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RETORNO XII Congreso Nacional

de Biotecnologa y Bioingeniera

PURIFICACIN PARCIAL DE LA ENZIMA INULINASA DE Aspergillus kawachii EN


FERMENTACIN EN MEDIO SLIDO
Mara Zenaida Saavedra Leos, Jos Gerardo Gaona Lozano, Olga Araceli Ptron Soberano,
Mara Isidora Castillo Snchez, Juan Carlos Contreras Esquivel.
zenaidasaavedra1@hotmail.com.mx
Palabras clave: inulina, inulinasas.

Introduccin. En los ltimos aos se ha observado un


incremento en el inters de las inulinasas (2,1--D fructan Cromatografa QXL (catinica)
frutanohidrolasa) ya que stas se encuentran dentro del
grupo de las enzimas hidrolasas las cuales tienen diversas 20
Sacarosa
18
aplicaciones en la industria alimentara y farmacutica. La 16
Inulina
inulinasa es la enzima que acta sobre los correspondientes 14
enlaces glucosdicos de inulina, polmero que se encuentra 12

U/mL
10
constitudo por fructosa. Su hidrlisis total produce adems 8
de fructosa, un 5 a 6% de molculas de glucosa que se 6
encuentra en los extremos de la cadena. Las inulinasas son 4
2
producidas por muchos microorganismos, incluyendo a los 0
hongos filamentosos como Aspergillus sp y levaduras como 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
Kluyveromyces sp, as como diversas bacterias (Pandey et Fraccin

al., 1999). Figura 1. Actividad enzimatica exoinulinasa y endoinulinasa


El objetivo del presente trabajo de investigacin fu estudiar en U/mL (cromatografa de intercambio inico HiTrapTM
el proceso de purificacin parcial de inulinasas a partir de QXL, 1mL catinica, bfer de acido actico acetato 25mM,
Aspergillus kawachii por fermentacin en medio slido, las pH 5 y bfer de acido actico acetato 25Mm, pH 5, 0.5 M
cuales se utilizaron en la hidrlisis de inulina para la NaCl.)
obtencin de monosacridos de fructosa.
Cromatografa de filtracin en gel
Metodologa. Para la fermentacin slida se utilizaron S300
matraces de 500 ml con 110 ml de medio de cultivo, cuya 10
9 Sacarosa
composicin fue similar al utilizado para la produccin de 8
amilasas con esta misma cepa (Sudo et al., 1993), 7
6
Inulina
U/mL

sustituyendo la fuente de carbono por bagazo de pia. Los 5


matraces se incubaron a 30 C, por 48 y 72 horas. Para la 4
3
deteccin de la actividad inulinasa se emple el mtodo del 2
incremento de poder reductor por la tcnica de Somogyi- 1
0
Nelson y la purificacin parcial de la enzima se llevo acabo 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
mediante mtodos cromatograficos: filtracin en gel Fraccin
HiTrapTM Desalting 5mL, S300 e intercambio inico
columna HiTrapTM QXL, 1mL catinica cromatografa . Figura 1. Actividad enzimatica exoinulinasa y endoinulinasa en
U/mL (cromatografa de filtracin en gel S300 bfer de acido
actico acetato 25mM, pH).
Resultados y discusin. La mxima actividad enzimtica
obtenida fue a las 72 horas de fermentacin. El extracto se Conclusiones: A. kawachii es una nueva fuente para
pas por cromatografa de intercambio inico donde se produccin de inulinasas utilizando fermentacin en medio
determin la actividad exoinulinasa utilizando como sustrato slido y bagazo de pia como fuente de carbono.
sacarosa. Como se muestra en la figura 1, la fraccin 22 La actividad enzimtica de la exoinulinasa representa el 85%
tiene una actividad enzimtica exoinulisa de 17 U/mL, de la actividad inulinasa total.
determinada por el incremento del poder reductor; mientras Bibliografa.
que la actividad endoinulinasa (3 U/mL), se present en la 1. Sudo, S., Ishikawa, T., Takayasu-Sakamoto, T., Sato and
fraccin 23 determinndose con inulina. Souza-motta et al Oba T. (1993). Journal Fermentation Bioengineering,
(2005), reportaron actividad inulinasa de 20 U/mL a las 72 76:105-110.
horas de fermentacin en medio lquido del hongo Niveus 2. Souza-Motta, C., de Queiroz, M., Figueiredo, A.,
Blochwitz 4128URM del Aspergillus usando 20g/L de Aparecida, K., Filho, J. (2005). Braz. arch. biol. technol. vol.
inulina como fuente de carbono. 48, no. 3.
Dado que la exoinulinasa y la endoinulinasa pueden tener 3. Pandey, A. R., Socool, C., Selvakumar, P., Socool, V.,
semejante punto isoelctrico, se separ por tamao mediante Krieger, N. and Fontana, J. (1999). Applied
cromatografa de filtracin en gel S300 (figura 2). Biochemistry and Biotechnology.81:35-50.