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ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE

CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
BIOQUMICA Y FARMACIA

ASIGNATURA: BIOLOGA MOLECULAR Y GENTICA

TEMA: REPARACIN POR APAREAMIENTO


ERRNEO. REPARACIN POR
RECOMBINACIN HOMLOGA

ESTUDIANTES: MISHELL MACHADO


XIMENA MACHADO
KATERINNE VILLACIS
DOCENTE: DRA. MORELLA GUILLEN

CURSO: SEXTOA

FECHA: 2017/06/28
REPARACIN POR APAREAMIENTO ERRNEO
El mecanismo de reparacin de errores de apareamiento (MMR), es responsable de remover las bases
desapareadas, causadas por daos espontneos, desaminacin de bases, oxidacin, metilacin y daos
en los procesos de replicacin o recombinacin. La importancia del MMR radica en mantener la
estabilidad genmica y reducir las mutaciones durante la replicacin, puesto que individuos con
mutaciones relacionadas al MMR, presentan una alta predisposicin de tumores, sndromes y cncer.

Fig. 1: Reparacin por escisin de nucletidos - NER (Nucleotide Excision


Repair): El complejo de los tres polipptidos (UvrABC) en E. coli acta como
endunucleasa, localizando la lesin y removiendo los nucletidos con dao.
La escisin de oligonucletidos es realizada por la UvrC y la UvrD helicasa
libera los oligonucletidos con dao, la ADN polimerasa I sintetiza y la ligasa
une la secuencia corregida a la cadena de ADN.

Etapas
1. Reconocimiento de la lesin en el ADN por el complejo proteico MutS
2. Incorporacin y reconocimiento de la hebra nueva por el compljo proteico MutL
3. Corte y eliminacin del fragmento daado por la exonucleasa I y sustitucin por los nucletido
correctos utilizando la ADN polimerasa delta.
4. Ligamiento de la hebra por la ADN ligasa

El MMR en eucariotas y en la mayora de las bacterias dirige la reparacin de la hebra con error,
mediante el reconocimiento de las discontinuidades de cadena. En E. coli este sistema ha sido
completamente reconstruido in vitro, involucrando tres protenas especificas (MutS, MutL, y MutH)
que aumentan la precisin de la replicacin del ADN de 20-400 veces. El MMR presenta complejas
reacciones que comprometen mltiples protenas, el reconocimiento de la lesin es realizado por un
complejo llamado MutS, compuesto por la unin de dos protenas homlogas que forman un dmero
(MSH2-MSH6), el cual se une al sitio del apareamiento errneo. Posteriormente, el complejo MutL
(MLH1-PMS2) en presencia de ATP, reconoce la secuencia de ADN hemimetilado generando un
rompimiento de la cadena debido a su actividad de endonucleasa. El segmento lesionado es removido
por la helicasa UvrD y degradado por una exonucleasa, finalmente la sntesis y ligacin es realizada
por ADN polimerasa III y la ADN ligasa.
Fig. 2 Reparacin por apareamiento errneo - MMR (Mitsmach Repair): El
reconocimiento de las bases errneas y las regiones de DNA con prdidas o
inserciones es realizado por un complejo llamado MutS, posteriormente un dmero
(MSH2-MSH6), se une al sitio del apareamiento errneo y el complejo MutL (MLH1-
PMS2) en presencia de ATP reconoce la secuencia de ADN hemimetilado generando
un rompimiento de la cadena (endonucleasa). El segmento lesionado es removido por
la helicasa y la exonucleasa retira la secuencia errnea, de esta forma la polimerasa
resintetiza y la ligasa restaura los enlaces fosfodister

REPARACIN POR RECOMBINACIN HOMLOGA


Este sistema detecta y repara daos generados por agentes qumicos, fsicos y radicales libres
derivados de un DSB especialmente en la fase G2 del ciclo celular. La eficiencia de los reparos se debe a
la proximidad entre las cromtidas hermanas que tienen informacin idntica, de esta forma es
activada una cascada de reacciones junto con las protenas de reparo que bloquean el ciclo celular.
Los mecanismos moleculares de la recombinacin homloga en humanos an son complejos, sin
embargo han sido identi cadas las protenas como XRCC2, XRCC3, RAD51B, RAD51C, RAD51 y las que
reconocen los DSB conocidas como quinasas ATR y ATM; esta ltima atrajo la atencin de los
investigadores cuando se descubri que su prdida o inactivacin es la responsable de la enfermedad
gentica humana conocida como ataxia-telangiectasia.

En levaduras los DSB son reconocidos por un complejo proteico llamado MRN (RAD50/
MRE11/NBS1), acta junto a la nucleasa Mre11 que degrada el ADN produciendo cadenas sencillas.
Posteriormente, la protena RAD52 protege el ADN de la accin de exonucleasas inespecficas
(protenas o enzimas que cortan el ADN) unindose a los extremos de las cadenas. As, la protena
RAD51 en presencia de ATP sintetiza un filamento nucleoproteco que busca la secuencia homloga y
cataliza el intercambio y apareamiento de las cadenas con la ayuda de RAD52; en humanos Rad51 es
homloga a RecA en bacterias. Durante esta etapa, la protena RAD54 estimula a RAD51 en el
alineamiento de cadenas, de esta forma es
sintetizada la cadena, empleando como molde la secuencia homloga que repara la informacin
prdida durante el DSB. Finalmente, se forma una estructura de cadenas entrecruzadas conocida como
el intermediario de Holliday que corta y liga el proceso de reparacin de forma adecuada, evitando
rearreglos cromosomales
Figura 6. Reparacin por recombinacin homloga - HR (Homologous Recombination): En
eucariotas los DSB son reconocidos por un complejo proteico llamado MRN
(RAD50/MRE11/NBS1), este complejo posee actividad de nucleasa que degrada el ADN
produciendo cadenas sencillas. Posteriormente, la protena RAD52 protege el ADN de la
accin de exonucleasas inespec cas, mientras que la protena RAD51 en presencia de ATP
sintetiza un lamento nucleoproteco que busca la secuencia homloga y cataliza el
intercambio y apareamiento de las cadenas con la ayuda de RAD52. Finalmente, se forma una
estructura de cadenas entrecruzadas llamada el intermediario de Holliday que terminan el
proceso de reparacin.

Este modelo propone que si tenemos dos DNAs con secuencias homlogas:

Debe haber una rotura en cada uno de los dos DNA, los cortes se producen en cadenas de igual
polaridad.
Los extremos rotos invaden a la doble cadena contraria, una cadena sencilla (rojo) desplaza a
la cadena de su misma polaridad (azul) y recprocamente. El que se mueve es siempre el
extremo 3' OH. Por esa invasin recproca los dos DNAs se entrecruzan y a continuacin se
sellan por ligasas. Las dos dobles cadenas entrecruzadas conforman el intermediario de
Holliday, el cual se ha observado in vivo por microscopa electrnica:
Entonces, tiene lugar una migracin del punto de cruce de las cadenas con un aporte
energtico mnimo, ya que el nmero de pares de bases que desaparean corresponde al
nmero de pares de bases que aparean. Esta migracin origina una regin de
DNA heterodplex, doble cadena de distinta procedencia (rojo-azul).
Las figuras siguientes son slo distintas representaciones grficas de una misma estructura sin
ningn sentido molecular. Se separan las dobles cadenas por un proceso similar al de apertura
de unas tijeras cerradas y se rotan 180 las cadenas de la parte inferior, manteniendo fijas las
de la parte superior. De esta manera quda una de las representaciones ms comunes del
intermediario de Holliday.
Tienen lugar entonces la resolucin del intermediario por rotura y unin, la cual puede ocurrir
de dos maneras:
i. Cortes horizontales (este - oeste). Estos cortes no originan intercambio entre los
marcadores. Los recombinantes son AZ y az, igual que los del principio. Pero s ha
habido recombinacin, ya que hay una regin heterodplex entre los marcadores. Se
generan recombinantes potenciales.
ii. Cortes verticales (norte - sur). S originan intercambio de marcadores. Son verdaderos
recombinantes.

Modelos moleculares demuestran que el intermediario de Holliday es estructuralmente posible, in


vivo se han aislado intermediarios de recombinacin de plsmidos col E1 que, linearizados, presentan
el mismo aspecto por microscopa electrnica. Estas estructuras se dan con una frecuencia de 10 -5 en
cepas recA-, indicando que recA se requiere para la formacin de intermediarios de Holliday en E. coli.

En el modelo que acabamos de describir los cortes individuales en simple cadena (sc) ocurren
sucesivamente. Sin embargo hoy se conoce que el intercambio gentico es iniciado por el corte en una
doble cadena. La descripcin de otro modelo se ilustra a continuacin y alternativamente. Entre los
dos modelos hay dos diferencias importantes:

En el Modelo 1 se corta una sola cadena de cada dplex, hay un solo crossing-over, en el
Modelo 2 hay dos.
En el Modelo 2 parte de una molcula ha sido convertida a la secuencia de la otra (por lo que la
cromtida iniciadora se llama receptora), en el modelo 1 la cromtida iniciadora es
el donador de la informacin gentica.
En este ltimo modelo, la formacin del heterodplex es la nica forma posible para la interaccin de
dos dplex de DNA. Sin embargo el hecho de que se produzca una ruptura en la doble cadena
influencia nuestra perspectiva sobre la habilidad de la clula para manipular el DNA. Una vez hecha la
mella no se puede virar atrs. Observe que en este modelo hay prdida de informacin, cualquier error
en su recuperacin pudiera ser fatal. Por otro lado, recuperar esta informacin resintetizndola de
otro dplex proporciona a la clula la mayor seguridad neta.

Figura 8. Mecanismo de reparacin de cromosomas fragmentados. Reparacin mediante recombinacin.

En general la fase S del ciclo celular resulta crtica para la vida de la clula, ya que en ella el material
gentico a replicar ha de estar en las mejores condiciones posibles antes de ser transferida a la
descendencia, de tal forma que si dicha copia est muy daada podra bloquear el proceso replicativo,
hasta el punto de que la clula opte por el suicidio (apoptosis) para evitar que pasen genes
defectuosos a la descendencia. El mismo sistema que regula la entrada en apoptosis alerta a los
mecanismos de reparacin de errores en la copia del ADN celular a transcribir. En caso de que este
sistema falle podran acumularse un nmero excesivo de mutaciones en la clula. En este sistema de
control participan numerosas protenas, aunque una de ellas, la denominada p53 juega un papel
decisivo en el mismo. Una prueba evidente de la importancia de esta protena en el control del ciclo
celular la tenemos en el hecho de que una de las mutaciones ms frecuentes en tumores afecta a dicha
protena, este aspecto se tratar ms en detalle en el siguiente apartado.

El sistema de reparacin por recombinacin homloga se cree que es utilizado con frecuencia por la
clula para llevar a cabo la reparacin de cromosomas rotos. Este tipo de lesin, como ya se ha
comentado, puede producirse por ataque de radicales hidroxilo sobre el dplex de ADN. De no
repararse, la presencia de tales alteraciones provocar graves daos a la clula, y su descendencia ser
con toda probabilidad inviable debido a la prdida de una cantidad importante de material gentico.
Por ello la clula es particularmente sensible a este tipo de lesin, y para remediarlo pone en marcha
complejos mecanismos de reparacin en los que intervienen un elevado nmero de protenas.

Adems de esta estrategia de reparacin que se basa en la recombinacin homloga, se sabe que la
clula dispone de otra no menos sofisticada (aunque menos estudiada) para reparar el mismo tipo de
lesin. En este mecanismo la reparacin de la rotura se produce por empalme entre los extremos de
los fragmentos del dplex truncado (Barnes, 2001).
Webgrafa:
[Internet]. 2017 [cited 27 June 2017]. Available from:
http://www.scielo.org.co/pdf/biosa/v13n2/v13n2a08.pdf
Recombinacin del DNA [Internet]. Fbio.uh.cu. 2017 [cited 27 June 2017]. Available from:
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Principales mecanismos de reparacin de daos en la molcula de ADN. (PDF Download
Available). Available from:
https://www.researchgate.net/publication/282815419_Principales_mecanismos_de_repara
cion_de_danos_en_la_molecula_de_ADN [accessed Jun 28, 2017].