PRESENTACIN

este trabajo esta dirijido a todas las personas que estn interesadas en
saber mas de la validon
se presenta este tema con un gran nfasis de ,,,,

No puedo llnalo

1
 NDICE

PRINCIPIOS DE LA PRCTICA ANALTICA _______________________________________ 3

INTRODUCCIN __________________________________________________________ 3
VALIDACIN _____________________________________________________________ 3
POR QU ES NECESARIO VALIDAR UN MTODO? _______________________________ 9
CUNDO DEBERA VALIDARSE UN MTODO? _________________________________ 9
QUIN REALIZA LA VALIDACIN? __________________________________________ 10
QU REQUISITOS DEBO CUBRIR ANTES DE VALIDAR UN MTODO ANALTICO?______ 10
DESARROLLO DEL MTODO ________________________________________________ 11
PARMETROS DE DESEMPEO DE UN MTODO _______________________________ 11
INCERTIDUMBRE ________________________________________________________ 23
USO DE LOS DATOS DE VALIDACIN PARA CONTROL DE CALIDAD _________________ 27
CONTROL DE CALIDAD INTERNO ____________________________________________ 27
CONTROL DE CALIDAD EXTERNO ____________________________________________ 28
CONCLUSION ___________________________________________________________ 33
Bibliografa _____________________________________________________________ 33

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PRINCIPIOS DE LA PRCTICA ANALTICA

Las mediciones analticas se deberan hacer para satisfacer una necesidad

acordada (por ejemplo algn objetivo definido)
Las mediciones analticas se deberan realizar usando mtodos y
equipamiento que han sido probados para asegurar que se ajustan al
propsito de la medicin
El personal dedicado a las mediciones analticas debera ser calificado y
competente para realizar la tarea (y demostrar que pueden realizar el anlisis
correctamente)
Debera haber un ensayo independiente regular del desempeo tcnico de un
laboratorio
Las mediciones analticas realizadas en un lugar deberan ser consistentes con
aquellas realizadas en otro lugar
Las organizaciones que hacen mediciones analticas deberan tener
procedimientos de control de calidad y de aseguramiento de la calidad bien
definidos

INTRODUCCIN

La validacin de un mtodo es un requisito importante en la prctica de los

anlisis qumicos. Sin embargo, se suele considerar a la validacin de un mtodo
como algo que solamente se puede hacer en colaboracin con otros laboratorios
y en consecuencia, no se hace.

VALIDACIN

La validacin de un mtodo analtico es un paso fundamental para asegurar que

los resultados entregados por dicho mtodo son confiables. Cuando se realiza la
validacin de un mtodo por parte del laboratorio, lo que se busca es poder
determinar con fundamento estadstico que el mtodo es adecuado para los fines
previstos.

3
En este sentido, es importante que para el proceso de validacin se asigne a un
responsable de realizar dicha tarea. De manera que, la validacin se efecte en
forma metdica, ordenada, trazable y confiable.
Es importante que el laboratorio tenga claridad antes de iniciar la validacin de
cuales son los requerimientos del mtodo para establecer el alcance de la
validacin.
Es esencial, entonces conocer el mtodo a validar y su aplicabilidad, es decir, el
analito, su concentracin (nivel, LMP, LMR, etc.) y la matriz (o matrices) en las
cuales se desea utilizar.

En general, se establece que el laboratorio DEBE validar:

1. Mtodos no normalizados:
Corresponden a mtodos desarrollados por el laboratorio o mtodo nuevos
(ejemplo: publicado en revista cientfica), o bien, a mtodos que tradicionalmente
se han utilizado en el laboratorio pero que no estn normalizados.

2. Mtodo normalizado con una modificacin significativa:

Cuando se trata de un mtodo empleado tradicionalmente por el laboratorio que

no est normalizado, se puede realizar una Validacin Retrospectiva, es decir,
en base a los datos experimentales que el laboratorio dispone, para la cual se
realizara la recopilacin de la mayor cantidad de datos histricos disponibles, para
luego realizar un proceso de ordenamiento y seleccin de los datos recopilados,
estos datos pueden ser: curvas de calibracin, resultados de ensayos, cartas de
control, ensayos de aptitud, etc. A travs de estos, se debern determinar los
parmetros de validacin, y evaluar si los resultados obtenidos para los fines de la
son aceptable.

En caso de ser un mtodo nuevo (o uno antiguo del que no se dispongan de

datos suficientes) se debe realizar una Validacin Prospectiva, generando a
travs de anlisis datos experimentales.

En algunos casos se puede realizar lo que se conoce como validacin menor o

verificacin cuando se trate de:

1. Mtodos normalizados.
2. Mtodos normalizados usados fuera de su alcance propuesto. Ejemplo: uso en
otra matriz.
3. Ampliaciones y modificaciones menores de mtodos normalizados. Ejemplo:
uso en otros analtos.
4. Cuando se trate de mtodos previamente validados, que haya sufrido alguna
alteracin significativa por lo cual deben volver a evaluarse. Estas variaciones
pueden ser; cambio de equipo, cambio de componentes de equipo como
columnas, detectores, cambio analista, cambio de la matriz que contiene la
muestra o de nivel de concentracin del analito de inters, entre otros.
4
La verificacin, tiene generalmente como objetivo, el comprobar que el
laboratorio domina el mtodo de ensayo normalizado y lo utiliza correctamente, en
caso de tratarse de un mtodo normalizado modificado para la verificacin se
requiere solo realizar aquellas pruebas que indiquen que la variacin realizada no
afecta el ensayo.
En ocasiones, lo que se busca a travs de una validacin es demostrar que un
mtodo es equivalente a otro.
El objetivo de la validacin y la verificacin, es demostrar que el mtodo utilizado
por un laboratorio es adecuado para la aplicacin en la que se propone utilizar,
as, como tambin demostrar que las modificaciones que pudieron haberse
realizado no afectan su desempeo, ni la confiabilidad de los resultados por este
entregado.

5
En relacin a los parmetros de validacin o verificacin estos debern
determinarse de acuerdo al tipo de mtodo. Para este fin la siguiente tabla puede
ser utilizada como gua:

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De acuerdo a los antecedentes anteriormente mencionados, el responsable de la
validacin o verificacin deber as elaborar el Plan de Validacin que se va a
realizar.

A) ESTABLECER PLAN DE VALIDACIN

Se entiende como Plan de Validacin, a un documento (tipo protocolo) en el cual

se definen previamente a la experiencia; las pruebas o parmetros de validacin
necesarios y el diseo experimental a desarrollar en base a los requerimientos del
mtodo.

El Plan de Validacin deber contener a lo menos:

Alcance de la validacin (mtodo, analito, matrices y requerimientos del mtodo
Diseo experimental:

Establecer la(s) muestra(s) a ser analizada(s): testigos reactivos, blanco matriz,

material certificados, material control, material(es) de referencia certificado,
matrices de las muestras, muestras sin fortificar, muestras fortificadas, etc.
El (los) parmetro(s) y pruebas a desarrollar, en caso, de que la prueba no sea
una convencional, sino diseada por el responsable, tambin deber indicarse en
el documento.
Numero de anlisis requeridos para cada prueba y/o parmetro.
Criterios de aceptabilidad para cada parmetro de validacin.
Analista(s) responsable de realizar la(s) prueba(s) analtica(s).
Materiales, insumos y equipos necesarios para desarrollar la validacin.
Responsable de la Validacin, fecha o tiempo programado para realizar la
validacin y fecha de elaboracin del plan.

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Cualquier modificacin realizada al plan de validacin, durante el proceso, debe
quedar debidamente documentada.
En anexo No 1, Se muestra un formato de plan de validacin. En el anexo No 6,
se incluye un ejemplo de esquema de trabajo de como se desarrolla un plan de
validacin para un mtodo normalizado.

B) DESARROLLO DE PRUEBAS DE PARAMETROS DE VALIDACIN

Para el desarrollo de las pruebas de validacin, los analistas a cargo debern

conocer el procedimiento de mtodo de ensayo y el nmero de ensayos o
mediciones a realizar de acuerdo a lo establecido en el plan de validacin.

(IMPORTANTE: El personal responsable de realizar los anlisis se encuentre

debidamente calificado, y
los equipos asociados al mtodo deberan encontrarse calibrados o controlados
antes de su uso.)
Los resultados obtenidos en cada prueba deben ser debidamente registrados y
almacenados. Los ensayos o mediciones realizadas sern con el fin de poder
realizar las siguientes pruebas de parmetros de validacin:

Selectividad
Linealidad
Sensibilidad
Limites
Exactitud
Precisin
Robustez
Aplicabilidad

El analista o responsable de la validacin deber con los resultados obtenidos de

cada prueba realizar los clculos matemticos, comparativos y/o estadsticos
correspondientes a cada ensayo para lo cual podr utilizar para ese fin un
software estadstico, calculadora o una planilla de clculo (ejemplo: Excel).

C) EVALUAR RESULTADOS DE LA VALIDACIN

Se deber evaluar para cada parmetro de validacin, si los resultados de las

pruebas son satisfactorios, es decir, si cumplen con los criterios de aceptabilidad
establecidos en el plan, se considera que el mtodo es aceptable.

D) INFORME DE VALIDACIN

El responsable de la validacin, deber realizar un informe en el cual presentara

los resultados
Obtenidos y conclusiones. El informe debe contener la declaracin de la
aplicabilidad del mtodo.

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 En el anexo No 2, se entrega un modelo tipo de informe de validacin.
El laboratorio debe tener disponible el procedimiento usado para la validacin, y
una declaracin acerca de que el mtodo se ajusta para el uso propuesto.
Este informe deber ser revisado por una tercera persona que tenga conocimiento
en el rea, y que no haya formado parte del proceso de validacin. En dicha
revisin se deber establecer si los criterios de aceptabilidad establecidos en el
plan son aceptables, y si el mtodo es idneo para el fin previsto.

POR QU ES NECESARIO VALIDAR UN MTODO?

Cuando la medicin analtica es importante (costo, salud, remediacin, legal, etc.)

1. Virtualmente, cualquier aspecto de la sociedad se respalda de algn modo por
una medicin analtica.
2. Es importante determinar el resultado correcto y ser capaz de demostrar que es
correcto.

Por la obligacin profesional del analista.

1. El cliente espera confiar en los resultados informados y generalmente los

cuestiona cuando aparece algn conflicto (aqu el analista debe demostrar que ha
informado la respuesta correcta para la parte analtica del problema del cliente
la validacin del mtodo permite demostrar que el mtodo is fit for purpose
2. Por la confianza con que el cliente necesita tomar decisiones en base a los
resultados analticos aqu se debe validar la aptitud del mtodo y estimar la
incertidumbre del resultado de un modo que sea ampliamente reconocido,
internamente consistente y fcil de interpretar. (Mucha de la informacin requerida
para evaluar la incertidumbre se puede obtener durante la validacin del mtodo)
3. La toma de muestras: si el laboratorio no puede tomar la muestra o no tiene
influencia sobre ello, los resultados deben informarse sobre la base de las
muestras como fueron recibidas y destacar este hecho en el informe.

CUNDO DEBERA VALIDARSE UN MTODO?

Cuando se necesita verificar que sus parmetros de aptitud son adecuados para
usar para un problema analtico particular.

Ejemplos:

o Cuando se desarrolla un mtodo nuevo

o Cuando se revisa un mtodo ya establecido para mejorar o extender a un
nuevo problema
o Cuando el control de calidad indica que el mtodo en uso est cambiando
con el tiempo
o Cuando se usa un mtodo ya establecido en un laboratorio diferente o con
diferente analista o con diferente instrumental

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 o Para demostrar la equivalencia entre 2 mtodos, por ej. Un mtodo nuevo y
una norma

QUIN REALIZA LA VALIDACIN?

1. El laboratorio que usa un mtodo es responsable de asegurar que est

adecuadamente validado. Si se usa un mtodo normalizado validado, el
usuario solamente necesita establecer los datos de aptitud para el uso propio del
mtodo
2. Validacin mediante un estudio colaborativo. Es el modo preferido de realizar la
validacin de un mtodo
3. Cuando no es posible participar en interlaboratorios para validar el mtodo,
surgen las siguientes preguntas:
o pueden los laboratorios validar mtodos por su cuenta, y cmo?
o pueden estos mtodos validados ser reconocidos por otros laboratorios?
o Qu clase de reconocimiento se puede esperar para los mtodos caseros
usados en un mbito regulAnte un requisito regulatorio, un mtodo analtico
casero debera demostrar:
o las tolerancias de todas las mediciones realizadas (volumen, temperatura,
masas, etc.)
o las formas de la sustancia medida incluyendo su especiacin
o el efecto de las interferencias y su cuantificacin
o las fuentes significativas de error y los mtodos para controlarlas

QU REQUISITOS DEBO CUBRIR ANTES DE VALIDAR UN MTODO ANALTICO?

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DESARROLLO DEL MTODO
Adaptar un mtodo existente y hacerlo adecuado para una nueva aplicacin
Desarrollar un mtodo desde cero, aplicando el conocimiento y la experiencia,
para lograr el mtodo adecuado

PARMETROS DE DESEMPEO DE UN MTODO

SELECTIVIDAD

La selectividad es el grado en que un mtodo puede cuantificar o cualificar al

analito en presencia de interferentes. Estos interferentes normal o frecuentemente
se encuentran en la matriz de inters.
La prueba de selectividad puede disearse de acuerdo al mtodo, en el caso de
cromatografa la resolucin entrega informacin sobre la selectividad del mtodo,
en el caso de espectro fotometra el espectro de absorcin o un espectro de
masas entrega informacin al respecto, en especial cuando es comparado en
presencia de una interferencia.
Una prueba de Selectividad comnmente utilizada, consiste en analizar un
mnimo de tres testigo reactivos, tres blancos de matriz y tres muestras o
estndares de concentracin conocida del analito de inters.
Se deben comparar las lecturas (seales de medicin) obtenidas para cada caso,
y observar si existen variaciones entre los testigos reactivos, blancos de matrices
y estndares o muestras con analito. Si se encuentran diferencias significativas
debern ser identificadas y en lo posible eliminadas.

LINEALIDAD

La linealidad es la capacidad de un mtodo de anlisis, dentro de un determinado

intervalo, de dar una respuesta o resultados instrumentales que sean
proporcionales a la cantidad del analito que se habr de determinar en la muestra
de laboratorio.
Con el fin de determinar el rango lineal se puede realizar mediante un grafico de
concentracin versus respuesta, que se conoce como Funcin Respuesta
(normalmente llamada recta de calibrado). Esta se establece cada dia con una
cierta cantidad de valores formados por un blanco y los patrones de trabajos
limpios de valor terico conocido, que cubran el intervalo de trabajo. En este
sentido se recomienda abarcar valores desde cercano al cero y valores superiores
al LMP o al valor de inters. El nmero de puntos a analizar deber ser
establecido por el analista (en general, se utiliza un mnimo de 4 valores).
Luego de realizar el grafico se puede observar el comportamiento de la curva y
establecer cualitativamente el rango lineal (fig.1). Despus de establecer el
comportamiento lineal del mtodo se deber realizar la Curva de trabajo o curva

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de calibracin (fig.2). Graficar los datos de concentracin de los estndares de
calibracin estimados (X) v/s la lectura observada (Y).

Evaluar los estimadores de regresin lineal del grfico: la pendiente (m), el

coeficiente de correlacin (ro ) y el punto de corte (intercepto) con el eje de las Y
(L0).

En general el criterio de aceptacin cualitativo que se usa para determinar la

linealidad es el coeficiente de correlacin:
El coeficiente de correlacin indica el grado de relacin entre la variable
concentracin (X) y la variable respuesta (Y) de la curva de calibracin. Los
valores mximos que puede alcanzar son 1 y 1. El valor mximo de 1 indica una
correlacin positiva perfecta (entre X e Y) con una pendiente positiva. Cuando
r=0, no existe correlacin alguna, independencia total de los valores X e Y

En la prctica si r tiene un valor cercano a uno (1), esto significa que existe
correlacin con una probabilidad elevada. Para una curva de calibracin o trabajo,
es recomendable que el coeficiente de correlacin obtenido sea mayor o igual a
0.999, aunque para el caso de trazas se admite un valor igual o mayor que 0.99.

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Coeficiente de correlacin (g o r): r > 0.99
Coeficiente de correlacin al cuadrado r2 > 0.99.
Se puede realizar una evaluacin de curva de calibracin global (construida con
ms de una curva de calibracin de las mismas caractersticas) en la cual se
puede realizar una evaluacin estadstica de prueba t-Student, como un mejor
indicador del modelo lineal.

Se calcula un valor de t con n-2 grados de libertad y se compara con el valor

tabulado de t para el nivel de confianza requerido ( = 0.05), dos-colas, en este
caso para un n que depende de los niveles de calibracin.
Se desea probar si existe entonces una correlacin significativa: La hiptesis nula
H0 es que no existe correlacin entre X e Y. Si el valor observado de tr es mayor
que tcri, se rechaza la hiptesis nula H0, siendo la correlacin lineal significativa
con la probabilidad calculada.

Dnde:
tr = Valor del estimador t Student obtenido para el coeficiente de correlacin
| r | = Valor absoluto del coeficiente de correlacin
n 2 = Numero de grados de libertad
r2 = Valor del coeficiente de determinacin

SENSIBILIDAD

La sensibilidad es el cociente entre el cambio en la indicacin de un sistema de

medicin y el cambio correspondiente en el valor de la cantidad objeto de la
medicin.

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En una regresin lineal la sensibilidad corresponde a la pendiente (m) de la recta
de calibracin.
Se calcula como:

El valor de sensibilidad obtenido [m] debe permitir una adecuada discriminacin

de los valores de concentracin en base a la lectura.
En figura No 3, se puede observar que mientras ms prxima al eje de las Y este
la recta, significa que a ligeros cambios en las concentraciones esperadas habr
grandes variaciones en los resultados de las lecturas observadas [m2] En el caso
de [m3] grandes cambios en la concentracin no son significativos para la lectura.

Se dice, que un mtodo es sensible cuando una pequea variacin de

concentracin determina una gran variacin de respuesta. La sensibilidad permite
observar la capacidad de respuesta instrumental frente a una determinada
cantidad de analito. En el tiempo, visualiza cmo se comporta el instrumento.

LIMITES

Se debe tener en consideracin los siguientes parmetros: Valor crtico, limite

deteccin (LOD) y lmite de cuantificacin (LOQ).
Valor critico (LC): El valor de la concentracin o cantidad neta que en caso de
superarse da lugar, para una probabilidad de error dada , a la decisin de que la
concentracin o cantidad del analito presente en el material analizado es superior
a la contenida en el material testigo (Referencia: Codex Alimentarius).

Se recomienda para su clculo a lo menos seis mediciones de blanco matriz o

testigo reactivo.

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Dnde:
t = t-Student
1-= probabilidad b
v= Grados de libertad
So = Desviacin estndar de las lecturas del blanco matriz o testigo reactivo.

Un resultado inferior al LC que determine la decisin no detectado no deber

interpretarse como demostracin de que el analito esta ausente. No se
recomienda notificar tal resultado como cero o como < LOD. Deber hacerse
constar en todo los casos el valor estimado y su incertidumbre.

Lmite de deteccin (LOD): Concentracin o cantidad real del analito presente en el

material objeto de anlisis que llevara, con una probabilidad (1-), a la conclusin
de que la concentracin o cantidad del analito es mayor en el material analizado
que en el material testigo (Referencia del Manual del Codex Alimentarius).
Se recomienda para su clculo a lo menos seis mediciones de blanco matriz,
testigo reactivo o concentracin estimada cercana al blanco.

LOD = 3,29So, cuando la incertidumbre del valor medio (esperado) del material
testigo es insignificante, = = 0,05 y el valor estimado tiene una distribucin
normal con una varianza constante conocida.
Un criterio de aceptacin adecuado es LC < LOD < LMP. En general tambin se
sugiere, para un LMP > 0,1 ppm un LOD < 1/10 LMP y para un LMP <0,1 ppm un
LOD < 1/5 LMP.

Limite de cuantificacin (LOQ): Una caracterstica del funcionamiento del mtodo

que suele expresarse como seal del valor (verdadero) de la medicin que
producir estimaciones con una desviacin estndar relativa (RSD) generalmente
de 10 % (o 6 %). El LOQ se calcula mediante la siguiente formula:

EXACTITUD

El manual del Codex Alimentarius define la exactitud como el grado de

concordancia entre el resultado de un ensayo y el valor de referencia.
El trmino exactitud, esta aplicado a un conjunto de resultados de un ensayo, y
supone una combinacin de componentes aleatorios y un componente comn de
error sistemtico o sesgo.
Cuando se aplica a un mtodo de ensayo, el trmino exactitud se refiere a una
combinacin de veracidad y precisin. En el siguiente esquema de Tiro al
Blanco, ampliamente utilizado para ejemplificar esto, los punto u orificios

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equivaldran a los resultados analticos y el crculo rojo al centro el rango en el
cual se espera este el valor de referencia (o verdadero).

Como se puede observar entre ms veraz y preciso sea un resultado analtico, es

ms exacto.

VERACIDAD

Determina el grado de coincidencia existente entre el valor medio obtenido de una

serie de resultados y un valor de referencia aceptado.
La veracidad puede ser determinada por sesgo o recuperacin.

A) Sesgo (s):

La diferencia entre la expectativa relativa a los resultados de un ensayo o una

medicin y el valor verdadero. En la prctica el valor convencional de cantidad
puede sustituir el valor verdadero. El sesgo es el error sistemtico total en
contraposicin al error aleatorio.
Para determinar el sesgo puede utilizarse material de referencia, material
fortificado, material control, material ensayo de aptitud: Para este fin, se debe
medir un analito de concentracin conocido y se determina la diferencia en valor
absoluto entre el valor conocido y la media del valor obtenido. Una diferencia
sistemtica importante en relacin al valor de referencia aceptado se refleja en un
mayor valor del sesgo, cuanto ms pequeo es el sesgo, mayor veracidad indica
el mtodo.

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Dnde:
s= sesgo
X = lectura obtenida o valor promedio de las lecturas obtenidas.
Xa = valor asignado, valor certificado del material de referencia o valor esperado.
Para evaluar el sesgo, se debe realizar la prueba t, en la cual el tobs < t crit:

Dnde :
t calc= t observado o calculado
Xa = Valor esperado o valor certificado en concentracin
X= Promedio de valores ledos u observados en concentracin
S= Desviacin estndar
n= Numero de lecturas o valores observados.
Buscar t- Student terico en tabla (Anexo II) para grados de libertad (v) y el
porcentaje de seguridad deseado ( 1-a) para un error a. Usualmente se trabaja
con un valor de 0,05.

B) Recuperacin (R):

Es la fraccin de la sustancia agregada a la muestra (muestra fortificada) antes

del anlisis, al ser analizadas muestras fortificadas y sin fortificar.
La recuperacin permite ver el rendimiento de un mtodo analtico en cuanto al
proceso de extraccin y la cantidad del analito existente en la muestra original.
Por lo cual, la recuperacin esta intrnsecamente relacionada a las caractersticas
de la matriz de la muestra.
Se recomienda realizar a lo menos 6 mediciones de cada uno en lo posible en
tres niveles. Se debe considerar al elegir estos niveles el rango de la curva de
calibracin del mtodo, el LOD y el LMP establecido. De manera que los niveles
seleccionados permitan entregar la mejor informacin posible respecto a la
capacidad de recuperacin del mtodo, en cuanto a estos valores crticos.
Se calcula de la siguiente manera:

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Siendo:
R= Recuperacin
Ce = es la concentracin de analito de la muestra enriquecida.
C0 = es la concentracin de analito medida en la muestra sin adicionar.
Ca = es la concentracin de analito adicionado a la muestra enriquecida.
Se puede igualmente expresar en porcentaje de recuperacin (%R): se calcula
de la siguiente manera:

En caso de evaluar la recuperacin, se deber realizar prueba t , en la cual el

tcalc<t crit:

Dnde:
t calc= t observado o calculado
R= Recuperacin
S= Desviacin estndar de las lecturas del porcentaje de recuperacin
n= No de lecturas o valores observados

Si el tcalc> tcrit (hay diferencia estadsticamente significativa), los resultados

reportados debern ser corregidos.
Si el tcalc tcrit (no hay diferencia estadsticamente significativa), no es necesario
ninguna correccin.
El Criterio de aceptacin en base al valor obtenido para el porcentaje de
recuperacin puede utilizarse los criterios de AOAC. En caso de utilizar criterio de
AOAC ( Ver Anexo III), se debe buscar en tabla de acuerdo a la concentracin

18
esperada del analito y si el % R obtenido de la experiencia analtica, se encuentra
dentro del rango de %R tericos esperados.
En caso que se cuente con un MRC utilizar el rango de aceptabilidad sealado en
el certificado como criterio de aceptabilidad. Es decir, el valor determinado
analticamente deber encontrase dentro del rango de tolerancia establecido a
travs de certificado, es decir, del lmite superior (LS) o lmite inferior (LI).
Cabe sealar que el Codex Alimentarius seala que existen directrices relativas a
los intervalos previstos de recuperacin en reas especficas de anlisis, como
por ejemplo: Residuos de plaguicidas (RP) o residuos de medicamentos
veterinarios (RMV). En casos en los que se haya demostrado que la recuperacin
es una funcin de la matriz, podrn aplicarse otros requisitos especificados.

PRECISIN

La precisin podr establecerse en trminos de Repetibilidad y reproducibilidad.

El grado de precisin se expresa habitualmente en trminos de imprecisin y se
calcula como:
Desviacin estndar de los resultados (Referencia: Manual Codex Alimentarius
18o Ed.).

A) Repetibilidad

Es la precisin bajo las condiciones de Repetibilidad, es decir, condiciones donde

los resultados de anlisis independientes se obtienen con el mismo mtodo en
tems de anlisis idnticos en el mismo laboratorio por el mismo operador
utilizando el mismo equipamiento dentro de intervalos cortos de tiempo.
Se puede determinar registrando a lo menos 6 mediciones bajo las mismas
condiciones (mismo operador, mismo aparato, mismo laboratorio y en corto
intervalo de tiempo) de un analito en un Material de Referencia. Calcular la
Desviacin Estndar (Sr) y el porcentaje de coeficiente de
Variacin (CVr%).

B) Reproducibilidad

Es la precisin bajo las condiciones de reproducibilidad, es decir, condiciones

donde los resultados de los anlisis se obtienen con el mismo mtodo en tem
idnticos de anlisis en condiciones diferentes ya sea de laboratorio, diferentes
operadores, usando distintos equipos, entre otros.
Para determinar la precisin de la reproducibilidad intralaboratorio (Ri) ( es decir,
la precisin dentro de un laboratorio), se sugiere realizar 3 mediciones de un
Material de Referencia (MRC o material control) una vez por cada semana o el
comportamiento de la curva de calibracin en 3 das distintos.
Tambin, se puede determinar registrando a lo menos 10 mediciones en das
distintos, o en un mismo da cambiando a lo menos una condicin analtica
(ejemplo: operador, aparato, reactivos y largo intervalo de tiempo) de un analito

19
en un Material de Referencia. Calcular la desviacin estndar (SRi)y el porcentaje
de coeficiente de variacin (CVRi%).

Cuando se desea determinar la reproducibilidad interlaboratorios para fines de

validacin de un mtodo, deben participar diferentes laboratorios, se debe tener
en consideracin que estos utilicen el mismo mtodo y misma muestra, en un
intervalo de tiempo preferentemente establecido, se determina de este modo la
desviacin estndar de los resultados obtenidos por los diferentes laboratorios
(SR).
El criterio de aceptabilidad para la precisin se puede hacer en base a coeficiente
de variacin de Horwitz :

CVh% = 2 (1-0.5)log C o tambin se expresa como; CVh%= 0,02 x c 0.8495

Dnde:
C= valor nominal del analito expresado en potencia de 10, ejemplo 1ppm = 1mg/L
=10-6
En este sentido se establece para la Repetibilidad, el CVr% obtenido debe ser <
(CVh%/2).

En el caso de la reproducibilidad interlaboratorios el CVR% <CVh%, para la

reproducibilidad interna (intralaboratorio) CVRi% < (2CVh%/3).
El Codex menciona que para coeficientes de concentracin < 10-7, se aplica la
teora de Horwitz-
Thompson, esto es, CVT = 22%.

ROBUSTEZ

La robustez es una medida de la capacidad de un procedimiento analtico de no

ser afectado por variaciones pequeas pero deliberadas de los parmetros del
mtodo; proporciona una indicacin de la fiabilidad del procedimiento en un uso
normal. En este sentido el objetivo de la prueba de robustez es optimizar el
mtodo analtico desarrollado o implementado por el laboratorio, y describir bajo
qu condiciones analticas (incluidas sus tolerancias), se pueden obtener a travs
de este resultado confiable.

Un mtodo de ensayo es ms robusto entre menos se vean afectados sus

resultados frente a una modificacin de las condiciones analticas.
Entre las condiciones analticas que podran afectar a un mtodo se encuentran:
Analistas
Equipos
Reactivos
PH
Temperatura. A
Tiempo de reaccin.
Estabilidad de la muestra.
Otros.
20
Para esta determinacin se aplica el Test de Youden y Steiner para la
evaluacin de la robustez de un mtodo qumico analtico. Este procedimiento
permite evaluar el efecto de siete variables con solo ocho anlisis de una muestra.
Para proceder a realizar el estudio de robustez se deben identificar aquellos
factores del mtodo que posiblemente afectaran los resultados finales obtenidos
a travs de este.

Estos factores estn presentes habitualmente en el mtodo (ejemplo:

temperatura, composicin de fase mvil o soluciones reactivas, pH de solucin,
tamao de celda espectrofotomtrica, flujo gas
carrier, split, etc.). Para estudiar la robustez se procede a exponer a cada factor a
un estudio de variable, es decir se expone a una variacin respecto de la
establecida en el mtodo, es decir, cada variable se estudia mediante un valor
alto (A, B,...,G) y otro bajo (a,b,...,g). Una vez establecidos estos valores se
disean ocho pruebas de ensayo como, por ejemplo, muestra la tabla No 3.
Los factores a estudiar no deben ser necesariamente siete; puede considerarse
un nmero menor de variables. Esto no afectara el balance del diseo del
experimento, pero es importante considerar que siempre se den llevar a cabo los
ocho pruebas de ensayo indicado.
Los resultados de la experiencia analtica obtenidos con las variaciones realizadas
en estas 8 pruebas se representan con las letras s hasta la z.
A partir de los resultados puede calcularse el efecto de cada una de las variables
haciendo la media de los cuatro anlisis que contienen la variable en su valor ms
alto (mayscula) y aquellas que corresponden al valor ms bajo (minscula). As,
para evaluar el efecto de la primera variable obsrvese que:

Es decir, la media de los resultados (s + t + u + v) equivalen a A porque las seis

restantes variables presentes en estos cuatro resultados se anulan entre si como
consecuencia de que existen siempre dos maysculas y dos minsculas de cada
variable. Anlogamente, la media de los resultados (w + x + y + z) equivalen a a.
Para cualquier otra variable se puede proceder de manera similar, tal como
muestra la tabla siguiente:

Tabla No 3: Prueba de Robustez de Younden y Steiner

21
Se deben establecer las siete comparaciones posibles, es decir las diferencias
entre la variable de mayor valor versus la de menor valor:

(A a), (B b), (C c), (D d), (E e), (F f) y (G g)

De este modo se puede conocer el efecto de cada variable. En este sentido,

cuanto mayor sea la diferencia de los resultados entre el valor mayor y el valor
menor (D = X-x), mayor influencia tendr dicha variable en el mtodo analtico.
Como criterio de aceptacin para la robustez del mtodo se considera que la
diferencia entre el valor alto y el valor bajo sea superior a 2 de la desviacin
estndar de la precisin del mtodo (S), es decir: ( X-x ) < 2 S.

Una informacin adicional de este test de Youden es que la desviacin estndar

de los resultados s a z constituye una medida excelente de la imprecisin
previsible del mtodo cuando se utiliza para el anlisis de rutina, ya que este
procedimiento introduce deliberadamente el tipo de variacin en las variables que
puede esperarse que ocurra durante el empleo normal del mtodo.

APLICABILIDAD

Se utiliza el trmino de Aplicabilidad, cuando un mtodo de anlisis puede

utilizarse satisfactoriamente para los analtos, matrices y concentraciones
previstas. La declaracin de aplicabilidad (o mbito de aplicacin), adems de
una declaracin del margen de funcionamiento satisfactorio para cada factor,
puede incluir tambin advertencias acerca de la interferencia conocida de otros
analtos, o de la inaplicabilidad a determinadas matrices y situaciones.
Es decir, la aplicabilidad consiste en una declaracin de las especificaciones del
rendimiento del mtodo, que se entrega en el informe de validacin y que
normalmente incluye la siguiente informacin:
La identidad de la sustancia analizada, incluyendo en su caso, de especiacin
(por ejemplo, "el arsnico total, metil-mercurio).

22
 El intervalo de concentraciones cubierto por la validacin (por ejemplo, "0-50
ppm")
Una especificacin de la gama de las matrices del material de prueba cubierto
por la validacin (por ejemplo, marisco", productos lcteos, etc.).
La aplicacin prevista y de sus requisitos de incertidumbre crticos. (Ejemplo:
anlisis de residuos de plaguicidas en frutas ctricas de acuerdo al reglamento
sanitario de alimentos).
En este sentido, la prueba de aplicabilidad, consiste en el mbito de aplicacin del
mtodo declarado por el responsable de la validacin, una vez concluida esta.
En aquellos casos que se trate de un mtodo normalizado u oficializado, esta
declaracin se realiza de acuerdo a los antecedentes bibliogrficos o normativos
del mtodo.

INCERTIDUMBRE

La incertidumbre de una medicin es el parmetro asociado al resultado, es decir,

caracteriza la dispersin de los valores que razonablemente pueden ser atribuidos
al mesurando.
En este sentido, es importante que para un mtodo validado o verificado por el
laboratorio, se realice la determinacin de las diferentes fuentes o componentes
de la incertidumbre de la medicin presentes:
a) Muestreo
b) Efectos de la muestra: tipo de matriz, almacenamiento, etc.
c) Sesgos Instrumentales: Las debidas a las caractersticas de los equipos
utilizados para realizar las medidas tales como: deriva, resolucin, magnitudes de
influencia. Ejemplo: temperatura
d) Pureza de Reactivos: materiales de referencia, preparacin de estndares.
e) Analista: Las debidas a la serie de mediciones: variaciones en observaciones
repetidas bajo condiciones aparentemente iguales. Ejemplo: paralelaje
f) Condiciones de medicin: Las debidas al certificado de calibracin: en el se
establecen las correcciones y las incertidumbres asociadas a ellas, para un valor
de k determinado, en las condiciones de calibracin. Ejemplo: material
volumtrico, etc.
g) Condiciones de medicin: temperatura, humedad, etc.
h) Otras: Mtodo (por ejemplo al interpolar en una recta), tablas (por ejemplo las
constantes), pesada, alcuota, efectos computacionales, etc.
Generalmente para el anlisis de las fuentes de incertidumbre se utiliza el
diagrama de espina de pescado u otro tipo de diseo esquemtico que permita
con facilidad identificar las fuentes de incertidumbre presentes durante el proceso
analtico. Ejemplo:

23
La incertidumbre de la medicin comprende, en general, muchos componentes.
Algunos de estos pueden ser evaluados por tipo.
Para este fin el laboratorio deber realizar una evaluacin de las incertidumbres
tipo A y B que estn presentes en el mtodo:

Evaluacin de incertidumbre tipo A: Evaluacin de un componente por un anlisis

estadstico de los valores de mediciones obtenidos en condiciones de medicin
definidas. Ejemplo: realizar varias mediciones en condiciones de Repetibilidad.

Evaluacin de incertidumbre tipo B: Evaluacin de un componente incertidumbre de

la medicin realizada por otros medios distinto a los del tipo A. Ejemplos: La
evaluacin basada en la informacin, obtenidos a partir de un certificado de
calibracin, obtenidos a partir de los limites deducirse a travs de personal la
experiencia, etc.
En general, la incertidumbre est dada por los errores sistemticos y aleatorios
presentes en el ensayo analtico.

24
La determinacin de la incertidumbre incluye generalmente 4 pasos, el primero
como se ha dicho anteriormente corresponde a la determinacin de las fuentes, el
segundo en expresar los componentes en una incertidumbre estndar , el tercero
combinar las diferentes incertidumbres y el cuarto paso es la determinacin de la
incertidumbre expandida es decir, multiplicar la incertidumbre combinada por un
factor de cobertura de k = 2, a fin de entregar un 95% de confianza, y as
establecer el intervalo entorno al resultado de la medicin en el cual se puede
esperar que se incluya la mayor fraccin de la distribucin de los valores que se
pueden atribuir razonablemente al mesurando.

Los resultados obtenido se expresaran como por ejemplo: 178 mg/L + 14 mg/L ,
que corresponde a 178 mg/L + ( 2x7 mg/L), es decir, el resultado entregado,
corresponde a un intervalo de a } 2u que representa un nivel de confianza del
95 % dentro del cual se encontrara el valor real.

En algunos casos pueden existir mayores exigencias en cuanto al valor del factor
de cobertura utilizado para obtener la incertidumbre expandida, pudindose
solicitar o requerir un k = 3, a fin de entregar un
99,7 % de confianza, esto generalmente se puede solicitar frente a determinados
contaminantes o residuos.

25
La determinacin de la incertidumbre realizada por el laboratorio debe estar
debidamente documentada.
Para demostrar que un mtodo analtico es adecuado para el fin previsto, el
laboratorio deber demostrar a travs de una evidencia objetiva que el mtodo
analtico ha sido adecuadamente validado o verificado.
En este sentido, el laboratorio debe demostrar que las caractersticas de
desempeo del mtodo analtico utilizado, son adecuadas para el uso destinado:

Reglas aconsejadas para cuando se usan mtodo validados:

26
 El analista debe familiarizarse completamente con el mtodo antes de usarlo por
primera vez: Lograr la Repetibilidad, lmite de deteccin, etc.
Conocer la teora del mtodo, identificar los puntos sensibles
Estabilidad de los reactivos, soluciones, etc.

Evaluar cuntas muestras es conveniente procesar al mismo tiempo. Es mejor

analizar bien pocas muestras que tratar de analizar muchas y tener que repetir
casi todas

Asegurarse de que todas las cosas (reactivos, equipamiento, etc.)para el mtodo

estn disponibles antes de comenzar el trabajo
Cuando se adapta o cambia un mtodo validado por otro, se necesita revalidar
ese mtodo

USO DE LOS DATOS DE VALIDACIN PARA CONTROL DE CALIDAD

Aseguramiento de la calidad: se relaciona con todas las medidas que toma un

laboratorio para asegurar y controlar su calidad

Control de calidad: describe las medidas individuales relacionadas con el monitoreo

y control de operaciones analticas particulares
La validacin de un mtodo brinda una idea de las capacidades y limitaciones de
la performance de ese mtodo que se pueden experimentar durante el uso
rutinario
Durante la validacin el mtodo se aplica a muestras de contenido conocido
Una vez que el mtodo tiene un uso rutinario, se aplica para muestras de
contenido desconocido
En la prctica, se recomienda continuar midiendo esas muestras de composicin
conocida con cada batch de muestras como parte del proceso de control de la
calidad.
El control de calidad puede realizarse dentro del laboratorio o de manera externa
(interlaboratorios)

CONTROL DE CALIDAD INTERNO

Incluye el uso de blancos, patrones de calibracin, muestras fortificadas, blind

samples, rplicas de ensayos, muestras QC y cartas de control
La clase de QC adoptado debe demostrar suficiencia para demostrar la validez de
los resultados. Ejemplo: muestras QC, analizadas a intervalos regulares, uso de
varios tipos de blancos, rplicas para chequear la Repetibilidad, etc.
Muestras QC: muestras que a lo largo de un periodo de tiempo dado son
suficientemente estables y homogneas para brindar el mismo resultado y que
estn disponibles en cantidad suficiente para usarse en anlisis repetitivos.

27
CONTROL DE CALIDAD EXTERNO

Ensayos de pro eficiencia Mtodo reconocido para que un laboratorio monitoree

su performance contra sus propias exigencias y la generalidad de los requisitos
de otros laboratorios
Ayudan a resaltar la reproducibilidad entre laboratorios y los errores sistemticos,
por ej. Sesgo

PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACIN/VERIFICACIN DEL

FUNCIONAMIENTO DE INSTRUMENTOS Y EQUIPO

Los procedimientos de calibracin de aparatos utilizados en qumica analtica

frecuentemente son descritos por el propio fabricante, que aporta adems
informacin sobre las actividades normales de mantenimiento y la frecuencia con
que deben realizarse. A continuacin se ofrecen directrices para establecer
procedimientos estndar de calibracin de instrumentos y equipo de uso comn].

Pipetas automticas

El mantenimiento ordinario exige que, aparte de una calibracin, se realicen

controles peridicos de las lneas de pipetas, desarmndolas y limpindolas en
caso necesario.
Parmetro a calibrar: volumen de la descarga.
Mtodo: si se trata de pipetas de volumen fijo, se pipetea agua destilada en un
recipiente de peso conocido para controlar el volumen efectivamente librado. Se
consigue una mayor exactitud si la balanza utilizada para controlar el peso viene
acompaada de una cmara de pesaje que pueda saturarse con vapor de agua,
que con frecuencia se libra como accesorio con las balanzas electrnicas
modernas. Las pipetas de volumen variable deben calibrarse al menos en cuatro
niveles: el nivel mximo, el nivel mnimo fijado por el encargado de las pipetas
automticas y dos o ms niveles intermedios, uno de los cuales debe ser inferior
al punto medio de la escala. Si una pipeta de volumen variable se utiliza
nicamente para dispensar un volumen fijo slo podr ser calibrada para ese
volumen fijo. Los ajustes del mecanismo de fijacin del volumen deben hacerse,
en caso necesario, siguiendo las instrucciones del fabricante.
Intervalo de calibracin: el ritmo de deterioro de la calibracin debe determinarse
haciendo controles frecuentes (diarios) del calibrado. El intervalo de las
calibraciones podr alargarse entonces para adaptarlo a las condiciones del
laboratorio (normalmente el intervalo ser de tres meses).

Aparatos de medicin del punto de fusin

Parmetro a calibrar: Exactitud del termmetro.

Mtodo: Los puntos de fusin de las sustancias de referencia se miden por lo
menos dos veces.
Intervalo de calibracin: Cada seis meses.

28
Medidores del pH
Parmetro a calibrar: Exactitud y linealidad del pH.
Mtodo: Los indicadores preparados comercialmente o los indicadores estndar
(que pueden buscarse en cualquier farmacopea) han de utilizarse de acuerdo con
las instrucciones del fabricante.
Intervalo de calibracin: Diariamente cuando est en uso.

Hornos y calefactores

Parmetro a calibrar: Temperatura.

Mtodo: El control se realiza con un pirmetro porttil o un termmetro de
precisin, que deben situarse lo ms cerca posible del sensor de temperatura del
horno.
Intervalo de calibracin: Anualmente, y despus de cada reparacin que pueda
influir en el funcionamiento del horno/calefactor.

Baos de agua

Parmetro a calibrar: Temperatura.

Mtodo: Termmetro de precisin/de referencia.
Intervalo de calibracin: Trimestralmente, cuando se sustituya el termmetro del
bao de agua
o cuando ste no haya sido utilizado durante un tiempo prolongado (semanas o
meses).

Balanzas

Antes de su utilizacin, las balanzas deben ser comprobadas para asegurarse de

que estn limpias y equilibradas en la superficie en que se encuentren. Las
balanzas utilizadas para realizar mediciones fundamentales (es decir, cuando la
suma de las incertidumbres que genere el proceso de pesaje represente un factor
importante de la exactitud del resultado final o, en otros trminos, cuando puedan
significar un 10% del error total) deben disponer como mnimo de un certificado de
calibracin. Estos certificados deben ser emitidos por un organismo acreditado
externo o por un personal de laboratorio adecuadamente capacitado. Los
certificados deben ser renovados anualmente.
Parmetro a calibrar: exactitud.
Mtodo: Los pesos de referencia se utilizan de acuerdo con las recomendaciones
del fabricante.

Refrigeradores y congeladores

Parmetro a calibrar: Temperatura.

Mtodo: Termmetro de precisin. La temperatura debe mantenerse dentro de
una banda mxima de 5 grados de la temperatura requerida.

29
Intervalo de calibracin: Continuamente, Instrumentos para mtodos
inmunolgicos
Existen muchos mtodos inmunolgicos distintos y la mayora depende de una
comparacin directa con un patrn de calibracin incluido en cada tanda de
muestras a analizar. Tiene especial importancia el umbral de concentracin del
analito utilizado, por lo que el analista debe conocer cul es el umbral de
concentracin establecido por el fabricante del juego de inmuno ensayo que
utilice. Los procedimientos de calibracin a seguir son los establecidos por el
fabricante.
Como excepcin notable a este procedimiento general cabe sealar los juegos de
inmuno ensayo desechables (a veces denominados pruebas de palito), que a
veces tienen mecanismos de control interno, pero no siempre. En principio, deben
reflejar un resultado positivo o negativo si la concentracin del analito buscado
es superior o inferior al umbral. Cabe sealar que con frecuencia interviene un
cierto grado de interpretacin por parte de quien realiza la prueba y que, como
siempre, un operador capacitado y con experiencia obtendr resultados ms
exactos y coherentes que otro con menos experiencia.
Espectrofotmetros de radiacin ultravioleta-visible

Parmetro a calibrar: Exactitud de la longitud de onda y Repetibilidad, exactitud

fotomtrica.
Mtodo: La absorcin de las longitudes de onda de las radiaciones UV se controla
con filtros de holmio y didimio, que deben ser suministrados por el fabricante. La
exactitud de la longitud de onda y la repetibilidad se controlan en toda la gama de
radiacin UV-visible. Han de obtenerse por lo menos dos espectros. La desviacin
mxima ha de ser 1,0 nm.
Intervalo de calibracin: Anualmente.

Espectrmetros infrarrojos

Los procedimientos que se indican a continuacin afectan slo a los

espectrmetros independientes.
Los instrumentos combinados, como los espectrmetros CFG/FT-IR se deben
calibrar de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Mtodo: Se comprueba la gama total del instrumento con una pelcula de
poliestireno. Debe diferenciarse el pico de absorcin de 3095 nm del de 3080 nm
y la absorcin de 3020 nm debe diferenciarse de la de 3015 nm.
Intervalo de calibracin: Trimestralmente.
Parmetro a calibrar: Exactitud de la longitud de onda.
Mtodo: Se escanea una pelcula de poliestireno y se controla la exactitud de los
picos en
2852, 1602 y 1028 nm [18]. La exactitud debe ser de 3-5 nm en el rango 4000-
2000 nm
y de 1,5-2,5 nm en el rango inferior a 2000 nm.
Intervalo de calibracin: Trimestralmente.

30
Cromatgrafos de gases

Entre las operaciones ordinarias de mantenimiento cabe mencionar los controles

del septum, el sistema de inyeccin, las presiones del gas y los filtros internos
(por ejemplo, filtros de oxgeno, impurezas, humedad e hidrocarburos), el nivel de
la seal de base y el ruido de fondo. Dependiendo del grado de utilizacin del
instrumento, puede ser conveniente establecer un programa de mantenimiento
ordinario que suponga un cambio semanal del septum y el mezclador del inyector
(con mayor frecuencia si se analiza un gran nmero de muestras).
-Parmetro a calibrar: Temperatura del horno.
Mtodo: Controlar con un pirmetro porttil de referencia o un termmetro de
precisin, que debe situarse lo ms cerca posible del sensor de temperatura del
horno.
Intervalo de calibracin: Anualmente.
-Parmetros a verificar: Calidad de la columna (eficiencia, resolucin, forma del
pico, tiempos de retencin).
Mtodo: Se analiza un grupo de estndares de uso ordinario. La precisin de los
tiempos de retencin puede medirse inyectando el estndar tres veces o ms.
Tambin pueden medirse las reas de los picos (vase ms adelante
integradores). Es til dibujar un diagrama de control de los parmetros, como
tiempos/ndices de retencin.
Intervalo de la verificacin: Mensualmente.
-Parmetros a verificar: Sensibilidad del detector, seal de base y ruido de fondo.
Mtodo: Se analiza un grupo de patrones de uso ordinario y se compara con
resultados anteriores.
Intervalo de verificacin: Mensualmente.
-Parmetro a calibrar: Capacidad de lectura del detector de gases.
Mtodo: Se utiliza un medidor de flujos de pompas de jabn o un medidor
electrnico calibrado de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Intervalo de calibracin: Cuando se limpie o repare el detector, o cuando se
cambie la columna analtica o se deteriore el funcionamiento. La dificultad de
encendido de un detector de ionizacin de llama indica muchas veces que la
velocidad de flujo es incorrecta.

Cromatgrafos lquidos de alto rendimiento

Los trabajos ordinarios de mantenimiento de los sistemas de cromatografa de

lquidos de
alto rendimiento (HPLC) incluye el recambio peridico de los filtros, internos y en
lnea, y
de las columnas de almacenaje, lo que normalmente debe hacerse cuando la
presin inversa supera el lmite aceptable (es decir, se sita por encima del nivel
mximo de presin dentro de la columna). Si los mtodos se transfieren de un
instrumento a otro puede ser necesario comprobar la exactitud de algunos
parmetros como la velocidad de flujo, la temperatura de la columna y la
composicin del eluyente, que influyen en los tiempos absolutos y relativos de
retencin.
31
-Parmetro a calibrar: Exactitud del flujo.
Mtodo: Los efluyentes de la columna se recogen en una probeta o frasco
volumtrico durante el tiempo adecuado.
Intervalo de calibracin: La velocidad absoluta del flujo con frecuencia es menos
importante que su variacin durante una tanda de anlisis, pero debe ser
controlada si se utiliza un mtodo estndar, oficial o recomendado.
-Parmetro a calibrar: Repetibilidad del flujo y precisin volumtrica del inyector.
Mtodo: Se inyecta tres veces, o ms, un grupo de estndares de uso ordinario y
se mide la precisin de los tiempos de retencin y las reas de los picos.
Intervalo de calibracin: Mensualmente, o bien diariamente si esta prueba est
integrada en un sistema de comprobacin diaria del buen estado de los aparatos.
-Parmetro a calibrar: Coeficiente seal del detector/ruido.
Mtodo: Se analiza un grupo de estndares utilizados normalmente y se
comparan los resultados con los de anlisis anteriores. El ruido de base se mide
en intervalos de 0,5 a 1 minutos y se calcula el promedio. El ruido se calcula con
un programa informtico (si lo suministra el fabricante) o grficamente, definiendo
dos lneas horizontales que abarquen todas las variaciones observadas y
midiendo la distancia vertical entre ellas. El nivel del ruido puede medirse mientras
fluyen los eluyentes y sin ese flujo, para definir as la contribucin del sistema de
alimentacin de eluyentes al ruido.
Intervalo de calibracin: Mensualmente.

-Parmetro a calibrar: Exactitud del detector de longitudes de onda (detectores de

UV-visible y de fluorescencia).
Mtodo: La absorcin de las longitudes de onda UV se comprueba con un filtro de
xido de holmio, suministrado por el fabricante (y rastreable hasta el patrn
primario) que tiene un mximo de absorcin de longitud de onda de 361 nm que
es caracterstico. La exactitud de la longitud de onda y la reproducibilidad se
controlan en todo el rango de radiacin UV-visible.
La desviacin mxima (admisible) es de 1,0 nm. La emisin de longitudes de
onda de la fluorescencia normalmente se controla utilizando un patrn, por
ejemplo, sulfato de quinina, que tiene unos picos de excitacin de 255 y 355 nm y
un pico de emisin de 455 nm.
Intervalo de calibracin: Anualmente.

Espectrmetros de masas

Los espectrmetros de masas se regulan y calibran de forma semejante tanto si

son un instrumento independiente o estn combinados con interfaces
cromatogrficas (GC-MS y LC-MS y sus derivaciones con mltiples sectores).
Existen diferencias entre los instrumentos cuadrupolares y los de sector
magntico, en especial si estos ltimos son capaces de ofrecer una alta
resolucin. La mayora de los instrumentos de laboratorio de este tipo estn
controlados directamente por un sistema informtico y la regulacin y calibracin
se realizan automticamente.

32
El sistema informtico genera un mensaje de advertencia cuando el instrumento
deja de cumplir los requisitos de funcionamiento prefijados, y muchas veces
ordena directamente una intervencin del operador, por ejemplo, limpiar la fuente.
-Parmetros a calibrar: Regulacin de la fuente y calibracin de las masas.
Mtodo: Se introduce en el espectrmetro un compuesto de calibracin, como el
perfluorokeroseno (PFK) o la heptacosafluoroperbutilamina (perfluoroperbutila-
mina) por la rendija correspondiente. La fuente se regula por medio de una
seleccin de fragmentos de iones para obtener una sensibilidad y un rea de los
picos ptimas, y obtener unas relaciones masa/carga de los picos (por ejemplo,
m/z 69, 219 y 264, y 502, en el espectro de la perfluoroperbutilamina), que
normalmente vienen determinados por el fabricante. Los espectros se almacenan
y comparan con el espectro de referencia en lo que respecta a la asignacin de
masas y la intensidad relativa de los picos.
Intervalo de calibracin: Diariamente o inmediatamente antes de su utilizacin.
Integradores cromatogrficas y sistemas de datos.

La validacin de los sistemas y los programas informticos es un trmite de

especial importancia que debe estar a cargo del fabricante. Sin embargo, sigue
siendo responsabilidad del usuario asegurarse de que los programas informticos
han sido validados. La validacin formal de los programas informticos puede ser
realizada por el proveedor en nombre del usuario, pero este ltimo deber
ensayarlos para que se produzca la aceptacin formal. El ensayo permite
establecer si se satisfacen los criterios establecidos para los programas
informticos.

CONCLUSION

La validacin de un mtodo es el proceso para confirmar que el procedimiento

analtico utilizado para una prueba en concreto es adecuado para su uso previsto.
Los resultados de la validacin del mtodo pueden utilizarse para juzgar la
calidad, la fiabilidad y la constancia de los resultados analticos, se trata de una
parte integrante de cualquier buena prctica analtica

Bibliografa
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Metrologa Ambiental y de Alimentos . Recuperado el 28 de mayo de 2016, de
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http://www.suelos.org.ar/adjuntos/validacion_metodos_analiticos.pdf
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34