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UNIVERSIDAD PRIVADA ARZOBISPO LOAYZA

GUIA DE PRACTICAS DE LABORATORIO


BIOQUIMICA

SEMESTRE ACADEMICO 2017-II

JAIME ALBERTO MORI CASTRO

Nombre: Programa de:

2017
UNIVERSIDAD PRIVADA ARZOBISPO LOAYZA

INDICE

Normas Generales de Bioseguridad en Laboratorio..3

Introduccin4

Practica No 1.Bioseguridad y Reconocimiento de Materiales y Equipos de

Laboratorio...................5-12

Practica No 2.Determinacion pH y Preparacin de Soluciones

Amortiguadoras. 13-16

Practica No 3. Reconocimiento de Carbohidratos......17-18

Practica No 4. Reconocimiento de Protenas.. 19-21

Practica No 5. Determinacin de colesterol en Sangre... 22-24

Practica No 6. Digestin Enzimtica del Almidn....25-26

Anexos..27

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REGLAMENTO GENERAL DE BIOSEGURIDAD EN LABORATORIO

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INTRODUCCION

La siguiente guia de practicas de laboratorio en bioquimica se inparte a los


estudiantes con el objetivo de conocer los procedimientos experimentales ms
ampliamente usados en bioqumica. Incluye anlisis de macromolculas como
carbohidratos, lpidos, protenas y enzims.

En esta guia de laboratorio, pretende que los estudiantes tomen contacto con el
laboratorio de bioqumica y para cada procedimiento se aplique el reglamento y las
normas generales de bioseguridad. Se le describir el material de laboratorio y se har
especial hincapi en la importancia del correcto uso de las unidades de masa, volumen y
concentracin, as como del cuidado, correcta utilizacin y limpieza del material utilizado

El estudiante tambin se familiarizara con algunos de los reactivos y equipos ms


frecuentemente usados en las prcticas de bioqumica.

Antes de cada practica de laboratorio, el estudiante debera venir leyendo la guia de


prcticas, esta lectura proveer informacin y entendimiento sobre los procedimientos a
ser desarrollados.

Finalmente cada practica contiene cuestionarios que deben desarrollar y responder


las preguntas de la prctica que deben ser entregadas al inicio de cada practica, con la
apropiada citacin de las fuentes de informacin que usted debe siempre referenciar
apropiadamente los autores de artculos y libros que usted consulta.

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PRACTICA 1
BIOSEGURIDAD Y RECONOCIMIENTO DE MATERIALES Y EQUIPOS

1-INTRODUCCIN:
El Laboratorio de Qumica es un lugar donde se desarrollan las prcticas elegidas por el docente
para confirmar y reafirmar los conocimientos tericos impartidos en el aula.
Por lo tanto el estudiante deber acatar el reglamento del Laboratorio y estar atento a las
explicaciones del docente.
Cada una de las reacciones efectuadas debe dominarse no slo en la parte prctica, sino en el
conocimiento de sus productos finales, ya que con esto se pueden tomar decisiones para
conservar la limpieza del aire, el agua y el suelo, tratando de utilizar hasta donde sea posible,
procesos tecnolgicos no contaminantes y en caso contrario dominar las tcnicas adecuadas
para el manejo de residuos txicos peligrosos.

PARA PREVENIR LOS ACCIDENTES O MINIMIZAR SITUACIONES PELIGROSAS ES


PRECISO SEGUIR LAS REGLAS MNIMAS DE CONDUCTA EN EL LABORATORIO MISMAS
QUE SE MENCIONAN A CONTINUACIN:

2-OBJETIVOS
Genera y registra datos e informacin a partir de la experiencia de cada instrumento utilizado en
las prcticas de Laboratorio.
Trabaja con cautela y normar el comportamiento en el Laboratorio por las exigencias de la
Seguridad personal y del grupo

NORMAS Y REGLAS DE SEGURIDAD E HIGIENE EN EL LABORATORIO

Para reducir riesgos a la salud o a la integridad corporal, deben acatarse reglas de seguridad, por
lo general sencillas, cuando se realiza trabajo prctico de laboratorio. A menudo se dice que los
accidentes no ocurren por s solos, son provocados!. Las causas son generalmente por
ignorancia, por cansancio, por descuido, por uso de equipo y materiales defectuosos o
deteriorados, ms an por voluntad propia de tomar riesgos o por realizar bromas sin evaluar las
consecuencias de las mismas.

Para minimizar riesgos y prevenir accidentes es preciso conocer sus causas y estar alerta de
reconocer situaciones de riesgo susceptibles de desencadenar accidentes que no solo pueden
afectar al alumno, sino a todos los que trabajan en el laboratorio.

Un laboratorio es un lugar convenientemente habilitado donde se puede habilitar, manejar y


examinar microorganismos y experimentar. Este tipo de trabajo debe ser llevado a cabo con una
buena tcnica asptica y por tanto se requiere un ambiente limpio y ordenado.

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EXPERIENCIA:

NORMAS DE BIOSEGURIDAD PRINCIPIOS GENERALES DE SEGURIDAD:


El laboratorio es un rea de trabajo. No se desempean otras actividades que no estn
relacionadas con ste. As mismo, no deben efectuarse experimentos no autorizados, a menos
que estn autorizados por el profesor.
Debe tenerse conocimiento de la ubicacin de las llaves maestras de gas, electricidad y agua
del laboratorio. Tambin de los extinguidores y dems equipos de seguridad as como de su
correcta utilizacin.
Mantener siempre el rea de trabajo limpia y ordenada, ubicar los frascos y recipientes
alejados de los bordes de la mesa de trabajo. Evitar los movimientos bruscos durante el
manejo de los materiales y equipos. Mantener los pasillos entre las mesas despejados y
trasladarse de un punto a otro sin correr.
Cualquier incidente o accidente, por menor que parezca debe informarse inmediatamente al
profesor encargado del grupo. Es responsabilidad del profesor controlar la observancia de las
reglas de seguridad.
Antes de retirarse del laboratorio, debe dejarse el rea de trabajo limpia y lavarse las manos
con jabn y agua.

LAS CAUSAS MS COMUNES DE ACCIDENTES SON:

Desconocimiento de las formas de manejar las sustancias qumicas (reactivos), los materiales
y el equipo con el que se trabaja.
Imprudencia en el manejo de equipo, reactivos y materiales.
Descuido o falta de precaucin al efectuar las prcticas.

EQUIPO DE PROTECCION OBLIGATORIO

Portar bata de algodn (blanca) de talla apropiada con mangas largas y abotonadas durante
todo el tiempo que se trabaje en el laboratorio.
Portar lentes de seguridad para proporcionar proteccin en los ojos.
Mascarilla y guantes para evitar contaminarse con sustancias txicas.
Zapato de piso normal o tenis

MATERIAL DE VIDRIO

No debe recibirse material de trabajo defectuoso o deteriorado.


El material de vidrio en general y sobre todo el sometido a frecuentes calentamientos como
vasos de precipitado y matraces Erlenmeyer, pueden romperse con facilidad cuando se
someten a presin.
El material de vidrio rayado o que presente despostilladuras debe descartarse antes de que se
quiebre.

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Los pedazos de vidrio roto, particularmente los de pequeo tamao nunca deben recogerse con
la mano. Debe usarse cepillo o recogedor y una aspiradora.

NORMAS GENERALES EN EL MANEJO DE REACTIVOS QUIMICOS

Conocer las propiedades fsicas, qumicas y toxicolgicas de los reactivos qumicos con los que
se va a trabajar.
Nunca deben tomarse alimentos ni tampoco se debe fumar en el laboratorio esto reduce el
riesgo de ingestin o inhalacin accidental de las sustancias qumicas.
No deben probarse sustancias qumicas o disoluciones ni tampoco inhalar vapores sobre todo
si no se tiene informacin sobre las sustancias.
Es necesario limpiar inmediatamente cualquier sustancia tirada o lquido derramado. Los
cidos y bases derramados deben neutralizarse con bicarbonato de sodio antes de limpiar el
rea afectada. Para efectuar la limpieza deben usarse guantes de plstico.
La transferencia de lquidos que emiten vapores txicos o corrosivos como el HCl y HNO3 o
NH4OH deben efectuarse bajo la campana.
Las reacciones qumicas que desprenden vapores o que involucran disolventes voltiles,
inflamables o txicas tambin deben realizarse bajo la campana.
La transferencia de volmenes precisos de soluciones debe efectuarse con pipetas
volumtricas previstas de una perilla de succin o de una propipeta. Nunca debe pipetearse por
aspiracin directa con la boca.
Las diluciones de cidos concentrados siempre deben efectuarse aadiendo el cido
concentrado al agua y nunca a la inversa.
Las soluciones que se preparan, siempre deben etiquetarse correctamente en el momento de
su preparacin.
Antes de utilizar solventes inflamables (alcohol, ter, acetona, etc.) es preciso verificar que no
se encuentren mecheros encendidos en la cercana.
En caso de que alguna sustancia qumica entre en contacto con la piel (manos, cara y sobre
todo con los ojos), debe lavarse la zona afectada con abundante agua durante 15 minutos por
lo menos.

RECOMENDACIONES ESPECFICAS PARA EL MANEJO DE ALGUNOS REACTIVOS


QUMICOS

CIDOS PELIGROS Y CUIDADOS

cido fluorhdrico HF Causa quemaduras de accin retardada en la piel, en


contacto con las uas causa fuertes dolores y solo si se
atiende a tiempo se puede evitar la destruccin de
c. Sulfrico H2SO4, c.Las soluciones concentradas de estos cidos lesionan
tejidos.
Fosfrico H3PO4 y c. rpidamente la piel y los tejidos internos. Sus quemaduras
Clorhdrico HCl. tardan en sanar y pueden dejar cicatrices. Los accidentes
ms frecuentes son salpicaduras y quemaduras al
pipetearlos directamente con la boca.
c. perclrico HClO4 En estado anhidro es un explosivo poderoso. Dicho estado
se puede formar al poner en contacto el HClO4 con
agentes deshidratantes como el H2SO4, P2O5.
En contacto con materiales orgnicos (madera, algodn,
grasa, etc) puede hacerlos explotar por calentamiento o
c. Ntrico HNO3 por
Daa impacto.
permanentemente los ojos en unos cuantos
segundos y es sumamente corrosivo en contacto con la
piel, produciendo

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quemaduras dolorosas; mancha las manos de amarillo por su


accin sobre las protenas.

HIDRXIDOS PELIGROS Y CUIDADOS

NaOH, KOH, NH4OH Los hidrxidos de Sodio y Potasio slidos y las soluciones
concentradas de NH4OH pueden lesionar la piel y las
mucosas.

PERXIDOS PELIGROS Y CUIDADOS

Na2O2, BaO2, H2O2 Los perxidos de Sodio y Bario pueden causar incendio o
explosin al humedecerse en contacto con papel y materiales
orgnicos. El perxido de Hidrgeno se descompone con
violencia en agua y oxgeno. En contacto con la piel puede
causar ampollas.
El perxido de Hidrgeno o agua oxigenada que se emplea
como antisptico es una solucin muy diluida que no es
peligrosa si se manipula en forma adecuada.

CLORATOS Y PERCLORATOS PELIGROS Y CUIDADOS

Cuando se ponen en contacto o se mezclan con material


combustible pueden ocasionar incendio. Debe evitarse su
contacto con azufre, sulfuros, metales pulverizados, sales de
amonio y compuestos orgnicos.

SOLVENTES ORGNICOS PELIGROS Y CUIDADOS

ter El ter es oxidado por el O2 atmosfrico. Si sus gases se


concentran en el laboratorio forman perxidos y stos son
explosivos.

ter etlico Es de los ms peligrosos por su bajo punto de ebullicin y


baja temperatura de ignicin. Se deber trabajar siempre con
pequeas cantidades.

Alcoholes, Acetona, Todos los solventes orgnicos presentan un riesgo potencial


Benceno, Tolueno de INCENDIO O EXPLOSIN. Los vapores de estos
solventes forman mezclas explosivas con el aire. El incendio
provocado por solventes no se debe apagar con agua ya que
se expandera; se debe utilizar una manta, arena o
extinguidor.

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RECONOCIMIENTO DE ALGUNOS MATERIALES DE LABORATORIO

Observa y grafica los materiales que el profesor te mostrar, y escucha atentamente su


explicacin sobre el uso de cada uno de ellos.

3-MATERIALES DE LABORATORIO
PIPETA: .
TUBO DE ENSAYO: .
VASO DE PRECIPITADOS: .
ESPTULA: .
MATRAZ ERLENMEYER: .
PROBETA: .
CAJA DE PETRI. .
PIPETA. .

4-PROCEDIMIENTO

Discuta y analice en equipos las reglas y normas de seguridad e higiene en el laboratorio


asignadas por el profesor; por ejemplo:

Principios generales de seguridad


Causas ms comunes de accidentes, equipo de proteccin y manejo de material de vidrio.
Normas generales en el manejo de reactivos qumicos
Recomendaciones especficas en el manejo de algunos reactivos qumicos.
Realice una exposicin por equipos acerca de las reglas y normas de seguridad e higiene en
el laboratorio, que les asigno el profesor.

Llegue a conclusiones generales en base a lo expuesto por cada uno de los equipos.

5-RESULATDOS

6-CUESTIONARIO
1.- Explica las medidas de bioseguridad en el laboratorio.

2.- Explica las medidas de cuidado de los equipos de laboratorio

3.- Grafica o dibuja cada uno de los procedimientos utilizados en la prctica de laboratorio.

7- EVALUACIN
Mencione cuales son las reglas de Seguridad dentro de un laboratorio?

Cmo recomendaras que estas reglas fueran reconocidas y recordadas por las personas
que realizan trabajos incluyndote a ti?

En caso de no contar en el laboratorio con alguna de las instalaciones de seguridad


mencionadas Qu precauciones adicionales debes tener en cuenta?

Cul es tu opinin acerca del uso de ropa adecuada y proteccin a los ojos dentro del
laboratorio?

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CLASIFICACIN DE MATERIALES DE LABORATORIO A.- MATERIALES DE VIDRIO

VASO DE PRECIPITACION: TUBO DE ENSAYO: SE REFRIGERANTES: SIRVE


SE USA COMO USA PARA REALIZAR PARA CONDENSAR
RECIPIENTE PARA REACCIONES QUIMICAS VAPORES USANDO AGUA
OBTENER PRECIPITADOS FRIA.

LUNA DE RELOJ. SE USA AGITADOR O VARILLA: PIPETA: SIRVE PARA


PARA DESHIDRATAR SIRVE PARA MEZCLAR EXTRAER LIQUIDOS DE
MEZCLAR SOLIDOS, Y LIQUIDOS. SUS ENVASES EN
COMO TAPA DE VASOS. VOLUMENES
DETERMINADOS.

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BALON DE FONDO PLANO: BALON DE DESTILACION: FIOLA: SIRVE PARA


SE USA PARA SIRVE PARA HERVIR PREPARAR SOLUCIONES
REACCIONES Y PARA SUSTANCIAS VALORADAS.
HERVIR. SEPARABLES.

EMBUDO: SE USA PARA PROBETA GRADUADA: SE MATRAZ DE ERLENMEYER:


TRASVASAR LIQUIDOS Y EMPLEA PARA MEDIR EL SIRVE PARA MEZCLAR,
PARA FILTRACIONES. VOLUMEN DE LOS HACER CULTIVOS DE
LIQUIDOS. MICROORGANISMOS Y
COMO RECIPIENTE PARA
REACCIONES.

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B.- MATERIALES DE METAL.

SOPORTE UNIVERSAL: SE REJILLA CON ASBESTO: PINZAS: SE USA PARA


USA COMO BASE PARA EL SE USA PARA SUJETAR CRISOLES U
MONTAJE DE DIVERSOS PROTEGER DEL FUEGO OTROS MATERIALES
APARATOS DIRECTO EL MATERIAL SOMETIDOS A CALOR
(DESTILACION) DE VIDRIO.

MECHERO DE BUNSEN: BALANZA DE TRIPLE BARRA: SIRVE PARA PESAR


PROPORCIONA SUSTANCIAS EN GRANOS.
CALOR, FUNCIONA
CON GAS PROPANO.

C.- MATERIALES DE PORCELANA

CAPSULA: SE USA PARA LA MORTERO CON PILON: SIRVE PARA


SEPARACION DE MEZCLAS POR MOLER SOLIDOS.
EVAPORACION.

GRADILLA: SE USA COMO SOPORTE DE LOS TUBOS DE ENSAYO

D.- MATERIAL DE MADERA

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PRACTICA 2
DETERMINACION DEL PH Y PREPARACION DE SOLUCIONES
AMORTIGUADORAS

1-INTRODUCCION
El pH: Los bioqumicos usan el pH para indicar de forma precisa la acidez o basicidad de una
sustancia. Normalmente oscila entre los valores de 0 (ms cido) y 14 (ms bsico).
INDICADOR DE pH: Los indicadores son colorantes orgnicos, que cambian de color segn estn
en presencia de una sustancia cida, o bsica.

Figura 1. Escala de colores que toma el extracto de la col morada: en presencia de cidos (1-6) y bases (8-14).

Los cidos y bases son los dos tipos de sustancias ms comunes en el laboratorio y en el mundo
Cotidiano. A finales del siglo XIX, Arrhenius formul la primera definicin:
CIDO: Toda sustancia capaz de ceder protones (H+). BASE: Toda sustancia capaz de ceder oxhidrilos
(OH-).
En 1923 Brnsted-Lowry, propusieron una definicin ms amplia:
CIDO: Toda sustancia capaz de ceder protones (H+).BASE: Toda sustancia capaz de aceptar protones
(H+).
Considerando que el agua, H2O es el solvente por excelencia y puede actuar como aceptor o dador de
H+. La reaccin de autoionizacin correspondiente es: H2O + H2O H3O+ + OH
Una manera de evaluar la acidez de una sustancia es por el conocimiento de la [H+], pero suelen ser
cantidades muy pequeas y poco cmodas de manejar, una medida ms prctica, es la basada en la
definicin de pH del qumico Dans Soren Sorensen en 1909, cuando realizaba un trabajo para el control
de calidad de la elaboracin de la cerveza y es usada actualmente en todos los mbitos de la Ciencia,
+
medicina e ingeniera. pH = -log [H ]
Se establece una escala de acidez o escala de pH, en base al producto inico del H2O a 25 C, (Kw= 1x
10-14 ), que vara en el intervalo 0 y 14. Soluciones cidas tienen ms H +, por ello pH< 7. Las
soluciones bsicas tienen ms OH-, el pH >7 y en las soluciones neutras [H+] = [OH-], pH = 7

Ecuacin de Henderson-Hasselbach: La ecuacin de Henderson-Hasselbach, ha sido derivada de la


Ley de accin de masas de Gulberg y Waage, del concepto de constante de equilibrio y de la ionizacin
de cidos y bases dbiles. Se utiliza para calcular el pH terico de una mezcla de cidos dbiles y sus
sales.
Para el siguiente sistema en equilibrio:

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2-OBJETIVOS

1. Determina el pH y realiza las reacciones de soluciones amortiguadoras


2. Explica y describe qumicamente las reacciones

3- MATERIALES Y EQUIPOS

Materiales:

1. Tubos de ensayo
2. Gradilla de metal
3. Pipeta serolgica 2mL y 5mL
4. Bagueta
5. Esptula
6. Beacker 250mL
7. Balanza analtica
8. Trpode
9. Rejilla de asbesto
10. Pinza de madera

Reactivos:
1. Sol. de NaOH 0,01M
2. Sol. de HCl 0,01M
3. Sol. de CH3COOH 0,01M
4. Sol. de NH4OH 0,1 M
5. Sol. de NH4Cl 0,1 M

Muestras biolgicas y qumicas


Limn, Vinagre, Refresco-frutio preparado, Leche, Crema dental, Jugo de naranja, jugo de
toronja, leche de magnesia, limpiador domstico, clorox, champ, jabn lquido, agua
oxigenada, alcohol, crema de manos, perfume, gaseosa

4- PROCEDIMENTO
EXPERIMENTO 1: Determinacin de pH de diferentes sustancias usando Papel
indicador:

a-Tomar una muestra de cada sustancia (Limn, Vinagre, Refresco-frutio preparado, Leche,
Crema dental, Jugo de naranja, jugo de toronja, Agua expuesta al aire con 3 das de
anticipacin, leche de magnesia, limpiador domstico, clorox, champ, jabn lquido, agua
oxigenada, alcohol, crema de manos, perfume, desodorante, jabn de loza, jabn de tocador),
si es lquida con un gotero, si es slida, humedecerla un poco con agua en un plato
desechable, usando la microesptula.

b-Tomar pedacitos de papel indicador (recortar con tijeras limpias y no tocar con los dedos ni
los guantes sucios ni hmedos) con las pinzas el depilador, y colocar sobre la muestra por
uno de los extremos el papel y registrar la coloracin que arroja cada muestra, registrar datos
en una tabla. Compararlos con las tablas de pH llevadas a clase (laminadas)

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EXPERIMENTO 2.- Determinar el pH teorico y practico en las SIGUIENTES


SO LUCIO NES :

NaOH 0,01 M
HCl 0,01 M
CH3COOH 0,1 M
NH4OH 0,1 M
NH4Cl 0,1 M

Determinar el valor del pH terico segn la ecuacin de Henderson-Hasselbach. Tomar 10


mL de cada solucin y determinar el valor del pH prctico utilizando el pH-metro.

EXPERIMENTO 3.- INFLUENCIA DEL pH EN LA SOLUBILIDAD DE SUSTANCIAS


ORGNICAS SOLUBILIDAD DEL BENZOATO DE SODIO

En un vaso de precipitados de 100 mL de capacidad disolver 10 mg de benzoato de sodio


con 10 mL de agua destilada, inmediatamente medir su pH, luego adicionar 5 gotas de HCl
concentrado agitar y observar. Medir nuevamente el pH de la solucin final.

EXPERIMENTO 4.- NATURALEZA AMORTIGUADORA de la ALBMINA

Preparar 4 tubos de prueba con los siguientes reactivos:

Tubo 1.- 1 gota de HCl 0,1 M + 1 gota de anaranjado de metilo + 2 mL de H 20


Tubo 2.- 1 gota de HCl 0,1 M + 1 gota de anaranjado de metilo + 2 mL de H 20
Tubo 3.- 1 gota de NaOH 0,1 M + 1 gota de fenolftalena + 2 mL de H 20
Tubo 4.- 1 gota de NaOH 0,1 M + 1 gota de fenolftalena + 2 mL de H 20

A los tubos 1 y 3 agregar 3 mL de solucin de albmina, agitar y observar.


A los tubos 2 y 4 agregar 3 mL de H2O, agitar y o b s e r v a r .
Explicar sus resultados.

5- RESULTADOS
Registrar los resultados en una tabla siguiente:

sustancia observaciones pH (papel Acido o Base Que crees que


indicador) sucede?
Limn

Vinagre

Refresco

Leche

Sailiva

Crema Dental

Se determin la ecuacin de Henderson-Hassel Bach en las muestras problemas

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6-CONCLUSIONES

7-CUESTIONARIO
1-Explique por qu es importante conocer el pH de las sustancias que utilizamos en
nuestro hogar.
2-Consulte otros tipos de indicadores y su rango de coloracin en medio cido y
bsico y dibuje la escala para cada uno.
3-Realice las ecuaciones qumicas para cada una de las experiencias realizadas
4-cul es la importancia del sistema buffer en el organismo

8- REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

1. Lehninger, A. (1989).Bioqumica: 2da Edicin Omega Barcelona- Espafia


2. Eric Conn, Paul Stumpf, George Bruening, Roy Doi . Bioqumica Fundamental.
Editorial Limusa, Cuarta Edicin Mxico 736 paginas

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PRCTICA N 3

RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS

1-INTRODUCCION
Los carbohidratos, glcidos o azcares constituyen una de las ms importantes clases de
molculas constituyentes de los organismos. Los carbohidratos son los compuestos orgnicos
ms abundantes de la biosfera y a su vez los ms diversos. Normalmente se los encuentra en
las partes estructurales de los vegetales y tambin en los tejidos animales, como glucosa o
glucgeno. Estos sirven como fuente de energa para todas las actividades celulares vitales.
Son complejos terciarios en los cuales el hidrgeno y el oxgeno estn en igual proporcin que
el agua. Los ms comunes son los sacridos, los cuales se dividen tambin en monosacridos
o azcares simples, disacridos y polisacridos. Los carbohidratos son derivados aldehdicos o
cetnicos de alcoholes polioxidrilados y por lo tanto tienen las propiedades caractersticas de
esos grupos como son la formacin de oxina e hidrazonas. Existen diferentes tipos de
reacciones qumicas que sirven para determinar cualitativamente la presencia de carbohidratos
(monosacridos, disacridos y polisacridos)
La glucosa se usa mucho como alimento y como agente edulcorante, industrialmente se fabrica
en grandes cantidades por hidrlisis de almidn. La frmula estructural de la sacarosa no tiene
grupos hidroxilos glucsidos libres, ni contiene grupo aldehdico libre ni potencial, ya que las
dos unidades de monosacridos estn unidos por los hidroxilos glucsidicos, ello trae como
consecuencia que la sacarosa no presente mutarrotacin, no sea reductora y no forme
osazona.

2-OBJETIVOS
1. Realiza las reacciones de caracterizacin de azucares
2. Explica y describe qumicamente las reacciones

3- MATERIALES Y EQUIPOS

MATERIALES
Tubos de ensayo (18) Gradilla Pinza para tubo de ensayo Pipetas (3 de 1mL, 2 de 5mL)
Vaso de precipitado (2 de 50mL) Vidrio de reloj Trpode Mechero Bunsen o de alcohol
Esptula Agitador de vidrio Rejilla con asbesto Agua destilada

REACTIVOS
Reactivo de Fehling A y B Reactivo De Lugol Reactivo de Seliwanoff Reactivo de
Molish Reactivo de Bial HCl concentrado y diludo Bicarbonato. Sacarosa (azcar
comn) Fructosa (refresco) Lactosa (leche) Almidn (harina). Galactosa, xilosa,
ribosa, maltosa.

4- PROCEDIMEINTO
.4.1. Experiencia: REACCIN DE FEHLING
Tomar la muestra que se quiera analizar (aproximadamente 3 mL) Aadir 1 mL de
Fehling A y 1 mL de Fehling B. El lquido del tubo de ensayo adquirir un fuerte

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color azul. Calentar el tubo al bao Mara o directamente en un mechero de


laboratorio. La reaccin ser positiva si la muestra se vuelve de color rojo ladrillo.
La reaccin ser negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul-
verdoso.
3.4.2. Experiencia: REACCIN LUGOL
Este mtodo se usa para identificar polisacridos. El almidn en contacto con unas
gotas del reactivo de Lugol (disolucin de yodo y yoduro potsico) toma un color
azul-violeta caracterstico. Agregar en un tubo de ensayo unos 3 mL del glcido a
investigar. Aadir unas gotas de Lugol, si la disolucin del tubo de ensayo se torna
de color azul-violeta, la reaccin es positiva.
3.4.3. Experiencia: REACCIN MOLISH
En un tubo de ensayo, colocar 2 mL de cada una de las muestras indicadas,
adicionar 3 gotas de reactivo de Molish y mezclar. Aadir en zona (dejar resbalar
por las paredes del tubo, lentamente), 2 mL de cido sulfrico concentrado. La
formacin de un anillo de color prpura en la interfase indicar que la reaccin es
positiva.
3.4.4. Experiencia: REACCIN BIAL
En tubos de pruebas, colocar 2 mL de cada una de las muestras indicadas,
adicionar 4 mL de reactivos de Bial, calentar en bao mara durante 10 a 15 minutos
hasta ebullicin. La coloracin verde indica la presencia de pentosas.

3.4.5. Experiencia: REACCIN DE SELIWANOFF


Colocar en tubos de pruebas 5 mL de reactivo de Seliwanoff y 3 mL de las
muestras indicadas, llevar a bao mara durante 4 a 5 minutos. La coloracin
salmn 8 rojo cereza evidencia la presencia de cetohexosas.

3.4.6. Experiencia: AZCARES NO REDUCTORES


Tomar una muestra de sacarosa y aadir unas 10 gotas de cido clorhdrico al 10%.
Calentar a la llama del mechero durante un par de minutos. Dejar enfriar y realizar
la prueba de Fehling. Observa el resultado. La reaccin positiva nos dice que
hemos conseguido romper el enlace O-glucosdico de la sacarosa. (Se recomienda
antes de aplicar la reaccin de Fehling, neutralizar con bicarbonato, Fehling sale
mejor en un medio que no sea cido.)

5- RESULTADOS
Se determin la presencia de azucares en las muestras problemas

6- CONCLUSIONES:
Escribe tus conclusions sobre la prctica.

7- CUESTIONARIO
1-Por qu razn LOS CARBOHIDRATOS tienen diferentes resultados con los reactivos?
Explique.
2-Los polisacridos y monosacridos utilizan un mismo reactivo? Qu cambios se observa
con cada una de stas molculas? Explique.
3-Explique las propiedades de cada uno de los reactivos utilizados en la prctica de
laboratorio.
4- Realice las ecuaciones qumicas para cada una de las experiencias realizadas
5-Indique otros mtodos cualitativos para identificacin de glucosa y sacarosa

8-REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

1. Lock de Ugaz O. Investigacin Fitoqumica: Mtodos en el estudio de productos naturales


2. Dominnguez, X. A. Mtodos de Investigacin Fitoqumica. Editorial Limusa, Mxico
D.F.1973
3. Gibaja O. S. Gua para el anlisis de los compuestos del carbono Lima Per 1977

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PRCTICA N 4

RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS

1-INTRODUCION
Aminocidos: En la estructura general de los aminocidos se observa que tienen en
comn un tomo de carbono central (alfa) al que estn unidos covalentemente un
cido carboxlico, un grupo amino y un tomo de hidrgeno. Adems de ello, al tomo
de carbono alfa se une una cadena lateral, designada R, que es diferente para cada
uno de los 20 aminocidos comunes.

Las protenas son compuestos biolgicos conformados principalmente por la unin de


alfa aminocidos unidos unos a otros en forma lineal mediante enlaces peptdico.
La conformacin estructural de una protena que se da en forma natural (protena
nativa) es una caracterstica extremadamente importante de las protenas. A travs de
estudios con rayos X de ciertas protenas nativas y polipptidos sintticos, Pauling y
Corey propusieron que toda o ciertas partes de algunas protenas contenan
aminocidos dispuestos en forma helicoidal especficamente como una alfa hlice. En
otras protenas, tales como las del msculo o el pelo, se observan otras estructuras.
La desnaturalizacin de las protenas puede ser definido como algn cambio en la
estructura de la protena nativa que no produce la ruptura de los enlaces peptdicos.
Los agentes desnaturalizantes, tales como el calor, cidos, bases, agitacin, rayos X,
oxidacin o reduccin y urea, actan rompiendo los enlaces de hidrgeno, afectando
los tales como el calor, cidos, bases, agitacin, rayos X, oxidacin o reduccin y urea,
actan rompiendo los enlaces de hidrgeno, afectando los puentes salinos, oxidando o
reduciendo los enlaces disulfuro, etc. dando por resultado un compuesto que posee
una diferente conformacin, as como diferentes propiedades que la protena nativa.
La solubilidad de las protenas depende no slo de la variedad de los grupos
individuales de los aminocidos y de la menera de plegarse la cadena peptidicasino
tambin de las propiedadres del sistema solvente en elcual se encuentra la protena.
La solubilidad de las protenas es muy variable. Muchas de ellas se hallan en
soluciones coloidales en agua, o en soluciones salinas; pero diferentes reactivos
afectan su solubilidad. Las cadenas de aminocidos que conforman las molculas
proteicas contribuyen con grupos cargados positiva y negativamente pueden
reaccionar con otros iones de carga opuesta y con el agua. En consecuencia, existen
interacciones moleculares: protena - protena, protena-pequeos iones y protena-
agua. Alguna condicin por la cual se incremente la interaccin protena - protena, o
de crezca la interaccin protena-agua, decrecer su solubilidad y viceversa.
La fuerza inica del medio, el pH, la temperatura y el efecto del solvente son los cuatro
factores principales que afectan la solubilidad de las protenas, relacionados todos con
las estructuras secundaria y terciaria.

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2- OBJETIVOS:

1. Conoce los mtodos de obtencin de la albmina


2. Realiza las reacciones de caracterizacin de los aminocidos y protenas
3. Explica y describe qumicamente las reacciones.

3- MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales:
1. Tubos de ensayo
2. Gradilla de metal
3. Pipeta 2mL y 5mL
4. Becker 250mL y 500mL
5. Esptula
6. Bagueta

Reactivos:
1. HCl Q.P
2. Hidrxido de sodio 40%, 10%
3. Sol. Sulfato de amonio 75%
4. Acetona
5. Sol. Albumina 1%
6. Sol. De ferrocinaruro de potasio
7. Fenilalanina Q.P
8. Tiroxina Q.P
9. Triptofano Q.P
10. cido sulfrico Q.P
11. Rvo. De Biuret
12. Rvo. De ninhidrina

4- PROCEDIMIENTO

Preparar una solucin de albmina con la clara de un huevo diluido en agua

A. Determinacin de las propiedades de las protenas

Reaccin de Desnaturalizacin: Disponer de 5 tubos de ensayo

Tubo N1: 2mL de solucin de albmina y luego calentar.


Tubo N2: 2mL de sol. de albmina y X gotas de HCl concentrado

de precipitacin mediante aniones:

Tubo N01: 1mL de solucin de albmina.


Tubo N02: 1mL de sol. de albmina y II gotas de HCl 10%
Tubo N03: 2mL de sol. de albmina y II gotas de NaOH 10%

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B. Reacciones de coloracin: Determinacin de aminocidos

Mtodo de la ninhidrina: Grupo amino libre


En un tubo de ensayo aadir 1mL de la Solucin de albmina 1%, llevar a bao mara
por 5 minutos. Observar y anotar los resultados

Reaccin con acetato de plomo alcalino: Aminocidos azufrados

En un tubo de ensayo aadir 1mL de la Solucin de cistena, metionina y 1mL de


acetato de plomo alcalino a cada uno de los tubos de ensayo.
Observar y anotar los resultados.

B. Determinacin de protenas:

Reaccin de Biuret:

En un tubo de ensayo aadir 1mL de solucin de albmina, adicionar 1 mL. de una


solucin de NaOH 10% y luego aadir 1 gota de sulfato de cobre 1%.

5- RESULTADOS
Se determin el anlisis cualitativo de aminocidos de la albmina

6-CONCLUSIONES

7- CUESTIONARIO
1. Realice las ecuaciones qumicas de cada una de las experiencias
2. Indique otras tcnicas por las cuales se pueda identificar aminocidos o protenas

8-REFERENCIA BIBLIOGRAFICA
1. Lock de Ugaz O. Investigacin Fitoqumica: Mtodos en el estudio de productos
Naturales
2. Dominnguez, X. A. Mtodos de Investigacin Fitoqumica. Editorial Limusa, Mxico
D.F. 1973
3. Gibaja O. S. Gua para el anlisis de los compuestos del carbono Lima Per 1977

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PRACTICA N 5

DETERMINACION DE COLESTEROL EN SANGRE

5.1. Marco terico.


El colesterol es el esteroide ms abundante en el organismo humano.
Es un componente habitual de la dieta (carne, leche, huevos), pero
fundamentalmente el, organismo lo sintetiza en el hgado. Es importante
mencionar que una de sus principales funciones biolgicas es la de
regular la fluidez de las membranas celulares y la de constituirse como
uno de los precursores de hormonas esteroideas, gestgenos y
corticoides, andrgenos, estrgenos, vitaminas y otros compuestos
biolgicos

Se desplaza por la sangre en partculas denominadas lipoprotenas, que


contienen tanto lpidos como protenas. El organismo cuenta con tres
tipos de lipoprotenas:

Lipoprotenas de baja densidad (LDL): Contienen cerca del 70 por


ciento del colesterol del suero y favorecen los trastornos cardiovasculares

Lipoprotenas de baja densidad (HDL): Acumulan el 20 por ciento del


colesterol total y tienen un efecto protector

Lipoprotenas de muy baja intensidad (VLDL): Contienen en torno al


10 por ciento del colesterol total del suero y la mayor parte de los
triglicridos.La principal consecuencia del exceso de colesterol en sangre
es el desarrollo de enfermedades coronarias (EC). Que son frecuentes en
las poblaciones cuya alimentacin es rica en grasas saturadas

La hipercolesterolemia est estrechamente ligada a la arterosclerosis,


una alteracin degenerativa que ataca a las arterias en las que se forman
placas de ateroma.
que obstruyen total o parcialmente los vasos de las arterias ocasionando
una falta de riego. Si la falta de riego se localiza en las arterias coronarias
que irrigan el corazn se puede originar una angina de pecho o un infarto
de miocardio. Si se produce en las arterias cerebrales son frecuentes las
hemorragias y trombosis cerebrales. Cuando la obstruccin se localiza en
las extremidades puede favorecer la gangrena de un miembro y, en el
peor de los casos, su amputacin.

5.2. Competencia.
Determina colesterol en el suero sanguneo. Concientiza el riesgo
que genera concentraciones elevadas de colesterol (ateroma) o bajas
(afeccin heptica o tiroidea).

5.3. Materiales y equipos.

5.3.1. Equipos y materiales.


- Espectrofotmetro.
- Centrifuga.

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- Bao Mara regulado a 37C.


-Jeringas descartables x 5ml. con aguja hipodrmica estril,
o tubos vacutainers tapa roja, adaptador y aguja vacutainer
-Algodn, ligadura.
-Tubos de prueba de 13 x 100mm.
-Pipetas de 10 mL.
- Micropipetas de 0 a 50 uL.
-Punteras amarillas, gradillas y baguetas.

5.3.2. Reactivos.

Set de reactivos para colesterol (enzimtico).


Muestra biolgica.
Alcohol medicinal.

5.3.3. Procedimiento.
a. En una gradilla disponer tres tubos de prueba de 13 x 100mm,
rotularlos
con P (problema), S (Standard) y B (blanco) luego proceder como
sigue
b. Reposo x 20 minutos.

REACTIVOS P S B

Suero del paciente 10 ul - -

Standard de colesterol 200mg/dl - 10ul -

Agua destilada - - 10 ul

Reactivo enzimtico 1mL 1mL 1mL

a. Leer a 650 nn, llevando el espectrofotmetro a cero en


absorbancia con el blanco de reactivos.
b. Para obtener la concentracin de colesterol de la muestra
problema, se aplica la siguiente frmula.

mg de colesterol/ dL = absorbancia del problema X 200


absorbancia del standard
5.4. Resultados.
Concentraciones de colesterol, en mg/dL, obtenidos por los alumnos en las
muestras analizadas.

5.5. Cuestionario.
a. Describa como se realiza la biosntesis del colesterol.
b. Qu ocurre cuando el LDL-colesterol no es fagocitado?
c. Mencione cuatro mtodos para la determinacin de colesterol en
sangre, indicando cul? de ellos es el ms exacto y por qu. y
Porqu?
d. Mencione lo requisitos indispensables que debe observar una
persona, para que su determinacin de colesterol sea real.
e. Explicite la biosntesis de colesterol a partir de la ingesta de
carbohidratos.

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5.6. Fuentes de Informacin.


a. Stryer l , Berg JM. Bioqumica. 5ta ed. Barcelona. Reverte. 2003.
b. Devlin TM. Bioqumica. 4 ed. Barcelona. Reverte. 2004.
c. Lehninger. Principios de Bioqumica.4 ed. Barcelona. Omega. 2006.
d. Mathews CK, Van Holde KE Bioqumica. 3a ed. Madrid. Addison
Wesley. 2002.

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PRACTICA N 6

DIGESTION ENZIMATICA DEL ALMIDON

5.1. Marco terico.

El almidn constituye un importante componente de la dieta de los seres humanos.


El proceso de digestin de este nutriente se inicia en la cavidad oral, lugar en que
acta la alfa-amilasa salivar, enzima que tiene la propiedad de hidrolizar los enlaces
alfa 1,4 del almidn y formar polisacridos de menor peso molecular.

5.2. Competencia.
Determina colesterol en el suero sanguneo. Concientiza el riesgo que
genera concentraciones elevadas de colesterol (ateroma) o bajas (afeccin
heptica o tiroidea).

5.3. Materiales y equipos.

5.3.1. Equipos y materiales.

Tubos de prueba de 13 x 100mm.


Pipetas de 10 mL.
Micro pipetas de 0 a 50 uL.
Punteras amarillas, gradillas y baguetas.
Bao maria
reloj
lugol
Gradillas
Muestra: saliva

5.3.2. Reactivos.
Tampon fodfsto 0.1 M pH 6.5
Almidon 1%
HCl 0.5N
Agua destilada

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5.3.3. Procedimiento.

HIDROLISIS DEL ALMIDON POR LA AMILASA SALIVAR

Para realizar el experimento se prepararn los siguientes medios de reaccin:

1 2 3

mL. tampn fosfato 0.1 M pH 6.5 1 1.0 1.0


mL. de almidn al 1% 2. 2.0 2.0
mL. cido clorhdrico 0.5 N 0.
-- --- 1.
mL. de agua destilada 0- 1. 5
2 5 ---
.
0
Colocar los tubos de ensayo en el bao mara a 37 C durante 2 min, luego
adicionar:

Colocar nuevamente los tubos en bao mara y sacar alcuotas de 0.5 mL. de cada
uno de los tubos
a los 5, 10, 15 y 20 minutos, y adicionarlos a los tubos previamente preparados que
contienen 2.0 mL
de cido clorhdrico 0.05 N, de acuerdo al siguiente esquema:

Tubo N 1 2 3

Luego adicionar a cada tubo:

Gotas de solucin de Lugol 1 gota 1gota 1gota


Dejar en reposo durante 1 minuto y observar el color formado.
Durante el desarrollo del experimento se observarn modificaciones del color inicial de
los
tubos como consecuencia de la accin de la alfa-amilasa salivar.
El experimento concluye cuando uno de los tubos muestre un color pardo claro.

5.4. Resultados.
Se determin la accin enzimtica sobre el almidon

5.5. Cuestionario.
Describa como se realiza la hidrolisis del almidn mediante la enzima.
Qu ocurre cuando hay deficiencia de esta enzima?

5.6. Fuentes de Informacin.


a. Stryer l , Berg JM. Bioqumica. 5ta ed. Barcelona. Reverte. 2003.
b. Devlin TM. Bioqumica. 4 ed. Barcelona. Reverte. 2004.
c. Lehninger. Principios de Bioqumica.4 ed. Barcelona. Omega. 2006.
d. Mathews CK, Van Holde KE Bioqumica. 3a ed. Madrid. Addison Wesley. 2002

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PROGRAMACION DE PRACTICAS SEGUN SILABO 2017- I

CONTENIDOS EVALUACIN DEL APRENDIZAJE REA DE PRACTICA


Semana Fechas TEMATICOS A ESTRATEGIAS
DESARROLLLAR METODOLGICAS AULA
INDICADORES INSTRUMENTOS LABORATORIO
SEMINARIO
Introduccin.
Formacin de Experiencias
1 X
grupos de vivenciales
trabajo.
Bioseguridad y
Responsabilidad
Reconocimiento Practicas Rubrica
Trabajo en equipo
2 de materiales y dirigidas Lista de X
Aprendizaje
Equipos de cotejos
independiente
Laboratorio
Responsabilidad
Importancia del Practicas Rubrica
Trabajo en equipo
3 agua en nuestro dirigidas Lista de X
Aprendizaje
organismo cotejos
independiente
Responsabilidad
Identificacin de Practicas Rubrica
Trabajo en equipo
4 Elementos dirigidas Lista de X
Aprendizaje
Biogensicos cotejos
independiente
Responsabilidad
Practicas Rubrica
Trabajo en equipo
5 Ciclo de Krebs dirigidas Lista de X
Aprendizaje
cotejos
independiente
Determinacin Responsabilidad
Practicas Rubrica
del pH y Accin Trabajo en equipo
6 dirigidas Lista de X
de los Aprendizaje
cotejos
Amortiguadores independiente
Patologias
Responsabilidad
relacionadas con Practicas Rubrica
Trabajo en equipo
7 los trastornos del dirigidas Lista de X
Aprendizaje
metabolismo de cotejos
independiente
carbohidratos
8 Primera evaluacin de prcticas
Responsabilidad
Practicas Trabajo en Rubrica
Identificacin de
9 dirigidas equipo Lista de X
Carbohidratos
Aprendizaje cotejos
independiente
Patologias Responsabilidad
relacionadas con Practicas Trabajo en Rubrica
10 los trastornos del dirigidas equipo Lista de X
metabolismo de Aprendizaje cotejos
lpidos independiente
Responsabilidad
Practicas Trabajo en Rubrica
Identificacin de
11 dirigidas equipo Lista de X
Lpidos
Aprendizaje cotejos
independiente
Responsabilidad
Reconocimiento
Practicas Trabajo en Rubrica
de las
12 dirigidas equipo Lista de X
propiedades de
Aprendizaje cotejos
las enzimas
independiente
Segunda evaluacin de prcticas
13 X

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ANEXOS

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