Semillero fase II (2017)
Aislamiento descripcin e identificacin de cultivos bacteriano
Cristina Snchez Gutirrez, Michel Flrez Salamanca & Diana Sofa Puerta
Departamento de biologa, Universidad del Quindo
Introduccin
Los microorganismos son los seres ms primitivos y
numerosos que existen en la tierra, colonizan todo
ambiente, suelo, agua, aire, participan de forma vital en
todos los ecosistemas y estn en interaccin continua
con las plantas, animales y el hombre. Los
microorganismos son clave para el funcionamiento de
los sistemas biolgicos y el mantenimiento de la vida
sobre el planeta, pues participan en procesos
metablicos, ecolgicos y biotecnolgicos de los cuales
dependemos para sobrevivir y enfrentar los retos del
futuro. Dentro de los microorganismos encontramos los
hongos, virus, arqueas y bacterias (Montao et al 2010).
La ciencia de la microbiologa estudia los
microorganismos y cmo funcionan, especialmente las
bacterias, un grupo muy grande de clulas pequeas, que
tienen una importancia bsica y prctica enorme. Las
bacterias son microorganismos con una nica clula
(unicelular) relativamente simples, dado que su material
gentico no est encerrado por una membrana nuclear
especial, las clulas bacterianas se denominan
procariontes. Estos organismos suelen presentar una de
diversas formas, como los son en bastn, cocos y la
espiral. Las bacterias individualmente pueden formar
pares, cadenas, racimos u otros agrupamientos; estas
formaciones suelen ser caractersticas de un gnero o
especie de bacteria particular (Gerard 2007).
Las bacterias estn recubiertas por paredes celulares que
en gran parte estn por un complejo de hidrato de
carbono y protena denominada peptidoglucano, suelen
reproducirse mediante fisin binaria donde una clula se
divide en dos iguales. Para la nutricin la mayora de las
bacterias utilizan sustancias qumicas orgnicas, que en
la naturaleza pueden provenir de organismos muertos o
vivos. Algunas bacterias pueden producir sus propios
alimentos mediante la fotosntesis y algunas pueden
nutrirse a partir de sustancias inorgnicas. Varias
bacterias pueden moverse mediante apndices
denominados flagelos (Gerard 2007).
Docente Fabiana Marial Lora.
La identificacin de una bacteria consiste en determinar
la especie a la que pertenece. La primera fase, y quiz la
fundamental para la identificacin de una bacteria, es la
obtencin de un cultivo puro utilizando las tcnicas de
aislamiento. Una vez obtenido un cultivo puro,
habitualmente se determina, morfologa y agregacin,
efectuando tinciones. A partir de este punto, se valoran
las caractersticas de crecimiento, lo que se efecta
sembrando la bacteria en diversos medios de cultivo y en
distintas condiciones de incubacin. Por ejemplo,
medios de cultivo con sangre que nos indica si la
bacteria hemoliza los hemates (eritrocitos), el
crecimiento en presencia o ausencia de oxigeno nos
indica si es aerobia o anaerobia. Se efectan mltiples
pruebas para determinar caracteres fisiolgicos, llamadas
pruebas bioqumicas; donde se identifica la presencia de
enzimas como la catalasa. Tambin se puede identificar
el tipo de va metablica que utiliza la bacteria para
obtener energa a partir de glucosa (Rosa 2011).
Resultados y discusin.
En consecuencia se realiz el aislamiento de una muestra
bucal, por siembra indirecta en un medio de cultivo
solido (agar nutritivo) (Fig. 1), obteniendo as un cultivo
mixto con gran diversidad de colonias, con el fin de
hacer la seleccin de una de ellas y as lograr su
identificacin.
Figura 1. Asilamiento de la muestra bucal (mixta) por
mtodo indirecto y su siembra en agar nutritivo.
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Segn Ferreira et al (2010) la proliferacin de los
microorganismos es debido al tipo de medio de cultivo,
de esta manera el autor explica en trminos generales
que todas las bacterias tienen unos requerimientos
nutricionales imprescindibles para su crecimiento;
necesitan una fuente de energa, una fuente de carbono,
una fuente de nitrgeno, algunas sales, oligoelementos y
agua. Por su parte La Scola y Raoult (2009) afirman que
todos los medios de cultivo han de cumplir como
mnimo con estos requisitos, pero en muchas ocasiones
se necesitan adems otras sustancias adicionales como
vitaminas, factores o aminocidos esenciales.
El aislamiento de la muestra bucal por mtodo indirecto
se realiz en agar nutritivo, ya que este es un medio de
cultivo que contiene gran cantidad de sustancias
alimenticias como peptona, extracto de carne o de
levadura, agar, NaCl, agua destilada y un pH casi neutro
(6.8); estos componentes hacen que en este medio
puedan crecen un sinnmero de bacterias, el crecimiento
bacteriano es superficial en este medio, por lo que ayuda
a distinguir mejor las colonias de bacterias. (Torrico &
Medina 2012).
Anlogamente se realiz la descripcin macroscpica de
la colonia bacteriana bucal, escogida de la siembra en
agar nutritivo donde contena una flora mixta (inoculo)
(Tabla. 1).
Tabla 1. Descripcin macroscpica de la colonia bucal
escogida a partir del cultivo por siembra indirecta en
agar nutritivo.
El aislamiento de la colonia escogida
macroscpicamente presento las caractersticas
establecida en la tabla. 1, al respecto Gobernado y Lpez
(2003) exponen que la morfologa de las colonias es
fundamental en la identificacin preliminar y para la
diferenciacin de los microorganismos, as mismo estos
agregan que para la observacin morfolgica es
preferible examinar colonias de cultivos frescos crecidas
en medios no selectivos como agar nutritivo, a su vez
aaden que en este paso de la identificacin es muy
importante el aislamiento de las bacterias en cultivo puro
ya que esta debera estar compuesta por un solo tipo de
microorganismos (axnico) y procedera de una nica
clula.
Posteriormente de la escogencia de la colonia bacteriana
para su identificacin, se procedi a realizar la re-
siembra de la bacteria, con el fin de obtener cultivos
puros a partir de muestras que contienen flora mixta,
atendiendo a diferentes tcnicas de aislamiento y en
diversos medios de cultivo.
Tabla 2. Descripcin de los tipos de medio de siembra
directa vs resultados (positivos o negativos).
De modo que se realizaron dos siembras en placa con
dos tipos de agares, agar nutritivo para siembra por estra
y agar Mac conkey para siembra por agotamiento, al
someter los dos medios a condiciones de temperaturas
ambientales (37C) donde crecen organismos mesfilos,
se identific que en la siembra por agotamiento que
contena el agar Mac conkey la colonia sembrada no
creci (Fig. 2), esto es explicado segn Koneman (2001),
el cual afirma que el agar Mac conkey es selectivo, es
decir que permite la proliferacin de bacterias Gram
negativas (-), inhibiendo el crecimiento de algunas Gram
positivas (+), esta inhibicin es producida por la
concentracin de sales biliares y reactivos como el cristal
violeta que estn en el medio, impidiendo la
proliferacin de ciertas Gram positivas, en contraste
Ramrez et al (2006) explica que otro factor limitable
para el crecimiento de la colonia bacteriana fue el tipo
de siembra, la siembra por agotamiento es un mtodo, el
cual desea conseguir una buena separacin de las
colonias y aislarlas fcilmente, de lo anterior se puede
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inferir que tal vez se tom un inoculo muy pequeo y al

someter a diversos agotamientos la colonia ya no creci
o quizs al hacer la inoculacin con el asa este estaba
muy caliente logrando quemar la colonia, igualmente se
deduce que la colonia al no crecer en este agar selectivo
posiblemente sea Gram positiva (+), del mismo modo
otro agente que permite tener certeza de que solo creci
un tipo de microorganismo es la siembra en placa por
estra, donde creci abundantemente la colonia
anteriormente descrita (Tabla. 2) sembrada del cultivo
indirecto. Figura 3. Siembra en tubo inclinado o pico de flauta con
agra urea.

Por otro lado se realiz la ltima siembra para

Figura 2. Tipos de siembra y medios de cultivo. A)
Siembra en placa por estra en agar nutritivo y B)
Siembra en placa por agotamiento en agar Mac conkey
As mismo se realiz la siembra en un medio solido en
tubo de agar inclinado por estra o pico de flauta con
agar urea, observndose un viraje del medio de amarillo
a fucsia (Fig. 3), para tal motivo Vullo et al (2009)
expone que este tipo de siembra de tubo inclinado
permite el cultivo de microorganismos aerobios o
anaerobios facultativos, el autor sostiene tal afirmacin
por el aspecto general del medio y la aparicin de
crecimiento sobre su superficie, en este caso la aparicin
de un color fucsia en su superficie indica que la colonia
axnica escogida puede poseer uno de los dos tipos de
respiracin y que adems, est en su metabolismo posee
ureasa que degrada la urea, razn por la cual el medio
cambia de color, lo cual a su vez puede sealar
caractersticas de su metabolismo.
obtener cultivos puros o axnicos, sin embargo este
se realiz en un medio liquido con agar LB (Caldo
Luria Bertoni LB) obteniendo la precipitacin del
inoculo diluido en este agar, en cuanto este tipo de
siembra Clavell (2003) manifiesta que su fin es
mostrar la formacin de una pelcula o velo sobre la
superficie o profundidad del tubo, que indique al
igual que en la siembra de tubo inclinado el tipo de
respiracin, la cual puede ser anaerobia facultativa
si genera turbidez en la parte inferior, micro-
aereotolerante si la turbidez est dada en el medio y
aerobio si la turbidez se genera en la parte superior,
sin embargo en este medio se obtiene con ms
precisin tal caracterstica y al mismo tiempo este
tipo de siembra permite la obtencin de una
poblacin microbiana grande, es decir, con un
elevado nmero de microorganismos, de acuerdo
con Clavell (2003) se puede inferir que la
precipitacin del inoculo diluido confirmen que
posiblemente las bacterias de la colonia descrita
macroscpicamente sean anaerobias facultativas.
(Fig. 4).

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Figura 4. Siembra en medio liquido con agar LB (Caldo
Luria Bertoni LB): A) Colonia anaerobio facultativo.
Por otro lado para lograr su identificacin se realizaron
diferentes procedimientos analticos entre los que se
hallaron las tinciones, las pruebas bioqumicas y pruebas
de susceptibilidad a antibiticos (antibiograma), lo cual
genero una serie de caractersticas determinables para
lograr reconocer el gnero de la bacteria bucal axnica
aislada por los diferentes mtodos.
Los resultados obtenidos fueron positivos para la tincin
Gram (Fig. 5) permitiendo generar la reconfirmacin de
que las bacterias de la colonia bucal son Gram positivas
con morfologa de cocos. Segn Lpez et al (2014) la
tincin de Gram se basa en colocar como colorante
primario cristal violeta, el cual tiene afinidad con el
peptidoglicano de la pared bacteriana, seguidamente, se
coloca lugol, el cual sirve como mordiente e impide la
salida del cristal violeta por la formacin de un complejo
cristal violeta-yodo que satura los espacios del
peptidoglicano de la pared bacteriana; seguidamente se
coloca una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata
la pared bacteriana y cierra los poros de la misma,
tambin destruye la membrana externa de las bacterias
Gram negativas debido a que sta es soluble a la accin
de solventes orgnicos, como la mezcla de alcohol-
acetona. Las bacterias Gram positivas, al contener una
gran cantidad de peptidoglicano, retienen con mayor
fuerza este complejo, mientras que las Gram negativas
no lo pueden retener por tener menos cantidad de
peptidoglicano; por ltimo, se coloca safranina, la cual
funciona como un colorante secundario o de contra-
tincin y sirve para teir las bacterias que no pudieron
retener el complejo cristal violeta-yodo (Gram
negativas). Es decir, el mtodo de Gram permite la
diferenciacin entre estos dos grupos, reflejando
diferencias fundamentales en sus envolturas celulares
(Brooks et al 2014).
Figura 5. Cocos Gram positivos a 100X.
Por otra parte, el resultado para la coloracin de "Ziehl
Neelsen fue negativa, es decir, la bacteria bucal aislada
no presento cidos alcoholes resistentes; de acuerdo a
Lpez et al (2014) esta tincin permite diferenciar a las
bacterias en dos grupos: aquellos que son capaces de
resistir la decoloracin con alcohol-cido y aquellos que
no lo son. Por lo tanto, la tincin se basa en colocar
carbol-fucsina y calentar la preparacin ligeramente para
solubilizar las ceras, lpidos y otros cidos grasos de la
pared celular para que permita el paso libre del
colorante, el cual tiene una enorme afinidad por los
cidos miclicos presentes en la pared bacteriana, al
enfriar con agua, los componentes de la pared vuelven a
solidificar, resistiendo la accin abrasiva del alcohol-
cido, y el azul de metileno es utilizado como contra-
tincin (Lpez et al 2014), por consiguiente se infiere
que la bacteria al no ser positiva para la tincin de Ziehl
Neelsen, esta no es acido-alcohol resistente, es decir no
presento cidos miclicos en su pared celular.
En contraste, se llev a cabo la tincin de clulas
eucariotas a travs del mtodo de gota gruesa, se realiz
mediante la extraccin de una pequea cantidad de
sangre en un portaobjetos para un continuo
esparcimiento por capilaridad, inmediatamente se fij
con metanol, una vez secado se aplic el reactivo
Giemsa y se observ en el microscopio.
La tcnica de Giemsa est formada por varios colorantes
que le proporcionan una afinidad a estructuras celulares;
los tintes neutros utilizados combinan el azul de
metileno, azur A y azur B, como tintes bsicos, y
la eosina como tinte cido, lo que da una amplia gama de
colores. El azul de metileno es un colorante
metacromtico, de ah que muchas estructuras se tian
de prpura y no de azul (Gutirrez y Arrospide 2003). Al
observarse en el microscopio se logr diferenciar los
eritrocitos y leucocitos; de acuerdo a Welsch (2009) los
leucocitos son clulas sanguneas nucleadas que se
subdividen en: granulocitos, linfocitos y monocitos. La
definicin de granulocitos se debe a la existencia de una
gran cantidad de grnulos o lobulaciones del ncleo.
Estos grnulos se tien con colorantes cidos como la
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eosina o con colorantes bsicos como el azul del Por la descripcin anteriormente de Welsch (2009)
metileno y el azur. Los grnulos de los neutrfilos son posiblemente se observ de la muestra dos granulocitos
pequeos y se tien de rosa o violeta, ya que son tenidos neutrfilos (Fig. 6), un granulocito basfilo (Fig.7) y en
tanto de los colorantes cidos como de los colorantes la figura 8 probablemente tres basfilos y un eosinfilo.
bsicos. Los grnulos relativamente grandes de los
eosinfilos se tien de rojo intenso con la eosina. Los
grnulos de lo basfilos, tambin relativamente grandes
adquieren un color azul negro profundo con los
colorantes bsicos.

El ncleo de los neutrfilos presenta de 3-4 segmentos

unidos por conexiones muy delgadas (puentes
nucleares), los neutrfilos desempean un papel Figura 6A. Granulocito neutrfilo de tres segmentos.
fundamental en la reaccin inflamatoria aguda, su
funcin ms importante es la fagocitosis sobre todo de
bacterias pero tambin de algunos virus. Los eosinfilos
suelen contener un ncleo bilobulado y grnulos
citoplasmticos eosinfilos (rojos) relativamente grandes
caractersticos, su funcin an es un interrogante, pueden
fagocitar y viven mucho ms tiempo que los neutrfilos
a diferencia de los cuales pueden recircular. Los
basfilos poseen un ncleo relativamente grande que
puede tener diferentes formas, con frecuencia es Figura 6B. Granulocito neutrfilo de cuatro segmentos.
redondeado y posee una escotadura poco pronunciada,
pero tambin puede ser bilobulado, de la funcin normal
de estas clulas infrecuentes se sabe muy poco (Welsch
2009).

Mientras que los linfocitos son clulas mononucleares

especficas del sistema inmunitario, se caracteriza por
una enorme cantidad de mecanismos moleculares
complejos todava inabarcables que regulan su Figura 7. Granulocito basfilo.
diferenciacin, especificidad y diversidad as como la
induccin y el mantenimiento de la auto-tolerancia;
alrededor del 22-44% de los leucocitos de la sangre son
linfocitos. En los extendidos sanguneos su dimetro
vara entre 6 y unos 12 m, por lo general su ncleo es
redondeado y oscuro y a su alrededor se ve un borde
estrecho de citoplasma (Welsch 2009).

Entre tanto, los monocitos son los leucocitos ms

grandes en la sangre perifrica y con frecuencia exhiben Figura 8. A) eosinfilo B) basfilo, C) basfilos Y D)
un ncleo arrionado y a veces bilobulado con una basfilos.
estructura nubosa. Como macrfagos son los
componentes ms importantes del sistema fagocitico
mononuclear.

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Otro mtodo usado para la identificacin de colonias en cultivos bacterianos puros fueron las pruebas bioqumicas (Tabla.
3), las cuales permitieron su clasificacin en relacin al resultado obtenido en cada prueba.

Tabla 3. Descripcin de las diferentes pruebas bioqumicas vs resultados.

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Las pruebas bioqumicas o bateras realizadas tienen

como principal objetivo la identificacin fenotpica del
inoculo puro aislado en los diferentes medios y la
determinacin de las caractersticas metablicas de la
bacteria, para tal caso Bizzini (2010) da a conocer que la
identificacin fenotpica bacteriana se basa
fundamentalmente en la comparacin de las
caractersticas morfolgicas de bacterias desconocidas
con aquellas de cultivos tipo; as mismo el autor explica Figura 9. Identificacin de la reaccin catalasa-oxidasa
de manera clara que todas las caractersticas fenotpicas para la determinacin del tipo de respiracin: A)
conocidas son importantes y que se beben tener en reaccin catalasa positiva (+) liberacin de agua y
cuenta cuando se inicia el proceso de identificacin, pero oxigeno gaseoso y B) reaccin oxidasa negativa (-).
en principio se seleccionan aquellas que se consideran Del mismo modo se realiz una de las ocho pruebas para
pruebas primarias, que son rpidas y sencillas. la determinacin del citrato como nica fuente de
En cuanto a la colonia bacteriana ya aislada por mtodo carbono, esta fue efectuada en agar citrato Simmons,
donde se observ que su color tuvo un viraje de verde a
directo, se le aplic ocho pruebas bioqumicas (Tabla. 3),
con diferentes sustratos, llevndose a cabo un azul rey en el pico flauta, por lo cual se determin que la
seguimiento continuo para con ello lograr identificar bacteria posiblemente utiliza citrato como nica fuente
diferentes caractersticas de est. de carbono para sus reacciones metablicas (Fig. 10),
provocando una alcalinizacin del medio, en relacin a
Para lograr describir el tipo de enzimas vinculadas a la lo anterior Schaechter (2004) da a conocer que hay
respiracin se realizaron dos pruebas, una con la enzima diferentes gneros de enterobacterias que poseen esta
catalasa y la otra con la oxidasa, respecto a los resultados caractersticas como lo son: Enterobacter, Klebsiella,
obtenidos se logr identificar que la bacteria produce o Serratia, Citrobacter y algunas especies de Salmonella y
sintetiza catalasa (Fig. 9), es decir fue positiva, ya que al a su vez acepta que Escherichia, Shigella, Yersinia,
agregar el perxido de hidrogeno, esta enzima lo Salmonella typhi y Salmonella paratyphi son incapaces
hidroliza en agua y oxigeno gaseoso que se liber en de crecer utilizando citrato como nica fuente de
forma de burbujas, al respecto Quinn et al (2011) explica carbono.
que la enzima catalasa est presente en la mayora de los
microorganismos que poseen citocromos, adems
Stanchi et al (2007) aclara que esta prueba separa
bacterias de Micrococacceae (positiva) de Streptococcus
spp (sin catalasa) y Enterococcus spp. (negativa); al
mismo tiempo se identific que la bacteria no sintetiza
oxidasa, ya que al agregar el reactivo de Kovac esta no
reacciono, es decir que no presento un sistema citocromo
c-oxidasa (anaerobias), en consecuencia, se deduce que
una de las caractersticas de la bacteria a identificar es la
produccin de la enzima catalasa que est vinculada
mayormente a bacterias con respiracin aerobia o
anaerobia facultativa que contienen citocromo.
Figura 10. Prueba citrato Simmons para la
determinacin de citrato como nica fuente de carbono,
viraje positivo (+) de A) verde a B) azul rey.

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Igualmente se efectu una prueba para la deteccin de afirma que la tal motilidad se da con mayor frecuencia
exoenzimas, con agar base sangre, en el cual dio en las entereobacterias excluyendo al gnero Klebsiella,
negativo (Fig. 11), dicho de otro modo, la bacteria a el cual no presenta esta caracterstica.
pesar de que creci en tal medio que le gener
nutrientes, est no hizo ruptura, ya que no hizo lisis en
los eritrocitos, es decir que la bacteria no produce
enzimas extracelulares que actan sobre los glbulos
rojos, al respecto Ryan y Ray (2004) expresan que el
agar base sangre permite el crecimiento de todos los
microorganismos con importancia clnica excepto los
ms exigentes y de esta manera especifican que hay
ciertas bacterias con esta caracterstica llamadas
hemolisis gamma entre las que se encuentra la especie
Streptococcus pneumoniae.

Figura 12. Prueba (SIM): para la determinacin de: A)

fermentacin de sulfuro de hidrogeno positivo (+), B)
formacin del anillo indol negativo (-) y C) presencia de
flagelo positivo (+).

En cuanto a la determinacin de diferentes compuestos

Figura 11. Prueba hemolisinas en agar base sangre para
la determinacin de bacterias generadoras de enzimas
que hacen lisis de los eritrocitos: A) sin ruptura del
medio, hemolisis gamma.
Por su parte tambin se hizo una prueba para determinar
la presencia o ausencia de motilidad, esta se elabor con
agar SIM, logando identificar una ramificacin a las 24
horas sobre la lnea recta realizada en la siembra por
puncin (Fig. 12), esta ramificacin indica la presencia
de flagelos, los cuales dan la motilidad a la bacteria, al
mismo tiempo se logr observar la aparicin de diversos
puntos negro en la parte superior del tubo del ensayo,
para lo cual Venetsaneas et al (2009) hace referencia a
que tal fenmeno ocurre por la fermentacin de sulfuro
de hidrogeno (Fig. 12), es decir que la bacteria usa
carbono orgnico en cantidades moderadas en vez de
oxgeno para su actividad metablica, siendo este por lo
tanto anaerobio facultativo. Por otro lado, al agregar el
reactivo de Kovac para la prueba del anillo de indol, este
no presento el anillo rojo (Fig. 12), lo cual indica que la
bacteria no desdobl o degrado el triptfano presente en
el agar para convertirlo en Indol. As mismo el autor
como nica fuente de nitrgeno, se realiz la prueba con
agar urea, de acuerdo a las observaciones tomadas en la
Tabla. 1, se determin que esta bacteria posiblemente
tiene como nica fuente de nitrgeno la urea, ya que su
color viro de amarillo a un rosa-fucsia (Fig. 13), razn
por la cual su viraje da a conocer que la bacteria puede
desdoblar la urea, por la accin de la enzima ureasa,
segn Madigan et al (2009) esta actividad enzimtica es
caracterstica de todos los gneros de Proteus y se usa
sobre todo para diferenciar este gnero de otras
enterobacteria. La prueba tambin se utiliza para
diferenciar Physobacter phenylpyruvicus de Moraxella
spp.y para diferenciar Helicobacter pylori y Brucella spp
que tambin hidrolizan la urea (MacFaddin 2000).
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Figura 13. Prueba de urea para la determinacin de
citrato como nica fuente de carbono: viraje positivo (+)
de A) verde a B) azul rey.
Por ltimo se realizaron dos pruebas de ensayos
combinados para la identificacin de enterobacterias el
cual est integrado por diferentes pruebas entre las que
se encuentra la TSI y LIA.
TSI (triple azcar hierro) al observar el viraje de la
bacteria de anaranjado a rojo, se determin que esta tiene
la capacidad de metabolizar hidratos de carbono
especficos como la glucosa (Fig. 14), segn Murray y
Cols (1999) las bacterias metabolizan glucosa ya que, en
un principio empiezan a fermentar est, produciendo
cidos y virando totalmente el medio a color amarillo-
anaranjado, sin embargo como solamente utilizan la
glucosa y no sacarosa ni la lactosa, la agotan hallndose
en baja concentracin, por lo cual la bacteria comienza a
utilizar la peptonas con produccin de amonaco que
alcaliniza el medio dando un color rojo en la parte
superior de la muestra; as mismo y de acuerdo con el
Manual de identificacin bacteriolgico de pruebas
bioqumicas (2013) tambin se logr diagnosticar que no
produce cido sulfhdrico al no observarse una
coloracin negro en la parte inferior y que no desprende
gases al no romper el medio, de igual modo el autor
expone que este tipo de prueba bioqumica se usa para
identificar y diferenciar enterobacterias.
Figura 14. Prueba TSI (triple azcar hierro) para la
identificacin del metabolismo de los hidratos de
carbono, viraje positivo (glucosa) de A) anaranjado B)
rojo.
LIA (Agar hierro lisina), de acuerdo a la identificacin
realizada en la Tabla. 3 se demostr el viraje lento de
amarillo en la parte inferior a violeta en la parte superior
(Fig. 15) indica que est bacteria produce lisina
descarboxilasa , en consecuencia Rojas-Trivio (2008)
seala que los microorganismos LD negativos, los cuales
no originan aumento de pH, pero son fermentadores de
la glucosa, producen un viraje amarillo de la totalidad
del medio de cultivo, aclarando que la incubacin
prolongada puede ocasionar alcalinizacin en la zona de
las superficie del medio de cultivo y por consiguiente se
produce un viraje a violeta, as mismo el autor expone
que una de la especies asociados a este tipo de bacterias
fermentadoras de glucosa es la Shigella flexneri;
igualmente se logr identificar que la bacteria no libera
sulfuro de hidrogeno al no presentar un precipitado
negro por utilizacin de las sales de hierro.
Figura 15. Prueba LIA (Agar lisina hierro) para la
identificacin de produccin de lisina descaboxilasa o
deaminasa: viraje descaboxilasa negativo (-) de A)
amarillo a B) violeta
Finalmente se llev a cabo la prctica de inhibidores
bacterianos, la cual se realiz mediante el agregamiento
de un ml de solucin salina en un tubo de ensayo,
posteriormente se introdujo una cierta cantidad de
bacterias de la muestra problema hasta obtener una
turbidez. Esta turbidez corresponde al tubo cinco de la
escala de Mc-Farland; los cuales son una serie de tubos,
previamente calibrados y con una densidad ptica
diferente originada por la aparicin de un precipitado de
sulfato de bario (SO4Ba) resultante de la reaccin entre
el cloruro de bario (BaCl2) al 1.175% y cido sulfrico
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(H2SO4) al 1%. La turbidez puede interpretarse
pticamente y cada una de ellas corresponde a una
concentracin conocida de bacterias/ml (Granada 2011).
De acuerdo a esta escala el tubo nmero cinco presenta,
0.5 ml de BaCl2 y 9.5 ml H2SO4 que corresponden a
15*108 nmero de clulas bacterianas por mL.
Seguidamente, en un medio de Agar Muller Hinton,
estandarizado para examinar la susceptibilidad de la
colonia, en el cual se da una reproducibilidad
relativamente buena, (Matuschek 2014), se realiz una
siembra de forma masiva de la dilucin anterior. Luego,
se coloc tres discos de papel correspondientes a
concentraciones de penicilina (10 g), ampicilina (30
g), eritromicina (15 g), introducindose por ltimo la
caja Petri en la incubadora durante 24 horas.
Los resultados de la medicin de las zonas de inhibicin
en torno a cada disco mostraron en la penicilina un halo
de un dimetro de 22mm, en la eritromicina un dimetro
de 30 mm y la ampicilina de 25mm.La penicilina y
ampicilina no realizaron el halo puro. (Fig. 16).
Figura 16. Antibiograma de la muestra problema: A)
eritromicina B) penicilina C) ampicilina.
Los resultados de susceptibilidad antimicrobiana fueron
clasificados como sensibles, intermedios o resistentes de
acuerdo a los puntos de corte utilizados para cada
antibitico determinado a partir de las recomendaciones
del CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute)
(2003).
Tabla. Criterio de interpretacin de acuerdo al valor de
la concentracin mnima inhibitoria (CIM).
De los resultados obtenidos los tres discos de papel con
antibiticos son de categora sensible, es decir, implica
que una infeccin dada por la cepa en estudio puede ser
tratada apropiadamente con la dosis de antibitico
recomendada para el tipo de infeccin y la especie
infectante (Malbran 2012).
El espectro de las penicilinas est dirigido a bacterias
gram positivas no productoras de -Lactamasas. El
mecanismo de accin de este grupo de drogas es la
inhibicin de la sntesis de pared celular. Las amino-
penicilinas (ampicilina y amoxicilina) poseen actividad
frente a otras especies de bacterias gram negativas,
incluyendo miembros de la familia Enterobacteriaceae.
Mientras que, las penicilinas estables frente a
penicilinasas (cloxacilina, dicloxacilina, meticilina,
nafcilina y oxacilina) poseen actividad contra cocos
gram positivos incluyendo Staphylococcus productores
de penicilinasas.
La eritromicina forma parte del grupo de los macrlidos,
antibiticos estructuralmente relacionados que inhiben la
sntesis proteica a nivel ribosomal. Para organismo gram
positivos se ensaya rutinariamente la eritromicina. En el
caso del Staphylococcus aureus presenta sensibilidad a
la actividad de la eritromicina (Cortes et al 2007).
Tambin Tamariz et al (2009) concuerda con que la
eritromicina es uno de los componentes del complejo
MLSB (macrlidos (eritromicina), lincosamidas
(clindamicina) y estreptograminias para el tratamiento de
las infecciones por Staphylococcus aureus.
Finalmente se deduce que la especie de la colonia bucal
aislada por los diferentes mtodos es Staphylococcus
aureus, ya que este presento una serie de caractersticas
determinables que la identificaron, como ser cocos Gram
positivos, no hacer hemolisis (gamma) en agar sangre,
positivo para catalasa, anaerobio facultativo, positivo
para la produccin de ureasa, utilizacin de glucosa para
formar productos cidos, sensible a la eritromicina al
presentar un halo aproximadamente de 20mm y
resistente a la ampicilina y penicilina , usar el citrato
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 Semillero fase II (2017)
como nica fuente de carbono, entre otras, segn Archer
et al (2000) est especie de Staphylococus se presenta
frecuentemente en la piel de humanos y de animales y en
membranas mucosas, como lo es la cavidad bucal;
adems agrega que la proliferacin de esta bacteria en el
cuerpo humano puede producir infecciones
nosocomiales que poseen tratamiento con antibiticos.
Conclusiones.
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