Identificaciones pigmentos superiores por cromatografa liquida de alta eficacia en fase

reserva
Para empezar que son los pigmentos superiores.

1-Para empezar los tejidos verdes de las plantas superiores contienen, por regla general,
la misma secuencia de carotenoides1 junto a las clorofilas2 a y b
Qu es un carotenoide? Los carotenoides son los responsables de la gran mayora de
los colores amarillos, anaranjados o rojos presentes en los alimentos vegetales, y tambin
de los colores anaranjados de varios alimentos animales. Desde el punto de vista
qumico, pertenecen a la familia de los terpenos, es decir estn formados por unidades de
isopreno ( cuarenta tomos de carbono).
Clorofila A: Pigmentos verdes de las plantas y de algunos microorganismos, que se encuentran
en los cloroplastos, responsables de la fotosntesis.

Clorofila B: La clorofila b caracteriza a los plastos de las algas verdes y de sus descendientes las
plantas terrestres (reino Plantae).

2.- Los pigmentosn se encuentran localizados en los cloroplastos, acumulndose mayoritariamente

en los tilacoides mientras que solamente se encuentran en concentraciones traza en la matriz o
estroma que rodea a estas membranas.

Los carotenoides, en las plantas, tienen almenas dos funciones fundamentales. Actan como
agentes foto protectores de la clorofila, enzimas y lpidos y son picmentos accesorios en la
fotosntesis ya que forman parte de los complejos clorofila-proteina , encargados de realizar el
trasporte electrnico y de la conversin de la energa luminosa en biomasa.
2.-Antes que nada que es la cromatografa de alta eficacia?
Es un tipo de cromatografa en columna utilizada frecuentemente en bioqumica y qumica
analtica. Tambin se la denomina a veces cromatografa lquida de alta
presin o cromatografa lquida de alta resolucin. Es una tcnica utilizada para separar
los componentes de una mezcla basndose en diferentes tipos de interacciones qumicas
entre las sustancias analizadas y la columna cromatografa.
En la Cromatografa lquida de alta resolucin el compuesto pasa por la columna
cromatografa a travs de la fase estacionaria (normalmente, un cilindro con pequeas
partculas redondeadas con ciertas caractersticas qumicas en su superficie) mediante el
bombeo de lquido (fase mvil) a alta presin a travs de la columna. La muestra a analizar es
introducida en pequeas cantidades y sus componentes se retrasan diferencialmente
dependiendo de las interacciones qumicas o fsicas con la fase estacionaria a medida que
adelantan por la columna. El grado de retencin de los componentes de la muestra depende
de la naturaleza del compuesto, de la composicin de la fase estacionaria y de la fase mvil.

3.- el avance en el conocimiento de los carotenoides ha sido consecuencia de la evolucin

de los mtodos cromatograficos. Los ms utilizados para el estudio de los pigmentos
fotosintticos, se pueden citar: la cromatografa en columna, la cromatografa en papel y
la cromatografa de capa fina. La primera permiti evidenciar la existencia de pigmentos
responsables del color en gran nmero de vegetales.
Esta tcnicas presentan limitaciones, como consecuencias de la labilidad de las
estructuras de los pigmentos que son especialmente sensibles a los efectos de la luz,
calor, oxgeno y a otras degradaciones qumicas.
La separacin por los carotenoides por cromatografa liquida de alta resolucin puesta en
eidencia por Fiksdhal en 1978 supuso un considerable avance en el estudio de los
pigmentos vegetales. Es el mtodo ms conveniente debido a la rapidez y resolucin que
ofrece el tipo de columnas utilizado.
Materiles para el desarrollo

Para el desarrollo se han utilizado hojas

Espinaca
Remolacha
Naranjo
SOLVENTE:
Metanol
Se agrega Carbonato de Calcio (CaCO3) para prevenir la formacin de teofilina, y de
cido ascrbico, como antioxidante.
El procedimiento se realiz con luz tenue de color verde y los extractos eran mantenidos
en frio.

Purificacin del extracto se realizo segn la tcnica descrita por Eskins y Dutton

EQUIPO
Bomba de alta presin
Inyector equipado con un deposito para la muestra
Electofotometro