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Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos.
Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la
familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato
de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo
de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH
(rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.
Siembra
- Sembrar en superficie.
- Utilizando la tcnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar aproximadamente 15 ml de medio de cultivo
fundido y enfriado a 45-50 C.
Incubacin
Durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica
Resultados
Microorganismos Colonias
Escherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Diminutas, incoloras, opacas
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-114-05 x 500g :Cdigo: B02-114-06
E.M.B. Agar.
Este medio (tambin denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rpido
desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
Fundamento
Este medio combina las frmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el
aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La diferenciacin entre organismos
capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y
azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia
coli y Citrobacter spp. presentan un caracterstico brillo metlico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con
periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida
spp. como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans.
Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras
bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de
acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporacin de azul de metileno a sus membranas. En este medio
se obtiene adems, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.
Siembra
En superficie, por estriado a partir de un inculo poco denso, para obtener colonias aisladas.
En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.
Incubacin
De 24 a 48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Resultados
La esterilizacin del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El color prpura se restaura por agitacin.
La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del
mismo.
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-101-05 x 500g :Cdigo: B02-101-06 6 x 50 ml: B04-101-84
Salmonella Shigella Agar.
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces,
alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.
Fundamento
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de
la mayora de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el
indicador de pH, obtenindose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen
colonias transparentes.
La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formacin de sulfuro de hierro.
Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo (B02-120-05).
Siembra
Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.
Recomendaciones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de agar E.M.B. (B02-101-05) o de agar Mac Conkey
(B02-114-05).
Incubacin
Durante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Resultados
Microorganismos Colonias
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro
Shigella flexneri Incoloras
Shigella sonnei Incoloras
Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro
Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-138-05 X 500g :Cdigo: B02-138-06
Agar XLD
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Agar_XLD.pdf
Verde Brillante Agar.
Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., excepto S. typhi y S.
paratyphi, a partir de muestras clnicas, alimentos, y otros materiales de importancia sanitaria. No se recomienda para el
aislamiento de Shigella spp.
Es de un valor excepcional cuando se investiga un gran nmero de muestras de heces o alimentos, por su alta capacidad de
diferenciacin de las colonias sospechosas.
Fundamento
En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrgeno, vitaminas y minerales.
La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo
cuando hay produccin de cido a partir de la fermentacin de azcares, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y
el verde brillante acta como agente selectivo.
Siembra
Sembrar en superficie por estriado a partir de una dilucin del material a investigar o de un cultivo previo en un medio de
enriquecimiento selectivo, como Selenito caldo (B02-120-05) o Tetrationato caldo (B02-145-05).
Para el tratamiento de materia fecal se recomienda hacer cultivo primario en medios menos selectivos, como Salmonella
Shigella agar (B02-138-05), o Mac Conkey agar (B02-114-05).
Incubacin
Incubar 24 horas a 35-37C.
Resultados
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-124-05 x 500g :Cdigo: B02-124-06
Agar Sulfito de Bismuto
http://www.condalab.com/uploads/media/1011__AGAR_BISMUTO_SULFITO_REv_0_Abril_2010_
01.pdf
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/sulfitobismuto.pdf
TCBS Medio
MEDIO SELECTIVO para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae, Vibrio parahemolyticus y otras especies de
Vibrio a partir de heces, agua y alimentos contaminados.
Tambin es conocido como Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa, o como Agar Selectivo para Vibrios.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de levadura, la peptona de carne y la triptena aportan nutrientes para el desarrollo
bacteriano. Es este, el medio selectivo ms adecuado para el aislamiento de las especies de Vibrio, e inhibidor para la
mayora de las enterobacterias. Esta inhibicin se basa en las altas concentraciones de tiosulfato y citrato, la presencia de
bilis y un pH fuertemente alcalino. La degradacin de la sacarosa es variable entre las especies de Vibrio y las colonias son
verdes para las cepas que no la utilizan y amarillas para aquellas que producen cido a partir de este azcar. Esto es debido
al viraje del color de los indicadores de pH azul de timol y azul de bromotimol, del color azul al amarillo en medio cido. Es
importante tener en cuenta, que la proporcin de sacarosa en el medio est equilibrada de forma tal que no inhiba el
crecimiento bacteriano por exceso de cido.
El cloruro de sodio favorece el crecimiento de microorganismos. El tiosulfato de sodio aporta azufre y junto con el citrato
frrico permiten la deteccin de produccin de cido sulfhdrico.
Aumentando la concentracin de cloruro de sodio y disminuyendo la temperatura de incubacin, pueden aislarse especies
marinas sin importancia sanitaria.
Siembra
1-Materiales clnicos:
a-materia fecal: suspender 1 gramo de heces o el contenido del hisopo en 10 ml de Agua Peptonada Alcalina (B02-159-05,
B02-159-06) e incubar de 6 a 8 horas a 35-37C, en aerobiosis.
b-materiales provenientes de infecciones extraintestinales: no es necesario realizar enriquecimiento previo en Agua
Peptonada Alcalina.
2-Agua: Filtrar de 1 a 10 litros (el volumen deseado) de agua con membrana de 0.22.Colocar la membrana en un
recipiente conteniendo Agua Peptonada Alcalina e incubar de 6 a 8 horas a 35-37C, en aerobiosis.
3-Alimentos: Licuar 25 g de la muestra con 225 ml de Agua Peptonada Alcalina (B02-159-05, B02-159-06) e incubar de de
6 a 8 horas a 35-37C, en aerobiosis.
En todos los casos sembrar una alcuota del caldo de enriquecimiento en la superficie de una placa de TCBS, por
estriado, para el aislamiento de colonias.
Incubacin
En aerobiosis, durante 18-24 horas a 35-37C.
Resultados
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-167-05 x 500g :Cdigo: B02-167-06
GC Agar Base.
Medio de cultivo empleado como medio basal para la preparacin del medio Thayer-Martin original o modificado, y como
agar chocolate con o sin enriquecimiento.
Es til para la recuperacin de N. gonorrhoeae, N. meningitidis y otros microorganismos exigentes en sus requerimientos
culturales.
Fundamento
Es un medio altamente nutritivo. La pluripeptona (es una mezcla en partes iguales de peptona de carne y peptona de
casena) es la fuente de nutrientes para el desarrollo de microorganismos, el almidn soluble absorbe sustancias txicas
indeseables para el desarrollo de ciertos microorganismos, las sales de fosfato forman un sistema buffer y el cloruro de
sodio mantiene el balance osmtico.
Este medio de cultivo, puede ser suplementado con otros nutrientes o con antimicrobianos, logrndose un medio mas
enriquecido o selectivo segn el aditivo.
El agar base GC, en combinacin con hemoglobina y el suplemento estril de enriquecimiento Britalex (B03-600-21), se usa
para el aislamiento de microorganismos exigentes.
Si se desea un medio selectivo para N. gonorrhoeae, se puede adems aadir mezcla antimicrobiana VCNT (B03-605-21)
para inhibir el desarrollo de microorganismos Gram positivos y Gram negativos, excepto N. gonorrhoeae.
Instrucciones
Preparar agar base GC doble concentracin, suspendiendo 8,2 g del polvo en 100 ml de agua destilada usando un
erlenmeyer de 500 ml. (Si a partir del medio deshidratado se desea preparar Thayer Medio modificado, es necesario agregar
1 g de agar y 0,3 g de glucosa.) Mezclar suavemente. Calentar con agitacin peridica y dejar hervir durante un minuto
para asegurar la disolucin completa del medio. Suspender 2 g de hemoglobina en polvo en 100 ml de agua destilada de la
siguiente manera: mezclar 2 g de hemoglobina con 2 o 3 ml de agua destilada caliente hasta la formacin de una pasta
uniforme. Agregar gradualmente y agitando agua destilada hasta completar los 100 ml, quedando as una solucin
homognea. Esterilizar el Agar Base GC y la hemoglobina al 2% por autoclave 15 minutos a 121C. Enfriar las soluciones
estriles a 50C. Luego, segn el medio de cultivo que se desee preparar, proceder de la siguiente manera:
-Para preparar el medio de cultivo Thayer Martin: reconstituir el Britalex y el V.C.N.T. agregando 2.1 ml de solvente
estril a cada frasco ampolla. Adicionar aspticamente la solucin de hemoglobina, 1 ampolla de V.C.N.T. y otra de Britalex
al medio base GC doble concentracin; mezclar suavemente y distribuir en placas de Petri u otros recipientes estriles.
-Para preparar agar chocolate: agregar al medio base GC doble concentracin,el suplemento Britalex reconstituido con
2.1 ml de solvente estril y la solucin de hemoglobina, mezclar suavemente y distribuir en placas de Petri u otros
recipientes estriles.
Siembra
Directa, sobre la superficie del medio de cultivo.
Incubacin
El tiempo, la temperatura, y la atmsfera de incubacin, depender del microorganismo que se quiera aislar.
Resultados
De acuerdo al protocolo del CDC el control de calidad del medio Thayer Martin para productores de medios de cultivo el
ensayo que efecta Laboratorios Britania, es el siguiente:
a-Cultivos para demostrar inhibicin del crecimiento por los antimicrobianos presentes en el medio:
GC Agar Base suplementado con Hemoglobina 2%, VCNT y Britalex:
Microorganismos Crecimiento
N. gonorrhoeae ATCC 49226 Bueno-excelente
N. meningitidis Bueno-excelente
P. mirabilis ATCC 43071 Inhibicin total o parcial
E. coli ATCC 25922 Inhibicin total o parcial
S. epidermidis ATCC 14990 Inhibicin total o parcial
N. sicca Inhibicin total o parcial
C. albicans ATCC 10231 Inhibicin parcial
Microorganismos Crecimiento
P. mirabilis ATCC 43071 Bueno-excelente
E. coli ATCC 25922 Bueno-excelente
S. epidermidis ATCC 14990 Bueno-excelente
C. albicans ATCC 10231 Bueno-excelente
N. gonorrhoeae ATCC 49226 Bueno-excelente
N. meningitidis Bueno-excelente
H. influenzae ATCC 49247 Bueno-excelente
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-157-05 x 500g :Cdigo: B02-157-06
Manitol Salado Agar.
Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. Los estafilococos coagulasa positiva
hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos
coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas, se repicarn en un
medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y
minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es
el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se
modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del
mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o
prpura.
Siembra
Sembrar en superficie un inculo denso de la muestra.
Incubacin
De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubacin durante 3 das a 32 C, en aerobiosis.
Resultados
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-118-05 x 500g :Cdigo: B02-118-06
Sangre Agar Base
Medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos.
Con la adicin de sangre, el medio es til tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios
nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observacin de reacciones de
hemlisis.
Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar chocolate.
Fundamento
La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una
gran variedad de microorganismos, an de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracin final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento
bacteriano, y permite detectar hemlisis.
Instrucciones
Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar perfectamente hasta obtener una
suspensin homognea. Calentar con agitacin frecuente y hervir 1 minuto. Esterilizar 20 minutos a 121C. Enfriar a 45-
50C agregar sangre desfibrinada al 5%. Homogeneizar y distribuir en placas.
Preparacin de la placa de Agar Sangre: aadir en forma asptica un 5% de sangre estril desfibrinada a temperatura
ambiente, el agar debe estar a 45C.
Preparacin de Agar Chocolate: despus de aadir la sangre y agitando frecuentemente se mantiene el medio de cultivo a
80C por 10 minutos hasta que adquiera un color pardo chocolatado.
Siembra
Por inoculacin directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de cultivo.
Incubacin
El tiempo, temperatura y atmsfera de incubacin, dependern del microorganismo que se quiera aislar.
Resultados
Limitaciones
-Las reacciones hemolticas de muchos microorganismos son diferentes al usar sangre de caballo respecto a la sangre de
carnero, tal es el caso de algunas cepas de estreptococos grupo D, que producen beta hemlisis en el agar suplementado
con sangre de caballo pero no en agar suplementado con sangre de carnero, y son mal clasificados como Estreptococos
Grupo A al usar sangre de caballo.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-149-05 x 500g :Cdigo: B02-149-06 6 x 50 ml: B04-149-84
Fundamento
Tanto la glucosa presente como la infusin de papa favorecen el desarrollo exuberante de hongos y levaduras, mientras que
el desarrollo bacteriano es inhibido con el agregado de cido tartrico luego de la esterilizacin hasta alcanzar un pH: 3.5
0.2. Una vez agregado el cido no se puede recalentar ya que el agar se hidroliza.
Siembra
- Tcnica De Pour Plate: sembrar 0.1 o 1 ml y agregar 15 ml del Papa Glucosado Agar fundido y enfriado
a 45-50 C
- En superficie: por estriado
Incubacin
En aerobiosis, a 22-25 C 30-32 C segn el mtodo seguido, durante 5 das o mayor tiempo.
Resultados
Microorganismos Crecimiento
Aspergillus niger Bueno
Candida albicans Bueno
Sacharomyces cerevisiae Bueno
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-166-05 x 500g :Cdigo: B02-166-06
AGAR DEXTROSA SABOURAUD
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_AgarSabouraudD
extrosa.pdf
AGAR MICOSEL.
http://www.bd.com/europe/regulatory/assets/ifu/hb/ce/pa/es-pa-
254417.pdf
http://www.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/US/L007479%2808%29
%280107%29_ES.pdf