Biologia Molecular01

Educao a Distncia
Curso de
Biologia Molecular
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Curso de
Biologia Molecular
MDULO I
Ateno: O material deste curso est disponvel apenas como parmetro de estudos.
proibida qualquer forma de comercializao do mesmo. Os crditos do contedo aqui
contido so dados aos seus respectivos autores descritos na bibliografia consultada
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CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR
Sumrio
Glossrio de siglas e smbolos
Captulo 1 Da clula ao DNA

1.1 A Clula
1.2 Clulas Procariticas
1.3 Clulas Eucariticas
1.4 Organelas Celulares
1.4.1 Clula Animal versus Vegetal
1.5 Constituintes Qumicos da Clula
1.5.1 gua e Sais Minerais
1.5.1.1 Equilbrio Hidrossalino
1.5.2 Carboidratos
1.5.3 Lipdeos
1.5.4 cidos Nuclicos
1.5.4.1 Estrutura do DNA
1.5.4.2 Tipos de DNA
1.5.4.3 Formas do DNA
1.5.5 Protenas
1.5.5.1 Estrutura das Protenas
1.5.5.2 Famlias de Protenas
1.5.5.3 Classificao das Protenas
1.5.5.4 Funes das Protenas
1.5.5.5 Desnaturao e Renaturao
Captulo 2 - Do DNA a Protena

2.1 Dogma Central da Biologia Molecular
2.2 Ciclo Celular
2.3 Replicao do DNA
2.3.1 Replicao na bactria Escherichia coli
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Este material deve ser utilizado somente como parmetro de estudo. Os crditos deste material so dados a seus respectivos autores da obra
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2.3.2 Trmino da Replicao em Genomas Circulares

2.4 Mutao e Reparo do DNA
2.4.1 Mutao Pontual
2.4.2 Mutaes Ocorrem em Hotspots
2.4.3 Mecanismos de Reparo do DNA
2.4.3.1 Reparo por Fotorreativao Enzimtica
2.4.3.2 Reparo por Exciso
2.4.3.3 Reparo de Bases Malpareadas
2.5 RNA
2.5.1Tipos de RNA
2.5.2 Estrutura dos Tipos de RNA
2.6 Transcrio
2.6.1Transcrio em Procariotos
2.6.2 Transcrio em Eucariotos
2.7 Traduo - sntese de protenas
Captulo 3 - Vias da informao

3.1Empacotamento do DNA
3.1.1 Cromatina
3.1.2 Protenas histnicas e No-histnicas
3.1.3 Nucleossomos
3.1.4 Nveis mais altos de empacotamento
3.2 Cromossomos
3.2.1Estrutura dos cromossomos
3.3 Genes
3.3.1 Organizao dos genes nos procariotos
3.3.2 Controle da expresso gnica nos procariotos
3.3.3 Organizao dos genes nos eucariotos
3.3.4 Controle da expresso gnica nos eucariotos
3.4 Genoma
3.4.1 Genoma Nuclear
3.4.2 Genoma Mitocondrial
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Captulo 4 - Tcnicas bsicas de Biologia Molecular

4.1 Extrao de DNA
4.1.1 Cultura de Clulas
4.2 Clonagem de DNA
4.2.1 Tipos de Vetores de Clonagem
4.2.2 Biblioteca de DNA
4.3 Reao em Cadeia da Polimerase PCR
4.4 Eletroforese
4.4.1 Eletroforese para Purificao de Protenas
4.5 Sequenciamento de DNA
4.5.1 Sequenciadores de Nova Gerao
4.6 Sequenciamento de protenas
Referncias Bibliogrficas
Glossrio de siglas e smbolos
DNA cido desoxirribonuclico

mRNA RNA mensageiro
nm nanmetro
RNA cido ribonuclico
tRNA RNA transportador
rRNA RNA Ribossmico
pb bares de bases
pH potencial hidrogeninico
UV ultravioleta
m micrometro
C grau Celsius
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Captulo 1 Da Clula ao DNA
Introduo
No h como falarmos em Biologia Molecular, sem antes conhecermos de forma bsica,

alguns conceitos que fazem parte da Biologia Celular, que o estudo da clula, bem
como seus componentes e constituintes, inclusive a formao de molculas de DNA
(cido desoxirribonuclico) responsveis por carregar toda a informao gentica e a
sntese de protenas, objetos de estudo da Biologia Molecular.
Desta forma, vamos conhecer um pouco sobre as clulas de forma geral, at chegarmos
ao estudo dos constituintes moleculares das clulas (DNA, RNA e protenas).
1.1 A clula
Todos os seres vivos so formados por clulas. Cada clula que compe nosso corpo tem
como caractersticas: crescer, reproduzir, processar informaes, responder a estmulos e
morrer. Como somos compostos basicamente por clulas, apresentamos essas mesmas
caractersticas durante a vida.
Tanto os seres formados por uma nica clula, denominado unicelulares como o caso
das bactrias, como os organismos formados por um conjunto de clulas denominados
pluricelulares, como as plantas, animais e o homem, possuem todas essas capacidades
citadas acima (crescimento, reproduo etc).
Alm de apresentarem essas caractersticas, podemos considerar as clulas como sendo
pequenas unidades envoltas por membranas e preenchidas por uma soluo aquosa.
No entanto, as clulas s puderam ser conhecidas e receberam esse nome, aps a
inveno do primeiro microscpio ptico no sculo XVII. O desenvolvimento do
microscpio ocorreu devido ao avano na produo de lentes de vidro, sendo que o
refinamento dessas lentes levou a fabricao de microscpios pticos simples.
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O pesquisador ingls Robert Hooke, observando um pedao de cortia ao microscpio

ptico (Figura 1.1) notou que este fragmento era composto por pequenas cavidades
polidricas ao qual chamou de clula, do latim cella que significa cavidade. Na realidade
o que Hooke observou naquela poca, eram as paredes das clulas vegetais mortas, j
que hoje sabemos que a cortia um tecido vegetal morto.
Figura 1.1 Desenho esquemtico do microscpio ptico usado na descoberta das clulas pelo
pesquisador Robert Hooke. Imagem adaptada disponvel no endereo:
http://www.scielo.cl/fbpe/img/atenea/n493/03fig09.jpg.
Embora em 1663, Hooke tenha introduzido o conceito de clula, foi muito tempo depois
que dois pesquisadores realizaram experimentos e formularam a teoria celular, que afirma
que todo ser vivo formado por clulas. essa teoria que diferencia o homem de uma
pedra, pois todas as matrias vivas so formadas por clulas.
A microscopia foi fundamental para a descoberta das clulas e continua sendo at hoje,
um poderoso instrumento para estudo e anlise de diferentes tipos celulares.
Conforme especificado acima, mesmo todas as clulas apresentando as mesmas
caractersticas estruturais e a capacidade de crescer e se reproduzir, h uma diversidade
celular muito grande tanto no que se refere a morfologia (forma) como as suas
funcionalidades em um organismo.
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Temos clulas bastante especializadas como, por exemplo, as hemcias presentes no

sangue que so responsveis pelo transporte de gases (oxignio e gs carbnico). Por
outro lado, temos as clulas-tronco que so indiferenciadas e que possuem a capacidade
de se transformarem em qualquer tipo celular.
Alm disso, temos clulas com uma grande variedade de formas e tamanhos. H clulas
que se movem rapidamente como o caso dos gametas masculinos (espermatozides) e
outras estticas, ou ainda, clulas que vivem isoladas ou em colnias, em associao ou
no com outros organismos.
Assim, podemos notar que a diversidade celular muito grande e para conhecermos um
pouco dessas diferenas e semelhanas vamos analisar as clulas de organismos
procariotos e eucariotos, pois todas as clulas pertencem a um desses dois grupos.
1.2 Clulas Procariticas
Todos os seres procariotos (bactrias e cianobactrias) apresentam clulas denominadas

procariticas. A principal caracterstica desse grupo celular a ausncia de uma
membrana que delimita seu material gentico, assim no possuem um ncleo definido e
sua organizao interna bem simples. A Figura 1.2 mostra uma bactria e seus
constituintes.
Figura 1.2 Desenho de uma clula procaritica (bactria). Imagem disponvel em:
http://pt.wikipedia.org/wiki/Ficheiro:Prokaryote_cell_diagram_pt.svg.
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Podemos observar na Figura 1.2, que o material gentico (DNA) est disperso na regio
central (no h uma membrana envolvendo esse DNA, fica em uma regio denominada
nucleide) e em seu interior aquoso (citoplasma ou citosol) esto presentes os
ribossomos.
A membrana dessas clulas possui mais de uma camada, sendo formada por: uma
cpsula, uma parede celular e a membrana plasmtica.
A cpsula formada por protenas e confere resistncia contra a ingesto e a digesto
por clulas fagocitrias (clulas que digerem outras clulas). J a parede celular rgida e
tem a funo de proteger a clula de agresses do meio externo e a membrana
plasmtica fundamental para a seleo do que entra e sai da clula. Todas essas
estruturas sero um pouco mais detalhadas no item de organelas celulares.
A bactria apresentada no desenho (Figura 1.2) apresenta um flagelo que serve para a
locomoo. J o mesossomo uma estrutura formada pela invaginao da membrana
plasmtica e que tem como funo participar da diviso celular, auxiliando na diviso
correta dos cromossomos nas clulas.
1.3 Clulas Eucariticas
As clulas eucariticas so mais complexas que as clulas procariticas e o que as

diferencia fundamentalmente a presena de uma membrana nuclear individualizada e
vrios tipos de organelas com diferentes funes.
Provavelmente estas clulas surgiram aps um processo de aperfeioamento das clulas
procariticas. No possvel saber com preciso dizer quanto tempo a clula "primitiva"
gastou para passar por transformaes em sua estrutura at originar o modelo de clula
eucaritica que conhecemos hoje, mas provvel que isso tenha ocorrido h muitos
milhes de anos. Acredita-se que a clula "primitiva" fosse bem pequena e para que
realizasse melhor suas funes, precisou aumentar seu tamanho.
A clula eucaritica apresenta uma srie de estruturas como: ncleo celular, nuclolo,
ribossomos, retculo endoplasmtico rugoso (RER), complexo de Golgi, microtbulos,
retculo endoplasmtico liso (REL), mitocndrias, vacolo, citoplasma, lisossomos,
cloroplastos e centrolos.
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A Tabela 1.1 apresenta as estruturas presentes ou ausentes que diferenciam os seres

eucariontes e procariontes.
Clulas procariticas Clulas eucariticas
Envoltrio nuclear Ausente Presente
Ncleo No est definido Presente
Citoplasma Sem citoesqueleto Citoesqueleto constitudo

de filamentos proticos
Organelas Poucas ou nenhumas Ncleo, mitocndria,

cloroplasto, retculo
endoplasmtico, entre
outras
Tabela 1.1 Tabela comparativa apresentando a presena ou ausncia de estruturas observadas

entre as clulas eucariticas e procariticas.
Vamos conhecer a seguir as organelas apresentadas nas clulas procariticas e

eucariticas, bem como suas caractersticas e funes.
1.4 Organelas Celulares
Como vimos, todas as clulas possuem trs componentes bsicos: material gentico
(DNA ou RNA), citoplasma e uma membrana plasmtica. Mas h organelas existentes
que tambm so importantes e possuem funes especficas dentro das clulas.
Membrana plasmtica: constituda por protenas e uma bicamada de lipdios.

importante para a seleo das substncias que entram e saem da clula. Alm disso,
separam o interno da clula (meio intracelular) e o externo da clula (meio extracelular).
Os pesquisadores Singer e Nicolson, propuseram o modelo de mosaico fluido para a
membrana plasmtica. Nesse modelo, as protenas ficam embebidas em uma dupla
camada de lipdeos, de forma que as pores hidrofbicas (que repelem a gua) das
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protenas encontram-se no interior da bicamada tambm hidrofbica, estando protegidas

do contato da gua.
Mitocndrias: so estruturas alongadas e arredondadas, formadas por duas membranas

com formas e funes diferentes. Como tem a funo de realizar a respirao celular, a
quantidade de mitocndrias presentes na clula, est relacionado com a maior ou menor
quantidade de energia gasta pela clula. Assim, clulas do rim possuem cerca de 300
mitocndrias, j espermatozides possuem cerca de 25 e algumas algas chegam a ter
apenas uma mitocndria, pois consomem pouca energia.
Cloroplastos: so encontrados desde algas verdes e azuis at vegetais superiores, mas

nunca em animais. onde ocorre a fotossntese, processo onde a luz absorvida por
pigmentos e convertida em energia qumica.
Da mesma forma que as mitocndrias, os cloroplastos so delimitados por duas
membranas, sendo que o espao entre as duas membranas denominado de espao
intermembrana. A membrana externa permite a passagem de substncias mais facilmente
do que a membrana interna, que mais seletiva. Porm, ambas as membranas so
altamente permeveis ao CO 2 (dixido de carbono) que o substrato para a sntese de
carboidratos na fotossntese.
Complexo de Golgi: formado por sacos achatados e vesculas. responsvel pelo

processamento de protenas ribossmicas e a sua distribuio por entre essas vesculas.
Portanto, como uma espcie de sistema central de distribuio de substncias na clula,
realiza o armazenamento, transformao, empacotamento e remessa de substncias.
Participa tambm da formao dos lisossomos entre outras funes.
Lisossomos: so esfricos e de tamanho varivel, formados a partir do Complexo de

Golgi (Figura 1.3). Apresentam em seu interior, enzimas hidrolticas com funo de
realizar a digesto dentro da clula. Este papel muito importante, pois permite eliminar
pores envelhecidas ou danificadas do citoplasma, incluindo organelas e molculas,
alm de degradar componentes.
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Lisossomo
Figura 1.3 - Representao esquemtica do Complexo de Golgi e do lisossomo. Observe que o

lisossomo formado a partir do Complexo de Golgi. Imagem adaptada disponvel em:
http://www.vestibulandoweb.com.br/biologia/teoria/complexo-de-golgi.jpg.
Peroxissomo: so pequenas organelas esfricas envoltas por uma nica membrana, que
possui em seu interior enzimas. Aparece em quase todas as clulas eucariticas, sendo
que o nmero de peroxissomos por clula, bem como seu tamanho e forma, variam
conforme o tipo de clula. No homem, essas organelas esto presentes em maior
quantidade no fgado e rim.
Citoesqueleto: responsvel pela forma e sustentao da clula, assim como o

esqueleto no homem. Para realizar essa tarefa apresenta trs tipos de filamentos de
actina, microtbulos e filamentos intermedirios.
Retculo endoplasmtico: responsvel por comunicar e transportar substncias entre

o ncleo e o citoplasma da clula, para realizar essa funo possui um sistema de canais
delimitados por membranas, interconectados na forma de tubos ramificados que
delimitam uma cavidade interna conhecida como luz. Temos dois tipos de retculos: o
retculo endoplasmtico rugoso (RER) e o retculo endoplasmtico liso (REL). A Figura 1.4
apresenta as estruturas dos retculos.
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Carioteca Ncleo Cisternas do RE

Luz
Ribossomos
RE
REL
Figura 1.4 - Representao esquemtica do retculo endoplasmtico liso e rugoso. Observe que
h uma ligao direta com o envoltrio nuclear. Pode se observar tambm a luz do RE e os
ribossomos que fazem parte do RER. Imagem adaptada de:
http://professores.unisanta.br/maramagenta/Imagens/ANATOMIA/Reticulo%20-
%20extr%20euita.bmp.
Ncleo: uma estrutura presente apenas nas clulas eucariticas e com duas funes
bsicas: regular as reaes qumicas que ocorrem dentro da clula e armazenar as
informaes genticas da clula (DNA).
Nuclolo: encontrado dentro do ncleo, sendo uma estrutura esfrica e densa que tem
um dimetro de 1 a 3 m. Sob maiores aumentos microscpicos se comprova que o
nuclolo apresenta reas constitudas por grnulos e reas compostas de fibrilas. A parte
fibrilar constituda de DNA e a parte granular consiste em partculas precursoras de
ribossomos.
Algumas dessas organelas esto presentes em todos os tipos de clulas, tanto em

animais como em vegetais, porm algumas s aparecem em um dos dois tipos. A seguir
veremos a distribuio dessas organelas nos dois tipos celulares.
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1.4.1 Clula Animal versus Vegetal
Sabendo que todos os organismos existentes possuem ou clulas procariticas

ou eucariticas e conhecendo a funo de cada organela na clula, vamos observar as
diferenas em relao a ausncia ou presena das organelas em cada tipo celular, animal
e vegetal. Vamos notar tambm que isto est relacionado com as diferentes funes que
cada tipo de clula possui. A Figura 1.5 apresenta as organelas presentes em cada tipo
de clula, animal e vegetal.
Figura 1.5 Representao de uma clula eucaritica animal e vegetal e de suas estruturas
celulares internas e externas. As imagens esto disponveis em:
http://br.geocities.com/pri_biologiaonline/animal_vegetal.jpg.
Embora a clula vegetal e a clula animal possuam as mesmas estruturas bsicas, em

um exame mais detalhado ao microscpio, observou-se algumas diferenas, que podem
ser melhores percebidas na Tabela 1.2.
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Estruturas Clula vegetal Clula animal

Centrolos Presente Presente
Citoplasma Presente Presente
Complexo de Golgi Presente Presente
Lisossomos Presente Presente
Membrana Plasmtica Presente Presente
Mitocndrias Presente Presente
Ncleo Presente Presente
Parede Celular Presente Ausente
Retculo endoplasmtico Presente Presente
Vacolo Presente Ausente
Tabela 1.2 Tabela comparativa das estruturas celulares presentes e ausentes nas clulas
eucariontes vegetais e animais.
1.5 Constituintes Qumicos das Clulas
Todas as clulas so formadas por uma combinao de molculas organizadas em uma

ordem muito precisa. Possuem componentes qumicos classificados em: inorgnicos, do
qual fazem parte a gua e os sais minerais e os orgnicos, que incluem os cidos
nuclicos, carboidratos, protenas e lipdios. Cerca de 70% de uma clula de gua e 2 a
3% de sais inorgnicos. A Tabela 1.3 apresenta as principais substncias e suas
respectivas propores nas clulas.
Substncia Porcentagem na clula (%)
gua 65
Protenas 15
Lipdios 8
Carboidratos 6
Sais minerais 5
Outros 1
Total 100%
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Tabela 1.2 Proporo dos principais componentes qumicos presentes nas clulas.
1.5.1 gua e Sais Minerais
A gua um dos compostos mais abundante e importante presente nas clulas, vital para
os organismos vivos. Como muito abundante no organismo, a maioria das reaes
qumicas ocorrem em meio aquoso.
Possui a grande importncia de facilitar a passagem de substncias atravs da
membrana.
Pode ser obtida pela ingesto de alimentos slidos ou pastosos, de lquidos e da prpria
gua. Alguns animais no bebem gua, eles a obtm exclusivamente atravs dos
alimentos.
Ao fim das reaes de sntese protica, como ao final do processo respiratrio e da
fotossntese, h a formao de gua. Dessa forma, o teor de gua no citoplasma
proporcional com sua atividade celular. Em tecidos muscular e nervoso, a proporo de
gua de 70 a 80%, enquanto que no tecido sseo essa taxa reduz para cerca de 25%.
Os sais minerais so as substncias que regulam o metabolismo celular, podendo ser

obtidos pela ingesto de gua ou alimentos como frutas, cereais, leite, peixes entre
outros. Participam diretamente dos mecanismos de osmose, estimulando, conforme suas
concentraes, a entrada ou a sada de gua na clula.
Podem atuar nos organismos em sua forma cristalina ou dissociados na forma de ons.
Abaixo temos alguns sais minerais importantes presentes em nosso organismo, bem
como o que a falta desses sais pode ocasionar em nosso corpo:
- Ferro: essenciais na formao da hemoglobina. A deficincia de ferro no organismo
causa uma doena denominada anemia ferropriva.
- Iodo: tm papel importante na ativao da glndula tireide, cujos hormnios possuem
iodo na sua frmula. A falta de sais de iodo na alimentao ocasiona o bcio.
- Fosfatos e carbonatos de clcio: participam na sua forma cristalina da composio do
tecido sseo e do tecido conjuntivo da dentina. A carncia desses sais na alimentao
implica no desenvolvimento anormal de ossos e dentes, determinando o raquitismo.
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- Sdio e potssio: tm ativa participao na transmisso dos impulsos nervosos atravs

dos neurnios.
- Clcio: atuam na contrao das fibras musculares e no mecanismo de coagulao
sangnea.
- Magnsio: participa da formao da molcula de clorofila, essencial para a realizao da
fotossntese.
- Fsforo: faz parte da molcula do ATP (composto que armazena energia) e integram
tambm as molculas de cidos nuclicos (DNA e RNA).
1.5.1.1 Equilbrio Hidrossalino
Os sais minerais e a gua so fundamentais para a manuteno do equilbrio hidrossalino

e da presso osmticas na clula. Alm disso, a queda no teor de gua, nas clulas e no
organismo, abaixo de certo limite, gera uma situao de desequilbrio hidrossalino, ou
seja, um desequilbrio entre a quantidade de gua e sais, o que caracteriza um quadro de
desidratao e pe em risco a vida da clula e do organismo.
1.5.2 Carboidratos
Carboidratos ou acares so substncias orgnicas tambm conhecidas por hidratos de

carbono, pois para cada carbono presente h 2 tomos de hidrognio e 1 tomo de
oxignio, na mesma proporo existente na molcula de gua. Da o nome carbo
(carbono) e hidrato (hidros= gua), portanto apresentam frmula qumica geral: (CH2O)n.
So muito abundantes na natureza e desempenham muitas funes, como: fonte de
energia, reserva de energia, estrutural e como matria-prima para a biossntese de outras
biomolculas.
Os carboidratos podem ser classificados de acordo com o nmero de tomos de carbono
que possuem em: monossacardeos (ex: glicose e frutose), dissacardeos (formados por
dois monossacardeos como, por exemplo, maltose formada por duas glicoses) e
polissacardeos (formados por vrios monossacardeos).
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Os carboidratos esto presentes nos cereais, pes, farinhas, mandioca, batata, doces e
frutas apresentam carboidratos em sua constituio, sendo que o carboidrato a nica
fonte de energia aceita pelo crebro, importante para o funcionamento do corao e de
todo sistema nervoso.
1.5.3 Lipdeos
So um grupo de compostos caracterizados por terem um tipo de estrutura prpria, com

duas regies: uma polar (hidroflica), conectada a uma regio no-polar (hidrofbica)
(Figura 1.6).
Cabea Poro hidroflica

polar
Cauda apolar Poro hidrofbica
Figura 1.6 Estrutura geral de um lipdio, formado por uma cabea polar e uma cauda apolar,
sendo essas as mesmas caractersticas dos fosfolipdios que formam a bicamada lipdica da
membrana plasmtica.
Suas principais funes so:

- Reserva de energia;
- Componente estrutural das membranas biolgicas.
Esse tipo de estrutura caracteriza os lipdios como um grupo de compostos pouco

solveis em gua e solveis em solventes orgnicos.
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1.5.4 cidos Nuclicos
Os cidos nuclicos so as biomolculas mais importantes do controle celular, pois

armazenam toda a informao gentica que a base da herana biolgica, transmitida de
pais para filhos.
Temos dois tipos de cidos nuclicos: o cido desoxirribonuclico (DNA) e cido
ribonuclico (RNA).
Essas molculas foram descobertas em 1869, com os experimentos do pesquisador
Friederich Miescher que trabalhava no sul da Alemanha. Seu trabalho consistia no exame
de clulas do pus humano, retirado a partir de curativos, derivados de processos de
infeco.
Verificou que todas as clulas vivas, inclusive as de pus, continham um glbulo central
mais escuro que o restante da clula, essa regio recebeu o nome de ncleo celular.
Miecher acabou por concluir que daquele material poderia obter, quase que na sua
totalidade, um grande nmero de ncleos celulares isolados.
Para realizar esse isolamento dos ncleos, o pesquisador utilizou uma enzima digestiva
chamada de pepsina. Em seguida, por centrifugaes e outros processos de separao e
filtragem, verificou o aparecimento de uma substncia qumica at ento desconhecida e
rica em fsforo. Inicialmente esta substncia foi chamada de nuclena, ao submet-la
verificao do pH (potencial hidrogeninico), descobriu que esta substncia era bastante
cida, e alterou seu nome para cido Nuclico.
Utilizando tcnicas apropriadas, foi possvel isolar os cidos nuclicos e identificar seus
constituintes. Podemos identificar trs constituintes fundamentais nos cidos nuclicos,
que so:
- cido fosfrico ou fosfato: que confere a caracterstica cida. Faz as ligaes entre
nucleotdeos de uma mesma cadeia e est presente tanto no DNA quanto no RNA.
- Pentose: um acar formado por cinco tomos de carbono. Temos dois tipos de
pentoses: a desoxirribose que est presente no DNA e a ribose que est presente no
RNA.
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- Bases nitrogenadas: h cinco tipos de bases nitrogenadas diferentes, divididas em dois

grupos: pricas (Adenina (A) e guanina (G)) e pirimdicas (Timina (T), Citosina (C) e
Uracila (U)).
Os trs compostos essenciais se unem formando um nucleotdeo. Na Figura 1.7, temos

um esquema mostrando como os trs compostos esto ligados formando o nucleotdeo,
que a unidade que formadora do DNA e RNA.
Base
nitrogenada
Fosfato
Acar
Figura 1.7 Estrutura qumica de um nucleotdeo, mostrando que ele formado por uma base
nitrogenada, um fosfato e um acar (pentose). Imagem adaptada do endereo:
http://www.nutritotal.com.br/textos/files/44--nucleotideo.jpg.
As estruturas da pentose e do fosfato em um nucleotdeo, nunca so alteradas, porm a

base nitrogenada que se liga a pentose pode variar. Temos quatro tipos de bases
nitrogenadas que compem o DNA, apenas para fins ilustrativos, esses tipos podem ser
visualizados na Figura 1.8.
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Bases pirimdicas
(possuem dois
anis aromticos)
T C
Bases pricas
(possuem um anel
aromtico)
A G
Figura 1.8 Estruturas qumicas dos quatro tipos de bases nitrogenadas que compem a
molcula de DNA: timina (T), adenina (A), guanina (G) e citosina (C).
Observando Figura 1.8, podemos notar que as bases pirimdicas (Timina e Citosina)
possuem apenas um anel aromtico, enquanto que as pricas (Adenina e Guanina)
possuem dois anis aromticos.
importante lembrar que a Uracila (U) aparece apenas no RNA, substituindo a base
Timina
Sabendo agora como a composio dos cidos nuclicos, podemos conhecer com mais
detalhes como esses compostos de unem na formao da estrutura do DNA.
1.5.4.1 Estrutura do DNA
A estrutura do DNA que conhecemos hoje foi proposta pelos cientistas Dewey Watson e
Francis Harry Comptom Crick.
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Em 1953, com base nos dados obtidos por difrao de raios X, por Rosalind Franklin, os
pesquisadores Watson e Crick, descobriram o que chamamos atualmente de DNA B.
Nessa forma, o DNA composto por duas cadeias de nucleotdeos ligados entre si por
pontes de hidrognio, que so ligaes fracas no covalentes, formadas entre bases
opostas nas duas cadeias (ou fitas). Assim o pareamento de bases muito especfico
sendo que a base prica Adenina (A) pareia somente com a base pirimdica Timina (T), e
a outra base purnica Guanina (G) pareia com a base pirimdica Citosina (C).
Essas duas sequncias unidas fazem um giro para a direita, formando uma hlice dupla
em torno de um eixo central. A Figura 1.9, mostra este modelo da cadeia de DNA
proposto por Watson e Crick.
Figura 1.9 Modelo da cadeia de DNA proposto por Watson e Crick. Imagem retirada de:
http://profs.ccems.pt/OlgaFranco/10ano/biomoleculas_ficheiros/image051.jpg.
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Os pareamentos entre A e T e C com G, bem como o fato do nmero de bases A ser igual
ao de T, e o nmero de bases C ser sempre igual ao de G (A + G = C + T), receberam o
nome de regra de Chargaff, que o nome do pesquisador que demonstrou entre 1949 e
1953, essa regra.
Esse pareamento pode ocorrer pela presena de duas ou trs pontes de hidrognio.
Sabemos hoje que A e T sempre so unidas por duas pontes de hidrognio e G e C por
trs pontes de hidrognio.
A = T (duas pontes de H)
G = C (trs pontes de H)
Essa caracterstica de um tipo de base apenas parear com um outro tipo, fundamental
para o que chamamos de complementariedade de cadeias, pois se sabemos a seqncia
de uma fita de DNA, a seqncia da outra fita ser facilmente encontrada fazendo-se o
pareamento correto de suas bases.
1.5.4.2 Tipos de DNA
O DNA pode apresentar algumas conformaes dependendo do meio onde est

localizado e da constituio de suas bases. Essas formas distintas puderam ser
estudadas atravs de cristalografia. Algumas dessas formas ainda no foram encontradas
in vivo, apenas em condies artificiais.
Os trs tipos de DNA encontrados em condies fisiolgicas so: DNA tipo B, DNA tipo A
e DNA tipo Z. Nas trs formas se aplicam as regras do pareamento de bases e mudanas
na conformao no levam a alterao na informao carregada por essas sequncias.
Como dito no item anterior, a estrutura descrita por Watson e Crick, de dupla hlice
representa o DNA tipo B, sendo a forma mais encontrada no organismo.
Quando esse DNA tipo B, desidratado ou em etanol 75% ou com a diminuio do sal, o
DNA se encurta e engrossa formando o DNA tipo A.
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Nos dois tipos de DNA, A e B, tanto a desoxirribose quanto a base nitrogenada, ficam em
lados opostos da ligao glicosdica. Em altas concentraes de ons com cargas
positivas (ctions), a base nitrogenada e o acar ficam do mesmo lado da ligao
glicosdica, formando o DNA tipo Z. Esse DNA mais longo e fino que o tipo B.
Aparentemente algumas regies do DNA in vivo, aparecem desta forma.
A Figura 1.10 apresenta um esquema com os trs tipos de DNA apresentados.
Figura 1.10 Esquema apresentando os trs tipos de DNA, A, B e Z respectivamente. Imagem

disponvel em: http://www.jabulela.com/files/images/a-dna-b-dna-z-dna.preview.jpg.
Observe na Figura acima, que h uma diferena entre as cavidades indicadas pelas setas
vermelhas.
1.5.4.3 Formas do DNA
Nem sempre o DNA se apresenta na forma de dupla hlice, podem ocorrer ligaes nas
extremidades das cadeias levando a formao de estruturas circulares como ocorre nas
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bactrias que possuem seus cromossomos na forma circular e ainda apresentam

plasmdeos que so DNA extracromossmico em forma circular.
Alm disso, alguns genomas de vrus de animais e vegetais possuem seu DNA em fita
nica, no havendo a dupla hlice. Isso ocorre tambm nos bacterifagos que so os
vrus que atacam as bactrias.
Podemos encontrar tambm na natureza uma outra situao, onde o DNA dupla fita,
antes de selar suas extremidades sofrem giros na mesma direo da hlice dupla e desta
forma assumem um superenrolamento positivo, o que ocorre nas arqueobactrias que
so bactrias primitivas.
1.5.5 Protenas
As protenas constituem mais da metade do peso seco de uma clula. Desempenham

inmeras funes e determinam a forma e a estrutura da clula.
Os aminocidos so os monmeros que formam as protenas e recebem esse nome por
serem cidos orgnicos, possuindo um grupo amina (NH 2 ) e um grupo carboxlico
(COOH). A presena desses dois grupos faz com que os aminocidos sejam molculas
anfteras (cidos e bsicos).
Todos os aminocidos possuem uma estrutura bsica formada por um tomo de carbono
(C) central ligado a um grupamento amnico (amina) e uma carboxila, um tomo de
hidrognio e um grupo varivel, denominado R ou cadeia lateral, conforme pode ser visto
na Figura 1.11.
Figura 1.11 Estrutura bsica de um aminocido. Imagem disponvel em:

http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/trabalhos_pos2003/const_microorg/proteinas.ht
m.
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Todas as protenas so formadas por aminocidos unidos por ligaes denominadas

peptdicas. H um total de 20 tipos de aminocidos diferentes que so responsveis pela
formao de todas as protenas existentes, sendo que estes aminocidos so agrupados
conforme a polaridade de seu agrupamento em bsicos, cidos, polares e apolares. A
Figura 1.12 apresenta os 20 tipos de aminocidos e suas classificaes quanto a
polaridade.
Figura 1.12 Todos os 20 tipos de aminocidos existentes que compem as protenas e sua
classificao conforme a polaridade. Imagem disponvel em:
http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/imagens/TABELA_AA.GIF.
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Podemos dizer tambm que as protenas so cadeias polipeptdicas (formadas por muitas
ligaes peptdicas). A Figura 1.13 apresenta um esquema da ligao peptdica que
ocorre entre o grupo amina de um aminocido e o grupo carboxlico de outro, formando as
protenas.
Figura 1.13 Esquema da ligao peptdica entre os aminocidos na formao da protena.

Imagem disponvel em: http://curlygirl4.no.sapo.pt/ligacaopeptidica.jpg.
Podemos encontrar protenas simples, formadas apenas por aminocidos e protenas

complexas, formadas por aminocidos associados a outros compostos como, por
exemplo, pigmentos como a hemoglobina que d a cor vermelha ao sangue ou a clorofila
presente nos vegetais verdes.
importante ressaltar que uma cadeia curta de aminocidos, geralmente com menos de
30 resduos de aminocidos, unidos por ligaes peptdicas em uma sequncia
determinada denominada de peptdeo, enquanto que as cadeias mais longas, com at
mais de 4.000 resduos, so chamadas de polipeptdeos.
Geralmente o termo protena refere-se a um polipeptdeo (ou conjunto de polipeptdeos)
que apresenta uma estrutura tridimensional bem definida.
O tamanho de uma protena representado em dltons (Da) que uma unidade de
massa atmica ou em peso molecular (MW). Apenas para exemplificar, uma protena com
peso molecular de 20.000 tem uma massa de 20.000 dltons ou 20 quilodltons (20KDa).
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1.5.5.1 Estrutura das Protenas
As protenas podem apresentar quatro tipos de estruturas, conforme o tipo de

aminocidos que possuem, o tamanho da cadeia e a configurao no espao dessa
cadeia. As estruturas podem ser primria, secundria, terciria e quaternria.
Estrutura primria: representada pela seqncia de aminocidos ao longo da cadeia.

o nvel mais simples e mais importante, pois a partir dele so derivados todos os outros
arranjos espaciais da molcula. Essa estrutura tambm conhecida como "colar de
contas", devido a sua aparncia a um colar com uma regio linear onde esto ligados os
aminocidos (Figura 1.14).
Estrutura primria
(seqncia de aminocidos)
Figura 1.14 Representao da estrutura primria de uma protena, tambm conhecida como
colar de contas. Imagem adaptada disponvel no endereo:
http://www.colegiosaofrancisco.com.br/alfa/aminoacido/imagens/proteinas9.jpg.
Estrutura secundria: apresenta por um arranjo espacial de aminocidos prximos entre

si na seqncia primria da protena. Ocorre graas possibilidade de rotao das
ligaes entre os carbonos. Apenas como curiosidade, temos dois tipos de arranjo
secundrio regular: a folha-beta e a alfa-hlice. Para melhor entendermos esse tipo de
estrutura podemos visualizar um esquema mostrado na Figura 1.15.
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Estrutura secundria
Figura 1.15 Representao da estrutura secundria de uma protena. Imagem adaptada

disponvel em: http://www.colegiosaofrancisco.com.br/alfa/aminoacido/imagens/proteinas11.jpg.
Estrutura terciria: formada pelo enrolamento da estrutura secundria, alfa-hlice ou da

folha-beta, sendo mantida por pontes de hidrognio e/ou dissulfeto. Essa estrutura
confere a atividade biolgica s protenas e pode ser vista Figura 1.16.
Figura 1.16 Representao da estrutura terciria de uma protena. Imagem disponvel em:
http://www.daanvanalten.nl/quimica/images_bestanden/proteina01.jpg.
Estrutura quaternria: formada a partir de duas ou mais cadeias polipeptdicas, gerando-

se estruturas tridimensionais. A unio de cadeias polipeptdicas podem produzir diferentes
funes para os compostos. Um dos principais exemplos de estrutura quaternria a
hemoglobina. Sua estrutura formada por quatro cadeias polipeptdicas (Figura 1.17).
27
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Figura 1.17 - Representao da estrutura quaternria de uma hemoglobina. Imagem disponvel

em: http://www.jornallivre.com.br/images_enviadas/sangue-hemoglobinafull-1-f66df.jpg.
Se observarmos a Figura 1.17, podemos notar que a hemoglobina formada por quatro
cadeias de globinas (representadas por quatro cores) e cada cadeia globina est ligada a
um grupo heme (que carrega ferro), da seu nome hemoglobina. Essa protena
extremamente importante, pois responsvel pelo transporte de oxignio.
1.5.5.2 Famlias de Protenas
As protenas so agrupadas em famlias quando possuem um ancestral comum, assim

tambm podemos dizer que as protenas de uma mesma famlia so homlogas.
Geralmente dentro dessas famlias, as protenas apresentam muitas semelhanas em sua
cadeia de aminocidos. Isso pode ser percebido com as protenas da mioglobina e da
hemoglobina, que transportam oxignio no msculo e sangue respectivamente. A
comparao das sequncias de aminocidos das duas protenas mostra que temos vrios
aminocidos idnticos ou semelhantes quimicamente encontrados nas mesmas posies
na estrutura primria das protenas. A Figura 1.18 apresenta uma comparao entre as
duas sequncias da mioglobina e da hemoglobina humana, mostrando os aminocidos
idnticos e semelhantes.
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Figura 1.18 Comparao das sequncias da mioglobina humana e hemoglobina humana,

mostrando suas semelhanas. Imagem disponvel em:
http://medicina.med.up.pt/bcm/trabalhos/2006/aminhaproteinafavorita/estrutura.htm.
Essa Figura nos mostra que h 23 aminocidos idnticos (marcados com uma caixinha)
em ambas as sequncias, nas mesmas posies sem contar os aminocidos
semelhantes.
A maior evidncia da ancestralidade comum entre protenas o quanto os aminocidos
so semelhantes comparando-se as sequncias o que chamamos de similaridade de
sequncias e estrutura.
Outras comparaes verificadas puderam revelar a relao entre a sequncia de
aminocidos, a estrutura tridimensional e a funo das protenas. Assim, podemos usar
esse princpio para saber, baseado em comparaes entre sequncias ou similaridade, a
estrutura e funo de protenas ainda desconhecidas.
1.5.5.3 Classificao das Protenas
Quanto a composio, as protenas podem ser simples, quando por hidrlise (quebra pela
adio de gua) liberam apenas aminocidos ou conjugadas, quando por hidrlise liberam
aminocidos e um radical no peptdico.
Em relao a forma, as protenas podem ser classificadas em duas grandes classes que
so: protenas fibrosas e protenas globulares.
As protenas globulares apresentam uma estrutura enovelada e compactada, com formato
globular, misturando mais de um tipo de estrutura secundria. Podem ser encontradas em
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qualquer organismo. Um exemplo desse tipo de protena a enzima ribonuclease que

assim como toda enzima uma protena globular.
J as protenas fibrosas possuem um papel estrutural em clulas e tecidos animais.
Temos as protenas da pele, do tecido conjuntivo e fibras como cabelo, l e seda. O
colgeno a protena fibrosa mais abundante nos vertebrados. A elastina encontrada
nos ligamentos e artrias. Essas protenas possuem geralmente um nico tipo de
estrutura secundria e tem o aspecto de um filamento.
1.5.5.4 Funes das Protenas
Como dito anteriormente, a forma estrutural das protenas est diretamente relacionada
com suas funes biolgicas. Assim protenas diferentes com formas diferentes, tero
tambm atividades diferentes.
Temos vrios tipos de protenas, sendo que estas esto agrupadas conforme suas
funcionalidades. Assim temos as funes:
- Estrutural ou plstica: as protenas desse grupo participam dos tecidos conferindo
consistncia, rigidez e elasticidade. Ex: colgeno (cartilagens), actina e miosina (fibras
musculares), fibrinognio (presente sangue), albumina (nos ovos) etc.
- Hormonal: essas protenas exercem atividade especfica sobre algum rgo, por
exemplo a insulina que retira a glicose em excesso do sangue.
- Defesa: realizam a defesa do organismo. Temos os anticorpos que reconhecem e
neutralizam os vrus e bactrias, alm de outros corpos estranhos. A trombina
responsvel pela coagulao do sangue e preveno da hemorragia.
- Energtica: as protenas podem ser degradadas em aminocidos a fim de produzir
energia.
- Enzimtica: catalisam as reaes bioqumicas atravs das enzimas que so especficas
para cada tipo de substrato.
- Condutoras de gases: realizam o transporte de gases realizados por protenas como a
hemoglobina e a mioglobina.
30
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1.5.5.5 Desnaturao e Renaturao
Pudemos perceber que a estrutura tridimensional de uma protena ser estabelecida

conforme sua sequncia de aminocidos. Isso pode ser demonstrado por experimentos
de desnaturao de uma protena, ou seja, pela alterao de sua forma natural (nativa),
por mudanas no meio (pH, temperatura, solventes) onde se encontra a protena. Desta
forma, a estrutura tridimensional da protena foi desfeita, ocorrendo a perda de sua funo
biolgica.
Esse processo de alterao da forma nativa de uma protena, que a da sua estrutura
terciria, atravs de mudanas no meio denominado de desnaturao. Quando isso
ocorre a sequncia de aminocidos no alterada.
Se o meio estabelecido em suas condies normais e esta protena se reestabelece,
dizemos que est renaturada, ou seja, voltou a sua estrutura terciria. No entanto, isso
no significa necessariamente que ela est ativa novamente, pois pode ter adquirido uma
forma distinta daquela que a deixa funcional.
Fim do Mdulo I
31

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Glossrio de siglas e smbolos

Captulo 1 Da clula ao DNA

Captulo 2 - Do DNA a Protena

2.3.2 Trmino da Replicao em Genomas Circulares

Captulo 3 - Vias da informao

Captulo 4 - Tcnicas bsicas de Biologia Molecular

Glossrio de siglas e smbolos

DNA cido desoxirribonuclico

Captulo 1 Da Clula ao DNA

No h como falarmos em Biologia Molecular, sem antes conhecermos de forma bsica,

O pesquisador ingls Robert Hooke, observando um pedao de cortia ao microscpio

Temos clulas bastante especializadas como, por exemplo, as hemcias presentes no

1.2 Clulas Procariticas

Todos os seres procariotos (bactrias e cianobactrias) apresentam clulas denominadas

1.3 Clulas Eucariticas

As clulas eucariticas so mais complexas que as clulas procariticas e o que as

A Tabela 1.1 apresenta as estruturas presentes ou ausentes que diferenciam os seres

Clulas procariticas Clulas eucariticas

Envoltrio nuclear Ausente Presente

Ncleo No est definido Presente

Citoplasma Sem citoesqueleto Citoesqueleto constitudo

Organelas Poucas ou nenhumas Ncleo, mitocndria,

Tabela 1.1 Tabela comparativa apresentando a presena ou ausncia de estruturas observadas

Vamos conhecer a seguir as organelas apresentadas nas clulas procariticas e

1.4 Organelas Celulares

Membrana plasmtica: constituda por protenas e uma bicamada de lipdios.

protenas encontram-se no interior da bicamada tambm hidrofbica, estando protegidas

Mitocndrias: so estruturas alongadas e arredondadas, formadas por duas membranas

Cloroplastos: so encontrados desde algas verdes e azuis at vegetais superiores, mas

Complexo de Golgi: formado por sacos achatados e vesculas. responsvel pelo

Lisossomos: so esfricos e de tamanho varivel, formados a partir do Complexo de

Figura 1.3 - Representao esquemtica do Complexo de Golgi e do lisossomo. Observe que o

Citoesqueleto: responsvel pela forma e sustentao da clula, assim como o

Retculo endoplasmtico: responsvel por comunicar e transportar substncias entre

Carioteca Ncleo Cisternas do RE

Algumas dessas organelas esto presentes em todos os tipos de clulas, tanto em

1.4.1 Clula Animal versus Vegetal

Sabendo que todos os organismos existentes possuem ou clulas procariticas

Embora a clula vegetal e a clula animal possuam as mesmas estruturas bsicas, em

Estruturas Clula vegetal Clula animal

1.5 Constituintes Qumicos das Clulas

Todas as clulas so formadas por uma combinao de molculas organizadas em uma

Substncia Porcentagem na clula (%)

1.5.1 gua e Sais Minerais

Os sais minerais so as substncias que regulam o metabolismo celular, podendo ser

- Sdio e potssio: tm ativa participao na transmisso dos impulsos nervosos atravs

1.5.1.1 Equilbrio Hidrossalino

Os sais minerais e a gua so fundamentais para a manuteno do equilbrio hidrossalino

Carboidratos ou acares so substncias orgnicas tambm conhecidas por hidratos de

So um grupo de compostos caracterizados por terem um tipo de estrutura prpria, com

Cabea Poro hidroflica

Cauda apolar Poro hidrofbica

Suas principais funes so:

Esse tipo de estrutura caracteriza os lipdios como um grupo de compostos pouco

1.5.4 cidos Nuclicos

Os cidos nuclicos so as biomolculas mais importantes do controle celular, pois

- Bases nitrogenadas: h cinco tipos de bases nitrogenadas diferentes, divididas em dois

Os trs compostos essenciais se unem formando um nucleotdeo. Na Figura 1.7, temos

As estruturas da pentose e do fosfato em um nucleotdeo, nunca so alteradas, porm a

1.5.4.1 Estrutura do DNA

1.5.4.2 Tipos de DNA