FACULDADES METROPOLITANAS UNIDAS - FMU

ALBERTO ANDRADE LEITE

UTILIZAO DA FOTOMETRIA NO LABORATRIO DE ANLISES CLNICAS.

SO PAULO
2017
 ALBERTO ANDRADE LEITE

UTILIZAO DA FOTOMETRIA NO LABORATRIO DE ANLISES CLNICAS.

Trabalho de Concluso de Curso

apresentado ao curso de
graduao em Farmcia da FMU,
sob a orientao do Professor Dr.
Paolo Ruggero Errante.

SO PAULO
2017
 ALBERTO ANDRADE LEITE

UTILIZAO DA FOTOMETRIA NO LABORATRIO DE ANLISES CLNICAS.

Trabalho de Concluso de Curso

apresentado ao curso de
graduao em Farmcia da FMU,
sob a orientao do Professor Dr.
Paolo Ruggero Errante e aprovado
pelos membros da Banca
Examinadora abaixo:

___________________________________________
Professor Dr. Paolo Ruggero Errante PhD. Orientador
FMU

___________________________________________
Prof. (verificar a titulao do prof.) [nome do professor]
FMU

___________________________________________
Prof. (verificar a titulao do prof.) [nome do professor]
FMU

SO PAULO
2017
RESUMO

A fotometria estuda a propriedade que diferentes compostos qumicos possuem de

absorver radiaes eletromagnticas. Esta propriedade de absoro ocorre na
presena de uma luz branca polarizada e determinado comprimento de onda, a fim de
obter um valor especfico da concentrao de uma soluo. No setor de bioqumica
clnica o processo fotomtrico utilizado para traduzir a leitura da concentrao dos
compostos cromforos presentes nas reaes qumicas, em algarismos numricos no
display de um espectrofotmetro. Por se tratar de um mtodo rpido e eficaz, a
fotometria est presente em inmeros equipamentos utilizados nas rotinas dos
laboratrios clnicos e, atualmente os resultados dos exames laboratoriais tem
relevante importncia, pois compem a anamnsia de um indivduo junto com os
exames fsicos realizados nos consultrios mdicos. Os exames laboratoriais de
glicose, marcador para diabetes, creatinina e ureia, marcadores renais, dosados para
a elaborao deste trabalho, foram realizados no equipamento automtico randmico
de multiparmetros de bioqumica Cobas Integra 400 Plus, o qual utiliza o processo
de fotometria para a leitura da reao de ponto final enzimtica para glicose e reaes
cinticas para creatinina e ureia. Os resultados obtidos foram comparados com os
resultados de indivduos sadios no perodo de fevereiro de 2017 a junho de 2017 no
Laboratrio CDA de Anlises Clnicas do Hospital San Paolo.

Palavras-Chave: Fotometria, Colorimetria, Absoro, Diagnstico Laboratorial,

Anlises Clnicas.
JUSTIFICATIVA
Nas ltimas dcadas, as metodologias analticas utilizadas em laboratrios
clnicos evoluram. Isto se deu, devido necessidade de ter maior eficcia, segurana
e qualidade nos testes determinados nos modernos equipamentos multiparmetros
que, tem como base a metodologia fotomtrica ponto final (enzimtica/colorimtrica)
e cintica/colorimtrica que, auxiliou nos resultados indicados neste trabalho.
Para a obteno dos resultados, foi determinado o perfil glicmico de 49
indivduos incluindo os sexos feminino e masculino com diabetes e o perfil renal de 49
indivduos incluindo os sexos feminino e masculino com nefropatias em estudo
observacional descritivo quantitativo retrospectivo. Os resultados foram comparados
com grupo controle compostos por 98 indivduos sadios, sendo 49 indivduos sadios
para a comparao com os indivduos diabticos e 49 indivduos sadios para a
comparao com nefropatas. A mdia de idade foi entre 2570 anos para os
indivduos com diabetes e entre 3070 para os indivduos nefropatas. Os nveis
sricos de glicose estiveram aumentados no grupo de indivduos com diabetes, e para
creatinina e ureia mostraram-se elevados no grupo de pacientes com nefropatia. Na
comparao dos grupos com diabetes e nefropatia em relao ao grupo controle, foi
verificada uma diferena estatstica significativa para glicose, uria e creatinina
(p<0,0001, teste t de Student). Dessa forma o monitoramento da glicemia em
indivduos com diabetes e da funo renal em indivduos nefropatas primordial para
o acompanhamento e preveno das complicaes decorrentes dessas patologias.

OBJETIVO GERAL
Avaliar os nveis sricos de Glicose, Creatinina e Ureia em indivduos com
alteraes nesses marcadores, comparando-os com indivduos sadios, no
equipamento automtico randmico de multiparmetros de bioqumica Cobas Integra
400 Plus, onde empregado a metodologia de fotometria ponto final (enzimtica) e
cintica (colorimtrica).
METODOLOGIA
Foi realizado estudo observacional descritivo quantitativo retrospectivo,
onde foram includos 196 indivduos adultos divididos em dois grupos; 49 indivduos
diabticos (sexo feminino =15, sexo masculino = 34) e 49 indivduos nefropatas (sexo
feminino =21, sexo masculino = 28) comparados com 98 indivduos saudveis que
foram divididos em dois grupos, cada um com 49 indivduos (sexo feminino = 36, sexo
masculino = 62). Foram coletadas amostras de sangue em 3 dias alternados de cada
indivduo (5,0 mL) por puno de veia perifrica e separadas por centrifugao
(plasmas para os testes de glicemia e soro para os testes de ureia e creatinina), para
determinao dos marcadores glicose, creatinina e uria e dosados no equipamento
automtico de multiparmetros de bioqumica Cobas Integra 400 Plus, onde
empregado a metodologia de fotometria com reaes de ponto final e cintica, no
perodo de fevereiro de 2017 a junho de 2017. As anlises foram realizadas no
Laboratrio de Anlises Clnicas CDA do Hospital San Paolo, So Paulo, Brasil. O
projeto foi aprovado pelo comit de tica do Hospital San Paolo.
INTRODUO

a) Fotometria
A fotometria estuda a capacidade de compostos qumicos absorverem
radiaes eletromagnticas. Esta capacidade da absoro de uma determinada
radiao luminosa ocorre na presena de uma luz branca polarizada e de determinado
comprimento de onda, a fim de obter um valor especfico da concentrao de uma
soluo 1.
A luz branca polarizada ou a luz ultravioleta quando atinge uma molcula
de determinada soluo faz com que alguns de seus eltrons absorvam parte desta
energia incidente, passando dos estados de bases para os estados com maior nvel
de energia. O efeito excitatrio que uma radiao eletromagntica causa em uma
molcula depende de sua energia. Cada molcula atmica possui um espectro de
absoro de luz caracterstico que pode permitir a sua identificao atravs de um
aparelho denominado espectrofotmetro, o qual permite a leitura da concentrao dos
compostos cromforos presentes nas reaes qumicas 2.
As radiaes eletromagnticas so caracterizadas pelo valor de sua
energia (E) ou pelo seu comprimento de onda () e a relao entre ambas dada pela
equao: E = h. = h.c/; onde h = constante de Planck, = frequncia da radiao e
c = velocidade da luz (no vcuo). Portanto, a metodologia fotomtrica utilizada nos
espectrofotmetros manuais, semi-automtico ou nos multiparmetros automticos,
tem a finalidade de mensurar a absoro da luz pelos compostos cromforos
presentes nas solues analisadas. Para a leitura da absorvncia de cada analise
bioqumica feita nesses equipamentos, se faz necessrio a utilizao manual ou
automtica de um determinado comprimento de onda, o qual varia entre 400 nm a
800nm que a faixa de luz visvel ao olho humano, ou entre 200 a 400nm da faixa de
luz ultravioleta 3.
Os espectrofotmetros manual e semi-automtico so constitudos por uma
fonte de luz policromtica, como uma lmpada de hidrognio que fornece luz
ultravioleta; um monocromador, um prisma ou uma grade de difrao para dispersar
a luz (Figura 1); uma fenda que permite a passagem de um feixe monocromtico cujo
comprimento de onda depende da posio do prisma; uma cubeta que contm o
material em estudo que absorve a luz incidente; um detector ou clula fotoeltrica
sensvel radiao luminosa; e um medidor ou galvanmetro que recebe um sinal
eltrico da clula fotoeltrica e permite a leitura da intensidade de luz transmitida 3.

Figura 1 Esquema da Absorvncia em um Espectrofotmetro manual e

semiautomtico. Dentro do equipamento, ocorre a passagem de um feixe de luz
monocromtica atravs de uma soluo. Este feixe de luz mede a quantidade de luz
que foi absorvida por absorbncia e a quantidade de luz que atravessou essa soluo
pela transmitncia. Quando a luz polarizada atinge o prisma, ela separada em
diversos feixes com diferentes comprimentos de onda, permitindo determinao de
qual a quantidade de luz absorvida em cada comprimento de onda especfico.

Atualmente os espectrofotmetros manuais e semi-automticos (Figura 2 e

3), possuem pouqussimos utilizao nos laboratrios clnicos. Os analisadores
multiprocessadores randmicos automticos (Figura 4), otimizam o tempo da
produo analtica, aumentando a eficcia, rapidez, qualidade e segurana dos
resultados. As leituras dos valores finais das reaes so expressas em mg/dL, %,
U/L, mEq/L ou mmol/L. As concentraes dos compostos presentes nas maiorias das
metodologias realizadas na bioqumica clnica so determinadas pela absoro.
Esses compostos so denominados de cromforos, os quais absorvem uma
determinada onda de luz, refletindo outra. Esses compostos so obtidos pela reao
entre o composto a ser analisado e o reagente cromognico 4.
Figura 1 Espectrofotmetro manual.

Fonte: Dr. Sergio Pilling Professor de Fsico-Qumica Experimental I Bacharelado em Qumica

Engenharia Qumica Prof. Dr. Sergio Pilling Univap Universidade do Vale do Paraba 2012.

Neste tipo de equipamento manual, s medidas das absorvncias para

reao de ponto final de glicose plasmtica e, reaes de ponto final e/ou cinticas de
creatinina e ureia sricas, so realizadas pela introduo de cubetas na cmara de
leitura, onde uma cubeta ser o zero a qual contm o branco, outra com padro e a
terceira com a amostra teste. A metodologia de leituras se faz com o acerto do zero
com a cubeta com o branco, aps o acerto, retira a cubeta da clula de leitura e, em
seguida coloca-se a cubeta com o padro anotando-se a absorvncia, retirar e coloca
a cubeta com o teste, anotando-se a absorvncia. O clculo feito pela determinao
de um fator, onde pegamos o valor da absorvncia da amostra e dividimos pelo valor
de absorvncia do padro e multiplicamos pela concentrao do padro conhecida 5;

6.
Figura 3 Espectrofotmetro Semi-automtico Equipamento com fluxo continuo.

Fonte: Bioplus Produtos para Laboratrios Ltda. 2017.

Figura 4 Analisador Randmico Automtico Cobas Integra 400 plus

Fonte: Roche Diagnostics - 2007

O analisador randmico automtico multiparmetros Cobas Integra 400

plus, realiza automaticamente todos os testes bioqumicos solicitados em uma
determinada rotina laboratorial. s reaes desses testes so determinados atravs
de reaes de ponto final enzimtica e reaes cinticas e, so lidas pela metodologia
fotomtrica de absorvncia, polarizao de fluorescncia e turbidimetria, alm
determinaes eletrolticas realizadas nos eletrodos seletivos dos ons sdio, potssio
e cloro. Este tipo de equipamento foi desenvolvido para trabalhar continuamente no
perodo de 24 horas/dia 7.
a) Colorimetria
A colorimetria um segmento da fotometria capaz de obter a concentrao
de solues atravs da mensurao da absoro da luz em um determinado
comprimento de onda, que varia de 400 nm a 800 nm (faixa de luz visvel), ou 200 a
400 nm (faixa de luz ultravioleta). Segundo a Lei de Lambert-Beer (absoro de
solues) diz: A absorvncia quando um raio de luz monocromtica atravessa uma
soluo capaz de absorver energia de um determinado comprimento de onda (),
parte da luz que incide sobre a soluo absorvida e no emerge do outro lado. A
transmitncia corresponde a razo entre a intensidade de luz emergente, e a
intensidade da luz incidente, onde o valor de transmitncia dado em porcentagem.
Portanto, quando uma soluo for atravessada por uma luz emergente com
comprimento de onda absorvido somente pelo soluto, a transmitncia depende da
concentrao do soluto e da espessura da soluo atravessada pela luz polarizada.
Segundo a frmula: T = 10-.c.l, onde a constante caracterstica do soluto ou
coeficiente de absoro ou de extino. Est equao exponencial pode ser expressa
na forma linear como log T = - .c.l ou -log T = .c.l, sendo a densidade tica ou
absorbncia (A) calculada pela frmula: (A)=.c.I, o que significa que para uma
determinada espessura da soluo (l), a absorvncia diretamente proporcional
concentrao 8.
O comprimento de ondas a distncia entre duas cristas e a unidade de
medida o nanmetro (nm). A quantidade de energia propagada nessas ondas
inversamente proporcional a medida do comprimento, portanto quanto maior o
comprimento de onda, menor a energia e, quanto menor o comprimento de onda,
maior a energia 9.
Essa energia propagada a partir de uma fonte de luz polarizada
possibilitando o clculo da intensidade energtica entre a distncia das duas cristas
(ondulaes consecutivas ou senoidais) (Figura 6).

Figura 6 Propagao da energia radiante d o comprimento de onda.

 O olho humano possui percepo para os espectros compostos acima de
380 nm, pois no visualizamos sem o auxlio de equipamento especfico comprimento
de onda igual ou acima a 25 cm (ondas de rdio), e nem comprimento de onda menor
que o raio gama (abaixo de 0,1nm) (Figura 7) 9. (Tabela 1).

Figura 7 Diviso do espectro em regies ou bandas denominadas segundo as

formas de radiaes produzidas ou detectadas nos espectrofotmetros.

Fonte: Horst Frank With some modifications by Jailbird. Traducion da version de Alebergen Obra
derivada da image Eletromagnetic spectrum-es svg 15:39, 5 May 2011.

Tabela 1. Intervalo de comprimento de ondas perceptveis ao olho humano.

 A absoro o fenmeno onde o campo energtico do fton tem que ser
igual quantidade de energia necessria para um tomo passar do estado
fundamental para o excitado, sendo necessria a utilizao de um feixe de luz
monocromtica de certo comprimento de onda capaz de excitar as molculas do
composto analisado. O comprimento de onda a ser escolhido, dever ser estudado a
partir do ajuste com uma soluo submetida ao feixe de luz monocromtica de
diferentes comprimentos de onda, para se verificar qual deles ser mais absorvido
pela soluo. Assim, uma determinada luz passa atravs de uma cubeta de calibre
determinado que contm uma determinada soluo e incide sobre uma clula
fotoeltrica que traduz a intensidade luminosa em um sinal eltrico detectado pelo
galvanmetro. A escala do galvanmetro graduada para indicar a transmitncia ou
a absorbncia da soluo, cuja escala varia de 0% (T=0) a 100% (T=1) 9; 10.
Os objetos ou solues coloridas absorvem com maior intensidade
determinada faixa de comprimento de onda, e a cor de radiao mais absorvida
denominada de cor complementar, onde duas cores ou luzes so chamadas de
complementares ao ficarem sobrepostas e promovem a percepo visual de branco
ou cinza neutro. Porm, quando sobrepomos cores primrias como verde, vermelho
e violeta, obtemos a cor branca e quando elas se sobrepem em pares do origem as
cores complementares (Figura 6) 10.

Figura 6. Cores primrias dando origem a cores complementares.

 Na tabela 2 est exemplificado o comprimento de ondas das nove cores
fundamentais e intermediarias do espectro visvel e a formao das cores
complementares.

Tabela 2. Cores fundamentais e complementares.

Comprimento de onda Cores Fundamentais Cores Complementares
400 435 Violeta Verde-Amarelo
435 480 Azul Amarelo
480 490 Azul-Esverdiado Laranja
490 500 Verde-Azulado Vermelho
500 560 Verde Prpura
560 580 Verde-Amarelado Violeta
580 595 Amarelo Azul
595 610 Laranja Azul-Esverdeado
610 750 Vermelho Verde-Azulado
Comprimento de onda Cores Fundamentais Cores Complementares

A IMPORTNCIA DA AUTOMAO NA DIAGNOSTICAO CLNICA.

As anlises realizadas com os fotocolormetros manuais clssicos podem
apresentar imprecises significativas inerentes a mecnica de retirar e colocar a
cubeta na cela tica durante a mensurao. Porm, no fotmetro de fluxo contnuo
semi-automtico esta impreciso no ocorre, pois a cubeta mantida fixa e a troca de
solues realizada atravs de bombeamento descontinuo durante o enchimento da
cela de fluxo e, nos equipamentos automticos multiprocessadores, o carrossel
analtico de cristal tambm recebe os reagentes e as amostras sem ter a interveno
humana 11.
Nas anlises bioqumicas clnicas, inmeras metodologias foram
desenvolvidas para detectar a presena de biomolculas em solues com diferentes
tipos de cor. Essas reaes determinam qualitativamente e quantitativamente as
diferentes biomolculas dos marcadores plasmticos ou sricos como: glicose,
lipdios, colesterol, protenas; produtos nitrogenados como cido rico, ureia e amnia;
enzimas como amlase, fosfatase alcalina, fosfatase cida, aminotransferases, lactato
desidrogenase; pigmentos endgenos como bilirrubina; e ons como clcio, fsforo,
magnsio e ferro, alm de analitos analisados na urina e LCR (liquido encfalo
raquidiano). O conhecimento adquirido em tcnicas laboratoriais tornou-se
importantes ferramentas auxiliares no diagnstico de doenas, uma vez que os
exames laboratoriais fornecem dados para a formao da hiptese diagnstica, e
prestam informaes que permitem a comprovao ou rejeio da hiptese formada
12; 13.

A implantao da automao no laboratrio de anlises clnicas levou ao

desenvolvimento de equipamentos analticos que utilizam a fotometria para quantificar
seus resultados, aumentando a agilidade de entrega dos laudos, reduzindo os riscos
biolgicos e custo operacionais, otimizando o tempo de processamento das amostras
14.

DIABETES MELLITUS E A INSUFICINCIA RENAL

O diabetes mellitus corresponde a um grupo de distrbios metablicos que
apresentam em comum a hiperglicemia, sendo considerada uma doena crnica
degenerativa causada pela incapacidade de secreo de insulina ou por resistncia
perifrica a insulina 15.
O diagnstico tardio e falta de tratamento podem levar ao surgimento de
complicaes como falncia renal irreversvel, comum em 20 a 40% dos indivduos
com diabetes mellitus do tipo 1 e 10 a 20% dos indivduos com diabetes mellitus do
tipo 2 16. A nefropatia diabtica considerada a principal causa de ingresso de
indivduos em programa de tratamento para transplante renal 17.

A insuficincia renal possui diferentes causas como diabetes, hipertenso

arterial sistmica e doena cardiovascular concomitante 18. A insuficincia renal ocorre
por progressiva e irreversvel perda da funo renal, levando a azotemia, hipertenso
arterial e morte 19.
Os indivduos portadores de diabetes e nefropatia devem tratados e
monitorados constantemente para a ocorrncia de complicaes e agravos. Dessa
forma, este trabalho teve como objetivo determinar o perfil glicmico em indivduos
com diabetes e perfil renal em indivduos com nefropatia.

DETERMINAO DE GLICOSE
A dosagem de glicose pode ser determinada pelo mtodo de O-toluidina
que lido em um espectrofotmetro semi-automtico. Nesse mtodo a glicose reage
com a o-toluidina (orto-toluil) em meio cido e aquecido, formando glicosamina e base
de Schiff. Esta reao produz uma cor azul na soluo proporcional quantidade de
glicose presente na amostra (soro, plasma, urina ou liquor). A leitura
espectrofotomtrica feita entre 600 a 650nm 20.

No equipamento automtico Cobas Integra 400 plus o teste qumico de

glicose realizado pelo mtodo hexoquinase 21. A hexoquinase catalisa a fosforilao
da glicose pelo ATP, dando origem a glicose-6-fosfato e ADP. Para prosseguir a
reao, uma segunda enzima, a glicose6-fosfato desidrogenase (G6PDH), utilizada
para catalisar a oxidao de glicose-6-fosfato pelo NADP+, dando origem ao NADPH.
A concentrao de NADPH formado diretamente proporcional concentrao de
glucose. O comprimento de onda utilizado 340nm 7. (Tabela 3).

Tabela 3 Estatstica comparativas dos exames de Glicose realizados no

equipamento randmico Cobas Integras 400 plus.
Valores referenciais: 70 a 99mg/dL.
INDIVIDUOS Amostra Amostra Amostra INDIVIDUOS Amostra Amostra Amostra
GLICOSE 1 2 3 GLICOSE 1 2 3
1 100 98 98 51 66 70 76
2 78 83 87 52 78 77 70
3 110 118 110 53 222 240 56
4 99 110 100 54 79 78 71
5 110 89 91 55 88 90 98
6 180 178 187 56 110 98 99
7 98 99 99 57 78 79 87
8 89 78 77 58 78 71 76
9 76 77 79 59 80 89 87
10 88 89 90 60 89 93 96
11 130 133 150 61 90 99 87
12 90 96 95 62 67 75 74
13 323 333 340 63 78 77 89
14 120 99 110 64 56 67 68
15 115 120 125 65 76 77 79
16 89 88 90 66 67 69 75
17 57 56 60 67 89 90 99
18 67 72 73 68 116 120 119
19 250 212 198 69 99 98 99
20 111 98 99 70 98 99 110
21 76 78 74 71 56 60 67
22 118 176 150 72 99 89 86
23 67 77 73 73 89 83 81
24 77 74 76 74 77 78 79
25 80 83 78 75 89 90 95
26 78 77 79 76 116 116 98
27 76 77 84 77 98 99 110
28 410 380 356 78 89 85 84
29 67 67 69 79 78 76 73
30 90 97 96 80 99 110 115
31 78 77 76 81 89 89 90
32 99 115 110 82 78 76 74
33 250 119 137 83 45 56 59
34 76 77 87 84 90 87 78
35 90 99 91 85 230 240 215
36 78 79 80 86 99 120 111
37 90 99 96 87 112 111 110
38 89 90 94 88 78 87 88
39 415 379 315 89 89 88 80
40 89 90 98 90 111 130 145
41 99 90 98 91 120 122 135
42 90 110 111 92 350 316 218
43 76 77 78 93 67 69 70
44 110 99 100 94 120 121 125
45 78 79 79 95 99 98 97
46 80 81 82 96 78 79 80
47 67 70 71 97 120 135 119
48 80 78 79 98 56 55 60
49 78 78 83 99 76 78 79
50 89 88 87 100 78 77 79

DETERMINAO DE CREATININA
A creatina sintetizada no fgado, rim e pncreas, sendo transportada para
as clulas musculares e crebro, onde fosforilada a creatina-fosfato que atua como
reservatrio de energia. Em condies fisiolgicas a creatina-fosfato e a creatina
espontaneamente perdem cido fosfrico para formar seu anidro, a creatinina. A
creatinina se difunde do msculo para o plasma, sendo excretada na urina. A
quantidade de creatinina excretada diariamente proporcional a massa muscular, no
sendo afetada pela dieta, idade ou exerccios 22.
Para a determinao de creatina, esta reage com o cido pcrico em
pH=12,4 produzindo o picrato de creatinina que possui cor vermelha, cuja cor
proporcional concentrao de creatinina existente na amostra. A leitura
espectrofotomtrica feita entre 450 a 510nm 23.

No Cobas Integra 400 plus, o teste de creatinina cintica determinado

medindo na absorvncia de 512nm. Para a determinao deste teste, nas amostras
de soro ou plasma contm protenas que reagem pelo mtodo de Jaff, e os valores
obtidos so convertidos automaticamente com fator de -18mol/L ou -0,2mg/dL.
Lembrando que em uma soluo alcalina, a creatinina reage com o picrato ou cido
prcrico para formar um complexo com cores amarelo/avermelhado 7. (Tabela 4).

Tabela 4 Estatstica comparativas dos exames de Creatinina Cintica realizados no

equipamento randmico Cobas Integras 400 plus.
VALOR DE REFERNCIA 24:
At 6 anos: 0,3 a 0,7 MG/DL.
7 a 12 anos: 0,5 a 1,0 MG/DL;
Maior que 12 anos:
Sexo masculino: 0,7 a 1,2 MG/DL;
Sexo feminino: 0,6 a 1,0 MG/DL.
 INDIVIDUOS Amostra Amostra Amostra INDIVIDUOS Amostra Amostra Amostra
CREATININA 1 2 3 CREATININA 1 2 3
1 0,9 0,8 0,9 51 1,0 1,0 0,9
2 0,5 0,5 0,9 52 0,7 0,8 0,9
3 1,0 1,0 1,0 53 5,6 6,7 1,8
4 0,9 0,8 0,7 54 0,8 0,9 1,0
5 4,0 3,3 3,1 55 0,5 0,6 0,6
6 1,0 0,9 0,8 56 0,9 0,7 0,6
7 0,5 0,7 0,8 57 0.7 0,8 1,0
8 0,9 0,8 0,8 58 1,0 1,0 1,0
9 0,5 0,8 0,8 59 0,9 1,0 0,9
10 0,9 0,7 0,8 60 0,6 0,6 0,7
11 1,0 1,0 1,0 61 1,0 1,0 1,0
12 0,6 0,8 0,9 62 0,5 0,6 0,8
13 5,6 4,9 5,1 63 1,0 1,0 1,0
14 0,7 0,6 0,6 64 0,5 0,6 0,8
15 1,0 0,9 0,9 65 0,6 0,6 0,6
16 0,8 0,9 0,7 66 0,9 0,7 0,7
17 0,5 0,8 0,9 67 1,0 1,0 1,0
18 0,9 0,7 0,6 68 0,6 0,6 0,7
19 0,7 0,6 0,5 69 1,0 1,0 0,8
20 0,8 0,9 0,8 70 0,7 0,7 0,5
21 1,0 1,0 1,0 71 0,6 0,5 0,7
22 0,9 0,8 1,0 72 0,8 0,8 0,8
23 1,0 1,0 1,0 73 0,8 0,6 0,6
24 0,9 0,8 0,9 74 1,0 1,0 1,1
25 1,2 1,0 1,0 75 0,9 0,8 0,8
26 0,9 0,7 0,6 76 1,1 1,2 1,0
27 0,9 0,8 0,9 77 0,6 0,7 0,7
28 6,0 5,4 5,5 78 0,5 0,7 0,9
29 1,0 0,9 0,8 79 0,7 0,9 1,0
30 1,0 0,8 0,8 80 0,8 0,9 0,7
31 0,8 0,7 0,6 81 0,7 0,8 0,9
32 1,0 1,0 1,1 82 0,9 0,8 0,8
33 1,0 1,1 1,0 83 1,0 1,0 0,9
34 1,2 1,1 1,0 84 0,8 0,6 0,7
35 0,9 0,8 0,9 85 1,0 1,0 1,0
36 0,8 0,8 0,9 86 1,0 0,9 0,9
37 0,8 0,9 1,0 87 0,6 0,8 0,9
38 1,0 0,9 0,9 88 0,8 0,9 0,7
39 0,8 0,7 0,6 89 0,7 0,6 0,6
40 0,8 0,7 0,7 90 0,8 0,9 0,9
41 1,1 1,1 1,2 91 1,0 1,0 1,1
42 0,9 0,9 0,8 92 1,2 1,0 1,0
43 0,8 0,9 1,1 93 1,5 1,1 1,3
44 1,4 1,2 1,1 94 0,9 0,9 0,7
45 0,6 0,6 0,8 95 0,9 1,0 0,8
46 0,8 0,7 0,9 96 0,9 1,0 1,1
47 0,9 1,1 1,0 97 0,8 0,9 0,9
48 1,0 1,0 1,0 98 0,9 1,0 1,0
49 1,0 0,9 0,9 99 0,9 1,0 0,8
50 0,9 0,8 0,8 100 1,1 1,2 1,3

DETERMINAO DE URIA
A uria sintetizada no fgado a partir do dixido de carbono e amnia
proveniente da desaminao dos aminocidos nos tecidos como produto final do
catabolismo protico. Depois transportada pelo plasma at os rins, sendo excretada
na urina; mais de 40% reabsorvida por difuso passiva durante a passagem pelos
tbulos renais. O nvel de ureia no plasma afetado pela funo renal, contedo
proteico da dieta e grau de protelise 25.
 A determinao da uria basea-se na hidrlise cida da diacetilmonoxima
diacetil, que reage com a ureia na presena de tiosemicarbazida (que intensifica a
cor) e ons de cdmio (que estabiliza a cor). A reao leva a formao de um derivado
diazdico de colorao rsea, cuja intensidade da cor proporcional concentrao
de ureia na amostra. A leitura espectrofotomtrica feita entre 580 a 620nm 26.

No equipamento randmico Cobas Integra 400 plus a determinao da

uria no soro est diretamente proporcional a diminuio da taxa na concentrao de
NADH com a concentrao de uria na amostra analisada. Sua determinao
analisada na absorvncia de 340nm. um teste cintico com urase e glutamato
desidrogenase, onde a uria srica hidrolisada pela urase, dando origem a amnia
e a carbonato no primeiro momento da reao. Na segunda etapa da reao, o 2-
oxoglutarato reage com a amnia na presena de glutamato desidrogenase (GLDH)
e da coenzima NADH, dando origem a L-glutamato. Est reao entendida onde 2
moles de NADH so oxidados a NAD por cada mole de ureia hidrolisada 7. (Tabela 5).

Tabela 5 Estatstica comparativa dos exames de Uria Cintica realizados no

equipamento randmico Cobas Integras 400 plus.
Valores de referncia: 15 a 40 mg/dL.
INDIVIDUOS Amostra 1 Amostra Amostra INDIVIDUOS Amostra Amostra Amostra
URIA 2 3 URIA 1 2 3
1 22 23 25 51 34 31 27
2 20 15 10 52 10 15 17
3 17 22 20 53 106 111 45 (Dialise)
4 12 17 19 54 38 33 37
5 26 28 29 55 55 57 50
6 39 35 33 56 49 67 55
7 40 36 36 57 50 53 54
8 18 19 17 58 30 33 32
9 22 22 26 59 18 19 20
10 50 51 55 60 43 44 46
11 35 33 32 61 12 19 22
12 22 25 27 62 20 17 19
13 199 200 116 63 54 53 55
14 17 18 19 64 34 35 33
15 61 57 54 65 19 22 20
16 23 34 34 66 22 25 26
17 45 44 47 67 32 33 36
18 22 24 26 68 19 20 17
19 88 81 76 69 22 26 27
20 66 55 47 70 56 50 52
21 35 36 33 71 30 27 28
22 20 21 22 72 19 18 16
23 55 54 56 73 20 23 25
24 45 40 45 74 18 16 15
25 23 29 30 75 28 35 39
26 33 40 44 76 37 32 33
27 22 23 18 77 45 41 44
28 109 108 117 78 32 30 28
29 77 76 55 79 12 22 27
30 33 33 31 80 35 36 38
31 40 37 33 81 12 12 15
32 15 12 16 82 19 23 19
33 34 39 29 83 30 35 37
34 55 53 55 84 44 41 46
35 18 19 22 85 22 23 27
36 33 34 40 86 33 38 37
37 67 77 78 87 18 16 17
38 55 53 52 88 23 22 26
39 45 44 48 89 70 67 65
40 27 28 29 90 45 44 46
41 30 37 38 91 19 16 17
42 22 23 34 92 45 48 49
43 66 64 60 93 45 50 42
44 111 110 99 94 29 30 25
45 55 54 51 95 40 44 48
46 19 19 25 96 22 25 29
47 23 22 27 97 35 38 33
48 20 23 25 98 48 44 46
49 88 79 78 99 35 33 38
50 66 64 61 100 36 33 36

DESENVOLVIMENTO TCNICO
Os resultados foram dispostos em grficos de colunas e realizada anlises
estatsticas, onde, s variveis das categricas foram apresentadas em porcentagem
e comparadas pelo teste de qui-quadrado. As variveis contnuas foram apresentadas
na forma de mdiadesvio padro e foram comparadas pelo teste t de Student
pareado e no pareado aps a identificao da distribuio de cada mdia contnua.
Os resultados com p<0,05 foram considerados estatisticamente significativos. Todos
os testes foram aplicados utilizando-se intervalo de confiana de 95%. Para anlise
estatstica foi utilizado o programa GraphPad Prism 5.0.

RESULTADOS
Foram avaliados 49 indivduos com diabetes, sendo 15 do sexo feminino e
34 do sexo masculino. A idade mdia dos indivduos foi de 45 anos (sexo feminino
com idade entre 2570 anos e sexo masculino entre 3570 anos). Dos 49 indivduos,
4 so portadores de diabetes tipo 1, sendo 1 do sexo feminino e 3 do sexo masculino,
e 45 indivduos portadores de diabetes tipo 2, sendo 10 do sexo feminino e 35 do sexo
masculino.
O grfico 1 apresenta a mdia da dosagem de glicose (mg/dL sangue)
realizada em 3 dias alternados, demonstrando que a maioria dos indivduos com
diabetes apresentou uma maior concentrao de glicose em relao aos 49 indivduos
do grupo controle (valores de referncia=70-99 mg/dL sangue).
Grfico 1. Dosagem de glicose, mdia entre trs dosagens realizadas em dias
alternados.

O grfico 2 apresenta a comparao dos nveis de glicose com o grupo

controle, onde foi verificado um aumento significativamente estatstico no grupo de
indivduos com diabetes (p<0.0001, teste t de Student).

Grfico 2. Anlise estatstica comparativa dos nveis sricos de glicose entre o grupo
controle e pacientes com diabetes.

Foram avaliados 49 indivduos com nefropatia, sendo 21 do sexo feminino

e 28 do sexo masculino. A idade mdia dos indivduos foi de 40 anos (sexo feminino
com idade entre 3050 anos e sexo masculino entre 3070 anos).
O grfico 3 apresenta a mdia da dosagem de creatinina realizada em 3
dias alternados, demonstrando que a maioria dos indivduos nefropatas apresentou
uma maior concentrao de creatinina em relao aos indivduos do grupo controle
(valores de referncia em adultos=0,7-1,2 mg/dL sangue para homens e 0,6 a 1,0
mg/dL sangue para mulheres).

Grfico 3. Dosagem de creatinina, mdia entre trs dosagens realizadas em dias

alternados.

O grfico 4 apresenta a comparao dos nveis de creatinina com o grupo

controle, onde foi verificado um aumento significativamente estatstico no grupo de
nefropatas (p<0.0001, teste t de Student).

Grfico 4. Anlise estatstica comparativa dos nveis sricos de creatinina entre o

grupo controle e indivduos nefropatas.

O grfico 5 apresenta a mdia da dosagem de uria (mg/dL sangue)

realizada em dias alternados, onde a maioria dos indivduos nefropatas apresentou
uma maior concentrao de uria em relao aos 49 indivduos do grupo controle
(valores de referncia=15-40 mg/dL sangue).
Grfico 5. Dosagem de uria, mdia entre trs dosagens realizadas em dias
alternados.

O grfico 6 apresenta a comparao dos nveis de uria com o grupo

controle, onde foi verificado um aumento significativamente estatstico no grupo de
indivduos nefropatas (p<0.0001, teste t de Student).

Grfico 6. Anlise estatstica comparativa dos nveis sricos de uria entre o grupo
controle e pacientes nefropatas.
DISCUSSO
Os ensaios bioqumicos laboratoriais ganharam qualidade, segurana e
confiabilidade. Isto se deu devido a necessidade de ter resultados confiveis que iro
auxiliaram na diagnosticao de doenas. Est necessidade acelerou o processo de
evoluo nas metodologias analticas na bioqumica clnica, a fim de atender uma
demanda populacional cada vez mais crescente no mundo.
Na dcada de 70, no Brasil, poucos eram os laboratrios clnicos que
dispunham de condies em ter, controles de qualidades bem definidos, certificaes
atestando qualidades de servios mdicos prestados, acreditaes e auditorias
externas e internas padronizando normas e preconizando medidas contra no
conformidades. Muitas das metodologias bioqumicas, como as estudadas neste
trabalho (marcadores: glicose, creatinina e ureia), neste perodo eram processadas
manualmente e com leitura fotomtrica rudimentar em espectrofotmetros analgicos
com reaes colorimtrica de ponto final. Tambm neste perodo, eram utilizados kits
de reagentes padronizados com metodologias descritas em bulas pelos fabricantes
alm de treinamentos ministrados por assessores cientficos. Essas metodologias no
tinham carter emprico, pois estudos cientficos j preconizavam a evoluo das
reaes para determinaes bioqumicas, alm de uma pequena, porm promissor
controle interno de qualidade.
Na modernidade associao como a SBPC (Sociedade Brasileira de
Patologia Clnica) e programa como a PALC (Programa de Acreditao de
Laboratrios Clnicos), auxiliam nas certificaes e acreditaes dos laboratrios
clnicos. Padronizando suas aes, melhorando a eficincia, a segurana e a
qualidade dos servios prestados. O programa PALC foi desenvolvido pela SBPC/ML
tento como modelo as normais internacionais ISO, CAP e legislaes dispostas para
a rea da sade O processo de acreditao no s reconhece o sistema de qualidade
de uma empresa estabelecidos na norma da ABNT NBR NM ISO 15189 27 a qual
engloba os laboratrios de exames de materiais biolgicos, microbiolgicos,
imunolgicos, qumicos, imuno-hematolgicos, hematolgicos, biofsicos, citolgicos,
patolgicos ou outros materiais provenientes do corpo humano, tambm d ao mdico
e ao paciente a tranquilidade de que os laudos de laboratrios acreditados tm total
confiabilidade. Este programa de acreditao foi lanado no ano de 1998, passando
por revises em 2004, 2007, 2008, 2010 e 2013 28.
 O SBPC foi fundado em 1944, em territrio carioca pelo mdico Jos da
Cunha Lima e seus amigos do colegiado de Patologia Clnica com os objetivos de
trabalhar pela elevao de nvel das condies cientficas e profissionais dos que
exercem a especialidade; promover uma aplicao mais extensa dos mdicos de
laboratrio ao diagnstico das doenas; estimular a pesquisa original em todos os
ramos de trabalho do laboratrio clnico; pugnar por uma cooperao mais estreita
entre o clnico e o patologista; estabelecer, quando achar conveniente, padres para
a realizao dos diferentes exames de laboratrio; empreender a publicao de uma
revista especializada, onde sero publicados trabalhos cientficos de valor, notas
editoriais e os resumos das sesses da Sociedade; promover a realizao de cursos,
conferncias e Congressos nacionais ou internacionais de Patologia Clnica ou de
qualquer de seus ramos 28.
A cada tempo de evoluo nas anlises clinicas, vo se adequando e
corrigindo falhas, mesmo que apresentem ser pequenas, evitando erros e
aumentando a confiabilidade. Um dos quesitos rigorosamente discutidos em 2016 por
laboratrios clnicos, Mdicos e no mdicos e acreditadores, so os valores que
referenciam os resultados liberados. O intervalo de referncia tem extrema
necessidade de ser compatvel com o marcador bioqumico analisado, pois auxiliam
diretamente na conduta mdica. Contudo os laboratrios brasileiros se limitam em
utilizar os intervalos preconizados nas bulas dos fabricantes de reagentes 29; 30.
Os intervalos de referncias, so dois ou mais valores estabelecidos dados
resultados de medio de uma populao de referncia. A conveco desses
intervalos feita rigorosamente com a seleo de indivduos e, se baseia em critrios
que exclui qualquer patologia que podero afetar nos analticos estudados. Os
resultados so trabalhos obtidos dos testes laboratoriais realizados nesses indivduos,
so tratados estatisticamente. Quanto maior o nmero for a amostra de indivduos
estudados, menor ser a variao. quase que impossvel que um determinado
laboratrio clinico realize este estudo sozinho para estabelecer os valores de
referncias que comporo seus laudos. A recomendao do CLSI (Clinical and
Laboratory Satandards Intitute) que esses laboratrios clnicos tenham
embasamentos cientficos em literaturas, contato direto com o setor
cientifico/tecnolgico dos fabricantes e network com outros laboratrios clnicos do
mesmo pas, estado ou municpio, acreditados e que trabalhem com certificaes
idneas. Tambm se faz necessrio que se levem em considerao os fatores
analticos e pr-analticos, baseando-se inclusivamente, quanto a idades, ao sexo e
ao estado clinico 31.
Para garantir a excelncia no produto ofertado, o laboratrio clinico CDA
do Hospital San Paolo, So Paulo, utiliza para analises de seus testes bioqumicos, o
equipamento multiprocessador Cobas Integra 400 plus utilizado para os doseamentos
dos marcadores glicose, creatinina e ureia, equipado com mdulos de medio da
fotometria de absorvncia, de polarizao de fluorescncia, turbidimetria e medies
dos eletrodos seletivos para os ons sdio, potssio e cloro.
O marcador glicose analisado neste trabalho, um teste in vitro, que
determina quantitativamente a concentrao de glicose no sangue, urina e LCR. Foi
utilizado um reagente vanguardista denominado Glucose HK, mtodo enzimtico
(reao de ponto final), de referncia com hexoquinase 32; 33.
A dosagem de glicose importante no monitoramento da glicemia, evitando
futuras complicaes em indivduos diabticos 19. Os rins so rgos fundamentais
para a regulao da homeostase lquido eletroltica e cido bsico atravs da filtrao
do sangue, eliminado produtos do metabolismo corporal. A alterao da funo renal
pode ser modificada em doenas como diabetes e nefropatias 34.

Os marcadores creatinina e ureia analisados neste trabalho, so

destinados a investigao de nefropatias. O analito creatinina um teste in vitro, que
determina quantitativamente sua concentrao no sangue, sendo ele, uma reao
cintica de Jaff tamponada sem desproteinizao 35; 36; 37. O analito ureia, tambm
um teste in vitro para determinar quantitativamente de sua concentrao no sangue,
plasma e urina. Este teste determinado como ureia/BUN (nitrognio de ureia azoto
ureico no sangue). um teste de reao cintica com urease e glutamato
desidrogenase 38; 39; 40; 41.
A creatina o produto residual da creatina, cujo catabolismo realizado
principalmente pelas clulas musculares 22, ao passo que a ureia produzida no
fgado a partir do CO2 e amnia a partir da deaminao de aminocidos 17. Ambos
produtos so liberados na corrente sangunea e filtrados nos rins pelos glomrulos
renais, sendo a seguir eliminados na urina.
Neste estudo, foi verificado que todos os pacientes com diabetes
apresentaram nveis sricos de glicose acima do normal, com predomnio do sexo
masculino. Os indivduos com nefropatia apresentaram nveis aumentados de ureia e
creatinina no sangue, com predomnio do sexo masculino. Estes valores aumentados
de glicose em indivduos com diabetes e de ureia e creatinina em nefropatas indicam
uma falha no tratamento destas doenas com aumento do risco para o surgimento de
complicaes pelas doenas.

CONSIDERAES FINAIS

O controle glicmico fundamental para a preveno das complicaes

crnicas no diabetes, incluindo leso e falncia renal. Da mesma maneira, a avaliao
da funo renal em indivduos nefropatas de primordial importncia no controle da
evoluo e agravos da doena.
Os dados coletados aps as dosagens dos ensaios bioqumicos de Glicose,
Creatinina e Uria em amostras de indivduos annimos realizados no analisador
randmico Cobas Integra 400 plus, mostraram a estabilidade e congruncia entre os
valores plotados nas referidas tabelas 3; 4 e 5. Por no ocorrer interferncias manuais
nas cubetas de leituras dentro das clulas pticas por partes dos Analistas Clnicos
no analisador automtico Cobas Integra 400 plus, seus resultados propiciam alta
confiabilidade que auxiliam diretamente na clnica mdica.
REFERNCIAS

1. LLOYD, G. R.; STONE, N. Method for identification of spectral targets in discrete

frequency infrared spectroscopy for clinical diagnostics. Appl Spectrosc. 2015; 69(9):1066-
73.
2. NOGUEIRA NETO, J. F.; OLIVEIRA JUNIOR, R. B. Novas Tecnologias em Patologia
Clnica. Latinidade / Revista do Ncleo de Estudos das Amricas, Rio de Janeiro, p. 103 -
129, 01 dez. 2012.

3. PASCHOAL, L. R.; FERREIRA, W. A.; PRADO, M. R. D.; VILELA, A. P. O. Aplicao do

mtodo da espectrofotometria de derivadas na identificao e doseamento simultneo de
sistemas multicomponentes. Rev Bras Cinc Farma. 2003; 39(1): 105-13.

4. SALDANHA, T. C. B.; ARAJO, M. C. U. Anlise multicomponente simultnea por

espectrofotometria de absoro molecular uv-vis. Qumica Nova. 1999; 22(6): 847-853.

5. BASQUES, J. C. Especificaes da qualidade analtica Labtest Diagnostica, MG, 2005.

6. National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney diseases Disponivel em:
https://www.niddk.nih.gov/labprofissionals - Visitado em Set/2017.

7. ROCHE Diagnostics Manual do utilizador Verso 2.4 Edio de 2008.

8. BASQUES, J. C. Fotometria e Padronizao Labtest Diagnstica SA. Atualizaes:

Frida Wilke Alves Basques - So Paulo, 2010.

9. GU, H.; CHANG, W. Three-dimensional protein shape rendering in magnetized solution

with Lambert-Beer law. Appl Opt. 2012; 51(20):4827-32.

10. MOURA, R. A.; WADA, C. S.; PURCHIO, A.; DE ALMEIDA, T. V. Tcnicas de Laboratrio - 3 ed.
ISBN: 8573791136 Editora: Atheneu Rio de Janeiro, 2001.

11. FABBRI, F.; SASSAROLI, A.; HENRY, M. E,; FANTINI, S. Optical measurements of
absorption changes in two-layered diffusive media. Phys Med Biol. 2004; 49(7):1183-201.
12. LAPA, R. A. S.; LIMA, J. L. F. C.; REIS, B. F.; SANTOS, J. L. M.; ZAGATTO, E. A. G.
Multi-pumping in flow analysis: concepts, instrumentation, potentialities, Analytica Chimica
Acta. 2002; 466, 125-32.

13. ZAIA, D. A. M.; ZAIA, C. T. B. V.; LICHTIG, J. Determinao de protenas totais via
espectrofometria: vantagens e desvantagens dos mtodos existentes. Qumica Nova,
1998; 21(6): 787-93.

14. KUGIMIYA, A.; TAKAMITSU, E. Spectrophotometric detection of histidine and lysine

using combined enzymatic reactions. Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 2013; 33(8):4867-
70.

15. AMERICAN DIABETES ASSOCIATION. DIAGNOSIS AND CLASSIFICATION OF

DIABETES MELLITUS. Diabetes Care. 2005; 28(Suppl 1): S37-42.

16. BURMEISTER JE, MOSMANN CB, BAU R, ROSITO GA. Prevalncia de diabetes mellitus
em pacientes renais crnicos sob hemodilise em Porto Alegre, Brasil. J Bras Nefrol. 2012;
34(2):117-121.

17. MOREIRA HG, SETTE JBC, KEIRALLA LCB, ALVES SGA, PIMENTA E, DE SOUSA M,
CORDEIRO A, PASSARELLI JR O, BORELLI FAO, AMODEO C. Diabetes mellitus,
hipertenso arterial e doena renal crnica: estratgias teraputicas e suas limitaes.
Rev Bras Hipertens. 2008; 15(2):111-116.

18. ROMO JR JE. Doena Renal Crnica: Definio, Epidemiologia e Classificao. J Bras
Nefrol. 2004; 26(3): Supl. 1: 1-3.

19. NUNES TF, BRUNETTA DM, LEAL CM, PISI PCB, RORIZ-FILHO JS. Insuficincia renal
aguda. Medicina (Ribeiro Preto). 2010; 43(3): 272-282.

20. S RC, EDNA NAVAS AFA, ALVES SR. Diabetes mellitus: Avaliao e controle atravs
da glicemia em jejum e hemoglobina glicada. Rev Univap. 2014; 20(35): 15-23.

21. DOHNAL, L.; KALOUSOV, M.; ZIMA T. Comparison of three methods for determination
of glucose. Prague Med Rep. 2010;111(1):42-54.
22. KUNST, et al Methods of Enzymatic Analysis 3rd Ed. Volume VI, Metabolites 1:
Carbohydrates. 1984: 163-172.

23. COSTA, J. A. C.; VIEIRA-NETO, O. M.; NETO, M. M. Insuficincia renal aguda.

Medicina, Ribeiro Preto. 2003; 36: 307-24.

24. DALTON RN. Creatinina srica e taxa de filtrao glomerular: percepo e realidade. J
Bras Patol Med Lab. 2011; 47(1): 8-11.

25. LEGENDA = JUNGE, W. et al Determination of reference intervals for srum creatinine,

creatinine excretion and creatinine clearance with an enzymatic and modified Jaff
method. Clin Chim Acta 2004; 344;137-148.

26. ROMO JR JE, HAIASHI ARM, VIDONHO JR AF, ABENSUR H, QUINTAES PSL,
ARAJO MRT, NORONHA IL, SANTOS FRL, MACHADO MM. Causas e prognstico da
insuficincia renal aguda hospitalar em pacientes idosos. Rev Ass Med Brasil. 2000; 46(3):
212-217.

27. INMETRO Instituto Nacional de Metrologia, Qualidade e Tecnologia, 2017 Disponivel

em: http://inmetro.gov.br Acesso em 02/10/2017.

28. SPC/ML Sociedade Brasileira de Patologia Clnica, 2011 Disponivel em:

http://www.sbpc.org.br Acesso em 02/10/2017.

29. CLSI (Clinical and Laboratory Satandards Intitute) - Defining, Establishing, and verifying
reference intervals in the clinical laboratory; approved guideline, 2017.

30. HOROWITZ, G. L. EP28 - Definio, Estabelecimento e Verificao de Intervalos de

Referncia no Laboratrio Clnico, 3 Edio ISBN: 1-56238-682-4, 2011.

31. SPC/ML Sociedade Brasileira de Patologia Clnica SPBC/ML. Norma PALC, 2016
Disponivel em: http://www.sbpc.org.br Acesso em 02/10/2017.
32. KUNST, A.; DRAEGER, B.; ZIEGENHORN, J. In: Bergmeyer, Methods of Enzymatic
Analysis, 3rd ed. Volume VI, Metabolites 1: Carbohydrates. 1984:163-172.

33. TIETZ, N. W. Ed. Clinical Guide to Laboratory, 1995: 268-273.

34. KIRSZTAJN, G. M. Evaluation of Renal Function. J Bras Nefrol. 2009; 31 (Supl 1):14-20.

35. JAFF, M.; Ueber den Niederschlag, welchen Pikrinure in normalem Harn erzeugt und
ber eine neue Reaction des Kreatinins. Z Physiol Chem. 1886;391-400.

36. FABINY, D. L.; ERTINGHAUSEN, G. Automated reaction-rate method for determination

of serum creatinine with the CentrifiChem. Clin Chem 1971;17:696-700.

37. BARTELS, H.; BHMER M. Micro-determination of creatinine. Clin Chim Acta

1971;32:81-85.

38. RICHTERICH, R.; COLOMBO; J. P. Klinische Chemie. 4th ed. Basel: Karger S 1978:319-
324.

39. TALKE, H.; SCHUBERT, G. A. Enzymatiche Harnstoffbestimmung in Blut und Serum im

optischen Test nach Warburg. Klin Wochenschr 1965;43:174.

40. TIFFANY, T. O.; JANSEN, J. M.; BURTIS, C. A. OVERTON, J. B.; SCOTT, C. D.

Enzymatic Kinetic rate and end-poit analyses of substrate, by use of a GeMSAEC fast
Analyzer. Clin Chem 1972;18:829-840.

41. SAMPSON, E. J.; BAIRED, M. A.; BURTIS, C. A.; SMITH, E. M.; WITTE, D. L.; BAYSE,
D. D. A coupled-enzyme equilibrium method for measuring urea in serum: Optmiztion
and evaluation of the AACC study group on urea candidate reference method. Clin Chem
1980;26:816-826.