de

cultivo en g/L: 1,12 CaCl2.2H2O; 0,11 ZnSO4.7H2O; 0.06 FeSO4.7H2O; 0.05 CuSO4.5H2O;
0.01 CoCl2.6H2O; 0.0005 MoO3; 0.027 MnCl2.6H2O y 0.28 NaCl.
Determinacin de la concentracin de biomasa para el medio de activacin:
- El medio de activacin contiene 15ml de medio, de lo cual tendramos que sacar

15ml segn X0: 15 v/v para inocular en el medio de fermentacin que es de 100
ml.
15 ml
15 ml 100 ml
Fuente Nutriente % clula %nutriente Yx/s So(g/L) Sò(g/L)

C C12H22O11 45 42.1 0.56 10 10

Ahora podemos hallar X: =

= 10 0.56 = . /

5
Determinacin de la concentracin de biomasa inicial para el medio de

fermentacin:
10 ml 100 ml
X=5.6g/L X0= ?
20 ml 100 ml
1 1 = 2 2
5.6 10 = 100
= . /
Calculando la concentracin de nutrientes para el medio de Pre-fermentacin
Xo: 20 v/v So: 5.36g/L, m = 0.37 h-1, Metabolismo aerobio: 0.5-0.6, trabajando con 0.6
Elemento Nutriente %celula %nutriente Yx/s So(g/L) Sò(g/L) So(gr)

C_Limit C12H22O11 45 42.1 0.56 3.2 3.2 0.32
N (NH4)2SO4 9 10.6 1.17 1.5385 2.3077 0.23077
P KH2PO4 2 29.8 14.9 0.1208 0.1812 0.01812
K KH2PO4 0.5 37.5 75 0.024 0.036 0.0036
S MgSO4.7H2O 0.25 12.99 51.96 0.0346 0.0519 0.00519
Mg MgSO4.7H2O 0.4 9.74 24.35 0.0739 0.1108 0.01108
Aminocidos Extracto de ---- --- --- --- 1.8 0.18
Levaduras
Sacarosa C12H22O11, PM: 342
Sulfato de Magnesio Heptahidratado MgSO4.7H2O, PM: 246.3
Fosfato de Potasio KH2PO4, PM: 144
Sulfato de Amonio (NH4)2SO4, PM: 132
Yx/s = (Xf-Xo)/(So-Sf)

6
Ya que se empleara 3.2g/l de sustrato inicial de sacarosa, y teniendo en cuenta que

es una fermentacin aerobia se lograra producir 1.8 g/L de clulas lo cual nos dara
una variacin de biomasa igual a: Xf-Xo= 1.8 g/L
Teniendo en cuenta siempre elegir entre 2 nutrientes iguales los valores ms altos
para sustrato inicial.
Hallando el Xf, sabiendo que X=1.8 g/L:
Se trabajara con un Xf aproximado de 1.8 g/L
El tiempo que se estima para el CL es de 7 horas.
Calculando la concentracin de nutrientes para el medio de Fermentacin CLA
Si se consideran las mismas caractersticas del medio de pre-fermentacin para la etapa

inicial del CLA, la cual consiste en 1 Litro de medio en Lote, se tendr las siguientes
caractersticas: luego se utilizara un litro ms en el flujo para agregar al cultivo por lote
alimentado as es que los gramos de medio a utilizar sern:
Ya que al final del cultivo por lote alimentado se obtendr una concentracin de clulas de
3.64g/L, al inicio de la primera etapa en el cultivo por lote alimentado se agregaran las
sales necesarias para que se pueda obtener 3.64g/l pero el sustrato limitante (fuente de
carbono) se mantendr para 1.8 g/L de clula, ya que al inicio de la segunda etapa se
necesitar sales para obtener 3.64 g/L de clula. Por tanto en el cultivo por lote se
agregara en exceso las sales y aminocidos necesarios para obtener 3.64 g/L.
Elemento Nutriente %celula %nutriente Yx/s So(g/L) Sò(g/L) So(gr)

C_Limit C12H22O11 45 42.1 0.56 3.2 3.2 0.32
N (NH4)2SO4 9 10.6 1.17 3.11 4.67 0.467
P KH2PO4 2 29.8 14.9 0.24 0.37 0.037
K KH2PO4 0.5 37.5 75 0.05 0.07 0.007
S MgSO4.7H2O 0.25 12.99 51.96 0.07 0.11 0.011
Mg MgSO4.7H2O 0.4 9.74 24.35 0.15 0.22 0.022
Aminocidos Extracto de ---- --- --- --- 1.8 0.18
Levaduras

7
- Primera etapa del cultivo por lote alimentado:
Se tiene 1 litro de medio con una S0 inicial de 1.8g/l de sacarosa. Entonces de los clculos
anteriores se obtiene una concentracin inicial de:
1 1 = 2 2
1.8 100 = 2 1000

0 = 0.18

Viendo que esta concentracin es supuestamente la ideal tendremos una concentracin

menor a esta, sera mucho mejor extraer el inoculo en su fase exponencial pero ya que no
se va a poder por lo motivos antes descritos, sacaremos el inculo a una concentracin de
0.9 gr/l, para un litro de Bach que contiene 15 gr/l de sustrato se obtendr una
diferencial de concentracin de 8.4 gr/l de clula, entonces se espera de 3 4 horas para
obtener un crecimiento exponencial y aqu daremos inicio al cultivo por lote alimentado .
-Segunda etapa de cultivo por lote alimentado:
Para la alimentacin del lote alimentado (SF), donde tendr un X0 de 1.8 g/L y se desea
obtener un concentracin de clulas final de 3.64 g/L, lo cual se determino mediante la
siguiente ecuacin:
= 0 0
Donde = 3 y = 1.5, porque es en la etapa de transicin. Reemplazando los datos

obtenemos:
1.5 = 1.8 1 0.373
= . /
Despus de la etapa de transicin se asume que la concentracin es constante

(crecimiento limitado), entonces el Xf=3.64g/L.
Elemento Nutriente %celula %nutriente Yx/s Sf(g/L) So(gr)

C_Limit C12H22O11 45 42.1 0.56 6.5 0.65

8
- Calculamos el flujo para un tiempo de 6 horas y un incremento de volumen de

1L:
= /
= 1000 /360
= 2.8/
= . /
- Para graficar la curva del crecimiento se tomaran 6 puntos en un tiempo de

3.5 horas .Cada punto cada punto en un lapso de 35 minutos.
- Hallando la concentracin de sustrato limitante en la alimentacin:
0 0 = + 0 0 + 0 0
Donde: = 0.371, 0 = 1 , 0 = 1.8/, = 3, = 0.17/, 0 = 0,

= 0.56
Por lo tanto: = . /

9
- Hallando el sustrato final (S):

=
( 1) + (0 0 + 0 0 )
Reemplazando obtenemos:
= 0.0453/
RESUMIENDO:
F= 0.17L/h X=3.64g/L
SF= 12.82g/L Condiciones finales S=0.0453g/L
V=2L
V X0=1.8g/L
V0 Condiciones iniciales S0=0

V0=1L
t=6 h
- La velocidad de aireacin (Q):
vvm=Q/volumen del liquido de fermentador
vvm= 0.5 2 a nivel de laboratorio
Volumen del liquido de fermentacin = 2 litros
Q=1.5*2 =3litros /min

10
2.2. Preparacin del Medio de cultivo
a) PREPARACIN DEL MEDIO DE MANTENCIN SOLIDO
Adicionar los componentes previamente pesados

segn la Tabla 02 a una fiola de 50ml
Aforar con agua destilada
Llevar a calentar en agua hasta 2 minutos en Partir de la aparicin de la 1

ebullicin burbuja en el agua.
mL de esta solucin en 6 tubos con tapa En caliente e

inmediatamente taparlos
Colocar los tubos en un vaso de precipitado y Aflojar un poco las tapas de

Esterilizar hasta 121C durante 15minutos los tubos dentro de la olla a
presin para facilitar el
intercambio de gases.
Ajustar las tapas de los tubos Luego de la olla a

presin
Dejar los tubos a temperatura ambiente en

posicin inclinada para que se solidifique

11
b) PREPARACON DEL MEDIO DE ACTIVACION
Pesar los componentes para el medio de activacin de

25 mL segn la TABLA N02
Preparar por separado el Extracto de Levadura en un

tubo de ensayo - enrazar hasta 5mL con agua destilada
Preparar las Sales en otro tubo de ensayo

- enrazar hasta 8 mL con agua destilada
Preparar la Glucosa en un matraz de 125 mL

- con 12 mL de agua destilada -
Esterilizar a 30C durante 15 minutos
Proceder a enfriar y no mezclar los nutrientes hasta el

dia de la activacin
Tapar bien para proceder a la siembra del inoculo

12
c) PREPARACIN DEL MEDIO DE PRE-FERMENTACIN
Pesar los componentes para el medio de Fermentacin

de 100 ml segn la TABLA N 02

tubo de ensayo - enrazar hasta 10ml con agua
destilada
Preparar las Sales en otro tubo de ensayo enrazar

hasta 10ml con agua destilada
Preparar la Sacarosa en un matraz de 100 ml - con

55 ml de agua destilada+10ml de tampn+15ml de
inoculo
Agregar en el matraz de 100ml el preparado de

extracto de le Levadura y Sacarosa

dia de la fermentacin
Tapar bien y esperar para proceder a la siembra del

inoculo para la fermentacin

13
d) PREPARACIN DEL MEDIO DE FERMENTACIN
Pesar los componentes para el medio de Fermentacin

de 2 litros segn la TABLA N 02

tubo de ensayo - enrazar hasta 10ml con agua
destilada
Preparar las Sales en otro tubo de ensayo enrazar

hasta 10ml con agua destilada
Preparar la Sacarosa en un matraz de 100 ml - con

55 ml de agua destilada+10ml de tampn+15ml de
inoculo
Agregar en el matraz de 100ml el preparado de

extracto de le Levadura y Sacarosa

dia de la fermentacin
Tapar bien y esperar para proceder a la siembra del

inoculo para la fermentacin

14
2.3. PROGRAMA DE MUESTREO
Vista de la hoja de muestreo
Cultivo por lote alimentado aireado

Grupo:..
Da de la experiencia:
Microrganismo: Fuente carbono..
pH:..T C:Nrpm :.........
N Hora Tiempo Absorbancia Oxigeno Nombre Observaciones

disuelto del
% oxigeno

15
2.4. CULTIVO DE MICROORGANISMOS
a) PARA EL MEDIO DE MANTENCIN
Esterilizamos la zona de trabajo y los instrumentos,

trabajando siempre junto al mechero.
Extraer la cepa de Saccharomyces Cerevisiae ATCC 4126

con una asa de Siembra expandiendo bien sobre la
superficie del agar
Observando la muestra
para que se propague
Siempre flameando, proceder a inocular en el medio de bien (2 a 5h) Tomar el
agar solido y dejar en la incubadora a 35C tiempo a partir de la
aparicin de la 1
burbuja en el agua.
Luego de haberse infestado el medio de agar solido

proceder a refrigerar para su posterior uso agregar 7
mL de esta solucin en 6 tubos con tapa
b) PARA EL MEDIO DE ACTIVACIN
Activar las clulas (Saccharomyces Cerevisiae ATCC

4126)
de agar en incubadora a 35C durante 2 horas
Inocular las Clulas Activas del medio de Mantencion,

tomando una a 2 asadas de una de las cepas
Llevar al Shaker a 35C y 200rpm durante horas

16
c) PARA MEDIO DE PRE-FERMENTACIN
Activar las clulas (Saccharomyces Cerevisiae ATCC 4126)
de agar en incubadora a 35C durante 2 horas
Inocular las Clulas Activas del caldo de activacin y

sembrar en el medio de fermentacin
Llevar al Shaker a 35C durante 10 horas
d) PARA MEDIO DE PRE-FERMENTACIN
Una ves terminado el tiempo de pre-fermentacin, se procede

a agitar bien
Luego se procede a inocular en el medio de fermentacin
Observar el comportamiento las 3 primeras horas del CLA,

luego de este tiempo se procede a alimentar el lote

17
2.5. METODOS ANALITICOS
2.5.1. Determinacin de Azucares Reductores DNS
La preparacin del reactivo DNS se requiere de lo siguiente:
REACTIVOS CONCENTRACIN PARA 100 mL

cido 3,5 dinitrosalicilico
10 g/l 1g
(DNS)
NaOH 2N 200 mL/l 20 mL
Tartrato de sodio y potasio
300 g/l 30 g
tetrahidratado.
Clculo de la cantidad de NaOH Concentrado a utilizar:
Datos: V= 20 mL= 0.020 lt, N = 2 N,
PM (NaOH) = 40
Entonces:
= 0.02 40 2
= .
Cantidad de NaOH Concentrado que se necesita para preparar 20ml de NaOH a 2N

18
Determinacin de Azucares reductores:
Rotular tubos de ensayo con tapa segn el nmero de muestras Evaluadas

durante la Cintica de Crecimiento ms un tubo para el BLANCO
Luego aadir a cada tubo 1 mL de la muestra y al tubo para

el Blanco aadir 1 mL de agua destilada
Agregar 1 mL del reactivo de DNS a cada tubo
Colocar todos los tubos en agua hirviendo durante 5 minutos
Enfriar en agua helada y luego adicionar 10ml de agua

destilada a cada tubo
AGITAR todas las muestras y colocarlas en una rejilla.
Leer la ABSORBANCIA a 540 nm en el

ESPECTROFOTOMETRO

19
2.5.2. Determinacin de la concentracin celular por D.O.
Preparar 8 tubos de ensayo sin tapa y gruesos
Tener como base 5 ml de

Adicionar caldo de clulas + agua destilada especificado
dilucin (caldo de clulas +
en la Tabla 03
agua destilada)
Leer la Absorbancia en el Espectrofotmetro, anotar las Realizar los siguientes

pasos para los 8 tubos
lecturas
Llevar a la Centrifuga a 1200 rpm por 20 minutos
Sacar el tubo y realizar un primer lavado con agua destilada y botar el

sobrenadante (previamente pesados).
Luego volvemos a colocar el mismo tubo con 5mL de agua destilada a la

centrifuga durante 20 min.
Realizar un segundo lavado, volver a centrifugar y botar el sobrenadante
Luego del segundo lavado, echar agua destilada a las clulas, llevar el
tuvo al agitador de tubos y echar las clulas a los capachitos
Cuando ya tenemos todos los capachitos listos con las clulas, los
colocamos en la estufa a 80 C por 24 horas
Cuando ya han secado, los pesamos y obtenemos el peso seco de las

clulas por diferencia de peso. Anotamos en la Tabla 03

20
III. MATERIALES , INSTRUMENTOS Y REACTIVOS
Material Biolgico:
Cepa de Saccharomyces Cerevisiae ATCC 4126.
Medio de Cultivo:
Agar
Peptona
Extracto de Levadura
Agua destilada.
Xilosa
Reactivos:
K2HPO4
DNS (ACIDO DINITROSALICILICO)
NH4Cl
MgSO4.7H2O
KCl

21
Instrumentos:
Balanza analtica:
El espectrofotmetro
La autoclave
La centrifuga
El shaker
La incubadora
Horno de esterilizacin (la estufa)
Agitador
Asa bacteriolgica.
Mechero bunsen.
Tubos de ensayo con tapa para medio de cultivo.
matraz 125 ml , 250 ml y 1 litro
Papel para hacer los capachos de muestra.
Esptula.
Micro pipeta.
Matraz de 200ml.
Picetas.
Pipetas de 1 ml y 10ml
Gradillas
Papel aluminio ,algodn y gasa (para los tapones de los matraces)
Alcohol
Fosforo

22
IV. CRONOGRAMAS DE ACTIVIDADES Y TAREAS
ACTIVIDADES FECHA
12/11/12
Recoleccin de informacin. 28/11/12
Resembrado Celular
Obtencin de la Curva de Calibrado para Azucares Reductores:
MTODO DEL DNS
Hidrlisis Acida de la Sacarosa. 07/11/12
Preparar una Solucin de NaOH 2 N.
Obtencin de Azucares Reductores: Mtodo del DNS
para la Sacarosa Hidrolizada.
Obtencin de la Curva de Calibrado para Biomasa
Activacin celular.
Esterilizar pipetas por 2 horas a 140C.
Acopio y Codificacin de Viales para recibir muestras. 14/11/12
Acondicionar canastillas en el SHAKER.
Pesar capachos para curva de biomasa rpida.
Inicio de la cintica de medio de activacin

Inicio de la cintica de medio de activacin

Preparacin y Esterilizacin del Medio de Activacin para el
inculo. 20/11/12
Preparacin y Esterilizacin del Medio de Pre- Fermentacin
Resembrado en el medio de Pre -ermentacin
INICIO DE CINETICA LOTE ALIMENTADO
21/11/12
TOMA DE MUESTRAS
Discusin y conclusin de la experiencia:
Determinacin de Azcares Reductores. 28 /11/12
Determinacin de Alcoholes.
Presentacin del informe final. 29/11/12
Sustentacin del informe. 29/11/12

23
V. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA
http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/ClaseProca
riontes/Alejandra/Pr%C3%A1ctica%201%20T%C3%A9cnica%20as%C3%A9ptica.pdf
http://www.laboratoriosmicrokit.com/docs/..%5Cmanual%5CKits-C.pdf.
http://www.monografias.com/trabajos15/lactobacilos/lactobacilos.shtml
QUINTEROS RAMIREZ Rodolfo, Ingeniera Bioqumica.
http://es.scribd.com/doc/14173118/4-Esterilizacion-y-Preparacion-de-Medios-de-
Cultivo
VI. ANEXOS
Para disear un medio de cultivo es necesario conocer la composicin elemental del M.O
Elemento % De composicin
elemental
Carbono 45
Nitrgeno 9
Magnesio 0.4
Azufre 0.25
Potasio 0.5
Fosforo 2
Tabla 01: Lane, M. y Morrisey, J. 2010

24
Tabla 02: Requerimiento de nutrientes para la preparacin del Medio de Mantencin

Activacin, Pre-Fermentacin y Fermentacin
MEDIO NUTRIENTE CONCENTRACIN (G/L)
3
5
Peptona
SLIDO DE MANTENCIN 3
Extracto de Malta
20
Agar
10
Glucosa
15
Sacarosa
3
ACTIVACIN
5
Extracto de Malta
T 35C, 200 rpm Solucion de Sales 5ml/L
Sacarosa 15

PRE-FERMENTACIN
Fosfato de Potasio KH2PO4 0.0036
35C y 150 rpm Sulfato de Magnesio 0.5173
Tampn Citrato pH 4.2 100ml/L

25
Sacarosa 0.32

FERMENTACIN en CLA
Para 2 litros Fosfato de Potasio KH2PO4 0.037
Sulfato de Magnesio 0.022
pH 4.2
TABLA 03:
N Caldo Agua ABS Peso (gr) Peso (gr) Peso seco X

Capacho m.o (ml) (ml) (640nm) Capacho Capacho clulas (gr) (gr/l)
+ clulas
1 5,0 0,0
2 4,0 1,0
3 3,5 1,5
4 3,0 2,0
5 2,5 2,5
6 2,0 3,0
7 1,0 4,0
8 0,5 4,5
REFEREN 0,0 5,0
CIAL

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Bioprocesos 2da Unidad Cultivo

Augusto Castillo Caldern

Diestra Galarreta Alex

CULTIVO CELULAR POR LOTE ALIMENTADO CON

Disear un medio de cultivo

DESARROLLO DEL INOCULO Y CULTIVO CELULAR POR LOTE

II. METODOLOGIA EXPERIMENTAL:

2.1. Diseo del Medio de Cultivo

Para disear un medio de cultivo es necesario conocer la composicin elemental del

MEDIO NUTRIENTE CONCENTRACIN (G/L)

Extracto de Levadura 1.8

Sulfato de Amonio (NH4)2SO4 0.23077

Solucin de Sales 10ml/L

Tampn Citrato pH 4.2 100ml/L

DESARROLLO DEL INOCULO Y CULTIVO CELULAR POR LOTE

Extracto de Levadura 1.8

Sulfato de Amonio (NH4)2SO4 0.467

Solucin de Sales 10ml/L

Composicin de Solucin de Sales 100 veces concentrado, utilizadas en los medios de

Determinacin de la concentracin de biomasa para el medio de activacin:

- El medio de activacin contiene 15ml de medio, de lo cual tendramos que sacar

Fuente Nutriente % clula %nutriente Yx/s So(g/L) S`o(g/L)

DESARROLLO DEL INOCULO Y CULTIVO CELULAR POR LOTE

Determinacin de la concentracin de biomasa inicial para el medio de

Calculando la concentracin de nutrientes para el medio de Pre-fermentacin

Elemento Nutriente %celula %nutriente Yx/s So(g/L) S`o(g/L) So(gr)

Sacarosa C12H22O11, PM: 342

Sulfato de Magnesio Heptahidratado MgSO4.7H2O, PM: 246.3

Fosfato de Potasio KH2PO4, PM: 144

Sulfato de Amonio (NH4)2SO4, PM: 132

DESARROLLO DEL INOCULO Y CULTIVO CELULAR POR LOTE

Ya que se empleara 3.2g/l de sustrato inicial de sacarosa, y teniendo en cuenta que

Hallando el Xf, sabiendo que X=1.8 g/L:

Se trabajara con un Xf aproximado de 1.8 g/L

El tiempo que se estima para el CL es de 7 horas.

Calculando la concentracin de nutrientes para el medio de Fermentacin CLA

Si se consideran las mismas caractersticas del medio de pre-fermentacin para la etapa

Elemento Nutriente %celula %nutriente Yx/s So(g/L) S`o(g/L) So(gr)

DESARROLLO DEL INOCULO Y CULTIVO CELULAR POR LOTE

- Primera etapa del cultivo por lote alimentado:

1.8 100 = 2 1000

Viendo que esta concentracin es supuestamente la ideal tendremos una concentracin

-Segunda etapa de cultivo por lote alimentado:

Donde = 3 y = 1.5, porque es en la etapa de transicin. Reemplazando los datos

1.5 = 1.8 1 0.373

Despus de la etapa de transicin se asume que la concentracin es constante

Elemento Nutriente %celula %nutriente Yx/s Sf(g/L) So(gr)

DESARROLLO DEL INOCULO Y CULTIVO CELULAR POR LOTE

- Calculamos el flujo para un tiempo de 6 horas y un incremento de volumen de

- Para graficar la curva del crecimiento se tomaran 6 puntos en un tiempo de

- Hallando la concentracin de sustrato limitante en la alimentacin:

Donde: = 0.371, 0 = 1 , 0 = 1.8/, = 3, = 0.17/, 0 = 0,

DESARROLLO DEL INOCULO Y CULTIVO CELULAR POR LOTE

- Hallando el sustrato final (S):

SF= 12.82g/L Condiciones finales S=0.0453g/L

V0 Condiciones iniciales S0=0

- La velocidad de aireacin (Q):

vvm=Q/volumen del liquido de fermentador

vvm= 0.5 2 a nivel de laboratorio

Volumen del liquido de fermentacin = 2 litros

Q=1.5*2 =3litros /min

DESARROLLO DEL INOCULO Y CULTIVO CELULAR POR LOTE

2.2. Preparacin del Medio de cultivo