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Bioquímica Geral C

Série 1
PROPRIEDADES ÁCIDO-BASE DOS AMINOÁCIDOS

1.1 - Responda às seguintes questões com “verdadeiro” ou “falso”. Se “falso”, explique


porquê:
a) Só a pH muito baixo ou muito alto é que a forma não ionizada de um dado
aminoácido predomina;
b) A leucina é mais polar do que a alanina;
c) A um valor de pH superior ao valor de pKa de um grupo ionizável mais de metade
desses grupos estão ionizados;
d) O ponto isoeléctrico do tripeptídeo Lis-Lis-Lis é maior do que qualquer dos valores
de pKa dos resíduos individuais (Lisina). Esboce a curva de titulação com NaOH
para este tripeptídeo;
e) Há rotação livre em torno de uma ligação peptídica.

1.2 - O grupo γ-carboxilo do ácido glutâmico tem um pKa = 4,3.


a) Que fracção destes grupos estão desprotonados (i.e. na forma –COO–) em solução
diluída de ácido glutâmico a pH = 5,0?
b) E a pH = 3,8?
c) Calcule as cargas formais do ácido glutâmico para valores de pH das alíneas
anteriores.

1.3 - O aminoácido HISTIDINA apresenta três grupos ionizáveis:

-
COO pKa1 = 1,8 (α-carboxilo)
NH+
H C CH2 pKa2 = 9,2 (α-amino)
+ N
NH3 pKa3 = 6,0 (imidazol)
H

Esquematize uma curva de titulação (pH / equiv. de base adicionada) indicando as


espécies presentes. Justifique.

1.4 - Considere as seguintes misturas de aminoácidos:


a) Uma mistura de aminoácidos, Ala, Ser, Fen, Arg, Asp e His, é sujeita a electroforese
em papel a pH = 3,9. Indique a direcção de migração de cada aminoácido;
b) Suponha que tem uma mistura de Ala, Val, Glu e Lis a pH = 6,0. Calcule a carga
formal de cada aminoácido. Desenhe a forma da tira de papel revelada pela
ninidrina após ter realizado a electroforese. Indique o ânodo (+), cátodo (-) e a
origem e a posição de cada um dos aminoácidos.

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1.5 - Usando os valores de pKa indicados na Tabela em anexo identificar os aminoácidos


cujas curvas de titulação são mostradas nas Figuras.

12
12
10
10

8
8
pH

pH
6
6

4
4

2 2

0 0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3
Moles de NaOH Moles de NaOH

1.6 - A partir do colagénio isolado da cauda do canguru obteve-se uma prolina substituída
(aminoprolina) ainda não caracterizada.
A partir das curvas de titulação determinaram-se os pKa dos grupos ionizáveis:

H
pKa(α-carboxilo) = 1,9
H3N C CH2 pKa(α-amino) = 9,8
pKa(γ-amino) = 10,0
H2C HC CO2-
N
H2

a) Indique todas as formas ionizadas deste aminoácido;


b) Calcule o ponto isoeléctrico deste aminoácido;
c) Calcule a carga deste aminoácido a pH 2,5 e diga qual a direcção de migração deste
aminoácido quando sujeito a electroforese a este pH.

1.7 - Considere o seguinte peptídeo:


Glu-Leu-Arg-Met-Glu-Trp-Arg-Ala-Trp-Glu

a) Suponha que vai titular na forma Ln- indique todos os equilíbrios desde a forma
totalmente desprotonada até à forma totalmente protonada referindo quais os
grupos envolvidos em cada passo e os respectivos valores de pKa;
b) Desenhe a curva de titulação. Justifique.
c) Calcule o pH do ponto isoeléctrico.

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1.8 - Na titulação de 0,01 moles de um


peptídeo na sua forma completamente
protonada foram gastos 0,07 moles de
NaOH. Na figura 1 apresenta-se a curva
de titulação realizada.
A composição de aminoácidos revelou
somente a presença de três tipos de
aminoácidos (Glu, His, Arg).
a) Através da curva de titulação
observada determine a composição de
aminoácidos deste peptídeo.
Justifique.
b) Escreva os equilíbrios postos em jogo
ao longo da titulação e respectivos
valores de pKa.
c) Calcule a carga total do peptídeo a pH 4,0 e a pH 6,0.
d) Determine o pH do ponto isoeléctrico deste peptídeo.

EXERCÍCIOS SUPLEMENTARES

1.9 - O grupo ε-amino da lisina tem pKa = 10,5.


a) Que fracção deste grupo está protonada (i.e. na forma –NH3⊕) em solução diluída
de lisina a pH = 9,5?
b) E a pH = 11,0?

1.10 - Cada grupo ionizável de um aminoácido tem dois estados possíveis de ionização,
carregado e não carregado (ex: –COO– e –COOH).
a) Represente os estados possíveis de ionização do resíduo SERINA;
b) Indique qual a forma predominante aos valores de pH iguais a 1,0; 3,0; 7,0 e 10,0.

-
COO pKa1 = 2,2 (α-carboxilo)
H C CH2 OH pKa2 = 9,2 (α-amino)
NH3+

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1.11 - Os aminoácidos podem ser usados como tampões. Uma solução tampão é uma
solução que não varia apreciavelmente de pH quando se lhe adiciona ácido ou base.
A zona na qual uma dada solução é um tampão efectivo é designada por “zona
tampão” e é geralmente definida por pKa ± 1.
a) Indique a “zona tampão” da glicina, histidina, aspártico e lisina; (Resposta: Zona
tampão = pka ± 1)
b) Escolha um aminoácido para tamponizar a pH = 4, 6; 9,0 e 12,0;
c) Uma proteína contendo 110 aminoácidos será melhor ou pior tampão que a solução
de concentração equivalente dos aminoácidos constituintes? Explique. (Ajuda para a
resposta: nas proteínas os grupos amino e carboxilo estão envolvidos nas ligações
peptídicas)

1.12 - Usando os valores de pKa tabelados, identifique os aminoácidos A, B, C e D, a partir


das curvas de titulação.

Aminoácido pKa1 pKa2 pKa3

Asp 1,9 3,6 9,6


His 1,8 6,0 9,2
Cis 2,2 9,0 10,5
Thr 2,6 10,4 -

CURVAS DE TITULAÇÃO

Escolha o pH a que seja possível separar uma mistura destes quatro aminoácidos por
electroforese. Para esse pH indique as espécies presentes de cada aminoácido e o valor
da carga. Indique também a direcção de migração.

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Apêndice
OS AMINOÁCIDOS COMUNS: ESTRUTURAS E VALORES DE PKA.

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