Validación de Métodos

Cronograma
Escribir
SEGUNDA PARTE
Introduccin Terico-Prctica al Concepto de Incertidumbre (continuacin).

Las herramientas cualimtricas bsicas de la validacin.
Las herramientas cualimtricas bsicas de la validacin (continuacin).

Herramientas de control.
Realizacin de actividades integradoras.
1
Ejemplos
Escribir
A continuacin se muestran algunos

ejemplos para las distintas estrategias
de clculo de la incertidumbre
2
Estimacin de la incertidumbre
Escribir
ISO,
Ejemplos EURACHEM / CITAC.
Estandarizacin de soln. de NaOH.
Una solucin de NaOH es valorada con ftalato cido

de potasio (KHP) (droga patrn primario)
[NaOH] aproximada: 0.1 m l-1
Punto final determinado instrumentalmente (titulador

automtico - potenciomtrico)
KHP provee trazabilidad al Sistema Internacional
3
Escribir
ISO,
Secado, de acuerdo
a instrucciones
Pesar aprox. como
para gastar 19 ml
Ultimo digito de la balanza: 0.1 mg
[NaOH] 0.1 m l-1 ( 4 g de NaOH)
Titulador automtico, punto final potenciomtrico
4
Escribir
ISO,
5
Escribir
ISO,
Diagrama de causa y efecto: Magnitudes principales
6
Escribir
ISO,
Diagrama de causa
y efecto: Todas las
fuentes
7
Escribir
ISO,
Masa de ftalato mKHP
tara y sustancia
Incertidumbre de variabilidad interpesadas

la calibracin (repetibilidad)
Sensibilidad Linealidad
Si la pesada es efectuada sobre

la misma escala y en un rango
pequeo estas pueden
despreciarse
8
Escribir
ISO,
Pureza del patrn

primario PKHP
Provista por el fabricante:

1.0000 0.0005
Deben seguirse los pasos

recomendados por el fabricante para
el proceso de secado del patrn
9
Escribir
ISO,
Masa Molar
(C8H5O4K) MKHP
La incertidumbre de la masa molar se

estima combinando las incertidumbres
de los pesos atmicos de los elementos
constituyentes.
Una tabla de pesos atmicos incluyendo la

incertidumbre estimada es publicada bienalmente por
la IUPAC en el Journal de Qumica Pura y Aplicada
10
Escribir
ISO,
Volumen emitido por

VT la bureta-pistn
Repetibilidad
Calibracin
Diferencias de temperatura entre laboratorio y la

utilizada para calibrar la bureta-pistn
Deteccin del punto final
Inexactitud en el mtodo Repetibilidad Diferencia entre el punto

matemtico final y el equivalente
(absorcin de carbonatos,
etc.)
11
Escribir
ISO,
Es posible combinar
todas las
contribuciones a la
repetibilidad en un
solo trmino global y
de esta forma utilizar
En nuestro ejemplo la los valores obtenidos
validacin del mtodo muestra durante la validacin
una repetibilidad para la del mtodo
titulacin de 0.05 %.
12
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ISO,
Recpiente + KHP: 60.5450 g (observado)

Recpiente - KHP: 60.1562 g (observado)
mKHP KHP 0.3888 g (calculado)
No es necesario tener en cuenta la repetibilidad de las pesadas

(trmino global de arriba)
Se cancelar cualquier diferencia sistemtica presente
La sensibilidad es despreciable si se utiliza la misma escala y un rango

pequeo de pesada
Solo la incertidumbre por linealidad participa significativamente
13
Escribir
ISO,
Solo la incertidumbre por linealidad participa significativamente
Certificado de calibracin de la
0.15 mg
balanza (linealidad)
Distribucin Incertidumbre
rectangular estndar
14
Escribir
ISO,
PKHP Provista por el fabricante:

1.0000 0.0005
No existe informacin
Se supone una
adicional por parte del
distribucin rectangular
fabricante
Incertidumbre
estndar
15
Escribir
ISO,
Masa Molar
MKHP (C8H5O4K)
Se trata como distribucin rectangular
16
Escribir
ISO,
VT Volumen emitido por la bureta-pistn
Repetibilidad del volumen dispensado: Distribucin

Ya es tenida en cuenta en el trmino global triangular
Calibracin: Para la bureta-pistn de 20 ml

el fabricante indica 0.3 ml.
Temperatura: Posible variacin de la
temperatura en el laboratorio 3 oC (95
% de confianza).
Deteccin del p. final: Atmsfera de Coeficiente de expansin de volumen

argn, titulacin fuerte-fuerte. para agua: 2.1 x 10-4 oC-1
Incertidumbre despreciable
17
Escribir
ISO,
Volumen gastado en la titulacin: VT = 18.64 ml
Incertidumbre en VT
18
Escribir
ISO,
Resumiendo
19
Escribir
ISO,
20
Escribir
ISO,
21
Escribir
ISO,
Incertidumbre Expandida
U c (cNaOH ) = 2 cNaOH 0.0097mol.l 1
22
Escribir
ISO,
Repetibilidad
Calibracin de la La mas
u(VT) es la bureta-pistn importante
componente
mas Diferencia entre la
importante temperatura de calibracn Depende del
y la de operacin fabricante
Repetibilidad en la
deteccin del punto final
23
Estimacin de la incertidumbre a partir
Escribir
de
resultados de Ejercicios Interlaboratorios
Colaborativos. Ejemplos EURACHEM / CITAC.
Ventajas
Engloba las fuentes y facilita enormemente la estimacin de la
incertidumbre.
Inconvenientes
No disponibilidad de los datos del ejercicio interlaboratorio.
La incertidumbre determinada puede no ser representativa del
laboratorio
24
Escribir
de
Los resultados obtenidos desde una

participacion en un ejercicio colaborativo entre
laboratorios pueden utilizarse a los fines de
cuantificar la incertidumbre de los resultados
generados (Condiciones de reproducibilidad)
25
Escribir
de
Aumenta variabilidad
Repetibilidad Reproducibilidad
Informacin desde ejercicios

inter-laboratorios
Cuantificacin bajo mxima

agrupacin de las fuentes
de incertidumbre
26
Escribir
de
Ventajas
Los errores sistemticos y aleatorios que ocurren dentro de los laboratorios
individuales se convierten en errores aleatorios entre laboratorios cuando se
observan desde un nivel superior
Incluye factores individuales intrnsicamente desconocidos
Limitaciones
Disponibilidad de informacin interlaboratorio
Seleccin de los laboratorios
Las estimaciones de la reproducibilidad individual pueden no ser representativas
Algunos de los componentes de la incertidumbre (muestreo, pretratamiento)

pueden no estar incluidos
Diferencias entre medidas pasadas y condiciones actuales del laboratorio
27
Escribir
de
Determinacin de fibra cruda en alimentos para animales
Fibra cruda se define como la cantidad de sustancia orgnica libre de

grasa la cual es insoluble en medio cido y alcalino.
El procedimiento esta estandarizado
Cambios en el procedimiento producen cambios en el mensurando

(Mtodos empricos)
Se disponen de resultados de ejercicios colaborativos entre

laboratorios para este mtodo estndar (repetibilidad y
reproducibilidad)
No hay disponibilidad de materiales de referencia para este mtodo
28
Escribir
de
29
Escribir
de
30
Escribir
de
31
Escribir
de
32
Escribir
de
33
Escribir
de
34
Escribir
de
Resultados de EIC
Cinco muestras representativas de diferentes alimentos para

animales estuvieron sujetas a la prueba
Los participantes de la prueba llevaron a cabo todas las etapas del

mtodo incluyendo la molienda de las muestras.
Se evalu la repetibilidad in house (en un batch) para alimentos

con concentraciones de fibra similares a las muestras analizadas en
la prueba colaborativa (Eval. Interna). Cada estimacin fue
replicada 5 veces.
35
Escribir
de
Es aceptable utilizar la
desviacin estndar de Comparables
reproducibilidad
36
Escribir
de
A los fines de la cuantificacin de la incertidumbre deben

considerarse efectos no tenidos en cuenta en el ejercicio
Incert. estndar
Contenido de Incert. estndar
relativa
fibra (%p/p) u(Cfibre) (%p/p)
u(Cfibre)/ Cfibre (%p/p)
2.5 0.29 0.12
5 0.4 0.08
10 0.6 0.06
37
Escribir
de
Incert.
Contenido de fibra Incert. expandida
expandida
(%p/p) como CV (%)
U(Cfibre) (%p/p)
2.5 0.62 25
5 0.8 16
10 1.2 12
38
Escribir
de
Ventajas
Implica podo esfuerzo adicional pues siempre
debe determinarse trazabilidad y precisin en
condiciones de reproducibilidad interna.
Menos costosa que la aproximacin ISO
39
Escribir
de
informacin de la Validacin del Mtodo.
Inconvenientes
No disponibilidad de un adecuado material de referencia

con elevada jerarqua metrolgica.
Pueden existen factores que pueden no variar
representativamente al momento de determinar la
trazabilidad.
No permite cuantificar las fuentes de manera individual.
En ocasiones es dificultoso el diseo experimental para
cuantificar alguna fuente de incertidumbre.
Sobrestimacin de algunas fuentes de incertidumbre.
40
Escribir
de
2 2
U = 2* u sesgo +u Re producibilidad
Se deben incluir todas las

fuentes de variacin en el
mtodo analtico
En el Proceso de Verificacin de la Trazabilidad (PVT ) se genera

informacin en condiciones intermedias de reproducibilidad
41
Escribir
de
42
Escribir
de
Ejemplo: PCB en sedimentos
Determinacin de la suma de 7 PCBs

1 Especificacin del Mensurando en sedimento por extraccin y GC-MS(SIM).
Se espera una incertidumbre ~ 20%
Cuantificacin u(Rw)
El CRM es certificado a 152 14 g/kg. La media de los
A: muestra de control resultados de la carta de control es 144. De acuerdo a esto bias
2 = 5.3%,
B: algunas etapas posiblemente Sbias = 8% (n=22)
no cubiertas por la muestra de u(Cref) 14 g/kg/1.96, lo que da 4.7% (relativa)
control
A: La muestra de control, que es un CRM, da una sRw = 8% al

nivel del 150 g/kg como material seco.
sRw = 8% es tambin empleado para establecer los lmites de la
carta de control.
Cuantificacin del bias del mtodo
3
y del laboratorio
B: el anlisis de la muestra de control incluye a todas las etapas
excepto el secado de la muestra para determinar su masa seca.
Se considera que la incertidumbre asociada a esta etapa es
insignificante.
43
Escribir
de
Convertir componentes a
4 incertidumbre estndar
u(x)
Calcular la incertidumbre estndar

5
combinada, uc
Calcular la incertidumbre
6
expandida, U = 2*uc
44
Escribir
de
Digitos relevantes
Cifras significativas fiables mas el primero
afectado por la
incertidumbre
Operaciones entre datos con diferentes cifras significativas:
El resultado final no puede tener mas cifras significativas que el

dato inicial con el menor nmero de las mismas.
No se deben redondear los datos iniciales, sino efectuar esta

operacin en el resultado final.
45
Cmo informar la Incertidumbre.
Escribir
Expresin de la incertidumbre
Intervalo de confianza (U)
El ltimo dgito significativo en el resultado

y en la incertidumbre debern coincidir
(1,23 0,08) mg/L (1,2305 0,08) mg/L (1,234 0,083) mg/L
46
Incertidumbre ISO. Incertidumbre
Escribir
de
medidas futuras
Medidas efectuadas con el instrumento calibrado
Utilizacin de la informacin generada en la calibracin.
La expresin de la incertidumbre depende de cmo se

ha calibrado el instrumento
Calibracin Tcnicas de Calibracin

local regresin global
47
Incertidumbre ISO. CalibracinEscribir
en un
punto
Instrumento patrn o patrn

Instrumento de medida
No se puede mostrar la imagen en este momento.

48
Escribir
de
medidas futuras utilizando calibracin
local
Expresin de una medida futura corregida:
Valor corregido = valor encontrado + correccin
Fuentes de incertidumbre:
Valor encontrado: precisin del instrumento, sinstrumento
Incertidumbre del
Clculo de la correccin:
proceso de calibracin
2 2
u(correccin) = u(valor generado) + u(valor encontrado)
49
Escribir
de
medidas futuras utilizando calibracin
local
Aplicacin de la ley de propagacin de errores
u (valor corregido) = u (correccin) 2 +u (instrumen to) 2

Sustituyendo
2 2
s s
u (valor corregido) = u 2
(valor generado) +
(instrumen
n
to)
+
(instrumen to)
N
n: nmero de medidas hechas en la calibracin para obtener valor encontrado
N: nmero de medidas hechas para obtener valor encontrado de una medida futura
(Normalmente N=1)
50
Ejemplo. Calibracin de un termmetro
Escribir
Termmetro de trabajo Termmetro certificado

Rango de trabajo: 20.0 30.0 0C 25.00 0C, U=0.05 0C
Se obtienen con nuestro

termmetro de trabajo a Con el termmetro
calibrar las sig. medidas: certificado se mide el
bao termostatizado:
1 25.60
2 25.55
3 25.55 Valor generado: 25.00 0C
4 25.40
U(valor generado) = 0.05/2 = 0.025
5 25.60
51
Escribir
Como se procede frente a una nueva medida con nuestro

termmetro calibrado localmente?
Se mide la temperatura de otro bao trmico
Nuevo valor encontrado = 27.30 0C
Valor corregido = nuevo valor encontrado + correccin

= 27.30 0.54 = 26.76 0C
52
Escribir
2 2
u (valor corregido) = u (nuevo valor encontardo ) + u (correccin) =
= s(instrumento)2 + u(correccin) 2 = (0.08)2 + (0.045)2 = 0.092
53
Escribir
54
Escribir
En general para el 95% de confianza

k=2 (
eff) grande
U = k*u = 2*0.092 = 0.18
Nuevo Valor: (26.76 0.18) oC
55
Escribir
56
Las herramientas cualimtricas.
Escribir
Parmetros estadsticos usados en el
tratamiento de datos analticos
Quimiometra
Estadstica aplicada a los datos qumico-analticos,

cuyo objetivo es ampliar y mejorar la informacin
analtica con ahorro de tiempo y esfuerzo
57
Escribir
Cualimetra
Quimiometra Informtica Calidad
58
Escribir
Por qu mediciones repetidas o

replicadas?
59
Las herramientas cualimtricas. Media
Escribiry
Varianza.
Parmetros estadsticos usados en

el tratamiento de datos analticos
Estimador del Estimador de

valor central la dispersin
Media
Varianza
aritmtica
60
Las herramientas cualimtricas. Media
Escribiry
Varianza.
Qu mide
y que nos
indica la
varianza?
61
Escribir
Distribucin Normal.
Media Desviacin
n
aritmtica estndar
Poblacin (n > 30)

Muestra (n < 30) x s
62
Escribir
Distribucin Normal.
Resultados de 50 determinaciones de concentracin de

NO3- en g/mL
0.51 0.51 0.51 0.50 0.51 0.49 0.52 0.53 0.50 0.47
0.51 0.52 0.53 0.48 0.49 0.50 0.52 0.49 0.49 0.50
0.49 0.48 0.46 0.49 0.49 0.48 0.49 0.49 0.51 0.47
0.51 0.51 0.51 0.48 0.50 0.47 0.50 0.51 0.49 0.48
0.51 0.50 0.50 0.53 0.52 0.52 0.50 0.50 0.51 0.51
63
Escribir
Distribucin Normal.
Tabla de frecuencias para medidas de

concentracin de ion nitrato
[NO3- / g/mL] Frecuencia
0.46 1
0.47 3
0.48 5
0.49 10
0.50 10
0.51 13
0.52 5
0.53 3
64
Escribir
Distribucin Normal.
Herramientas para graficar mediciones

repetitivas Histogramas
Curva de
distribucin
normal
+
rea total = 1 (100%)
# clases = n
65
Escribir
Distribucin Normal.
66
Escribir
Distribucin Normal.
La ecuacin de la 1
curva normal f ( x) = exp[( x ) 2 / 2 2 ]
viene dada por la 2
expresin
Los valores de x estn distribuidos

normalmente con promedio y una
varianza 2
x N ( , 2 )
Escribir
Distribucin Normal.
Funcin de densidad de probabilidad normal para distintos valores

de 2 y 2.
Escribir
Distribucin Normal.
La desviacin estndar, , mide la distancia desde la media, , hasta el

punto de inflexin de la curva.
Un 95% de los valores estn comprendidos en el interyalo 1,9600

.
Un 99% de los valores estn comprendidos en el intervalo 2,576

.
Un 99,7% de Ios valores estn comprendidos en el intervalo 3,290

.
69
Escribir
Distribucin Normal.
70

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Introduccin Terico-Prctica al Concepto de Incertidumbre (continuacin).

Las herramientas cualimtricas bsicas de la validacin (continuacin).

Realizacin de actividades integradoras.

A continuacin se muestran algunos

Una solucin de NaOH es valorada con ftalato cido

[NaOH] aproximada: 0.1 m l-1

Punto final determinado instrumentalmente (titulador

KHP provee trazabilidad al Sistema Internacional

Ultimo digito de la balanza: 0.1 mg

[NaOH] 0.1 m l-1 ( 4 g de NaOH)

Titulador automtico, punto final potenciomtrico

Diagrama de causa y efecto: Magnitudes principales

Masa de ftalato mKHP

Incertidumbre de variabilidad interpesadas

Si la pesada es efectuada sobre

Pureza del patrn

Provista por el fabricante:

Deben seguirse los pasos

La incertidumbre de la masa molar se

Una tabla de pesos atmicos incluyendo la

Volumen emitido por

Diferencias de temperatura entre laboratorio y la

Deteccin del punto final

Inexactitud en el mtodo Repetibilidad Diferencia entre el punto

Recpiente + KHP: 60.5450 g (observado)

No es necesario tener en cuenta la repetibilidad de las pesadas

Se cancelar cualquier diferencia sistemtica presente

La sensibilidad es despreciable si se utiliza la misma escala y un rango

Solo la incertidumbre por linealidad participa significativamente

Solo la incertidumbre por linealidad participa significativamente

PKHP Provista por el fabricante:

VT Volumen emitido por la bureta-pistn

Repetibilidad del volumen dispensado: Distribucin

Calibracin: Para la bureta-pistn de 20 ml

Deteccin del p. final: Atmsfera de Coeficiente de expansin de volumen

Volumen gastado en la titulacin: VT = 18.64 ml

U c (cNaOH ) = 2 cNaOH 0.0097mol.l 1

Los resultados obtenidos desde una

Informacin desde ejercicios

Cuantificacin bajo mxima

Seleccin de los laboratorios

Las estimaciones de la reproducibilidad individual pueden no ser representativas

Algunos de los componentes de la incertidumbre (muestreo, pretratamiento)

Diferencias entre medidas pasadas y condiciones actuales del laboratorio

Determinacin de fibra cruda en alimentos para animales

Fibra cruda se define como la cantidad de sustancia orgnica libre de

El procedimiento esta estandarizado

Cambios en el procedimiento producen cambios en el mensurando

Se disponen de resultados de ejercicios colaborativos entre

No hay disponibilidad de materiales de referencia para este mtodo

Cinco muestras representativas de diferentes alimentos para

Los participantes de la prueba llevaron a cabo todas las etapas del

Se evalu la repetibilidad in house (en un batch) para alimentos

A los fines de la cuantificacin de la incertidumbre deben

2.5 0.29 0.12

No disponibilidad de un adecuado material de referencia

Se deben incluir todas las

En el Proceso de Verificacin de la Trazabilidad (PVT ) se genera

Ejemplo: PCB en sedimentos

Determinacin de la suma de 7 PCBs

A: La muestra de control, que es un CRM, da una sRw = 8% al

Calcular la incertidumbre estndar

U = ku = 20.092 = 0.18